CN103382182A - 苯基脲偶联喹唑啉类化合物及其制备方法、药物组合物及药物用途 - Google Patents

苯基脲偶联喹唑啉类化合物及其制备方法、药物组合物及药物用途 Download PDF

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CN103382182A CN2013102483702A CN201310248370A CN103382182A CN 103382182 A CN103382182 A CN 103382182A CN 2013102483702 A CN2013102483702 A CN 2013102483702A CN 201310248370 A CN201310248370 A CN 201310248370A CN 103382182 A CN103382182 A CN 103382182A
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Abstract

本发明提供一种式(I)所示的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐，其中，R1为H;Br、Cl或F;-CH3、-CH2-CH3、-CH2(CH3)2或-CF3;-O-CH3、-O-CH2-CH3或-O-CH2(CH3）2；-C≡CH或-C≡N;n1为1、2、3、4或5;R2或R3之一为式(II)所示的基团;R4为H;Br、Cl或F;-CH3、-CH3-CH3、-CH2(CH3)2或-CF3;-O-CH3、-O-CH2-CH3或-O-CH2(CH3)2;-NH2;或-NO2;n2为1、2、3、4或5;R2或R3中的另外一个为H、-O-CH3、-O-CH2-CH3、-O-CH2(CH3)2、或

Description

苯基脲偶联喹唑啉类化合物及其制备方法、药物组合物及药物用途
技术领域
本发明涉及一种苯基脲偶联喹唑啉类化合物，具体涉及一种具有蛋白酪氨酸激酶抑制作用的苯基脲偶联喹唑啉类化合物及其制备方法、该衍生物中间体的制备方法、药物组合物、及其在制备涉及蛋白酪氨酸激酶过度表达的疾病的药物中的用途。
背景技术
表皮生长因子受体（EGFR）是一种由单一多肽链组成的跨膜糖蛋白，它与细胞外部的生长因子（EGF）结合后被激活，可以选择性地使含有酪氨酸残基的受体蛋白磷酸化。这种酪氨酸磷酸化作用与许多细胞调节过程有关，如T细胞及B细胞的激活、有丝***、分化与发育、对外界刺激的反应、细胞存活及生长状况调节等（F.Al-Obeidi等人，Peptide Science47(1998),197和T.Hunter,Cell88(1997),333）。研究表明，当酪氨酸蛋白激酶过度表达时，细胞的生长调控失控，始终处于增生状态，进而发展成为恶性肿瘤（R.Patarca,Critical Reviews in Oncogenesis7(1996),343）。
在表皮生长因子受体抑制剂的研究中，酪氨酸激酶PTK(ProteinTyrosine Kinase)是近年来发现的抗肿瘤药物作用的重要分子靶点。基于该靶点设计的小分子酪氨酸激酶类（4-苯胺基喹唑啉类）抑制剂，副作用轻微，有良好的耐受性，成为治疗各种实体肿瘤的新的有效治疗药物。
因此，开发具有蛋白酪氨酸激酶抑制作用的新化合物具有重要意义。
发明内容
针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐，该喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐能够用于治疗涉及蛋白酪氨酸激酶过度表达的疾病。
本发明的另一目的在于提供一种制备上述苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐的方法。
本发明的再一目的在于提供一种制备上述苯基脲偶联喹唑啉类化合物及其中间体的方法。
本发明的再一目的在于提供一种药物组合物。
本发明的再一目的在于提供上述苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐在制备涉及蛋白酪氨酸激酶过度表达的疾病的药物中的用途。
为达到上述目的，本发明提供一种式（I）所示的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐。
Figure BDA00003382604900021
其中，R1为H；Br、Cl或F；-CH3、-CH2-CH3、-CH2(CH3)2或-CF3；-O-CH3、-O-CH2-CH3或-O-CH2(CH3)2；-C≡CH或-C≡N；
n1为1、2、3、4或5；
R2或R3之一为式（II）所示的基团；
Figure BDA00003382604900022
其中，R4为H；Br、Cl或F；-CH3、-CH2-CH3、-CH2(CH3)2或-CF3；-O-CH3、-O-CH2-CH3或-O-CH2(CH3)2；-NH2；或-NO2；
n2为1、2、3、4或5；
R2或R3中的另外一个为H、-O-CH3、-O-CH2-CH3、-O-CH2(CH3)2、
Figure BDA00003382604900023
优选地，所述式（Ⅰ）所示的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐选自以下化合物：
1-苯基-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-苯基-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(4-甲氧基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-异丙基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2,4,6-三甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-(2-甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-苯基-3-[4-(2-氯苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2,4-二氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-(2,3-二甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(2,4-二氟苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(4-甲氧基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(2,4,6-三甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(4-硝基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(4-氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-(4-氟苯基)-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-(7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-6-基)脲，
1-苯基-3-(4-苯胺基喹唑啉-6-基)脲，
1-苯基-3-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-氰基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(吗啉-4-基)-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-(6-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-苯基-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯胺基喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[6-(吗啉-4-基)-4-苯胺基喹唑啉-7-基]脲或
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲；或这些化合物的盐。
优选地，所述药学上可接受的盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、半硫酸盐、磷酸盐或羧酸盐，优选氨基酸盐。
本发明还提供一种制备上述式（I）所示的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐的方法，包括以下步骤：
步骤a：式（III）所示的化合物在有机溶剂中与催化剂反应，优选回流反应1h，生成式（IV）所示的化合物；
Figure BDA00003382604900041
其中，R5或R6之一为NO2；
R5或R6中的另外一个为H、-O-CH3、-O-CH2-CH3、-O-CH2(CH3)2、
步骤b：式（IV）所示的化合物与式（V）所示的化合物在有机溶剂中反应，优选回流反应1.5h，生成式（VI）所示的化合物；
Figure BDA00003382604900052
其中，R1、n1的定义同式（Ⅰ）中R1、n1的定义相同；
步骤c：式（VI）所示的化合物在有机溶剂中与还原剂反应，优选回流反应1h，生成式（VII）所示的化合物；
Figure BDA00003382604900054
其中R7或R8之一为NH2；
R7或R8中的另外一个为H、-O-CH3、-O-CH2-CH3、-O-CH2(CH3)2、
Figure BDA00003382604900055
步骤d：式（VII）所示的化合物与式（VIII）所示的化合物在有机溶剂中，优选在室温反应3h，生成式（I）所示的化合物;
Figure BDA00003382604900056
其中，R4、n2的定义与式（I）中R4、n2的定义相同。
优选地，所述方法进一步包括：
步骤e：室温下，式（I）所示的化合物与酸或碱在有机溶剂中反应生成式（Ⅹ）所示的化合物；
Figure BDA00003382604900061
其中，M为盐酸、氢溴酸、硫酸、半硫酸、磷酸或羧酸，优选氨基酸或盐酸；R1、n1、R2、R3的定义同式（Ⅰ）中R1、n1、R2、R3的定义相同。
优选地，所述步骤a中的有机溶剂为氯化亚砜，催化剂为二甲基甲酰胺（DMF）；
优选地，所述步骤b中的有机溶剂为异丙醇、无水乙腈或无水四氢呋喃；
优选地，所述步骤c中的有机溶剂为乙酸乙酯或无水乙醇；还原剂优选氯化亚锡、水合肼或雷尼镍中的一种或多种。
优选地，所述步骤d中的有机溶剂为乙腈或无水四氢呋喃；
优选地，所述步骤e中的有机溶剂为无水乙醇或二氯甲烷；
优选地，式（VIII）所示的化合物的制备方法包括：式（IX）所示的化合物与三光气(BTC)在有机溶剂中反应生成式（VIII）所示的化合物。
本发明还提供一种制备上述式（I）所示的化合物的中间体的方法，所述中间体为苯基异氰酸酯，该方法包括：
将式（IX）所示的化合物和三乙胺的1,2-二氯乙烷溶液滴加到三光气的1,2-二氯乙烷溶液中，反应后得到式（IX）化合物对应的苯基异氰酸酯中间体，
其中，R4、n2的定义与式（I）中R4、n2的定义相同。
优选地，上述方法具体包括：冰水浴冷却条件下，将式（IX）所示的化合物和三乙胺的1,2-二氯乙烷溶液，滴加到三光气的1,2-二氯乙烷中，控制滴加速度，优选2滴/秒，滴加完毕后，室温搅拌1h，加热回流3h，放置至室温，过滤后得到滤液，用1,2-二氯乙烷洗涤滤饼，合并滤液，蒸除溶剂后得油状物，再经减压分馏后得到式（IX）所示的化合物对应的苯基异氰酸酯中间体。
本发明进一步提供一种药物组合物，其包含如上所述的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。用于本发明的载体、赋形剂或稀释剂可为本领域常用的载体、赋形剂或稀释剂，例如硬脂酸镁、滑石粉、二氧化硅、干淀粉、羧基纤维素钠、羧甲淀粉钠、羟丙基纤维素及交联聚维酮等。
优选地，本发明的药物组合物可进一步包含除上述苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐之外的其他活性物质，例如硬脂酸镁、二氧化硅、干淀粉及羧甲淀粉钠等，另外也可包括其他的添加剂及辅助剂等，例如乙醇、水、碳酸氢钠、蔗糖及枸橼酸等。
本发明进一步提供上述苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐在制备涉及蛋白酪氨酸激酶过度表达的疾病的药物中的用途。
其中，所述涉及蛋白酪氨酸激酶过度表达的疾病为恶性肿瘤，包括但不限于：肺癌，优选非小细胞肺癌；胰腺癌；磷状上皮癌；甲状腺髓样癌；头颈部癌；食道癌；胃癌；或妇科癌瘤优选膀胱癌和乳腺癌。
本发明通过对4-苯胺基喹唑啉类药物构效关系的研究(L.Hennequin,Journal of Medicinal Chemistry(1999),42(26),5369-5389)，根据现有技术中对4-苯胺基喹唑啉类药物构效关系的理解，以4-苯胺基喹唑啉为母核结构，分别对4位取代基和7位（或6位）取代基进行修饰，以得到具有酪氨酸激酶的多靶点抑制作用的先导化合物。对4位取代基的修饰，主要以芳香环结构为主，而对7位（或6位）取代基的修饰主要以取代苯基脲结构为主，以此得到本发明的苯基脲偶联喹唑啉类化合物。
此外，本发明合成的4-苯胺基喹唑啉类化合物的结构中，已经发现部分结构具有明显的药理活性。本发明的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐能够有效地治疗涉及蛋白酪氨酸激酶过度表达的疾病。
附图说明
图1示出了本发明的化合物2对A549细胞的IC50图谱；
图2示出了本发明的化合物18对A549细胞的IC50图谱；
图3示出了本发明的化合物33对A549细胞的IC50图谱。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药品、试剂等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
本发明实施例中的终产物通过质谱法（ESI-MS）和1H-NMR（500MHz，在二甲基亚砜（DMSO）中）进行测定。
实施例1  1-苯基-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲（化合物1）的合成
化合物1的合成路线及方法如下：
Figure BDA00003382604900081
步骤1：7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮的制备
将2-氨基-4-硝基苯甲酸（7.28g，40.0mmol）及甲酸铵（3.78g，60.0mmol)加入到100mL甲酰胺中，加热至150℃，保温反应16h，冷却至室温，析出固体，过滤，用异丙醇洗涤，干燥，得棕色针状固体7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮6.62g，产率为86.6%。
步骤2：7-硝基-4-苯胺基喹唑啉的制备
将7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮（2.25g，11.8mmol）加入到23mL SOCl2溶液中，然后加入0.2mL DMF，回流搅拌1h，溶液逐渐变为棕色澄清，停止反应，冷却至室温，蒸除过量的SOCl2，得到黄色固体7-硝基-4-氯喹唑啉。将得到的黄色固体搅碎，加入10mL石油醚，减压蒸出石油醚，重复加入石油醚操作2次，以去除残余的SOCl2，得到黄色固体。不经纯化向上述黄色固体中加入苯胺（1.31g，14.1mmol），异丙醇37mL，回流搅拌1.5h，有固体析出，冷却至室温，过滤，用异丙醇洗涤，干燥，得黄色固体7-硝基-4-苯胺基喹唑啉1.87g，产率为59.7%。
步骤3：7-氨基-4-苯胺基喹唑啉的制备
将7-硝基-4-苯胺基喹唑啉（1.31g，4.9mmol）、二水合氯化亚锡（4.42g，19.6mmol）和乙酸乙酯49mL混合，回流反应1h。反应液先变澄清，后出现沉淀，反应完毕后，放置至室温，过滤，所得沉淀用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯溶液，用饱和碳酸氢钠溶液调节至中性，分离乙酸乙酯层，用10mL水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩至干，干燥，得到黄色固体7-氨基-4-苯胺基喹唑啉0.95g，产率为81.1%。
步骤4：苯基异氰酸酯的制备
冰水浴冷却下，将苯胺（0.73g，7.8mmol）和三乙胺（1.64g，16.2mmol）的1,2-二氯乙烷（4mL）的混合溶液缓慢滴加到三光气（0.94g，3.2mmol）和干燥的1,2-二氯乙烷（8mL）的溶液中，控制滴加速度（2滴/秒），滴加完毕后，室温搅拌1h，加热回流3h，放置至室温，过滤得滤液，用1,2-二氯乙烷洗涤滤饼，合并滤液，蒸除溶剂后得油状物，再经减压分馏得到无色液体苯基异氰酸酯0.70g，产率为75.4%。
步骤5：1-苯基-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲的制备
将苯基异氰酸酯（0.26g，2.2mmol）加入到20mL乙腈中，室温搅拌下，分批加入7-氨基-4-苯胺基喹唑啉（0.47g，2.0mmol)，室温搅拌3h，过滤得固体，用乙腈洗涤，干燥，再用80%乙醇重结晶，得到淡黄色固体1-苯基-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲（化合物1）0.62g，产率为79.5%。
实施例2  1-苯基-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物2）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的4-甲基苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例3  1-苯基-3-[4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物3）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-甲基苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例4  1-苯基-3-[4-(4-甲氧基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物4）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(4-甲氧基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的4-甲氧基苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(4-甲氧基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(4-甲氧基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(4-甲氧基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(4-甲氧基苯胺基)喹唑啉。
实施例5  1-苯基-3-[4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物5）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2-氟-4-溴苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉。
实施例6  1-苯基-3-[4-(3-异丙基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物6）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(3-异丙基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-异丙基苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(3-异丙基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(3-异丙基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(3-异丙基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(3-异丙基苯胺基)喹唑啉。
实施例7  1-苯基-3-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物7）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-氯-4-氟苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉。
实施例8  1-苯基-3-[4-(2,4,6-三甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物8）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(2,4,6-三甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2,4,6-三甲基苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(2,4,6-三甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(2,4,6-三甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(2,4,6-三甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(2,4,6-三甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例9  1-苯基-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物9）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2,3-二甲基苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例10  1-(2-甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲（化合物10）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例1中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例1中步骤3实验操作。
步骤4：2-甲基苯基异氰酸酯的制备
参见实施例1中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯胺替换成等摩尔量的2-甲基苯胺。
步骤5：1-(2-甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯基异氰酸酯替换成等摩尔量的2-甲基苯基异氰酸酯。
实施例11  1-苯基-3-[4-(2-氯苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物11）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(2-氯苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2-氯苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(2-氯苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(2-氯苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(2-氯苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(2-氯苯胺基)喹唑啉。
实施例12  1-苯基-3-[4-(2,4-二氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物12）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(2,4-二氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2,4-二氟苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(2,4-二氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(2,4-二氟苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(2,4-二氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(2,4-二氟苯胺基)喹唑啉。
实施例13  1-(2,4-二氟苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲（化合物13）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例1中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例1中步骤3实验操作。
步骤4：2,4-二氟苯基异氰酸酯的合成
参见实施例1中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯胺替换成等摩尔量的2,4-二氟苯胺。
步骤5：1-(2,4-二氟苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯基异氰酸酯替换成等摩尔量的2,4-二氟苯基异氰酸酯。
实施例14  1-(4-甲氧基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲（化合物14）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例1中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例1中步骤3实验操作。
步骤4：4-甲氧基苯基异氰酸酯的合成
参见实施例1中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯胺替换成等摩尔量的4-甲氧基苯胺。
步骤5：1-(4-甲氧基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯基异氰酸酯替换成等摩尔量的4-甲氧基苯基异氰酸酯。
实施例15  1-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物15）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例9中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例9中步骤3实验操作。
步骤4：参见实施例14中步骤4实验操作。
步骤5：1-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例9中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯基异氰酸酯替换成等摩尔量的4-甲氧基苯基异氰酸酯。
实施例16  1-苯基-3-[4-(4-氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物16）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的4-氟苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(4-氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉。
实施例17  1-(4-氟苯基)-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物17）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例2中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例2中步骤3实验操作。
步骤4：4-氟苯基异氰酸酯的合成
参见实施例1中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯胺替换成等摩尔量的4-氟苯胺。
步骤5：1-(4-氟苯基)-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例2中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯基异氰酸酯替换成等摩尔量的4-氟苯基异氰酸酯。
实施例18  1-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物18）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例2中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例2中步骤3实验操作。
步骤4：参见实施例14中步骤4实验操作。
步骤5：1-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例2中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯基异氰酸酯替换成等摩尔量的4-甲氧基苯基异氰酸酯。
实施例19  1-苯基-3-(7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-6-基)脲（化合物19）的合成
化合物19的合成路线及方法如下：
Figure BDA00003382604900171
步骤1：7-氯-3H-喹唑啉-4-酮的制备
将4-氯-2-氨基苯甲酸（10.26g，60.0mmol）和醋酸甲脒（12.50g，120.0mmol）加入到250mL乙二醇单甲醚中，加热至120℃，保温反应16h，冷却至室温，减压浓缩至干，用0.01mol/L氨水洗至中性，抽滤，干燥，得灰白色固体7-氯-3H-喹唑啉-4-酮9.52g，产率为88.1%。
步骤2：7-氯-6-硝基-3H-喹唑啉-4-酮的制备
冰水浴冷却下，将7-氯-3H-喹唑啉-4-酮（9.00g，50.0mmol）分批加到混酸（浓硫酸30mL和发烟硝酸30mL）中，加毕，室温搅拌1h，加热至45℃，搅拌过夜。然后将反应液倒入60mL冰水中，过滤，过滤所得固体用水洗涤，采用乙酸重结晶，干燥，得黄色固体7-氯-6-硝基-3H-喹唑啉-4-酮7.78g，产率为68.3%。
步骤3：6-硝基-7-甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮的制备
将7-氯-6-硝基-3H-喹唑啉-4-酮（7.01g，31.1mmol）溶解于干燥的120mLDMF中，后加入甲醇钠（5.45g，101.0mmol）的无水甲醇溶液（120mL）及碘化钾（5.16g，31.1mmol），加热至90℃，反应20h。将反应液抽滤，用乙酸调节滤液至中性，用水稀释，析出固体，抽滤，得黄色固体6-硝基-7-甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮6.02g，产率为87.6%。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉的制备
将6-硝基-7-甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮（4.42g，20.0mmol）加入到45mLSOCl2溶液中，然后加入0.4mL DMF，回流搅拌2h，溶液逐渐变为褐色澄清，停止反应，冷却至室温，蒸除过量的SOCl2，得浅黄色固体4-氯-6-硝基-7-甲氧基喹唑啉。将得到的浅黄色固体搅碎，加入30mL石油醚，减压蒸出石油醚，重复加入石油醚操作2次，去除残余的SOCl2，得到黄色固体。不经纯化将黄色固体转移到三口瓶中，加入苯胺（2.05g，22.0mmol），异丙醇170mL，回流搅拌2h，冷却至室温，收集固体，用异丙醇洗涤，干燥，得黄色固体6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉3.67g，产率为61.9%。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉的制备
将6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉（2.37g，8.0mmol）和二水合氯化亚锡（10.84g，48.0mmol）加入到250mL乙酸乙酯中，回流反应1h。反应完毕，放置至室温，过滤，过滤所得固体用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯溶液，用饱和碳酸氢钠溶液调节至中性，分离乙酸乙酯层，用30mL水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩至干，得棕褐色固体6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉1.50g，产率为70.4%。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-(7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-6-基)脲的制备
将苯基异氰酸酯（0.26g，2.2mmol）加入到20mL乙腈中，室温搅拌下分批加入6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉（0.53g，2.0mmol），室温搅拌3h，过滤得固体，用乙腈洗涤，干燥，再用80%乙醇重结晶，得淡黄色固体1-苯基-3-(7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-6-基)脲（化合物19）0.51g，产率为66.2%。
实施例20  1-苯基-3-[4-(3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物20）的合成
步骤1参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-三氟甲基苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例21  1-(2,3-二甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲（化合物21）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例1中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例1中步骤3实验操作。
步骤4：2,3-二甲基苯基异氰酸酯的制备
参见实施例1中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯胺替换成等摩尔量的2,3-二甲基苯胺。
步骤5：1-(2,3-二甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯基异氰酸酯替换成等摩尔量的2,3-二甲基苯基异氰酸酯。
实施例22  1-苯基-3-[4-(2-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物22）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(2-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2-甲基苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(2-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(2-甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(2-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(2-甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例23  1-(2,4,6-三甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲（化合物23）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例1中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例1中步骤3实验操作。
步骤4：2,4,6-三甲基苯基异氰酸酯的合成
参见实施例1中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯胺替换成等摩尔量的2,4,6-三甲基苯胺。
步骤5：1-(2,4,6-三甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯基异氰酸酯替换成等摩尔量的2,4,6-三甲基苯基异氰酸酯。
实施例24  1-(4-硝基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲（化合物24）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例1中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例1中步骤3实验操作。
步骤4：4-硝基苯基异氰酸酯的合成
参见实施例1中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯胺替换成等摩尔量的4-硝基苯胺。
步骤5：1-(4-硝基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中反应物苯基异氰酸酯替换成等摩尔量的4-硝基苯基异氰酸酯。
实施例25  1-苯基-3-[4-(4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物25）的合成
化合物25的合成路线及方法如下：
Figure BDA00003382604900201
步骤1：6-硝基-3H-喹唑啉-4-酮的制备
将2-氨基-5-硝基苯甲酸（7.28g，40.0mmol）加入到60mL甲酰胺中，加热至120℃，保温反应16h，冷却至室温，析出固体，过滤，用异丙醇洗涤，干燥，得棕色固体6-硝基-3H-喹唑啉-4-酮3.94g，产率为51.6%。
步骤2：6-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
将6-硝基-3H-喹唑啉-4-酮（2.25g，11.8mmol）加入到23mLSOCl2溶液中，然后加入0.2mL DMF，回流搅拌1h，溶液逐渐变为棕色澄清，停止反应，冷却至室温，蒸除过量的SOCl2，得黄色固体4-氯-6-硝基喹唑啉。将得到的黄色固体搅碎，加入10mL石油醚，减压蒸出石油醚，重复加入石油醚操作2次，去除残余的SOCl2，得黄色固体。不经纯化向黄色固体中加入4-氟苯胺（1.27g，14.1mmol），异丙醇37mL，回流搅拌2h，析出固体，冷却至室温，过滤收集固体，用异丙醇洗涤，干燥，得黄色固体6-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉2.52g，产率为75.2%。
步骤3：6-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
将6-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉（1.39g，4.9mmol）和二水合氯化亚锡（4.42g，19.6mmol）和乙酸乙酯49mL混合，回流反应1h。反应液先变澄清，后出现沉淀，反应完毕后，放置至室温，过滤，所得沉淀用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯溶液，用饱和碳酸氢钠溶液调节至中性，分离乙酸乙酯层，用10mL水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩至干，得黄绿色固体6-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉1.12g，产率为89.9%。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
将苯基异氰酸酯（0.26g，2.2mmol）加入到20mL乙腈中，室温搅拌下，分批加入6-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉（0.56g，2.0mmol），室温搅拌3h，过滤后得到固体，用乙腈洗涤，干燥，再用80%乙醇重结晶，得淡黄色固体1-苯基-3-[4-(4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物25）0.51g，产率为68.3%。
实施例26  1-苯基-3-(4-苯胺基喹唑啉-6-基)脲（化合物26）的合成
步骤1：参见实施例25中步骤1实验操作。
步骤2：6-硝基-4-苯胺基喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的4-氟苯胺替换成等摩尔量的苯胺。
步骤3：6-氨基-4-苯胺基喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-4-苯胺基喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-(4-苯氨基喹唑啉-6-基)脲的制备
参见实施例25中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-4-苯胺基喹唑啉。
实施例27  1-苯基-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物27）的合成
步骤1：参见实施例25中步骤1实验操作。
步骤2：6-硝基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的4-氟苯胺替换成等摩尔量的4-甲基苯胺。
步骤3：6-氨基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例25中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例28  1-苯基-3-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物28）的合成
步骤1：参见实施例25中步骤1实验操作。
步骤2：6-硝基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的4-氟苯胺替换成等摩尔量的3-溴苯胺。
步骤3：6-氨基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例25中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉。
实施例291-苯基-3-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物29）的合成
步骤1：参见实施例25中步骤1实验操作。
步骤2：6-硝基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的4-氟苯胺替换成等摩尔量的3-氯-4-氟苯胺。
步骤3：6-氨基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例25中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉。
实施例30  1-苯基-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物30）的合成
步骤1：参见实施例25中步骤1实验操作。
步骤2：6-硝基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的4-氟苯胺替换成等摩尔量的2,3-二甲基苯胺。
步骤3：6-氨基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例25中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例25中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-4-(4-氟苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例31  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物31）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-甲基苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例32  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物32）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的4-甲基苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例33  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物33）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-溴苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉。
实施例34  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物34）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-氯-4-氟苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉。
实施例35  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物35）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2,3-二甲基苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例36  1-苯基-3-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物36）的合成
步骤1：参见实施例1中步骤1实验操作。
步骤2：7-硝基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤2实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-溴苯胺。
步骤3：7-氨基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例1中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-硝基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤4：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤5：1-苯基-3-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例1中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的7-氨基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉。
实施例37  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物37）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的4-氯-3-三氟甲基苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉。
实施例38  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物38）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2-氟-4-溴苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉。
实施例39  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物39）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-乙炔基苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯胺基)喹唑啉。
实施例40  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物40）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(4-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的4-溴苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(4-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(4-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(4-溴苯胺基)喹唑啉。
实施例41  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-氰基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物41）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例19中步骤3实验操作。
步骤4：6-硝基-7-甲氧基-4-(3-氰基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-氰基苯胺。
步骤5：6-氨基-7-甲氧基-4-(3-氰基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例19中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-甲氧基-4-(3-氰基苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-氰基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例19中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-甲氧基-4-(3-氰基苯胺基)喹唑啉。
实施例42  1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物42）的合成
化合物42的合成路线及方法如下：
Figure BDA00003382604900291
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：6-硝基-7-氯-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
将上述得到的6-硝基-7-氯-3H-喹唑啉-4-酮（9.00g，40.0mmol）加入到90mL SOCl2溶液中，然后加入0.9mL DMF，回流搅拌2h，溶液逐渐变为深黄色澄清，停止反应，冷却至室温，蒸除过量的SOCl2，得到黄色固体4,7-二氯-6-硝基喹唑啉。将黄色固体搅碎，加入50mL石油醚，减压蒸出石油醚，重复加入石油醚操作2次，去除残余的SOCl2，得到黄色固体。不经纯化将黄色固体转移到三口瓶中，加入3-甲基苯胺（4.71g，44.0mmol），异丙醇170mL，回流搅拌2h，析出固体，冷却至室温，收集固体，用异丙醇洗涤，干燥，得黄色固体6-硝基-7-氯-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉6.87g，产率为54.7%。
步骤4：6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
将6-硝基-7-氯-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉（6.28g，20.0mmol）加入N-甲基哌嗪（20.0g，200.0mmol）中，在氮气气氛下，加热至70℃，保温反应4h，冷却至室温，减压蒸干，加入乙酸乙酯提取，抽滤，滤液旋干，残渣加入60mL乙醇，搅拌下滴加120mL蒸馏水，搅拌30min，析出黄色固体，抽滤，得黄色固体6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉4.32g，产率57.1%。
步骤5：6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉的制备
将6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉（3.79g，10.0mmol）、水合肼（0.20g，4.0mmol）及雷尼镍（7.6mL）加入到乙醇（500mL）中，在氮气气氛下，加热至回流，保温反应2h，将反应液抽滤，并将滤液减压蒸干，采用石油醚与乙酸乙酯（3:1）混合液洗涤残渣，抽滤，得到黄色固体6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉2.15g，产率61.7%。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
将6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉（0.70g，2.0mmol）于60℃热溶于20mL乙腈中，加入苯基异氰酸酯（0.26g，2.2mmol），回流反应2h，过滤，乙腈洗涤滤饼，干燥，得淡黄色固体1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲0.68g，产率为72.8%。
实施例43  1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物43）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：6-硝基-7-氯-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-溴苯胺。
步骤4：6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-氯-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-氯-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤5：6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例42中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉。
实施例44  1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物44）的合成
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：6-硝基-7-氯-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2-氟-4-溴苯胺。
步骤4：6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-氯-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-氯-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤5：6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例42中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉。
实施例45  1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物45）的合成
步骤1参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：6-硝基-7-氯-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的2-甲基-4-甲氧基苯胺。
步骤4：6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤4实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-氯-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-氯-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉。
步骤5：6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉。
步骤6参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例42中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉。
实施例46  1-苯基-3-[7-(吗啉-4-基)-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（化合物46）的合成
化合物46的合成路线及方法如下：
步骤1：参见实施例19中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例19中步骤2实验操作。
步骤3：6-硝基-7-氯-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤3实验操作，唯一不同之处为将此步骤中加入的苯胺替换成等摩尔量的3-氯-4-氟苯胺。
步骤4：6-硝基-7-(吗啉-4-基)-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
将6-硝基-7-氯-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉（70.62g，20.0mmol）加入吗啉（17.42g，200.0mmol）中，在氮气气氛下，加热至70℃，保温反应4h，冷却至室温，减压蒸干，加入乙酸乙酯提取，抽滤，滤液旋干，残渣加入60mL乙醇，搅拌下滴加120mL蒸馏水，搅拌30min，析出黄色固体，抽滤，得黄色固体6-硝基-7-(吗啉-4-基)-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉4.73g，产率58.6%。
步骤5：6-氨基-7-(吗啉-4-基)-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉的制备
参见实施例42中步骤5实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-硝基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-硝基-7-(吗啉-4-基)-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉。
步骤6：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤7：1-苯基-3-[7-(吗啉-4-基)-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲的制备
参见实施例42中步骤7实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-氨基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉替换成等摩尔量的6-氨基-7-(吗啉-4-基)-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉。
实施例47  1-苯基-3-(6-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲（化合物47）的合成
化合物47的合成路线及方法如下：
Figure BDA00003382604900341
步骤1:N-(2-甲基-4-甲氧基-苯基)乙酰胺的合成
将4-甲氧基-2-甲基苯胺（18.40g，134.1mmol）逐滴加入到乙酸酐（13.69g，134.1mmol）和140mL乙酸的混合溶液中，加热至60℃，保温反应30min，减压浓缩至干，残渣用80mL乙酸乙酯溶解，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8.0，分离乙酸乙酯层，用蒸馏水和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩至干，得黄色固体N-(2-甲基-4-甲氧基-苯基)乙酰胺18.22g，产率为75.8%。
步骤2：N-(2-甲基-4-甲氧基-5-硝基苯基)乙酰胺
将N-(2-甲基-4-甲氧基-苯基)乙酰胺（16.18g，90.3mmol）溶于166ml三氟乙酸中，冰水浴冷却至0℃。缓慢加入硝酸钾（10.11g，100.0mmol），室温搅拌1h。将反应液倒入冰水中淬火，用乙酸乙酯（2×50mL）萃取，合并乙酸乙酯溶液，用饱和碳酸氢钠溶液调节至中性，用蒸馏水和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩至干，残渣加入100mL乙酸乙酯中，搅拌1h，抽滤，得黄色固体N-(2-甲基-4-甲氧基-5-硝基苯基)乙酰胺16.84g，产率为83.2%。
步骤3:2-乙酰胺基-5-甲氧基-4-硝基苯甲酸
将N-(2-甲基-4-甲氧基-5-硝基苯基)乙酰胺（15.04g，67.1mmol）加入到硫酸镁（10.11g，84.0mmol）和高锰酸钾（29.22g，184.9mmol）的671mL水溶液中，升温至80℃，反应45min后，加入硫酸镁（5.08g，42.2mmol）和高锰酸钾（14.63g，92.6mmol），反应1h。抽滤，滤饼用热水（2×300mL）洗涤。滤液用3.0N HCl溶液酸化至pH为3.0，加入300mL二氯甲烷分液，用二氯甲烷（2×200mL）萃取，合并二氯甲烷溶液，无水硫酸镁干燥，减压浓缩至干，得黄色固体2-乙酰胺基-5-甲氧基-4-硝基苯甲酸11.37g，产率为66.7%。
步骤4：2-氨基-5-甲氧基-4-硝基苯甲酸
将2-乙酰胺基-5-甲氧基-4-硝基苯甲酸（10.67g，42.0mmol）加入到38mL蒸馏水和15mL浓盐酸的混合液中，回流3h，冷却至0℃，析出固体，抽滤，用蒸馏水洗，干燥，得黄色固体2-氨基-5-甲氧基-4-硝基苯甲酸7.50g，产率为84.2%。
步骤5：6-甲氧基-7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮
将2-氨基-5-甲氧基-4-硝基苯甲酸（6.70g，31.5mmol）加入到100mL甲酰胺中，加热至150℃，保温反应4.5h，冷却至0℃，析出固体，抽滤，减压干燥，得黄色固体6-甲氧基-7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮5.38g，产率为77.2%。
步骤6：6-甲氧基-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉
将上述得到的6-甲氧基-7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮（4.42g，20.0mmol）加入到44mL SOCl2溶液中，然后加入0.4mL DMF，回流搅拌2h，溶液逐渐变为深黄色澄清，停止反应，冷却至室温，蒸除过量的SOCl2，得到黄色固体4-氯-6-甲氧基-7-硝基喹唑啉。将黄色固体搅碎，加入10mL石油醚，减压蒸出石油醚，重复加入石油醚操作2次，去除残余的SOCl2，得到黄色固体。不经纯化将黄色固体转移到三口瓶中，加入苯胺（2.04g，22.0mmol），异丙醇70mL，回流搅拌2h，析出固体，冷却至室温，收集固体，用异丙醇洗涤，干燥，得黄色固体6-甲氧基-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉3.89g，产率为65.6%。
步骤7：6-甲氧基-7-氨基-4-苯胺基喹唑啉
将6-甲氧基-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉（5.92g，20.0mmol）和二水合氯化亚锡（18.05g，80.0mmol）加入到250mL乙酸乙酯中，回流反应1h。反应完毕，放置至室温，过滤，过滤所得固体用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯溶液，用饱和碳酸氢钠溶液调节至中性，分离乙酸乙酯层，用30mL水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩至干，得淡黄色固体6-甲氧基-7-氨基-4-苯胺基喹唑啉4.48g，产率为84.1%。
步骤8：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤9：1-苯基-3-(6-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲
将苯基异氰酸酯（0.26g，2.2mmol）加入到10mL乙腈溶液中，室温搅拌下分批加入6-甲氧基-7-氨基-4-苯胺基喹唑啉（0.53g，2.0mmol），室温搅拌3h，过滤得固体，用乙腈洗涤（5mL×3），干燥，将所得固体加入30ml甲醇中，回流1h，趁热抽滤，得淡黄色固体1-苯基-3-(6-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲0.60g，产率为77.8%。
实施例48  1-苯基-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯胺基喹唑啉-7-基]脲（化合物48）的合成
化合物48的合成路线及方法如下：
Figure BDA00003382604900361
步骤1:N-(2-甲基-4-氯-苯基)乙酰胺的合成
将4-氯-2-甲基苯胺（18.98g，134.1mmol）逐滴加入到乙酸酐（13.69g，134.1mmol）和140mL乙酸的混合溶液中，加热至60℃，保温反应60min，减压浓缩至干，残渣用80mL乙酸乙酯溶解，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8.0，分离乙酸乙酯层，用蒸馏水和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩至干，得黄色固体N-(2-甲基-4-氯-苯基)乙酰胺16.70g，产率为67.8%。
步骤2：N-(2-甲基-4-氯-5-硝基苯基)乙酰胺
将N-(2-甲基-4-氯-苯基)乙酰胺（16.58g，90.3mmol）溶于166ml三氟乙酸中，冰水浴冷却至0℃。缓慢加入硝酸钾（10.11g，100.0mmol），室温搅拌1h。将反应液倒入冰水中淬火，用乙酸乙酯（2×50mL）萃取，合并乙酸乙酯溶液，用饱和碳酸氢钠溶液调节至中性，用蒸馏水和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩至干，残渣加入100mL乙酸乙酯中，搅拌1h，抽滤，得黄色固体N-(2-甲基-4-氯-5-硝基苯基)乙酰胺15.93g，产率为77.1%。
步骤3:2-乙酰胺基-5-氯-4-硝基苯甲酸
将N-(2-甲基-4-氯-5-硝基苯基)乙酰胺（15.34g，67.1mmol）加入到硫酸镁(10.11g，84.0mmol)和高锰酸钾（29.22g，184.9mmol）的671mL水溶液中，升温至80℃，反应45min后，加入硫酸镁（5.08g，42.2mmol）和高锰酸钾（14.63g，92.6mmol），反应1h。抽滤，滤饼用热水（2×300mL）洗涤。滤液用3.0N HCl溶液酸化至pH为3.0，加入300mL二氯甲烷分液，用二氯甲烷（2×200mL）萃取，合并二氯甲烷溶液，无水硫酸镁干燥，减压浓缩至干，得黄色固体2-乙酰胺基-5-氯-4-硝基苯甲酸11.84g，产率为68.2%。
步骤4：2-氨基-5-氯-4-硝基苯甲酸
将2-乙酰胺基-5-氯-4-硝基苯甲酸（10.86g，42.0mmol）加入到38mL蒸馏水和15mL浓盐酸的混合液中，回流3h，冷却至0℃，析出固体，抽滤，用蒸馏水洗涤，干燥，得黄色固体2-氨基-5-氯-4-硝基苯甲酸8.39g，产率为92.2%。
步骤5：6-氯-7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮
将2-氨基-5-氯-4-硝基苯甲酸（6.82g，31.5mmol）加入到100mL甲酰胺中，加热至150℃，保温反应4.5h，冷却至0℃，析出固体，抽滤，减压干燥，得黄色固体6-氯-7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮6.03g，产率为84.9%。
步骤6：6-氯-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉
将上述得到的6-氯-7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮（4.51g，20.0mmol）加入到45mL SOCl2溶液中，然后加入0.4mL DMF，回流搅拌2h，溶液逐渐变为深黄色澄清，停止反应，冷却至室温，蒸除过量的SOCl2，得到黄色固体4,6-二氯-7-硝基喹唑啉。将黄色固体搅碎，加入10mL石油醚，减压蒸出石油醚，重复加入石油醚操作2次，去除残余的SOCl2，得到黄色固体。不经纯化将黄色固体转移到三口瓶中，加入苯胺（2.04g，22.0mmol），异丙醇70mL，回流搅拌2h，析出固体，冷却至室温，收集固体，用异丙醇洗涤，干燥，得黄色固体6-氯-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉4.25g，产率为70.8%。
步骤7：6-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉的制备
将6-氯-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉（6.01g，20.0mmol）加入N-甲基哌嗪（20.0g，200.0mmol）中，在氮气气氛下，加热至70℃，保温反应4h，冷却至室温，减压蒸干，加入乙酸乙酯提取，抽滤，滤液旋干，残渣加入60mL乙醇，搅拌下滴加120mL蒸馏水，搅拌30min，析出黄色固体，抽滤，得黄色固体6-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉5.46g，产率90.8%。
步骤8：6-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-氨基-4-苯胺基喹唑啉的制备
将6-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉（3.64g，10.0mmol）、水合肼（0.20g，4.0mmol）及雷尼镍（7.6mL）加入到乙醇（500mL）中，在氮气气氛下，加热至回流，保温反应2h，将反应液抽滤，并将滤液减压蒸干，采用石油醚与乙酸乙酯（3:1）混合液洗涤残渣，抽滤，得到黄色固体6-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-氨基-4-苯胺基喹唑啉2.79g，产率83.4%。
步骤9：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤10：1-苯基-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯胺基喹唑啉-7-基]脲
将6-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-氨基-4-苯胺基喹唑啉（0.67g，2.0mmol）于60℃热溶于20mL乙腈中，加入苯基异氰酸酯（0.26g，2.2mmol），回流反应2h，过滤，乙腈洗涤滤饼，干燥，得类白色固体1-苯基-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯胺基喹唑啉-7-基]脲0.61g，产率为67.2%。
实施例49  1-苯基-3-[6-(吗啉-4-基)-4-苯胺基喹唑啉-7-基]脲（化合物49）的合成
步骤1：参见实施例48中步骤1实验操作。
步骤2：参见实施例48中步骤2实验操作。
步骤3：参见实施例48中步骤3实验操作。
步骤4：参见实施例48中步骤4实验操作。
步骤5：参见实施例48中步骤5实验操作。
步骤6：参见实施例48中步骤6实验操作。
步骤7：6-(吗啉-4-基)-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉的制备
将6-氯-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉（6.01g，20.0mmol）加入吗啉（17.42g，200.0mmol）中，在氮气气氛下，加热至70℃，保温反应4h，冷却至室温，减压蒸干，加入乙酸乙酯提取，抽滤，滤液旋干，残渣加入60mL乙醇，搅拌下滴加120mL蒸馏水，搅拌30min，析出黄色固体，抽滤，得黄色固体6-(吗啉-4-基)-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉5.10g，产率72.6%。
步骤8：6-(吗啉-4-基)-7-氨基-4-苯胺基喹唑啉的制备
参见实施例48中步骤8实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-(吗啉-4-基)-7-硝基-4-苯胺基喹唑啉。
步骤9：参见实施例1中步骤4实验操作。
步骤10：1-苯基-3-[6-(吗啉-4-基)-4-苯胺基喹唑啉-7-基]脲的制备
参见实施例48中步骤10实验操作，唯一不同之处为将此步骤中的反应物6-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-氨基-4-苯胺基喹唑啉替换成等摩尔量的6-(吗啉-4-基)-7-氨基-4-苯胺基喹唑啉。
实施例50  1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲盐酸盐（化合物50）的合成
化合物45的合成路线及方法如下：
Figure BDA00003382604900391
采用与实施例37相同的方法制备1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，将制备的1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲（0.2g，0.41×10-3mol）溶于乙醇与二氯乙烷（3:7）的混合溶液中，加入2N盐酸乙醇溶液（2mL）过滤，滤饼干燥，得到白色固体1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲盐酸盐。
表1列出了上述实施例1-49中化合物1-49制备过程中的收率结果。
表1化合物1-49制备过程中各步骤的收率
Figure BDA00003382604900392
Figure BDA00003382604900401
Figure BDA00003382604900411
表2列出了根据本发明实施例1-得到的化合物1-的分子结构及表征。
Figure BDA00003382604900412
Figure BDA00003382604900421
Figure BDA00003382604900431
Figure BDA00003382604900441
Figure BDA00003382604900451
Figure BDA00003382604900471
Figure BDA00003382604900481
测试例1  1-苯基-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲（化合物2）的测定
色谱条件：C18色谱柱(Luna250×4.6mm5μ)，流动相，乙腈∶水(pH＝3.0，磷酸)＝23∶77，流速：1.0mL/min，检测波长：254nm，进样量：10μL。
***适应性试验：取化合物2对照溶液(3mg/mL)按色谱条件下进样测定，理论塔板数以化合物2峰计为4120，保留时间为：14.454min。
检测限及定量限：分别以S/N为3和10为考察指标，测得化合物2的检测限为90ng，定量限为210ng。
重现性实验：在色谱条件下，对照品溶液连续进样5次，化合物2出峰时间的相对标准偏差(RSD)为0.20％，峰面积的RSD为0.16％。
样品测定：小试产品溶液(3mg/mL)在色谱条件下进样测定。采用上述分离方法，根据面积归一化法，分别对3批化合物2小试样品进行含量检查，实验结果(如表3所示)表明，3批样品含量均不低于99％。
表3：批样品(化合物2)含量检查结果
批号 ％
20110101 99.4
20110201 99.4
20110202 99.5
制剂制备实施例1  药物组合物(片剂)的制备
取10g化合物2，加可压性淀粉200g，蔗糖50g，硬脂酸镁5g，混合均匀，将粉末直接压片，制成500片，包薄膜衣。
测试例2  部分化合物的抗肿瘤活性筛选
1)试验材料
受试药物：本发明中合成的36种新喹唑啉类化合物(化合物1-36)，阳性对照药物吉非替尼(Gefitinib)、凡德他尼(Vandetanib)、顺铂(Cisplatin)，所有药物纯度＞99.5％。
试剂与仪器：DMEM培养基(Gibco BRL)；小牛血清(HyClone)胰蛋白酶(Amresco)；噻唑蓝(MTT，Sigma)；TK活性分析酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)测试盒(Chenicon)；其余试剂均为国产分析纯试剂。细胞培养系为Costar公司产品；恒温CO2卵箱购自Heraeus公司；酶标仪为奥地利TECAN-SUNRISE产品，型号F039246A。
细胞株：人源性非小细胞性肺腺癌细胞株A549；人肺癌细胞株NCI-H2921（***转移）。
2）肿瘤细胞株培养
A549和NCI-H2921细胞株生长于含10%小牛血清及双抗（青霉素100U·mL-1、链霉素100μg·mL-1）的DMEM培养基中，37℃、5%恒温孵箱中培养，取对数生长期细胞进行试验。
3）细胞活力测定
将对数生长期细胞采用0.25%胰蛋白酶消化成单细胞悬浮液后均匀接种于96孔培养板中进行常规培养，待细胞生长至单层后弃去原培养基，随机分组，分别加入含各受试及阳性药物的无血清DMEM，37℃下作用48h，然后更换培养基，各孔加入20μl MTT（5mg·mL-1），37℃反应4h后，吸出孔内液体，加入150μl DMSO分析纯溶液振摇10min，采用酶标仪在490nm波长处测定吸光度OD值。细胞存活率（%）=给药组OD值/对照组OD×100%。
4）TK活性分析
将对数生长期A549细胞以冰冷D-Hank’s液洗涤后，加入裂解液冰上裂解10min，收集细胞，在4℃、相对离心力为12000g条件下离心10min，抽提TK细胞粗提物。选取针对A549细胞株MTT初筛有效的化合物分别与TK细胞粗提物在37℃作用20min，加入分析液及底物肽30℃孵育45min后用EDTA终止反应。取各组反应体系50μl至酶标孔37℃作用30min，洗涤后封闭30min，PY20-HRP抗体室温孵育1h，摇床振摇。洗涤后与四甲基联苯胺（TMB）作用15min，采用酶标仪于450nm波长处测定吸光度。
5）细胞增殖实验法（MTT法）
在含有20%胎牛血清的D-MEM/hams培养基中，将被试细胞调成密度为2×105细胞/mL的悬液。将上述肿瘤细胞株悬液接种于96孔培养板，每孔50μl，分别加入空白对照磷酸盐缓冲液（PBS）、溶剂对照0.1%二甲基亚砜以及不同浓度单体化合物各50μl，每组均设3个复孔。将上述96孔培养板置于饱和湿度、37℃和5%CO2培养箱中培养48小时，在培养结束前4小时，各培养孔加入5mg/mL四氮唑盐（MTT）10μl，培养结束后，弃去培养上清液，悬浮细胞需离心后弃去上清液，每孔加入反应停止液150μl，静置1小时，用酶联免疫检测仪检测各孔吸光度（OD）值，测定波长λ=570nm，参考波长λ=630nm，并计算肿瘤细胞生存率。
本发明化合物溶解于DMSO，添加后的最终浓度在0.1%以下。以只添加DMSO的培养基作为对照。
本发明化合物的抑制肿瘤细胞增殖活性结果（相对于对照（添加DMSO））如表4所示。
6）数据统计和分析
试验数据用mean±SEM（平均值±标准差）表示，用单因素方差分析（One-way ANOVA）结合Tukey检验各组数值间的差异。P＜0.05表示有统计学意义。
7）结果
新化合物对各肿瘤细胞株细胞增殖的影响：浓度为10μM的新化合物（3复孔/组）分别与各细胞株作用48h，MTT法观察新化合物对肿瘤细胞增殖的影响。其结果如表4所示：
表4：化合物1-36MTT法细胞活性筛选数据
Figure BDA00003382604900511
Figure BDA00003382604900521
8）结论：从表4看出，与对照药物吉非替尼（Gefitinib）、凡德他尼（Vandetanib）、顺铂（Cisplatin）相比，本发明的化合物经抗肿瘤活性筛选后，对A549细胞而言，化合物2、9、11、13、17、18、19、24、27、32、33、34表现出了明显的抗肿瘤活性，其肿瘤细胞生存率低于对照药物的肿瘤细胞生存率（图1、图2和图3分别示出了在化合物2、18和33在不同浓度下对A549细胞的抑制作用，附图中，**表示表示与对照组相比较，差异具有统计学意义，p<0.01；*表示与对照组相比较，差异具有统计学意义，p<0.05），另外除化合物4、7、8、10、21、30外，其他的化合物也表现出较强的抗肿瘤活性。对NCI-H2921细胞而言，化合物2、4、9，10、18、22、33表现出了明显的抗肿瘤活性，其肿瘤细胞生存率低于对照药物的肿瘤细胞生存率，其他的化合物也表现出较强的抗肿瘤活性。由此表明，本发明的化合物能够对涉及蛋白酪氨酸激酶过度表达的疾病，尤其恶性肿瘤进行有效的治疗。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (11)

1.一种式（I）所示的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐，
Figure FDA00003382604800011
其中，R1为H；Br、Cl或F；-CH3、-CH2-CH3、-CH2(CH3)2或-CF3；-O-CH3、-O-CH2-CH3或-O-CH2(CH3)2；-C≡CH或-C≡N；
n1为1、2、3、4或5；
R2或R3之一为式（II）所示的基团；
Figure FDA00003382604800012
其中，R4为H；Br、Cl或F；-CH3、-CH2-CH3、-CH2(CH3)2或-CF3；-O-CH3、-O-CH2-CH3或-O-CH2(CH3)2；-NH2；或-NO2；
n2为1、2、3、4或5；
R2或R3中的另外一个为H、-O-CH3、-O-CH2-CH3、-O-CH2(CH3)2、
Figure FDA00003382604800013
2.根据权利要求1所述的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述式（Ⅰ）所示的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐选自以下化合物：
1-苯基-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-苯基-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(4-甲氧基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-异丙基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2,4,6-三甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-(2-甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-苯基-3-[4-(2-氯苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2,4-二氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-(2,3-二甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(2,4-二氟苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(4-甲氧基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(2,4,6-三甲基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(4-硝基苯基)-3-(4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(4-氟苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-(4-氟苯基)-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-(7-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-6-基)脲，
1-苯基-3-(4-苯胺基喹唑啉-6-基)脲，
1-苯基-3-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(2,3-二甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-氯-3-三氟甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-氰基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-甲基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-氟-4-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-(2-甲基-4-甲氧基苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-[7-(吗啉-4-基)-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲，
1-苯基-3-(6-甲氧基-4-苯胺基喹唑啉-7-基)脲，
1-苯基-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯胺基喹唑啉-7-基]脲，
1-苯基-3-[6-(吗啉-4-基)-4-苯胺基喹唑啉-7-基]脲或
1-苯基-3-[7-甲氧基-4-(3-氯-4-氟苯胺基)喹唑啉-6-基]脲；或这些化合物的盐。
3.根据权利要求1或2所述的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述药学上可接受的盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、半硫酸盐、磷酸盐或羧酸盐，优选氨基酸盐。
4.一种制备权利要求1中式（I）所示的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐的方法，包括以下步骤：
步骤a：式（III）所示的化合物在有机溶剂中与催化剂反应，优选回流反应1h，生成式（IV）所示的化合物；
Figure FDA00003382604800031
其中，R5或R6之一为NO2；
R5或R6中的另外一个为H、-O-CH3、-O-CH2-CH3、-O-CH2(CH3)2、
Figure FDA00003382604800041
步骤b：式（IV）所示的化合物与式（V）所示的化合物在有机溶剂中反应，优选回流反应1.5h，生成式（VI）所示的化合物，
Figure FDA00003382604800042
其中，R1、n1的定义同式（Ⅰ）中R1、n1的定义相同；
步骤c：式（VI）所示的化合物在有机溶剂中与还原剂反应，优选回流反应1h，生成式（VII）所示的化合物；
Figure FDA00003382604800043
其中R7或R8之一为NH2；
R7或R8中的另外一个为H、-O-CH3、-O-CH2-CH3、-O-CH2(CH3)2、
Figure FDA00003382604800044
步骤d：式（VII）所示的化合物与式（VIII）所示的化合物在有机溶剂中，优选在室温反应3h，生成式（I）所示的化合物;
Figure FDA00003382604800051
其中，R4、n2的定义与式（I）中R4、n2的定义相同；
优选地，所述方法进一步包括：
步骤e：室温下，式（I）所示的化合物与酸或碱在有机溶剂中反应生成式（Ⅹ）所示的化合物；
Figure FDA00003382604800052
其中，M为盐酸、氢溴酸、硫酸、半硫酸、磷酸或羧酸，优选氨基酸或盐酸，R1、n1、R2、R3的定义同式（Ⅰ）中R1、n1、R2、R3的定义相同。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤a中的有机溶剂为氯化亚砜，催化剂为二甲基甲酰胺；
优选地，所述步骤b中的有机溶剂为异丙醇、无水乙腈或无水四氢呋喃；
优选地，所述步骤c中的有机溶剂为乙酸乙酯或无水乙醇；还原剂优选氯化亚锡、水合肼或雷尼镍中的一种或多种；
优选地，所述步骤d中的有机溶剂为乙晴或无水四氢呋喃；
优选地，所述步骤e中的有机溶剂为无水乙醇或二氯甲烷；
优选地，式（VIII）所示的化合物的制备方法包括：式（IX）所示的化合物与三光气在有机溶剂中反应生成式（VIII）所示的化合物。
Figure FDA00003382604800053
6.一种制备权利要求1中式（I）所示的化合物的中间体的方法，所述中间体为苯基异氰酸酯，所述方法包括：
将式（IX）所示的化合物和三乙胺的1,2-二氯乙烷溶液滴加到三光气的1,2-二氯乙烷溶液中，反应后得到式（IX）化合物对应的苯基异氰酸酯中间体，
Figure FDA00003382604800061
其中，R4、n2的定义与式（I）中R4、n2的定义相同。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括：冰水浴冷却条件下，将式（IX）所示的化合物和三乙胺的1,2-二氯乙烷溶液，滴加到三光气的1,2-二氯乙烷中，控制滴加速度，优选2滴/秒，滴加完毕后，室温搅拌1h，加热回流3h，放置至室温，过滤后得到滤液，用1,2-二氯乙烷洗涤滤饼，合并滤液，蒸除溶剂后得到油状物，再经减压分馏后得到式（IX）所示的化合物对应的苯基异氰酸酯中间体。
8.一种药物组合物，包含权利要求1-3中任一项所述的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物进一步包含其他的活性物质。
10.权利要求1-3中任一项所述的苯基脲偶联喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐在制备涉及蛋白酪氨酸激酶过度表达的疾病的药物中的用途。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述疾病为恶性肿瘤，优选地，所述恶性肿瘤为肺癌，优选非小细胞肺癌；胰腺癌；磷状上皮癌；甲状腺髓样癌；头颈部癌；食道癌；胃癌；或妇科癌瘤优选膀胱癌和乳腺癌。
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