CN103451132A

CN103451132A - 一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂

Info

Publication number: CN103451132A
Application number: CN2013103733391A
Authority: CN
Inventors: 陈琳; 莫艳华; 秦火保; 丁星; 王安全
Original assignee: FUJIAN DAYONG ECOLOGICAL AGRICULTURE COMPREHENSIVE DEVELOPMENT Co Ltd
Current assignee: FUJIAN DAYONG ECOLOGICAL AGRICULTURE COMPREHENSIVE DEVELOPMENT Co Ltd
Priority date: 2013-08-23
Filing date: 2013-08-23
Publication date: 2013-12-18

Abstract

本发明提供一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后纯化得各斜面菌种，备用；利用各斜面菌种制备相应的原菌液；将各原菌液按1：1：1：1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基Ⅰ中进行培养，得复合微生态菌剂的一级种子；将一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基Ⅱ中培养得复合微生态菌剂的二级种子；最后将二级种子按5%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基Ⅲ培养以获得复合微生态菌剂的成品。利用该复合微生态制剂发酵处理后所获得的发酵饲料的饲料喂养生猪，能够促进生猪的生长，提高生猪的日增重，降低料肉比，从而提高经济效益。

Description

一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂

【技术领域】

本发明涉及一种养殖领域用的复合微生态制剂，尤其涉及一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂。

【背景技术】

嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，杆的末端呈圆形，主要存在小肠中，释放乳酸、乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素，调整肠道菌群平衡，抑制肠道不良微生物的增殖。

沼泽红假单胞菌属于光合细菌（英文缩写PSB）的一种，是地球上最古老的微生物之一。PSB菌体营养丰富，蛋白质含量高达65%，且富含多种生物活性物质，并具有适应性强，能耐受高浓度的有机废水和较强的分解转化能力，对酚、氰等毒物也有一定的耐受和分解能力等特点；其可用作饲料级微生物添加剂。

酿酒酵母，又称面包酵母或者出芽酵母；在现代分子和细胞生物学中用作真核模式生物，其作用相当于原核的模式生物大肠杆菌。酿酒酵母是发酵中最常用的生物种类。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形，直径5-10μm。

枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种；单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀；无荚膜，周生鞭毛，能运动；革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大；菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭；需氧菌；其可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。其具有如下作用：枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其它致病菌生长；枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用；能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其制备方法的具体步骤如下：

（1）原菌种斜面培养：将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化，得嗜酸乳杆菌斜面菌种、枯草芽孢杆菌斜面菌种、沼泽红假单胞菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用；

（2）原菌种液体培养：将嗜酸乳杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，之后置于37℃下厌氧培养1-2天得嗜酸乳杆菌原菌液；将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅱ中，接着于30℃下好氧培养1-2天得枯草芽孢杆菌原菌液；将沼泽红假单胞菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅲ中，接着于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天得沼泽红假单胞菌原菌液；将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅳ中，之后于28℃-30℃下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；

（3）一级种子培养：将嗜酸乳杆菌原菌液、枯草芽孢杆菌原菌液、沼泽红假单胞菌原菌液、及酿酒酵母原菌液按1：1：1：1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基Ⅰ中进行培养，具体地：先接种枯草芽孢杆菌原菌液与酿酒酵母原菌液，并于30℃下好氧培养3天，再接种嗜酸乳杆菌原菌液与沼泽红假单胞菌原菌液，于37℃下厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子；

（4）二级种子培养：将所得的一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基Ⅱ中，并于30℃下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，得复合微生态制剂的二级种子；

（5）成品培养：将所得的二级种子按5%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基Ⅲ中，并于30℃下先好氧3-5天再厌氧培养3-5天，获得复合微生态制剂的成品。

进一步地，所述步骤（1）中嗜酸乳杆菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将嗜酸乳杆菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅰ上，之后于37℃下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基Ⅰ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为20min；且该斜面培养基Ⅰ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。

进一步地，所述步骤（1）中枯草芽孢杆菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基Ⅱ上，然后于30℃下好氧培养1-2天；所述斜面培养基Ⅱ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为20min；且该斜面培养基Ⅱ的组分：蛋白胨30克、葡萄糖1克、牛肉膏5克、氯化钠5克、琼脂15克、水1000ml、PH7.2。

进一步地，所述步骤（1）中沼泽红假单胞菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将沼泽红假单胞菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅲ上，之后于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天；所述斜面培养基Ⅲ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为15min；且该斜面培养基Ⅲ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH7.0-7.2。

进一步地，所述步骤（1）中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为：用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基Ⅳ上，之后于28-30℃下好氧培养3天；所述斜面培养基Ⅳ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为30min；且该斜面培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH自然。

进一步地，所述步骤（2）中液体培养基Ⅰ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、水1000ml、PH6.8；液体培养基Ⅱ的组分：蛋白胨30克、葡萄糖1克、牛肉膏5克、氯化钠5克、水1000ml、PH7.2；液体培养基Ⅲ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、水1000ml、PH7.0-7.2；液体培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。

进一步地，所述步骤（3）中发酵培养基Ⅰ的组分：桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。

进一步地，所述步骤（4）中发酵培养基Ⅱ的组分：桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。

进一步地，所述步骤（5）中发酵培养基Ⅲ的组分：桔水5%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。

本发明一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂的有益效果在于：该复合微生态制剂能够在生猪体内产生多种消化酶，它们在消化过程中与生猪体内的酶起到协同作用，有利于降解饲料中的蛋白质、脂肪和复杂的碳水化合物，从而提高饲料的转化率，促进生猪生长、提高生猪的日增重。

【具体实施方式】

一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其制备方法的具体步骤如下：

其中：步骤（1）中嗜酸乳杆菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将嗜酸乳杆菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅰ上，之后于37℃下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基Ⅰ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为20min；且该斜面培养基Ⅰ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。步骤（1）中枯草芽孢杆菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基Ⅱ上，然后于30℃下好氧培养1-2天；所述斜面培养基Ⅱ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为20min；且该斜面培养基Ⅱ的组分：蛋白胨30克、葡萄糖1克、牛肉膏5克、氯化钠5克、琼脂15克、水1000ml、PH7.2。步骤（1）中沼泽红假单胞菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将沼泽红假单胞菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅲ上，之后于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天；所述斜面培养基Ⅲ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为15min；且该斜面培养基Ⅲ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH7.0-7.2。步骤（1）中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为：用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基Ⅳ上，之后于28-30℃下好氧培养3天；所述斜面培养基Ⅳ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为30min；且该斜面培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH自然。

步骤（2）中液体培养基Ⅰ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、水1000ml、PH6.8；液体培养基Ⅱ的组分：蛋白胨30克、葡萄糖1克、牛肉膏5克、氯化钠5克、水1000ml、PH7.2；液体培养基Ⅲ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、水1000ml、PH7.0-7.2；液体培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。

步骤（3）中发酵培养基Ⅰ的组分：桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。步骤（4）中发酵培养基Ⅱ的组分：桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。步骤（5）中发酵培养基Ⅲ的组分：桔水5%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。

需要说明的是，本发明中各培养基的百分比均为质量百分比。

本发明制备所得复合微生态制剂是应用于养猪饲料的发酵处理，具体地：取1重量份的本发明制备所得复合微生态制剂并加入12重量份清水进行稀释，稀释后与25份重量的饲料Ⅰ进行充分搅拌，形成半干湿状态的拌合饲料，之后将此拌合饲料装塑料袋密封后码放堆沤，进行常温发酵直至袋内的饲料变成颜色深褐、形态松软且散发出酒酸味，即得发酵饲料。其中，饲料Ⅰ可以选用市场上现有的商品全价配合饲料，也可选用养猪场自配饲料。

另外，申请人为了说明本发明复合微生态制剂的作用，将利用本发明复合微生态制剂发酵处理后所获得的发酵饲料进行喂养生猪试验，具体地：

在福建龙岩某养猪场，选择日龄相同、体重大小基本一致、生长发育正常、体重40千克以上的健康猪共40头，随机分为试验组和对照组，每组20头。试验组中，将发酵饲料掺入养猪场自配饲料中，充分拌匀后饲喂生猪，且加入发酵饲料占饲料总重量的百分比为最初5%、5日后10%、10日后20%；对照组只饲喂养猪场自配饲料；试验猪及对照组的猪在同一圈舍分栏饲养，统一管理，环境条件相同，且试验前均进行免疫注射、体内外寄生虫驱除，并经7天预试期进行适应性饲养，之后进入试验阶段；给料标准以槽内不断料为原则，日加料2次，自由采食，清洁饮水不断，试验时间为75天。实验开始和结束时对每一头生猪进行单独称重，实验结果为：试验组生猪平均日增重为0.78千克，对照组平均日增重为0.71千克，即试验组相较对照组日增重提高9.9％；试验组的料重比3.14：1，对照组的料重比3.44：1，试验组比对照组每增加一千克毛重节约饲料0.22千克，试验组比对照组饲料用量降低了7％。因此，从试验结果可知，采用添加了利用本发明复合微生态制剂发酵处理后所获得的发酵饲料的饲料喂养生猪，能够提高生猪的日增重，降低料肉比，提高经济效益。

此外，本发明中所述的养猪场自配饲料由基础料和预混料按25:1的重量比混合而成，且其中基础料由如下重量份的组分组成：玉米65份、豆粕25份、麦麸5份、米糠5份。

综上，该复合微生态制剂能够在生猪体内产生多种消化酶，它们在消化过程中与生猪体内的酶起到协同作用，有利于降解饲料中的蛋白质、脂肪和复杂的碳水化合物，从而提高饲料的转化率，促进生猪生长、提高生猪的日增重。

Claims

1.一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其特征在于：其制备方法的具体步骤如下：

（2）原菌种液体培养：将嗜酸乳杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，之后置于37℃下厌氧培养1-2天得嗜酸乳杆菌原菌液；将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅱ中，接着于30℃下好氧培养1-2天得枯草芽孢杆菌原菌液；将沼泽红假单胞菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅲ中，接着于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天得沼泽红假单胞菌斜面菌原菌液；将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅳ中，之后于28℃-30℃下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；

2.根据权利要求1所述的一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤（1）中嗜酸乳杆菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将嗜酸乳杆菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅰ上，之后于37℃下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基Ⅰ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为20min；且该斜面培养基Ⅰ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。

3.根据权利要求1所述的一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤（1）中枯草芽孢杆菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基Ⅱ上，然后于30℃下好氧培养1-2天；所述斜面培养基Ⅱ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为20min；且该斜面培养基Ⅱ的组分：蛋白胨30克、葡萄糖1克、牛肉膏5克、氯化钠5克、琼脂15克、水1000ml、PH7.2。

4.根据权利要求1所述的一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤（1）中沼泽红假单胞菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将沼泽红假单胞菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅲ上，之后于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天；所述斜面培养基Ⅲ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为15min；且该斜面培养基Ⅲ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH7.0-7.2。

5.根据权利要求1所述的一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤（1）中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为：用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基Ⅳ上，之后于28-30℃下好氧培养3天；所述斜面培养基Ⅳ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为30min；且该斜面培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH自然。

6.根据权利要求1所述的一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤（2）中液体培养基Ⅰ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、水1000ml、PH6.8；液体培养基Ⅱ的组分：蛋白胨30克、葡萄糖1克、牛肉膏5克、氯化钠5克、水1000ml、PH7.2；液体培养基Ⅲ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、水1000ml、PH7.0-7.2；液体培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。

7.根据权利要求1所述的一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤（3）中发酵培养基Ⅰ的组分：桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。

8.根据权利要求1所述的一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤（4）中发酵培养基Ⅱ的组分：桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。

9.根据权利要求1所述的一种用于养殖饲料发酵处理的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤（5）中发酵培养基Ⅲ的组分：桔水5%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。