CN103289911A

CN103289911A - 一种枯草芽孢杆菌的固体发酵方法

Info

Publication number: CN103289911A
Application number: CN2012104066117A
Authority: CN
Inventors: 夏新界; 王从峰; 李本涛; 何宏轩; 印遇龙; 佘锐萍; 李帅伟
Original assignee: GUANGZHOU GLAM BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: GUANGZHOU GLAM BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2012-10-23
Filing date: 2012-10-23
Publication date: 2013-09-11

Abstract

本发明公开了一种枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，包括以下步骤：（1）将枯草芽孢杆菌置于种子培养液中进行复苏传代，制得种子菌液；（2）将制得的种子菌液接种于灭菌的固体培养基中进行发酵培养，制得发酵菌体；（3）将制得的发酵产物经真空干燥，制得枯草芽孢杆菌发酵成品。本发明有益效果：本发明提供了一种枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，发酵时间为23h，节约了发酵时间，缩短了发酵周期，另外菌体浓度大，芽孢形成率高，采用常见发酵基质，保存和运输方便，不仅不会造成废液和环境污染，而且成本廉价。

Description

一种枯草芽孢杆菌的固体发酵方法

技术领域

本发明涉及饲用微生物领域，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌的固体发酵方法。

背景技术

芽孢杆菌类微生物添加剂是利用正常微生物群成员中的有益芽孢杆菌制成的一种活菌制剂，具有天然耐高温和耐酸碱等优点。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是嗜温型的好氧产芽孢的杆状细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，不污染环境，可形成芽孢的革兰氏阳性菌，是国内外公认可在饲料中直接添加使用的益生菌。

枯草芽孢杆菌在制剂中以内生孢子形式存在，孢子进入动物肠道后能迅速萌发并分泌活性很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等，有助于降解饲料中某些复杂的化合物，产生有益代谢产物，促进营养物质的消化吸收，达到促进动物生长和提高饲料转化率的目的。由于枯草芽孢杆菌具有丰富的多功能酶活性和促生长、适宜加工耐贮藏等优点，提高饲料的利用率，抑制有害菌的繁殖、保证宿主健康，因而越来越受到相关研究人员的重视。

目前在工业化生产中，仍然存在发酵周期长、芽孢形成率低、成本高等问题。所以需要对枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件进行研究，以期提高枯草芽孢杆菌的产量并降低生产成本。

目前，枯草芽孢杆菌的研究、生产等主要以液体发酵为主，为解决液体发酵产生大量废弃液、造成环境污染和后续应用生产工序复杂等问题，针对具有抗病促生作用的枯草芽孢杆菌的固体发酵进行研究，为枯草芽孢杆菌的畜牧行业应用提供基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，以克服现有的枯草芽孢杆菌的固体发酵方法的不足。

实现本发明目的的技术方案如下：

一种枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，包括以下步骤：

（1）将枯草芽孢杆菌置于种子培养液中进行复苏传代，制得种子菌液；

（2）将步骤（1）制得的种子菌液接种于灭菌的固体培养基中进行发酵培养，制得发酵菌体；

（3）将步骤（2）制得的发酵产物经真空干燥，制得枯草芽孢杆菌发酵成品。

进一步的，所述枯草芽孢杆菌制剂中的活菌含量为1×1010cfu/g～1×1011cfu/g。

优选的，所述步骤（1）中的种子菌液的制备方法为：取活化的保存菌种于盛有200mL液体种子培养基的培养瓶中，接种量为4%（V/V），混合均匀，30℃，200r/min 培养18h；所述液体种子培养基包括：蛋白胨5g、牛肉膏3g、NaCl5g和水1L；所述液体种子培养基的pH 值为7.0～7.2。

优选的，所述步骤（2）中的发酵菌体的制备方法为：取种子菌液保存于固体培养基中，接种量10%（V/V），混匀，30℃，培养22h；所述固体培养基包括：麸皮：豆粕=1:1.5，含水量60%，水中添加6%葡萄糖、4%酵母粉和0.1%硫酸锰；所述固体培养基的pH值为7.5。

本发明有益效果：（1）本发明所提供的枯草芽孢杆菌固体发酵方法，发酵时间为23h，节约了发酵时间，缩短了发酵周期；（2）本发明所提供的枯草芽孢杆菌固体发酵方法，菌体浓度大，芽孢形成率高；（3）本发明所提供的枯草芽孢杆菌固体发酵方法，采用常见的发酵基质，不造成废液和环境污染，成本廉价。

附图说明

下面根据附图对本发明作进一步详细说明。

图1是发明实施例所述的一种枯草芽孢杆菌的固体发酵方法中枯草芽孢杆菌种子生长曲线。

具体实施方式

实施例1

将枯草芽孢杆菌置于种子培养液中进行复苏传代，制得种子菌液。按如下配方配制液体种子培养基：蛋白胨5g、牛肉膏3g、NaCl5g、水1L，调pH值7.0～7.2。所配上述液体种子培养基经121℃、高压蒸汽灭菌20min。取1环活化的保存菌种于盛有 200mL液体种子培养基的1L培养瓶中，接种量4%（V/V），混匀，置于恒温摇床内，30℃、200r/min培养18h。每隔2h取样，测OD600，测试结果如图1所示。

实施例2

将实施例1中制得的种子菌液接种于固体发酵培养液中进行培养，制得固体发酵产物。按如下配方配制固体发酵培养基：麸皮：豆粕=1:1.5，加水使其含水量为60%，浸泡2h，水中添加6%葡萄糖、4%酵母粉和0.1%硫酸锰，调节pH值为7.5，121℃、高压蒸汽灭菌20min。将实施例1中制得的种子菌液接种于固体发酵培养液中，接种量10%（V/V），30℃培养22h。每隔2h进行取样，将发酵固形物稀释1000倍，测定OD600。

实施例3

将实施例2中发酵获得产物放进65℃真空干燥箱，进行真空干燥，制得枯草芽孢杆菌发酵成品，经过倍数稀释后，划平板计数，所述枯草芽孢杆菌制剂中的活菌含量为1×1010cfu/g～1×1011cfu/g。

本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌制剂中的活菌含量为1×1010cfu/g～1×1011cfu/g。

3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，其特征在于：所述步骤（1）中的种子菌液的制备方法为：取活化的保存菌种于盛有200mL液体种子培养基的培养瓶中，接种量为4%（V/V），混匀，30℃，200r/min 培养18h。

4.根据权利要求1或3所述的枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，其特征在于：所述液体种子培养基包括：蛋白胨5g、牛肉膏3g、NaCl5g和水1L。

5.根据权利要求4所述的枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，其特征在于：所述液体种子培养基的pH 值为7.0～7.2。

6.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，其特征在于：所述步骤（2）中的发酵菌体的制备方法为：取种子菌液保存于固体培养基中，接种量10%（V/V），混匀，30℃，培养22h。

7.根据权利要求1或6所述的枯草芽孢杆菌的固体发酵方法，其特征在于：所述固体培养基包括：麸皮：豆粕=1:1.5，含水量60%，水中添加6%葡萄糖、4%酵母粉和0.1%硫酸锰。