CN103155786A - 一种棕色蘑菇母种培养基的筛选方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种棕色蘑菇母种培养基的筛选方法,其特征在于它是由麸皮发酵培养基质(g/L)成分组成：麸皮120，葡萄糖15，蛋白胨2。采用本发明的培养基质培养的棕色蘑菇液体菌种的菌丝量由1.543g/L提高到32.043g/L，发酵罐验证试验中菌丝干重达到38.486g/L；本发明的方法满足了人们和市场对新菇种与食用菌新技术的需求，如能得到广泛应用必将产生巨大的经济效益与社会效益。

Description

一种棕色蘑菇母种培养基的筛选方法

技术领域

 本发明提供了涉及棕色蘑菇的培养方法，更具体的说是一种棕色蘑菇母种培养基的筛选方法。

背景技术

棕色蘑菇（Agaricus brunnescens Peck），是蘑菇中的珍稀类品种，属于担子菌纲(Basidiomycotina)、伞菌目(Agaritales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇属 (garicus)。棕色蘑菇俗称棕蘑，是波希美亚种。该菌株产量高、菇质优良、口感鲜嫩，其菇盖为自然棕褐色，菌柄白色，肉质致密紧实。现在所有的白色双孢蘑菇品种均为棕色蘑菇的白色变种，也就是说棕色蘑菇是白色双孢蘑菇的野生祖先。棕色蘑菇,别名白蘑菇、洋菇,属于担子菌纲、伞菌目、蘑菇科、蘑菇属。棕色蘑菇营养丰富、味道鲜美,据报导鲜蘑菇含蛋白质3%—4%,脂肪0.2%—0.3%,碳水化合物2.4%—3.8%,可消化率达70%—90%,享有“植物肉”之称。蘑菇的氨基质酸组成较全面,尤其富含人体必需的赖氨酸等。棕色蘑菇还含有丰富的铁、钾、钙等矿质元素。还含有硫氨素、核黄素、烟酸、抗坏血酸等多种维生素及酶类。由于含有较高的不饱和脂肪酸,故多食用蘑菇对降低血脂有明显作用,用蘑菇罐头加工预煮液制成的药物对医治迁延性肝炎、慢性肝炎、肝肿大、早期肝硬化等均有显著疗效。随着人们追求天然、返璞归直潮流的到来，棕色蘑菇在市场上受到广大消费者的追捧，是一个很好的商业品种。

棕色蘑菇的营养、口感和香味更接近于野生口蘑，市场价格也比常规的双孢蘑菇高20％左右。棕色蘑菇蛋白质、氨基酸、糖和矿物质元素含量丰富，比例恰当，其所含有的蛋白质的消化率可达70 %～90%，所含的多糖类物质具有抗癌和降低胆固醇的作用，氨基酸组成全面，特别是富含一般谷物中所缺乏的赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸等，且不易富积重金属。营养数据表明，棕色蘑菇是老少皆宜的营养性食品。

发明内容

本发明公开一种棕色蘑菇母种培养基的筛选方法，其特征在于，按如下的步骤进行：

一种棕色蘑菇母种培养基的筛选方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）供试菌株：棕色蘑菇MC441引自福建省蘑菇菌种研究推广站；

（2）供试的母种培养基配方：

1）种子液的制备，取5块0.5 cm²新鲜斜面菌种接种于种子培养基质（50mL/250mL三角瓶）中，25℃，150rpm摇床培养3天；其中的斜面培养基质为下面的一种之一：

A、草炭土培养基(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL；

B、玉米粉Ⅱ培养基(g/L)：玉米粉40g，葡萄糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨1g，水1000mL；

C、菜园土培养基(g/L)：菜园土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL；

2）配制培养基：取适量草炭土、麦粒，加入一定量的清水中煮沸20～30min，用4层纱布过滤，得滤液；向滤液中加入硫酸镁、磷酸二氢钾、蛋白胨、葡萄糖、琼脂，待药品溶化后，补足水分，分装试管；

3）灭菌：121℃，灭菌20min。灭菌结束后，取出摆斜面；

4）接种、培养：严格按照无菌操作将棕色蘑菇菌丝接种于斜面中部；25℃恒温培养至满管；

5）挑杂、保存：将染菌、生长状态不佳的斜面去除后，将剩余斜面置于4℃冰箱保存，备用；

（3）将配置好3种培养基，121℃灭菌25min，摆斜面，将选取的棕色蘑菇菌丝按照无菌操作程序分别接种于培养基试管的中部，25℃恒温无光培养，48h后观察及测量各试管中菌丝生长情况。

在棕色蘑菇母种培养基中加入土壤（菜园土），并对土壤进行了检测，发现土壤中的有机酸的含量对棕色蘑菇母种的生长具有一定促进作用。富里酸对食用菌具有助长作用的机理可能和它的分子结构与性质有关。第一，富里酸大分子上连有羧基、羟基、羰基、醌基、甲氧基等官能团，是一类结构复杂的生物活性物质，氧化还原作用强。它是加强微生物呼吸作用的接触剂，进入微生物体内，在过氧化酶参与下，使氧化酶放出原子氧，多元酚被氧化成醌，形成酚-醌结构，构成氧化还原体系。氧化还原体系能提高食用菌胞外酶的活性，促进有机质的分解和吸收，从而达到助长的效果。总之，由于富里酸分子含有多种官能团和酚醌结构，从而提高了富里酸的水溶性，增强了微生物体内氧化酶的活性，使氧化分解营养物质的条件得到改善，这是富里酸类物质对微生物生命活动具有刺激作用的基本原因。

本发明选用的棕色蘑菇MC441菌株主要优特点是： 

1.该菌株菇盖表面为自然棕褐色，菇柄、菌肉白色；菇质优，子实体圆整，菇盖厚、结实，不凹顶；味道鲜美，口感鲜嫩，保鲜期长。菌丝生长速度快。产量高，在相同条件下，比白色蘑菇品种提早2-3天出菇，菇潮整齐，产量达9-10公斤/平方。      2.出菇温度范围广，尤其是低温结实能力比常规白色蘑菇强，在5℃-8℃下，产量比对照2796高70％。培养技术简易、培养原料来源广。其培养料配方以稻、麦草为主要原料，培养料及堆制发酵方法与常规蘑菇相同。

具体实施方式

下面结合实施例说明本发明，这里所述实施例的方案，不限制本发明，本领域的专业人员按照本发明的精神可以对其进行改进和变化，所述的这些改进和变化都应视为在本发明的范围内，本发明的范围和实质由权利要求来限定。其中棕色蘑菇MC441，引自福建省蘑菇菌种对外有售。

实施例1

棕色蘑菇母种培养基的筛选

（1）供试菌株：棕色蘑菇MC441引自福建省蘑菇菌种研究推广站对外有售。

（2）供试的母种培养基配方

A、葡萄糖马铃薯培养基（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，水1000 mL

B、麦粒Ⅰ培养基(g/L)：麦粒100g，葡萄糖20g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL 。

C、麦粒Ⅱ培养基(g/L)：麦粒200g，葡萄糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL。

D、草炭土培养基(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL。

E、玉米粉Ⅰ培养基(g/L)：玉米粉24g，葡萄糖20g，硫酸镁1g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨1g，水1000mL。

F、玉米粉Ⅱ培养基(g/L)：玉米粉40g，葡萄糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨1g，水1000mL。

G、菜园土培养基(g/L)：菜园土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL。

H、麸皮培养基：麸皮100g，葡萄糖20g，蛋白胨2，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，水1000mL。

（3）母种培养基的筛选试验：

将配置好8种培养基，121℃灭菌25min，摆斜面，将选取的棕色蘑菇菌丝按照无菌操作程序分别接种于培养基试管的中部，25℃恒温无光培养。每组两个平行。按照以下要求记录菌丝生长天数和菌丝生长长度，计算生长速度，观察菌丝形态、颜色及长势。

菌丝长势：观察菌丝浓密度，气生菌丝量的多少。

菌丝长速：菌丝生长速度(mm/d)=菌丝生长长度(mm)/生长天数(d) 

综合各种因素，筛选出各方面表现均较好的母种培养基。

48h后观察及测量各试管中菌丝生长情况，每组两个平行，结果如下：

表1 菌丝生长速度及生长势

注：“+++”菌丝生长势强，“++”菌丝生长势一般，“+”菌丝生长势弱。

不同培养基的菌丝生长速度、生长势、色泽以及疏密度情况见表1。由表中可见，不同供试培养基对棕色蘑菇菌丝生长有较大影响。在D培养基上的菌株菌丝平均生长速度快，达到3.125 mm/d，且菌丝浓密，生长均匀，气生菌丝多。G、F培养基菌株菌丝平均生长速度次之，但菌株菌丝较稀疏，生长不均匀，气生菌丝少。其余培养基上菌株菌丝生长均较缓慢，菌丝也稀疏。生长速度最慢的A培养基平均生长速度仅有0.6 mm/d。因此选择D培养基，即草炭土培养基作为棕色蘑菇的母种培养基。

实施例2

 草炭土和菜园土中腐殖质的含量分析

通过不同培养基对棕色蘑菇菌丝生长的影响分析表明，在含有草炭土和菜园土的培养基上棕色蘑菇菌丝长势较好，即D和G培养基。由于草炭土和菜园土两种土壤中最大的差别在于腐殖质含量明显不同，试验中对两土壤样品中富里酸和胡敏酸的含量进行了测定。采用碱溶酸析发测得的两种土壤样品中富里酸和胡敏酸的含量见表2。

表2土壤样品中富里酸和胡敏酸的含量

土壤样品	富里酸含量	胡敏酸含量
			菜园土	8.53%	0.137%
草炭土	12.13%	9.847%

从含量分析结果可以看出，不管是草炭土还是菜园土，其富里酸的含量都比胡敏酸的含量要高。但从富里酸的含量来看，草炭土略高，但两者差别不是很明显；从胡敏酸的含量来看，草炭土比菜园土高出71.9倍，含量上具有绝对的优势。

由表1可知，添加草炭土和菜园土的配方菌丝生长速度和均匀度都明显好于未添加组，说明两种土壤溶液中的腐植酸对食用菌的生长都具有良好的促进作用。且草炭土组菌丝的生长速度和均匀度略好于菜园土组，但差别不大。这说明在促进食用菌生长方面，胡敏酸的作用不是主要的，主要的是富里酸的作用。

富里酸对食用菌具有助长作用的机理可能和它的分子结构与性质有关。第一，富里酸大分子上连有羧基、羟基、羰基、醌基、甲氧基等官能团，是一类结构复杂的生物活性物质，氧化还原作用强。它是加强微生物呼吸作用的接触剂，进入微生物体内，在过氧化酶参与下，使氧化酶放出原子氧，多元酚被氧化成醌，形成酚-醌结构，构成氧化还原体系。氧化还原体系能提高食用菌胞外酶的活性，促进有机质的分解和吸收，从而达到助长的效果。总之，由于富里酸分子含有多种官能团和酚醌结构，从而提高了富里酸的水溶性，增强了微生物体内氧化酶的活性，使氧化分解营养物质的条件得到改善，这是富里酸类物质对微生物生命活动具有刺激作用的基本原因。

此外，食用菌菌丝体内参与代谢的酶类需要一价离子的活化, 而富里酸分子中含有的羧基、羟基、羰基、醌基、甲氧基等官能团能与金属离子发生交换、吸附、络合、螯合等作用，可以改善细胞膜通透性，并具有富集钾、铵、镁等多种元素，能持续地供应营养物质，提高菌丝对金属离子和营养物质的吸收。

再次，由于羧基和酚羟基的存在，使富里酸的+1价盐类具有水溶性，这一特性也有利于一些+2 价、+3价的金属形成络合物，可被微生物吸收利用，使富里酸的刺激作用得以充分发挥。

实施例3

（1）供试菌株：棕色蘑菇MC441引自福建省蘑菇菌种研究推广站；

（2）供试的母种培养基配方：

1）种子液的制备，取5块0.5 cm²新鲜斜面菌种接种于种子培养基质（50mL/250mL三角瓶）中，25℃，150rpm摇床培养3天；其中的斜面培养基质：草炭土培养基质(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL；种子培养基质为下面的一种之一：

A、草炭土培养基(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL或

B、玉米粉Ⅱ培养基(g/L)：玉米粉40g，葡萄糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨1g，水1000mL。

（3）将配置好3种培养基，121℃灭菌25min，摆斜面，将选取的棕色蘑菇菌丝按照无菌操作程序分别接种于培养基试管的中部，25℃恒温无光培养，48h后观察及测量各试管中菌丝生长情况。

实施例4

一种棕色蘑菇母种培养基的筛选方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）供试菌株：棕色蘑菇MC441引自福建省蘑菇菌种研究推广站；

（2）供试的母种培养基配方：

1）种子液的制备，取5块0.5 cm²新鲜斜面菌种接种于种子培养基质（50mL/250mL三角瓶）中，25℃，150rpm摇床培养3天；其中的斜面培养基质为下面的一种之一：

B、玉米粉Ⅱ培养基(g/L)：玉米粉40g，葡萄糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨1g，水1000mL或

C、菜园土培养基(g/L)：菜园土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL；

2）配制培养基：取适量草炭土、麦粒，加入一定量的清水中煮沸20～30min，用4层纱布过滤，得滤液；向滤液中加入硫酸镁、磷酸二氢钾、蛋白胨、葡萄糖、琼脂，待药品溶化后，补足水分，分装试管；

3）灭菌：121℃，灭菌20min。灭菌结束后，取出摆斜面；

4）接种、培养：严格按照无菌操作将棕色蘑菇菌丝接种于斜面中部；25℃恒温培养至满管；

5）挑杂、保存：将染菌、生长状态不佳的斜面去除后，将剩余斜面置于4℃冰箱保存，备用；

（3）将配置好3种培养基，121℃灭菌25min，摆斜面，将选取的棕色蘑菇菌丝按照无菌操作程序分别接种于培养基试管的中部，25℃恒温无光培养，48h后观察及测量各试管中菌丝生长情况。

Claims (2)

1.一种棕色蘑菇母种培养基的筛选方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）供试菌株：棕色蘑菇MC441引自福建省蘑菇菌种研究推广站；

（2）供试的母种培养基配方：

1）种子液的制备，取5块0.5 cm²新鲜斜面菌种接种于种子培养基质（50mL/250mL三角瓶）中，25℃，150rpm摇床培养3天；其中的斜面培养基质为下面的一种之一：

A、草炭土培养基(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL；

B、玉米粉Ⅱ培养基(g/L)：玉米粉40g，葡萄糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨1g，水1000mL；

C、菜园土培养基(g/L)：菜园土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL；

2）配制培养基：取适量草炭土、麦粒，加入一定量的清水中煮沸20～30min，用4层纱布过滤，得滤液；向滤液中加入硫酸镁、磷酸二氢钾、蛋白胨、葡萄糖、琼脂，待药品溶化后，补足水分，分装试管；

3）灭菌：121℃，灭菌20min。

2.灭菌结束后，取出摆斜面；

4）接种、培养：严格按照无菌操作将棕色蘑菇菌丝接种于斜面中部；25℃恒温培养至满管；

5）挑杂、保存：将染菌、生长状态不佳的斜面去除后，将剩余斜面置于4℃冰箱保存，备用；

（3）将配置好3种培养基，121℃灭菌25min，摆斜面，将选取的棕色蘑菇菌丝按照无菌操作程序分别接种于培养基试管的中部，25℃恒温无光培养，48h后观察及测量各试管中菌丝生长情况。