CN103108658B - 抗体制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含蔗糖的制剂，和制备所述制剂的方法，其中所述蔗糖含量促进降低或消除所述制剂中抗体的可逆自体缔合(RSA)。本发明也涉及包含抗PDGFR-α抗体或抗体片段的制剂。这种抗体能用于各种治疗方法。本申请还涉及消除或降低制剂中抗体RSA趋势的方法。

Description

抗体制剂
相关申请
本申请要求2010年7月2日提交的美国临时申请61/361,209的优先权。上述申请的公开内容通过引用全文纳入本文。
序列表
本申请包含通过EFS-Web以ASCII格式同时提交的序列表，并通过引用全文纳入本文。2011年6月22日创建的所述ASCII拷贝命名为102728WO1.txt，大小为3,275字节。
背景技术
抗体制剂中不需要物质的不稳定性和/或存在可以引起问题，包含简单的不便性如需要以特定方式存储或处理所述制剂，以及安全性和功效问题如由增加的毒性或免疫原性引起的那些。一些抗体观察到的一个特性是所述抗体分子可逆性自体缔合的趋势，也称为可逆自体缔合(RSA)。在给定制剂中抗体的RSA可以受抗体浓度、温度和/或pH的影响。所述制剂中抗体的RSA趋势能对抗体制剂的物理属性有显著影响，潜在地影响长期稳定性、可制造性、使用者顺应性和潜在的产物安全性和功效。例如，当维持在或低于约2°C-8°C的存储温度时，一些抗体制剂中抗体RSA趋势明显。尽管室温延长孵育(如长于1小时)可以完全或基本解决这种RSA趋势，对这种延长孵育的需求可能会负面影响制剂的有效性和持续使用。
需要有助于鉴定合适制剂条件以使稳定性最大化和RSA趋势最小化的方法。例如，当存储在广泛条件（如温度、抗体浓度和pH）下时，需要使治疗抗体稳定而RSA最小的方法和制剂。
发明内容
本公开提供了降低制剂中抗体或抗体片段的可逆自体缔合的制剂方法。同样，本公开提供了能用于鉴定制备抗体或抗体片段的改善制剂的方法。例如这种制剂能在临床或实验室设置中治疗或诊断性应用。
本公开还提供了特定制剂，所述特定制剂包含特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段。示例性制剂有使所述制剂特别适于药学应用的优势RSA和稳定特性。在某些实施方式中，所述制剂是液体制剂，包含特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段。在一个实施方式中，所述液体制剂不适合冻干。在另一个实施方式中，所述制剂适合冻干。在某些实施方式中，所述制剂包含缓冲液。在其他实施方式中，所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在其他实施方式中，所述制剂包含乙酸钠缓冲液。在另一些实施方式中，替代或除了乙酸钠缓冲液外，所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在某些实施方式中，所述制剂中所用缓冲液的这些变化可应用于本文所述公开的任何方面和实施方式。
在另一方面，本公开提供了某种制剂，所述制剂包含：a)水性运载体;b)1mg/ml-100mg/ml特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段;c)4%-20%(重量/体积)蔗糖;d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0。
在一些方面，本发明提供了某种制剂，所述制剂由下列组成：a)水性运载体;b)1mg/ml-100mg/ml特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段;c)4%-20%(重量/体积)蔗糖;d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0。
在任一上述某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含全长IgG单克隆抗体。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段的存在浓度是20mg/ml-50mg/ml。在某些实施方式中，所述抗体或抗体片段的存在浓度是20mg/ml。在其他实施方式中，所述抗体或抗体片段的存在浓度是50mg/ml。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含含氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链多肽。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含含氨基酸序列SEQ ID NO:2的轻链多肽。在某些实施方式中，所述抗体或抗体片段与重链多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且轻链多肽含SEQ ID NO:2氨基酸序列的抗体结合相同的表位。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含：有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1;有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1;有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段与包含下列结构域的抗体结合相同的表位：有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1;有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1;有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂包含6%(w/v)蔗糖或10%(w/v)蔗糖。在某些实施方式中，所述制剂包含0.05%(w/v)PS80。在一些实施方式中，所述制剂包含50mM乙酸钠缓冲液。在其他实施方式中，所述制剂的pH是5.5。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，据分析超速离心(AUC)测定，所述制剂中的所述抗体或抗体片段在2-8°C和23-27°C有基本相似的可逆自体缔合(RSA)特性。在某些实施方式中，高效大小排阻色谱(HPSEC)和动态光散射(DLS)不能检出所述制剂中所述抗体或抗体片段的RSA。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段是单体形式，并且当在10mg/ml、2-8°C时HPSEC不能检出所述抗体或抗体片段的RSA。在一些实施方式中，据动态光散射(DLS)测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在5°C的流体力学半径与25°C的没有显著区别。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂适合静脉内给予。在某些实施方式中，所述水性运载体是水。在一些实施方式中，所述制剂是无热原的。在其他实施方式中，所述制剂还包含防腐剂以延长保存期限。在一些实施方式中，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂在2-8°C稳定至少2年。在一些实施方式中，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂的纯度在至少两年内每年下降小于0.5%。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂基本没有组氨酸、任何其它表面活性剂、任何其它糖或多元醇和/或任何其它盐。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂适合冻干。在其他实施方式中，所述制剂不适合冻干。
在一些方面，本公开提供了基本由以下组成的制剂：a)无菌水;b)20mg/ml特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段;c)10%(重量/体积)蔗糖;d)0.05%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)50mM乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH5.5。
在另一方面，本发明提供了基本由以下组成的制剂：a)无菌水;b)50mg/ml特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段;c)10%(重量/体积)蔗糖;d)0.05%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)50mM乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH5.5。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链多肽。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的轻链多肽。在某些实施方式中，所述抗体或抗体片段与重链多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且轻链多肽含SEQ ID NO:2氨基酸序列的抗体结合相同的表位。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含：有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1;有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1;有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段与包含下列结构域的抗体结合相同的表位：有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1;有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1;有氨基酸序列的SEQ ID NO:7VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，据AUC测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在2-8°C的不可逆自体缔合(非RSA)特性和23-27°C的基本相似。在一些实施方式中，当在10mg/ml、2-8°C时HPSEC不能检出所述制剂中所述抗体或抗体片段的RSA。在其他实施方式中，所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段在2-8°C是单体形式。在某些实施方式中，据动态光散射(DLS)测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在5°C的流体力学半径和25°C的没有显著区别。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂适合静脉内给予。在一些实施方式中，所述水是无菌水。在某些实施方式中，所述制剂是无热原的。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，据根据ICHQ1A指南的长期稳定性研究测定，所述制剂在约2-8°C稳定至少2年。所述ICHQ1A指南是工业标准(Federal Register（联邦公报）,68卷,第225号,2003年11月21日星期五;第65717-18页)。在某些实施方式中，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂的纯度在至少两年内每年下降小于0.5%。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂不适合冻干。在一些实施方式中，所述制剂适合冻干。
在另一方面，本公开提供了一种制剂，所述制剂包含：a)水性运载体;b)1mg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段;c)4%-20%(重量/体积)蔗糖;d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中制剂中所述抗体或抗体片段在约2-8°C测定的非RSA趋势与约23-27°C测定的基本相同。
在其他方面，本公开提供了一种制剂，所述制剂包含：a)水性运载体;b)1mg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段;c)4%-20%(重量/体积)蔗糖;d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中在2-8°C时所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段是非自体缔合、单体形式。
在某些方面，本公开提供了一种制剂，所述制剂由下列组成：a)水性运载体;b)1mg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段;c)4%-20%(重量/体积)蔗糖;d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中所述制剂中所述抗体或抗体片段在约2-8°C测定的非RSA趋势与约23-27°C测定的基本相同。
在一些方面，本发明提供了一种制剂，所述制剂由下列组成：a)水性运载体;b)1mg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段;c)4%-20%(重量/体积)蔗糖;d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中在2-8°C时所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段是非自体缔合、单体形式。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，本公开提供了乙酸钠缓冲液被不同的乙酸盐缓冲液代替或取代的制剂。例如，在某些实施方式中，本公开提供了包含不同乙酸盐缓冲液替代乙酸钠的制剂。当使用不同的乙酸盐缓冲液时，所述缓冲液可以与乙酸钠缓冲液所用类似的方式使用(如在或跨相同浓度范围)。在其他实施方式中，所述制剂包含多于一种乙酸盐缓冲液。
在其他方面，本公开提供了消除和降低制剂中抗体的可逆自体缔合(RSA)的方法，所述方法包含:提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中，所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA可用HPSEC测量，i)在约2-8°C和/或ii)在大于4mg/ml浓度，和所述起始制剂中抗体或抗体片段包含高分子量形式;向所述起始制剂中加入蔗糖以提供有约4%-约20%(重量/体积)蔗糖的改变制剂，其中当在约2-8°C以给定抗体浓度比较时，所改变制剂中抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂抗体或抗体片段的RSA消除或降低。
在某些实施方式中，所述方法还包含：测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径，并将其与所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径进行比较，其中当在约2-8°C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径相对于所述起始制剂的流体力学半径消除或降低。在一个实施方式中，所述改变的制剂的流体力学半径用DLS测定。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述方法还包含：使用HPSEC测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势，并将其与所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势进行比较，其中当在约2-8°C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势相对于所述起始制剂的RSA趋势消除或降低。在某些实施方式中，所述方法还包含在约2-8°C和约23-27°C测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势，和确证所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段在2-8°C测定的非RSA趋势和23-27°C测定的基本相似。在一个实施方式中，通过AUC分析在约2-8°C和约23-27°C的RSA趋势。在一些实施方式中，HPSEC不能检出所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约1mg/ml–约100mg/ml。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约20mg/ml或约50mg/ml。在其他实施方式中，所述抗体或抗体片段在所改变制剂中的存在浓度是约20mg/ml或约50mg/ml。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，向所述起始制剂中加入蔗糖包含加入蔗糖以使蔗糖终浓度达到所改变制剂中约10%(w/v)。
在其他方面，本公开提供了消除或降低制剂中抗体可逆自体缔合(RSA)的方法，所述方法包含:a)提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中以浓度10mg/ml、在约2-8°C时用HPSEC可检出所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA;b)使用一种或多种试验测定所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性;c)将所述起始制剂的蔗糖含量调节至约4%-约20%(w/v)的终浓度以生成改变的制剂;和d)使用一种或多种试验测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性;其中当在约2-8°C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂的RSA消除。
在一些实施方式中，步骤(c)进行多于一次。在某些实施方式中，步骤(c)和(d)进行多于一次。在其他实施方式中，步骤(b)和(d)包含评价相同的生物物理属性。在示例性实施方式中，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述生物物理属性是指示RSA趋势的特征色谱峰。在一些实施方式中，所述特征色谱峰是所述峰有峰肩。在一些实施方式中，所述生物物理属性在2个不同温度评价。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，据动态光散射测定，所述生物物理属性是所述起始制剂和/或所述改变的制剂中抗体或抗体片段的流体力学半径。
在任一上述方面和实施方式中某些实施方式中，所述生物物理属性是流体力学半径，并且所述方法包含测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径，并将其与所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径进行比较，其中当在约2-8°C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径相对于所述起始制剂的流体力学半径降低。在示例性实施方式中，所述改变的制剂的流体力学半径用DLS测定。
在上述方面或实施方式中任一项的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段以约1mg/ml–约100mg/ml浓度存在于所述起始制剂和所改变制剂。在某些实施方式中，所述抗体或抗体片段以约20mg/ml或约50mg/ml浓度存在于所述起始制剂和改变的制剂。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段以约20mg/ml或约50mg/ml浓度存在于所改变的制剂。
在上述方面和实施方式中任一项的某些实施方式中，调整蔗糖含量包含加入蔗糖以达到所改变制剂中蔗糖终浓度约10%(w/v)。
在其他方面，本公开提供了根据任一上述方面或实施方式的方法生成的含有抗体或抗体片段的制剂。
在其他方面，本公开提供了治疗需要治疗的患者肿瘤病症的方法，所述方法包含给予所述患者有效量的任一上述方面或实施方式的制剂。在某些实施方式中，所述制剂作为治疗方案的一部分与一种或多种其他药剂或治疗方式联合施用。在示例性实施方式中，所述肿瘤病症是癌症。
在另一方面，本公开提供了生成有降低RSA的抗体或抗体片段的制剂的方法，所述方法包含:生成抗体或抗体片段;和将所述抗体或抗体片段配制为包含以下组分的制剂:水性运载体;1mg/ml-100mg/ml所述抗体或抗体片段;4%-20%(重量/体积)蔗糖;0.01%-0.1%(重量/体积)表面活性剂;和乙酸盐缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0;其中所述制剂中使用的蔗糖量通过以下选择:提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中在约2-8°C用HPSEC可检出所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA，并且所述起始制剂中的抗体或抗体片段由高分子量形式组成;加入蔗糖到所述起始制剂中以提供有4%-20%(重量/体积)蔗糖的改变制剂，其中在约2-8°C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂下降。
在其他方面，本公开提供了生成有降低RSA的抗体或抗体片段的制剂的方法，所述方法包含:生成抗体或抗体片段;和将所述抗体或抗体片段配制为包含以下组分的制剂:水性运载体;1mg/ml-100mg/ml所述抗体或抗体片段;4%-20%(重量/体积)蔗糖;0.01%-0.1%(重量/体积)表面活性剂;和乙酸盐缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0;其中所述制剂中使用的蔗糖量通过以下选择：a)提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中以10mg/ml、在约2-8°C下时用HPSEC可检出所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA;b)使用一种或多种试验测定所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性;c)调整所述起始制剂的蔗糖含量实现约4%-约40%(w/v)终浓度以生成改变的制剂;和d)使用一种或多种试验测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性，其中当在约2-8°C以给定抗体浓度下比较时，所改变制剂中所述抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂的RSA下降。
在任一上述某些实施方式中，本公开提供了制剂中有缓冲液的制剂和方法。在某些实施方式中，所述缓冲液是乙酸盐缓冲液。在某些实施方式中，所述乙酸盐缓冲液是乙酸钠缓冲液。在其他实施方式中，所述乙酸盐缓冲液不是乙酸钠缓冲液。在其他实施方式中，乙酸钠缓冲液用不同的乙酸盐缓冲液代替或取代。例如，在某些实施方式中，本公开提供了包含不同乙酸盐缓冲液替代乙酸钠的制剂。当使用不同的乙酸盐缓冲液时，所述缓冲液可以与乙酸钠缓冲液所用类似的方式使用(如在或跨相同浓度范围)。在其他实施方式中，所述制剂包含多于一种乙酸盐缓冲液。
本公开考虑了任一上述方面和实施方式的所有组合以及详细描述和实施例中所示任一实施方式的组合。另外，当涉及"任一上述方面或实施方式"时，也应该理解包含"任一上述或下列方面或实施方式"。
附表和图的简要说明
图1。MabA显示了不含蔗糖的乙酸盐/盐制剂中的RSA趋势。此起始、包含乙酸盐/盐制剂中所述抗体的RSA趋势由HPSEC和沉降速率分析超速离心(AUC)测定。图1A，下图(2-8℃)，表明在存储温度条件下出现指示RSA的峰的前沿峰肩。在2-8°C下单体峰中的竖直线显示自体缔合。图1B显示了这种不含蔗糖制剂中的MabA于23-27°C沉淀超过离散范围，在2-8°C观察到显著变宽和更高的沉降系数，指示RSA。图1显示了起始不含蔗糖制剂中的MabA在2-8°C有用HPSEC和AUC可测量的RSA趋势。所述RSA主要作为二聚化和更高级寡聚化发生。另外，图1显示了此起始制剂中所述抗体的RSA趋势是温度依赖性的(如由上述峰肩证明的RSA趋势在室温相对于约2-8°C存储温度分解成单体)。
图2。含有蔗糖制剂中MabA的RSA预防，据HPSEC和AUC测定。在含有蔗糖制剂中，据HPSEC(图2A)在2-8°C以20mg/ml和50mg/ml抗体浓度测定，没有检出RSA。另外，如AUC所显示，抗体沉淀中没有观察到温度依赖性(叠加2-8°C和23-27°C的AUC沉淀概况;见图2B)。因此，与不含蔗糖的制剂相比，MabA的RSA在以含蔗糖的制剂提供时被防止。例如，在约2-8°C通过HPSEC不再检出和测量到RSA。
图3。MabA上α-氨基萘三磺酸(ANS)和疏水性表面之间的相互作用随着蔗糖含量增加而减少。0%和12%蔗糖含量的比较显示了含有蔗糖制剂中ANS结合的显著下降，提示蔗糖含量降低抗体的表面疏水性，造成RSA降低。
图4。含蔗糖和不含蔗糖制剂中多个温度下MabA流体力学半径的测量。图4A显示了5°C、25°C和37°C下含乙酸盐/盐制剂中MabA的流体力学半径。没有蔗糖时，所述抗体流体力学半径是温度依赖性，指示了低温下RSA趋势。然而，出现蔗糖(图4B)时，没有观察到温度依赖性，指示RSA趋势的消除。
图5。含蔗糖制剂中MabA的增加热稳定性。使用差示扫描量热法(DSC)，在含蔗糖和不含蔗糖的制剂中评价MabA的热稳定性。所述抗体显示了含蔗糖制剂中显著更大的热稳定性。这显示了含蔗糖制剂诱导有利构象变化，产生相对于所述起始制剂降低的RSA和增加的热稳定性。
图6。第二维里系数的测量。加入蔗糖使所述第二维里系数从吸引向排斥净交互作用移动。这个结果指示了蔗糖对分子间相互作用的显著下降/防止和自体缔合倾向起作用。
具体实施方式
(i)综述
抗体的可逆自体缔合可以在某些制剂条件下发生。然而，通常，仅作为蛋白聚集更大问题的一部分，制剂中发生抗体可逆自体缔合。例如，可逆自体缔合可以在显著非可逆二聚化、三聚化和其他更高级寡聚化发生的情况和/或条件下观察到。显著非可逆聚集的出现通常使制剂不适合治疗应用。
此外或替代地，仅在基本低于制剂存储或使用温度的极低温度下发生可检测的可逆自体缔合。在这个情况下，尽管可逆自体缔合在极低温度的条件下可检测，存储温度和室温下可检测自体缔合的消失意味者RSA可能基本不影响制剂的诊断、研究或治疗效用。
在上面任一条件下，可以没有调节所述制剂以降低RSA的特定需求。然而，在一些情况下，在存储温度（约2-8°C，如5°C）发生制剂中可检测的可逆自体缔合。替代地或此外，甚至在相对低抗体浓度（如约4-8mg/ml）下仍发生制剂中可检测的抗体可逆自体缔合。这是显著的，因为期望可逆自体缔合随着抗体浓度的降低而降低，并且在低于通常存储或使用条件的剂量下，出现可检出RSA提示了RSA对标准治疗或使用条件下所述制剂中的抗体是重要事件。本公开提供了这些情况下防止或降低RSA的方法和与RSA有关的挑战。
本公开部分是基于以下发现：如本文所述蔗糖降低或防止制剂中抗PDGFR-α抗体的RSA。因此，在某些方面，本公开提供了减少制剂中抗体或抗体片段的RSA趋势的方法。本文所述制剂方法的可观察优势是制备制剂的能力，当以给定浓度如至少约10mg/ml评价和与存储温度及室温基本相同时，HPSEC不能检出制剂中抗体的RSA趋势。在某些实施方式中，所述方法产生制剂的制备，其中在约2-8°C的存储温度下，HPSEC不能检测制剂中抗体的RSA趋势。注意到RSA趋势可以在任意一些浓度和温度下评价。然而，在过低抗体条件下评价RSA趋势可能错误低估RSA的出现。因此，在得出制剂中抗体RSA趋势消除或RSA趋势显著提高的结论前，在靶标制剂浓度或至少约10mg/ml浓度和2-8°C下进行HPSEC和/或AUC评估。在这种浓度和温度范围下不能由HPSEC和/或AUC检出的RSA与就制剂中抗体而言RSA消除的结论一致。
本公开方法和组合物的显著优势之一是特别在相关浓度如至少10mg/ml评价时HPSEC不能检出RSA和在存储温度(2-8°C)与室温之间没有显著区别的制剂，和/或在相关浓度如至少10mg/ml时HPSEC于2-8°C不能检测RSA趋势的制剂能使用而不需要室温延长孵育。换言之，如果不能检出RSA，不需要室温孵育60-90分钟或更长的延长期。
因此，在某些实施方式中，本公开提供了防止或降低制剂中抗体RSA的方法。本文提供这些方法的细节。在某些实施方式中，所述方法涉及防止或降低制剂中抗PDGFR-α抗体的RSA。
另外，本公开提供了包含抗PDGFR-α抗体或抗体片段的制剂。本文提供了特定制剂的细节。在某些实施方式中，所述制剂提高了优选的非RSA属性，例如1)给定浓度下在2-8°C对比室温没有显著区别的RSA和/或2)在相关浓度如至少10mg/ml不能由HPSEC于2-8°C检测的RSA和/或3)至少4mg/ml的抗体浓度下不能检测的RSA和/或随着浓度没有显著变化的RSA。不考虑RSA特性，应该理解所述制剂中抗体保留其功能属性如特异结合PDGFR-α的能力，和抑制表达PDGFR-α的细胞生长。另外，本公开提供了降低或消除起始制剂中抗体的RSA趋势以实现一种或多种上述RSA特性。
同样地，所述抗体制剂在存储修复后不需要延长培育期就可以给予对象，因此简化了健康护理专业人员向对象给予制剂的过程。另外，本文所述制剂能包含浓度范围约1mg/ml–约100mg/ml的抗体(包含其抗体片段)，而不造成由于延长存储期间蛋白聚集和/或片段化对抗体生物活性的不良作用。这种稳定性不仅保证了抗体的功效，而且降低了对象中可能发生不良作用的风险。
因此，在某些实施方式中，本公开提供了防止或降低抗体特别是抗PDGFR-α抗体RSA趋势的包含蔗糖的抗体制剂。另外，本文提供了防止或降低抗体制剂中抗体RSA的方法。在某些实施方式中，所述制剂是液体制剂。在某些实施方式中，所述制剂不适合冻干。在某些实施方式中，所述制剂适合冻干。在某些实施方式中，这种制剂中的抗体具有利的RSA特性。在某些实施方式中，这种有利的RSA特性相对于起始制剂中抗体的RSA特性作评价。
本公开制剂提供了抗体（包含其抗体片段）的稳定即用型制品。在特定实施方式中，本公开制剂提供了包含抗PDGFR-α抗体的制品。
不希望受理论的限制，本公开部分基于下面的观察：起始制剂中抗PDGFR-α抗体有影响所述制剂能使用方法的RSA趋势(参见例如本文实施例1)。这种起始制剂中的单体抗PDGFR-α分子有短暂和可逆的自体缔合趋势，并且这种RSA是温度的函数。特定地，所述起始制剂中该抗体的RSA在约2°C–约8°C的存储条件下显著，并且甚至在10mg/ml下可由HPSEC测量，如单体峰前沿峰肩所指示。在这个起始制剂中，甚至当所示抗体显著稀释时HPSEC仍然可测量指示RSA的峰肩(如直到所述抗体稀释到小于或等于4mg/ml时，所示峰肩可以检出)。然而，RSA趋势随时间降低并且室温平衡60–90分钟后不能检出。类似地，所述抗体应用于此起始制剂前需要室温或更高温度的延长培育。需要延长培育是通常不方便的原因并且可潜在引入不顺应性的风险。
在某些实施方式中，这种短暂RSA趋势是浓度依赖性的，并且随着更低抗体浓度而下降。例如，上述HPSEC峰肩在2-8°C和蛋白浓度10mg/ml下可检出。2-8°C下稀释抗体浓度到小于或等于4mg/ml后，不能观察到所述HPSEC峰肩。4°C时AUC的尺寸分布分析也显示了低抗体浓度下产物峰加宽变小。类似的，为了避免这种制剂中的RSA，一些抗体需要在极低浓度(如小于4mg/ml)下。对很多治疗应用而言，在这种低浓度下配制抗体不实用。
本发明部分基于下面惊人的发现：蔗糖防止或降低起始制剂中观察到的抗PDGFR-α抗体的RSA，并且本公开也适用于显示本文所述RSA的其他抗体。在某些实施方式中，本描述提供了防止或降低抗体RSA的方法(相对于起始制剂的RSA)，其中起始制剂中抗体的RSA有一种或多种下列特性:i)在2-8°C于给定抗体浓度如10mg/ml或至少10mg/ml可测量/检出RSA，并且所述RSA在室温平衡后降低或消除，ii)在2-8°C大于4mg/ml抗体浓度下可测量/检出RSA，并且所述RSA在稀释到4mg/ml或更小浓度后降低或消除，和/或iii)从可逆自体缔合的高分子量形式(如二聚体、三聚体、四聚体、五聚体或更高级寡聚体)生成RSA。防止或降低RSA的方法特别适于防止或降低抗体中的RSA，其中起始制剂中的RSA有1、2或全部3项上述特性。
类似地，所述抗体制剂在存储修复后不需要延长培育期就可以给予对象，从而简化了健康护理专业人员向对象给予制剂的过程。另外，本公开制剂能包含浓度范围约1mg/ml–约100mg/ml的抗体(包含其抗体片段)，而不造成由于延长存储期间RSA、蛋白聚集和/或片段化对抗体生物活性的不良作用。尽管抗体稳定性是与RSA趋势不同的属性，制剂稳定性对安全性、功效和商业应用重要。这种稳定性不仅保证了抗体的功效，而且降低了对象中可能发生不良作用的风险。
因此，本公开提供了防止或降低抗体特别是抗PDGFR-α抗体的RSA趋势的含蔗糖抗体制剂。另外，本文提供了防止或降低抗体制剂中抗体RSA的制剂方法。
(ii)定义
继续进一步详细描述本发明之前，应理解本发明不限于特定组合物或工艺步骤，所述组合物或工艺步骤可变化。必须注意，除非上下文另外明确说明，否则在本说明书和所附权利要求中使用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代物。
除非另有定义，本文使用的所有科技术语与本发明所属领域普通技术人员所理解的通常含义相同。例如，Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology（《生物医药和分子生物学简明词典》）,Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC出版社（CRCPress）;The Dictionary of Cell and Molecular Biology（《细胞和分子生物学词典》）,第3版，1999,学术出版社（Academic Press）;和Oxford Dictionary Of Biochemistry AndMolecular Biology（《牛津生物化学和分子生物学辞典》）,修订,2000,牛津大学出版社（Oxford University Press），向技术人员提供了本发明使用的很多术语的常用词典。
本文中氨基酸可指由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的俗称三字母符号或单字母符号。同样，核苷酸可指其普遍接受的单字母代码。
除非另有说明，抗体可变结构域、互补决定区(CDR)和框架区(FR)的氨基酸编号遵循Kabat等Sequences of Proteins of Immunological Interest（《免疫学感兴趣蛋白的序列》）,第5版，公共卫生服务部(Public Health Service),马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院(1991)所示的Kabat定义。使用这个编号***，所述实际线形氨基酸序列可以包含对应于可变结构域FR或CDR缩短、或***的更少或其他氨基酸。例如，重链可变结构域可以包含H2的残基52后的单氨基酸***(根据Kabat的残基52a)和重链FR残基82后的***残基(如根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。可以通过用"标准"Kabat编号序列比对抗体序列同源性区域就给定抗体测定残基的Kabat编号。构架残基的最大比对常需要在编号***中***“间隔”残基，用于Fv区。另外，由于种间或等位基因差异，任何给定Kabat位点上的某些单独残基特性在抗体链间可能不同。
本文所用术语“一种或多种抗体”也称为免疫球蛋白，包括单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、由至少两种不同表位结合片段(如双特异性抗体)形成的多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼(camelised)抗体、嵌合抗体、单链Fv(scFv)、Fab片段、F(ab')2片段、显示所需生物学活性（如抗原结合部分）的抗体片段、二硫键连接的Fv(dsFv)和抗独特型(抗-Id)抗体(包括例如，本公开抗体的抗-Id抗体)、细胞内抗体和任一上述物质的表位结合片段。具体说，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性片段，即含有至少一个抗原结合位点的分子。免疫球蛋白分子能是任何同种型(如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、亚同种型(如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或同种异型(如Gm，如G1m(f、z、a或x)、G2m(n)、G3m(g、b或c)、Am、Em和Km(1、2或3))。抗体可衍生自任何哺乳动物，包括但不限于人、猴、猪、马、兔、犬、猫、小鼠等，或其他哺乳动物如鸟（如鸡）。
在给出值或范围时，本文所用术语“约”指在给定数值或范围的20%以内、优选10%以内和更优选5%以内的数值或范围。
术语"PDGFR-α"指血小板衍生生长因子酪氨酸激酶受体-α。PDGFR-α也称作CD140a和PDGFR-α。
“MabA"指包含表1所示氨基酸序列的特定、人IgG2抗PDGFR-α抗体。特定地，所述抗体包含表1所示VH和VL(其可变区包含表1所示6个CDR)。这个抗体也可以涉及其示于表1的6个CDR或作为包含VH和VL结构域的抗体和包含表1所示6个CDR的抗体。这种特定人抗体是特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的PDGFR-α抗体示例。
当涉及靶标结合药剂如抗体时，术语"中和"指所述药剂消除或显著降低靶标抗原活性的能力。因此，"中和"抗PDGFR-α抗体能消除或显著降低PDGFR-α的活性。例如中和PDGFR-α抗体可以通过阻断配体和PDGFR-α结合起作用。
如Kabat等，1991(Kabat,E.A.等.(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest（《免疫学感兴趣蛋白的序列》）,第5版，美国卫生和人类服务部公共卫生署的NIH，华盛顿)和随后版本所定义，术语“CDR区”或“CDR”用于指示免疫球蛋白重链和轻链的超变区。抗体通常含有3个重链CDR和3个轻链CDR。本文利用术语CDR表示(视情形而定)这些区域中的一个或几个或甚至全部，这些区域含有负责通过抗体与其识别抗原或表位的亲和性来结合的大多数氨基酸残基。
如本文所讨论，考虑了抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列的小变化由所述抗体或免疫球蛋白分子所涵盖，前提是氨基酸序列的变化维持与本文所述抗体或免疫球蛋白分子至少75%，至少80%、90%、95%或至少99%序列相同性。变体应该保持参照抗体的所需生物属性。例如，在PDGFR-α抗体情况下，变体应该保持(i)特异结合PDGFR-α的能力和/或(ii)抑制表达PDGFR-α的细胞生长的能力。在某些实施方式中，变体还定性为：作为参照抗体结合相同表位和/或与所述参照抗体就结合抗原竞争。在某些实施方式中，变体包含相对于参照抗体的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代(包含删除或***)。特别地，考虑了保守性氨基酸取代。保守性取代是在有相关侧链的氨基酸家族内发生的取代。遗传编码的氨基酸通常分为几个家族：(1)酸性=天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性=赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性=丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不带电极性=甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、色氨酸、苏氨酸、酪氨酸。更优选家族为:丝氨酸和苏氨酸是脂族羟基家族;天冬酰胺和谷氨酰胺是含酰胺家族;丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸是脂族家族;以及苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸是芳族家族。例如，能合理预期分别用异亮氨酸或缬氨酸取代亮氨酸，用谷氨酸取代天冬氨酸，用丝氨酸取代苏氨酸，或用结构上相关氨基酸类似地取代某氨基酸对结合功能或所得分子的属性不会产生大影响。氨基酸改变是否产生功能肽能易于通过测定所述多肽衍生物的特异活性来测定。本文详细描述试验。抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物能易于通过本领域普通技术制备。优选片段或类似物的氨基和羧基末端出现在功能结构域的边界附近。通过比较核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有的序列数据库能鉴定结构和功能结构域。优选计算机比较方法用于鉴定在已知结构和/或功能的其他蛋白上出现的序列基序或预测蛋白构型结构域。已知鉴定折叠成已知三维结构的蛋白序列的方法。Bowie等，Science253:164(1991)。因此，上述实施例显示了本领域技术人员能识别可用于定义与本文所述抗体一致的结构和功能结构域的序列基序和结构构型。当过量抗体使配体结合受体量减少至少50%、60%或80%或大于约85%(如体外竞争性结合试验所测量)时，抗体通常抑制配体和受体的结合。
本文使用的术语"单克隆抗体"指特异结合相同表位的基本均匀抗体群中的抗体。
在此易指出本文使用“和/或”时应视作具体公开了两种特征或组分的每一种，有或没有另一种。例如，“A和/或B”应视作具体公开了(i)A、(ii)B及(iii)A和B中每一种，就如同各自在本文中单独列出一样。
本文使用的术语"特异结合"指特异结合到抗原的抗体(包括抗体片段)。优选特异结合抗原的抗体(包括抗体片段)不与其他无关抗原发生明显的交叉反应。然而，应理解特异结合来自给定物种特定蛋白的抗体也可以特异结合来自一种或多种其他物种蛋白的直向同源物。由于特异结合抗原，这种交叉物种结合不改变抗体特性。在某些实施方式中，利用实验技术如放射免疫试验(RIA)和酶联免疫吸附实验(ELISA)测定，抗体与某抗原结合的亲和性大幅高于任何交叉反应抗原例如亲和性高100-1000倍时，所述抗体特异性结合于该抗原。参见例如，Paul编，1989，基础免疫学(《Fundamental Immunology》)，第2版，纽约拉文出版社(Raven Press，New York)，第332-336页有关抗体特异性的讨论。
本文所用的术语“联合”指使用一种以上治疗(如一种以上药剂；一种或多种药剂以及一种或多种其他治疗/治疗方式)。使用术语“联合”不限制向对象给予治疗(如药剂和/或其他治疗方式)的顺序。在给予对象第二治疗(如第二种药剂和/或其他治疗方式)之前(如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)、同时或之后(如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)给予第一治疗(如第一种药剂和/或其他治疗方式)。例如"其他治疗方式（modality）"包括但不限于手术、放射治疗、透析、干细胞移植、辅助呼吸（ventilatory support）、饮食、物理治疗等。
本文所用的术语“赋形剂”指在制剂中用作稀释剂、载剂、防腐剂、粘合剂或稳定剂的惰性物质，所述的惰性物质赋予制剂有益物理特性，如增加蛋白质稳定性、提高蛋白质溶解度和降低粘度。赋形剂的例子包括但不限于：蛋白质(如血清白蛋白)、氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸和组氨酸)、表面活性剂(如SDS、聚山梨酯和非离子型表面活性剂)、糖(如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和海藻糖)、多元醇(如甘露糖醇和山梨醇)、脂肪酸和磷脂(如烷基磺酸盐(alkyl sulfonate)和辛酸酯(caprylate))。其它有关赋形剂的信息参见Remington’s PharmaceuticalSciences(《雷明顿药物科学》)(Joseph P.Remington，第18版（增刊），宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(Mack Publishing Co.，Easton，PA))，其通过引用全文纳入本文。
本文所用的术语“多元醇”指与正常糖相比含有许多--OH基团的糖。
"可逆自体缔合趋势"、"可逆自体缔合特性"、"RSA"或"可逆自体缔合"可互换使用，并且涉及蛋白或抗体分子与另一分子或蛋白或抗体分子组短暂自体缔合(即分子间相互作用)的特性。RSA通常是浓度依赖性并且随着蛋白浓度而增加。本文所述RSA也能是温度依赖性，并且可以在低温观察到，而温度升高时利于分解。
"可测量的RSA"或"可测量的RSA趋势"互换使用，指能使用例如HPSEC或AUC检出RSA。通过HPSEC可测量的RSA还能通过其他正交方法测量。
"防止"或"消除"指用本文所述方法(如HPSEC)检测时，不能检出或不能测量RSA。另外，当与没有RSA的制剂(如没有显示RSA的对照样品)比较，RSA基本相同时，也可以应用该术语。
"高分子量形式"或"更高级形式"指单体以外的(如二聚体、三聚体、四聚体、五聚体等)的给定制剂中处于短暂或永久状态(如可逆或非可逆更高级形式)的任一蛋白种类。
"非RSA"指没有RSA，或者用本文所述方法(如HPSEC)检测时，不能检出或不能测量RSA。
"非自体缔合单体"指制剂中作为单体(Y形抗体分子)，而不是例如作为二聚体(两个Y形抗体分子)、三聚体(三个Y形分子)、片段等出现的抗体或功能片段。
"稳定的"和"稳定性"指在一段时间内维持起始水平的制剂纯度。换言之，如果在时间0的给定抗体种类方面，制剂是99%纯度，稳定性是所述制剂基本保留此纯度水平的良好程度和时间长度(如没有形成其他种类，如纯物质的片段化部分或聚集物)。在约2-8°C存储给定时间段时，如果纯度水平没有大幅下降，制剂是稳定的。优选稳定制剂是在存储条件超过至少2年时间段，稳定性没有大幅下降的制剂。类似地，在约2-8°C存储给定时间段时，通过如HPSEC测定的制剂纯度水平来测量稳定性。"基本（substantially）没有下降"指制剂纯度水平在给定时间段内改变每年小于1%、每年小于0.75%、每年小于0.5%或每年小于0.4%。类似地，稳定性能在其他温度评价。
(iii)抗体
本公开提供了降低制剂中抗体和抗体片段的RSA趋势的方法。此外，本公开提供的具体制剂包含特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗PDGFR-α抗体和抗体片段。例如，可在治疗和诊断上应用这种制剂。在某些实施方式中，本公开制剂降低了RSA趋势。
在讨论降低RSA的特定制剂和/或更常用方法前，提供了抗体的简单描述。除非另有说明，抗体或抗体片段的一般讨论应用于任何抗体或抗体片段，例如可以通过增加制剂中蔗糖来降低抗体或抗体片段的RSA。
可通过本领域已知的任何合成抗体方法，具体是通过化学合成或通过重组表达技术生产特异性结合抗原如PDGFR-α的抗体(包括抗体片段)。
抗体结构
基本天然抗体的结构单位已知包含四聚体。各四聚体由两对相同的多肽链构成，各对有一条“轻链”(约25kDa)和一条“重链”(约50-70kDa)。各链的氨基末端部分包含约100-110或更多氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。各链的羧基末端部分定义主要负责效应物功能的恒定区。人轻链分类为κ和λ轻链。重链分类为μ、δ、γ、α、或ε，分别定义抗体同种型IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。通常参见FundamentalImmunology（《基础免疫学》）第7章(Paul,W.编，第2版，纽约拉文出版社(RavenPress，New York)(1989))(通过引用全文纳入本文以用于所有目的)。每个轻/重链对的可变区形成抗体结合位点。全长抗体情况下，单体IgG抗体分子的基本单位经常描述为Y。
因此，完整天然抗体有两个结合位点。两个结合位点不相同的抗体示例包含双功能或双特异性抗体。
天然抗体链都显示了由三个高变区连接的相对保守框架区(FR)的相同通用结构，也称为互补决定区或CDR。来自各对的两条链的CDR通过框架区比对，能结合特定表位。从N末端到C末端，轻和重链都包含所述结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。每个结构域氨基酸的比对与Kabat Sequences of Proteinsof Immunological Interest（《免疫学感兴趣蛋白的序列》）(马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院（National Institutes of Health）(1987和1991))或Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987);Chothia等，Nature342:878-883(1989)的定义一致。
在某些情况下，使用抗体片段有优势。例如，不希望受理论限制，抗体片段的使用可以引起实体瘤可及性改善和/或可允许快速清除。
已开发了产生抗体片段的各种技术。传统上，这些片段通过蛋白酶水解消化完整抗体来获得(参见例如，Morimoto等，J Biochem Biophys.Method.24:107-117(1992)和Brennan等，Science，229:81(1985))。然而，现在这些片段可以通过重组宿主细胞直接产生。Fab、Fv和scFv抗体片段能在细胞如大肠杆菌（E.coli）内表达或从其分泌，因此能容易生成大量的这些片段。抗体片段能从例如抗体噬菌体文库分离。或者，Fab'-SH片段可由大肠杆菌直接回收，并经化学偶联形成F(ab')2片段(Carter等，Bio/Technology，10:163-167(1992))。按照另一种方法，F(ab')2片段可由重组宿主细胞培养物直接分离。体内半衰期增加的Fab和F(ab')2描述于美国专利号5,869,046。在其它实施方式中，所选抗体是单链Fv片段(scFv)。见WO93/16185;美国专利号5,571,894和美国专利号5,587,458。抗体片段还可以是如美国专利号5,641,870所述的“线形抗体”。这种线形抗体片段可以是单特异性或双特异性。
尽管VH或VL结构域可单独用于结合抗原，VH结构域与VL结构域配对以提供抗体抗原-结合位点。VH结构域可与VL结构域配对，从而形成同时包含VH和VL结构域的抗体抗原-结合位点。
人抗体和抗体人源化
在某些实施方式中，所述要求权利的方法和制剂中使用的抗体和抗体片段是人或人源化的。在其他实施方式中，抗体或抗体片段是鼠的。人抗体避免了与具鼠或大鼠可变和/或恒定区的抗体有关的一些问题。这种鼠或大鼠衍生蛋白的出现能造成所述抗体的快速清除或能引起患者产生针对抗体的免疫反应。为了避免使用鼠或大鼠衍生抗体，全人抗体能通过将功能性人抗体基因座引入到啮齿动物、其他哺乳动物或动物来产生，从而所述啮齿动物、其他哺乳动物或动物生成全人抗体。
生成全人抗体的一种方法是通过使用小鼠系，所述小鼠系已经工程改造成包含多至但是少于1000kb大小生殖系配置的人重链基因座和κ轻链基因座片段。见Mendez等，Nature Genetics15:146-156(1997)以及Green和Jakobovits J.Exp.Med.188:483-495(1998)。所述品系可得自安进公司（Amgen,Inc.）(美国加利福尼亚州弗里蒙特)。
然后这种小鼠能生成人免疫球蛋白分子和抗体，并且在生成鼠免疫球蛋白分子和抗体上有缺陷。用于实现相同目标的技术公开于1996年12月3日提交的美国专利申请序列号08/759,620，和1998年6月11日发表的国际专利申请号WO98/24893，和2000年12月21日发表的WO00/76310，其公开内容通过引用纳入本文。也参见Mendez等，Nature Genetics15:146-156(1997)，其公开内容通过引用纳入本文。
所述小鼠系的生成还讨论和描绘在1990年1月12日提交的美国专利申请序列号07/466,008，1990年11月8日提交的07/610,515，1992年7月24日提交的07/919,297，1992年7月30日提交的07/922,649，1993年3月15日提交的08/031,801，1993年8月27日提交的08/112,848，1994年4月28日提交的08/234,145，1995年1月20日提交的08/376,279，1995年4月27日提交的08/430,938，1995年6月5日提交的08/464,584，1995年6月5日提交的08/464,582，1995年6月5日提交的08/463,191，1995年6月5日提交的08/462,837，1995年6月5日提交的08/486,853，1995年6月5日提交的08/486,857，1995年6月5日提交的08/486,859，1995年6月5日提交的08/462,513，1996年10月2日提交的08/724,752，1996年12月3日提交的08/759,620，2001年11月30日提交的美国公开2003/0093820和美国专利号6,162,963、6,150,584、6,114,598、6,075,181和5,939,598以及日本专利号3 068 180 B2、3 068 506 B2和3 068 507 B2。也参见1996年6月12日授予发表的欧洲专利号EP 0463 151 B1，1994年2月3日发表的国际专利申请号WO94/02602，1996年10月31日发表的国际专利申请号WO96/34096，1998年6月11日发表的WO98/24893，2000年12月21日发表的WO00/76310。上述专利、申请和参考文献的公开内容通过引用整体纳入本文。
在替代方法中，包含杰珐姆国际公司（GenPharm International,Inc.）在内的其他方法使用"微基因座（minilocus）"方案。在所述微基因座方案中，外源Ig基因座通过包含来自Ig基因座的片段(个体基因)来模拟。因此一种或多种VH基因，一种或多种DH基因，一种或多种JH基因，μ恒定区和通常第二恒定区(优选γ恒定区)形成构建体以***到动物中。这个方案描述于Surani等的美国专利号5,545,807，和各为Lonberg和Kay的美国专利号5,545,806、5,625,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,877,397、5,874,299和6,255,458，Krimpenfort和Berns的美国专利号591,669和6,023.010，Berns等的美国专利号5,612,205、5,721,367和5,789,215，和Choi和Dunn的美国专利号5,643,763，和杰珐姆国际公司（GenPharmInternational）1990年8月29日提交的美国专利申请序列号07/574,748，1990年8月31日提交的07/575,962，1991年12月17日提交的07/810,279，1992年3月18日提交的07/853,408，1992年6月23日提交的07/904,068，1992年12月16日提交的07/990,860，1993年4月26日提交的08/053,131，1993年7月22日提交的08/096,762，1993年11月18日提交的08/155,301，1993年12月3日提交的08/161,739，1993年12月10日提交的08/165,699，1994年3月9日提交的08/209,741，其公开内容通过引用纳入本文。也参见欧洲专利号0 546 073 B1，国际专利申请号92/03918、WO92/22645、WO92/22647、WO92/22670、WO93/12227、WO94/00569、WO94/25585、WO96/14436、WO97/13852和WO98/24884以及美国专利号5,981,175，其公开内容通过引用全文纳入本文。还参见Taylor等，1992,Chen等，1993,Tuaillon等，1993,Cho等，1993,Lonberg等，(1994),Taylor等，(1994)，和Tuaillon等，(1995),Fishwild等，(1996)，其公开内容通过引用全文纳入本文。
Kirin也显示了从小鼠生成人抗体，其中通过微细胞（microcell）融合引入大片段染色体或整个染色体。参见欧洲专利申请号773 288和843 961,其公开内容通过引用纳入本文。此外，生成了Kirin Tc小鼠与Medarex微基因座(Humab)小鼠杂交结果的KMTM小鼠。这些小鼠有Kirin小鼠的人IgH转染色体（transchromosome）和Genpharm小鼠的κ链转基因(Ishida等，Cloning Stem Cells,(2002)4:91-102)。
人抗体也能由体外方法获得。合适的示例包括但不限于噬菌体展示(CAT、Morphosys、Dyax、Biosite/Medarex、Xoma、Symphogen、Alexion(以前的Proliferon)、Affimed)核糖体展示(CAT)、酵母展示等。
注意到上述技术仅仅是生成人抗体的方法示例。另外，鼠抗体能使用例如标准杂交瘤技术生成。不考虑特定抗体如何初始制成，一旦鉴定了所述抗体的氨基酸序列，该抗体能易于重组生成。例如，鼠、人源化、人等抗体和抗体片段能在细胞内表达和从所述培养细胞中纯化。能用于重组表达的抗体和抗体片段的示例性细胞包括但不限于CHO细胞、COS细胞、酵母细胞和细菌细胞。这在下面更详细描述。
表1提供了在要求权利的组合物和方法情况下使用的示例性PDGFRα抗体的序列。然而，在其他实施方式中，本公开制剂和/或方法使用其他PDGFRα抗体，例如结合的表位与有表1所示任一序列的抗体相同的抗体，或者与有表1所示任一序列的抗体竞争结合抗原的抗体。
易在体外测定抗体之间的竞争，例如采用ELISA和/或用特定的报道分子对一种结合成员作标记(可在一种或多种其它未标记的抗体存在下检出)，从而能鉴定结合相同表位或重叠表位的抗体。本领域普通技术人员不难知晓这些方法，本文更详细描述了这些方法。因此，本公开其他方面提供了包含人抗体抗原结合位点的抗原结合位点，所述人抗体抗原结合位点与抗体分子竞争，例如特别是包含VH和/或VL结构域的抗体分子，母体抗体或任何结合PDGFR-α的本文所公开抗体的CDR如HCDR3或CDR组。
在某些实施方式中，抗体或抗体片段可以用另一部分作标签、标记或融合。例如抗体或抗体片段可以用荧光、金属或放射性部分标记以帮助例如诊断或成像情况下的检出。通过其他示例，抗体或抗体片段可以PEG化以提高体内药代动力学性质。通过其他示例，抗体或抗体片段可以添加全部或部分HAS以提高血清半衰期。通过其他示例，抗体或抗体片段可以包含myc或HA标签以辅助纯化和/或检出。上述仅仅是示例。
抗体的制备
通常，抗体通过本领域已知方法生成，例如杂交瘤技术（小鼠或人）、噬菌体展示等。一旦鉴定了所需抗体(例如有所需功能特性的抗体)，能使用杂交瘤和/或通过在培养细胞中重组表达编码抗体的核苷酸序列来完成持续制备。
应该理解本公开情况下制成的抗体或抗体片段如抗PDGFR-α抗体能在杂交瘤细胞系以外的细胞系中表达。编码特定抗体的序列能用于转化合适的哺乳动物细宿主胞或非哺乳动物宿主细胞。转化可以是将多核苷酸引入宿主细胞的任何已知方法，包含例如把多核苷酸封装入病毒(或病毒载体)和用所述病毒(或载体)转导宿主细胞或通过本领域已知的转染技术，如美国专利号4,399,216、4,912,040、4,740,461和4,959,455(所述专利通过引用纳入本文)所示例的。所使用的转化方法依赖于要转化的宿主。引入异源多核苷酸进入哺乳动物细胞的方法为本领域熟知，并且包含右旋糖苷介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺（polybrene）介导的转染、原生质体融合、电穿孔、多核苷酸封装入脂质体，和直接微注射DNA到细胞核。
可用作表达宿主的哺乳动物细胞系为本领域已知，并且包含很多获自美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection）(ATCC)的永生化细胞系，包括但不限于中华仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(如Hep G2)、人上皮肾293细胞和很多其他细胞系。
一旦生成抗体或抗体片段，其能如本文所述配制和/或其能用于本文所述方法。例如，抗PDGFR-α抗体用于检出患者样品中的PDGFR-α并且因此用作疾病状态例如本文所述肿瘤病症的诊断。在某些实施方式中，以帮助最小化RSA趋势的方式制备所述抗体，并且这种抗体用于诊断方法。在某些实施方式中，当通过HPSEC在约2-8°C和给定相关浓度如约10mg/ml评价时，用于诊断方法的制剂没有可检测的RSA趋势。
通过其他示例，基于其抑制肿瘤生长的能力，抗PDGFR-α抗体在治疗由于PDGFR-α表达造成的症状和病症中有治疗效果。一旦生成抗体或抗体片段，其能如本文所述配制和/或其能用于本文所述方法。在特定实施方式中，本文所述抗体和方法涉及肿瘤病症的治疗，如由于PDGFR-α诱导肿瘤生长造成的肿瘤病症。其他实施方式涉及使用本文所述抗体和方法以***疾病，如癌症，包含肺癌、卵巢癌、***癌、结肠癌、多形性成胶质细胞瘤、黑素瘤和胃肠道间质瘤(GIST)、肾细胞癌、肝细胞癌等。
在某些实施方式中，以帮助最小化RSA趋势的方式制备所述抗体。例如这种制剂可以用于治疗或诊断方法。在某些实施方式中，当用HPSEC在约2-8°C和大于4mg/ml浓度（如至少10mg/ml、至少20mg/ml、或至少50mg/ml或至少100mg/ml）评价时，用于治疗方法的制剂没有可测量的RSA趋势。
PDGFR-α抗体
在某些实施方式中，抗PDGFR-α抗体特异性结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞的生长。在某些实施方式中，所述抗体是例如结合PDGFR-α并且防止配体与PDGFR-α结合的中和抗体。在某些实施方式中，所述抗体是全长抗体，例如全长IgG抗体。在某些实施方式中，所述抗体是IgG2或IgG4抗体。在其他实施方式中，所述抗体是IgG1抗体。在其他实施方式中，所述抗体是特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体片段。在某些实施方式中，任何这些抗体和抗体片段是人抗体。
示例性抗体特异结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长。这种抗体能根据所述功能和/或序列鉴定。这种抗体还能基于一种或多种其他功能特性鉴定，例如KD(如抗原亲和性)。通过其他示例，这种抗体能根据与来自非人物种的PDGFR-α交叉反应来鉴定。因此，在某些实施方式中，示例性抗体或抗体片段特异结合人PDGFR-α并且还特异结合来自一种或多种其他物种如小鼠、大鼠或猕猴的PDGFR-α。在某些实施方式中，特异结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段是高亲和性抗体，例如KD为约10-6–约10-12M或更好(如更低KD指示更高亲和性抗体)的抗体。在其他实施方式中，这种抗体的KD小于约500、400、300、200或100皮摩(pM)并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长。在某些实施方式中，这种抗体抑制肿瘤生长。在一些实施方式中，所述抗体结合PDGFR-α的KD小于约75、60、50、40、30、25、20、10或5pM并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长。在某些实施方式中，这种抗体抑制肿瘤生长。
测量亲和性能通过固相或溶液相技术如针对细胞使用基于FACS亲和性测量技术。亲和性也能通过使用表面等离子体共振试验通过BIACORETM-2000或BIACORETM-3000(新泽西州皮斯卡特维的BIAcore公司)测量。例如，使用25°C下在~10反应单位(RU)有固定抗原CM5芯片的表面等离子体共振试验。简单说，羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(CM5,BIAcore公司)用N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)根据供应商说明书激活。在以5ul/分钟流速注射前，抗原用110mM乙酸钠,pH4.8稀释到5ug/ml(～0.2uM)以实现约10反应单位(RU)的偶联蛋白。抗原注射后，注射IM乙醇胺以阻隔未反应组。对动态测量而言，把两倍系列稀释的Fab(0.78nM-500nM)以约25ul/分钟流速于25°C注射到有0.05%吐温20的PBS(PBST)中。不考虑特定实验参数，表面等离子体共振试验能用于测量KD、Ka、以及k结合和k解离。结合速率(k结合)和解离速率(k解离)使用简单一对一（one-to-one）朗格缪尔结合模型(BIACORETM评价软件3.2版)通过同时拟合所述结合和解离传感图(sensorgram)计算。
美国专利申请11/833,473(本文也称作"'473应用")提供了特异结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长的示例性抗体和抗体片段，所述申请通过引用全文纳入本文。简单说，所述'473申请提供了多种抗体，如该申请所述的特异结合PDGFR-α的特异性人抗体。在某些实施方式中，本公开考虑了特异结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长的任何这种抗PDGFR-α抗体或抗体片段能如此申请所述配制和/或能用于此申请所述的方法和试剂盒。本公开的实施方式包含表1提供序列信息的特异抗PDGFR-α抗体或抗体片段。表1提供了特定人PDGFR-α抗体的重和轻链可变区的序列信息以及各个CDR(可变区序列亚组)的序列信息。
简单说，描述于美国申请序列号11/833,473的抗PDGFR-α抗体通过使用所述申请描述的技术制备，所述申请通过引用全文纳入本文。简单说，小鼠系用感兴趣抗原(如PDGFR-α)免疫，从高免疫小鼠中回收淋巴细胞(如B细胞)，和所回收的淋巴细胞融合骨髓型细胞系以制备永生杂交瘤细胞系。这些杂交瘤细胞系经筛选和选择以鉴定生成感兴趣抗原特异抗体的杂交瘤细胞系。用于实施例所述制剂的特定抗体是最初用这种方法生成的人、IgG2抗体，并且描述于申请序列号11/833,473。表1提供了实施例所述制剂使用的抗体的重和轻链可变区的序列信息以及各个CDR(可变区序列亚组)的序列信息。关于特异结合PDGFR-α的其他人抗体的其他信息能见于美国序列号11/833,473，所述专利通过引用全文纳入本文。
表1.抗PDGFR-α抗体的序列
如上所详述，本发明考虑了包含特异结合PDGFR-α的抗PDGFR-α抗体和抗体片段的制剂，以及使用这种抗体、抗体片段和制剂的方法。在某些实施方式中，用于要求权利的制剂或方法的抗PDGFR-α抗体或抗体片段包含含有SEQ ID NO:1氨基酸序列的重链多肽。在某些实施方式中，用于要求权利的制剂或方法的PDGFR-α抗体或抗体片段包含含有SEQ ID NO:2氨基酸序列的轻链多肽。在某些实施方式中，用于要求权利的制剂或方法的PDGFR-α抗体或抗体片段包含含有SEQ ID NO:1氨基酸序列的重链多肽和含有SEQ ID NO:2氨基酸序列的轻链多肽。在其他实施方式中，用于要求权利的制剂或方法的PDGFR-α抗体或抗体片段包含至少一种表1所示CDR。在其他实施方式中，用于要求权利的制剂或方法的抗PDGFR-α抗体或抗体片段包含至少两种、至少三种、至少四种、或至少五种表1所示CDR。在其他实施方式中，用于要求权利的制剂或方法的抗PDGFR-α抗体或抗体片段包含全部六种表1所示CDR。在其他实施方式中，用于要求权利的制剂或方法的抗PDGFR-α抗体或抗体片段结合的表位与有任何一种或多种此段所示序列特性的抗体或抗体片段相同。通过非限定示例，这种抗体或抗体片段特异结合PDGFR-α并且结合的表位与包含表1所示六种CDR的抗体或抗体片段相同。在其他实施方式中，用于要求权利的制剂或方法的抗PDGFR-α抗体或抗体片段与有任何一种或多种此段所示序列特性的抗体或抗体片段就结合PDGFR-α竞争。通过非限定示例，这种抗体或抗体片段特异结合PDGFR-α并且与包含表1所示六种CDR的抗体或抗体片段就结合PDGFR-α竞争。对所述上述而言，应理解所述抗PDGFR-α抗体和抗体片段特异结合PDGFR-α。在某些实施方式中，抗PDGFR-α抗体或抗体片段特异性结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长。在某些实施方式中，任何上述抗体或抗体片段在有优选RSA特性的含蔗糖制剂中制备，例如相对于不含蔗糖制剂的不可检出RSA;当以相关浓度如至少10mg/ml评价时通过HPSEC在约2-8°C不能检测RSA;和/或在约2-8°C不能检测RSA并且RSA不是温度依赖性(如RSA在2-8°C与23-27°C下基本相似)。
制剂的制备
本公开提供了制备抗体或衍生物、类似物或其片段的制剂以及包含蔗糖的制剂的方法。在某些实施方式中，所述制剂包含特异性结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段。在某些实施方式中，本公开考虑了所述制剂包含了特异结合本文所述或申请11/833,473所公开PDGFR-α的任何PDGFR-α抗体。在某些实施方式中，所述制剂是液体制剂。在某些实施方式中，所述制剂适合冻干。在某些其他实施方式中，所述制剂不适合冻干。在一些实施方式中，本文所述方法对液体制剂特异。在某些实施方式中，本公开药剂防止或降低制剂的RSA或是以相关浓度如大于4mg/ml（如至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少20mg/ml、至少50mg/ml或至少100mg/ml）评价时通过HPSEC不能测量RSA的制剂。
如本文所述制备制剂的方法可以包含:从条件培养基(单一批次或混合批次的培养基)纯化所述抗体(包含其抗体片段)和浓缩所述纯化抗体(包含其抗体片段)部分。
本公开制剂可以包含水性运载体、蔗糖、乙酸钠缓冲液、聚山梨酯80、以及特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段。所述制剂各个成分的浓度和/或比例在下面详述。应该理解本发明考虑了包含下面所示特定浓度成分任一组合的制剂。另外，对可选包含其他赋形剂(下面提供了其浓度)的制剂而言，应该理解本描述考虑了包含任何这些特征的组合物。另外，在某些实施方式中，本公开考虑了所述制剂可包含除了或取代乙酸钠缓冲液的不同乙酸盐缓冲液。
在某些实施方式中，所述抗体或抗体片段在所述制剂中的存在浓度是约1mg/ml-约100mg/ml。在其他实施方式中，所述抗体或抗体片段的存在浓度是约1mg/ml-约70mg/ml。在其他实施方式中，所述抗体或抗体片段的存在浓度是约10mg/ml-约50mg/ml或约20mg/ml-约50mg/ml。在其他实施方式中，所述抗体或抗体片段的存在浓度是约10mg/ml-约50mg/ml。在其他实施方式中，所述抗体或片段的存在浓度是约1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或约75、或约100mg/ml。在某些实施方式中，所述抗体或片段的存在浓度是约20mg/ml或约50mg/ml。
在某些实施方式中，所述制剂可选包含氯化钠。在一个实施方式中，本公开制剂不含除水或合适溶剂以外的其它成分。换言之，在某些实施方式中，所述制剂由水性运载体、蔗糖、乙酸钠缓冲液、聚山梨酯80、以及特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段组成。在另一个实施方式中，水是蒸馏水。在一个特定实施方式中，本公开制剂中所包含免疫特异性结合PDGFR-α的抗体是含有一个或多个上表1所列VH CDR和/或一个或多个VL CDR的抗体(包括其抗体片段)。
在某些实施方式中，本公开制剂提供了基本没有结晶膨胀剂的抗体制剂。在一个特定实施方式中，抗体制剂是均一的。在优选的实施方式中，本公开抗体制剂是无菌的和/或无热原的。
本公开制剂部分包含浓度(重量/体积)范围约4%-约20%的蔗糖。在某些实施方式中，所述制剂包含约4%-约15%蔗糖、约4%-约12%蔗糖、约5%-约12%蔗糖、或约6%-约12%蔗糖。在其他实施方式中，所述制剂包含约5%-约10%蔗糖或约6%-约10%蔗糖。所有上述以w/v提供。在其他实施方式中，所述制剂包含约4%、约5%、约6%、约7%、约8%或约9%(w/v)蔗糖。在其他实施方式中，所述制剂包含约10%(w/v)蔗糖。在其他实施方式中，所述制剂包含约11%、约12%、约13%、约14%或约15%(w/v)蔗糖。在其他实施方式中，所述制剂包含约16%、约17%、约18%或约20%(w/v)蔗糖。
所述制剂的pH通常不应等于特定抗体(包含其抗体片段)的等电点，并且范围可以是约4.0-约6.0、约5.0-约6.0、约5.2-约6.0或约5.5-约6.0。在某些实施方式中，所述制剂的pH是约5.5。在某些实施方式中，所述制剂的pH是约5.0或约5.2或约6.0。
除了蔗糖和特异结合PDGFR-α的抗体或抗体片段，本公开制剂还可以包含约(重量/体积)0.01%、约0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、约0.07%、0.08%、0.09%或约0.1%的聚山梨酯80(PS80)。在某些实施方式中，所述制剂包含约0.05%(w/v)的聚山梨酯80。在某些实施方式中，本公开制剂包含约0.01%-约0.07%(w/v)PS80、约0.01%-约0.05%、约0.02%-约0.06%或约0.03%-约0.05%(重量/体积)PS80。在某些实施方式中，聚山梨酯20可以替代或补充PS80使用。聚山梨酯20可以在相似浓度范围使用。
在某些实施方式中，溶于所述制剂的乙酸钠缓冲液是约25mM-约150mM;约25mM-约100mM;约40mM-约100mM;约50mM-约100mM;或约50-约75mM。在某些实施方式中，溶于所述制剂的乙酸钠缓冲液是约25、30、40、45、50、55、60、70、75、80、90或约100mM。在某些实施方式中，溶于所述制剂的乙酸钠缓冲液是约100、110、125或约150mM。在某些实施方式中，所述制剂包含不同的乙酸盐缓冲液补充或替代乙酸钠缓冲液。例如当使用不同的乙酸盐缓冲液取代乙酸钠时，这种乙酸盐缓冲液能以就示例性乙酸钠缓冲液所述的任何上述浓度使用。通过其他示例，当使用乙酸盐缓冲液的组合时，这种组合可以是任意比率，总浓度是就示例性乙酸钠缓冲液所述的那些。
在某些实施方式中，所述水性运载体是水，例如注射用无菌水。
在某些特定实施方式中，除了抗体，所述制剂包含（或替代地由下列组成）：水性运载体、50mM乙酸钠、10%(w/v)蔗糖、0.05%(w/v)PS80、pH5.5。在另一个实施方式中，除了抗体，所述制剂包含（或替代地由下列组成）：水性运载体、25mM乙酸钠、50mM氯化钠、6%(w/v)蔗糖、0.03%(w/v)PS80、pH5.5。在另一个实施方式中，除了抗体，所述制剂包含（或替代地由下列组成）：水性运载体、50mM乙酸钠、50mM氯化钠、6%(w/v)蔗糖、0.03%(w/v)PS80、pH5.5。在另一个实施方式中，除了抗体，所述制剂包含（或替代地由下列组成）：水性运载体、25mM组氨酸、50mM氯化钠、6%(w/v)蔗糖、0.03%(w/v)PS80、pH5.5。在另一个实施方式中，除了抗体，所述制剂包含（或替代地由下列组成）：水性运载体、25mM乙酸钠、50mM氯化钠、10%(w/v)蔗糖、0.05%(w/v)PS80、pH5.5。在任意特定实施方式中，所述抗体浓度可以是20mg/ml或50mg/ml。
在某些实施方式中，所述制剂包含一种或多种其他成分如赋形剂。在某些实施方式中，所述制剂不包含其他成分如赋形剂。
在某些实施方式中，本公开药剂还可以用组氨酸缓冲。本描述制剂所含的组氨酸浓度范围可以是1mM-100mM、5mM-50mM和10mM-约25mM。在特定实施方式中，本公开制剂所含组氨酸浓度是5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。组氨酸能是L组氨酸、D组氨酸或其混合物形式，但是L组氨酸最优选。组氨酸也能是水合物形式。组氨酸可以药学上可接受盐形式使用，例如盐酸盐(如单盐酸盐和二盐酸盐)、氢溴酸盐、硫酸盐、乙酸盐等。组氨酸的纯度应该为至少98%、优选至少99%，并且最优选至少99.5%。如本文所用，组氨酸环境下的术语“纯度”指本领域所理解的组氨酸化学纯度，如TheMerck Index(《默克索引》)，第13版，O’Neil等编(默克公司(Merck和Co.)，2001)所述。在某些实施方式中，所述制剂不包含组氨酸。
所述制剂还可以包含浓度小于150mM、小于100mM、小于75mM、小于50mM、小于10mM、小于3.0mM或小于2.0mM的甘氨酸。制剂中甘氨酸的量应该不引起显著缓冲以避免抗体在其等电点沉淀。在某些实施方式中，所述制剂不包含甘氨酸。
在其他实施方式中，本公开制剂还可以包含NaCl。制剂所含NaCl浓度范围是10mM、20mM、30mM、40mM、50mM、60mM或70mM。然而，在其他实施方式中，所述制剂特定不包括额外NaCl。
可选地，所述制剂还可以包含其他赋形剂，例如糖(如甘露糖、海藻糖等)、多元醇(如甘露醇、山梨糖醇等)和去污剂。在一个实施方式中，所述其他赋形剂是糖。在一个特定实施方式中，所述糖是海藻糖，其浓度范围为制剂的约1%-约15%、约5%-约12%和约8%-约10%。在另一个实施方式中，所述海藻糖浓度是制剂的1%、2%、3%、4%、5%、6%、8%或10%。在另一实施方式中，赋形剂是多元醇。然而，优选所述制剂不包含甘露醇。在某些实施方式中，所述制剂不包含蔗糖以外的任何其他糖。在某些实施方式中，所述制剂不包含任何多元醇。在某些实施方式中，所述制剂不包含蔗糖以外的任何糖，并且不包含任何多元醇。在任何上述的某些实施方式中，所述制剂不包含PS80以外的任何其他去污剂。
对任何上述而言，应该注意到所述制剂中的抗体或抗体片段保留了所需的生物活性。例如PDGFR-α抗体保留了特异结合PDGFR-α和抑制表达PDGFR-α的细胞生长的能力。
在某些实施方式中，本公开制剂显示了在温度范围38-42°C持续至少15天和一些实施方式中不多于1个月的稳定性。此外或替代地，在某些实施方式中，所述制剂在温度范围20°C-24°C或者23°C-27°C稳定至少6个月和/或温度范围2°C-8°C稳定至少6个月、至少1年、至少1.5年、至少2年、至少2.5年、至少3年或至少4年。此外或替代地，在某些实施方式中，所述制剂在温度-20°C稳定至少2年、至少3年、至少4年或至少5年。例如稳定性可以通过高效大小排阻色谱(HPSEC)评价。在某些实施方式中，稳定性通过随时间维持纯度水平来评价。例如，在某些实施方式中，据HPSEC测定,本公开制剂在2-8°C存储时每年纯度下降小于1%、小于0.8%、小于0.75%、小于0.7%、小于0.6%、小于0.5%或甚至小于0.4%。在一个实施方式中，据监测片段和/或聚集物质出现或消失的HPSEC测定,本公开制剂保存期限大于6个月、大于1年或大于18个月，在2-8°C下超过6个月纯度损失小于0.2%。
在某些实施方式中，储存上述确定时间段后，本公开制剂使聚集和/或片段化水平从较低提高至无法检出，如本文所定义。优选储存上述确定时间段后，经HPSEC测定，不超过5%、不超过4%、不超过3%、不超过2%、不超过1%和最优选不超过0.5%的抗体(包括其抗体片段)形成片段或聚集体（可逆或不可逆）形式。而且，通过不同免疫实验评价，包括例如酶联免疫吸附实验(ELISA)和放射免疫分析测定抗体(包括其抗体片段)免疫特异性结合PDGFR-α的能力，本公开制剂在上述条件下使抗体(包括其抗体片段)的生物学活性于延长储存期间几乎不下降。在储存上述确定时间段后，本公开制剂促进保持大于80%、大于85%、大于90%、大于95%、大于98%、大于99%、大于99.5%、大于99.8%或大于99.9%的储存前该制剂初始生物学活性(如结合PDGFR-α的能力)。在一些实施方式中，与代表储存前抗体的参比抗体相比，本公开制剂在储存上述确定时间段后能促进保持至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，至少98%，至少99%、至少99.5%、至少99.8%和至少99.9%的生物学活性(如结合PDGFR-α的能力)。
在某些实施方式中，所述制剂有优选的本文所述非RSA属性。在某些实施方式中，以相关浓度例如大于4mg/ml如至少10mg/ml评价时，所述制剂中抗体的RSA在2-8°C不能由HPSEC检测。此外或替代地，当在相关浓度用HPSEC和AUC之一或两者测量时，所述制剂中抗体的RSA在2-8°C和23-27°C下基本相似。我们注意到当评价RSA是否降低或消除时，重要的是在相关浓度如10mg/ml或20mg/ml进行HPSEC分析。这是重要的，因为所述RSA趋势测量能由稀释抗体到足够低浓度来假性倾斜。因此，以浓度例如1-4mg/ml测量时HPSEC不能检出RSA的评价可能不是所述抗体的RSA特性的精确指示物，例如在接近所述抗体存储和/或使用的浓度评价时。因此，为了合适评价RSA是否确实消除和在2-8°C下不能由HPSEC检测，在合适浓度例如至少约10mg/ml或约10mg/ml下进行分析是重要的。
在某些实施方式中，所述制剂有优选的非RSA属性，从而在2-8°C评价时，所述制剂中至少95%的抗体以非自体缔合、单体形式出现。在其他实施方式中，在2-8°C评价时，制剂中至少约96%、97%、98%或99%的抗体以非自体缔合、单体形式出现。在其他实施方式中，在2-8°C评价时，制剂中至少约95%、96%、97%、98%或约99%的抗体以非自体缔合、单体形式出现。
本公开制剂可制备成单位剂型。例如每瓶单位剂量可以包含1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml、10ml、15ml或20ml的不同浓度抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段免疫特异性结合范围为约1mg/ml-约100mg/ml、约1mg/ml-约100mg/ml、约5mg/ml-约100mg/ml、约10mg/ml-约100mg/ml、约15mg/ml-约70mg/ml或约20mg/ml-约50mg/ml的PDGFR-α。如果需要，可通过向各药瓶添加无菌稀释剂将这些制剂调整至所需浓度。
可通过包括无菌过滤在内的各种灭菌方法对本发明制剂进行灭菌。在某些实施方式中，例如用预灭菌的0.2微米滤器对所述抗体制剂进行过滤除菌。本公开的无菌制剂可给予对象以防止、治疗或改善疾病或紊乱和/或可以用于诊断方法。
起始制剂中MabA的RSA趋势的初始定性
起始、不含蔗糖的制剂中MabA的RSA趋势在抗体浓度10mg/ml下评价。除了抗体以外，所述起始制剂包含溶于水的50mM乙酸钠、100mM NaCl、0.01%(w/v)PS80,pH5.5。在2-8°C和蛋白浓度10mg/ml下，通过HPSEC检出单体峰前沿的峰肩。在23-27°C平衡MabA约80分钟后或蛋白浓度稀释到小于或等于4mg/ml后，没有观察到所述HPSEC峰肩。进行包括分析超速离心(AUC)在内的定性研究以进一步理解MabA的HPSEC峰肩性质。结果概括如下。
由AUC获得的大小分布结果与峰肩信息是温度依赖性的HPSEC数据一致。4°C下进行的MabA(10mg/ml)的AUC分析显示了在更高S(沉降系数;斯维德贝格)的峰加宽，提示自体缔合。在25°C相同浓度下没有观察到峰加宽（自体缔合）。
所述自体缔合是浓度依赖性并且随着抗体浓度降低而下降。2-8°C和蛋白浓度小于或等于4mg/ml时，通过HPSEC没有观察到所述峰肩。4°C下AUC的尺寸分布分析也显示了低蛋白浓度时产物峰的较小加宽。
所述HPSEC峰肩部分用HPSEC收集、再分析，并且洗脱为没有峰肩的单体。
在10mg/ml(2-8°C)下，有多角度光散射(MALS)分析的HPSEC显示所述峰肩有213kDa表观分子量。此表观分子量与自体缔合一致。
在23-27°C平衡2小时后，MabA(10mg/ml)回到2-8°C，并且数小时内没有通过HPSEC观察到所述峰肩。所述结果指示室温平衡后，在2-8°C下用数小时检出所述峰肩。
已知高分子量形式造成光散射强度相较单体增加。因此，会期望所述HPSEC峰肩出现的MabA解离，(表观分子量213kDa)造成光散射降低。有光散射检出的停流动力学研究显示了4°C下，光散射信号在MabA稀释后有快速下降(从10mg/mg到1mg/ml)。相同稀释后，对照IgG2和IgG1抗体(对照抗体没有显示RSA趋势)没有显示光散射信号的下降。所述结果提示稀释后所述峰肩物质的解离迅速，表观半衰期为14秒。
总之，MabA的正交大小分布分析观察的所述峰肩显示依赖于温度和蛋白浓度，并且在所述抗体的室温平衡后没有观察到。所述动力学研究提示了2-8°C下，稀释后所述峰肩中出现MabA快速分解并缓慢再结合。注意到当评价RSA是否降低或消除时，重要的是在相关浓度如至少10mg/ml如10mg/ml或20mg/ml进行HPSEC分析。这是重要的，因为所述RSA趋势测量能由稀释抗体到足够低浓度来假性倾斜。因此，当在浓度例如1-4mg/ml测量时HPSEC不能检测RSA的评价可能不指示所述抗体在接近该抗体存储和/或使用浓度评价时的良好RSA特性。因此，为了合适评价RSA是否确实消除和2-8°C下不能由HPSEC检测，重要的是在合适浓度例如至少约10mg/ml，如约10mg/ml、约12mg/ml、约15mg/ml或约20mg/ml下进行分析。然而，这不意味着暗示测量不能在任意很多浓度下进行。另外，指定10mg/ml下HPSEC不能检测RSA不表明其在20mg/ml可测量。在某些实施方式中，以浓度约10mg/ml、约20mg/ml和/或约50mg/ml评价时，2-8°C下HPSEC不能检出RSA。
监测抗体生物物理特性的方法
本公开部分涉及防止制剂中抗体RSA趋势的方法。类似地，在一些实施方式中，评价RSA趋势的出现和/或程度的方法用于测定在例如改变抗体制剂后是否防止了RSA。另外，这种技术能用于检测起始制剂中的RSA，例如评价特定制剂中抗体的RSA趋势从而再配制是具有优势的。
测量和比较蛋白的某些生物物理特性的多种分析技术和设备可用并且为本领域熟知(参见例如Cantor,C.R.和Schimmel,P.R.(1980)Biophysical Chemistry:Pt.II::Techniques for the Study of Biological Structure and Function（《生物物理化学:第II部分::研究生物结构和功能的技术》）.WHF公司（W.H.Freeman）)。
在示例性实施方式中，出现RSA能用相对大小(例如平均抗体流体力学半径)、热稳定性、或二级/三级构象的变化来评价。在一些实施方式中，动态光散射(DLS)、分析超速离心(AUC)或高效大小排阻色谱(HPSEC)能用于测定分子的平均半径和/或形状的任何改变。使用这种方法，能评价和比较给定制剂中抗体的RSA出现或程度。
例如当抗体RSA用HPSEC在冷温度条件如5°C评价时，所述抗体分子通常作为单体物质或二聚体物质洗脱，并且各相对量就给定抗体而言是独特的。例如MabA主要洗脱为单体，存在少量二聚体。在约2-8°C单体峰前沿处通过特征性"拖拽"(或峰肩)能检出MabA的RSA(见图1A)。相反，在约2-8°C下防止MabA RSA的制剂中没有此峰肩(见图2A)。因此，RSA显著下降，并且在相关浓度如10mg/ml评价时不能由HPSEC检测到。在一些实施方式中，能使用本文所述方法比较给定制剂中的抗体和没有RSA趋势的对照抗体。
另外，在5°C使用DLS，抗体大小能在抗体重新制成（reformulation）前后测量并且比较以测定重新制成（reformulation）是否防止或降低RSA。例如，能比较所述流体力学半径以及各峰宽度以测定两种制剂之间是否存在统计学显著区别。重新制成后给定温度下峰的统计学显著变窄指示RSA不可检出（比较图1B和2B）。或者，5°C下新制剂中抗体流体力学半径相较前面制剂的统计学显著下降指示新制剂引起抗体的RSA被防止或降低。
另外，全面构型变化能例如分别通过圆二色性法(CD)或二阶导数UV监测分子二级或三级结构变化，或例如通过差式扫描量热法(DSC)的分子热稳定性综合评价来评估。评估抗体稳定性的其他方法包含例如电荷转移吸收、荧光光谱、NMR和HPSEC。参见例如，Wang等，1988，J．of Science&Technology42(增刊)：S4-S26。HPSEC是最常见和最简单的评价蛋白质聚集体形成、蛋白质降解和蛋白质片段化的方法之一。因此，可通过这些方法评估本公开制剂的稳定性。另外，作为疏水性表面暴露增加的结果，抗体构象的变化能直接通过1-苯胺基-8-萘磺酸盐(ANS)结合来测量。ANS是已知优选结合蛋白表面疏水区域的荧光染料。结合造成ANS荧光强度增加，使得能直接评价表面疏水性的任何改变。
本发明制剂的稳定性和/或活性也能通过任何测量抗PDGFR-α或制剂中其抗原结合片段的生物活性的试验来评价。所述抗体的生物活性包括但不限于抗原结合活性。可通过本领域技术人员已知的任何方法测定抗PDGFR-α或抗原结合片段的抗原结合活性，所述方法包括但不限于ELISA、放射免疫测定、Western印迹等。例如，基于ELISA的分析可用于把抗PDGFR-α制剂或其抗原结合片段免疫特异结合PDGFR-α抗原的能力与抗PDGFR-α参照标准作比较。
在评价和/或比较给定抗体的任何生物物理特性中，于给定温度就两种或更多种制剂中抗体能测量或观察到生物物理属性的统计学显著差异时，实现了RSA的防止和降低。例如，使用HPSEC在相关浓度如10mg/ml评价RSA，制剂A(显示RSA)中特征性MabA单体峰能与制剂B（重新制成）中MabA单体峰在5°C下比较。如果MabA显示了制剂B中单体峰的峰肩消失，则实现了RSA的防止或降低。在其他实施方式中，给定制剂中抗体的RSA程度能通过比较本文所述两个不同温度(如5°C与25°C)下的生物物理属性来评价。例如，显示防止或降低RSA的制剂中抗体重新制成后，新制剂中抗体能在2个不同温度通过例如DLS评价。如果DLS显示5°C和25°C下制剂中抗体流体力学半径差异为统计学不显著，则新制剂引起抗体的RSA减少。统计学显著/不显著差异的测定为本领域已知。广泛注意到使用这些方法评价RSA的下降或防止时，重要的是在给出试验的相关浓度下评价。例如，对HPSEC而言，重要的是在相关浓度如10mg/ml评价，因为制剂中抗体稀释到足够低浓度能减少RSA趋势，并且提供了抗体在存储或使用条件相关浓度下于制剂中如何表现的假性评价。在某些实施方式中，在与抗体存储浓度如约20mg/ml相同或接近的浓度进行HPSEC评价。
注意到当评价RSA是否降低或消除时，重要的是在相关浓度如至少10mg/ml如10mg/ml、12mg/ml、15mg/ml、18mg/ml或20mg/ml进行HPSEC分析。这是重要的，因为所述RSA趋势测量能由稀释抗体到足够低浓度来假性倾斜。因此，在浓度例如1-4mg/ml测量时HPSEC不能检出RSA的评价可能不是所述抗体的RSA特性的精确指示物，例如在接近所述抗体存储和/或使用的浓度评价时。因此，为了合适评价RSA是否确实消除和2-8°C不能由HPSEC检测，重要的是在合适浓度例如至少约10mg/ml，如约10mg/ml、约12mg/ml、约15mg/ml、约18mg/ml或约20mg/ml下进行分析。然而，这不意味着暗示测量不能在任意很多浓度下进行。另外，指定10mg/ml下HPSEC不能检测RSA不表明其在20mg/ml下可测量。在某些实施方式中，当以约10mg/ml、约20mg/ml和/或约50mg/ml浓度评价时，2-8°C下HPSEC不能检出RSA。
可通过本领域技术人员熟知的任何方法例如HPSEC，测定本公开抗体制剂的纯度。如下所述评估抗体制剂的无菌性：通过标称孔隙度为0.45μm的无菌滤器过滤抗体制剂，用测试抗体制剂接种无菌大豆-酪蛋白消化物培养基和液体巯基醋酸盐培养基。使用SterisureTM或SteritestTM方法时，各过滤装置无菌填充有约100ml无菌大豆-酪蛋白消化物培养基或液体巯基醋酸盐培养基。使用常规方法时，将经刺激的过滤物(filter)无菌转移到100ml无菌大豆-酪蛋白消化物培养基或液体巯基醋酸盐培养基中。在合适温度下孵育培养基，在14天中观察三次以确认细菌或真菌生长。
(iv)使用方法
(a)诊断使用方法
在某些实施方式中，本公开RSA下降的制剂可以体内和/或体外应用。举例来说，包含特异结合PDGFR-α(如包含表1所示一个或多个CDR的抗体或片段;包含表1所示全部6个CDR的抗体或片段;结合的表位与包含表1所示全部6个CDR的抗体或片段相同的抗体或片段;包含一个或两个表1所示VH和VL结构域的抗体或片段;结合的表位与包含一个或两个表1所示VH和VL结构域的抗体或片段相同的抗体或片段等)的抗PDGFR-α抗体或抗体片段的本公开制剂能体内和/或体外应用，例如检出细胞和组织中PDGFR-α表达或成像表达PDGFR-α的细胞和组织。在某些实施方式中，所述抗体是人抗体并且这种抗体用于在活体人患者中成像PDGFR-α表达。
举例来说，例如通过在抗体和PDGFR-α之间能形成复合物的条件下使要检测样品可选地与对照样品一起接触所述抗体，能完成诊断应用。然后检出复合物形成(如使用ELISA或成像以检出连接抗体的部分)。使用对照样品与受试样品时，两种样品中都检出复合物，样品之间形成复合物的任何统计学显著差异表明受试样品中存在PDGFR-α。
在一个实施方式中，本公开提供了检测疑似包含PDGFR-α样品中出现PDGFR-α的方法，所述方法包含使所述样品暴露于本公开制剂中的抗PDGFR-α抗体，并且测定所述样品中抗体与PDGFR-α的结合，其中样品中抗体与PDGFR-α的结合指示样品中出现PDGFR-α。在一个实施方式中，样品是生物样品。在示例性实施方式中，所述方法用于体外评价癌症或潜在癌症样品例如肿瘤活检是否包含表达或过量表达PDGFR-α的细胞。这种体外诊断可以用于评价所述患者是否似乎特别可能响应抗PDGFR-α抗体的治疗。
在某些实施方式中，本公开制剂中所述抗PDGFR-α抗体可以用于使用体内诊断试验的检出PDGFR-α的过量表达或扩增。在一个实施方式中，所述抗PDGFR-α抗体加入样品中，其中所述抗体结合要检出的PDGFR-α并且用可检测标记作标签(如放射性同位素或荧光标记)并且外部扫描患者以定位标记。
或者或此外，可以在***固定、石蜡包埋的组织上进行FISH试验如INFORMTM(购自亚利桑那州温塔纳公司（Ventana）)或PATHVISIONTM(伊里诺斯州Vysis)以测定样品中PDGFR-α表达或过量表达的程度（若有）。
在任何上述的某些实施方式中，所述诊断试验在人患者或人患者样品上进行，并且所述抗PDGFR-α抗体特异结合人PDGFR-α。注意到，所述抗PDGFR-α抗体还可选特异结合来自一种或多种其他物种的PDGFR-α，因而在人和合适的动物模型中辅助抗体的使用和/或检测。
注意到特异结合PDGFR-α和能根据本文所提供制成的其他示例性抗PDGFR-α抗体提供在美国申请公开2008-0089837中，其通过引用全文纳入本文。本公开考虑了任何这种抗体可以如本文所述制备并且例如在诊断方法中使用。
(b)治疗使用的方法
在某些实施方式中，本公开考虑了本文所述抗体和制剂可以例如治疗性用于人或非人对象的治疗。在某些实施方式中，所述制剂是本公开的非RSA检测的制剂。如本文所述，举例来说，包含特异结合PDGFR-α(如包含表1所示一个或多个CDR的抗体或片段;包含表1所示全部6个CDR的抗体或片段;结合的表位与包含表1所示全部6个CDR的抗体或片段相同的抗体或片段;包含一个或两个表1所示VH和VL结构域的抗体或片段;结合的表位与包含一个或两个表1所示VH和VL结构域的抗体或片段相同的抗体或片段等)的抗PDGFR-α抗体或抗体片段的制剂可以作为治疗人或非人对象方法的一部分给予。在某些实施方式中，用于治疗方法的所述制剂是相对于起始制剂防止或降低了抗体或片段RSA的制剂。在其他实施方式中，所述制剂是以至少约10mg/ml浓度评价时，约2-8°C下不能由HPSEC检测抗体或抗体片段RSA的制剂。
在某些方面，根据本公开包含抗PDGFR-α抗体或抗体片段的制剂可以给予治疗所需对象，例如人对象。能治疗的示例性条件包括但不限于肿瘤病症。其他示例性条件是与PDGFR-α或PDGFR-α信号过量表达或错误调节有关的那些。
在某些方面，本公开提供了在所需对象中***病症的方法，所述方法包含给予所述对象治疗有效量的本文所述包含特异结合PDGFR-α的抗PDGFR-α抗体的制剂。这种制剂中使用的合适抗体描述在本文以及美国专利公开2008-0089837中，其通过引用全文纳入。能治疗任何本文详述的疾病，如任何本文所述的肿瘤疾病。另外，本公开考虑了任何这种制剂能用作对特定病症合适的治疗方案的一部分。举例来说，合适方案除了本文所述抗PDGFR-α抗体以外，还可以包含一种或多种的(i)一种或多种其他药剂如化疗剂、其他抗体、其他小分子抑制剂;(ii)放疗;(iii)外科手术;(iv)饮食方案;(v)骨髓移植;(vi)干细胞移植;(vii)透析;(viii)物理治疗;(ix)皮肤移植;(x)针灸;(xi)氧疗;(xii)胰岛素治疗;(xiii)戒烟;等等。不是药物或生物剂的治疗干预在本文也称为其他治疗方式或其他治疗。下面描述示例性药剂和药剂组合。
用于治疗癌症的特别合适抗体(和片段)以及其制剂特异结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞的生长。示例包含含有表1所示序列的抗体和/或结合相同表位的抗体和/或申请11/833,473中提供的抗体。合适的抗体能基于其对PDGFR-α的亲和性，基于其阻断配体PDGFR-α结合的能力并且基于中和能力来类似地描述。鉴定PDGFR-α抗体活性的合适方法为本领域熟知并且示于美国专利公开2008-0089837，其通过引用全文纳入。
不考虑给予的特定制剂，给予患者有效量。本文使用的术语"有效量"指某一治疗量，所述量足以降低和/或缓解疾病或紊乱的严重性和/或持续时间;防止或延迟所述疾病或紊乱的发展;引起所述疾病或紊乱消退;防止或延迟一种或多种与所述疾病或紊乱相关症状的复发、发展或发作，或者增强或提高另一治疗效果。应理解单个剂量后可能不能观察有效性的测量信号。
“治疗”病症或疾病指治愈以及改善至少一种所述病症或疾病的症状，并且包含给予组合物，相对于没有接受所述组合物的对象，所述组合物在所需对象中减低医学病情症状的频率或延迟其发作。因此，治疗癌症包含例如接受治疗的患者群中相对于未治疗对照群降低可检测癌症生长的数目，和/或在治疗群对比未治疗对照群中，使可检测癌生长出现延迟，例如统计学和/或临床显著量。通过其他示例，治疗癌症包含例如延迟疾病进展、延迟或防止转移、降低转移数目、增加寿命、减轻疼痛(例如降低造成疼痛的肿瘤的大小)。作为另一个示例，治疗疼痛包含在治疗群对比未治疗对照群中，降低对象经历的疼痛感觉程度或替代地延迟疼痛感觉。
在某些实施方式中，在治疗中和/或治疗后监测治疗的进展和有效性。例如，能使用适于特定病症的方法例如血液测试、粪便分析、X射线、CT扫描、MRI、活检、PET扫描等等监测肿瘤病症。另外，能基于症状改善评价例如减轻疼痛(例如患者需要/使用更少的镇痛药)、降低对补充氧气的依赖性、改善食欲、体重增加、减少疲劳、增加运动性等来监测治疗。
本公开部分提供了基于抗体的治疗，所述治疗涉及给予对象（优选人）本文所述的抗体制剂(或"抗体制剂"或"制剂")以治疗、管理或改善与PDGFR-α的异常表达和/或活性有关或以其为表征的疾病或紊乱。例如，所述抗体能抑制表达PDGFR-α的细胞生长，因而抑制肿瘤生长，或所述抗体能与药剂结合并且递送致死毒素到靶标细胞。在特定实施方式中，本公开制剂用于***疾病例如下面详细描述的任何一种或多种疾病。抗PDGFR-α抗体能对治疗纤维变性疾病例如心、肺、肝、肾或皮肤纤维化有治疗作用。抗PDGFR-α抗体也能在治疗同种移植物血管病或狭窄中有治疗作用。另外，所述抗PDGFR-α抗体用于诊断疾病状态，特别是肿瘤、纤维化和免疫***疾病。
示例性可治疗的肿瘤疾病包含例如癌症，包含黑素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胶质瘤、肝细胞（肝）癌、甲状腺肿瘤、胃(胃部)癌、***癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、肾癌、结肠癌、胰腺癌、食道癌、头颈癌、间皮瘤、肉瘤、胆汁(胆管癌)、小肠腺癌、儿童恶性肿瘤、表皮样癌和胃肠道间质瘤(GIST)。在某些实施方式中，所述方法包含治疗任意一种或多种上述癌症，其中所述癌症是疾病的原发部位(如原发肿瘤)。在某些其他实施方式中，所述方法包含治疗任何一种或多种上述癌症，其中上述癌症是转移性的。
在某些实施方式中，所述方法包含治疗成胶质细胞瘤，其中所述成胶质细胞瘤是多形性成胶质细胞瘤。在某些实施方式中，所述方法包含治疗卵巢癌。在某些实施方式中，所述方法包含治疗肝细胞癌。在某些实施方式中，所述方法包含治疗非小细胞肺癌。在某些实施方式中，所述方法包含治疗肾癌，其中所述肾癌是肾细胞癌(RCC)、转移性RCC或透明细胞RCC。本公开考虑了治疗这种疾病，例如原发性肿瘤和/或转移性疾病。
在某些实施方式中，所述方法包含治疗任意一种或多种下列癌症:促纤维组织增生性小圆细胞肿瘤、多形性成胶质细胞瘤、硬纤维瘤、软骨肉瘤、晚期神经内分泌肿瘤、肾细胞癌(包含转移性RCC)、透明细胞RCC、皮肤纤维肉瘤、转移性黑素瘤、莫克细胞癌、巨细胞成纤维细胞瘤(GCF)、HIV相关卡波济氏肉瘤、***、睾丸癌、***癌、胆囊癌和骨癌。本发明考虑了治疗这种疾病，例如原发性肿瘤和/或转移性疾病。
在某些实施方式中，所述方法包含治疗造血或血液恶性肿瘤，例如嗜酸性粒细胞过多综合征(HES);真性红细胞增多(PV);骨髓瘤(包含多发性骨髓瘤);白血病;或淋巴瘤。在某些实施方式中，所述恶性肿瘤是白血病或淋巴瘤例如急性髓细胞性白血病(AML);急性淋巴细胞性白血病(ALL);慢性髓细胞性白血病(CML);慢性淋巴细胞性白血病(CLL);多毛细胞白血病;霍奇金淋巴瘤;或非霍奇金淋巴瘤(如套细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤等)。
本公开提供的方法包含给予含特异结合PDGFR-α的抗PDGFR-α抗体的制剂，例如本文所述制剂和抗体。这种方法包含通过给予有效量的如本文所述制成的所述抗体来治疗任何上述癌症的方法。另外，所述方法包含给予这种制剂作为与一种或多种其他药剂和/或一种或多种其他治疗方式组合的治疗方案的一部分。然而，注意到也考虑了给予PDGFR-α抗体(或片段)是唯一治疗（即单一治疗）的方法。
如上所述，在某些实施方式中，本公开提供了包含抗PDGFR-α抗体的制剂作为与一种或多种其他药剂和/或一种或多种其他治疗方式组合的治疗方案的一部分给予。任何这些其他药剂和/或治疗方式可与抗PDGFR-α抗体联用以治疗任何上述癌症或病症。选择合适的其他药剂和/或治疗方式可以依赖于特定疾病、患者病症、患者年龄、症状等。例如，其他合适治疗方式包括但不限于外科手术、放疗、骨髓移植、干细胞移植、透析、胰岛素治疗、饮食、物理治疗、戒烟、氧疗、辅助呼吸、针灸等。例如，其他合适药剂包括但不限于化疗剂、激素、麻醉剂(例如为了疼痛治疗)、抗炎药、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、镇痛药等。任何一种或多种这些药剂和/或方式能用作治疗方案的一部分。
任何合适的药剂，例如已知有用、或已经使用或目前用于预防、管理、治疗或改善一种或多种与PDGFR-α多肽异常表达和/或活性有关或以其为表征的疾病或紊乱、自体免疫疾病、感染疾病、增殖疾病、或感染相关的症状的那些，能与本公开抗体制剂联用作为治疗任何一种或多种所述病症例如任何一种或多种上面所详述癌症的治疗方法的一部分。
在某些实施方式中，合适的治疗方案包含抗PDGFR-α抗体(如本文所提供制成的抗PDGFR-α抗体或抗体片段)以外的一种或多种药剂，所述药剂包含选自抗有丝***、烷化剂、抗代谢物、抗血管新生、凋亡、生物碱、COX-2和抗生素和其组合的药学性质。例如，在某些实施方式中，所述药物能选自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、喜树碱、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、抗代谢剂、抗生素、酶、鬼臼乙叉甙、铂配合物复合物、长春花生物碱、取代的脲、甲肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、内皮他汀、紫杉醇、喜树碱、奥沙利铂、多柔比星和其类似物，和其组合。
用作治疗癌症病症（例如任何本文所述的癌症病症）的治疗方案一部分的药剂的其他非限定性示例包含喜树碱例如多柔比星(阿霉素)、柔红霉素(道诺霉素)、伊达比星、地托比星、洋红霉素（caminomycin）、表柔比星、依索比星和吗啉代和取代的衍生物、其组合和修饰。用作治疗癌症病症（例如任何本文所述的癌症病症）的治疗方案一部分的其他药剂示例包含顺铂、紫杉醇、卡奇霉素、长春新碱、阿糖胞苷(阿糖胞苷（Ara-C）)、环磷酰胺、氯***、柔红霉素、伊达比星、氟达拉滨、苯丁酸氮芥、干扰素α、羟基脲、替莫唑胺、沙利度胺和博来霉素，和其衍生物、组合和修饰。在某些实施方式中，所述药剂是多柔比星、吗啉代-多柔比星或吗啉代柔红霉素。如本文所述，治疗方案可以包含任何一种或多种其他药剂和/或任何一种或多种其他治疗方式。在某些实施方式中，尽管抗PDGFR-α抗体作为单一治疗给予，所述方案不含其他治疗。
为简要说明，下面提供了能单独使用或相互联合和/或与其他治疗联用作为组合方法一部分的其他药剂列表。
合适的药剂包括:
(i)其他用于内科肿瘤学的抗增殖/抗肿瘤药物和其组合，例如烷化剂(例如，顺铂、奥沙利铂、碳铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、瘤可宁、白消安、替莫唑胺和亚硝基脲)；抗代谢物(例如，吉西他滨和抗叶酸剂，如氟嘧啶，如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如，蒽环类抗生素，如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素和光辉霉素)；抗有丝***剂(例如，长春花碱，如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨及紫杉烷，如紫杉酚和泰索帝和polo激酶（polokinase）抑制剂)；和拓扑异构酶抑制剂(例如，鬼臼乙叉甙，如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康和喜树碱)；
(ii)细胞抑制剂，例如抗***(例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和艾多昔芬(iodoxyfene))、抗雄激素(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙氯地孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(例如，醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)和依西美坦)和5α-还原酶的抑制剂，例如非那雄胺；
(iii)抗侵入剂(例如c-Src激酶家族抑制剂，如4-(6-氯-2,3-亚甲基二氧基苯胺基)-7-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧-基]-5-四氢吡喃-4-基氧基喹唑啉(AZD0530;国际专利申请WO 01/94341)和N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{6-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]-2-甲基嘧啶-4-基氨基}噻唑-5-羧酰胺(达沙替尼,BMS-354825;J.Med.Chem.,2004,47,6658-6661)，和金属蛋白酶抑制剂如马立马司他，尿激酶纤溶酶原激活物受体功能的抑制剂、丝氨酸蛋白酶的抑制剂例如蛋白裂解酶、丝氨酸蛋白酶、脲激酶抑制剂，类肝素酶(heparanase)抑制剂;
(iv)细胞毒性剂例如氟达拉滨、2-氯脱氧腺苷、苯丁酸氮芥或多柔比星和其组合例如氟达拉滨+环磷酰胺、CVP:环磷酰胺+长春新碱+氯***、ACVBP:多柔比星+环磷酰胺+长春地辛+博来霉素+氯***、CHOP:环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+氯***、CNOP:环磷酰胺+米托蒽醌+长春新碱+氯***、m-BACOD:氨甲喋呤+博来霉素+多柔比星+环磷酰胺+长春新碱+***+甲酰四氢叶酸、MACOP-B:氨甲喋呤+多柔比星+环磷酰胺+长春新碱+氯***固定剂量+博来霉素+甲酰四氢叶酸、或ProMACE CytaBOM:氯***+多柔比星+环磷酰胺+依托泊甙+阿糖胞苷+博来霉素+长春新碱+氨甲喋呤+甲酰四氢叶酸;
(v)生长因子功能抑制剂，例如这种抑制剂包含生长因子抗体和生长因子受体抗体(例如抗erbB2抗体曲妥珠单抗[]、抗EGFR抗体帕尼单抗、抗erbB1抗体西妥昔单抗[Erbitux]和任何生长因子或生长因子受体抗体，公开于Stern等Critical reviews in oncology/haematology（肿瘤学/血液学的重要综述）,2005,卷54,第11-29页);这种抑制剂也包含酪氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼,ZD1839),N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双（bis）(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼,OSI-774)和6-丙烯酰氨-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉基丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI1033),erbB2酪氨酸激酶抑制剂例如拉帕替尼泊、肝细胞生长因子家族抑制剂、血小板衍生生长因子家族抑制剂例如伊马替尼、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如Ras/Raf信号转导抑制剂例如法尼基转移酶抑制剂例如索拉非尼(BAY43-9006))、通过MEK和/或AKT激酶的细胞信号转导抑制剂、肝细胞生长因子家族抑制剂、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、IGF受体(***)激酶抑制剂、aurora激酶抑制剂(例如AZD1152、PH739358、VX-680、MLN8054、R763、MP235、MP529、VX-528和AX39459)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂例如CDK2和/或CDK4抑制剂，和存活信号蛋白抑制剂例如Bcl-2，Bcl-XL例如ABT-737;
(vi)抗血管新生剂例如抑制血管内皮生长因子效果的那些[例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗()和VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂例如4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(ZD6474;WO01/32651中的实施例2),4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-喹唑啉(AZD2171;WO00/47212中的实施例240),瓦他拉尼(PTK787;WO98/35985)和SU11248(舒尼替尼;WO01/60814),诸如国际专利申请WO97/22596、WO97/30035、WO97/32856、WO98/13354、WO00/47212和WO01/32651所公开的化合物和由其他机理作用的化合物(例如利诺胺、整合素（integrin）αvβ3功能的抑制剂和血管他丁)]或集落刺激因子1(CSF1)或CSF1受体;
(vii)血管破坏剂，例如考布他汀A4和国际专利申请WO99/02166、WO00/40529、WO00/41669、WO01/92224、WO02/04434和WO02/08213中公开的化合物；
(vii)反义治疗，例如，针对上述靶标的那些，如G-3139(Genasense)、抗bcl2反义；
(ix)基因治疗方法，包括例如，替代异常基因如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法、GDEPT(基因指导的酶前药治疗)方法，例如利用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法和增加患者对化疗或放疗耐受性的方法，例如多药抗性基因治疗；和
(x)免疫治疗方案，包含例如用阿来组单抗(坎帕斯-)，针对CD52的单克隆抗体治疗，或用针对CD22抗体治疗，增加患者肿瘤细胞免疫原性的离体和体内方案，用细胞因子例如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子转染，降低T细胞无能的方法例如用抑制CTLA-4功能的单克隆抗体治疗，使用转染免疫细胞的方案例如细胞因子转染的树突细胞，使用细胞因子转染肿瘤细胞系的方案和使用抗独特型抗体的方案;
(xi)蛋白降解抑制剂例如蛋白酶体抑制剂例如万珂（Velcade）(硼替佐米)。
在示例性实施方式中，本公开抗体制剂(包含抗PDGFR-α抗体的制剂)可与替莫唑胺联合给予作为治疗多形性成胶质细胞瘤方法的一部分。在另一个示例性实施方式中，本公开抗体制剂(包含抗PDGFR-α抗体的制剂)可与拓扑替康联合给予作为治疗卵巢癌方法的一部分。在另一个示例性实施方式中，本公开抗体制剂(包含抗PDGFR-α抗体的制剂)可与索拉非尼联合给予作为治疗肝细胞癌方法的一部分。在另一个示例性实施方式中，本公开抗体制剂(包含抗PDGFR-α抗体的制剂)可与西地尼布（cediranib）、多西他赛和卡铂中的一种或多种联合给予作为治疗非小细胞肺癌方法的一部分。在另一个示例性实施方式中，本公开抗体制剂(包含抗PDGFR-α抗体的制剂)可与卡铂和紫杉醇两者联合或与吉西他滨和顺铂两者联合给予作为治疗非小细胞肺癌方法的一部分。上述特定示例仅是说明性的。在某些实施方式中，本公开考虑了给予本发明制剂作为治疗方案的一部分以及一种或多种上述药剂和/或一种或多种其他治疗方式的方法。任何这种组合治疗能用于例如治疗任何本文所述癌症的方法。
对任何涉及给予药剂和/或治疗的组合的治疗方法而言，这种联合治疗可以通过治疗单个成分的同时、顺序或分开剂量完成。对包含组合治疗或单一治疗的任何上述方法而言，在某些实施方式中，本公开考虑所述抗体是MabA。在某些实施方式中，所述抗体是如本文所提供制成的MabA。
(v)剂量和给药
本发明实施方式包含用于治疗疾病的抗PDGFR-α抗体的无菌药物制剂。这种制剂会抑制细胞生长，因而有效治疗例如PDGFR-α表达异常提高或PDGFR-α表达细胞调节疾病状态的病理病症。抗PDGFR-α抗体优选有足够亲和性以特异结合PDGFR-α，并且优选在人中有足够持续作用时间以给药。延长的持续作用会使给药方案频率更低和更方便。
多种递送***已知并且能用于给予本发明制剂。给予本发明抗体制剂或治疗的方法包括但不限于：胃肠道外给予(如皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内和皮下途径)、硬膜外给予、局部给予和粘膜给予(如鼻内和口服途径)。在一个具体实施方式中，肌肉内、静脉内或皮下给予本发明制剂。在优选实施方式中，本发明制剂静脉内给予，例如通过静脉输注。可通过任何便捷途径，例如输注或推注，通过上皮或粘膜皮肤衬里(如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收给予该制剂，并可与其它生物活性剂一起给药。给药可以是全身给药或局部给药。在一个具体实施方式中，向肿瘤内或在炎症部位给予本发明制剂。注意到当制剂作为组合治疗的一部分给予时，本发明考虑了可以通过相同或不同给予途径给予其他药剂。
在一个具体实施方式中，本公开抗体制剂包含药学上可接受的载体。在一个优选实施方式中，药学上可接受的载体是注射用水，USP，5%葡萄糖水溶液(D5W)或盐水。
在某些实施方式中，所述制剂包含抗体浓度约1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、75mg/ml、80mg/ml、90mg/ml或约100mg/ml。在某些实施方式中，所述制剂包含抗体浓度约20mg/ml或约50mg/ml。
使用的准确剂量和剂量方案会取决于给予途径、要治疗的特定疾病、患者病症的严重性等。有效剂量可从体外或动物模型测试***所得剂量反应曲线外推。
对抗体制剂而言，可以用患者的体重千克数(kg)乘以mg/kg表示的给药剂量，计算给予患者的剂量。然后，通过所需剂量的毫克数除以抗体制剂的浓度确定给予所需的体积(以mL计；也与ml互换)。如果需要，可以通过将所需多个药瓶的内容物收集到注射器中获得最终计算的所需体积，以给予本公开抗体制剂。通过将所需多个药瓶的内容物集合到注射器或袋中获得最终计算的所需体积，以给予药物。在某些实施方式中，每个位点注射最大体积2.0mL的抗体制剂。可用下式计算剂量(以mL计；也与ml互换)：剂量(mL)=[志愿者体重](kg)x抗体制剂的[剂量]mg/kg/20mg/mL。通常，因为对外来多肽的免疫应答，人抗体在人体内的半衰期比其它物种的抗体长。因此，人抗体的给药剂量和给药频率通常可能较低。另外，可通过提高制剂中的抗体(包括其抗体片段)浓度、提高抗体(包括其抗体片段)的亲和性和/或亲合力和/或延长抗体(包括其抗体片段)的半衰期来降低本公开制剂的给药剂量、体积和频率。
在一个具体实施方式中，用患者的体重千克数(kg)乘以mg/kg表示的给药剂量，计算给予患者的剂量。然后，通过所需剂量的毫克数除以制剂中的抗体(包括其抗体片段)浓度(例如20mg/mL、50mg/mL或100mg/mL)确定给予的所需体积(以mL计)。
在某些实施方式中，特别在试图给予人的制剂示例中，所述制剂是无热原制剂，基本没有内毒素和/或相关热原。内毒素包括限定在微生物内并且仅在微生物破坏或死亡时释放的毒素。热原也包括来自细菌和其它微生物外膜的诱导发热的热稳定性物质(糖蛋白)。如果给予人，这些物质均可引起发热、低血压和休克。由于潜在的有害作用，即使少量内毒素也必须从静脉内给予的药物溶液中除去。食品药品管理局("FDA")就静脉内药物应用设置上限为每小时5内毒素单位(EU)/剂量/千克体重(TheUnited States Pharmacopeial Convention,Pharmacopeial Forum(美国药典委员会，药典论坛)26(1):223(2000))。当以数百或数千毫克/千克体重的量给予治疗性蛋白时，即使是痕量的有害和危险内毒素也必须去除，抗体情况也如此。在某些特定实施方式中，该组合物中的内毒素和热原水平小于10EU/mg，或小于5EU/mg，或小于1EU/mg，或小于0.1EU/mg，或小于0.01EU/mg，或小于0.001EU/mg。
如本文所讨论，当特定制剂中抗体的RSA趋势显著时，安全和有效使用所述制剂可能需要室温下长时间培育以帮助消除或降低在存储温度发生的RSA。这种需要的培育期在患者和使用者之间引入变化，产生潜在顺从性问题，损害家中给药的可能性，以及向治疗方案中引入显著时间延迟和给予负担。有消除或降低RSA趋势的制剂（特别是所述抗体的消除或降低RSA趋势随着温度和/或浓度没有显著变化的制剂）的一个优势是消除或降低需求以在室温长期培育所述制剂(例如大于或等于约60-90分钟)。因此，在某些实施方式中，所述如此使用的给予制剂和/或说明书没有指定或需要平衡所述制剂到室温的需求，如冷存储(小于约8°C)后和给予前室温培育所述制剂至少60分钟。在某些其他实施方式中，提供的说明书明确指示了所述制剂能在冷存储后给予，不需要或必需在室温培育制剂60分钟。
在某些实施方式中，本公开制剂显示了在温度范围38-42°C持续至少15天和一些实施方式中不多于1个月的稳定性。此外或替代地，在某些实施方式中，所述制剂在温度范围20°C-24°C或者23°C-27°C稳定至少6个月和/或在温度范围2°C-8°C稳定至少6个月、至少1年、至少1.5年、至少2年、至少2.5年、至少3年或至少4年。此外或替代地，在某些实施方式中，所述制剂在温度-20°C稳定至少2年、至少3年、至少4年或至少5年。例如稳定性可以通过高效大小排阻色谱(HPSEC)评价。在某些实施方式中，稳定性通过随时间维持纯度水平来评价。例如，在某些实施方式中，据HPSEC测定，本描述制剂在2-8°C存储时每年纯度损失小于1%、小于0.8%、小于0.75%、小于0.7%、小于0.6%、小于0.5%或甚至小于0.4%。在一个实施方式中，据监测片段和/或高分子量形式出现或消失的HPSEC测定，本公开制剂保存期限大于6个月、大于1年或大于18个月，在2-8°C下超过6个月纯度损失小于0.2%。
(vi)制品生产
本公开提供包括一个或多个装有本说明书制剂的容器的药物包装或药盒。相似地，本公开提供了适于实验室和/或诊断应用的药物包装或药盒。本公开考虑了本文所述任意制剂例如包含有消除或降低RSA趋势的抗PDGFR-α抗体的制剂，能包装并且作为药盒的一部分出售。这种示例性药盒是药物试剂盒。
在一个具体实施方式中，本公开制剂包含与另一部分重组融合或化学偶联的抗体(包括其抗体片段)，所述另一部分包括但不限于：异源蛋白、异源多肽、异源肽、大分子、小分子、标记序列、诊断或检测药剂、治疗部分、药物部分、放射性金属离子、第二抗体和固体支持物。本公开也提供了某种药物包装或药盒，所述药物包装或药盒在一个或多个第一容器中包含本文所述制剂并在一个或多个第二容器中包含一种或多种其他预防或治疗药剂，用于预防、管理或治疗与PDGFR-α异常表达和/或活性相关或以其为表征的疾病或紊乱。
在示例性实施方式中，本发明制剂作为包含50mM乙酸钠、10%(w/v)蔗糖和0.05%(w/v)PS80的无菌制剂在单个剂量瓶制成。在某些实施方式中，各个1.0mL溶液包含20mg或50mg抗PDGFR-α抗体(包含其抗体片段)。在生产过程中，制剂缓冲液的pH调节为5.5。
任何本发明制剂可以在靶标体积为例如10.5mL的20mm、10R SchottI型硼硅酸盐透明玻璃瓶USP/EP(西部制药服务公司(West Pharmaceutical Serices))中提供。所述瓶用20mm West4432/50氯丁基特氟隆（Teflon）面塞子无菌塞住。所述瓶用West铝(TruEdge)翻开式顶封（overseal）封口。
所述容器任选附有关于药品或生物制品的生产、使用或销售的政府机构颁发的告知书，该告知书反映出生产、使用或销售管理机构批准其用于人体。
在销售给实验室和/或诊断应用的药盒示例中，所述药盒可选包含指示合适应用、安全考虑和任何限定应用的通知书。另外，在销售给实验室和/或诊断应用的药盒示例中，所述药盒可选包含一种或多种用于特定诊断或实验室应用的其他药剂例如阳性或阴性对照药剂。
本公开提供了可用于上述方法的药盒。在一个实施方式中，药盒包含一个或多个容器中的本文所述制剂。在另一个实施方式中，药盒包含一个或多个容器中的本文所述制剂，并在一个或多个其他容器中包含一种或多种其他预防或治疗药剂，用于预防、管理或治疗与PDGFR-α异常表达和/或活性相关或以其为表征的疾病或紊乱。在特定实施方式中，所述制剂中包含的抗体(包含其抗体片段)包含上表1所列一种或多种VHCDR和/或一种或多种VL CDR。优选地，该药盒还包括预防、治疗、控制或改善疾病(例如，单独使用本描述制剂或与另一预防剂或治疗剂联用)，以及副作用和给药方法剂量信息的说明书。
本公开也涵盖最终包装和标记药品。制品包括在合适器皿或容器如密封的玻璃药品或其它容器中的合适单位剂型。在适于胃肠外给予剂型的示例中，所述活性成分如上述免疫特异结合PDGFR-α的抗体是无菌的并且适合作为微粒游离溶液给予。在某些实施方式中，所述制剂适于静脉内给予，例如静脉内输注。
在优选实施方式中，单位剂型适合静脉内、肌肉内、鼻内、口服、局部或皮下递送。因此，本公开包括适合各递送途径的溶液，优选无菌溶液。
如同任何药品那样，设计包装材料和容器以保护该产品在储存和运输过程中的稳定性。另外，本公开产品包括指导医生、技术人员或患者如何适当地预防或治疗所研究疾病或紊乱的使用说明书或其它说明材料。换言之，该制品包括表明或提示给药方案的说明材料，包括但不限于：实际剂量、监测步骤等和其它监测信息。
特定地，本发明提供了制品，包含包装材料如盒、瓶、管、药瓶（vial）、容器、喷雾器、吹药器、静脉(i.v.)注射袋、包封等;在所述包装材料中包含的至少一个单位药剂剂型，其中所述药剂包含免疫结特异合PDGFR-α的抗体的制剂，和其中所述包装材料包含的说明方式指示通过如本文所述给予特定剂量和使用特定剂量方案，所述抗体能用于预防、管理、治疗和/或改善一种或多种与PDGFR-α异常表达和/或活性相关疾病有关的症状。
本公开也提供了制品，包含包装材料如盒、瓶、管、药瓶（vial）、容器、喷雾器、吹药器、静脉(i.v.)注射待、包封等;在所述包装材料中包含的至少一个单位剂型的各药剂，其中一种药剂包含免疫特异结合PDGFR-α抗体的制剂和另一种药剂包含免疫特异结合PDGFR-α的抗体以外的预防或治疗剂，和其中所述包装材料包含的说明方式指示通过如本文所述给予本文特定剂量和使用特定剂量方案，所述药剂能用于治疗、预防和/或改善一种或多种与PDGFR-α异常表达和/或活性相关疾病有关的症状或其一种或多种症状。
在某些实施方式中，特别在包含意在给予人的制剂的药盒示例中，所述制剂是无热原制剂，基本没有内毒素和/或相关热原。内毒素包括限定在微生物内并且仅在微生物破坏或死亡时释放的毒素。热原也包括来自细菌和其它微生物外膜的诱导发热的热稳定性物质(糖蛋白)。如果给予人，这些物质均可引起发热、低血压和休克。由于潜在的有害作用，即使少量内毒素也必须从静脉内给予的药物溶液中除去。食品药品管理局("FDA")就静脉内药物应用设置上限为每小时5内毒素单位(EU)/剂量/千克体重(The United States Pharmacopeial Convention,Pharmacopeial Forum(美国药典委员会，药典论坛)26(1):223(2000))。当以数百或数千毫克/千克体重的量给予治疗性蛋白时，即使是痕量的有害和危险内毒素也必须去除，抗体情况也如此。在某些特定实施方式中，该组合物中的内毒素和热原水平小于10EU/mg，或小于5EU/mg，或小于1EU/mg，或小于0.1EU/mg，或小于0.01EU/mg，或小于0.001EU/mg。
在某些实施方式中，所述药盒包含抗体或抗体片段RSA趋势消除或降低的制剂，例如在浓度10mg/mL评价时2-8°C下HPSEC不能检测RSA。如本文所讨论，当特定制剂中抗体的RSA趋势显著时，安全和有效使用所述制剂可能需要室温长时间培育以帮助消除在存储温度发生的RSA。这种需要的培育期在患者和使用者之间引入变化、产生潜在顺从性问题，损害家中给药的可能性，以及向治疗方案中引入显著时间延迟和给予负担。有降低或消除RSA趋势的制剂（特别是所述抗体的降低或消除RSA趋势随着温度没有显著变化的制剂）的一个优势是消除在室温长期培育所述制剂(例如大于或等于约60-90分钟)的需求。因此，在某些实施方式中，上述药盒提供的说明书没有详细说明或要求必需在冷藏(约2-8°C)后和给予前，室温下孵育所述制剂至少60分钟。在某些其他实施方式中，任何上述药盒提供的说明书明确指示了所述制剂能在冷藏后给予，不需要或不必需在室温孵育制剂60分钟。
实施例
给出下面示例以描述本发明的实施。其并不意在限定或定义本发明的全部范围。
实施例1：起始制剂中MabA的RSA趋势–MabA的RSA的起始鉴定依赖于温度和/或浓度
在起始、不含蔗糖的制剂中MabA的RSA趋势在抗体浓度10mg/ml下评价。除了抗体以外，所述起始制剂包含溶于的水50mM乙酸钠、100mM NaCl、0.01%(w/v)PS80、pH5.5。在2-8°C和蛋白浓度10mg/ml下，HPSEC检测到单体峰前沿的峰肩。在23-27℃下平衡MabA约80分钟后或蛋白浓度稀释到约4mg/ml后，没有观察到所述HPSEC峰肩。进行包含分析超速离心(AUC)在内的定性研究以进一步理解MabA的HPSEC峰肩性质。结果概括如下。
AUC获得的大小分布结果与显示峰肩信息是温度依赖性的HPSEC数据一致。4℃下进行的MabA(10mg/ml)的AUC分析显示了在更高S(沉降系数;斯维德贝格)的峰加宽，提示自体缔合。在25℃相同浓度下没有观察到峰加宽（自体缔合）。
所述自体缔合是浓度依赖性并且随着抗体浓度降低而下降。2-8°C和蛋白浓度小于或等于4mg/ml时，通过HPSEC没有观察到所述峰肩。4°C下AUC的尺寸分布分析也显示了低蛋白浓度时产物峰的较小加宽。
所述HPSEC峰肩部分用HPSEC收集、再分析，并且洗脱为没有峰肩的单体。
在10mg/ml(2-8°C)下，有多角度光散射(MALS)分析的HPSEC显示了所述峰肩有213kDa表观分子量。此表观分子量与自体缔合一致。
在23-27°C平衡2小时后，MabA(10mg/ml)回到2-8°C，并且数小时内没有通过HPSEC观察到所述峰肩。所述结果指示了室温平衡后，2-8°C下用数小时检出所述峰肩。
已知高分子量形式造成光散射强度相较单体增加。因此，会期望所述HPSEC峰肩出现的MabA分解，(表观分子量213kDa)造成光散射降低。有光散射检测的停流动力学研究显示了4°C下，光散射信号在MabA稀释后有快速下降(从10mg/mg到1mg/ml)。相同稀释后，对照IgG2和IgG1抗体(对照抗体没有显示RSA趋势)没有显示光散射信号的下降。所述结果提示稀释后所述峰肩物质的分解迅速，表观半衰期为14秒。
总之，MabA的正交大小分布分析观察到的所述峰肩显示依赖于温度和蛋白浓度，并且在所述抗体的室温平衡后没有观察到。所述动力学研究提示了2-8°C下，稀释后所述峰肩中出现MabA快速分解并缓慢再结合。
实施例2：如HPSEC、AUC和DLS所测定的含蔗糖制剂中MabARSA趋势消除。
低温贮藏条件下MabA在包含乙酸盐/盐制剂在内的多种制剂中显示RSA趋势
在起始、不含蔗糖、乙酸盐/盐制剂(10mg/ml MabA、50mM乙酸钠、100mMNaCl、0.01%(w/v)PS80,pH5.5)中MabA的RSA趋势通过标准存储温度(约2-8°C)和室温(约23-27°C)下高效大小排阻色谱(HPSEC)评价。如图1A所示，MabA的RSA趋势在约2-8°C显著，如单体峰的前沿峰肩所示。这种前沿峰肩在25°C下没有检出，指示MabA在2-8°C相比23-27°C表现不同。更特定地，MabA显示了2-8°C下HPSEC可测量的显著RSA趋势。
关于非蔗糖制剂中此抗体的RSA特性的所述结果还用两个温度下分析超速离心(AUC)来确证。如图1B所示，5°C下此制剂中MabA沉淀的沉积系数分布范围比25°C下MabA宽许多，提示了两个不同条件下分子的显著不同大小分布。特别地，这个结果指示了5°C下所述不含蔗糖制剂中抗体分子的RSA趋势更大。
MabA RSA趋势在含蔗糖制剂中消除。
20mg/ml或50mg/ml的MabA在50mM乙酸钠、10%(w/v)蔗糖、0.05%(w/v)PS80，pH5.5中重新制成，并且在2-8°C下用HPSEC评价。图2A指示了单体峰前沿峰肩的明确消失，这在2-8°C下缺少蔗糖的制剂中显著(相比于图1A)。这与含蔗糖制剂中MabA的RSA趋势降低一致，尽管在含蔗糖制剂中出现更高浓度的抗体。另外，RSA降低也在显著更高的抗体浓度中观察到(图1A中50mg/ml对比10mg/ml)。因此，含蔗糖制剂中MabA的RSA不依赖于抗体浓度，并且相对于起始制剂下降。
另外，在5°C和25°C通过分析超速离心来评价所述抗体。与不含蔗糖的乙酸盐/盐制剂中就MabA观察的相反，含蔗糖制剂中的MabA在5°C和25°C下表现相似–结果也与含蔗糖制剂中RSA趋势消除一致。如图2B所示，两个温度下MabA有相似的沉积系数分布，指示了含蔗糖制剂中MabA的RSA趋势不依赖于温度。
实施例3：MabA的RSA由疏水相互作用驱动并且与流体力学半径相关。
通过疏水性表面的暴露和确保疏水分子间相互作用部分增强了RSA。荧光染料(1-苯胺基-8-萘磺酸盐;“ANS”)和MabA之间的相互作用评价显示这点。ANS优选结合蛋白表面的疏水性区域，造成ANS荧光强度增加。因此，ANS荧光强度的下降指示可用疏水性表面减少，并且与流体力学半径的下降有关。
如图3所示，当在蔗糖含量增加的制剂中评价时，MabA上ANS与疏水性表面之间的相互作用减少。这与如下结论一致：当在蔗糖浓度增加的制剂中存在时，如5°C下所评价(如在RSA趋势（若有）是重要问题的温度下评价)，抗体变得更加紧凑。
这个观察还支持，抗体的总体大小在乙酸盐/盐或含蔗糖制剂中评价。特别地，能测量蛋白的流体力学半径用于指示分子中与表面疏水性变化一致的全面构型变化。为了检测制剂和温度对MabA的流体力学半径的影响，所述抗体通过多个温度下乙酸盐/盐或含蔗糖制剂中动态光散射(DLS)来评价。
如DLS所测定，所述乙酸盐/盐制剂,pH7.2中MabA的流体力学半径随着温度增加而下降(图4A)。这与高RSA趋势的预期行为一致(如更低温度下显著的RSA在更高温度培育后下降)。相反，所述流体力学半径在含蔗糖制剂中不受温度(5°C或25°C)影响(图4B)，提示了所述制剂中MabA的RSA趋势消除，因为RSA趋势不能检出到并且在5°C和25°C可比较。注意到制剂中抗体RSA趋势的消除可以通过评价RSA在给定浓度如10mg/ml是否能由HPSEC于2-8°C检测来评估。
实施例4：含蔗糖制剂对MabA的稳定效果
如上所详述，在50mM乙酸钠、10%(w/v)蔗糖、0.05%(w/v)聚山梨酯80，pH5.5的含蔗糖制剂中提供的MabA有更好的RSA属性，例如RSA趋势相对于不含蔗糖制剂中的抗体消除。进行下列实验以评价提高的含蔗糖制剂中抗体的热稳定性。
MabA的热转变通过含蔗糖制剂中差式扫描量热法来评价，并且与50mM乙酸钠、100mM NaCl、0.01%(w/v)聚山梨酯80，pH5.5的不含蔗糖制剂作比较以监测构型稳定性作为温度函数。用Origin VP-DSC软件进行样品分析以测定所述分子的Fc和Fab区域上的热转变(Tm)。如图5所示，含蔗糖制剂中提供的MabA显示显著更高的Tm，提示所述含蔗糖制剂赋予所述抗体稳定性效果。
为了测定蔗糖对溶液中蛋白-蛋白（或抗体-抗体）和蛋白-赋形剂相互作用的影响，检测所述第二维里系数。如图6所示，已经显示消除RSA趋势的制剂条件(如含12%蔗糖的乙酸钠缓冲液,pH5.5)生成净排斥第二维里系数，此观察与短程分子间相互作用的下降一致，提示这种制剂中抗体RSA趋势的消除。蛋白蛋白净排斥第二维里系数似乎随蔗糖含量增加而增加。相反，蔗糖缺失生成了有净排斥电荷的蛋白蛋白相互作用，与短程分子间相互作用的增加一致，提示了缺乏蔗糖的制剂中MabA自体缔合的趋势增加(即更大RSA)。
方法
例如使用下面简述的方法进行上述实验。
高效大小排阻色谱(HPSEC)
HP-SEC样品在没有室温平衡情况下分析，并且在稀释(10mg/ml)和靶标药物产物(20mg/ml)浓度下运行。所述稀释用冷制剂缓冲液制备(2-8°C)并且载入HPLC的自动取样器。分析前，所述样品在自动取样器（维持在5°C）中孵育约1小时。冷却样品注射入TSK胶（gel）G3000SWXL柱(7.8mm×30cm)。用包含0.1M硫酸钠和0.05%叠氮化钠的0.1M磷酸氢二钠,pH6.8，以流速1.0ml/分钟等度洗脱样品。用280nm处的UV吸光度检出洗脱的蛋白。所述结果报道为产物单体峰相较所有其他峰的面积百分比，排除了在约12分钟观察到的缓冲液相关峰。将早于单体峰洗脱的峰记录为聚集体百分数。单体峰后洗脱的峰记录为片段/其他百分数。
动态光散射(DLS)
通过动态光散射(DLS)使用Zetasizer Nano ZS(宾夕法尼亚州马文的马文仪器公司（Malvern Instruments,Malvern,PA）)监测所述蛋白大小分布和分子大小。这种仪器包含有能在范围0.6nm-6μm内测量蛋白大小的非侵入性后向散射光学。DLS测量散射光强度中由于蛋白分子布朗运动引起的时间依赖性波动。这些强度波动的分析能测定颗粒的扩散系数，使用斯托克斯-爱因斯坦关系数学转化成当量球的平均表观流体动力学直径。所述扩散系数从时间相关函数计算。为了理解蛋白的可逆自体缔合，所述光电流的时间依赖性自相关函数每隔10秒获取，每轮大于10次采集。所述样品溶液使用633nm激光照射，并且散射光强度在173度角测量。取样前，室温下分析的样品在实验室工作台上培育约90分钟。冷温控制的样品从冷藏条件下移出，置于冷金属块并且转移到取样槽。所述仪器设定为5°C温度范围并且用氮气吹扫控制浓缩。各个样品分析前，输入校正因子作为参数例如粘度、折射率和吸光度。DLS测量能提供能用于监测潜在自体缔合行为的流体动力学直径和其高斯分布的精确估计。
分析超速离心(AUC)
由分析生物活性系（Analytical Biochemistry Department）使用贝克曼(Beckman)Optima XL-I分析超速离心机进行AUC实验。所述沉降速度实验样品用合适的制剂缓冲液稀释到0.5mg/ml，并且所得蛋白溶液载入样品槽中的12mm离心孔。另外，参照缓冲液载入各个孔的参照槽中。将加载的小室置于AN-50Ti分析转头上，并平衡至25°C。当测量280nm光密度时，在42,000rpm转子速度下扫描所述样品。所述样品在42,000rpm离心直到完成200扫描。进行三次重复。所述数据用有SEDFIT(11.3版本)程序的标准AUC分析所用c(s)方法分析(Dam和Schuck,2004)。在这个方案中，原始数据扫描直接拟合以获得沉积系数分布。
对自体缔合单体特性而言，在多个蛋白浓度以及25°C和4°C温度下进行AUC实验。使用瑞利（Rayleigh）干涉光学在3mm路径长度离心室中检测大于2.0mg/ml浓度。样品透析最小12小时，并且透析液用于稀释和载入参照扇区（sector）。当4°C下进行实验时，所有透析、样品稀释、单元（cell）加载和转头加载在冷室(2-8°C)中进行，并且预冷离心，从而所述样品在整个实验中保持2-8°C。所述样品在42,000RPM离心，而折光增强对比径向位置由瑞利（Rayleigh）干涉测量***来收集。持续收集扫描直到所述样品沉淀到孔的底部。根据所述情况，收集的扫描数目是500–999。自体缔合单体的AUC数据使用g(s)方法而不是上述c(s)方法分析。所述g(s)方法适于c(s)方法不能完成的相互作用自体缔合物质的分析。然而，这个方法产生相对宽的重叠峰。所述AUC原始数据通过SEDANAL程序转化成表观沉积系数分布[g(s)图](Stafford和Sherwood)。
荧光测量
所述荧光染料ANS与蛋白的相互作用用光子技术国际公司（Photon TechnologyInternational(PTI)）的Quanta Master荧光计分析。已知ANS(1-苯胺基-8-萘磺酸盐)荧光染料特异结合蛋白表面的疏水性区域。结合造成了ANS荧光强度增加。相似条件下ANS荧光强度的比较能用于检出可能超出其他方法检测极限的蛋白中极小构象变化。
PTI装备有连接循环水浴的恒温控制固定器Turret400，并且荧光测量在10mm路径长度的石英光室中进行。激发波长设定在400nm并且发射记录在范围400-600nm中。以速率每秒1nm记录每0.5nm。发射/激发狭缝宽度分别设定在4和3nm。
溶于HPLC水的蛋白和ANS(英杰公司)储液在微量离心管中混合，并且在暗处室温和冷藏温度下孵育过夜。用于这个实验的蛋白浓度是0.5mg/ml，和所需的ANS量基于100摩尔ANS与1摩尔蛋白的过量摩尔比。对于低温(5°C)分析，所述制备样品置于冷金属块，并且然后转移到石英比色皿中，并置于PTI光谱仪的温度控制样品隔室中。在样品隔室中5°C再孵育约5分钟后记录荧光谱。对于室温(25°C)分析，所述样品转移到石英比色皿中，并且在检测前于样品隔室(25°C)中以环境温度孵育5分钟。ANS的荧光测量能提供表面疏水性的评价。
差式扫描量热法
使用差式扫描量热法(DSC)监测作为温度函数的构象稳定性。用微量热法（Micro Calorimetry）生成的VP-毛细管DSC进行DSC实验。运行（run）参数包含60度（deg）/小时速率下的扫描范围20°C-120°C。在响应缓冲液中制备样品成约0.5mg/ml，并且样品孔填充至400μl填装体积。运行（run）和洗涤步骤中分别包含其他缓冲液和水的样品作为基线。用Origin VP-DSC软件进行样品分析以测定所述分子的Fc和Fab区域上的热转化(Tm)。在更高热转化中，更多蛋白保持天然(折叠状态)，其翻译成提高的热稳定性状态。
参考文献的引用
本文提到的所有发表物和专利在此通过引用全文纳入，就好像各个单独发表物或专利特定和单独地表明是通过引用纳入。
当讨论本发明的特定实施方式时，上面说明书是说明性而不是限制性的。本领域的技术人员阅读了本说明书和下面权利要求后将清楚了解本发明的许多变化。本发明的全部范围应该通过参考所附权利要求书连同其等同物的全部范围，以及说明书连同所述改变（variation）来确定。
对本文参考文献的引用或讨论不应解释为承认这些参考文献是本发明的在先技术。

Claims (51)

1.一种制剂，所述制剂包含：
a)水性运载体；
b)1mg/ml-100mg/ml特异结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段，其中，根据分析超速离心(AUC)所测定，所述制剂中的所述抗体或抗体片段在2-8℃和23-27℃有相似的可逆自体缔合(RSA)特性；
c)4％-20％(重量/体积)蔗糖；
d)0.01％-0.1％(重量/体积)聚山梨酯80；和
e)乙酸钠缓冲液，
其中，所述制剂的pH为pH 4.0–pH 6.0；
且其中，所述抗体或抗体片段包含：
含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2；和
含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
2.一种制剂，所述制剂由下列组成：
a)水性运载体；
b)1mg/ml-100mg/ml特异结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段，其中，根据分析超速离心(AUC)所测定，所述制剂中的所述抗体或抗体片段在2-8℃和23-27℃有相似的可逆自体缔合(RSA)特性；
c)4％-20％(重量/体积)蔗糖；
d)0.01％-0.1％(重量/体积)聚山梨酯80；和
e)乙酸钠缓冲液，
其中，所述制剂的pH是pH 4.0–pH 6.0；
且其中，所述抗体或抗体片段包含：
含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2；和
含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
3.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，(b)包含全长IgG单克隆抗体。
4.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段的存在浓度是20mg/ml-50mg/ml。
5.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段的存在浓度是20mg/ml。
6.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段的存在浓度是50mg/ml。
7.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链多肽。
8.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包括含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的轻链多肽。
9.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段与重链多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且轻链多肽含SEQ ID NO:2氨基酸序列的抗体结合相同的表位。
10.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含：
氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的VH CDR1；
氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的VH CDR2；
氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的VH CDR3；
氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的VL CDR1；
氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的VL CDR2；和
氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的VL CDR3。
11.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含6％(w/v)蔗糖。
12.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含10％(w/v)蔗糖。
13.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含0.05％(w/v)聚山梨酯80。
14.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含50mM乙酸钠缓冲液。
15.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂的pH是5.5。
16.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂中所述抗体或抗体片段的RSA不能由高效大小排阻色谱(HPSEC)和动态光散射(DLS)检出。
17.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂中大于95％的所述抗体或抗体片段是单体形式，并且在10mg/ml时，2-8℃下，HPSEC不能检出所述抗体或抗体片段的RSA。
18.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，据动态光散射(DLS)测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在5℃的流体力学半径与25℃的没有显著区别。
19.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂适合静脉内给予。
20.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述水性运载体是水。
21.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂是无热原的。
22.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂还包含防腐剂以延长保存期限。
23.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂在2-8℃稳定至少2年。
24.如权利要求23所述的制剂，其特征在于，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂的纯度在至少两年内每年下降小于0.5％。
25.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂没有组氨酸。
26.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂没有任何其他表面活性剂。
27.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂没有任何其他糖或多元醇。
28.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂没有任何其他盐。
29.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述制剂适合冻干。
30.一种制剂，所述制剂基本由下列组成：
a)无菌水；
b)20mg/ml特异结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段，其中，据AUC测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在2-8℃的不可逆自体缔合特性与23-27℃的相似；
c)10％(重量/体积)蔗糖；
d)0.05％(重量/体积)聚山梨酯80；和
e)50mM乙酸钠缓冲液，
其中，所述制剂的pH是pH 5.5；
且其中，所述抗体或抗体片段包含：
含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2；和
含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
31.一种制剂，所述制剂基本由下列组成：
a)无菌水；
b)50mg/ml特异结合PDGFR-α并且抑制表达PDGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段，其中，据AUC测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在2-8℃的不可逆自体缔合特性与23-27℃的相似；
c)10％(重量/体积)蔗糖；
d)0.05％(重量/体积)聚山梨酯80；和
e)50mM乙酸钠缓冲液，
其中，所述制剂的pH是pH 5.5；
且其中，所述抗体或抗体片段包含：
含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2；和
含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
32.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链多肽。
33.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的轻链多肽。
34.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段与重链多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且轻链多肽含SEQ ID NO:2氨基酸序列的抗体结合相同的表位。
35.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含
氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的VH CDR1；
氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的VH CDR2；
氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的VH CDR3；
氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的VL CDR1；
氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的VL CDR2；和
氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的VL CDR3。
36.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述制剂中所述抗体或抗体片段的RSA在10mg/ml、2-8℃时不能由HPSEC检出。
37.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述制剂中大于95％的所述抗体或抗体片段在2-8℃下是单体形式。
38.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，据动态光散射(DLS)所测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在5℃的流体力学半径与25℃的没有显著区别。
39.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述制剂适合静脉内给药。
40.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述水是无菌水。
41.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述制剂是无热原的。
42.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，据ICHQ1A指南的长期稳定性研究测定，所述制剂在2-8℃稳定至少2年。
43.如权利要求42所述的制剂，其特征在于，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂的纯度在至少两年内每年下降小于0.5％。
44.如权利要求30或31所述的制剂，其特征在于，所述制剂不适合冻干。
45.一种制剂，所述制剂包含：
a)水性运载体；
b)1mg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段；
c)4％-20％(重量/体积)蔗糖；
d)0.01％-0.1％(重量/体积)聚山梨酯80；和
e)乙酸钠缓冲液，
其中，所述制剂的pH是pH 4.0-pH 6.0，并且，在2-8℃测定的所述制剂中所述抗体或抗体片段的不可逆自体缔合趋势与在23-27℃测定的相同；
且其中，所述抗体或抗体片段包含：
含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2；和
含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
46.一种制剂，所述制剂包含：
a)水性运载体；
b)1mg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段，其中，在2-8℃测定的所述制剂中所述抗体或抗体片段的不可逆自体缔合趋势与在23-27℃测定的相同；
c)4％-20％(重量/体积)蔗糖；
d)0.01％-0.1％(重量/体积)聚山梨酯80；和
e)乙酸钠缓冲液，
其中，所述制剂的pH是pH 4.0-pH 6.0，并且，所述制剂中大于95％的所述抗体或抗体片段在2-8℃是非自体缔合的单体形式；
且其中，所述抗体或抗体片段包含：
含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2；和
含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
47.一种制剂，所述制剂由下列组成：
a)水性运载体；
b)1mg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段；
c)4％-20％(重量/体积)蔗糖；
d)0.01％-0.1％(重量/体积)聚山梨酯80；和
e)乙酸钠缓冲液，
其中，所述制剂的pH是pH 4.0-pH 6.0，并且，所述制剂中所述抗体或抗体片段在2-8℃测定的不可逆自体缔合趋势与在23-27℃测定的相同；
且其中，所述抗体或抗体片段包含：
含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2；和
含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
48.一种制剂，所述制剂由下列组成：
a)水性运载体；
b)1mg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段，其中，在2-8℃测定的所述制剂中所述抗体或抗体片段的不可逆自体缔合趋势与在23-27℃测定的相同；
c)4％-20％(重量/体积)蔗糖；
d)0.01％-0.1％(重量/体积)聚山梨酯80；和
e)乙酸钠缓冲液，
其中，所述制剂的pH是pH 4.0-pH 6.0，并且其中所述制剂中大于95％的所述抗体或抗体片段在2-8℃是非自体缔合的单体形式；
且其中，所述抗体或抗体片段包含：
含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR1；
含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2；和
含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
49.权利要求1－48中任一项所述制剂在制备治疗需要治疗的患者中肿瘤病症的药物中的用途。
50.如权利要求49所述的用途，其特征在于，所述制剂作为治疗方案的一部分与一种或多种其他药剂或治疗方式联合施用。
51.如权利要求49或50所述的用途，其特征在于，所述肿瘤病症是癌症。
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