CN102977204A - 一种固相合成glp-1类似物的方法 - Google Patents
一种固相合成glp-1类似物的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102977204A CN102977204A CN2012104543559A CN201210454355A CN102977204A CN 102977204 A CN102977204 A CN 102977204A CN 2012104543559 A CN2012104543559 A CN 2012104543559A CN 201210454355 A CN201210454355 A CN 201210454355A CN 102977204 A CN102977204 A CN 102977204A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fmoc
- gly
- glp
- analogue
- resin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及多肽固相合成领域,为解决固相合成GLP-1类似物过程中氨基酸顺序连接困难或不完全造成而产生性质非常相似的缺失肽和副产品,导致后续纯化的时不能分离副产品的问题,本发明提出一种固相合成GLP-1类似物的方法,本发明在难连位点采用了片段缩合方法和引入取代基的方法,提高了多肽合成的收率。
Description
技术领域
本发明涉及多肽固相合成领域,具体地说涉及一种固相合成GLP-1(胰高血糖素样肽-1)类似物的方法。
背景技术
随着细胞和分子生物学的发展,肠促胰素这层神秘的面纱被慢慢揭开,研究证实,肠促胰素是人体内一种肠源性激素,肠促胰素以葡萄糖浓度依赖性方式促进胰岛β细胞分泌胰岛素,并减少胰岛α细胞分泌胰高血糖素(glucagon),从而降低血糖。正常人在进餐后,肠促胰素开始分泌,进而促进胰岛素分泌,以减少餐后血糖的波动。但对于2型糖尿病患者,其“肠促胰素效应”受损,主要表现为进餐后胰高血糖素样肽-1(GLP-1)浓度升高幅度较正常人有所减小,但其促进胰岛素分泌以及降血糖的作用并无明显受损,因此GLP-1及其类似物可以作为2型糖尿病治疗的一个重要靶点。GLP-1主要通过以下几方面发挥降糖作用。GLP-1具有保护β细胞的作用 GLP-1可作用于胰岛β细胞,促进胰岛素基因的转录、胰岛素的合成和分泌,并可刺激胰岛β细胞的增殖和分化,抑制胰岛β细胞凋亡,增加胰岛β细胞数量。此外,GLP-1还可作用于胰岛α细胞,强烈地抑制胰高血糖素的释放,并作用于胰岛δ细胞,促进生长抑素的分泌,生长抑素又可作为旁分泌激素参与抑制胰高血糖素的分泌。研究证明,GLP-1可通过多种机制明显地改善2型糖尿病动物模型或患者的血糖情况,其中促进胰岛β细胞的再生和修复,增加胰岛β细胞数量的作用尤为显着,这为2型糖尿病的治疗提供了一个非常好的前景。
然而,要将GLP-1应用于临床也面临着问题,那就是人体自身产生的GLP-1 极易被体内的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)降解,其血浆半衰期不足2分钟,必须持续静脉滴注或持续皮下注射才能产生疗效,这大大限制了GLP-1的临床应用。为解决这一难题,学者们已经提出两种方案:一是开发GLP-1类似物,让其既保有GLP-1的功效,又能抵抗降解:二是开发DPP-Ⅳ抑制剂,使体内自身分泌的GLP-1不被降解,维持GLP-1的功效。
目前市场上的GLP-1类似物通用名为艾塞那肽,英文名Exenatide,化学结构式为:His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2;分子式:C184H282N50O60S;分子量:4186.61。
传统的固相逐步合成法都是将一个一个保护氨基酸顺序偶联。但是,在多肽合成时往往有一些位点由于多肽长链的折叠和氨基酸的空间位置限制,往往使连接下一个氨基酸的反应难以进行或难以完全。在合成超过二十个氨基酸以后,特别是合成困难的多肽键时,产生以残基缺失为主的寡肽副产品含量显着增加并不断积累,由于这些寡肽副产品与目标肽在分子量、溶解性、极性和结构上很相似,难以纯化。
申请号为200710044421.4的中国专利,公开了一种固相多肽合成EXENATIDE的制备方法,该发明提供了一种固相多肽合成EXENATIDE的制备方法:以RINK AMIDE树脂、RINKAMIDE AM树脂或RINK AMIDE MBHA树脂为起始原料,依次连接具有FMOC保护基团的氨基酸,获得保护的三十九肽树脂,其间依次脱去FMOC-保护基团,用缩合剂,进行接肽反应,得保护的三十九肽树脂后,同步进行脱侧链保护基团及切肽,获得EXENATIDE粗品,并经C18或C8柱进行分离纯化,再经冷冻干燥,获得产品。该发明的合成方法属于传统的一个一个保护氨基酸顺序偶联,没有解决由于连接困难或是连接不完全而产生性质非常相似的缺失肽等副反应,导致纯化困难等问题。
发明内容
为解决固相合成GLP-1类似物过程中氨基酸顺序连接困难或不完全造成而产生性质非常相似的缺失肽和副产品,导致后续纯化的时不能分离副产品的问题,本发明提出一种固相合成GLP-1类似物的方法,该方法在难连接点,采用片段缩合和引入取代基的方法,提高了多肽合成的收率。
本发明是通过以下步骤实现的:一种固相合成GLP-1类似物的方法,所述的合成方法为以下步骤:
(1)以Fmoc-Rink Amide PEG MBHA Resin作为起始的树脂,在溶剂DCM或DMF作用下在容器中溶胀;起始树脂Fmoc-Rink Amide PEG MBHA Resin的取代度为0.1mmol/g~0.6mmol/g,作为优选,取代度为0.40mmol/g。溶剂的使用量为使起始树脂全部浸在溶剂中的量,溶胀0.5~12小时。起始树脂的溶胀是反应试剂分子进入树脂内部与功能基反应的先决条件,在反应进行中固相载体的充分溶胀对反应试剂分子、可溶的构件分子的***十分有利,因而能达到充分反应的效果。
(2)在容器中加入脱保护试剂后,然后对脱保护后的树脂进行冲洗备用;脱保护试剂选自Fmoc的脱保护试剂或者Boc的脱保护试剂,Fmoc的脱保护试剂选用体积浓度为20%的哌啶/DMF溶液,Boc的脱保护试剂选自体积浓度为50% 的TEA/DCM溶液,脱保护试剂的使用量为树脂体积的2~5倍。脱保护反应温度为5~50℃,脱保护反应时间为10~30分钟。
(3)以Fmoc或者Boc氨基保护的氨基酸或者肽片段溶液作为中间原料,在DMF溶剂中加入活化剂对羧基预活化;活化剂选自碳二亚胺型(DIC)、苯并***鎓盐型(BOP)、吡啶并***鎓盐型(AOP)、磷酸酯型缩合试剂中一种,其中DIC与HoBt或者HoAt同时使用,BOP或者AOP与叔胺同时使用,目前,常规使用量为氨基酸或者肽片段溶液:DIC:HoBt或者HoAt的摩尔比为1:1:1,氨基酸或者肽片段溶液:BOP或者AOP:叔胺的摩尔比为1:1:1,磷酸酯型缩合试剂选自DPPA、DEPBT、FDPP中一种,活化剂的使用量与氨基酸及肽片段投料量的摩尔数相同,中间原料在冰浴中预活化5~15min,DMF溶剂的使用量为使溶质溶解的量,常规为溶质与溶剂的质量体积比为1g:2~15ml,以能够完全溶解原料为宜,体积越小越好。
(4)将活化后的Fmoc或者Boc保护的氨基酸或者肽片段溶液与步骤(2)得到的产物混合,进行缩合反应;保护氨基酸及肽片段的投料量与步骤(2)产物的摩尔比为2~6:1。缩合反应温度为5~50℃,缩合反应的时间为1~3小时,如果反应不完全,可以延长反应时间或是换液重新偶联。将活化的Fmoc或者Boc保护氨基酸或者肽片段与经溶胀、脱氨基保护的多肽固相树脂混合,则树脂上中间产物多肽的脱保护氨基与溶液中的带保护氨基酸的活化羧基间发生缩合反应,固相树脂上形成更长链的Fmoc或者Boc保护氨基的多肽片段。
(5)抽取步骤(4)的产物通过茚三酮监测缩合反应完成的程度,直到步骤(4)完成反应,然后对步骤(4)的产物进行冲洗;通过茚三酮监测缩合反应完成的完成程度,直到反应完成。经洗涤,得到了具有更长肽片段的Fmoc或者Boc保护氨基肽片段固相树脂。茚三酮监测步骤为:茚三酮检测液A、B、C液各两滴,加热到110~120℃并保持1-2min,如果溶液有兰色,或固相树脂出现兰色,红褐色,表明还有游离氨基,反应尚未完成,否则说明连接完全。
(6)将步骤(5)的产物放入容器中,重复步骤(2)~(5),按照氨基酸序列从C端到N端的顺序进行新的氨基酸或者肽片段的缩合,最后,经过冲洗得到侧链全保护的GLP-1类似物-Rink Amide MBHA PEG固相树脂;
(7)对步骤(6)得到的侧链全保护的GLP-1类似物-Rink Amide MBHA PEG 固相树脂通过切割试剂进行脱保护和切割反应,然后采用冰***沉淀得到GLP-1类似物粗产品;脱保护和切割反应的切割试剂的使用量为,1g侧链全保护的GLP-1类似物-Rink Amide MBHA PEG固相树脂添加切割试剂5~10ml,切割试剂中各组分的体积比为TFA:Thioanisole:EDT:Phenol:H2O=85~95:1~5:1~5:1~5:1~5,脱保护和切割时先冰浴0.5~1小时,切割温度5~35℃,切割时间3~8小时,然后过滤,收集滤液并冲洗,最后在滤液中加入冰***,得到的沉淀用滤纸过滤,即得到GLP-1类似物粗产品,冰***与滤液的体积比为5~10:1。
(8)得到的GLP-1类似物粗产品通过离子交换及逆相高效液相色谱进行分离纯化,最后通过冷冻干燥,得到GLP-1类似物产品。
上述步骤中所述的冲洗均采用DMF及甲醇冲洗,先DMF洗涤若干次,再甲醇洗涤若干次,或者是DMF、甲醇间隔使用洗涤若干次。
作为优选,步骤(4)中所述的肽片段选在Gly处、Pro处或是能形成类Pro结构处中的一处或几处。
肽片段选在Gly处的肽片段选自带有His的Gly处、Gly-Gly处中一处或两处。带有His的Gly处的肽片段选自Fmoc-His1(Trt)-Gly2-OH、Fmoc-His1(Trt)-Gly2-Glu3-Gly4-OH、Boc-His1(Trt)-Gly2-OH、Boc-His1(Trt)-Gly2-Glu3-Gly4-OH中一种。带有Gly-Gly处的肽片段为Fmoc-Gly29-Gly30-OH。
选在Pro处或是能形成类Pro结构处的肽片段选自Fmoc-Thr7(tBu)-Ser8(Psi(Me,Me)pro)-OH、Fmoc-Leu10-Ser11(Psi(Me,Me)pro)-OH中一种或几种。
本发明提供了一种固相合成GLP-1类似物Exenatide的方法。采用Fmoc/tBu策略,按照固相合成的方法依次接入带Fmoc保护基团的氨基酸及带Fmoc/Boc保护基团的片段。期间依次脱去Fmoc或Boc保护基缩合带保护基团的氨基酸或肽片段,获得带保护的三十九肽树脂,然后进行切割脱去侧链保护基得到Exenatide粗产品。得到的Exenatide粗产品经过离子交换及逆相高效液相色谱方法纯化得到Exenatide产品。由于固相树脂为合成的多肽羧基端提供了氨基保护,合成后通过胺解反应将全保护肽从树脂上切割下来,再通过切割脱去侧链保护基,这样也能保证多肽序列的羧基端为氨基。
本发明在难连位点采用了片段缩合方法和引入取代基的方法。多肽合成难连位点一般在连接的时候连接困难或是容易产生副反应,或是连接不完全会产生性质非常相似的缺失肽,导致后续纯化的时候缺失肽杂质不能分离。困难肽合成的关键在于破坏困难序列导致的β-折叠结构,根据Pro残基可以终止β-折叠结构的原理,可在不含Pro的目标肽分子中特定部位酰胺键N原子上引入具有一定体积的取代基,使该残基成为二级胺型氨基酸(类Pro结构),可防止β-折叠的形成。本发明是在Pro处或是能形成类Pro结构处引入取代基。
本发明在最容易发生消旋化的位点添加氨基酸空间结构简单的氨基酸Gly的肽片段,减少His消旋杂质的产生。降低了纯化难度并提高了纯化收率、降低了生产成本,能够带来广泛的经济效益及社会效益。His组氨酸是最容易发生消旋化的氨基酸,本发明所述的肽片段一般选取Gly处,通过His-Gly、His-Gly- Glu-Gly,肽片段的引入减少了His消旋杂质的产生。
本发明通过固相连接Gly-Gly片段取代传统的单个氨基酸顺序连接,这样可以减少合成过程中产生Gly的缺失肽,而少Gly的缺失肽与目标多肽性质非常接近,这样会导致后续很难将目标肽与杂质有效的分离,影响总的收率。通过选择二肽片段引入Gly-Gly片段合成策略,在合成过程中不仅Gly-Gly和一个Gly一样连接容易,合成产率更高,而且Gly-Gly的缺失肽比Gly的缺失肽更容易与目标多肽分离提高了合成收益,降低了生产成本。
说明书和权利要求书中所使用的缩写的含义列于下表中:
Fmoc | 9-芴甲氧羰基 |
Boc | 叔丁氧羰基 |
DCM | 二氯甲烷 |
DMF | N,N-二甲基甲酰胺 |
DIC | N,N-二异丙基碳二亚胺 |
AOP | 六氟磷酸-7-氮杂-苯并***-1-基-氧基三-(二甲胺基)膦 |
BOP | 苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐 |
HoBt | 1-羟基苯并*** |
HoAt | 1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑 |
DPPA | 叠氮磷酸二苯酯, |
DEPBT | 3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮 |
FDPP | 五氟苯酚衍生物 |
Piperidine | 哌啶 |
TEA | 三乙胺 |
TFA | 三氟乙酸 |
Thioanisole | 茴香硫醚 |
EDT | 1,2-乙二硫醇 |
Phenol | 苯酚 |
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
(1)通过片段缩合减少了性质非常接近的缺失肽的产生,减少了杂质的产生,降低了生产成本,能够带来广泛的经济效益及社会效益;
(2)能够减少反应步数,节省了生产时间;
(3)降低了纯化难度并调高了纯化收率,能够将总收率由传统的单个氨基酸顺序连接的5%提高到15-20%。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步详细说明,实施例中所用起始树脂、Fmoc或者Boc氨基保护的氨基酸或者肽片段溶液等中间原料、反应试剂均可市购。
实施例1
(1)称取取代度为0.1mmol/g 的起始树脂Fmoc-Rink Amide PEG MBHA Resin 10g(1mmol),加入到固相反应容器中,在容器中加入溶剂DCM,使起始树脂完全浸在DCM溶剂中溶胀1小时;
(2)在上述容器中加入50mL的体积浓度为20%的哌啶/DMF脱保护试剂脱除Fmoc保护基,在温度15℃下反应30min,然后用DMF洗涤两次,再甲醇洗涤两次;
(3)以Fmoc-Ser(tBu)-OH为中间原料,将分别为3mmol的Fmoc-Ser(tBu)-OH、DIC、HoBt一起在DMF溶剂中冰浴活化5分钟;
(4)将活化后的Fmoc-Ser(tBu)-OH投入到步骤(2)的容器中,反应温度控制在15℃;
(5)通过茚三酮监测直到反应结束后,用DMF和甲醇交叉洗涤三次得到Fmoc-Ser(tBu)- MBHA Resin,检测取代度为0.03 mmol/g。
(6)取步骤(5)制备的产物 4g(0.12mmol)放入反应容器中,重复步骤(2)~(5),加入20mL体积浓度为20%的哌啶/DMF试剂脱除Fmoc保护基,用DMF和甲醇交叉洗涤两次,步骤(3)依次选取下面具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段3mmol为中间原料、3mmol的DIC、3mmol的HoBt在DMF溶剂中冰浴活化5min,将活化好的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段加入到上述所述的反应容器中进行缩合反应,反应温度控制在15℃,通过茚三酮检测来监测反应终点,
依次连接下面所述的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段:
1)Fmoc-Ser(tBu)-OH、2)Fmoc-Pro-OH、3)Fmoc-Pro-OH、4)Fmoc-Pro-OH、5)Fmoc-Ala-OH、6)Fmoc-Gly-OH、7)Fmoc-Ser(tBu)-OH、8)Fmoc-Ser(tBu)-OH、9)Fmoc-Pro-OH、10)Fmoc-Gly-Gly-OH、11)Fmoc-Asn(Trt)-OH、12)Fmoc-Lys-(Boc)-OH、13)Fmoc-Leu-OH、14)Fmoc-Trp(Boc)-OH、15)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、(16)Fmoc-Ile-OH、17)Fmoc-Phe-OH、18)Fmoc-Leu-OH、19)Fmoc-Arg(pbf)-OH、20)Fmoc-Val-OH、21)Fmoc-Ala-OH、22)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、23)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、24)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、25)Fmoc-Met-OH、26)Fmoc-Gln(Trt)-OH、27)Fmoc-Lys(Boc)-OH、28) Fmoc-Ser(tBu)-OH、29)Fmoc-Leu-OH、30)Fmoc-Asp(OtBu)-OH、31)Fmoc-Thr(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH 、33)Fmoc-Phe-OH、34)Fmoc-Thr(tBu)-OH、35)Fmoc-Gly-OH、36)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、37)Fmoc-His(Trt)-Gly-OH。
直到反应结束后,用DMF和甲醇交叉洗涤三次得到侧链全保护Exenatide- PEG MBHA Resin。
(7)称取上述全保护肽树脂100g,加入切割试剂5000ml,切割试剂中各组分的体积比为TFA:Thioanisole:EDT:Phenol:H2O=87.5:5:2.5:2.5:2.5,先冰浴1小时,然后,切割温度为25摄氏度,切割时间3小时然后过滤树脂,收集滤液,加入500g冰***,得到的沉淀用滤纸过滤即得到艾塞那肽粗产品。
(8)将步骤(7)得到的粗产品通过离子交换及反相高效液相色谱进行分离纯化,最后通过冷冻干燥9小时,得到GLP-1类似物产品。
His1-Gly2-Glu3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Leu10-Ser11-Lys12-Gln13-Met14-Glu15-Glu16-Glu17-Ala18-Val19-Arg20-Leu21-Phe22-Ile23-Glu24-Trp25-Leu26-Lys27-Asn28-Gly29-Gly30-Pro31-Ser32-Ser33-Gly34-Ala35-Pro36-Pro37-Pro38-Ser39-NH2
实施例2
(1)称取取代度为0.6mmol/g 的起始树脂Fmoc-Rink Amide PEG MBHA Resin 10g(6mmol),加入到固相反应容器中,在容器中加入溶剂DCM,使起始树脂完全浸在DCM溶剂中溶胀2小时;
(2)在容器中加入100mL体积浓度为20%的哌啶/DMF脱除Fmoc保护基,20℃反应20min,然后交叉使用DMF与甲醇洗涤3次;
(3)以Fmoc-Ser(tBu)-OH为中间原料,将分别为12mmol的Fmoc-Ser(tBu)-OH、DIC、HoAt一起在DMF溶剂中冰浴活化5分钟;
(4)将活化后的Fmoc-Ser(tBu)-OH投入到步骤(2)的容器中,反应温度控制在20℃;
(5)通过茚三酮监测直到反应结束后,用DMF和甲醇交叉洗涤三次得到Fmoc-Ser(tBu)- MBHA Resin,检测取代度为0.38 mmol/g。
(6)取步骤(5)制备的产物4g(1.52mmol)放入反应容器中,重复步骤(2)~(5),加入40mL体积浓度为20%的哌啶/DMF试剂脱除Fmoc保护基,用DMF和甲醇交叉洗涤两次,步骤(3)依次选取下面具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段4mmol为中间原料、4mmol的DIC、4mmol的HoBt在DMF溶剂中冰浴活化5min,将活化好的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段加入到上述所述的反应容器中进行缩合反应,反应温度控制在20℃,通过茚三酮检测来监测反应终点,
依次连接下面所述的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段:
1)Fmoc-Ser(tBu)-OH、2)Fmoc-Pro-OH、3)Fmoc-Pro-OH、4)Fmoc-Pro-OH、5)Fmoc-Ala-OH、6)Fmoc-Gly-OH、7)Fmoc-Ser(tBu)-OH、8)Fmoc-Ser(tBu)-OH、9)Fmoc-Pro-OH、10)Fmoc-Gly-Gly-OH、11)Fmoc-Asn(Trt)-OH、12)Fmoc-Lys-(Boc)-OH、13)Fmoc-Leu-OH、14)Fmoc-Trp(Boc)-OH、15)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、(16)Fmoc-Ile-OH、17)Fmoc-Phe-OH、18)Fmoc-Leu-OH、19)Fmoc-Arg(pbf)-OH、20)Fmoc-Val-OH、21)Fmoc-Ala-OH、22)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、23)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、24)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、25)Fmoc-Met-OH、26)Fmoc-Gln(Trt)-OH、27)Fmoc-Lys(Boc)-OH、28)Fmoc-Leu-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH、29)Fmoc-Asp(OtBu)-OH、30)Fmoc-Thr(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH、31)Fmoc-Phe-OH、32)Fmoc-Thr(tBu)-OH、33)Fmoc-His(Trt)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-OH。
反应结束后,用DMF和甲醇交叉洗涤三次得到侧链全保护Exenatide- PEG MBHA Resin。
(7)称取上述全保护肽树脂100g,加入切割试剂5000ml,切割试剂中各组分的体积比为TFA:Thioanisole:EDT:Phenol:H2O=85:5:4:2.5:3.5,先冰浴1小时,切割温度为35摄氏度,切割时间8小时然后过滤树脂,收集滤液,加入1000g冰***,得到的沉淀用滤纸过滤即得到艾塞那肽粗产品。
(8)将步骤(7)得到的粗产品通过离子交换及反相高效液相色谱进行分离纯化,最后通过冷冻干燥7小时,得到GLP-1类似物产品。
His1-Gly2-Glu3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Leu10-Ser11-Lys12-Gln13-Met14-Glu15-Glu16-Glu17-Ala18-Val19-Arg20-Leu21-Phe22-Ile23-Glu24-Trp25-Leu26-Lys27-Asn28-Gly29-Gly30-Pro31-Ser32-Ser33-Gly34-Ala35-Pro36-Pro37-Pro38-Ser39-NH2
实施例3
(1)称取取代度为0.4mmol/g 的起始树脂Fmoc-Rink Amide PEG MBHA Resin 10g(4mmol),加入到固相反应容器中,在容器中加入溶剂DCM,使起始树脂完全浸在DCM溶剂中溶胀0.5小时;
(2)在步骤(1)的容器中加入20mL的体积浓度为20%的哌啶/DMF脱除Fmoc保护基,在25℃反应30min,然后用DMF洗涤3次,再甲醇洗涤3次;
(3)以Fmoc-Ser(tBu)-OH为中间原料,将分别为16mmol的Fmoc-Ser(tBu)-OH、DIC、HoBt一起在DMF溶剂中冰浴活化5分钟;
(4)将活化后的Fmoc-Ser(tBu)-OH投入到步骤(2)的容器中,反应温度控制在10℃;
(5)通过茚三酮监测直到反应结束后,用DMF洗涤3次、甲醇洗涤3次,得到Fmoc-Ser(tBu)- MBHA Resin,检测取代度为0.25 mmol/g。
(6)取步骤(5)制备的产物 4g(1mmol)放入反应容器中,重复步骤(2)~(5),加入10mL体积浓度为20%的哌啶/DMF试剂脱除Fmoc保护基,用DMF洗涤3次、甲醇洗涤3次,步骤(3)依次选取下面具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段5mmol为中间原料、5mmol的DIC、5mmol的HoBt在DMF溶剂中冰浴活化5min,将活化好的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段加入到上述所述的反应容器中进行缩合反应,反应温度控制在10℃,通过茚三酮检测来监测反应终点,
依次连接下面所述的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段:
1)Fmoc-Ser(tBu)-OH、2)Fmoc-Pro-OH、3)Fmoc-Pro-OH、4)Fmoc-Pro-OH、5)Fmoc-Ala-OH、6)Fmoc-Gly-OH、7)Fmoc-Ser(tBu)-OH、8)Fmoc-Ser(tBu)-OH、9)Fmoc-Pro-OH、10)Fmoc-Gly-Gly-OH、11)Fmoc-Asn(Trt)-OH、12)Fmoc-Lys-(Boc)-OH、13)Fmoc-Leu-OH、14)Fmoc-Trp(Boc)-OH、15)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、(16)Fmoc-Ile-OH、17)Fmoc-Phe-OH、18)Fmoc-Leu-OH、19)Fmoc-Arg(pbf)-OH、20)Fmoc-Val-OH、21)Fmoc-Ala-OH、22)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、23)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、24)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、25)Fmoc-Met-OH、26)Fmoc-Gln(Trt)-OH、27)Fmoc-Lys(Boc)-OH、28)Fmoc-Ser(tBu)-OH、29)Fmoc-Leu-OH、30)Fmoc-Asp(OtBu)-OH、31 )Fmoc-Thr(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH、 32)Fmoc-Phe-OH、33)Fmoc-Gly-Thr(Psi(Me,Me)pro)-OH、34)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、35)Boc-His(Trt)-Gly-OH。
反应结束后,用DMF洗涤3次、甲醇洗涤3次得到侧链全保护Exenatide- PEG MBHA Resin。
(7)称取上述全保护肽树脂100g,加入切割试剂5000ml,切割试剂中各组分的体积比为TFA:Thioanisole:EDT:Phenol:H2O=90:3:2:2:3,先冰浴1小时,然后,切割温度为5摄氏度,切割时间6小时然后过滤树脂,收集滤液,将洗涤后得到的滤液,加入700g冰***的比例加入冰***,得到的沉淀用滤纸过滤即得到艾塞那肽粗产品。
(8)将步骤(7)得到的粗产品通过离子交换及反相高效液相色谱进行分离纯化,最后通过冷冻干燥9小时,得到GLP-1类似物产品。
His1-Gly2-Glu3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Leu10-Ser11-Lys12-Gln13-Met14-Glu15-Glu16-Glu17-Ala18-Val19-Arg20-Leu21-Phe22-Ile23-Glu24-Trp25-Leu26-Lys27-Asn28-Gly29-Gly30-Pro31-Ser32-Ser33-Gly34-Ala35-Pro36-Pro37-Pro38-Ser39-NH2
实施例4
(1)称取取代度为0.1mmol/g 的起始树脂Fmoc-Rink Amide PEG MBHA Resin 10g(1mmol),加入到固相反应容器中,在容器中加入溶剂DCM,使起始树脂完全浸在DCM溶剂中溶胀1.5小时;
(2)在步骤(1)的容器中加入30mL的体积浓度为20%的哌啶/DMF脱除Fmoc保护基,在30℃反应10min,然后用DMF洗涤两次,再甲醇洗涤两次;
(3)以Fmoc-Ser(tBu)-OH为中间原料,将分别为6mmol的Fmoc-Ser(tBu)-OH、DIC、HoAt一起在DMF溶剂中冰浴活化5分钟;
(4)将活化后的Fmoc-Ser(tBu)-OH投入到步骤(2)的容器中,反应温度控制在25℃;
(5)通过茚三酮监测直到反应结束后,用DMF和甲醇交叉洗涤三次得到Fmoc-Ser(tBu)- MBHA Resin,检测取代度为0.03 mmol/g。
(6)取步骤(5)制备的产物4g(0.12mmol)放入反应容器中,重复步骤(2)~(5),加入30mL体积浓度为20%的哌啶/DMF试剂脱除Fmoc保护基,用DMF和甲醇交叉洗涤两次,步骤(3)依次选取下面具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段0.6mmol为中间原料、0.6mmol的DIC、0.6mmol的HoBt在DMF溶剂中冰浴活化5min,将活化好的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段加入到上述所述的反应容器中进行缩合反应,反应温度控制在25℃,通过茚三酮检测来监测反应终点,
一次连接下面所述的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段:
1)Fmoc-Ser(tBu)-OH、2)Fmoc-Pro-OH、3)Fmoc-Pro-OH、4)Fmoc-Pro-OH、5)Fmoc-Ala-OH、6)Fmoc-Gly-OH、7)Fmoc-Ser(tBu)-OH、8)Fmoc-Ser(tBu)-OH、9)Fmoc-Pro-OH、10)Fmoc-Gly-Gly-OH、11)Fmoc-Asn(Trt)-OH、12)Fmoc-Lys-(Boc)-OH、13)Fmoc-Leu-OH、14)Fmoc-Trp(Boc)-OH、15)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、(16)Fmoc-Ile-OH、17)Fmoc-Phe-OH、18)Fmoc-Leu-OH、19)Fmoc-Arg(pbf)-OH、20)Fmoc-Val-OH、21)Fmoc-Ala-OH、22)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、23)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、24)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、25)Fmoc-Met-OH、26)Fmoc-Gln(Trt)-OH、27)Fmoc-Lys(Boc)-OH、28)Fmoc-Ser(tBu)-OH、29)Fmoc-Leu-OH、30)Fmoc-Asp(OtBu)-OH、31)Fmoc-Thr(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH 、32)Fmoc-Phe-OH、33)Fmoc-Thr(tBu)-OH 、34)Fmoc-His(Trt)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-OH。
反应结束后,用DMF和甲醇交叉洗涤三次得到侧链全保护Exenatide- PEG MBHA Resin。
(7)称取上述全保护肽树脂100g,加入切割试剂5000ml,切割试剂中各组分的体积比为TFA:Thioanisole:EDT:Phenol:H2O=92.5:2.5:1:1.5:2.5,先冰浴1小时,然后,切割温度为25摄氏度,切割时间4小时然后过滤树脂,收集滤液,将洗涤后得到的滤液,加入800g冰***的比例加入冰***,得到的沉淀用滤纸过滤即得到艾塞那肽粗产品。
(8)将步骤(7)得到的粗产品通过离子交换及反相高效液相色谱进行分离纯化,最后通过冷冻干燥9小时,得到GLP-1类似物产品。
His1-Gly2-Glu3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Leu10-Ser11-Lys12-Gln13-Met14-Glu15-Glu16-Glu17-Ala18-Val19-Arg20-Leu21-Phe22-Ile23-Glu24-Trp25-Leu26-Lys27-Asn28-Gly29-Gly30-Pro31-Ser32-Ser33-Gly34-Ala35-Pro36-Pro37-Pro38-Ser39-NH2
实施例5
(1)称取取代度为0.4mmol/g 的起始树脂Fmoc-Rink Amide PEG MBHA Resin 10g(4mmol),加入到固相反应容器中,在容器中加入溶剂DCM,使起始树脂完全浸在DCM溶剂中溶胀2小时;
(2)在步骤(1)的容器中加入150mL的体积浓度为20%的哌啶/DMF脱除Fmoc保护基,35℃反应20min,然后用DMF洗涤两次,再甲醇洗涤两次;
(3)以Fmoc-Ser(tBu)-OH为中间原料,将分别为8mmol的Fmoc-Ser(tBu)-OH、DIC、HoBt一起在DMF溶剂中冰浴活化5分钟;
(4)将活化后的Fmoc-Ser(tBu)-OH投入到步骤(2)的容器中,反应温度控制在50℃;
(5)通过茚三酮监测直到反应结束后,用DMF和甲醇交叉洗涤三次得到Fmoc-Ser(tBu)- MBHA Resin,检测取代度为0.25mmol/g。
(6)取步骤(5)制备的产物4g(1mmol)放入反应容器中,重复步骤(2)~(5),加入50mL体积浓度为20%的哌啶/DMF试剂脱除Fmoc保护基,用DMF和甲醇交叉洗涤两次,步骤(3)依次选取下面具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段2mmol为中间原料、2mmol的DIC、2mmol的HoBt在DMF溶剂中冰浴活化5min,将活化好的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段加入到上述所述的反应容器中进行缩合反应,反应温度控制在50℃,通过茚三酮检测来监测反应终点,
一次连接下面所述的具有Fmoc保护基团的氨基酸或者肽片段:
1)Fmoc-Ser(tBu)-OH、2)Fmoc-Pro-OH、3)Fmoc-Pro-OH、4)Fmoc-Pro-OH、5)Fmoc-Ala-OH、6)Fmoc-Gly-OH、7)Fmoc-Ser(tBu)-OH、8)Fmoc-Ser(tBu)-OH、9)Fmoc-Pro-OH、10)Fmoc-Gly-Gly-OH、11)Fmoc-Asn(Trt)-OH、12)Fmoc-Lys-(Boc)-OH、13)Fmoc-Leu-OH、14)Fmoc-Trp(Boc)-OH、15)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、(16)Fmoc-Ile-OH、17)Fmoc-Phe-OH、18)Fmoc-Leu-OH、19)Fmoc-Arg(pbf)-OH、20)Fmoc-Val-OH、21)Fmoc-Ala-OH、22)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、23)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、24)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、25)Fmoc-Met-OH、26)Fmoc-Gln(Trt)-OH、27)Fmoc-Lys(Boc)-OH、28)Fmoc-Leu-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH、29)Fmoc-Asp(OtBu)-OH、30)Fmoc-Thr(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH、31)Fmoc-Phe-OH、32)Fmoc-Thr(tBu)-OH、33)Fmoc-Gly-OH、34)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、35)Fmoc-His(Trt)-Gly-OH。
反应结束后,用DMF和甲醇交叉洗涤三次得到侧链全保护Exenatide- PEG MBHA Resin。
(7)称取上述全保护肽树脂100g,加入切割试剂5000ml,切割试剂中各组分的体积比为TFA:Thioanisole:EDT:Phenol:H2O=95:2:1:1:1,先冰浴1小时,然后,切割温度为25摄氏度,切割时间7小时然后过滤树脂,收集滤液,将洗涤后得到的滤液,加入900g冰***的比例加入冰***,得到的沉淀用滤纸过滤即得到艾塞那肽粗产品。
(8)将步骤(7)得到的粗产品通过离子交换及反相高效液相色谱进行分离纯化,最后通过冷冻干燥9小时,得到GLP-1类似物产品。
His1-Gly2-Glu3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Leu10-Ser11-Lys12-Gln13-Met14-Glu15-Glu16-Glu17-Ala18-Val19-Arg20-Leu21-Phe22-Ile23-Glu24-Trp25-Leu26-Lys27-Asn28-Gly29-Gly30-Pro31-Ser32-Ser33-Gly34-Ala35-Pro36-Pro37-Pro38-Ser39-NH2
实施例通过质谱和高效液相色谱确认,通过质谱检测,我们所合成的产品的分子量为4186.6,与标准物质检测结果一致;高效液相色谱,通过与标准物质比对,保留时间一致,纯度也能够达到99%以上。
Claims (10)
1.一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于:所述的合成方法为以下步骤:
(1)以Fmoc-Rink Amide PEG MBHA Resin作为起始树脂,在DCM或DMF溶剂下在容器中溶胀;
(2)在容器中加入脱保护试剂后,然后对脱保护后的树脂进行冲洗备用;
(3)以Fmoc或者Boc氨基保护的氨基酸或者肽片段溶液作为中间原料,在DMF
溶剂中加入活化剂对羧基预活化备用;
(4)将活化后的Fmoc或者Boc保护的氨基酸或者肽片段溶液与步骤(2)得到的脱保护产物混合,进行缩合反应;
(5)抽取步骤(4)的产物通过茚三酮监测缩合反应完成的程度,直到步骤(4)完成反应,然后对带有产物的固相树脂进行冲洗;
(6)将步骤(5)的产物放入容器中,重复步骤(2)~(5),按照氨基酸序列从C端到N端的顺序进行新的氨基酸或者肽片段的缩合,最后,经过冲洗得到侧链全保护的GLP-1类似物-Rink Amide MBHA PEG固相树脂;
(7)对步骤(6)得到的侧链全保护的GLP-1类似物-Rink Amide MBHA PEG 固相树脂进行脱保护和切割反应,然后采用冰***沉淀、过滤得到GLP-1类似物粗产品;
(8)得到的GLP-1类似物粗产品通过离子交换及反相高效液相色谱进行分离纯化,最后通过冷冻干燥,得到GLP-1类似物产品。
2.根据权利要求1所述的一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于,步骤(1)中起始树脂Fmoc-Rink Amide PEG MBHA Resin的取代度为0.1mmol/g-0.6mmol/g,溶剂的使用量为使起始树脂全部浸在溶剂中的量,溶胀0.5~12小时。
3.根据权利要求1所述的一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于,步骤(2)中脱保护试剂选自Fmoc的脱保护试剂或者Boc的脱保护试剂,Fmoc的脱保护试剂选用体积浓度为20%的哌啶/DMF溶液,BOC的脱保护试剂选自体积浓度为50% TEA/DCM,树脂与脱保护试剂的质量体积比为1g:2~15ml,脱保护反应温度为5~50℃,脱保护反应时间为10~30分钟。
4.根据权利要求1所述的一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于,步骤(3)中活化剂选自N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)、苯并***鎓盐型(BOP)、吡啶并***鎓盐型(AOP)、磷酸酯型缩合试剂中一种,其中DIC与HoBt或者HOAt同时使用,BOP或者AOP与叔胺同时使用,磷酸酯型缩合试剂选自DPPA、DEPBT、FDPP中一种,活化剂的使用量与氨基酸及肽片段的投料量的摩尔数相同,DMF溶剂的使用量为使溶质溶解的量。
5.根据权利要求1所述的一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于,步骤(4)中保护氨基酸及肽片段的投料量与步骤(2)产物的摩尔比为2~6:1,缩合反应温度为5~50℃,缩合反应的时间为1~3小时。
6.根据权利要求1所述的一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于,步骤(4)中所述的肽片段选在Gly处、Pro处或是能形成类Pro结构处中的一处或几处。
7.根据权利要求6所述的一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于,所述的肽片段选自带有His的Gly处、Gly-Gly处中一处或两处。
8.根据权利要求6或7所述的一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于,带有His的Gly处的肽片段选自Fmoc-His1(Trt)-Gly2-OH、Fmoc-His1(Trt)-Gly2-Glu3-Gly4-OH、Boc-His1(Trt)-Gly2-OH、Boc-His1(Trt)-Gly2-Glu3-Gly4-OH中一种。
9.根据权利要求6或7所述的一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于,Gly-Gly处的肽片段为Fmoc-Gly29-Gly30-OH。
10.根据权利要求6或7所述的一种固相合成GLP-1类似物的方法,其特征在于,选在Pro处或是能形成类Pro结构处的肽片段选自Fmoc-Thr7(tBu)-Ser8(Psi(Me,Me)pro)-OH、Fmoc-Leu10-Ser11(Psi(Me,Me)pro)-OH中一种或几种。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012104543559A CN102977204A (zh) | 2012-11-14 | 2012-11-14 | 一种固相合成glp-1类似物的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012104543559A CN102977204A (zh) | 2012-11-14 | 2012-11-14 | 一种固相合成glp-1类似物的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102977204A true CN102977204A (zh) | 2013-03-20 |
Family
ID=47851584
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2012104543559A Pending CN102977204A (zh) | 2012-11-14 | 2012-11-14 | 一种固相合成glp-1类似物的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102977204A (zh) |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103224558A (zh) * | 2013-04-03 | 2013-07-31 | 齐鲁制药有限公司 | 一种艾塞那肽的制备方法 |
CN103265630A (zh) * | 2013-05-27 | 2013-08-28 | 成都圣诺生物制药有限公司 | 艾塞那肽的制备方法 |
CN105273077A (zh) * | 2014-07-18 | 2016-01-27 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备普兰林肽的方法 |
CN106928342A (zh) * | 2015-12-31 | 2017-07-07 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种乌拉立肽的制备方法 |
CN107561168A (zh) * | 2016-06-30 | 2018-01-09 | 山东新时代药业有限公司 | 一种聚乙二醇化促胰岛素分泌肽类似物的分析检测方法 |
WO2018032843A1 (zh) * | 2016-08-19 | 2018-02-22 | 深圳市健元医药科技有限公司 | 一种索马鲁肽的合成方法 |
CN108948179A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-12-07 | 安徽省国平药业有限公司 | 一种glp-1(7-37)的合成方法 |
CN111018963A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-17 | 中肽生化有限公司 | 一种胰高血糖素的制备方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1129224A (zh) * | 1994-10-18 | 1996-08-21 | 伊莱利利公司 | 类胰高血糖素促胰岛素的多肽类似物组合物及其使用方法 |
US6902744B1 (en) * | 1999-01-14 | 2005-06-07 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Exendin agonist formulations and methods of administration thereof |
-
2012
- 2012-11-14 CN CN2012104543559A patent/CN102977204A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1129224A (zh) * | 1994-10-18 | 1996-08-21 | 伊莱利利公司 | 类胰高血糖素促胰岛素的多肽类似物组合物及其使用方法 |
US6902744B1 (en) * | 1999-01-14 | 2005-06-07 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Exendin agonist formulations and methods of administration thereof |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
李长兵: "困难肽AM-55的Fmoc固相合成研究", 《西南大学硕士学位论文》 * |
Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103224558A (zh) * | 2013-04-03 | 2013-07-31 | 齐鲁制药有限公司 | 一种艾塞那肽的制备方法 |
CN103224558B (zh) * | 2013-04-03 | 2015-08-12 | 齐鲁制药有限公司 | 一种艾塞那肽的制备方法 |
CN103265630A (zh) * | 2013-05-27 | 2013-08-28 | 成都圣诺生物制药有限公司 | 艾塞那肽的制备方法 |
CN103265630B (zh) * | 2013-05-27 | 2015-07-29 | 成都圣诺生物制药有限公司 | 艾塞那肽的制备方法 |
CN105273077B (zh) * | 2014-07-18 | 2019-03-19 | 杭州阿诺生物医药科技有限公司 | 一种制备普兰林肽的方法 |
CN105273077A (zh) * | 2014-07-18 | 2016-01-27 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备普兰林肽的方法 |
CN106928342A (zh) * | 2015-12-31 | 2017-07-07 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种乌拉立肽的制备方法 |
CN106928342B (zh) * | 2015-12-31 | 2020-10-16 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种乌拉立肽的制备方法 |
CN107561168A (zh) * | 2016-06-30 | 2018-01-09 | 山东新时代药业有限公司 | 一种聚乙二醇化促胰岛素分泌肽类似物的分析检测方法 |
WO2018032843A1 (zh) * | 2016-08-19 | 2018-02-22 | 深圳市健元医药科技有限公司 | 一种索马鲁肽的合成方法 |
CN108948179A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-12-07 | 安徽省国平药业有限公司 | 一种glp-1(7-37)的合成方法 |
CN111018963A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-17 | 中肽生化有限公司 | 一种胰高血糖素的制备方法 |
CN111018963B (zh) * | 2019-12-27 | 2023-11-24 | 中肽生化有限公司 | 一种胰高血糖素的制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102977204A (zh) | 一种固相合成glp-1类似物的方法 | |
CN106699871B (zh) | 一种利拉鲁肽的制备方法 | |
CN108059666B (zh) | 一种固液结合制备索玛鲁肽的方法 | |
CN102286076B (zh) | 比伐卢定的制备方法 | |
CN103304660B (zh) | 一种利拉鲁肽的合成方法 | |
CN102286092B (zh) | 利拉鲁肽的固相合成方法 | |
CN102532274B (zh) | 一种比伐卢定的制备方法 | |
CN110078816B (zh) | 一种索玛鲁肽的制备方法 | |
CN101747426B (zh) | 一种合成普兰林肽的方法 | |
CN101538324B (zh) | 一种制备艾塞那肽的方法 | |
CN102942625A (zh) | 一种艾塞那肽固相合成方法 | |
CN103864918A (zh) | 一种利拉鲁肽的固相合成方法 | |
CN113135991B (zh) | 一种制备索玛鲁肽的方法 | |
CN103265629B (zh) | 一种制备胸腺法新的固相合成新工艺 | |
CN110922470A (zh) | 一种索玛鲁肽的制备方法 | |
CN109575109B (zh) | 片段缩合制备地加瑞克的方法 | |
CN107880111A (zh) | 一种制备利拉鲁肽的方法 | |
CN110028573A (zh) | 一种固液结合制备利拉鲁肽的方法 | |
CN101357938A (zh) | 固相多肽合成Exenatide的制备方法 | |
CN104844706B (zh) | 一种合成利西拉来的方法 | |
CN110128526B (zh) | 长效化艾塞那肽衍生物及其盐与制备方法和用途 | |
CN103265630B (zh) | 艾塞那肽的制备方法 | |
CN112679602A (zh) | 索马鲁肽的固相合成方法 | |
CN113754753A (zh) | 一种索玛鲁肽的合成方法 | |
EP2915817B1 (en) | Method for preparing exenatide |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20130320 |