CN104459122A - 一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,由如下部分组成:第一区加样垫,第二区标记垫,第三区检测区T区,第四区对照区C区,第五区吸水区,第六区硝酸纤维素膜, 所述的第二区标记垫包被有以下物质中的一种:标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 )抗体;标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 ) 抗体;标记抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体。本发明的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,基于利用埃博拉病毒基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或 VP(如VP-40) 为主要生物原料,利用免疫层析法检测病毒特异抗体。以少许血样,鼻腔取样或其它***物即能检测是否感染埃博拉病毒,是一种在任何场合下可以使用的自身检测手段。
Description
技术领域
本发明涉及一种一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,属于生物诊断技术领域。
背景技术
埃博拉(Ebola virus)是一种十分罕见的病毒。1976年在苏丹南部的埃博拉河地区发现它的存在后,引起医学界的广泛关注和重视。据统计埃博拉病毒是一种能引起人类和灵长类动物产生埃博拉出血热的烈性传染病病毒,有很高的死亡率,在50%至90%之间,致死原因主要为中风、心肌梗塞、低血容量休克或多发性器官衰竭。目前市场已有PCR和酶标检测盒。但是,这些方法需要昂贵的设备,需要几个小时才能得到结果,并且需要专业的技术人员来运行测试。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足之处,5-10分钟记录检测结果。提供一种一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条。
本发明的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,由如下部分组成:第一区加样垫,第二区标记垫,第三区检测区T区,第四区对照区C区,第五区吸水区,第六区硝酸纤维素膜,
所述的第二区标记垫包被有以下物质中的一种:标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 )抗体;标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 );标记抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体;
当第二区包被有标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 )抗体时,检测区T区喷涂固相化有与第二区包被物质相对应的基因蛋白糖蛋白Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 )抗体;
当第二区包被有标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 )时,检测区T区喷涂固相化有与第二区包被物质相对应的基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 );
或
当第二区包被有标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 )时,检测区T区喷涂固相化有抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体;
当第二区包被有标记抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体时,检测区T区喷涂固相化有基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 );
所述的对照区C区喷涂有抗兔或鼠免疫蛋白IgG或IgM抗体,
所述的待测物质为埃博拉病毒抗原或埃博拉病毒抗体。
所述的标记垫中的标记为胶体金或其他标记。
所述的检测条可置予一种外壳,以利于检测程序。
所述的待测样品可用或不可用 洗涤剂灭活和萃取病毒蛋白。
本发明的工作原理如下:取血样,鼻腔取样或其它***物,滴加于第一区加样垫,借或不借助展开剂上行至第二区,如样品中存在待测物质,形成“待测物质和标记物质”复合物。该复合物按毛细管原理在检测条的第6 区上上行,行至第三区检测区T区,在检测区T处形成“三明治夹心”复合物。如金标测试条的显色带显现于检测区T,呈检测阳性。如检测区T无色带显现,其结果为病毒感染呈阴性结果。上行至第4区对照区,与C区的抗兔或鼠免疫球蛋白IgG或IgM抗体相遇,不管待测物质存在与否,C区总会有一条沉淀线出现,此条色带作为质量控制,如果C区色带不出现,则说明检测条失活。
本发明的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,基于利用埃博拉病毒基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或 VP(如VP-40) 为主要生物原料,利用免疫层析法检测病毒特异抗体。以少许血样,鼻腔取样或其它***物即能检测是否感染埃博拉病毒,是一种在任何场合下可以使用的自身检测手段。具有如下技术效果:
1.特异性高:所需配对埃博拉病毒特异抗体作用于相关基因蛋白糖蛋白Ebola GLyco Protrin和/或VP(如 VP-40 )。
2.灵敏性高:所需配对抗体以高灵敏度检测相关基因蛋白糖蛋白Ebola GLyco Protrin和/或VP(如 VP-40 )。
3.用于包被或标记的基因蛋白糖蛋白Ebola GLyco Protrin和/或VP(如 VP-40 )为可溶性和高亲和力蛋白。纯化后纯度为90%以上。且仅与Ebola埃博拉抗体有反应。
附图说明
图1是本发明的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条。
其中,1为第一区,2为第二区,3为第三区,4为第四区,5为第五区,6为第六区。
具体实施方式
本发明中所用的下列物质均购自皆来自JAJ International Inc. 圣地亚哥,美国92121。
1.基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和VP(如 VP-40 )。
2、配对的基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如VP-40)抗体,抗人免疫蛋白IgG和IgM抗体;抗兔或鼠免疫球蛋白IgG或IgM抗体。
3.10mil,PVC塑料壳,涂以双面粘胶(STAPLES,SAN DIEGO, CA)
4.硝酸纤维素膜 NITROCELLULOSE (WHATMAN,FAIRFIELD,NJ)
5.吸水纸片(WHATMAN,FAIRFIELD,NJ)
6.玻璃纤维纸(PALL-GELMAN,ANN ARBOR,MI)
7.吐温-20,牛血清白蛋白。
本发明的检测条的制备方法如下:
1.第二区制备;将第二区的抗原或抗体加入所需量25微克/10毫升金溶液,搅拌十分钟后,加入1/10体积的1%小牛血清蛋白液作稳定剂,高速离心,取得红白沉淀物。将上述沉淀物溶解于缓冲剂中,铺于玻璃纤维纸,真空抽干。
3. 第三区检测区T区和第四区对照区C区制备;将T区和C区的0.5 - 2毫克/毫升抗原或抗体用喷雾方法划线于硝基纤维膜上,于37摄氏度烘干20分钟。
4.装配;将上述各组分贴在有胶面的塑料薄板上,上下两端再贴上吸水纸,切割成条,再装入塑壳之中。
实施例1
本实施例的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,由如下部分组成:第一区加样垫,第二区胶体金垫,第三区检测区T区,第四区对照区C区,第五区吸水区,为吸水纸片,第六区硝酸纤维素膜。第二区包被有胶体金标记的基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 )抗体,检测区T区喷涂固相化有与第二区包被物质相对应的基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或 VP(如 VP-40 )抗体;对照区C区喷涂有抗兔或鼠免疫球蛋白IgG或IgM抗体。
本实施例的检测条可以检测埃博拉病毒抗原,工作过程如下:滴加待测样品于加样垫,液体依层析现象上升,标记,如样品中存在埃博拉病毒抗原,形成“抗原-标记抗体”复合物。该复合物持续上升至检测区T,在检测区T处形成“固相抗体-抗原-标记抗体”复合物。如金标测试条的显色带显现于检测区T,其结果为病毒抗原检测呈阳性。如检测区T无色带显现,其结果为病毒感染呈阴性结果。5-10分钟记录检测结果。不管待测物质存在与否,C区总会有一条沉淀线出现,此条色带作为质量控制,如果C区色带不出现,则说明检测条失活。
实施例2
本实施例的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,由如下部分组成:第一区加样垫,第二区胶体金垫,第三区检测区T区,第四区对照区C区,第五区吸水区,为吸水纸片,第六区硝酸纤维素膜。第二区包被有胶体金标记的基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 ),检测区T区喷涂固相化有与第二区包被物质相对应的基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 );对照区C区喷涂有抗兔或鼠免疫球蛋白IgG或IgM抗体。
本实施例的检测条可以检测埃博拉病毒抗体,工作过程如下:滴加待测样品于加样垫,液体依层析现象上升,标记,如样品中存在埃博拉病毒抗体,形成“抗体-标记抗原”复合物。该复合物持续上升至检测区T,在检测区T处形成“固相抗原-抗体-标记抗原”复合物。如金标测试条的显色带显现于检测区T,其结果为病毒呈抗体检测阳性。如检测区T无色带显现,其结果为病毒感染呈阴性结果。5-10分钟记录检测结果。不管待测物质存在与否,C区总会有一条沉淀线出现,此条色带作为质量控制,如果C区色带不出现,则说明检测条失活。
实施例3
本实施例的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,由如下部分组成:第一区加样垫,第二区胶体金垫,第三区检测区T区,第四区对照区C区,第五区吸水区,为吸水纸片,第六区硝酸纤维素膜。第二区包被有胶体金标记的基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 ),检测区T区喷涂固相化有抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体;对照区C区喷涂有抗兔或鼠免疫球蛋白IgG或IgM抗体。
本实施例的检测条可以检测埃博拉病毒抗体,工作过程如下:滴加待测样品于加样垫,液体依层析现象上升,标记,如样品中存在人免疫蛋白IgG或IgM抗体,形成“标记抗抗体-抗体”复合物。该复合物持续上升至检测区T,在检测区T处形成“固相抗原-抗体-标记抗抗体”复合物。如金标测试条的显色带显现于检测区T,则为埃博拉病毒抗体、IgG和IgM阳性结果,也可能埃博拉病毒抗体、IgG和IgM并存。如检测区T无色带显现,其结果为病毒感染呈阴性结果。5-10分钟记录检测结果。不管待测物质存在与否,C区总会有一条沉淀线出现,此条色带作为质量控制,如果C区色带不出现,则说明检测条失活。
实施例4
本实施例的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,由如下部分组成:第一区加样垫,第二区胶体金垫,第三区检测区T区,第四区对照区C区,第五区吸水区,为吸水纸片,第六区硝酸纤维素膜。第二区包被有胶体金标记的抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体,检测区T区喷涂固相化有基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP(如 VP-40 );对照区C区喷涂有抗兔或鼠免疫球蛋白IgG或IgM抗体。
本实施例的检测条可以检测埃博拉病毒抗体,工作过程如下:滴加待测样品于加样垫, 液体依层析现象上升,标记,如样品中存在埃博拉病毒抗体,先形成“标记基因蛋白抗原-抗体”复合物,当液体行至检测区T,在检测区T形成“固相抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体-埃博拉病毒抗体-标记基因蛋白复合物。如金标测试条的显色带显现于检测区T,则为埃博拉病毒抗体、IgG和IgM阳性结果,也可能埃博拉病毒抗体、IgG和IgM并存。如检测区T无色带显现,其结果为病毒感染呈阴性结果。5-10分钟记录检测结果。不管待测物质存在与否,C区总会有一条沉淀线出现,此条色带作为质量控制,如果C区色带不出现,则说明检测条失活。
Claims (3)
1.一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,由如下部分组成:第一区加样垫,第二区标记垫,第三区检测区T区,第四区对照区C区,第五区吸水区,第六区硝酸纤维素膜,其特征在于,
所述的第二区标记垫包被有以下物质中的一种:标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP抗体,标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP ,标记抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体;
当第二区包被有标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP抗体时,检测区T区喷涂固相化有与第二区包被物质相对应的基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP抗体;
当第二区包被有标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP时,检测区T区喷涂固相化有与第二区包被物质相对应的基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP;
或
当第二区包被有标记基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP时,检测区T区喷涂固相化有抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体;
当第二区包被有标记抗人免疫蛋白IgG或IgM抗体时,检测区T区喷涂固相化有基因蛋白糖蛋白Ebola Glyco Protein和/或VP ;
所述的对照区C区喷涂有抗兔或鼠免疫蛋白IgG或IgM抗体,
所述的待测物质为埃博拉病毒抗原或埃博拉病毒抗体。
2.根据权利要求1所述的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,其特征在于,所述的标记垫中的标记为胶体金或其他标记。
3.根据权利要求1所述的一步法快速诊断埃博拉病毒感染免疫层析检测条,其特征在于,所述的检测条可置予一种外壳,以利于检测程序。
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