具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1:
桑椹果渣提取纯化物的制备:取大十品种桑葚榨汁,然后通过离心处理或采用滤布包裹果渣挤压分离果汁与果渣。果渣用体积比1:1的pH 4.0的50%的乙醇溶液浸泡提取3次,每次12 h,抽滤,合并浸提液,离心20 min(5000 rpm)后取上清液,用闪蒸浓缩装置在50℃下真空浓缩至无醇味,得果渣浓缩液。果渣浓缩液通过大孔树脂 Diaion HP 2MGL柱,经蒸馏水冲至无色透明后,改用pH 4.0的60%的乙醇溶液洗脱,洗脱液流速为0.6 mL/min,收集有色的花青素洗脱液,使用闪蒸浓缩装置在50 oC下减压浓缩,得到浓缩液后,再转移出浓缩液,通过旋转蒸发仪旋转真空干燥或喷雾干燥,得干粉后称重并计算得率,样品避光干燥保存。得到的桑椹果渣提取纯化物的收得率为0.45%,提取纯化物中总花青素的含量达到43%。
杨梅果渣提取纯化物的制备:取荸荠品种杨梅,去核后榨汁,然后通过离心处理或采用滤布包裹果渣挤压分离果汁与果渣。果渣用体积比1:1的pH 4.0的50%的乙醇溶液浸泡提取3次,每次12 h,抽滤,合并浸提液,离心20 min(5000 rpm)后取上清液,用闪蒸浓缩装置在50℃下真空浓缩至无醇味,得果渣浓缩液。果渣浓缩液通过大孔树脂 Diaion HP 2MGL柱,经蒸馏水冲至无色透明后,改用pH 4.0,60%的乙醇溶液洗脱,洗脱液流速为 0.6 mL/min,收集有色的花青素洗脱液,使用闪蒸浓缩装置在50 oC下减压浓缩,得到浓缩液后,再转移出浓缩液,通过旋转蒸发仪旋转真空干燥或喷雾干燥,得干粉后称重并计算得率,样品避光干燥保存。 得到的杨梅果渣提取纯化物的收得率为0.42%,提取纯化物中总花青素的含量达到31%。
天然色素的制备方法:将桑椹果渣提取纯化物,杨梅果渣提取纯化物,配以酵母硒,按照桑椹果渣提取纯化物50%,杨梅果渣提取纯化物50%,硒酵母0.0005%的比例进行混合配比,得到天然色素产品。
实施例2:
桑椹果渣提取纯化物的制备:取日本果桑品种的桑葚榨汁,然后通过离心处理或采用滤布包裹果渣挤压分离果汁与果渣。果渣用体积比1:1的pH 4.0的55%的乙醇溶液浸泡提取4次,每次16 h,抽滤,合并浸提液,离心20 min(5000 rpm)后取上清液,用闪蒸浓缩装置在50℃下真空浓缩至无醇味,得果渣浓缩液。果渣浓缩液通过大孔树脂 Diaion HP 2MGL柱,经蒸馏水冲至无色透明后,改用pH 4.5的65%的乙醇溶液洗脱,洗脱液流速为0.6 mL/min,收集有色的花青素洗脱液,使用闪蒸浓缩装置在50 oC下减压浓缩,得到浓缩液后,再转移出浓缩液,通过旋转蒸发仪旋转真空干燥或喷雾干燥,得干粉后称重并计算得率,样品避光干燥保存。得到的桑椹果渣提取纯化物的收得率为0.48%,提取纯化物中总花青素的含量达到45%。
杨梅果渣提取纯化物的制备:取东魁品种杨梅,去核后榨汁,然后通过离心处理或采用滤布包裹果渣挤压分离果汁与果渣。果渣用体积比1:2的pH 4.0的60%的乙醇溶液浸泡提取4次,每次15 h,抽滤,合并浸提液,离心20 min(5000 rpm)后取上清液,用闪蒸浓缩装置在50℃下真空浓缩至无醇味,得果渣浓缩液。果渣浓缩液通过大孔树脂 Diaion HP 2MGL柱,经蒸馏水冲至无色透明后,改用pH 4.0,65%的乙醇溶液洗脱,洗脱液流速为 0.6 mL/min,收集有色的花青素洗脱液,使用闪蒸浓缩装置在50 oC下减压浓缩,得到浓缩液后,再转移出浓缩液,通过旋转蒸发仪旋转真空干燥或喷雾干燥,得干粉后称重并计算得率,样品避光干燥保存。 得到的杨梅果渣提取纯化物的收得率为0.52%,提取纯化物中总花青素的含量达到35%。
天然色素的制备方法:将桑椹果渣提取纯化物,杨梅果渣提取纯化物,配以酵母硒,按照桑椹果渣提取纯化物60%,杨梅果渣提取纯化物40%,硒酵母0.0006%的比例进行混合配比,得到天然色素产品。
实施例3:
桑椹果渣提取纯化物的制备:取红玛瑙品种的桑葚榨汁,然后通过离心处理或采用滤布包裹果渣挤压分离果汁与果渣。果渣用体积比1:1.5的pH 4.0的55%的乙醇溶液浸泡提取3次,每次15 h,抽滤,合并浸提液,离心20 min(5000 rpm)后取上清液,用闪蒸浓缩装置在50℃下真空浓缩至无醇味,得果渣浓缩液。果渣浓缩液通过大孔树脂 Diaion HP 2MGL柱,经蒸馏水冲至无色透明后,改用pH 4.0的60%的乙醇溶液洗脱,洗脱液流速为0.5 mL/min,收集有色的花青素洗脱液,使用闪蒸浓缩装置在50 oC下减压浓缩,得到浓缩液后,再转移出浓缩液,通过旋转蒸发仪旋转真空干燥或喷雾干燥,得干粉后称重并计算得率,样品避光干燥保存。得到的桑椹果渣提取纯化物的收得率为0.46%,提取纯化物中总花青素的含量达到45%。
杨梅果渣提取纯化物的制备:取丁岙品种杨梅,去核后榨汁,然后通过离心处理或采用滤布包裹果渣挤压分离果汁与果渣。果渣用体积比1:1.5的pH 4.0的60%的乙醇溶液浸泡提取3次,每次13 h,抽滤,合并浸提液,离心20 min(5000 rpm)后取上清液,用闪蒸浓缩装置在50℃下真空浓缩至无醇味,得果渣浓缩液。果渣浓缩液通过大孔树脂 Diaion HP 2MGL柱,经蒸馏水冲至无色透明后,改用pH 4.5,60%的乙醇溶液洗脱,洗脱液流速为 0.5 mL/min,收集有色的花青素洗脱液,使用闪蒸浓缩装置在50 oC下减压浓缩,得到浓缩液后,再转移出浓缩液,通过旋转蒸发仪旋转真空干燥或喷雾干燥,得干粉后称重并计算得率,样品避光干燥保存。 得到的杨梅果渣提取纯化物的收得率为0.46%,提取纯化物中总花青素的含量达到33%。
天然色素的制备方法:将桑椹果渣提取纯化物,杨梅果渣提取纯化物,配以酵母硒,按照桑椹果渣提取纯化物60%,杨梅果渣提取纯化物40%,硒酵母0.0007%的比例进行混合配比,得到天然色素产品。
现有的色素,大多数为合成色素,即使是从天然植物中提取的色素,也多是提取率较低,成本较高。本发明以桑椹和杨梅榨汁后废弃的果渣为原料,采用优化后的提取纯化工艺提取和分离富集功效成分,得到功效作用明显,花青素含量较高的天然色素产品。与现有技术相比,具有以下优势:
1、提取该天然色素产品中使用的浓缩方法是采用闪蒸浓缩装置进行浓缩。该装置是一种快速高效浓缩溶液或回收溶剂的闪蒸装置,基本原理是在减压下,使待浓缩的液体以细流匀速进入薄膜蒸发管中,在管中受热后形成薄膜,使部分溶剂气化而达到浓缩目的。使用该装置浓缩具有浓缩液受热温度低,被浓缩液体受热时间极短,有效保护热敏性成分花青素不被破坏,浓缩速度快、效率高,操作简单、使用方便、节能环保,溶剂的回收率高,仪器容量大,不受被浓缩液体积大小的限制等优势。得到的天然色素,提取率较高,其中桑椹果渣提取纯化物的提取率达到12%,杨梅果渣提取纯化物的提取率达到10%,提高了功效成分的提取率。
2、采用该工艺方法制备的桑椹果渣的提取纯化物和杨梅果渣提取纯化物所含花青素的含量远远大于果汁纯化物,表明桑葚果渣和杨梅果渣作为食品加工的废弃物具有更大的开发利用价值。通过对桑椹果渣和杨梅果渣的再利用,提高了植物废弃物的附加值和资源利用率。
3、桑椹果渣和杨梅果渣提取纯化物具有很强的抗氧化作用、抗疲劳作用和降血糖作用,同时功效成分花青素的含量较高,具有良好的保健功能和一定的治疗作用,安全无毒,工艺简单、成本低廉,可实现工业化生产,易于长期贮存和运输等优点,克服了现有技术的不足,在食品工业上可用做食品添加剂、抗氧剂、食品着色剂和染料。
4、桑葚和杨梅果实中含有大量糖分,直接食用或是饮料制品不利于老年人和糖尿病患者食用,这样限制了桑葚和杨梅产品的推广利用。本发明使用优化的提取纯化工艺对桑葚和杨梅果渣进行提取和纯化,得到了桑葚和杨梅的果渣提取纯化物。配伍后得到的天然色素不含水,不含糖,既解决了桑葚和杨梅含水量,含糖量高的问题,又克服了花青素不稳定的缺点,增加了桑葚和杨梅产品的使用人群。
5、本发明制备的天然色素具有很强的抗氧化、抑菌、防腐的作用,由于本身处于干燥粉末状态,又具有一定的抑菌及防腐作用,因此更易于长期贮存,延长了保质期,更易使消费者接受,使消费领域更为广阔。
以下通过相应试验进一步说明本发明的有益效果。
试验一、桑椹果渣与桑椹果汁的功效成分和活性测定及评价实验
1、从桑椹果渣中提取和纯化天然色素的工艺
提取工艺优选:以大十品种的桑椹为对象,考查桑葚花青素提取工艺。主要考查乙醇浓度、浸泡次数、提取溶剂pH及液料比4个因素,每次提取时间定为12小时。采用L934的正交试验,用紫外分光光度计通过测定吸光度进行跟踪测定。
结果桑椹果渣的最佳提取工艺为:A1B3C1D1,即乙醇浓度50%,提取液pH 4,料液比1:1,浸泡3次,每次12 h。
纯化富集工艺优选:利用单因素试验对桑葚果渣中花青素的纯化富集工艺进行考查。大孔树脂的筛选:Diaion HP 20,HP 2MGL和D101。将桑葚果渣浓缩液加入装有大孔树脂的柱子中,静态吸附24 h,过滤,测定滤液的吸光度,计算各树脂的吸附率。用pH 4的60%的乙醇溶液对已吸附的树脂进行解吸24 h,测定解吸液的吸光度,计算解吸率。结果HP2 MGL的吸附率和解析率最高,吸附力93.1%,解析率92.6%。洗脱溶剂浓度的选择:准备已经吸附有桑椹果渣花青素样品的大孔树脂,分别加入同体积的20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的pH 4乙醇溶液,静态解吸24 h,测定洗脱液的吸光度,结果60%的乙醇溶液对花青素的洗脱能力最强。洗脱溶剂酸度的选择:准备已经吸附有桑椹果渣花青素样品的大孔树脂,分别加入同体积pH分别为1、2、3、4、5的60%乙醇溶液,静态解吸24 h,测定洗脱液的吸光度,结果pH为4时解吸能力最好。洗脱溶剂流速的选择:取筛选出的树脂4份,装柱后各加入桑葚浓缩液,吸附4 h后,分别用0.4 mL/min 、0.6 mL/min 、0.8 mL/min 、1.0 mL/min 流速洗脱,收集洗脱液,测定洗脱液的吸光度。结果洗脱液流速越大,反而洗脱效果越差,同时,洗脱液流速为0.4 mL/min时,洗脱效果最好。但流速太小,洗脱时间延长,解吸速度变慢,综合考虑,最佳洗脱液流速为0.6 mL/min。因此,桑椹果渣最优纯化富集工艺是,桑葚果渣浓缩液通过HP 2 MGL大孔树脂柱,以0.6 mL/min的流速用pH 4的60%乙醇溶液洗脱液洗脱。
2、桑椹果汁提取纯化物和果渣提取纯化物中总黄酮总酚酸的含量测定
总黄酮的测定:参考NaNO2-Al(NO3)显色法。称取芦丁对照品适量,加70%乙醇溶解并定容,得对照品溶液。分别取上述芦丁对照品溶液,按照该显色方法配制溶液,于510 nm处测吸光度。得芦丁浓度与吸光度之间的回归方程Y= 9.8957x + 0.0011,R2 = 0.9999。分别吸取一定量样品溶液于容量瓶中,按照绘制芦丁标准曲线的方法测定吸光度,计算样品中总黄酮的含量,总黄酮的含量测定结果用芦丁当量RE表示。
总酚酸的测定:采用Folin-Ciocalteu法。 称取没食子酸对照品适量,用蒸馏水溶解并定容,制成对照品溶液。按照该显色方法配制溶液,于760 nm处测定吸光度,得没食子酸的回归方程Y= 80.743x + 0.0328,R2 = 0.9867。分别吸取一定量的样品溶液于容量瓶中,按照绘制没食子酸标准曲线的方法测定吸光度,计算样品中总酚酸的含量,总酚酸含量测定结果用没食子酸当量GAE表示。
结果表明大十品种桑葚果渣中总黄酮和总酚酸的含量均高于果汁,也高于其他有色水果中总黄酮及总酚酸的含量,表明果渣比果汁含有更多的功能因子,具有更大的开发利用价值。采用日本果桑、红玛瑙、蜀果1号、红果2号等品种的桑椹进行含量测定,结果也表明果渣中总黄酮和总酚酸的含量均高于果汁,也高于其他有色水果中总黄酮及总酚酸的含量。
3、桑椹果汁提取纯化物和果渣提取纯化物中总花青素的含量测定
pH示差法:待测液的制备:准确称取大十品种桑葚果汁和果渣纯化物10.0 mg,先用10%的稀醇溶解,用蒸馏水定容至10 mL。分别移取1 mL样液2份,分别用pH 1.0与pH 4.5的缓冲溶液定容至10 mL。暗处放置1 h后分别测定吸光值。花色苷含量(%,w/w)=(A/εL)×MW×DF×V/Wt×100%。
结果表明大十品种的桑椹果渣提取纯化物中总花青素的含量高,几乎是果汁提取纯化物中总花青素含量的2倍。采用日本果桑、红玛瑙、蜀果1号、红果2号等品种的桑椹进行总花青素的含量测定,结果也表明果渣提取纯化物中总花青素的含量比果汁提取纯化物中总花青素含量高很多。
由本发明得到的桑椹果渣提取纯化物(即桑椹花青素提取物)的含量可以达到38.3%~42.6%(413.49 mg/g),高于市面上各种花青素提取物中总花青素的平均含量(25%)。且桑葚果渣提取纯化物中总黄酮、总酚酸的含量和活性明显高于果汁提取纯化物,使得桑葚果渣成为开发天然色素以及功能性食品的廉价原料。
4、桑椹果汁提取纯化物和果渣提取纯化物中矢车菊素-3-葡萄糖苷的HPLC含量测定
色谱条件:使用配有Waters 2996 PDA二极管阵列检测器的Waters 2695高效液相色谱仪,色谱条件:SunfireC18色谱柱(5 μm, 4.6 mm×250 mm);柱温30℃;流速1.0ml/min;流动相:A: 2%的盐酸甲醇B: 水:甲醇:乙腈:乙酸=160:90:90:40;检测波长530nm;采用梯度洗脱。
准确称取矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准品,以2%的HCl色谱甲醇定容备用。精确称取不同品种桑葚果汁和果渣纯化物,以2%的HCl色谱甲醇定容备用。分别进标准品溶液,以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量为横坐标(X),峰面积(Y)为纵坐标建立标准曲线:Y=3.96×106X-7.93×105,R2 = 0.9993。
结果表明大十品种的桑椹果汁和果渣提取纯化物中花青素类物质是以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为主,含量约是总花青50%左右,且果渣提取纯化物比果汁提取纯化物中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量高出几倍。采用日本果桑、红玛瑙、蜀果1号、红果2号等品种的桑椹进行含量测定,结果也表明果渣提取纯化物比果汁提取纯化物中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量高出几倍。
5、桑椹果汁提取纯化物和果渣提取纯化物的抗氧化活性
DPPH法:采用96微孔板结合Infinite M 200酶标仪。准确量取Trolox 对照品适量,用无水乙醇定容得到Trolox原液。以Trolox (X)浓度为横坐标,以自由基清除率(Y)为纵坐标作标准曲线,Y= 3722.3X-1.6882,R2 =0.9994。计算DPPH自由基清除率(I%)= 1– (Ap – Ac ) / Amax × 100 %。 计算样品的TEAC ,以此来评价样品的抗氧化能力。
FRAP法:取醋酸缓冲液,TPTZ (溶于40 mmol/L盐酸)与三氯化铁溶液,以10:1:1的体积比混合配制而成。取FRAP试剂与样品溶液,反应10 min后在593 nm下测吸光值。以Trolox溶液为阳性对照,以Trolox (X)浓度为横坐标,以吸光值(Y)为纵坐标作标准曲线,Y=8.3839X+0.2026,R2=0.9998。样品抗氧化能力用TEAC 表示。
TRP的测定:取样品溶液加入到磷酸缓冲液中,然后加入1%的 K3Fe(CN)6,加热30 min后加入10 % 三氯乙酸, 混均后离心10 min。取上清液2.5 mL,迅速加入蒸馏水和0.1%三氯化铁混均,于波长700 nm处进行比色测定。以Trolox浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线, Y=54.282X-0.1478,R2=0.9788。 样品的总抗氧化能力以TEAC值表示。
桑葚果汁和果渣提取纯化物抗氧化活性的TEAC值(mg TE/g)
样品 |
DPPH |
FRAP |
TRP |
大十果汁提取纯化物 |
154.43 |
24.43 |
103.84 |
大十果渣提取纯化物 |
698.57 |
56.18 |
120.02 |
结果表明大十品种的桑椹花青素均具有较强的抗氧化活性,其中大十品种的桑椹果渣提取纯化物比果汁提取纯化物具有更强的抗氧化活性。采用日本果桑、红玛瑙、蜀果1号、红果2号等品种的桑椹进行抗氧化活性试验,结果也表明果渣提取纯化物比果汁提取纯化物具有更强的抗氧化活性。
6、桑椹果汁提取纯化物和果渣提取纯化物的抗菌活性
按照制备培养基的方法制备PDA培养基。在超净工作台中,将每种菌接种到带有灭菌培养基的平皿中央,用打孔机打孔,25 oC温箱中培养3-4 d。称取大十品种桑葚果汁和果渣提取纯化物10 mg,分别用无水乙醇溶解,再用无菌蒸馏水配制成5 mg/mL的样品溶液,再逐级稀释成5个不同浓度,备用。
抑菌活性测定:在无菌操作台中,分别将不同浓度的样品溶液加入到制备好的斜面试管培养基中,放置1 h,待溶液渗入到培养基中后,再将配制好的菌悬液均匀加到斜面培养基表面上,封口,将试管放到恒温培养箱中培养48 h后,取出观察抑菌效果,观察不到菌丝生长的最低样品浓度为最低抑菌浓度(MIC)。
结果表明大十品种桑葚果汁和果渣提取纯化物对8种致病真菌均有不同程度的抑制作用,其中,大十品种的果渣纯化物对植物病原真菌的抑菌作用比桑椹果汁强。采用日本果桑、红玛瑙、蜀果1号、红果2号等品种的桑椹进行抗菌活性试验,结果也表明果渣纯化物对植物病原真菌的抑菌作用比桑椹果汁强。
7、桑椹果汁提取纯化物和果渣提取纯化物的抗疲劳活性
采用昆明种小鼠雌雄各半,在给药前一个星期,饲以足够的水和标准鼠料供小鼠自由食用。实验动物随机分为正常对照组,阳性组,药物组,每组雌雄各半,分笼饲养。配制大十品种的桑葚果汁和果渣提取纯化物样品溶液作为受试药物。
指标测定:取已经分好组的小鼠,分别以待测溶液、阳性对照和溶剂溶液灌胃,每天灌胃一次,同时记录小鼠体重,每组灌胃0.4 mL。当小鼠体重达30 g后,灌胃剂量增加至0.6 mL。连续以口给予受试物,于末次给样30 min后对小鼠进行负重游泳实验。小鼠尾根部负小鼠体重10 %的铅皮,放入水温为25±0.5 ℃、水深35 cm的游泳箱中,参照力竭判断标准,即小鼠头部下沉于水面下10 s仍不能返回水面的时间,即为小鼠力竭时间。记录游泳时间。
通过小鼠负重游泳实验,发现大十品种桑葚果汁和果渣提取纯化物均具有一定的抗疲劳活性,均可以一定程度地提高小鼠的运动耐力,其中果渣提取纯化物组小鼠游泳时间较果汁组长,即抗疲劳作用更强。采用日本果桑、红玛瑙、蜀果1号、红果2号等品种的桑椹进行抗疲劳活性试验,结果也表明果渣提取纯化物组小鼠游泳时间较果汁组长,即抗疲劳作用更强。
试验二、杨梅果渣与杨梅果汁的功效成分和活性测定及评价实验
1、从杨梅果渣中提取和纯化天然色素的工艺
提取工艺优选:主要考查乙醇浓度、提取时间、提取溶剂pH及液料比4个因素,每次提取次数定为3次。采用L934的正交试验,用紫外分光光度计通过测定吸光度进行跟踪测定。
结果杨梅果渣的最佳提取工艺为:A1B3C1D1,即乙醇浓度50%,提取液pH 4,料液比1:1,浸泡3次,每次12 h。
纯化富集工艺优选:杨梅花青素的纯化工艺研究包括填料的选择,洗脱溶剂浓度、洗脱流速和减压浓缩温度四个因素,分别设计单因素实验对四个因素,通过测定吸光度进行考查。结果最佳富集纯化工艺为使用HP2MGL作为大孔树脂柱色谱的填料,洗脱溶剂的浓度为60%,洗脱流速为0.6 mL·min-1,减压浓缩温度为60oC。
2、杨梅果渣提取纯化物中总黄酮总酚酸的含量测定
总黄酮的测定参考NaNO2-Al(NO3)显色法。以芦丁为对照品。总酚酸的测定采用Folin-Ciocalteu法,以没食子酸为对照品。按照绘制芦丁和没食子酸标准曲线的方法测定吸光度,计算样品中总黄酮和总酚酸的含量,含量测定结果用芦丁和没食子酸当量GAE表示。
杨梅果渣提取纯化物中总黄酮及总酚酸含量(mg·g-1)
样品编号 |
品种 |
总黄酮含量(mg RE / g) |
总酚酸含量(mg GAE / g) |
1 |
荸荠 |
4.64 |
2.08 |
结果表明荸荠品种的杨梅果渣提取纯化物中总黄酮和总酚酸的含量较高。采用东魁、丁岙、野生、炭梅、晚稻等品种的杨梅进行含量测定,结果也表明果渣提取纯化物中总黄酮和总酚酸的含量较高。
3、杨梅果渣提取纯化物中总花青素及矢车菊素-3-葡萄糖苷的含量测定
准确称取荸荠品种杨梅果汁和果渣纯化物10.0 mg,先用10%的稀醇溶解,用蒸馏水定容至10 mL。分别移取1 mL样液2份,分别用pH 1.0与pH 4.5的缓冲溶液定容至10 mL。暗处放置1 h后分别测定吸光值。花色苷含量(%,w/w)=(A/εL)×MW×DF×V/Wt×100%。
荸荠品种的杨梅果渣提取纯化物中总花青素的含量为22~25%,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量达到21~32%。采用东魁、丁岙、野生、炭梅、晚稻等品种的杨梅进行含量测定,测定结果基本和荸荠品种的杨梅相似。
4、杨梅果渣提取纯化物的抗氧化活性
DPPH法:采用96微孔板结合Infinite M 200酶标仪。准确量取Trolox 对照品适量,用无水乙醇定容得到Trolox原液。以Trolox (X)浓度为横坐标,以自由基清除率(Y)为纵坐标作标准曲线,y = 2.3787x+1.1152,R2 = 0.9975。计算DPPH自由基清除率(I%)= 1– (Ap – Ac ) / Amax × 100 %。 计算样品的TEAC ,以此来评价样品的抗氧化能力。
DPPH法测定杨梅果渣提取纯化物的抗氧化能力
品种 |
回归方程 |
IC50(μg·mL-1) |
TEAC(mmol·g-1) |
荸荠 |
y = 2.4099x + 0.4117 |
0.0419 |
377.5 |
结果表明荸荠品种的杨梅果渣提取纯化物具有较强的抗氧化活性,采用东魁、丁岙、野生、炭梅、晚稻等品种的杨梅进行抗氧化活性试验,结果也表明杨梅果渣提取纯化物具有较强的抗氧化活性。
5、杨梅果渣提取纯化物的抗菌活性
按照制备培养基的方法制备PDA培养基。称取荸荠品种杨梅果渣提取纯化物配制成样品溶液,再逐级稀释成不同浓度。采用MIC法对8种植物病原真菌抑菌活性测定,观察不到菌丝生长的最低样品浓度为最低抑菌浓度(MIC)。
荸荠品种的杨梅果渣提取纯化物对玉米大斑和油菜菌核表现出了一定的抑制作用,对大麦赤霉、小麦赤霉和番茄灰霉等基本没有抑制作用。采用东魁、丁岙、野生、炭梅、晚稻等品种的杨梅进行抗菌活性试验,结果也表明果渣提取纯化物对玉米大斑和油菜菌核表现出了一定的抑制作用,对大麦赤霉、小麦赤霉和番茄灰霉等基本没有抑制作用。
6、杨梅果渣提取纯化物的抗疲劳活性
按照测定桑椹花青素的抗疲劳实验方法进行实验,取荸荠杨梅果渣提取纯化物,分别用羧甲基纤维素钠配制成浓度为高(0.3320 mg·mL-1)、中(0.2656mg·mL-1)、低(0.1992 mg·mL-1)三个浓度作为受试药物,物,溶剂对照为羧甲基纤维素钠。
杨梅果渣提取纯化物的小鼠游泳时间的平均值
样品编号 |
药物剂量 |
动物数(n) |
小鼠游泳时间(s) |
1 |
高剂量组 |
12 |
1104.76 |
2 |
中剂量组 |
12 |
912.45 |
3 |
底剂量组 |
12 |
687.34 |
4 |
空白组 |
12 |
603.12 |
5 |
阳性组 |
12 |
1034.56 |
通过小鼠负重游泳实验表明杨梅果渣提取纯化物均具有一定的抗疲劳活性,可以一定程度地提高小鼠的运动耐力,特别是高剂量组抗疲劳活性最为明显。
试验三、天然色素产品的降糖作用
按照桑椹果渣提取纯化物40%~70%,杨梅果渣提取纯化物30%~60%,硒酵母0.0005~0.0008%进行混合配比得到的天然色素产品,进行降糖作用的动物实验。
实验动物:SD雄性大鼠,6-8周龄,180-200g,适应性饲养3天。大鼠造模前禁食12h,除正常对照组外,其余各组均按每天腹腔注射1%四氧嘧啶,连续7天,正常对照组给予等体积的生理盐水,7天后,禁食12 h,剪尾取血,测定血糖值(空腹血糖)。
将造模成功的大鼠随机分为5组,即模型,阳性,药物高、中、低剂量组,每组6只。阳性组一定浓度的二甲双胍灌胃,连续14天,空白组和模型组给予等体积的生理盐水。第14天给药前,禁食12h,给药2h后,用水合氯醛麻醉,断头取血,常规分离血清,测定血糖值。结果表明,高、中、低不同剂量组对大鼠血糖具有明显的降血糖作用。
天然色素产品对大鼠降血糖作用的实验结果
组别 |
动物数 |
剂量(g/kg) |
血糖值(mmol/ L) |
正常组 |
6 |
-- |
5.456±2.353 |
模型组 |
6 |
-- |
18.425±3.354 |
阳性组 |
6 |
0.1 |
6.314±4.023 |
高剂量组 |
6 |
1.2 |
6.026±3.674 |
中剂量组 |
6 |
0.6 |
7.220±5.834 |
低剂量组 |
6 |
0.3 |
7.887±3.739 |
结果发现一般认为没有太大利用价值的废弃果渣的提取纯化物,其功效成分的含量及生物活性远远大于果汁的提取纯化物。实验结果提示,桑葚果渣和杨梅果渣作为食品加工的废弃物开发天然色素,具有更大的开发利用价值。