CN103446165A - 低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用。从褐藻胶中分级纯化的聚古罗糖醛酸降解获得的不同分子量的低聚古罗糖醛酸能够降低由酒精损伤引起的肝体指数升高,拮抗酒精引起的甘油三酯、胆固醇升高,并有效降低血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平,提高血清中总抗氧化力、谷胱甘肽水平和超氧化物歧化酶活性,抑制酒精引起的肝脏中丙二醛的生成,并能够降低小鼠醉酒率、延长小鼠醉酒时间、缩短醒酒时间,从而实现对酒精性肝损伤的保护作用及解酒功能。本发明产品来源于海洋天然产物,具有资源丰富、易于产业化,安全有效等诸多优点,在防治酒精性肝损伤、解酒护肝方面具有广阔的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明属于海洋药物领域,具体涉及低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用。
背景技术
过量饮酒导致的肝脏损伤是一个世界性医学难题。酒精性脂肪肝(ALD)是乙醇所致肝损伤的早期表现,进而可发展成酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化甚至是肝癌。在欧美等发达国家,酒精性肝病及其并发症是导致死亡的重要病因之一。近年来,我国ALD也呈现出发病率逐年增高、肝脏损害程度加重、受损功能器官增多等态势,己对我国人群健康造成***性危害。
ALD的发病机制复杂,乙醇代谢过程中产生的氧化应激是ALD的一个重要原因。氧化应激可以损伤线粒体,导致线粒体功能紊乱。乙醇也可以引起同型半胱氨酸的蓄积导致内质网应激,引起蛋白错误折叠,进而导致脂质蓄积、炎症反应以及细胞凋亡。
目前,临床上对于ALD治疗,除了戒酒和营养支持外,以药物治疗为主,如提高机体抗氧力的水飞蓟素、谷胱甘肽;抑制炎症反应的糖皮质激素;调节肝功能的美他多辛、多烯磷脂酰胆碱等药物。然而这些药物的应用都具有一定的局限性,不能很好的满足临床需求。因此,开发安全有效的,能够预防ALD的药物具有重要的意义。
低聚古罗糖醛酸是一种由海洋褐藻中提取分离获得的胞间多糖,是由L-古罗糖醛酸(guluronic acid,G)通过α-1,4-糖苷键连接组成的线型化合物。目前,国内外有文献报道低聚古罗糖醛酸具有抗氧化、免疫调节、调节粘膜蛋白功能等多种生物学活性,但尚未见有将其应用于酒精性肝损伤方面的报道。本 发明采用动物急性酒精肝损伤模型,探索不同聚合度的低聚古罗糖醛酸对酒精引起的甘油三酯、胆固醇升高的作用的影响,并考察了低聚古罗糖醛酸解拮抗酒精性氧化作用,发现低聚古罗糖醛酸在动物水平对酒精性肝损伤具有显著的保护作用。本发明产品来源于海洋天然产物,具有资源丰富、易于产业化,安全有效等诸多优点,在防治酒精性肝损伤、解酒护肝方面具有广阔的开发应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用,即利用低聚古罗糖醛酸用于预防和治疗酒精性脂肪肝、解酒护肝。
为实现上述发明目的,本发明采用下述技术方案予以实现:
低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用。
所述的低聚古罗糖醛酸以褐藻酸或褐藻酸钠为原料,经化学或物理降解法降解制备得到,其分子骨架为L-古罗糖醛酸G通过α-(1,4)-糖苷键连接形成的线性化合物,重均分子量范围为3kD-13kD,结构通式如下:
式中R=H或Na,Li,Ca,Mg药用盐,n为1-60。
进一步的,所述化学降解法为酸降解或Fenton降解法。
进一步的,所述物理降解法为微波降解法。
所述低聚古罗糖醛酸能够降低由酒精损伤引起的肝脏体重指数升高。
所述低聚古罗糖醛酸能够降低血清中甘油三酯、胆固醇水平,并降低酒精引起的血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平。
所述低聚古罗糖醛酸能够提高血清总抗氧化力、谷胱甘肽水平及超氧化物歧化酶活力,从而拮抗酒精引起的氧化损伤。
所述低聚古罗糖醛酸能够降低肝脏中丙二醛含量,抑制乙醇导致的氧化应激。
所述低聚古罗糖醛酸能够降低小鼠醉酒率,延长小鼠醉酒时间,缩短小鼠醒酒时间,从而达到解酒保肝的作用。
与现有技术相比,本发明的优点和技术效果是:本发明采用昆明小鼠急性酒精肝损伤模型,通过在一次性给与过量酒精前2h,按照体重比给予低聚古罗糖醛酸加以保护,探索低聚古罗糖醛酸对酒精性肝损伤的保护作用。通过实验证明低聚古罗糖醛酸能够降低由酒精损伤引起的肝体指数升高,拮抗酒精引起的甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)升高,有效降低酒精引起的ALT和AST升高,提高血清中GSH水平、SOD活力及血清总抗氧化力,降低肝组织中MDA含量,通过发挥抗氧化作用,实现对酒精性肝损伤的保护作用。
本发明产品来源于海洋天然产物,具有资源丰富、易于产业化,安全有效等诸多优点,在防治酒精性肝损伤方面具有广阔的开发应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细的说明。
实施例1:不同分子量低聚古罗糖醛酸的制备
将聚古罗糖醛酸(Mw=12.6kD,即G-12K)用纯水配置成不同浓度的混悬液,超声1min,使其溶解充分。将其加入8个微波萃取罐中(每罐25mL),设置功率为800W,在不同的温度条件下微波降解不同时间(反应条件见表1),所得产物冷却后,双层滤纸过滤,冻干,获得古罗糖醛酸寡糖混合物,冷冻干燥即可获得不同分子量的低聚古罗糖醛酸,即G-3K,G-4K,G-5K,G-6K。
所述制得的低聚古罗糖醛酸的结构式如下:式中R=H或Na,Li,Ca,Mg等药用盐。
式中n为1-60
用TOSOH TSK GEL3000PWXL柱色谱(7.8mm*300mm,6μm)和右旋糖酐标准品(中国药品生物制品检定所)作为标准,测得获得的低聚古罗糖醛酸的重均分子量。
按照本发明制备的低聚古罗糖醛酸的重均分子量和分布系数如表1所示。
表1样品浓度、反应温度、时间与低聚古罗糖醛酸重均分子量之间的关系
实施例2:低聚古罗糖醛酸对酒精诱导的小鼠肝脏体重指数升高的抑制作用
18-22g昆明种小鼠84只,随机分为对照组、模型组、给药组(不同重均分子量低聚古罗糖醛酸,Mw=3kD、Mw=4kD、Mw=5kD、Mw=6kD、Mw=12kD),每组12只。适应性喂养5天,实验期间小鼠自由进食普通饲料和饮水,一次给药200mg/kg,2h后一次性给予酒精4.8g/kg,禁食不禁水。16h后,将小鼠处死,分离肝脏,用预冷的PBS(0.1M,pH=7)溶液漂洗两次,再用滤纸将脏器表面的水分吸干,称重,计算脏器指数。计算公式如下:脏器指数(%)=脏器重量(g)/体重(g)*100%,结果如表2所示。
表2不同分子量低聚古罗糖醛酸对酒精所致肝脏指数升高的抑制作用
##P<0.01,与正常对照组相比;*P<0.05,**P<0.01,与模型组相比;(n=12;X±SD)
表2测试结果表明,不同分子量的低聚古罗糖醛酸口服给药均能明显抑制酒精引起的小鼠肝脏体重指数升高。
实施例3:低聚古罗糖醛酸对酒精诱导的小鼠血清TG、TC水平升高的抑制作用
18-22g昆明种小鼠60只,随机分为对照组、模型组、给药组(不同重均分子量低聚古罗糖醛酸,Mw=3kD、M-5kD、Mw=12kD),每组12只。适应性喂养5天,实验期间小鼠自由进食普通饲料和饮水,一次给药200mg/kg,2h后一次性给予酒精4.8g/kg,禁食不禁水,16h后眼球取血,3000rpm×10min制备血清,测定TG、TC指标。如表3所示。
表3不同分子量低聚古罗糖醛酸对酒精所致TC、TG升高的抑制作用
##P<0.01,与正常对照组相比;*P<0.05,**P<0.01,与模型组相比;(n=12;X±SD)
表3测试结果表明,不同分子量的低聚古罗糖醛酸口服给药均能明显抑制酒精引起的小鼠血清中胆固醇(TC)水平的升高。不同分子量的低聚古罗糖醛酸亦可抑制酒精引起的小鼠血清中甘油三酯(TG)水平的升高,且抑制活性随着分子量的降低而增强。即结果表明低聚古罗糖醛酸能够减轻因饮酒所致的脂肪蓄积。
实施例4:低聚古罗糖醛酸对酒精诱导的小鼠血清ALT、AST水平升高的抑制作用
18-22g昆明种小鼠60只,随机分为对照组、模型组、给药组(不同重均分子量低聚古罗糖醛酸,Mw=3kD、Mw=5kD、Mw=12kD),每组12只。适应性喂养3-5天,实验期间小鼠自由进食普通饲料和饮水,一次给药200mg/kg,2h后一次性给予酒精4.8g/kg,禁食不禁水,16h后眼球取血,3000rpm×10min制备血清,测定ALT、AST指标,实验结果如表4所示。
表4不同分子量低聚古罗糖醛酸对酒精所致ALT、AST水平升高的抑制作用
##P<0.01,与正常对照组相比;*P<0.05,**P<0.01,与模型组相比;(n=12;X±SD)
表4测试结果表明,不同分子量的低聚古罗糖醛酸口服给药均能明显抑制酒精引起的小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平的升高。即表明聚古罗糖醛酸能够保护肝细胞,减轻炎性反应。
实施例5:低聚古罗糖醛酸提高小鼠血清总抗氧化能力及超氧化物歧化酶活力,并升高血清中谷胱甘肽水平
18-22g昆明种小鼠60只,随机分为对照组、模型组、给药组(重均分子量Mw=3kD低聚古罗糖醛酸,高剂量组G-3K-H:200mg/kg、中剂量组G-3K-M:100mg/kg、低剂量组G-3K-L:50mg/kg),每组12只。适应性喂养3-5天,实验期间小鼠自由进食普通饲料和饮水,给药2h后一次性给予酒精4.8g/kg,禁食不禁水,6h后眼球取血,3000rpm×10min制备血清,测定血清中T-AOC、SOD和GSH指标。实验结果如表5所示。
表5低聚古罗糖醛酸对酒精所致血清中T-AOC、GSH水平及SOD活力降低的拮抗作用
#P<0.05,与正常对照组相比;*P<0.05,**P<0.01,与模型组相比;(n=12;X±SD).
表5测试结果表明,不同分子量的低聚古罗糖醛酸口服给药均能明显提高血清总抗氧化能力(T-AOC)及超氧化物歧化酶(SOD)活力,拮抗酒精引起的小鼠血清中谷胱甘肽(GSH)水平的下降,并具有剂量依赖性。
实施例6:低聚古罗糖醛酸对肝组织中丙二醛合成的抑制作用
18-22g昆明种小鼠60只,随机分为对照组、模型组、给药组(重均分子量Mw=3kD低聚古罗糖醛酸,高剂量组G-3K-H:200mg/kg、中剂量组G-3K-M:100mg/kg、低剂量组G-3K-L:50mg/kg),每组12只。适应性喂养5天,实验期间小鼠自由进食普通饲料和饮水,给药2h后一次性给予酒精4.8g/kg,禁食不禁水,6h后取小鼠肝组织,制备10%肝组织匀浆液,测定肝脏中MDA含量。实验结果如表6所示。
表6低聚古罗糖醛酸对肝组织中MDA合成的抑制作用
#P<0.05,与正常对照组相比;*P<0.05,**P<0.01,与模型组相比;(n=12;X±SD).
表6测试结果表明,不同分子量的低聚古罗糖醛酸口服给药均能明显降低肝脏中丙二醛(MDA)含量,并具有剂量依赖性。
实施例7:小鼠醉酒醒酒实验
18-22g昆明种小鼠50只,随机分为对照组、模型组、给药高、中、低剂 量组(重均分子量Mw=3kD低聚古罗糖醛酸,高剂量组G-3K-H:200mg/kg、中剂量组G-3K-M:100mg/kg、低剂量组G-3K-L:50mg/kg),每组10只。适应性喂养5天,实验期间小鼠自由进食普通饲料和饮水,给药2h后一次性给予酒精5.4g/kg,观察小鼠翻转反射消失,即为醉酒,。统计醉酒小鼠只数,计算醉酒率:醉酒率=醉酒小鼠只数/实验小鼠只数×100%。从给予小鼠酒精到小鼠翻转反射消失的时间即为醉酒时间,小鼠醉酒后恢复翻转反射的时间即为醒酒时间。小鼠醉酒判断:将小鼠取背向放入笼中,若小鼠背向下的姿势保持30s以上,则认为翻转反射消失,即为醉酒。实验结果如表7所示。
表7小鼠醉酒醒酒实验
表7实验结果表明低聚古罗糖醛酸在小鼠急性酒精肝损伤实验中能够降低小鼠醉酒率,延长醉酒时间,缩短醒酒时间,从而达到解酒醒酒的目的。综合其他测定指标结果分析,低聚古罗糖醛酸能够降低小鼠肝脏体重指数,抑制酒精所致血清中TG、TC水平的升高,拮抗酒精所致血清中ALT、AST水平的升高,具有解酒护肝作用。
低聚古罗糖醛酸能够提高小鼠血清中T-AOC含量、SOD活力及GSH水平,同时,可以抑制肝脏中MDA的生成,从而能够激活机体的抗氧化***,在一定程度上抑制乙醇所致氧化应激,实现对急性酒精性肝损伤的保护作用。
由于乙醇所致酒精性脂肪肝是肝脏损伤最初的表现,TG升高是最显著且重要的考察指标,同时,综合其他实验结果,本发明中低分子量的低聚古罗糖醛酸的解酒保肝效果更为显著,具有开发成为防治酒精性肝损伤的保健品的潜质。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其进行限制;尽管参照 前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的普通技术人员来说,依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (9)
1.低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用,其特征在于:所述化学降解法为酸降解或Fenton降解法。
4.根据权利要求2所述的低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用,其特征在于:所述物理降解法为微波降解法。
5.根据权利要求1或2所述的低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用,其特征在于:所述低聚古罗糖醛酸能够降低由酒精损伤引起的肝脏体重指数升高。
6.根据权利要求1或2所述的低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用,其特征在于:所述低聚古罗糖醛酸能够降低血清中甘油三酯、胆固醇水平,并降低酒精引起的血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平。
7.根据权利要求1或2所述的低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用,其特征在于:所述低聚古罗糖醛酸能够提高血清总抗氧化力、谷胱甘肽水平及超氧化物歧化酶活力, 从而拮抗酒精引起的氧化损伤。
8.根据权利要求1或2所述的低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用,其特征在于:所述低聚古罗糖醛酸能够降低肝脏中丙二醛含量,抑制乙醇导致的氧化应激。
9.根据权利要求1或2所述的低聚古罗糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用,其特征在于:所述低聚古罗糖醛酸能够降低小鼠醉酒率,延长小鼠醉酒时间,缩短小鼠醒酒时间,从而达到解酒保肝的作用。
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