CN102805759A

CN102805759A - 红旱莲总黄酮及其提取方法与应用

Info

Publication number: CN102805759A
Application number: CN2012103159951A
Authority: CN
Inventors: 张国文; 周佳; 胡明明; 潘军辉
Original assignee: Nanchang University
Current assignee: Nanchang University
Priority date: 2011-12-02
Filing date: 2012-08-31
Publication date: 2012-12-05
Anticipated expiration: 2032-08-31
Also published as: CN102805759B

Abstract

本发明涉及红旱莲总黄酮及其提取方法与应用，属于医药领域。本发明通过原料干燥，粉碎，提取，NKA–9型大孔树脂纯化等步骤对红旱莲总黄酮进行了提取，本方案提取速度快，效率高，得到总黄酮纯度高，回收率高，适合工业化生产。

Description

红旱莲总黄酮及其提取方法与应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及红旱莲黄酮及其提取方法与应用

背景技术

红旱莲为藤黄科金丝桃属植物（Hypericum ascyron L），别称黄海棠等，有平肝、止血、清热解毒功效。用于治疗出血、跌打损伤、疮疖肿痛等症。目前对红旱莲的功效成分研究尚少，申请号200610038949公开了一种提取红旱莲中总黄酮类成分的方法，包括40~95%醇提、浓缩、AB–8、HPD–100大孔树脂或过聚酰胺柱、洗脱、浓缩干燥等步骤。

发明内容

本发明目的在于提供一种快速高效提取红旱莲总黄酮的方法。

本发明的技术方案为：

红旱莲总黄酮，依照下列步骤来制备：

（1）取红旱莲全草原料经50~60℃干燥至含水量10~15%，粉碎；

（2）取红旱莲全草粉末，按1:30~50的固液比加入体积分数为50~60%的乙醇，以600~800W的微波功率辅助提取3.5~4.5分钟;

（3）真空浓缩直至无醇味，用NKA–9型大孔树脂对红旱莲总黄酮进行静态分离纯化，其工艺条件为：上样浓度3–4 mg/mL、吸附pH5–7、吸附温度30–40℃、解吸乙醇浓度60–70%、解吸液料比10–20:1；收集解吸液；

（4）将解吸液真空浓缩，干燥。

红旱莲总黄酮的提取方法，其特征在于包含下列步骤：

（1）取红旱莲全草原料经50~60℃干燥至含水量10~15%，粉碎；

（2）取红旱莲全草粉末，按1:30~50的固液比加入体积分数为50~60%的乙醇，以600~800W的微波功率辅助提取3.5~4.5分钟；

（4）将解吸液真空浓缩，干燥。

前述静态分离纯化可以用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至上样浓度3–4 mg/mL，调节pH5–7；以树脂湿重:上样量为1:20~25的比例配制黄酮与树脂的吸附溶液，将溶液置于30~40℃的恒温振荡器上振荡充分吸附，吸附结束后将溶液过滤，1~3倍体积蒸馏水冲洗树脂，并加入60–70%的乙醇并置于振荡器上充分解吸，收集解吸液。

为了达到更好的提取效果，红旱莲原料粉碎后过40~80目筛。

为了达到更好的解吸效率及保护总黄酮的活性，解吸过程可以在振荡器上实行，2小时即可达到较好的解吸效果。采用真空浓缩及真空冷冻干燥。

本发明还涉及到一种药物组合物，包含所述的红旱莲总黄酮和药学上可接受的辅料。所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、丸剂、浸膏剂、口服液或糖浆剂等常规的药学剂型。

本发明还涉及到红旱莲总黄酮作为抗氧化剂的应用。

本发明的有益效果：

（1）提取时间短，效率高，节约能源。本发明在红旱莲总黄酮提取上采用微波提取3.5~4.5分钟即可达到常规回流提取3小时左右、或超声辅助提取20分钟左右相近的提取率，大大节约了时间。微波提取通过偶极子旋转和离子传导两种方式里外同时加热，无温度梯度升温快速均匀，热效率高。常规回流提取需要在90℃下回流提取3小时左右，热效率较低，并需要大量的冷却水冷却。超声辅助提取需要在75℃左右下提取22分钟，热效率不高并需要配备加热设备，相比之下微波提取在节约能源上更具优势。

（2）选择性好：在微波场中，不同物质对微波能的吸收程度不同，这样就使得原料中的某些区域或某些组分被选择性加热，从而选择性的提取原料中有效成分。实验中发现超声提取液很难过滤，回流提取液颜色较深。

（4）本发明在红旱莲总黄酮纯化上使用NKA–9型大孔树脂，所得红旱莲总黄酮纯化物的纯度高达75–82%，纯化效果好，纯化工艺简单，生产成本低，易实现工业化；黄酮的回收率能达到75–85%，吸附量大、回收率高。

（5）本发明方案提取纯化后的红旱莲总黄酮活性保护好，抗氧化实验展示出良好的抗氧化能力。

具体实施方式

下面结合实例对本发明做进一步说明。

总黄酮含量测定方法及黄酮得率计算

（1）总黄酮含量测定方法：采用NaNO₂- Al(NO₃)₃- NaOH 比色法测定总黄酮含量。具体操作如下：取1 mL提取液于10 mL比色管中，用95%的乙醇定容至5 mL。加入5% NaNO₂溶液0.5 mL，摇匀，放置6 min后加入10% Al(NO₃)₃溶液0.5 mL，摇匀，放置6 min后加入4% NaOH 溶液4 mL摇匀，静置15 min后，以相应溶液空白为参比，于500 nm处测定其紫外吸光度A。

（2）黄酮得率的计算：以芦丁为对照，取质量浓度为0.098 mg/mL的芦丁标准液。准确吸取芦丁标准液 0、1、2、3、4、5 mL于10 mL比色管中，后续操作同样品。得芦丁含量C (mg/mL)与吸光度(A)的回归方程:A = 10.093C + 0.002 , R² = 0.9996，线性范围为0.098–0.490 mg/mL。通过回归方程得黄酮得率计算式：

黄酮得率

式中 A：紫外吸光值 V：提取液体积（mL） W：样品质量（g）

实施例1

取红旱莲全草原料，经50~60℃干燥至含水量10~15%，粉碎。取粉末20 g，加入800 mL 60%的乙醇溶液，放入微波炉中以640W的功率微波辅助提取4 min。提取结束后冷却至室温，真空过滤并测定黄酮的得率为5.9%。滤液在50℃下进行真空浓缩直至无醇味。用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至3.5 mg/mL并用稀盐酸调节pH至6。以树脂湿重:上样量为1:25的比例配制黄酮与树脂的吸附溶液。将溶液置于35℃的恒温振荡器上振荡吸附6 h。吸附结束后将溶液过滤，用2倍体积的蒸馏水冲洗树脂，并加入200 mL的60%的乙醇并置于振荡器上解吸2 h。解吸结束后过滤解吸液去除树脂，计算的黄酮的回收率为85%。将滤液在50℃下真空浓缩成浓稠的膏状物。将膏状物于–80℃下预冻6 h，–60℃下真空冷冻干燥12 h。最终黄酮的纯度为81%。

实施例2

取红旱莲全草原料，经50~60℃干燥至含水量10~15%，粉碎。取粉末20 g，加入1000 mL 50%的乙醇溶液，放入微波炉中以800W的功率微波辅助提取3.5 min。提取结束后冷却至室温，真空过滤并测定黄酮的得率为5.6%。滤液在50℃下进行真空浓缩直至无醇味。用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至3 mg/mL并用稀盐酸调节pH至5。以树脂湿重:上样量为1:25的比例配制黄酮与树脂的吸附溶液。将溶液置于40℃的恒温振荡器上振荡吸附6 h。吸附结束后将溶液过滤，用2倍体积的蒸馏水冲洗树脂，并加入100 mL的70%的乙醇并置于振荡器上解吸2 h。解吸结束后过滤解吸液去除树脂，计算的黄酮的回收率为81%。将滤液在45℃下真空浓缩成浓稠的膏状物。将膏状物于–80℃下预冻6 h，–60℃下真空冷冻干燥12 h。最终黄酮的纯度为77%。

实施例3

取红旱莲全草原料，经50~60℃干燥至含水量10~15%，粉碎。取粉末20 g，加入600 mL 50%的乙醇溶液，放入微波炉中以640W的功率微波辅助提取4.5min。提取结束后冷却至室温，真空过滤并测定黄酮的得率为5.5%。滤液在45℃下进行真空浓缩直至无醇味。用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至4 mg/mL并用稀氢氧化钠调节pH至7。以树脂湿重:上样量为1:25的比例配制黄酮与树脂的吸附溶液。将溶液置于30℃的恒温振荡器上振荡吸附6 h。吸附结束后将溶液过滤，用2倍体积的蒸馏水冲洗树脂，并加入200mL的70%的乙醇并置于振荡器上解吸2 h。解吸结束后过滤解吸液去除树脂，计算的黄酮的回收率为76%。将滤液在50℃下真空浓缩成浓稠的膏状物。将膏状物于–80℃下预冻6h，–60℃下真空冷冻干燥12 h。最终黄酮的纯度为75%。

实施例4 红旱莲黄酮抗氧化能力的测定

取实施例1纯化的红旱莲总黄酮，配成不同浓度，进行抗氧化能力测定的实验。通过测定红旱莲黄酮对DPPH自由基、羟基自由基、总还原能力、总抗氧化能力以评价红旱莲总黄酮的抗氧化能力。结果表明，同等条件下，红旱莲总黄酮清除DPPH自由基的EC₅₀为0.00797 mg/mL，VC为0.00371 mg/mL，由此看出，红旱莲总黄酮有较好的清除DPPH自由基的能力。红旱莲总黄酮清除羟基自由基的EC₅₀为0.145mg/mL，VC为0.190 mg/mL，由此看出，红旱莲总黄酮有较好的清除羟基自由基的能力（优于VC）。此外，1 mg/mL的红旱莲总黄酮的总还原能力与0.4 mg/mL的VC的总还原能力相当；与VC的总抗氧化能力相比较，红旱莲总黄酮也呈现出一定的抗氧化性。由此可见，红旱莲黄酮是一种比较好的天然抗氧化剂。

实施例5 微波提取与常规提取红旱莲总黄酮对比试验

（1）溶剂回流法：

取红旱莲全草粉末20 g，加入600 mL 60%的乙醇溶液，常规回流提取最佳工艺条件为乙醇浓度60%，固液比1:30，提取温度90℃，提取时间180分钟。此条件下红旱莲总黄酮的提取率为6.3%。

（2）超声辅助提取法：

取红旱莲全草粉末20 g，加入600 mL 60%的乙醇溶液，超声辅助提取的最佳工艺条件为超声功率90W，超声温度75℃，超声时间22分钟，乙醇浓度60%，固液比1:20。此条件下红旱莲总黄酮的提取率为5.4%。

实施例1、2、3提取率与上述常规提取结果相比，可见微波提取在提取时间上，能耗上，都有非常好的效果。

实施例6 红旱莲黄酮提取物不同剂型的制备

a)丸剂: 取红旱莲黄酮提取物、淀粉、交联羧甲基纤维素钠分别粉碎过100目筛，混合均匀，用水泛丸，干燥，每丸含红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg，检验合格，包装即得。

b)口服液: 取红旱莲黄酮提取物，加水溶解，加矫味剂适量，加活性炭5 g，加热30分钟，滤过，加水至1000 ml，滤过，灌封，灭菌，每ml红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg，检验合格，包装即得。

c)糖浆: 取红旱莲黄酮提取物，加水溶解，加蔗糖500 g及防腐剂适量，煮沸使溶解，滤过，加水至1000 ml，滤过，灌封，灭菌，每ml含红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg，检验合格，包装即得。

d)散剂、片剂、胶囊、颗粒剂、浸膏剂: 均按常规工艺制备，每片或每颗胶囊中含红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg；散剂或颗粒剂每小袋为1 g含红旱莲黄酮提取物0.1–100 mg，经检验合格后，包装即得。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.红旱莲总黄酮，其特征在于依照下列步骤来制备：

（1）取红旱莲全草原料经50~60℃干燥至含水量10~15%，粉碎；

（4）将解吸液真空浓缩，干燥。

2.如权利要求1所述的红旱莲总黄酮的提取方法，其特征在于包含下列步骤：

（1）取红旱莲全草原料经50~60℃干燥至含水量10~15%，粉碎；

（4）将解吸液真空浓缩，干燥。

3.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于静态分离纯化为用蒸馏水将黄酮浓缩液稀释至上样浓度3–4 mg/mL，调节pH5–7；以树脂湿重:上样量为1:20~25的质量比配制黄酮与树脂的吸附溶液，将溶液置于30~40℃的恒温振荡器上振荡充分吸附，吸附结束后将溶液过滤，蒸馏水冲洗树脂，并加入60–70%的乙醇并置于振荡器上充分解吸，收集解吸液。

4.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于所述的干燥为真空冷冻干燥。

5.一种药物组合物，其特征在于包含权利要求1所述的红旱莲总黄酮和药学上可接受的辅料。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、丸剂、浸膏剂、口服液或糖浆剂。

7.权利要求1所述的红旱莲总黄酮作为抗氧化剂的应用。