CN105440095A - 一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法，所述的提取物β-蜕皮甾酮的含量50%~100%，以露水草为原料，通过包括水回流提取，醇沉、树脂吸附、重结晶等工序制得。采用本发明提取方法获得的露水草提取物中β-蜕皮甾酮的含量大大提高，其纯度达到90%以上。其制备工艺较适合于工业化大规模生产，成本低。

Description

一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法

发明领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法。

发明背景

露水草(CyanotisarachnoidesC.B.Clarke)为鸭趾草科蓝耳属多年草本植物。别名有珍珠露水草、鸡冠参、知母、蛛毛蓝耳草等，露水草以根入药，具有祛风活络，利湿消肿，退虚热等功效，用于治疗风湿性关节炎，四肢麻木，腰腿痛，肾炎水肿，虚热不退等症，还可外用治脚廯、湿疹、刀伤等。在我国，露水草主要分布与云南、广东、广西、贵州、台湾、福建等地区，国外的印度、斯里兰卡、越南、老挝、柬埔寨也有分布。β-蜕皮甾酮是从露水草中提取得到的主要含有一种具有昆虫蜕皮活性的天然甾体化合物，研究发现，露水草是自然界中已知的富含β-蜕皮甾酮较多的植物。β-蜕皮甾酮具有特殊的生理功能，是天然药物、保健食品、天然化妆品的活性有效物质，能促进人体内蛋白质尤其是肝脏蛋白的合成，可排除体内胆固醇的积累，抑制血糖上升，并有降压作用；同时还可用于养蚕业，植源性杀虫剂的开发等领域。目前我国已经有露水草制剂上市，但由于现有技术提取及分离技术的限制，β-蜕皮甾酮的含量并不高，导致药效不明显。本发明是一种快速、高效的富含β-蜕皮甾酮的露水草提取物及其制备方法，对于充分利用露水草资源是非常必要的，而且还能推动露水草种植。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取纯度高、收率高的在露水草中提取、分离β-蜕皮甾酮的方法。

本发明采用了如下技术方案：

一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法，包括以下步骤：

(1)取无腐烂、无霉变质量合格的露水草，剔除杂质；

(2)取处理好的药材，用体积质量比5～40的水回流提取1～5小时，提取次数为1～5次，过滤，合并各次的滤液，并在0.09MPa、50～90℃的条件下减压浓缩至原料重量；

(3)将浓缩液放冷至室温，加乙醇使其醇浓度达到50～80％，放冷，静置，过滤或离心，取醇沉上清液并在0.09MPa、50～80℃的条件下减压浓缩至相对密度1.05～1.25之间；

(4)将醇沉浓缩液过大孔吸附树脂柱；

(5)先用水、5％的乙醇进行洗脱除杂，再用20～95％乙醇洗脱，保留20～95％乙醇的洗脱液。

(6)将20～95％的洗脱液在0.09MPa、50～80℃的条件下减压浓缩至无醇味，用等量的乙酸乙酯萃取，保留乙酸乙酯层；

(7)在0.09MPa、50～80℃的条件下减压浓缩得到乙酸乙酯层，得到β-蜕皮甾酮结晶；

(8)将甲醇加入至β-蜕皮甾酮结晶中，加热使其溶解，再向甲醇溶解液中加入1～5倍样品质量的100～300目的柱层析硅胶，拌匀蒸干，将拌好的硅胶样品研匀；

(9)将拌好的硅胶样品上200～400目的硅胶层析柱，用甲醇：乙酸乙酯(20:1～1:20)洗脱，TLC跟踪监测各馏分，收集富含β-蜕皮甾酮的馏分，在0.09MPa、50～80℃的条件下减压浓缩，析晶；

(10)将硅胶柱分离得到的样品，用甲醇、乙酸乙酯进行重结晶，放置冷藏，滤过，干燥得含量大于90％的β-蜕皮甾酮纯品。

实施例

实施例1

选择质量合格的露水草药材，剔除杂质，加入提取罐中，加入体积质量比为10的水，加热回流提取1.5小时，滤液减压浓缩，加乙醇使其含醇量达到50％，上清液减压浓缩，浓缩液上HPD100大孔树脂吸附柱，分别用水、5％乙醇各洗脱单个体积进行除杂，再用6倍量的40％的洗脱液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩，用等量的乙酸乙酯萃取2次，保留乙酸乙酯层；减压浓缩收干乙酸乙酯、干燥，上硅胶层析柱分离纯化，根据TLC跟踪结果收集馏分，减压浓缩得干燥物，粗品加体积质量比为8的乙酸乙酯进行重结晶，过滤，得β-蜕皮甾酮纯品，用高效液相色谱仪测定，β-蜕皮甾酮的含量大90％以上。

实施例2

选择质量合格的露水草药材，剔除杂质，加入提取罐中，加入体积质量比为12的水，加热回流提取1.5小时，提取两次，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使其含醇量达到60％，上清液减压浓缩，浓缩液上HPD100大孔树脂吸附柱，分别用水、5％乙醇各洗脱单个体积进行除杂，再用体积质量比为6的50％的洗脱液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩，用等量的乙酸乙酯萃取2次，保留乙酸乙酯层；减压浓缩收干乙酸乙酯、干燥，上硅胶层析柱分离纯化，根据TLC跟踪结果收集馏分，减压浓缩得干燥物，粗品加体积质量比为8的乙酸乙酯进行重结晶，过滤，得β-蜕皮甾酮纯品，用高效液相色谱仪测定，β-蜕皮甾酮的含量大90％以上。

实施例3

选择质量合格的露水草药材，剔除杂质，加入提取罐中，加入体积质量比为14的水，加热回流提取1.5小时，提取三次，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使其含醇量达到70％，上清液减压浓缩，浓缩液上HPD100大孔树脂吸附柱，分别用水、5％乙醇各洗脱单个体积进行除杂，再用体积质量比为6的70％的洗脱液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩，用等量的乙酸乙酯萃取3次，保留乙酸乙酯层；减压浓缩收干乙酸乙酯、干燥，上硅胶层析柱分离纯化，根据TLC跟踪结果收集馏分，减压浓缩得干燥物，粗品加体积质量比为10的乙酸乙酯进行重结晶，过滤，得β-蜕皮甾酮纯品，用高效液相色谱仪测定，β-蜕皮甾酮的含量大90％以上。

实施例4

选择质量合格的露水草药材，剔除杂质，加入提取罐中，加入体积质量比为16的水，加热回流提取2小时，滤液减压浓缩，加乙醇使其含醇量达到80％，上清液减压浓缩，浓缩液上HPD100大孔树脂吸附柱，分别用水、5％乙醇各洗脱单个体积进行除杂，再用体积质量比为6的80％的洗脱液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩，用等量的乙酸乙酯萃取4次，保留乙酸乙酯层；减压浓缩收干乙酸乙酯、干燥，上硅胶层析柱分离纯化，根据TLC跟踪结果收集馏分，减压浓缩得干燥物，粗品加体积质量比为12的乙酸乙酯进行重结晶，过滤，得β-蜕皮甾酮纯品，用高效液相色谱仪测定，β-蜕皮甾酮的含量大90％以上。

实施例5

选择质量合格的露水草药材，剔除杂质，加入提取罐中，加入体积质量比为16的水，加热回流提取2小时，提取两次，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使其含醇量达到70％，上清液减压浓缩，浓缩液上HPD600大孔树脂吸附柱，分别用水、5％乙醇各洗脱单个体积进行除杂，再用体积质量比为6的40％的洗脱液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩，用等量的乙酸乙酯萃取4次，保留乙酸乙酯层；减压浓缩收干乙酸乙酯、干燥，上硅胶层析柱分离纯化，根据TLC跟踪结果收集馏分，减压浓缩得干燥物，粗品加体积质量比为10的乙酸乙酯进行重结晶，过滤，得β-蜕皮甾酮纯品，用高效液相色谱仪测定，β-蜕皮甾酮的含量大90％以上。

Claims (4)

1.一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法，其特征是：含β-蜕皮甾酮50%~100%，以露水草为原料，通过包括水回流提取、醇沉、树脂吸附、硅胶柱层析、纯化工序制得，具体包括：

A、原料处理：选择1~2年生的、无腐烂、无霉变质量合格的露水草，剔除杂质；

B、水回流提取：将处理后的原料放入提取罐中，加入体积质量比5~40的水，加热回流提取1~5小时，提取1~5次，滤过，合并滤液；

C、将提取后的滤液在50~90℃减压浓缩至0.5~3g生药材/ml的浓缩液，加乙醇使其含醇量达到50~90%，静置，过滤或离心，取上清液，将醇沉上清液在50~80℃减压浓缩至0.5~3g生药材/ml的浓缩液；

D、树脂吸附：醇沉浓缩液上大孔树脂吸附柱，控制柱流速80~100kg/h，用水洗脱1~10倍柱体积，再用1~10倍柱体积5%~20%的乙醇洗脱除杂，最后用1~12倍柱体积的20~95%的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇；

E、将30~90%的洗脱液在0.09MPa、50~90℃的条件下减压浓缩至无醇味，用等量的乙酸乙酯萃取1-6次，保留乙酸乙酯层，浓缩析晶；

F、硅胶柱层析：将步骤E粗晶中加入溶剂加热溶解，加入0.5~5倍样品重量的柱层析硅胶，蒸干、研细，平铺于柱层析硅胶柱上层，用甲醇：乙酸乙酯（20:1~1:20）混合液进行洗脱，TLC跟踪，收集洗脱液，蒸干析粗晶；

G、纯化：将步骤F粗品中加入体积质量比6~12的乙酸乙酯进行重结晶，过滤，经低温干燥得β-蜕皮甾酮纯品。

2.根据权利要求所述的一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法，其特征是：所述B步骤的加水量体积质量比为5~40；提取时间为1~5h，提取次数为1~5次。

3.根据权利要求所述的一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法，其特征是：所述D步骤的大孔树脂型吸附树脂包括但不限于：D101，AB-8、HPD100、HPD400、HPD100、HPD600、D941型大孔树脂。

4.根据权利要求所述的一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法，其特征是：所述F步骤的溶剂为甲醇、乙醇、无水甲醇、无水乙醇、N.N-二甲基甲酰胺等。