CN102805759B - 红旱莲总黄酮及其提取方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及红旱莲总黄酮及其提取方法与应用,属于医药领域。本发明通过原料干燥,粉碎,提取,NKA–9型大孔树脂纯化等步骤对红旱莲总黄酮进行了提取,本方案提取速度快,效率高,得到总黄酮纯度高,回收率高,适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,涉及红旱莲黄酮及其提取方法与应用
背景技术
红旱莲为藤黄科金丝桃属植物(Hypericum ascyron L),别称黄海棠等,有平肝、止血、清热解毒功效。用于治疗出血、跌打损伤、疮疖肿痛等症。目前对红旱莲的功效成分研究尚少,申请号200610038949公开了一种提取红旱莲中总黄酮类成分的方法,包括40~95%醇提、浓缩、AB–8、HPD–100大孔树脂或过聚酰胺柱、洗脱、浓缩干燥等步骤。
发明内容
本发明目的在于提供一种快速高效提取红旱莲总黄酮的方法。
本发明的技术方案为:
红旱莲总黄酮,依照下列步骤来制备:
(1)取红旱莲全草原料经50~60℃干燥至含水量10~15%,粉碎;
(2)取红旱莲全草粉末,按1:30~50的固液比加入体积分数为50~60%的乙醇,以600~800W的微波功率辅助提取3.5~4.5分钟;
(3)真空浓缩直至无醇味,用NKA–9型大孔树脂对红旱莲总黄酮进行静态分离纯化,其工艺条件为:上样浓度3–4 mg/mL、吸附pH5–7、吸附温度30–40℃、解吸乙醇浓度60–70%、解吸液料比10–20:1;收集解吸液;
(4)将解吸液真空浓缩,干燥。
红旱莲总黄酮的提取方法,其特征在于包含下列步骤:
(1)取红旱莲全草原料经50~60℃干燥至含水量10~15%,粉碎;
(2)取红旱莲全草粉末,按1:30~50的固液比加入体积分数为50~60%的乙醇,以600~800W的微波功率辅助提取3.5~4.5分钟;
(3)真空浓缩直至无醇味,用NKA–9型大孔树脂对红旱莲总黄酮进行静态分离纯化,其工艺条件为:上样浓度3–4 mg/mL、吸附pH5–7、吸附温度30–40℃、解吸乙醇浓度60–70%、解吸液料比10–20:1;收集解吸液;
(4)将解吸液真空浓缩,干燥。
前述静态分离纯化可以用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至上样浓度3–4 mg/mL,调节pH5–7;以树脂湿重:上样量为1:20~25的比例配制黄酮与树脂的吸附溶液,将溶液置于30~40℃的恒温振荡器上振荡充分吸附,吸附结束后将溶液过滤,1~3倍体积蒸馏水冲洗树脂,并加入60–70%的乙醇并置于振荡器上充分解吸,收集解吸液。
为了达到更好的提取效果,红旱莲原料粉碎后过40~80目筛。
为了达到更好的解吸效率及保护总黄酮的活性,解吸过程可以在振荡器上实行,2小时即可达到较好的解吸效果。采用真空浓缩及真空冷冻干燥。
本发明还涉及到一种药物组合物,包含所述的红旱莲总黄酮和药学上可接受的辅料。所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、丸剂、浸膏剂、口服液或糖浆剂等常规的药学剂型。
本发明还涉及到红旱莲总黄酮作为抗氧化剂的应用。
本发明的有益效果:
(1)提取时间短,效率高,节约能源。本发明在红旱莲总黄酮提取上采用微波提取3.5~4.5分钟即可达到常规回流提取3小时左右、或超声辅助提取20分钟左右相近的提取率,大大节约了时间。微波提取通过偶极子旋转和离子传导两种方式里外同时加热,无温度梯度升温快速均匀,热效率高。常规回流提取需要在90℃下回流提取3小时左右,热效率较低,并需要大量的冷却水冷却。超声辅助提取需要在75℃左右下提取22分钟,热效率不高并需要配备加热设备,相比之下微波提取在节约能源上更具优势。
(2)选择性好:在微波场中,不同物质对微波能的吸收程度不同,这样就使得原料中的某些区域或某些组分被选择性加热,从而选择性的提取原料中有效成分。实验中发现超声提取液很难过滤,回流提取液颜色较深。
(4)本发明在红旱莲总黄酮纯化上使用NKA–9型大孔树脂,所得红旱莲总黄酮纯化物的纯度高达75–82%,纯化效果好,纯化工艺简单,生产成本低,易实现工业化;黄酮的回收率能达到75–85%,吸附量大、回收率高。
(5)本发明方案提取纯化后的红旱莲总黄酮活性保护好,抗氧化实验展示出良好的抗氧化能力。
具体实施方式
下面结合实例对本发明做进一步说明。
总黄酮含量测定方法及黄酮得率计算
(1)总黄酮含量测定方法:采用NaNO2- Al(NO3)3- NaOH 比色法测定总黄酮含量。具体操作如下:取1 mL提取液于10 mL比色管中,用95%的乙醇定容至5 mL。加入5% NaNO2溶液0.5 mL,摇匀,放置6 min后加入10% Al(NO3)3溶液0.5 mL,摇匀,放置6 min后加入4% NaOH 溶液4 mL摇匀,静置15 min后,以相应溶液空白为参比,于500 nm处测定其紫外吸光度A。
(2)黄酮得率的计算:以芦丁为对照,取质量浓度为0.098 mg/mL的芦丁标准液。准确吸取芦丁标准液 0、1、2、3、4、5 mL于10 mL比色管中,后续操作同样品。得芦丁含量C (mg/mL)与吸光度(A)的回归方程:A = 10.093C + 0.002 , R2 = 0.9996,线性范围为0.098–0.490 mg/mL。通过回归方程得黄酮得率计算式:
黄酮得率
式中 A:紫外吸光值 V:提取液体积(mL) W:样品质量(g)
实施例1
取红旱莲全草原料,经50~60℃干燥至含水量10~15%,粉碎。取粉末20 g,加入800 mL 60%的乙醇溶液,放入微波炉中以640W的功率微波辅助提取4 min。提取结束后冷却至室温,真空过滤并测定黄酮的得率为5.9%。滤液在50℃下进行真空浓缩直至无醇味。用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至3.5 mg/mL并用稀盐酸调节pH至6。以树脂湿重:上样量为1:25的比例配制黄酮与树脂的吸附溶液。将溶液置于35℃的恒温振荡器上振荡吸附6 h。吸附结束后将溶液过滤,用2倍体积的蒸馏水冲洗树脂,并加入200 mL的60%的乙醇并置于振荡器上解吸2 h。解吸结束后过滤解吸液去除树脂,计算的黄酮的回收率为85%。将滤液在50℃下真空浓缩成浓稠的膏状物。将膏状物于–80℃下预冻6 h,–60℃下真空冷冻干燥12 h。最终黄酮的纯度为81%。
实施例2
取红旱莲全草原料,经50~60℃干燥至含水量10~15%,粉碎。取粉末20 g,加入1000 mL 50%的乙醇溶液,放入微波炉中以800W的功率微波辅助提取3.5 min。提取结束后冷却至室温,真空过滤并测定黄酮的得率为5.6%。滤液在50℃下进行真空浓缩直至无醇味。用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至3 mg/mL并用稀盐酸调节pH至5。以树脂湿重:上样量为1:25的比例配制黄酮与树脂的吸附溶液。将溶液置于40℃的恒温振荡器上振荡吸附6 h。吸附结束后将溶液过滤,用2倍体积的蒸馏水冲洗树脂,并加入100 mL的70%的乙醇并置于振荡器上解吸2 h。解吸结束后过滤解吸液去除树脂,计算的黄酮的回收率为81%。将滤液在45℃下真空浓缩成浓稠的膏状物。将膏状物于–80℃下预冻6 h,–60℃下真空冷冻干燥12 h。最终黄酮的纯度为77%。
实施例3
取红旱莲全草原料,经50~60℃干燥至含水量10~15%,粉碎。取粉末20 g,加入600 mL 50%的乙醇溶液,放入微波炉中以640W的功率微波辅助提取4.5min。提取结束后冷却至室温,真空过滤并测定黄酮的得率为5.5%。滤液在45℃下进行真空浓缩直至无醇味。用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至4 mg/mL并用稀氢氧化钠调节pH至7。以树脂湿重:上样量为1:25的比例配制黄酮与树脂的吸附溶液。将溶液置于30℃的恒温振荡器上振荡吸附6 h。吸附结束后将溶液过滤,用2倍体积的蒸馏水冲洗树脂,并加入200mL的70%的乙醇并置于振荡器上解吸2 h。解吸结束后过滤解吸液去除树脂,计算的黄酮的回收率为76%。将滤液在50℃下真空浓缩成浓稠的膏状物。将膏状物于–80℃下预冻6h,–60℃下真空冷冻干燥12 h。最终黄酮的纯度为75%。
实施例4 红旱莲黄酮抗氧化能力的测定
取实施例1纯化的红旱莲总黄酮,配成不同浓度,进行抗氧化能力测定的实验。通过测定红旱莲黄酮对DPPH自由基、羟基自由基、总还原能力、总抗氧化能力以评价红旱莲总黄酮的抗氧化能力。结果表明,同等条件下,红旱莲总黄酮清除DPPH自由基的EC50为0.00797 mg/mL,VC为0.00371 mg/mL,由此看出,红旱莲总黄酮有较好的清除DPPH自由基的能力。红旱莲总黄酮清除羟基自由基的EC50为0.145mg/mL,VC为0.190 mg/mL,由此看出,红旱莲总黄酮有较好的清除羟基自由基的能力(优于VC)。此外,1 mg/mL的红旱莲总黄酮的总还原能力与0.4 mg/mL的VC的总还原能力相当;与VC的总抗氧化能力相比较,红旱莲总黄酮也呈现出一定的抗氧化性。由此可见,红旱莲黄酮是一种比较好的天然抗氧化剂。
实施例5 微波提取与常规提取红旱莲总黄酮对比试验
(1)溶剂回流法:
取红旱莲全草粉末20 g,加入600 mL 60%的乙醇溶液,常规回流提取最佳工艺条件为乙醇浓度60%,固液比1:30,提取温度90℃,提取时间180分钟。此条件下红旱莲总黄酮的提取率为6.3%。
(2)超声辅助提取法:
取红旱莲全草粉末20 g,加入600 mL 60%的乙醇溶液,超声辅助提取的最佳工艺条件为超声功率90W,超声温度75℃,超声时间22分钟,乙醇浓度60%,固液比1:20。此条件下红旱莲总黄酮的提取率为5.4%。
实施例1、2、3提取率与上述常规提取结果相比,可见微波提取在提取时间上,能耗上,都有非常好的效果。
实施例6 红旱莲黄酮提取物不同剂型的制备
a)丸剂: 取红旱莲黄酮提取物、淀粉、交联羧甲基纤维素钠分别粉碎过100目筛,混合均匀,用水泛丸,干燥,每丸含红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg,检验合格,包装即得。
b)口服液: 取红旱莲黄酮提取物,加水溶解,加矫味剂适量,加活性炭5 g,加热30分钟,滤过,加水至1000 ml,滤过,灌封,灭菌,每ml红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg,检验合格,包装即得。
c)糖浆: 取红旱莲黄酮提取物,加水溶解,加蔗糖500 g及防腐剂适量,煮沸使溶解,滤过,加水至1000 ml,滤过,灌封,灭菌,每ml含红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg,检验合格,包装即得。
d)散剂、片剂、胶囊、颗粒剂、浸膏剂: 均按常规工艺制备,每片或每颗胶囊中含红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg;散剂或颗粒剂每小袋为1 g含红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg,经检验合格后,包装即得。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.红旱莲总黄酮的提取方法,其特征在于包含下列步骤:
(1)取红旱莲全草原料经50~60℃干燥至含水量10~15%,粉碎;
(2)取红旱莲全草粉末,按1:30~50的固液比加入体积分数为50~60%的乙醇,以600~800W的微波功率辅助提取3.5~4.5分钟;
(3)真空浓缩直至无醇味,用NKA–9型大孔树脂对红旱莲总黄酮进行静态分离纯化,其工艺条件为:上样浓度3–4 mg/mL、吸附pH5–7、吸附温度30–40℃、解吸乙醇浓度60–70%、解吸液料比10–20:1;收集解吸液;静态分离纯化为用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至上样浓度3–4 mg/mL,调节pH5–7;以树脂湿重:上样量为1:20~25的质量比配制黄酮与树脂的吸附溶液,将溶液置于30~40℃的恒温振荡器上振荡充分吸附,吸附结束后将溶液过滤,蒸馏水冲洗树脂,并加入60–70%的乙醇并置于振荡器上充分解吸,收集解吸液;
(4)将解吸液真空浓缩,干燥。
2.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于所述的干燥为真空冷冻干燥。
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