CN102731666A - 一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,是将蛹虫草粉碎,加水混合于30~80℃在酶液或碱液中浸提,离心分离,不溶物重复提取,合并上清液。于50~75℃淀粉酶酶解,离心分离后上清液浓缩至含糖1.5~3.0%,加乙醇,0~4℃下醇沉,离心后干燥得产品。经脱蛋白,透析后,得到虫草粗多糖。可以采用单一酶、双酶、复合酶和超声波酶法,酶可选用蛋白酶,胰蛋白酶等。本发明优化了提取虫草多糖的工艺路线,提高了虫草多糖的得率及提取效率,有效地进行虫草多糖提取、分离纯化。本发明既对农业废弃物的利用提供了一种解决途径,也为虫草多糖的进一步开发提供了技术基础。
Description
技术领域
本发明涉及生物制品领域,更具体地说,涉及从蛹虫草培养基中提取多糖的方法。
背景技术
蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)又称北冬虫夏草,属于子囊菌亚门(Asconlycotina)、核菌纲(Pyrenomycetes)、球壳菌目(Sphaeriales)、麦角菌科(Claviciptiaceae)、虫草属(Cordyceps)与冬虫夏草(Cordyceps Sinensis(Berk)Sacc)同属异种。能够产生多种生物活性物质:多糖、甘露醇、虫草素、甾类等。近年来,蛹虫草人工培养及其活性成分的研究尤为活跃。
虫草多糖是一类高分子复合物,它作为蛹虫草的主要活性成分之一,是蛹虫草中含量最高的药理活性物质。大量药理学实验表明,虫草多糖具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂、抗动脉粥样硬化、保护肾脏、镇痛及抗放作用。
人工栽培的蛹虫草在营养生长阶段在培养基内长着大量的菌丝体,据研究菌丝体中含量最多的活性成分就是虫草多糖。
目前国内外公开报道的有关蛹虫草培养基中虫草多糖的提取,都只限于热水浸提,或利用超声波等辅助物理方法,提取率相对较低,而且其中混有大量的淀粉未经出去,影响虫草多糖的品质。
发明内容
本发明的目的是提供一种工艺方法,以蛹虫草大米或小麦培养基残基为原料,有效提取虫草多糖,并将其进行有效的分离纯化。
为了达到上述目的,本发明提供一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,包括如下步骤:
Step 1、原料处理:利用蛹虫草匀浆制得浆料或者制得干粉;
Step 2、利用所述浆料或干粉基于碱液提取法或酶提取法提取虫草多糖,获得虫草多糖提取液;
Step 3、对所述虫草多糖提取液基于中温淀粉酶清除淀粉,灭活分离,得上清液;
Step 4、将所述上清液,真空浓缩至多糖含量为1.5~3.0%;
Step 5、向浓缩液中加入乙醇,至乙醇最终浓度75~80%,在0~4℃温度下,醇沉12~16小时;
Step 6、醇沉后,以3000~4000转/分钟离心分离,蒸干乙醇,得沉淀状虫草粗多糖。
此外为了得到干燥的虫草粗多糖或粉状产品,Step 6之后可以采取如下步骤:
Step 7、所述沉淀状虫草粗多糖经喷雾干燥或者在-10~-50℃的温度下真空干燥,得到干燥的虫草粗多糖。
Step 8、所述干燥的虫草粗多糖经粉碎制得粉状虫草粗多糖产品。
而为了获得精制虫草多糖,Step 6之后可以采取Step 9、所述沉淀状虫草粗多糖配置成溶液,混合三氯乙酸溶液,在0~4℃条件下振摇后,离心分离,取上清液部分的多糖溶液;重复以上脱蛋白步骤,混合上清液,利用乙醇醇沉后离心分离,取沉淀配成3~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da~8000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后袋内液浓缩,冷冻干燥得精制虫草多糖。
优选方式下,Step 9的具体工艺参数及过程如下:所述沉淀状虫草粗多糖配置成2~10%的溶液,在4℃条件下缓慢加入10%三氯乙酸溶液,体积比为5∶1,搅拌;在此4℃条件下振摇10分钟后,在4℃条件下高速离心10分钟,取上清液重复以上脱蛋白步骤数次,至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量为0.5%。而后向溶液中加入4.5倍体积95%的乙醇醇沉12~16小时,高速离心,取沉淀,配成3~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da~8000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后,袋内液浓缩,冷冻干燥得精制虫草多糖。
此外,为了获得精制虫草多糖,Step 6之后还可以采取Step 10、所述沉淀状虫草粗多糖配置成溶液,加入胃蛋白酶,用HCl调pH1.5~3.0、温度37~42℃条件下,酶解后于90~98℃灭酶,冷却至室温,用NaOH溶液调至中性,离心分离,取上清液利用乙醇醇沉,离心分离,取沉淀配成2~5%的溶液,以体积比为4~5∶1的比例加入氯仿与正丁醇体积比为4~5∶1的Sevag试剂,振摇后静置,离心除去沉淀,取上清液重复以上脱蛋白步骤,而后利用乙醇醇沉,离心分离,取沉淀配成2~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da~8000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后袋内液浓缩,冷冻干燥得精制虫草多糖。
优选方式下,Step 10的具体工艺参数及过程如下:所述沉淀状虫草粗多糖配置成2~10%的溶液,加入溶液重量的0.05~1%的胃蛋白酶,用6mol/L的HCl调pH1.5~3.0%,在37℃条件下酶解1~6小时;而后于90~98℃灭酶10分钟,冷却至室温,用NaOH溶液调至中性,离心10分钟,取上清液,加入3~4.5倍体积95%乙醇,在0~4℃的温度下,醇沉12~16小时左右。离心,取沉淀,配制成2~5%的溶液,加入Sevag试剂,剧烈振摇20分钟,静置30分钟,离心除去沉淀,取上清液重复以上脱蛋白步骤数次,至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量至0.5%;而后向溶液中加入4.5倍体积95%的乙醇醇沉12~16小时,高速离心,取沉淀,配成2~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后,袋内液浓缩,冷冻干燥得精制虫草多糖。
Step 3的优选工艺过程为:向所述虫草多糖提取液加入水解液重量0.05~3.00%的中温淀粉酶,每500~1000mL提取液加入1~10%CaCl2溶液1~5mL,于50~75℃酶解1~2小时,而后在90~98℃条件下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,获得上清液待用。
此外,本发明还提供了如下多种实现Step 2的方法:
A、基于碱液提取法实现步骤S2的具体步骤为:
向所述浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,混匀,以0.5~1mol/L的NaOH或KOH调节pH值为8~9,在40~60℃下,浸提2~6小时后,3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离后的沉淀再加10~40倍的水,调节pH值8~9,重复上述浸提、分离操作1~2次,合并所得上清液,调节pH至中性获得所述虫草多糖提取液。
B、基于单酶提取法实现S2的具体步骤为:
向所述浆料或干粉中加入重量20~100倍的水;选用胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶或者胰蛋白酶中的一种,用碱液或酸液调节pH值至所选用酶的适宜范围,加入酶搅拌酶解,酶解时保持pH值;而后调pH为中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离,所得沉淀加水10~40倍重复上述酶解、分离步骤1~2次,合并几次分离的上清液,即为所述虫草多糖提取液。
C、基于双酶提取法实现S2的具体步骤为:
向所述浆料或干粉中加入重量20~100倍的水;选用胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶或者胰蛋白酶中的一种,选用碱液或酸液调节pH值至所选用酶的适宜范围,加入所选的酶搅拌酶解,酶解时保持pH值;再选用胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶或者胰蛋白酶中的第二种,以碱液或酸液调节pH值至所述第二种酶的适宜范围,加入所述第二种酶搅拌酶解,酶解时保持pH值;而后调pH为中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离,所得沉淀加水10~40倍重复上述酶解、分离步骤1~2次,合并几次分离的上清液,即为所述虫草多糖提取液。
D、基于复合酶提取法实现S2的具体步骤为:
向所述浆料或干粉中加入重量20~100倍的水;选用胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶或者胰蛋白酶中的2~3种,而且所述2~3种酶的适宜pH值和温度相近;用碱液或酸液调节pH值至所选用酶的适宜范围,加入所述2~3种酶搅拌酶解,酶解时保持pH值;而后调pH为中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离,所得沉淀加水10~40倍重复上述酶解、分离步骤1~2次,合并几次分离的上清液,即为所述虫草多糖提取液。
此外,Step 2在选用的酶提取法中,在所述浆料或干粉加入重量20~100倍的水之后,首先在20~80℃浸提2~6小时,而后实施上述B-D任一一种具体的酶提步骤。
或者,Step 2在选用的酶提取法中,在所述浆料或干粉加入重量20~100倍的水之后,首先在20~80℃浸提2~6小时,用20~30KHZ超声波处理30~60分钟;3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离得沉淀;而后基于沉淀加入重量20~100倍的水后实施上述B-D任一一种具体的酶提步骤。
本发明通过蛹虫草培养基残基的处理、提取、醇沉、干燥而得的虫草多糖,粗多糖经除蛋白、分离纯化而得虫草精制多糖。本发明有益效果在于:
1、工艺合理,开创了酶法为主从虫草培养基残基中提取虫草多糖的方法,最大限度将培养基中的虫草多糖提取出来;
2、在提取工艺上,广泛地研究并确定了多种有效的提取方法;
3、***的研究并确定了蛹虫草培养基多糖的分离纯化方法,为丰富食用菌药物作了前期的铺垫;
4、为提高虫草多糖的经济效益提供了技术基础,虫草培养基残基得到充分利用,无废弃物排放,环保增益。
具体实施方式
本发明从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,详细过程如下:
一、原料处理:
原料蛹虫草培养基,新鲜品、干燥品均可。新鲜品可加入5~20倍水以捣碎机捣碎并匀浆制成浆料;干燥品可将其冻干或烘干、粉碎,为粒度在60目以下的干粉,待用。
二、虫草多糖的提取
提取虫草多糖的方法采用碱液提取法和酶提取法。
1、碱液提取法
向浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,混匀,以0.5mol/L的NaOH或KOH调节pH为8~9,在40~60℃下,浸提2~6小时后,离心分离得上清液和沉淀。沉淀再加10~40倍的水,用NaOH或KOH调节pH值至8~9,重复上述操作1~2次,合并所得上清液,用HCl调节pH至中性待用。
2、酶提取法
酶提取法是向浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,用酶在所用酶适宜的pH值和温度等条件下进行酶解,所用的酶可以是单酶、双酶或复合酶,也可与上述提取法相结合,均可达到提取的母体。所述的单一酶、双酶、复合酶的品种为胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶等。
(1)单、双、复合酶酶解法
1)单酶酶解法:向浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,以6mol/L的HCL调pH为1~4,加入原料重量0.05~3.00%的胃蛋白酶,在30~45℃下搅拌酶解1~6小时,水解时保持上述pH值;再以0.5mol/L的NaOH或KOH溶液调pH为中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却至20~30℃后离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀可加水10~40倍重复上述步骤1~2次,离心分离的上清液合并待用,上清液可用NaOH或KOH调整pH值为中性。其他品种酶(胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶)的酶解操作同上,只是用碱液或酸液调至所用酶适宜范围。
2)双酶酶解法:向浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,以6mol/L的HCL调pH为1~4,加入原料重量0.05~3.00%的胃蛋白酶,在30~45℃下搅拌酶解1~4小时,水解时保持上述pH值;再以0.5mol/L的NaOH或KOH溶液调pH为7~9,加入原料重量0.05~3.00%的胰蛋白酶,在30~45℃水浴搅拌酶解1~4小时,水解时保持上述pH值;酶解后用酸调节pH至中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀也可加水10~40倍重复上述步骤1~2次,离心分离的上清液合并待用。其他双酶酶解法操作同上,只是用碱液和酸液调到所用酶适宜的pH范围。
3)复合酶酶解法
向浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,以6mol/L的HCL调节pH为1~4,加入胃蛋白酶、酸性蛋白酶,添加量为溶液重量的0.05~3.00%,两种酶的比例为1∶1,在30~45℃下,搅拌酶解1~4小时后,调节pH至中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀也可加水10~40倍重复上述步骤1~2次,离心分离的上清液合并待用。其他复合酶酶解法操作同上,只是用碱液和酸液调至所用酶适宜的pH范围,同时调节温度于所用酶适宜的范围。
一种复合酶酶解法的实施例为:经处理后的蛹虫草培养基浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,以0.5mol/L的NaOH或KOH溶液调节pH为7~9,加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶,添加量为溶液重量的0.05~3.00%,三种酶的比例为1.0∶0.1~1.0∶0.1~1.0,在20~60℃下,搅拌酶解1~4小时后,调节pH至中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀也可加水10~40倍重复上述步骤1~2次,离心分离的上清液合并。
(2)结合提取法
1)水提和双酶结合法:向浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,在20~80℃浸提2~6小时;以6mol/L的HCL调pH为1~4,加入原料重量0.05~3.00%的胃蛋白酶,在30~45℃下搅拌酶解1~4小时,水解时保持上述pH值;再以0.5mol/L的NaOH或KOH溶液调pH为7~9,加入原料重量0.05~3.00%的胰蛋白酶,在30~45℃水浴搅拌酶解1~4小时,水解时保持上述pH值;酶解后用酸调节pH至中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀也可加水10~40倍重复上述步骤1~2次,离心分离的上清液合并待用。其他双酶酶解法操作同上,只是用碱液和酸液调到所用酶适宜的pH范围。
上述操作由于两种酶水解时需要的pH值不同,所以分前后两次酶解;如果两种酶的最适pH和最适温度相近,则可加两种酶,一次酶解即成。如木瓜蛋白酶和胰蛋白酶水解时需要pH值均为7~9,温度均为37℃,则可以在这一pH值及温度下同时加入这两种酶。
2)超声波和单酶结合法:向浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,用20~30KHZ超声波处理30~60分钟,离心分离得到上清液和沉淀。向不溶物中再添加20~100倍的水,用6mol/L的HCl调节pH至1~4,加入原料重量0.05~3.00%的胃蛋白酶,在30~45℃下搅拌酶解1~4小时,水解时保持上述pH值;再以0.5mol/L的NaOH或KOH溶液调pH为中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀可加水10~40倍重复上述步骤1~2次,离心分离的上清液合并待用。
由上述操作可知,超声波、碱液和单酶、双酶及复合酶都是从虫草培养基中提取虫草多糖的可行方法,仅仅需要调整酶的最适合的pH值及酶的添加量。
上述所有离心分离均为3000~4000转/分钟高速离心10分钟左右的操作。
三、虫草多糖提取液淀粉的清除及浓缩
1、淀粉的清除
向提取液加入原料重量0.05~3.00%的中温淀粉酶(如α淀粉酶),每1000mL提取液加入2%CaCl2溶液1~5mL。于50~75℃酶解1~2小时后于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,上清液待用。
2、浓缩
将上述所得的离心上清液,真空浓缩至多糖含量为1.5~3.0%。
四、虫草多糖的醇沉
向浓缩液中加入3~4倍体积的95%乙醇,至最终乙醇浓度为75~80%,在0~4℃温度下,醇沉12~16小时。
五、虫草粗多糖的离心
醇沉后的多糖,3000~4000转/分钟高速离心10分钟左右,蒸干乙醇,得到的沉淀即虫草粗多糖。
六、虫草粗多糖的干燥
虫草粗多糖的干燥可以用以下任一方法均可达到目的:
1、将纯化得到的离心沉淀,在-10~-50℃的温度下,真空干燥,得到干燥的虫草粗多糖干品。
2、将纯化得到的离心沉淀,用水稀释至比重为1.05~1.10左右,进行喷雾干燥,喷雾干燥设备入口温度160~180℃,出口温度50~60℃,得到干燥的虫草粗多糖。
如果需要,还可将上述得到的虫草多糖,用粉碎机粉碎至160目以下。
此时,用本发明的方法提取的虫草多糖为粗多糖,浅棕色粉末,多糖提取率为10%~30%(干品比),多糖含量为20~47%,水溶性较好。可在食品行业广泛应用。如果再进一步纯化、脱蛋白,多糖含量可以更高,则可以应用于药品行业。
七、除蛋白及小分子,包括如下两种方法:
(1)将上述提取的虫草粗多糖配置成2~10%的溶液,在4℃条件下缓慢加入10%三氯乙酸溶液,体积比为5∶1,搅拌。在此温度下振摇10分钟后,4℃条件下高速离心10min,取上清液重复以上脱蛋白步骤数次,至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量0.5%以下,向溶液中加入4.5倍体积95%的乙醇醇沉过夜,高速离心,取沉淀,配成3~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后,袋内液浓缩,冷冻干燥得精制虫草多糖。
(2)将上述提取的虫草粗多糖或经浓缩配制成2~10%的溶液,加入溶液重量的0.05~1%的胃蛋白酶,用6mol/L的HCl调pH1.5~3.0%、温度37℃条件下,酶解1~6小时后,于90~98℃灭酶10分钟,冷却至室温,用NaOH溶液调至中性,离心10分钟,取上清液,加入3~4.5倍体积95%乙醇,在0~4℃的温度下,醇沉12~16小时左右。离心,取沉淀,配制成2~5%的溶液,加入Sevag试剂(V氯仿∶V正丁醇=5∶1),体积比为5∶1,剧烈振摇20min,静置30min,然后离心除去沉淀,取上清液重复以上脱蛋白步骤数次,至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量0.5%以下,向溶液中加入4.5倍体积95%的乙醇醇沉过夜,高速离心,取沉淀,配成2~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后,袋内液浓缩,冷冻干燥即得精制虫草多糖。
实例1(碱液提取法)
取蛹虫草培养基干粉100g,加入重量2000mL水,混匀,以0.5mol/L的NaOHpH为9,在60℃下,浸提4小时后,离心分离得上清液和沉淀。沉淀再加1000mL的水,调节pH9,重复上述操作1~2次,合并所得上清液,调节pH至中性,加入2g中温淀粉酶,2mL 2%Cacl2于70℃水解60分钟后,90℃灭酶5分钟,冷却,高速离心10分钟。上清液浓缩至多糖含量4%(苯酚硫酸法检测);加入3倍浓缩液体积95%乙醇,4℃下沉淀12小时后4000转/分钟离心10分钟,得到离心沉淀。将此沉淀于-50℃真空冷冻干燥得虫草粗多糖5.5g。苯酚硫酸法测其糖量为8.1%。
实例2(单酶法)
蛹虫草培养基干粉100g,加水8000mL,调节pH值为2.0,加入胃蛋白酶2g,在37℃下水解4小时后,调节pH值为7.0,90℃灭酶10分钟,冷却,4000转/分钟离心10分钟得上清液和沉淀,沉淀加水100mL重复上述操作1~2次,合并上清液。上清液加入0.2g中温淀粉酶,于70℃水解60分钟后,90℃灭酶5分钟,冷却,4000转/分钟离心10分钟。上清液浓缩至80mL,加入95%乙醇240mL,4℃下沉淀12小时后4000转/分钟离心10分钟,得到离心沉淀-50℃真空干燥得粗多糖15.8g,将此粗多糖用水稀释至50mL,加入Sevag试剂(V氯仿∶V正丁醇=5∶1)10mL,剧烈振摇20min,静置30min,然后离心除去沉淀,取上清液重复以上脱蛋白步骤2次,此时多糖溶液中蛋白含量0.35%,向溶液中加入95%乙醇260mL,于4℃下醇沉12小时后4000转/分钟离心。将此沉淀溶于30mL水,7000Da透析48小时后,-50℃真空冷冻干燥,得虫草粗多糖13.1g,苯酚硫酸法测其多糖含量为47.1%。
实例3(双酶法)
取新鲜蛹虫草培养基100g,捣碎后加水200mL,匀浆后加入1800mL的水,以6mol/L的HCL调pH为2.0,1g胃蛋白酶,在38℃下搅拌酶解1~4小时,水解时保持pH值2.0;再以0.5mol/L的NaOH溶液调pH为8.0,加入原料重量1g的胰蛋白酶,在37℃水浴搅拌酶解4小时,水解时保持pH值8.0;酶解后用酸调节pH至中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀加水500mL重复上述步骤2次,合并上清液,调节pH至中性,加入1g中温淀粉酶,于70℃水解60分钟后,90℃灭酶5分钟,冷却,高速离心10分钟。上清液浓缩至4%糖含量(苯酚硫酸法)后,加入3倍浓缩液体积95%乙醇,4℃下沉淀12小时后4000转/分钟离心10分钟,得到离心沉淀用水稀释至比重1.1,-50℃冷冻干燥,得干燥虫草多糖8.6g,苯酚硫酸法测其糖含量43.6%。
实例4(复合酶法)
取蛹虫草培养基干粉100g,加入水2000mL,以6mol/L的HCl调节pH值为2.5,加入胃蛋白酶2g、酸性蛋白酶2g,于40℃下搅拌酶解3小时后,调节pH至中性于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀加水500mL重复上述步骤2次,合并上清液,调节pH至中性,加入1g中温淀粉酶,于70℃水解60分钟后,90℃灭酶5分钟,冷却,高速离心10分钟。上清液浓缩至4%糖含量(苯酚硫酸法)后,加入3倍浓缩液体积95%乙醇,4℃下沉淀12小时后4000转/分钟离心10分钟,得到离心沉淀用水稀释至比重1.1,-50℃冷冻干燥,得干燥虫草多糖11.2g,苯酚硫酸法测其糖含量41.9%。
实例5(结合法)
取蛹虫草培养基干粉100g,加入2000mL水,用20~30KHZ超声波处理40分钟,离心分离得到上清液和沉淀。向沉淀物中再添加2000mL的水,用0.5mol/L的NaOH调节pH至8.0,加入2g胰蛋白酶,在38℃下搅拌酶解3小时,水解时保持上述pH值;再以HCl溶液调pH为中性,于90~98℃下灭活10分钟,冷却后离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀加水500mL重复上述步骤2次,离心分离得上清液合并待用,加入1g中温淀粉酶,于70℃水解60分钟后,90℃灭酶10分钟,冷却,高速离心10分钟。上清液浓缩至4%糖含量(苯酚硫酸法)后,加入3倍体积95%乙醇,4℃下沉淀12小时后4000转/分钟离心10分钟,得到离心沉淀以水稀释至1.1比重,-50℃真空冷冻干燥,得虫草粗多糖9.8g,苯酚硫酸法测其多糖含量为26.3%。
实例6
取蛹虫草培养基干粉100g,加入重量2000mL水,于80℃浸提4小时后,以6mol/L的HCL调pH为2,加入2g胃蛋白酶,在38℃下搅拌酶解3小时,水解时保持上述pH值;再以0.5mol/L的NaOH溶液调pH为8,加入2g胰蛋白酶,在38℃搅拌酶解4小时,水解时保持上述pH值;酶解后用酸调节pH至中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后4000转/分钟离心分离,得上清液和沉淀;上清液待用,沉淀也可加水10~40倍重复上述步骤1~2次,离心分离的上清液合并。加入1g中温淀粉酶,于70℃水解60分钟后,90℃灭酶10分钟,冷却,4000转/分钟离心10分钟。上清液浓缩至4%糖含量(苯酚硫酸法)后,加入3倍体积95%乙醇,4℃下沉淀12小时后4000转/分钟离心10分钟,得到离心沉淀以水稀释至1.1比重,-50℃真空冷冻干燥,得虫草粗多糖10.3g,苯酚硫酸法测其多糖含量为38.3%。
实例7
取实例1所得虫草多糖5g,加入水50mL溶解,加入0.1g胃蛋白酶,以6mol/LHCl调pH为2.0、温度38℃下,酶解4小时后,5分钟升温至98℃灭酶10分钟,冷却至室温,用0.5mol/LNaOH溶液调至中性,离心10分钟,取上清液,加入200mL 95%乙醇,在0℃的温度下,醇沉12小时。离心,取沉淀,加水50mL,加入Sevag试剂(V氯仿∶V正丁醇=5∶1)10mL,剧烈振摇20min,静置30min,然后离心除去沉淀,取上清液重复以上脱蛋白步骤2次,至多糖溶液中蛋白含量0.5%以下,向溶液中加入200mL95%的乙醇醇沉12,高速离心,取沉淀,加水100克,在截留分子量为7000Da的透析袋内透析48小时,透析后,袋内液浓缩,冷冻干燥得浅棕色粉末3.9g,为精制虫草多糖。
实例8
取如实例1得到的虫草多糖5克,加入水50mL,在4℃条件下缓慢加入10%三氯乙酸溶液,体积比为5∶1,搅拌。在此温度下振摇10min后,4℃条件下高速离心10min,取上清液重复以上脱蛋白步骤2次,至多糖溶液中蛋白含量0.5%以下,向溶液中加入160mL95%的乙醇,醇沉12小时,高速离心,取沉淀,加水50mL,在截留分子量为7000Da的透析袋内透析48小时,透析后,袋内液浓缩,冷冻干燥浅色精制虫草多糖2.1g。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (14)
1.一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1、原料处理:利用蛹虫草匀浆制得浆料或者制得干粉;
S2、利用所述浆料或干粉基于碱液提取法或酶提取法提取虫草多糖,获得虫草多糖提取液;
S3、对所述虫草多糖提取液基于中温淀粉酶清除淀粉,灭活分离,得上清液;
S4、将所述上清液,真空浓缩至多糖含量为1.5~3.0%;
S5、向浓缩液中加入乙醇,至乙醇最终浓度75~80%,在0~4℃温度下,醇沉12~16小时;
S6、醇沉后,以3000~4000转/分钟离心分离,蒸干乙醇,得沉淀状虫草粗多糖。
2.根据权利要求1所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,步骤S6之后还包括:S7、所述沉淀状虫草粗多糖经喷雾干燥或者在-10~-50℃的温度下真空干燥,得到干燥的虫草粗多糖。
3.根据权利要求2所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,步骤S7之后还包括:S8、所述干燥的虫草粗多糖经粉碎制得粉状虫草粗多糖产品。
4.根据权利要求1所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,步骤S6之后还包括去除蛋白及小分子的步骤:
S9、所述沉淀状虫草粗多糖配置成溶液,混合三氯乙酸溶液,在0~4℃条件下振摇后,离心分离,取上清液部分的多糖溶液;重复以上脱蛋白步骤,混合上清液,利用乙醇醇沉后离心分离,取沉淀配成3~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da~8000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后袋内液浓缩,冷冻干燥得精制虫草多糖。
5.根据权利要求4所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,步骤S9的具体步骤为:所述沉淀状虫草粗多糖配置成2~10%的溶液,在4℃条件下缓慢加入10%三氯乙酸溶液,体积比为5∶1,搅拌;在4℃条件下振摇10分钟后,在4℃条件下高速离心10分钟,取上清液重复以上脱蛋白步骤数次,至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量为0.5%;
而后向溶液中加入4.5倍体积95%的乙醇醇沉12~16小时,高速离心,取沉淀,配成3~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da~8000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后,袋内液浓缩,冷冻干燥得精制虫草多糖。
6.根据权利要求1所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,步骤S6之后还包括去除蛋白及小分子的步骤:
S10、所述沉淀状虫草粗多糖配置成溶液,加入胃蛋白酶,用HCl调pH1.5~3.0、温度37~42℃条件下,酶解后于90~98℃灭酶,冷却至室温,用NaOH溶液调至中性,离心分离,取上清液利用乙醇醇沉,离心分离,取沉淀配成2~5%的溶液,以体积比为4~5∶1的比例加入氯仿与正丁醇体积比为4~5∶1的Sevag试剂,振摇后静置,离心除去沉淀,取上清液重复以上脱蛋白步骤,而后利用乙醇醇沉,离心分离,取沉淀配成2~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da~8000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后袋内液浓缩,冷冻干燥得精制虫草多糖。
7.根据权利要求6所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,步骤S10的具体步骤为:所述沉淀状虫草粗多糖配置成2~10%的溶液,加入溶液重量的0.05~1%的胃蛋白酶,用6mol/L的HCl调pH1.5~3.0,在37℃条件下酶解1~6小时;而后于90~98℃灭酶10分钟,冷却至室温,用NaOH溶液调至中性,离心10分钟,取上清液,加入3~4.5倍体积95%乙醇,在0~4℃的温度下,醇沉12~16小时左右;
离心,取沉淀,配制成2~5%的溶液,加入Sevag试剂,剧烈振摇20分钟,静置30分钟,离心除去沉淀,取上清液重复以上脱蛋白步骤数次,至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量至0.5%;
而后向溶液中加入4.5倍体积95%的乙醇醇沉12~16小时,高速离心,取沉淀,配成2~5%的多糖液,在截留分子量为7000Da的透析袋内透析48~72小时,透析后,袋内液浓缩,冷冻干燥得精制虫草多糖。
8.根据权利要求1所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,步骤S3的具体步骤为:向所述虫草多糖提取液加入水解液重量0.05~3.00%的中温淀粉酶,每500~1000mL提取液加入1~10%CaCl2溶液1~5mL,于50~75℃酶解1~2小时,而后在90~98℃条件下灭活5~10分钟,冷却后离心分离,获得上清液待用。
9.根据权利要求1-8任一所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,基于碱液提取法实现步骤S2的具体步骤为:
向所述浆料或干粉中加入重量20~100倍的水,混匀,以0.5~1mol/L的NaOH或KOH调节pH值为8~9,在40~60℃下,浸提2~6小时后,3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离后的沉淀再加10~40倍的水,调节pH值8~9,重复上述浸提、分离操作1~2次,合并所得上清液,调节pH至中性获得所述虫草多糖提取液。
10.根据权利要求1-8任一所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,基于单酶提取法实现S2的具体步骤为:
向所述浆料或干粉中加入重量20~100倍的水;选用胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶或者胰蛋白酶中的一种,用碱液或酸液调节pH值至所选用酶的适宜范围,加入酶搅拌酶解,酶解时保持pH值;
而后调pH为中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离,所得沉淀加水10~40倍重复上述酶解、分离步骤1~2次,合并几次分离的上清液,即为所述虫草多糖提取液。
11.根据权利要求1-8任一所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,基于双酶提取法实现S2的具体步骤为:
向所述浆料或干粉中加入重量20~100倍的水;选用胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶或者胰蛋白酶中的一种,选用碱液或酸液调节pH值至所选用酶的适宜范围,加入所选的酶搅拌酶解,酶解时保持pH值;
再选用胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶或者胰蛋白酶中的第二种,以碱液或酸液调节pH值至所述第二种酶的适宜范围,加入所述第二种酶搅拌酶解,酶解时保持pH值;
而后调pH为中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离,所得沉淀加水10~40倍重复上述酶解、分离步骤1~2次,合并几次分离的上清液,即为所述虫草多糖提取液。
12.根据权利要求1-8任一所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,基于复合酶提取法实现S2的具体步骤为:
向所述浆料或干粉中加入重量20~100倍的水;选用胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、纤维素酶或者胰蛋白酶中的2~3种,而且所述2~3种酶的适宜pH值和温度相近;
用碱液或酸液调节pH值至所选用酶的适宜范围,加入所述2~3种酶搅拌酶解,酶解时保持pH值;
而后调pH为中性,于90~98℃下灭活5~10分钟,冷却后3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离,所得沉淀加水10~40倍重复上述酶解、分离步骤1~2次,合并几次分离的上清液,即为所述虫草多糖提取液。
13.根据权利要求1-8任一所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,步骤S2在选用的酶提取法中,在所述浆料或干粉加入重量20~100倍的水之后,首先在20~80℃浸提2~6小时,而后实施具体的酶提步骤。
14.根据权利要求1-8任一所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法,其特征在于,步骤S2在选用的酶提取法中,在所述浆料或干粉加入重量20~100倍的水之后,首先在20~80℃浸提2~6小时,用20~30KHZ超声波处理30~60分钟;3000~4000转/分钟离心10~15分钟分离得沉淀;而后基于沉淀加入重量20~100倍的水后实施具体的酶提步骤。
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---|---|
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---|---|
CN (1) | CN102731666B (zh) |
Cited By (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103130907A (zh) * | 2013-02-16 | 2013-06-05 | 浙江省林业科学研究院 | 一种中国被毛孢蛋白多糖及其制备和用途 |
CN103435712A (zh) * | 2013-08-27 | 2013-12-11 | 王辉 | 一种冬虫夏草胞内多糖的提取方法 |
CN103755825A (zh) * | 2014-01-03 | 2014-04-30 | 南京晓庄学院 | 一种从废弃蛹虫草培养基质中提取虫草基质多糖的方法及其提取物的应用 |
CN104323980A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-02-04 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104337753A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-02-11 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104352423A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-02-18 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104367538A (zh) * | 2014-11-25 | 2015-02-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的紧致乳及其制备方法 |
CN104382836A (zh) * | 2014-11-27 | 2015-03-04 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的原液及其制备方法 |
CN104434760A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-03-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104434759A (zh) * | 2014-11-22 | 2015-03-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的眼霜及其制备方法 |
CN104434762A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-03-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104434761A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-03-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104448014A (zh) * | 2014-11-07 | 2015-03-25 | 大庆师范学院 | 一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用 |
CN104862361A (zh) * | 2015-05-08 | 2015-08-26 | 岳龙龙 | 大米或小麦虫草培养基残基生物转化为水溶性食品的方法 |
CN105349606A (zh) * | 2015-12-16 | 2016-02-24 | 黑龙江众生生物工程有限公司 | 一种联合酶法对蛹虫草多肽的提取方法 |
CN105585639A (zh) * | 2015-12-08 | 2016-05-18 | 泰山医学院 | 一种蛹虫草子实体杂聚多糖及其应用 |
CN107501428A (zh) * | 2017-08-31 | 2017-12-22 | 成都菱祐生物科技有限公司 | 一种高效的蛹虫草子实体多糖提取方法 |
CN108084287A (zh) * | 2017-10-26 | 2018-05-29 | 辽宁省农业科学院大连生物技术研究所 | 从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草多糖的方法 |
CN108272681A (zh) * | 2018-03-28 | 2018-07-13 | 全家百(苏州)生物科技有限公司 | 菌藻活性营养组合物、菌藻活性营养液的制备方法及应用 |
CN108641006A (zh) * | 2018-04-27 | 2018-10-12 | 华南师范大学 | 一种从蛹虫草培养基下脚料中提取并分离纯化多糖的方法 |
CN109053923A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-12-21 | 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 广东虫草多糖ccg-cps及其制备方法与应用 |
CN110106219A (zh) * | 2019-04-25 | 2019-08-09 | 江苏大学 | 一种蛹虫草固体培养基残基再利用的方法 |
WO2019205662A1 (zh) * | 2018-04-27 | 2019-10-31 | 华南师范大学 | 一种蛹虫草培养基多糖及其分离纯化方法和用途 |
CN110819668A (zh) * | 2019-11-11 | 2020-02-21 | 白城市隆盛实业科技有限公司 | 一种淀粉中低聚糖的提取方法 |
CN117815278A (zh) * | 2024-03-06 | 2024-04-05 | 北京逯博士行为医学科技研究院有限公司 | 一种辅助降四高、改善肝肾功能的组合物及其制备方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1372002A (zh) * | 2001-02-26 | 2002-10-02 | 孙悦迎 | 冬虫夏草菌粉与活性免疫虫草多糖冻干粉的生产方法及产品 |
CN1869075A (zh) * | 2006-07-03 | 2006-11-29 | 卢成英 | 香菇多糖的树脂分离纯化方法 |
CN1884571A (zh) * | 2006-05-23 | 2006-12-27 | 贵州芊芊园艺新技术发展公司 | 从石蒜属植物中提取多糖的工艺方法 |
CN1978468A (zh) * | 2005-12-06 | 2007-06-13 | 李德远 | 一种富硒灵芝多糖及其制备方法 |
CN101736053A (zh) * | 2010-02-01 | 2010-06-16 | 南京泽朗医药科技有限公司 | 一种提取灰树花水溶性多糖的工艺 |
CN101744227A (zh) * | 2008-11-28 | 2010-06-23 | 江苏江南生物科技有限公司 | 一种蛹虫草子实体膳食纤维的提取方法 |
CN102002108A (zh) * | 2010-11-25 | 2011-04-06 | 南京泽朗医药科技有限公司 | 一种拐枣多糖的制备方法 |
-
2011
- 2011-04-07 CN CN201110086808.2A patent/CN102731666B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1372002A (zh) * | 2001-02-26 | 2002-10-02 | 孙悦迎 | 冬虫夏草菌粉与活性免疫虫草多糖冻干粉的生产方法及产品 |
CN1978468A (zh) * | 2005-12-06 | 2007-06-13 | 李德远 | 一种富硒灵芝多糖及其制备方法 |
CN1884571A (zh) * | 2006-05-23 | 2006-12-27 | 贵州芊芊园艺新技术发展公司 | 从石蒜属植物中提取多糖的工艺方法 |
CN1869075A (zh) * | 2006-07-03 | 2006-11-29 | 卢成英 | 香菇多糖的树脂分离纯化方法 |
CN101744227A (zh) * | 2008-11-28 | 2010-06-23 | 江苏江南生物科技有限公司 | 一种蛹虫草子实体膳食纤维的提取方法 |
CN101736053A (zh) * | 2010-02-01 | 2010-06-16 | 南京泽朗医药科技有限公司 | 一种提取灰树花水溶性多糖的工艺 |
CN102002108A (zh) * | 2010-11-25 | 2011-04-06 | 南京泽朗医药科技有限公司 | 一种拐枣多糖的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
刘华晶 等: "蛹虫草菌丝体粗多糖提取方法初探", 《东北农业大学学报》 * |
王延兵 等: "九州虫草菌丝体多糖CK3-A的分离纯化及其理化性质研究", 《食品与发酵工业》 * |
Cited By (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103130907B (zh) * | 2013-02-16 | 2014-12-03 | 浙江省林业科学研究院 | 一种中国被毛孢蛋白多糖及其制备和用途 |
CN103130907A (zh) * | 2013-02-16 | 2013-06-05 | 浙江省林业科学研究院 | 一种中国被毛孢蛋白多糖及其制备和用途 |
CN103435712A (zh) * | 2013-08-27 | 2013-12-11 | 王辉 | 一种冬虫夏草胞内多糖的提取方法 |
CN103755825A (zh) * | 2014-01-03 | 2014-04-30 | 南京晓庄学院 | 一种从废弃蛹虫草培养基质中提取虫草基质多糖的方法及其提取物的应用 |
CN103755825B (zh) * | 2014-01-03 | 2017-01-04 | 南京晓庄学院 | 一种从废弃蛹虫草培养基质中提取虫草基质多糖的方法及其提取物的应用 |
CN104448014A (zh) * | 2014-11-07 | 2015-03-25 | 大庆师范学院 | 一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用 |
CN104434759A (zh) * | 2014-11-22 | 2015-03-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的眼霜及其制备方法 |
CN104434761A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-03-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104434760A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-03-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104434762A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-03-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104352423A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-02-18 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104337753A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-02-11 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104323980A (zh) * | 2014-11-23 | 2015-02-04 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的面霜及其制备方法 |
CN104367538A (zh) * | 2014-11-25 | 2015-02-25 | 沈阳源康医疗器械有限公司 | 一种含蛹虫草成分的紧致乳及其制备方法 |
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CN104862361A (zh) * | 2015-05-08 | 2015-08-26 | 岳龙龙 | 大米或小麦虫草培养基残基生物转化为水溶性食品的方法 |
CN105585639A (zh) * | 2015-12-08 | 2016-05-18 | 泰山医学院 | 一种蛹虫草子实体杂聚多糖及其应用 |
CN105585639B (zh) * | 2015-12-08 | 2017-10-27 | 泰山医学院 | 一种蛹虫草子实体杂聚多糖及其应用 |
CN105349606A (zh) * | 2015-12-16 | 2016-02-24 | 黑龙江众生生物工程有限公司 | 一种联合酶法对蛹虫草多肽的提取方法 |
CN107501428A (zh) * | 2017-08-31 | 2017-12-22 | 成都菱祐生物科技有限公司 | 一种高效的蛹虫草子实体多糖提取方法 |
CN108084287A (zh) * | 2017-10-26 | 2018-05-29 | 辽宁省农业科学院大连生物技术研究所 | 从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草多糖的方法 |
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US11111317B2 (en) | 2018-04-27 | 2021-09-07 | South China Normal University | Cordyceps militaris medium polysaccharide, method for separating and purifying same, and use thereof |
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CN108641006B (zh) * | 2018-04-27 | 2021-10-26 | 华南师范大学 | 一种从蛹虫草培养基下脚料中提取并分离纯化多糖的方法 |
WO2019205662A1 (zh) * | 2018-04-27 | 2019-10-31 | 华南师范大学 | 一种蛹虫草培养基多糖及其分离纯化方法和用途 |
CN109053923A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-12-21 | 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 广东虫草多糖ccg-cps及其制备方法与应用 |
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