CN103409342A - 防治香料烟黑胫病的生防菌株yky01及其生防菌剂 - Google Patents
防治香料烟黑胫病的生防菌株yky01及其生防菌剂 Download PDFInfo
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Abstract
防治香料烟黑胫病的生防菌株YKY01及其生防菌剂,属生物农药技术领域。菌株YKY01的保藏号为CGMCC NO.7723。菌剂经如下步骤得到:菌株YKY01移植到培养皿中活化,33℃ 培养72小时;活化后的菌苔移入用500ml三角瓶装的300ml NA培养液中,在175转/min、33 ℃下培养72小时,获得一级发酵菌液;一级发酵菌液按接种量1:150比例接种于种子罐中的NA培养液中,种子罐的温度32-35℃,发酵48小时后,获得二级发酵用菌种液;二级发酵用菌种液按接种量1:15比例接种于发酵罐中发酵,温度32~35℃,发酵120小时储存作为生防菌液,1500rpm离心3 min,与专用保藏液配成活性菌剂,使菌剂中活菌总浓度为1×1011 CFU/ml以上。本发明成本低,能有效防止香料烟黑胫病的连作障碍,提高产量和品质。
Description
技术领域:
本发明涉及一种防治香料烟黑胫病的生防菌株YKY01及其生防菌剂,属生物农药技术领域。
背景技术:
香料烟又称土耳其烟、东方型烟,原产于地中海沿岸国家,是红花烟草(Nicotian atobacum)的一种特殊烟草类型。由于香料烟具有浓郁芳香和纯净吃味的品质特点,在烟草制品中有着特殊的应用价值,是生产混合型、外香型和东方型卷烟及斗烟丝的重要原料之一。尤其是混合型卷烟具有劲足、味浓、用料广泛、可有效降低焦油含量从而减轻吸烟对人体健康的危害特点,深受吸烟者的青睐,成为当今世界流行的卷烟类型。目前,中国香料烟主要在云南保山、新疆、浙江、湖北进行规模生产。云南省自1988年正式进行香料烟开发以来,经过10年12季的试验、示范和大规模推广种植,并在保山市、怒江州和临沧市建立了稳定的香料烟生产园区,目前年种植面积稳定在4000 hm 2左右,年收购烟叶6000~6500T。
香料烟黑胫病是由黑胫病菌(Phytophtora parasitica var.nicotianae) 引起的一种重要的香料烟毁灭性病害之一。该病广泛地分布于世界烟草种植区,也成为制约我国各烟区烟叶生产的最重要因素之一 [1-2]。目前,国内外在研究烤烟品种对烤烟黑胫病菌的研究报道较多,关于香料烟黑胫病相关的研究相对不足[3-6]。云南省保山市为我国主要的香料烟种植产区,近年来,香料烟黑胫病在香料烟种植基地严重发生,在很多烟区从育苗期就造成了不同程度的烟苗损失,轻则烟苗质量下降,将病菌带至移栽大田,造成烟叶减产,重则全部毁灭,致使无苗可栽,严重制约了香料烟生产的发展,同时浙江绍兴等地区香料烟种植基地发生也较为普遍[6-8]。
化学农业对农田生态***的严重破坏,病原菌对药剂的抗性也越来越明显,同时化学农药不易降解,高残留,对人畜不安全等都严重限制了将来在农业生产上的应用。因此,在香料烟有机栽培中非化学类防治措施,目前已经成为防 治香料烟黑胫病及土传病害的核心方式,而生物防治则为最有前途的方法。
经文献检索,未见与本发明相同的公开报道。
参考文献:
[1] 王智发, 刘延荣, 谢成颂, 张广民, 邢淑华, 姜茱, 陈瑞泰. 山东省烟草黑胫病菌生理小种初步鉴定. 植物保护学报, 1985, 12(1) :51-55.
[2] 王智发, 刘延荣, 谢成颂, 张广民, 陈瑞泰. 我国烟草黑胫病菌生理小种鉴定. 山东农业大学学报,1987, 18(1) :1-8.
[3] Abdul Wajd S M, Shenoi MMand Rao S V. Performance of Flue Cured Tobacco Line FCH 6005 Against Black Shank Disease in Nursery and Field. Tob. Res., 1988, 14( 2 ) : 102-105.
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[5] 龚龙英, 郑小波, 刘翔, 耿济国, 陆家云. 烟草疫霉对烟草的致病性及生理分化研究. 南京农业大学学报, 1993, 16(4) :68-72.
[6] 杨建卿, 江彤, 陈学平, 黄建如. 不同香料烟品种和品系对烟草黑胫病菌的抗病性研究. 中国烟草学报. 2001, 7(3): 34-36.
[7] 唐旭兵, 李光西, 宋玉川, 屈生彬, 兰应海, 付嵘, 杨艳丽. 香料烟黑胫病病原鉴定及防治药剂筛选. 中国烟草学报, 2010, 16(2):66-69
[8] 马德儒. 云南香料烟. 昆明:云南科技出版社, 1998.
发明内容:
本发明的目的在于针对目前农业生产中香料烟黑胫病防治在有机栽培中难度大、成本高,不宜使用化学农药和农药残留高的问题,提供一种防治香料烟黑胫病的生防菌株YKY01及其生防菌剂。
本发明从云南省保山市隆阳区香料烟种植区香料烟根际土壤中分离得到菌株YKY01,对其鉴定结果表明该细菌属于解淀粉芽孢杆菌,该菌株命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) YKY01。该菌株已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;地址:中国. 北京市朝阳区北辰西路1号院3号;保藏日期:2013年6月15日;保藏号:CGMCC NO.7723。
本发明的菌体特征及菌落特征:菌体呈短杆状,具运动性,兼性厌氧,可 形成芽孢,芽孢囊膨大,呈椭圆形,革兰氏染色阳性。在NA培养基上呈浅白色不透明菌落,表面较粗糙,菌落边缘不规则,不产色素。
本发明的生防菌剂经如下步骤得到:
a. 将菌株YKY01移植到培养皿中进行一环活化,33℃ 培养72小时;培养皿中的NA固体培养基配方为:蛋白胨10.0g,牛肉膏3.0g,氯化钠5.0g,琼脂15.0g,蒸馏水1L,PH值7.3;
b. 取一环活化后的菌苔移入用500ml三角瓶装的300ml配方为:蛋白胨10.0g,牛肉膏3.0g,氯化钠5.0g,蒸馏水1L,PH值7.3的NA培养液中,在175转/min、33 ℃下培养72小时,获得一级发酵菌液;
c. 将一级发酵菌液按接种量1:150培的比例接种于种子罐中与b步骤相同的NA培养液中发酵培养,种子罐的温度32~35℃,发酵48小时后,获得二级发酵用菌种液;
d. 将二级发酵用菌种液按接种量1:15倍的比例接种于发酵罐中与b步骤相同的NA培养液中发酵培养,发酵罐的温度为32~35℃,发酵120小时,当发酵罐中的发酵液中芽孢含量大于或等于88%,酸碱度为6.8~7.4时,储存作为生防菌液;
e. 将生防菌液1500rpm离心3 min,取离心后的菌体与专用保藏液配成活性菌剂,使成品中活菌总浓度为1×1011 CFU/ml以上;菌体专用保藏液重量百分比配方为:硅酸镁铝 0.5%,黄原胶 0.12%,尿素 3%,SP-2728(梳型高分子分散剂)2.3%,蒸馏水94.08%。
本发明所用的设备均为市场销售的通用设备。
本发明的优点在于:
1、本发明的生防菌剂制作容易且成本低,无毒、无害、无环境污染,可进行香料烟的有机栽培,保护农田生态***,实施农业的可持续发展;该菌剂还具有促生增产作用,有利于改良香料烟种植土壤,增加土壤中的微生物活性。
2、平板拮抗实验表明:YKY01菌剂对香料烟黑胫病菌和烤烟相关病原真菌具有明显的抑制作用。
4、温室小区试验结果表明:YKY01菌剂能有效控制香料烟黑胫病菌对香料烟植株的侵染,抑制病原菌菌丝的生长,达到控制黑胫病病情发生的效果。另 外,YKY01菌剂能有效促进香料烟植株的生长并提高其抗逆和抗病性。
5、温室试验和大田结果表明:YKY01菌剂对香料烟黑胫病防效为80~85%,增产10~15%。
具体实施方式:
实施例所用的设备均为市场销售的通用设备。
实施例1:生防菌剂的制备
a. 将菌株YKY01移植到培养皿中进行一环活化,33℃ 培养72小时;培养皿中的NA固体培养基配方为:蛋白胨10.0g,牛肉膏3.0g,氯化钠5.0g,琼脂15.0g,蒸馏水1L,PH值7.3;
b. 取一环活化后的菌苔移入用500ml三角瓶装的300ml配方为:蛋白胨10.0g,牛肉膏3.0g,氯化钠5.0g,蒸馏水1L,PH值7.3的NA培养液中,在175转/min、33 ℃下培养72小时,获得一级发酵菌液;
c. 将一级发酵菌液按接种量1:150培的比例接种于种子罐中与b步骤相同的NA培养液中发酵培养,种子罐的温度33℃或34℃或35℃,发酵48小时后,获得二级发酵用菌种液;
d. 将二级发酵用菌种液按接种量1:15倍的比例接种于发酵罐中与b步骤相同的NA培养液中发酵培养,种子罐的温度33℃或34℃或35℃,发酵120小时,当发酵罐中的发酵液中芽孢含量大于或等于88%,酸碱度为6.8或7.4时,储存作为生防菌液;
e. 将生防菌液1500rpm离心3 min,取离心后的菌体与专用保藏液配成活性菌剂,使成品中活菌总浓度为1×1011 CFU/ml以上;菌体专用保藏液重量百分比配方为::硅酸镁铝 0.5%,黄原胶 0.12%,尿素 3%,SP-2728(梳型高分子分散剂)2.3%,蒸馏水94.08%。
实施例2:平板拮抗试验
按照方中达《植病研究方法》中的平板对持培养试验方法,对YKY01菌对香料烟黑胫病菌的抑制效果进行评价,同时灭菌蒸馏水对照处理组病菌菌丝长满平板时统计结果如下,YKY01对香料烟黑胫病菌生长抑制率为91.50%(表1所 示)。说明YKY01菌株对香料烟黑胫病具有显著的抑制作用。
表1 YKY01对香料烟黑胫病菌及相关病菌的抑制作用
实施例3:香料烟黑胫病温室防效试验
设三个处理,处理1为灭菌水对照组,处理2为YKY01菌剂稀释液,处理3为杀真菌剂多菌灵(南京博士邦化工科技有限公司)。香料烟漂浮盘苗移栽入香料烟黑胫病菌病土中,移栽时用YKY01菌剂1︰30倍液蘸根,边蘸根边移栽;作物移栽7天后用YKY01菌剂1︰30倍菌液灌根,每升液体灌根10株作物;作物移栽90天后用YKY01菌剂1︰30倍菌液灌根,每升液体灌根10株作物。其他清水对照和多菌灵农药处理同上述方法和用量。每667m2施用该制剂的量,根据作物移栽株数计算而定。结果表明,YKY01菌剂在温室试验中对香料烟黑胫病的防效达89.58%,高于农药对照组。同时该菌剂能促进香料烟植株的生长,生物量增长率为14.03%(表2所示)。2012年11月15日移栽香料烟漂浮盘苗植株,在2013年5月进行调查,考察香料烟的生长和病害发生的状况。
表2 YKY01对香料烟黑胫病菌的温室试验结果
实施例4:香料烟黑胫病田间防效试验
设3个处理,处理1为灭菌水对照组,处理2为YKY01菌剂稀释液,处理3为杀真菌剂多菌灵(南京博士邦化工科技有限公司)。香料烟漂浮盘苗移栽入香料烟黑胫病菌田间病土中,移栽时用YKY01菌剂1︰30倍液蘸根,边蘸根边移栽;作物移栽7天后用YKY01菌剂1︰30倍菌液灌根,每升液体灌根10株作物;作物移栽90天后用YKY01菌剂1︰30倍菌液灌根,每升液体灌根10株作物。其他清水对照和多菌灵农药处理同上述方法和用量。每个处理设3个小区重复,每个小区面积为150m2,各处理小区随机排列。结果表明,YKY01菌剂在田间小区试验中对香料烟黑胫病的防效达85.36%。同时该菌剂能促进香料烟植株的生长,生物量增长率为10.78%(表3所示)。2012年11月15日移栽一年生香料烟漂浮盘苗植株,在2013年5月进行调查,考察香料烟的生长和病害发生的状况。
表3 YKY01对香料烟黑胫病菌的田间病土试验结果
以上所有实施例中,YKY01菌剂稀释液应始终 ≥ 1×109个/g以上的解淀粉芽胞杆菌数量。
实施例的试验结果均表明,本发明的YKY01菌剂对于香料烟黑胫病害的防治效果较好,明显降低了香料烟黑胫病的发病率。并且对于香料烟的生长发育有较强的促进作用,经济效益和环境效益显著。
Claims (2)
1.一种防治香料烟黑胫病的生防菌株YKY01,为解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens),2013年6月15日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心,保藏号:CGMCC NO.7723。
2.用权利要求1所述的生防菌株YKY01制备的防治香料烟黑胫病的生防菌剂,其特征在于该生防菌剂经如下步骤得到:
a. 将菌株YKY01移植到培养皿中进行一环活化,33℃ 培养72小时;培养皿中的NA固体培养基配方为:蛋白胨10.0g,牛肉膏3.0g,氯化钠5.0g,琼脂15.0g,蒸馏水1L,PH值7.3;
b. 取一环活化后的菌苔移入用500ml三角瓶装的300ml配方为:蛋白胨10.0g,牛肉膏3.0g,氯化钠5.0g,蒸馏水1L,PH值7.3的NA培养液中,在175转/min、33 ℃下培养72小时,获得一级发酵菌液;
c. 将一级发酵菌液按接种量1:150培的比例接种于种子罐中与b步骤相同的NA培养液中发酵培养,种子罐的温度32~35℃,发酵48小时后,获得二级发酵用菌种液;
d. 将二级发酵用菌种液按接种量1:15倍的比例接种于发酵罐中与b步骤相同的NA培养液中发酵培养,发酵罐的温度为32~35℃,发酵120小时,当发酵罐中的发酵液中芽孢含量大于或等于88%,酸碱度为6.8~7.4时,储存作为生防菌液;
e. 将生防菌液1500rpm离心3 min,取离心后的菌体与专用保藏液配成活性菌剂,使成品中活菌总浓度为1×1011 CFU/ml以上;菌体专用保藏液重量百分比配方为:硅酸镁铝 0.5%,黄原胶 0.12%,尿素3%, SP-2728梳型高分子分散剂 2.3%,蒸馏水94.08%。
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