CN103214480A

CN103214480A - 吡唑并吡啶炔苯类化合物及其药用组合物和应用

Info

Publication number: CN103214480A
Application number: CN2012100189052A
Authority: CN
Inventors: 丁克; 冯玉冰; 陆小云; 潘小芬; 张章; 龙活尤; 任小梅; 李伟华
Original assignee: Guangzhou Institute of Biomedicine and Health of CAS
Current assignee: Suzhou Yasheng Pharmaceutical Co., Ltd
Priority date: 2012-01-19
Filing date: 2012-01-19
Publication date: 2013-07-24
Anticipated expiration: 2032-01-19
Also published as: CN103214480B

Abstract

本发明公开了一种有式(I)结构特征的吡唑并吡啶炔苯类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，该化合物及其药学上可接受的盐或立体异构体在制备治疗或预防肿瘤的药物中的应用。该类化合物较临床使用的抗肿瘤药物(伊马替尼)相比，具有明显优势的抗多种肿瘤衍生型和耐药型细胞的活性，同时具有较好的药代动力学和毒性低的特点。式中各基团定义详见说明书。

Description

吡唑并吡啶炔苯类化合物及其药用组合物和应用

技术领域

本发明属于化学医药领域，具体地涉及具有式(I)结构特征的吡唑并吡啶炔苯类化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体及其前药分子，含有这种化合物的药物组合物和这些化合物或组合物在制备药物中的应用。

背景技术

肿瘤是目前人类健康和生命的头号杀手，其发病率仅次于心血管类疾病。并且随着环境污染或其它因素的影响，恶性肿瘤的发病率呈快速上升趋势。根据世界卫生组织2003年公布的数据，2000年全球共有恶性肿瘤患者1000万，因恶性肿瘤死亡者高达620万，占总死亡人数的12％～25％。预期到2020年，全球每年新发病例将达1500万。近年来，虽有一些新型的酪氨酸蛋白抑制剂等靶向新药的开发上市，但仍远远无法满足日益增长的临床癌症病人的需要。抗肿瘤药物研发也仍是目前药物研发界的重要研究方向。

肿瘤分子靶向治疗是基于对肿瘤生长密切相关的关键分子通过化学或生物学手段选择性杀伤肿瘤细胞的一种治疗方法。靶向治疗的特点为：特异性高，选择性强，毒副作用较轻；联合应用时，它可加强传统化疗、放疗的疗效，减少术后复发。以Gleevec(STI571)为代表的靶向药物为肿瘤化疗开创了一个新时代。肿瘤靶向治疗在短短几年内得到了迅速发展。肿瘤靶向治疗的出现已对传统给药观念和模式构成冲击，例如，因毒副作用小靶向药物在I期临床试验中往往无法达到剂量限制性毒性和最大耐受剂量；用靶向治疗药物时无需用最大耐受剂量即可达到满意疗效。肿瘤靶向治疗是肿瘤治疗的热点和发展趋势。

蛋白酪氨酸激酶(PTKs)是一类能够催化多种重要蛋白质的酪氨酸残基上的酚羟基发生磷酸化，进而激活功能蛋白的功能的蛋白质酶系。人体内的520多种蛋白激酶中大约有一半是酪氨酸激酶(PTKs)。它们在细胞内的信号传导通路中占据了十分重要的地位，调节着细胞体内生长、分化、死亡等一系列生理化过程。蛋白酪氨酸激酶功能失调会引发生物体内的一系列疾病。研究表明，半数以上的原癌基因和癌基因的激活都与蛋白酪氨酸激酶相关。蛋白酪氨酸激酶的异常表达可导致细胞增殖调节发生紊乱，进而导致肿瘤发生。此外，酪氨酸激酶的异常表达还与肿瘤的侵袭和转移，肿瘤新生血管的生成，肿瘤的化疗抗药性密切相关。以酪氨酸激酶为靶点进行抗肿瘤药物研发成为国际上的一个热点，也是各国药物开发机构研究投入的重点。

目前为止，已有数十种蛋白酪氨酸激酶小分子抑制剂和抗体进入临床试验，有的已经上市，并取得了较好的治疗效果。如：用于治疗费城染色体呈阳性慢性髓样白血病(CML)及胃肠间质瘤的Bcr-Abl抑制剂Gleevec；用于治疗非小细胞肺癌的EGFR抑制剂Iressa和Tarceva等。Gleevec是第一个在了解癌症的病因后合理设计开发，并取得了显著成效的肿瘤治疗药物，它的成功是癌症治疗的一个里程碑。这一重大成就也被美国《科学》杂志列入2001年度十大科技新闻。

针对蛋白酪氨酸激酶的特异性小分子抑制物在临床肿瘤治疗中获得的巨大成功进一步证实了蛋白酪氨酸激酶是关键性的治疗靶点，同时也说明其在肿瘤发生中的重要性。有确切证据证明蛋白酪氨酸激酶编码基因突变引起肿瘤发生的例子包括：Bcr-Abl与慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)；c-KIT与胃肠间质瘤(GIST)、***性肥大细胞增多症(systemic mastocytosis，SM)；PDGFR和慢性骨髓单核细胞性白血病(chronic myelomonocyticleukemia)、隆突性皮肤纤维肉瘤(dermatofibrosarcoma protuberan)、高嗜酸细胞综合征；Flt3与部分急性粒细胞性白血病；B-Raf与黑色素瘤(melanoma)；RET与甲状腺癌等。此外，c-KIT与小细胞肺癌有密切关系。

2001年美国FDA批准的用以治疗慢性粒细胞性白血病(CML)的第一个靶向治疗药物STI571(Gleevec，Imatinib mesylate，中文名“格列卫”，Novartis Pharmaceuticals)酪氨酸蛋白激酶抑制剂，主要作用于Bcr-Abl，cKit，PDGFR等。临床上STI571单药治疗可使98％的CML病人获得临床血液学的缓解，53％获得细胞遗传学缓解。

然而随着STI571在临床上的广泛应用，耐药问题日益突出：部分癌症病人对STI571天然耐受(primary resistance)；另一部分病人开始用药时有反应，但在用药治疗过程中逐渐出现获得性耐受(secondary resistance)。长期服用的患者易产生耐受性。耐受性是指慢性期患者经STI571治疗后未出现完全血液学反应或加速期和急变期患者经STI571治疗后未能恢复到慢性期。临床上，急变期(blast-crisis)的CML、Bcr-Abl阳性的ALL病人对STI571耐受较普遍，约70％的这两类病人在用药3～6个月出现对STI571耐药。而且一旦出现耐药，病情往往进展迅速。获得性耐受被认为是肿瘤细胞为逃避杀伤的一种防卫，其机制有多种，包括：①靶基因(Bcr-Abl，c-KIT，PDGFR)扩增；②靶基因突变；③靶基因非依赖性肿瘤克隆的形成；④α-1酸性糖蛋白的产生和多药耐受基因MDR1的过度表达。但目前公认的主要机制是靶基因(Bcr-Abl，c-KIT，PDGFR)表达产物激酶域的继发突变(secondary mutation)。研究表明与STI571耐受关系明确的靶基因的常见点突变位点包括Bcr-Abl的E255K、E255V、T315I及D276G，c-KIT的D816V等。携有这些突变的患者容易复发，预后不好。有报道指出仅有50％的转移性胃肠间质瘤(GIST)病人对STI571反应，效果可靠，而这部分病人携带有c-KIT临膜域V560G突变。此外，尚有50％的转移性GIST病人对STI571缺乏反应。c-KIT酪氨酸激酶域的点突变(如D816V，T315I)则对STI571非常耐受。体外实验表明STI571不能抑制携有D816V c-KIT以及T315I突变株细胞的增殖；携有D816V c-KIT的***性肥大细胞增多症病人对STI571也不反应。

如何克服STI571抵抗性是当今肿瘤医学的重要课题。寻找新型的酪氨酸激酶小分子抑制物是克服STI571抵抗性的的重要途径。例如，最近上市的酪氨酸激酶小分子抑制物Nilotinib(AMN107)、Dasatinib(BMS-354825)对部分(而不是全部)STI571抵抗性Bcr-Abl点突变(除T315I之外)病例有效。AMN107结合Abl激酶的位置与STI571相同，也是竞争性结合到非活化构型的Abl激酶，但与Abl的亲和力比STI571更强，药效约是后者的10～50倍。AMN107对除了T315I之外的15种点突变细胞有明显的抑制作用，IC50在10～1000nM。与STI571和AMN107不同，BMS-354825可以同时结合和抑制未活化和已活化的Bcr-Abl。BMS-354825对除了T315I之外的15种点突变细胞有明显的抑制作用，IC50在10～125nM。但是，AMN107和Dasatinib对T315I Bcr-Abl无效，且AMN107和STI571对c-KIT D816V点突变细胞无效。因此，研制出新型的、能有效杀伤STI571抵抗性c-KIT点突变(D816V)和Bcr-Abl点突变(包括T315I)携带细胞的小分子化合物在全球肿瘤治疗科学界和产业界都显得十分必要和迫切。

事实上，目前的蛋白酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物大多存在着药物诱导抗药性基因突变，并面临着临床适用范围较窄和等问题。因此，开发第二代蛋白酪氨酸激酶抑制剂以克服现有药物耐受并提高临床效果，具有重大意义。

申请人在201010216603.7的专利申请中公开了一种杂环炔苯类化合物，该类化合物可有效抑制多种肿瘤细胞的生长，但是，由于该类化合物数量巨大，而能高效抑制多种肿瘤细胞且毒性低的化合物仍有待本领域的技术人员进行深入研究。

发明内容

本发明需要解决的技术问题之一是提供一种新的吡唑并吡啶炔苯类化合物其药学上可接受的盐或立体异构体，或其前药分子，该类化合物较临床使用的抗肿瘤药物(伊马替尼)相比，具有明显优势的抗多种肿瘤衍生型和耐药型细胞的活性，同时具有较好的药代动力学和毒性低的特点。

解决上述技术问题的技术方案如下：

具有式(I)结构特征的吡唑并吡啶炔苯类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子：

R₁任选自：

1)H；

2)C₁～C₆烷基；

3)C₃～C₆环烷基；

4)苯基

R₂任选自：

1)H；

2)卤素；

3)C₁～C₅烷基；

4)C₃～C₆环烷基；

R₃、R₅任选自：

1)H；

2)C₁～C₄烷基；

3)C₁～C₄含氟烷基；

4)取代的含1-3个N原子的五元杂环；

R₄任选自：

1)H；

2)C₁～C₄含氟烷基；

3)取代的含1-2个N原子的五元或六元杂环.

优选地，所述杂环炔苯类化合物选自以下化合物：

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺、

N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺、

4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺、

N-(3-(1H-1，2，4-三氮唑-1-yl)-5-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺、

4-甲基-N-(3-(3-甲基-1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺、

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(3-(噁唑-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺、

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-(吡咯烷-1-基亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺、

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-(***啉亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺、

(S)-N-(4-((3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺、

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-哌啶-1-基亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺、

3-((3-环丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-yl)乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺、

4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-((3-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺、

4-乙基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺、

3-((1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-4-氯-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺、

4-氯-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺、

3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺、

3-((-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-4-环丙基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺、

N-(3-叔丁基-5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基)-4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-yl)乙炔基)苯甲酰胺、

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺二甲磺酸盐、

4-氯-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺二甲磺酸盐。

本发明的另一目的是提供上述化合物的应用。

上述述化合物及其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子在制备治疗或预防肿瘤的药物中的应用。

本申请还涉及了利用有效剂量的上述化合物可以用于治疗胃肠间质瘤、组织细胞性淋巴癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、***癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、***癌、鼻咽癌、白血病等过渡增殖性疾病。

本发明涉及的吡唑并吡啶炔苯类化合物及其药学上可接受的盐，可以有效抑制多种肿瘤细胞的生长，并对Bcr-Abl，c-Kit，PDGF等蛋白酶产生抑制作用，可用于制备抗肿瘤药物，并可以克服现有药物(Gleevec)诱发的耐药，同时具有较好的药代动力学和毒性低的特点，成药性较高。如本领域技术人员所理解的，本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐可用于制备治疗人类及其它哺乳动物的肿瘤等过渡增殖性疾病。

具体实施方式

本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本申请的权利要求中。

以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范围。

实施例1

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺

4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

步骤1.

5-溴-2-氯-N-甲氧基-N-甲基烟酰胺

5-bromo-2-chloro-N-methoxy-N-methylnicotinamide

将5-溴-2-氯烟酸96g(294.07mmol)溶于1L二氯甲烷，搅拌下加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐31.45g(323.48mmol)，EDC盐酸盐62g(323.48mmol)，最后滴加三乙胺39.2g(388.17mmol)，搅拌过夜，反应液水洗，饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂，柱层析得到产物白色固体65g(79％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.48(d，J＝2.0Hz，1H)，7.79(s，1H)，3.51(s，3H)，3.37(s，3H).MS(ESI)，m/z：279(M⁺).

步骤2.

1-(5-溴-2-氯苯基)乙酮

1-(5-bromo-2-chlorophenyl)ethanone

1L的三颈瓶中，将化合物225g(89.75mmol)溶于400mL无水四氢呋喃，冷却至-40℃，搅拌下缓慢滴加CH₃MgBr(3M，***溶液)35.9mL(107.7mmol)，滴加完毕，维持-40℃1小时，随后升至室温搅拌3小时，冰浴冷却下，加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂，硅胶快速柱层析得到浅红色油状物17.7g(84％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.53(d，J＝2.0Hz，1H)，8.00(d，J＝2.0Hz，1H)，2.69(s，3H).MS(ESI)，m/z：234(M⁺+H⁺).

步骤3.

5-溴-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶

5-bromo-3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridine

将17.7g化合物3(75.6mmol)，80％水合肼9.4g(151.3mmol)，碳酸钾10.4g(75.6mmol)加入200mL四氢呋喃中，加热回流过夜，旋掉大部分溶剂，加水，乙酸乙酯萃取，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到浅黄色固体15.3g(95.4％)。

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.42(s，1H)，8.52(s，2H)，2.51(s，3H).

MS(ESI)，m/z：213(M⁺+H⁺).

步骤4.

5-溴-3-甲基-1-(2-三甲基硅乙氧亚甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶

5-bromo-3-methyl-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridine

将15.3g化合物4(72.17mmol)溶于100mL DMF，冰浴冷却，搅拌下分批加入60％氢化钠8.66g(216.51mmol)，搅拌10min，滴加三甲基硅基乙氧甲基氯20.5g(122.69mmol)，滴加完毕升至室温搅拌过夜，加水，乙酸乙酯萃取，有机相水洗三次，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析得到浅黄色色油状物20.8g(84％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.55(d，J＝2.0Hz，1H)，8.12(d，J＝2.0Hz，1H)，5.76(s，2H)，3.62(t，J＝8.4Hz，2H)，2.55(s，3H)，0.93(t，J＝8.4Hz，2H)，-0.05(s，9H).

MS(ESI)，m/z：343(M⁺+H⁺).

步骤5.

4-甲基-3-((三甲基硅基)乙炔基)苯甲酸甲酯

methyl 4-methyl-3-((trimethylsilyl)ethynyl)benzoate

5L三颈瓶中，加入化合物6300g(1087mmol)，碘化亚铜2.06g(10.87mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯7.63g(10.87mmol)，乙酸乙酯4L，三乙胺329.3g(3260mmol)，三甲基硅乙炔159.8g(1630mmol)，置换氩气，封闭反应体系，室温搅拌过夜。过滤反应液，滤液水洗，饱和食盐水洗，有机相无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得红色固体267.4g(100％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.10(d，J＝1.6Hz，1H)，7.86(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，7.26(d，J＝8.0Hz，1H)，3.89(s，3H)，2.48(s，3H)，0.19(s，9H).

MS(ESI)，m/z：247(M⁺+H⁺).

步骤6.

3-乙炔基-4-甲基苯甲酸甲酯

methyl 3-ethynyl-4-methylbenzoate

5L三颈瓶中，加入化合物7267.4g(1087mmol)，再加入甲醇4L，机械搅拌使其溶解，加入碳酸钾225g(1630mmol)，5-10min反应完毕，将反应液倾入5L水中，搅拌均匀，过滤沉淀，水洗，固体真空干燥，得到棕色固体180g(95％)。

¹HNMR(400MHz，CD₃OD)，δppm 8.13(s，1H)，7.90(d，J＝8.0Hz，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.34(s，1H)，2.50(s，3H).

MS(ESI)，m/z：175(M⁺+H⁺).

步骤7.

4-甲基-3-((3-甲基-1-(2-三甲基硅乙氧亚甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酸甲酯methyl 4-methyl-3-((3-methyl-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)benzoate

100mL单颈瓶中加入化合物510g(29.24mmol)，化合物85.09g，碘化亚铜56mg(0.2924mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯205mg(0.2924mmol)，二异丙基乙基胺7.54g(58.48mmol)，N-甲基吡咯烷酮30mL，置换氩气，80℃搅拌过夜，加水，乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，有机相无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，柱层析得白色固体3.82g(54％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 9.54(d，J＝2.0Hz，1H)，8.20(d，J＝2.0Hz，1H)，8.18(d，J＝1.6Hz，1H)，7.92(m，1H)，7.31(m，1H)，5.80(s，1H)，3.93(s，3H)，3.64(t，J＝8.4Hz，2H)，2.60(s，6H)，0.95(m，2H)，-0.05(s，9H).

MS(ESI)，m/z：436(M⁺+H⁺).

步骤8.

4-甲基-3-((3-甲基-1-(2-三甲基硅乙氧亚甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺

4-methyl-3-((3-methyl-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethyny

l)-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

将化合物9200mg(0.4591mmol)和化合物10 125mg(0.4591mmol)溶于2.5mL四氢呋喃中，搅拌，降温至-20℃，将叔丁醇钾155mg(1.378mmol)溶于2.5mL四氢呋喃中，缓慢滴加至前述混合液中，滴加完毕维持-20℃30min，然后升至室温搅拌2h，加水，乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，柱层析得浅黄色固体204mg(65.6％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.69(d，J＝2.0Hz，1H)，8.16(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(d，J＝1.6Hz，1H)，7.98(s，1H)，7.90(m，1H)，7.85(d，J＝2.0Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.77(s，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，2H)，5.80(s，2H)，3.66(m，4H)，2.61(s，3H)，2.58(s，3H)，2.44(br，4H)，2.31(s，3H)，0.93(m，2H)，-0.05(s，9H).

MS(ESI)，m/z：677(M⁺+H⁺).

步骤9.

将化合物11 204mg(0.3014mmol)溶于5mL 1M的四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液中，搅拌下，加热回流过夜，加水，乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，柱层析得浅黄色固体126mg(76.5％)。

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.52(s，1H)，10.57(s，1H)，8.69(d，J＝2.0Hz，1H)，8.22(d，J＝2.0Hz，1H)，8.18(d，J＝2.0Hz，1H)，8.07(d，J＝8.8Hz，1H)，7.93(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70(m，2H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H)，3.56(m，2H)，2.59(s，3H)，2.51(s，3H)，2.33(brs，8H)，2.15(m，3H).

MS(ESI)，m/z：547(M⁺+H⁺).

实施例2

N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺

N-(3-(1H-imidazol-1-yl)-5-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.49(s，1H)，10.75(s，1H)，8.69(d，J＝2.0Hz，1H)，8.52(d，J＝2.0Hz，1H)，8.34(s，2H)，8.22(s，2H)，7.95(d，J＝8.0Hz，1H)，7.79(s，2H)，7.56(d，J＝8.0Hz，1H)，7.17(s，1H)，2.60(s，3H)，2.53(s，3H).

MS(ESI)，m/z：501(M⁺+H⁺).

实施例3

4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺

4-methyl-N-(3-(4-methyl-1H-imidazol-1-yl)-5-(trifluoromethyl)phenyl)-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.49(s，1H)，10.72(s，1H)，8.70(d，J＝1.6Hz，1H)，8.52(d，J＝1.6Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.21(s，2H)，8.17(s，2H)，7.95(m，2H)，7.74(s，2H)，7.56(d，J＝8.0Hz，1H)，7.49(s，2H)，2.60(s，3H)，2.54(s，3H)，2.19(s，3H).

MS(ESI)，m/z：515(M⁺+H⁺).

实施例4

N-(3-(1H-1，2，4-三氮唑-1-yl)-5-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺

N-(3-(1H-1，2，4-triazol-1-yl)-5-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.50(s，1H)，10.83(s，1H)，9.47(s，1H)，8.70(m，2H)，8.52(d，J＝1.6Hz，1H)，8.32(s，2H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝1.6Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.97(m，2H)，7.55(d，J＝8.0Hz，1H)，2.60(s，3H)，2.54(s，3H).

MS(ESI)，m/z：502(M⁺+H⁺).

实施例5

4-甲基-N-(3-(3-甲基-1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺

4-methyl-N-(3-(3-methyl-1H-1，2，4-triazol-1-yl)-5-(trifluoromethyl)phenyl)-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.49(s，1H)，10.79(s，1H)，9.32(s，1H)，8.69(m，2H)，8.52(d，J＝1.6Hz，1H)，8.39(s，1H)，8.35(s，1H)，7.97(m，2H)，7.55(d，J＝8.0Hz，1H)，2.60(s，3H)，2.54(s，3H).

MS(ESI)，m/z：516(M⁺+H⁺).

实施例6

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(3-(噁唑2-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(3-(oxazol-2-yl)-5-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.49(s，1H)，10.77(s，1H)，8.80(s，1H)，8.69(d，J＝1.6Hz，1H)，8.51(d，J＝2.0Hz，1H)，8.41(s，2H)，8.32(s，1H)，8.23(d，J＝1.6Hz，1H)，7.95(m，2H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.47(s，1H)，2.60(s，3H)，2.53(s，3H).MS(ESI)，m/z：502(M⁺+H⁺).

实施例7

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-(吡咯烷-1-基亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-(pyrrolidin-1-ylmethyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.50(s，1H)，10.67(s，1H)，8.69(d，J＝1.6Hz，1H)，8.52(d，J＝1.6Hz，1H)，8.29(s，1H)，8.20(d，J＝1.6Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.95(m，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，3.15(m，2H)，2.60(s，3H)，2.56(s，3H)，1.85(brs，4H)，1.56(m，2H)，1.32(m，2H).

MS(ESI)，m/z：518(M⁺+H⁺).

实施例8

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-(***啉亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-(morpholinomethyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.49(s，1H)，10.54(s，1H)，8.69(d，J＝2.0Hz，1H)，8.52(d，J＝2.0Hz，1H)，8.22(d，J＝2.0Hz，1H)，8.18(d，J＝2.0Hz，1H)，8.08(d，J＝8.0Hz，1H)，7.92(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，7.74(d，J＝8.8Hz，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，3.60(s，3H)，3.58(s，3H)，2.59(s，2H)，2.54(m，4H)，2.39(s，4H).MS(ESI)，m/z：534(M⁺+H⁺).

实施例9

(S)-N-(4-((3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺

(S)-N-(4-((3-(dimethylamino)pyrrolidin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.50(s，1H)，10.54(s，1H)，8.69(d，J＝1.6Hz，1H)，8.52(d，J＝2.0Hz，1H)，8.20(m，1H)，8.07(d，J＝7.6Hz，1H)，7.92(d，J＝8.0Hz，1H)，7.70(d，J＝8.4Hz，1H)，7.53(d，J＝8.0Hz，1H)，3.67(m，2H)，2.69(m，3H)，2.59(s，3H)，2.53(s，3H)，2.33(m，1H)，1.89(m，1H)，1.63(m，1H).

MS(ESI)，m/z：561(M⁺+H⁺).

实施例10

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-哌啶-1-基亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-(piperidin-1-ylmethyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.49(s，1H)，10.57(s，1H)，8.69(d，J＝2.0Hz，1H)，8.52(d，J＝1.6Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.18(s，2H)，8.09(d，J＝8.0Hz，1H)，7.93(m，1H)，7.74(m，1H)，7.63(m，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，3.17(s，2H)，2.59(s，3H)，2.54(s，3H)，2.45(brs，4H)，1.55(brs，4H)，1.43(brs，2H).MS(ESI)，m/z：532(M⁺+H⁺).

实施例11

3-((3-环丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-yl)乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺

3-((3-cyclopropyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-4-methyl-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

步骤1.

5-溴-3-碘-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶

5-bromo-3-iodo-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridine

将化合物1 10g(50.25mmol)和N-碘代丁二酰亚胺12g(53.34mmol)溶于300mL 1，2-二氯乙烷中，加热回流过夜，用1L四氢呋喃稀释，饱和硫代硫酸钠水溶液洗，水洗，饱和食盐水洗，有机相无水硫酸钠干燥，减压旋去溶剂得浅黄色固体15g(92％)。

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 14.31(s，1H)，8.63(d，J＝2.0Hz，1H)，8.18(d，J＝1.6Hz，1H).MS(ESI)，m/z：325(M⁺+H⁺).

步骤2.

5-溴-3-碘-1-(2-三甲基硅乙氧亚甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶

5-bromo-3-iodo-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridine

将2.68g化合物2(8.27mmol)溶于25mLDMF，冰浴冷却，搅拌下分批加入60％氢化钠1g(24.8mmol)，搅拌10min，滴加三甲基硅基乙氧甲基氯2.33g(14mmol)，滴加完毕升至室温搅拌过夜，加水，乙酸乙酯萃取，有机相水洗三次，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析得到浅黄色油状物3.07g(82％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.60(d，J＝2.0Hz，1H)，7.96(d，J＝1.6Hz，1H)，5.81(s，2H)，3.65(m，2H)，0.92(m，2H)，-0.05(s，9H).

MS(ESI)，m/z：455(M⁺+H⁺).

步骤3.

5-溴-3-环丙基-1-(2-三甲基硅乙氧亚甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶

5-bromo-3-cyclopropyl-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridine

将1g化合物3(2.2mmol)，190mg环丙基硼酸(2.2mmol)，1.18g磷酸钾，180mg[1，1’-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(0.22mmol)混于10mL 1，4-二氧六环中，置换氩气，90℃搅拌4h，加水，乙酸乙酯萃取，有机相水洗三次，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析得到白色固体580mg(71.8％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.53(d，J＝2.0Hz，1H)，8.17(d，J＝2.0Hz，1H)，5.73(s，2H)，3.60(m，2H)，2.15(m，1H)，1.07(m，4H)，0.91(m，2H)，-0.04(s，9H).

MS(ESI)，m/z：369(M⁺+H⁺).

步骤4.

3-((3-环丙基-1-(2-三甲基硅乙氧亚甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

3-((3-cyclopropyl-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-4-methyl-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

10mL单颈瓶中加入化合物5213mg(0.5177mmol)，化合物4190mg(0.5177mmol)，碘化亚铜1mg(0.005mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯4mg(0.005mmol)，二异丙基乙基胺134mg(1.0354mmol)，DMF 2mL，置换氩气，80℃搅拌过夜，加水，乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，有机相无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，柱层析得浅黄色固体196mg(54％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.67(d，J＝2.0Hz，1H)，8.21(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(d，J＝2.0Hz，1H)，7.95(s，1H)，7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.89(d，J＝2.0Hz，1H)，7.86(d，J＝2.0Hz，1H)，7.78(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，1H)，5.77(s，2H)，3.64(m，4H)，2.62(s，3H)，2.58(brs，8H)，2.31(s，3H)，2.21(m，1H)，1.12(m，4H)，0.94(s，2H)，-0.04(s，9H).

MS(ESI)，m/z：703(M⁺+H⁺).

步骤5.

将化合物6 190mg(0.2707mmol)溶于5mL 1M的四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液中，搅拌下，加热回流过夜，加水，乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，柱层析得浅黄色固体108mg(70％)。

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.45(s，1H)，10.54(s，1H)，8.68(d，J＝1.6Hz，1H)，8.55(d，J＝1.6Hz，1H)，8.22(s，1H)，8.19(s，1H)，8.07(d，J＝8.8Hz，1H)，7.91(d，J＝8.0Hz，1H)，7.70(m，1H)，7.53(d，J＝8.0Hz，1H)，3.57(m，2H)，2.60(m，3H)，2.36(m，8H)，2.19(s，3H)，1.67(m，1H)，1.33(m，4H).

MS(ESI)，m/z：573(M⁺+H⁺).

实施例12

4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-((3-苯基-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)苯甲酰胺

4-methyl-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-((3-phenyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)benzamide

合成方法如实施例11

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 14.12(s，1H)，10.55(s，1H)，8.84(d，J＝2.0Hz，1H)，8.79(d，J＝2.0Hz，1H)，8.21(s，2H)，8.19(m，3H)，7.93(d，J＝8.0Hz，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，7.55(m，3H)，7.45(d，J＝8.0Hz，1H)，3.57(m，2H)，2.67(m，3H)，2.40(m，8H)，2.17(s，3H).

MS(ESI)，m/z：609(M⁺+H⁺).

实施例13

4-乙基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

4-ethyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

步骤1.3-氨基-4-乙基苯甲酸(3-amino-4-ethylbenzoic acid)

将15mL发烟硝酸倒入50mL单口瓶中，冷却至-5℃，搅拌下加入2g对乙基苯甲酸(13.3mmol)，-5℃下继续搅拌1h，将反应液倾入冰水中，析出白色沉淀，抽滤，水洗，收集固体，真空干燥得白色固体2.6g。将2.6g化合物2(13.3mmol)溶解在20mL甲醇中，搅拌下加入300mg 50％钯碳，抽真空，置换氢气，室温搅拌过夜，反应液用硅藻土过滤，减压旋去溶剂得浅黄色固体2g(91％)。

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 7.23(s，1H)，7.10(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.00(d，J＝8.0Hz，1H)，2.47(m，2H)，1.13(m，3H).

MS(ESI)，m/z：166(M⁺+H⁺).

步骤2.4-乙基-3-碘苯甲酸(4-ethyl-3-iodobenzoic acid)

将2g化合物3(12.1mmol)置于100mL单颈瓶中，加入28mL水，冰浴下滴加浓盐酸8.4mL，搅拌10min，缓慢滴入2mL含有0.85g亚硝酸钠(12.3mmol)的水溶液，冰浴下搅拌5min后再滴入5mL含碘化钾2.05g(12.3mmol)的水溶液，室温搅拌过夜，加水，乙酸乙酯萃取，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析得到白色固体2.3g(69％)。

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.22(s，1H)，8.30(d，J＝1.6Hz，1H)，7.88(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.42(d，J＝8.0Hz，1H)，2.70(m，2H)，1.18(m，3H).

MS(ESI)，m/z：277(M⁺+H⁺).

步骤3.4-乙基-3-碘苯甲酸甲酯(methyl 4-ethyl-3-iodobenzoate)

将2.3g化合物4(8.33mmol)溶于50mL甲醇中，加入0.5mL浓硫酸，加热回流过夜，反应液冷却至室温，旋去大部分甲醇，加水，乙酸乙酯萃取，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析得浅黄色油状物2.4g(99％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.46(d，J＝2.0Hz，1H)，7.93(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.28(d，J＝8.0Hz，1H)，3.90(s，1H)，2.77(m，2H)，1.23(m，3H).

MS(ESI)，m/z：291(M⁺+H⁺).

步骤4.4-乙基-3-碘-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

(4-ethyl-3-iodo-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide)

将1.1g化合物5(3.79mmol)和1g化合物6(3.79mmol)溶于10mL四氢呋喃，将溶有2.5g叔丁醇钾(22.3mmol)的10mL四氢呋喃溶液缓慢滴入反应瓶中，反应10min，反应液投入冰水中，乙酸乙酯萃取，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析得到浅黄色固体2g(99％)。

MS(ESI)，m/z：532(M⁺+H⁺).

步骤5.4-乙基-3-乙炔基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

(4-ethyl-3-ethynyl-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide)

50mL单颈瓶中，加入化合物72g(3.77mmol)，碘化亚铜7mg(0.0377mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯26mg(0.0377mmol)，乙腈20mL，二异丙基乙胺1.95g(15.08mmol)，三甲基硅乙炔740mg(7.54mmol)，置换氩气，封闭反应体系，室温搅拌过夜。过滤反应液，滤液水洗，饱和食盐水洗，有机相无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，加甲醇20mL溶解，加入碳酸钾1.04g(7.54mmol)，室温搅拌2h，加水，乙酸乙酯萃取，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析得红色固体1.2g(74％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)，δppm 8.04(d，J＝2.0Hz，1H)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H)，7.79(m，4H)，7.33(d，J＝8.0Hz，1H)，3.62(s，2H)，3.31(s，1H)，2.88(m，2H)，2.45(brs，8H)，2.29(s，3H)，1.90(s，1H)，1.26(m，3H).

MS(ESI)，m/z：430(M⁺+H⁺).

步骤6.4-乙基-3-((3-甲基-1-(2-三甲基硅基乙氧亚甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

4-ethyl-3-((3-methyl-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

10mL单颈瓶中加入化合物8220mg(0.5177mmol)，化合物9177mg(0.5177mmol)，碘化亚铜1mg(0.005mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯4mg(0.005mmol)，二异丙基乙基胺134mg(1.0354mmol)，DMF 2mL，置换氩气，80℃搅拌过夜，加水，乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，有机相无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，柱层析得浅黄色固体230mg(64.4％)。MS(ESI)，m/z：691(M⁺+H⁺).

步骤7.4-乙基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

将化合物10 230mg(0.3333mmol)溶于5mL 1M的四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液中，搅拌下，加热回流过夜，加水，乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，柱层析得浅黄色固体98mg(53％)。

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.49(s，1H)，10.54(s，1H)，8.68(d，J＝1.6Hz，1H)，8.51(d，J＝1.6Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.18(s，1H)，8.06(d，J＝8.4Hz，1H)，7.95(d，J＝8.0Hz，1H)7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，3.57(s，2H)，2.96(m，2H)，2.54(s，3H)，2.35(brs，8H)，2.16(s，3H)，1.31(t，J＝8.0Hz，1H).

MS(ESI)，m/z：561(M⁺+H⁺).

实施例14

3-((1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-4-氯-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

3-((1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-4-chloro-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

合成方法如实施例13

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.98(s，1H)，10.66(s，1H)，8.73(d，J＝2.0Hz，1H)，8.54(d，J＝2.0Hz，1H)，8.33(d，J＝2.0Hz，1H)，8.24(s，1H)，8.19(d，J＝1.6Hz，1H)，8.02(m，2H)，7.80(d，J＝7.6Hz，1H)，7.71(d，J＝8.8Hz，1H)，3.57(m，2H)，3.17(s，3H)，2.40(brs，8H)，2.18(s，3H).MS(ESI)，m/z：554(M⁺+H⁺).

实施例15

4-氯-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

4-chloro-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

合成方法如实施例13

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.55(s，1H)，10.66(s，1H)，8.69(d，J＝2.0Hz，1H)，8.54(d，J＝1.6Hz，1H)，8.32(d，J＝1.6Hz，1H)，8.20(s，2H)，8.02(m，2H)，7.81(d，J＝8.8Hz，1H)，7.72(d，J＝8.4Hz，1H)，3.58(s，2H)，2.54(s，3H)，2.41(s，8H)，2.21(s，3H).

MS(ESI)，m/z：568(M⁺+H⁺).

实施例16

3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

合成方法如实施例13

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.51(s，1H)，10.70(s，1H)，8.68(d，J＝1.6Hz，1H)，8.51(d，J＝1.6Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.22(s，1H)，8.13(d，J＝8.0Hz，1H)，8.03(d，J＝8.0Hz，1H)7.81(d，J＝8.0Hz，1H)，7.68(m，2H)，3.66(s，2H)，3.10(brs，8H)，2.69(s，3H)，2.53(s，3H).

MS(ESI)，m/z：533(M⁺+H⁺).

实施例17

3-((-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-4-环丙基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

3-((1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-4-cyclopropyl-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide

合成方法如实施例13

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.50(s，1H)，10.55(s，1H)，8.74(d，J＝2.0Hz，1H)，8.53(d，J＝2.0Hz，1H)，8.21(m，3H)，8.06(dd，J＝8.4，1.6Hz，1H)，8.01(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.70(d，J＝8.8Hz，1H)，7.09(d，J＝8.4Hz，1H)，3.56(m，2H)，2.33(brs，8H)，2.15(s，3H)，1.55(m，1H)，1.30(m，4H).MS(ESI)，m/z：559(M⁺+H⁺).

实施例18

N-(3-叔丁基-5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基)-4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-yl)乙炔基)苯甲酰胺

N-(3-tert-butyl-5-(4-methyl-1H-imidazol-1-yl)phenyl)-4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)benzamide

合成方法如实施例1

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 13.50(s，1H)，10.41(s，1H)，8.70(s，1H)，8.52(s，1H)，8.20(s，1H)，8.06(s，1H)，7.92(m，2H)，7.74(s，1H)，7.52(m，1H)，7.38(s，1H)，7.30(s，1H)，2.60(s，3H)，2.54(s，3H)，2.18(s，3H)，1.34(s，9H).

MS(ESI)，m/z：503(M⁺+H⁺).

实施例19

4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺二甲磺酸盐

4-methyl-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide，dimesylate

将620mg 4-甲基-3-((3-甲基-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺(1.135mmol)置于500mL单口瓶中，加入150mL无水乙醇，搅拌下滴加220mg甲磺酸(2.271mmol)，室温搅拌过夜，有黄色固体析出，过滤，滤渣用乙醇洗三次，真空干燥得黄色固体70mg(84％)。

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 10.60(s，1H)，8.74(d，J＝2.0Hz，1H)，8.69(d，J＝2.0Hz，1H)，8.52(d，J＝2.0Hz，1H)，8.25(d，J＝2.0Hz，1H)，8.23(s，2H)，8.19(d，J＝1.6Hz，1H)，8.15(d，J＝8.4Hz，1H)，7.93(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.54(d，J＝8.4Hz，1H)，3.83(s，2H)，3.44(br，4H)，3.08(br，4H)，2.83(s，3H)，2.60(s，2H)，2.54(s，3H)，2.36(s，6H).

MS(ESI)，m/z：.547，643

实施例20

4-氯-3-((3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺二甲磺酸盐

4-chloro-3-((3-methyl-1H-pyrazolo[3，4-b]pyridin-5-yl)ethynyl)-N-(4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide，dimesylate

合成方法如实施例19

¹HNMR(400MHz，d-DMSO)，δppm 10.82(s，1H)，8.70(d，J＝2.0Hz，1H)，8.54(d，J＝2.0Hz，1H)，8.34(d，J＝2.0Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.20(d，J＝8.4Hz，1H)，8.02(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.87(d，J＝8.4Hz，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，4.23(s，2H)，3.62(br，2H)，3.40(br，4H)，3.05(br，4H)，2.87(s，3H)，2.54(s，3H)，2.45(s，6H).

MS(ESI)，m/z：.568，664

实施例21

用不同浓度的杂环炔苯类化合物(1×10^-10～1×10^-5M)分别处理K562(慢性白血病)，Ba/F3(携带Bcr/Abl)，Ba/F3(携带T315I Bcr/Abl突变，对STI571耐受)，A549(人肺癌细胞)，DU145(人***癌细胞)，HT-29(人结肠癌细胞)和HepG2(人肝癌细胞)等七种细胞，72小时后MTT或者CCK8，再孵育4小时，然后用酶标仪测定其在570nm(CCK8，450，650nm)的吸光值。结果发现，杂环炔苯类化合物处理可明显降低各种细胞对MTT的吸收，说明杂环炔苯类化合物可显著抑制上述细胞的增殖，尤其是抑制K562(慢性白血病)，Ba/F3(携带T315IBcr/Abl突变，对STI571耐受)细胞，A549(人肺癌细胞)，DU145(人***癌细胞)，HT-29(人结肠癌细胞)和HepG2(人肝癌细胞)的增值，抑制率与药物浓度成正相关。根据杂环炔苯类化合物对这三种细胞的生长抑制作用，我们计算出其半数抑制浓度(IC50，μM)值如表1所描述。(所用化合物分别为实施例1-18所制备的化合物，在表1中用Drug No.标号表示)。

以上是针对本发明的可行实施例的具体说明，但该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明技艺精神所为的等效实施或变更，均应包含于本发明的专利范围中。

Claims

1.具有式(I)结构特征的吡唑并吡啶炔苯类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子：

R₁任选自：

1)H；

2)C₁～C₆烷基；

3)C₃～C₆环烷基；

4)苯基

R₂任选自：

1)H；

2)卤素；

3)C₁～C₅烷基；

4)C₃～C₆环烷基；

R₃、R₅任选自：

1)H；

2)C₁～C₄烷基；

3)C₁～C₄含氟烷基；

4)取代的含1-3个N原子的五元杂环；

R₄任选自：

1)H；

2)C₁～C₄含氟烷基；

3)取代的含1-2个N原子的五元或六元杂环。

2.根据权利要求1所述的吡唑并吡啶炔苯类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体，其特征是，所述吡唑并吡啶炔苯类化合物选自以下化合物：

3.一种***的药用组合物，其由权利要求1-或2所述的吡唑并吡啶炔苯类化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子与药学上可接受的载体组成。

4.权利要求1或2所述吡唑并吡啶炔苯类化合物及其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子在制备治疗或预防肿瘤的药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征是：所述肿瘤为白血病、胃肠间质瘤、组织细胞性淋巴癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、***癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、***癌、鼻咽癌等中的任一种。