CN102712635A

CN102712635A - 用于抑制raf激酶的1h-吡唑并[3,4-b]吡啶化合物

Info

Publication number: CN102712635A
Application number: CN2010800482061A
Authority: CN
Inventors: S.格拉德尔; E.莱尔德; D.莫雷诺; R．李; S.M.温格洛斯基
Original assignee: Genentech Inc; Array Biopharma Inc
Current assignee: Genentech Inc; Array Biopharma Inc
Priority date: 2009-08-28
Filing date: 2010-08-27
Publication date: 2012-10-03
Also published as: WO2011025968A1; EP2470532A1; JP2013503194A; US20120157452A1; SG178561A1; CA2772316A1

Abstract

式I化合物适用于抑制RAF激酶。本发明公开了使用式I化合物及其立体异构体、互变异构体和药学上可接受的盐进行体外、原位和体内诊断、预防或治疗哺乳动物细胞的此类病症或相关病理学病状的方法。

Description

用于抑制RAF激酶的1H-吡唑并[3,4-B]吡啶化合物

发明优先权

本申请根据美国法典第35篇第119条(e)款要求2009年8月28日提交的美国临时专利申请第61/238,104号的优先权，所述美国临时专利申请的全部内容并入本文。

技术领域

本文提供了化合物，包含所述化合物的药物组合物，用于制备所述化合物的方法以及所述化合物在治疗中的用途。更具体来说，本文公开了适用于抑制Raf激酶和用于治疗由Raf激酶介导的病症的某些取代的1H-吡唑并[3，4-b]吡啶化合物。

背景技术

Raf/MEK/ERK通路对于细胞存活、生长、增殖和肿瘤发生而言是关键性的。Li，Nanxin等“B-Raf kinase inhibitors for cancer treatment.”CurrentOpinion in Investigational Drugs.第8卷，第6期(2007)：452-456。Raf激酶存在三种同工型，A-Raf、B-Raf和C-Raf。在这三种同工型中，研究显示B-Raf起主要的MEK激活剂的作用。B-Raf是人类癌症中最常突变的基因之一。B-Raf激酶代表了用于基于临床前靶标确认、流行病学和成药性的抗癌治疗的一种优良靶标。

正在开发用于抗癌治疗的B-Raf的小分子抑制剂。Nexavar

(甲苯磺酸索拉非尼)是一种多激酶抑制剂(包括抑制B-Raf)，且被批准用于治疗患有晚期肾细胞癌和不可切除的肝细胞癌的患者。其它Raf抑制剂也已被公开或已进入临床试验，例如GSK-2118436、RAF-265、PLX-4032、PLX-3603和XL-281。其它的B-Raf抑制剂也是已知的，参见例如，美国专利申请公布2006/0189627、美国专利申请公布2006/0281751、美国专利申请公布2007/0049603、美国专利申请公布2009/0176809、国际专利申请公布WO2007/002325、国际专利申请公布WO 2007/002433、国际专利申请公布WO2008/028141、国际专利申请公布WO 2008/079903、国际专利申请公布WO2008/079906和国际专利申请公布WO 2009/012283。

吡唑并吡啶是已知的，参见(例如)国际专利申请公布WO 03/068773和国际专利申请公布WO 2007/013896。

激酶抑制剂是已知的，参见(例如)国际专利申请公布WO 2006/066913、国际专利申请公布WO 2008/028617和国际专利申请公布WO 2008/079909。

发明内容

本文描述了为Raf激酶的抑制剂，特别是B-Raf抑制剂的化合物。某些过度增殖性病症是以Raf激酶功能的过度活化为特征，例如，以蛋白突变或过度表达为特征。因此，所述化合物适用于治疗过度增殖性病症，诸如癌症。

更具体来说，一个方面提供了式I化合物：

及其立体异构体、互变异构体和药学上可接受的盐，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷如本文所定义。

另一个方面提供了预防或治疗由B-Raf调节的疾病或病症的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物施用有效量的式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。此类疾病和病症的实例包括但不限于过度增殖性病症(诸如癌症，包括黑素瘤和其它皮肤癌症)、神经变性、心脏肥大、疼痛、偏头痛和神经创伤疾病。

另一个方面提供了预防或治疗癌症的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物单独施用或与具有抗癌性质的一种或多种其它化合物组合施用有效量的式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。

另一个方面提供了治疗哺乳动物的过度增殖性疾病的方法，其包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。

另一个方面提供了预防或治疗肾病的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物单独施用或与一种或多种其它化合物组合施用有效量的式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。另一个方面提供了预防或治疗多囊性肾病的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物单独施用或与一种或多种其它化合物组合施用有效量的式I化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐。

另一个方面提供了式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐在制备用于治疗过度增殖性疾病的药物中的用途。

另一个方面提供了用于治疗的式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。

另一个方面提供了用于治疗过度增殖性疾病的式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。在进一步实施方案中，所述过度增殖性疾病可能是癌症(或更进一步，是如本文所定义的具体癌症)。

另一个方面提供了用于治疗肾病的式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。在进一步实施方案中，所述肾病可能是多囊性肾病。

另一个方面提供了式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐在制备用于治疗过度增殖性疾病的药物中的用途。在进一步实施方案中，所述过度增殖性疾病可能是癌症(或更进一步，是如本文所定义的具体癌症)。

另一个方面提供了式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐在制备用于治疗肾病的药物中的用途。在进一步实施方案中，所述肾病可能是多囊性肾病。

另一个方面提供了式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐在制备作为B-Raf抑制剂用于对癌症患者进行治疗的药物中的用途。

另一个方面提供了式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐在制备用作进行多囊性肾病治疗的患者的治疗中的B-Raf抑制剂的药物中的用途。

另一个方面提供了包含式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐的药物组合物，其用于治疗过度增殖性疾病。

另一个方面提供了包含式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐的药物组合物，其用于治疗癌症。

另一个方面提供了包含式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐的药物组合物，其用于治疗多囊性肾病。

另一个方面提供了包含式I化合物、其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。

另一个方面提供了用于制备式I化合物的中间体。某些式I化合物可用作其它式I化合物的中间体。

另一个方面包括本文所描述的化合物的制备工艺、分离方法和纯化方法。

附图说明

图1展示对具有皮下LOX异种移植物的裸小鼠的TGI实验。

图2展示对具有皮下LOX异种移植物的裸小鼠的TGI实验。

具体实施方式

现将详细地参考某些实施方案，其实施例在所附的结构和式中说明。虽然会描述所列举的实施方案来，但应理解的是，不希望将本发明局限于那些实施方案。相反地，本发明意欲涵盖所有替代方案、修改方案和等价方案，它们均可包括在如由权利要求书所界定的本发明的范畴之内。本领域技术人员将会认识到与本文所描述的那些方法和材料类似或等价的可用于实践本发明的许多方法和材料。本发明决不限于所描述的方法和材料。在一篇或多篇并入的文献和类似材料与本申请(包括但不限于定义的术语、术语用法、描述的技术等)不同或矛盾的情况下，以本申请为准。

定义

术语“烷基”包括直链或支链碳原子基团。在一个实例中，所述烷基可为1至6个碳原子(C₁-C₆)。在其它实例中，所述烷基可为C₁-C₅、C₁-C₄或C₁-C₃。已对一些烷基部分进行缩写，例如，甲基(“Me”)、乙基(“Et”)、丙基(“Pr”)和丁基(“Bu”)，进一步的缩写用于表示化合物的具体异构体，例如，1-丙基或正丙基(“n-Pr”)、2-丙基或异丙基(“i-Pr”)、1-丁基或正丁基(“n-Bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-Bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-Bu”)、1，1-二甲基乙基或叔丁基(“t-Bu”)等。所述缩写有时与元素缩写和化学结构结合使用，例如，甲醇(“MeOH”)或乙醇(“EtOH”)。

本申请通篇使用的其它缩写可包括(例如)苄基(“Bn”)、苯基(“Ph”)和乙酸(“Ac”)。

术语“烯基”包括具有至少一个不饱和位点(即碳-碳双键)的直链或支链一价烃基，其中所述烯基可任选独立地被一个或多个本文所描述的取代基取代，并且包括具有“顺式”和“反式”取向或者“E”和“Z”取向的基团。在一个实例中，所述烯基可为2至6个碳原子(C₂-C₆)。在其它实例中，所述烯基可为C₂-C₅、C₂-C₄或C₂-C₃。

术语“炔基”包括具有至少一个不饱和位点(即碳-碳三键)的直链或支链一价烃基，其中所述炔基可任选独立地被一个或多个本文所描述的取代基取代。在一个实例中，所述炔基可为2至6个碳原子(C₂-C₆)。在其它实例中，所述炔基可为C₂-C₅、C₂-C₄或C₂-C₃。

术语“烷氧基”是指式-O-(烷基)的基团，其中所述烷基可被取代。

术语“环烷基”是指非芳族、饱和或部分不饱和的烃环基团，其中所述环烷基可任选独立地被一个或多个本文所描述的取代基取代。在一个实例中，所述环烷基可为3至6个碳原子(C₃-C₆)。在其它实例中，环烷基可为C₅-C₆、C₃-C₄或C₃-C₅。

术语“杂环”、“杂环的”和“杂环基”包括饱和或部分不饱和的4至7元环，其含有一个、两个或三个选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子，其余的原子是碳。在一个实例中，所述杂环可为3至6元环。在其他实例中，所述杂环可为4至6元环或5至6元环。

术语“杂芳基”包括5至6元芳环，其含有一个、两个或三个选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子，其余的原子是碳。在一个实例中，杂芳基可为5至6元环。

术语“卤素”是指F、Cl、Br或I。

术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”是指治疗性、预防性、治标性或防预性措施。有益的或所需的临床结果包括但不限于症状的减轻、疾病程度的减小、疾病状态的稳定(即不恶化)、疾病进程的延缓或减慢、疾病状态的改善或缓和，以及缓解(无论是部分缓解或是全部缓解)，无论是可检测或是不可检测。“治疗”也可意指与不接受治疗时的预期存活相比延长的存活。需要治疗的对象包括已经患有病状或病症的对象，以及易患病状或病症的对象或要预防其病状或病症的对象。

短语“治疗有效量”或“有效量”意指当对需要此治疗的哺乳动物施用时，足以(i)治疗或预防特定疾病、病状或病症，(ii)减弱、改善或消除所述特定疾病、病状或病症的一种或多种症状，或(iii)预防或延缓本文所描述的特定疾病、病状或病症的一种或多种症状的发作的式I化合物的量。对应于此量的化合物的量将取决于诸如特定的化合物、疾病病状和其严重性、需要治疗的哺乳动物的体征(identity)(例如体重)而变化，但是虽然如此仍可由本领域技术人员依惯例确定。

术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物的通常以异常或失调的细胞生长为特征的生理病状。“肿瘤”包含一种或多种癌性细胞。癌症的实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。此类癌症的更特定实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)，腹膜癌，肝细胞癌，胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤，子***，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝细胞瘤，乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，肾癌，***癌，外阴癌，甲状腺癌，肝癌，***癌，***癌，皮肤癌(包括黑素瘤)以及头颈癌。

短语“药学上可接受的”表示所述物质或组合物在化学上和/或毒理学上与构成制剂的其它成分和/或用所述制剂治疗的哺乳动物是相容的。

本文所使用的短语“药学上可接受的盐”是指本文所描述的化合物的药学上可接受的有机或无机盐。

本发明化合物也包括所述化合物的其它盐，其不必要是药学上可接受的盐，并且其可适于用作用于制备和/或纯化本文所描述的化合物和/或用于分离本文所描述的化合物的对映异构体的中间体。

术语“哺乳动物”是指患有本文所描述的疾病或有患上本文所描述的疾病风险的温血动物，包括但不限于豚鼠、犬、猫、大鼠、小鼠、仓鼠和包括人的灵长类动物。

B-RAF抑制剂化合物

本文提供的是可有效用于治疗由B-Raf调节的疾病、病状和/或病症的化合物及其药物制剂。

一个实施方案提供式I化合物：

及其立体异构体、互变异构体和药学上可接受的盐，其中：

R¹选自：

氢、

卤素、

CN、

NR^aR^b、

OR^c、

SR^d、

任选被1至3个R^e基团取代的苯基、

任选被C₁-C₄烷基取代的5-6元杂芳基、

任选被卤素或C₁-C₄烷基取代的饱和或部分不饱和C₃-C₆环烷基、

任选被C₁-C₄烷基取代的饱和或部分不饱和4-6元杂环基、

任选被卤素、OR^c或NR^aR^b取代的C₂-C₆炔基、

任选被卤素、OR^c或NR^aR^b取代的C₂-C₆烯基，或

任选被1至3个R^f基团取代的C₁-C₆烷基；

R²和R³独立地选自氢、卤素、C₁-C₃烷基和C₁-C₃烷氧基；

R⁴和R⁵独立地选自氢、卤素或C₁-C₃烷基；

R⁶选自苯基、5-6元杂芳基、9-10元双环杂环基或9-10元双环杂芳基，其中所述苯基、杂芳基和杂环基任选被1、2或3个R^g基团取代；

R⁷是氢或甲基；

R^a和R^b独立地选自氢、苯基和任选被氧代取代的C₁-C₄烷基；

R^c选自4-6元杂环基和C₁-C₆烷基，所述基团任选被卤素、OH、OCH₃、C₃-C₆环烷基、4-6元杂环基或NR^aR^b取代；

R^d是C₁-C₆烷基；

每个R^e独立地选自卤素、CF₃、C₁-C₄烷基或C₁-C₄烷氧基，其中所述烷基或烷氧基任选被OH、NR^aR^b或任选被C₁-C₃烷基取代的5-6元杂环基取代；

每个R^f独立地选自卤素、OH、OCH₃、氧代、NR^aR^b或C₃-C₆环烷基；和

每个R^g选自卤素、CN、SO₂CH₃、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基或C₃-C₆环烷基，其中所述烷基任选被卤素或3-6元杂环基取代。

在某些实施方案中，每个R^g选自卤素、CN、SO₂CH₃、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，其中所述烷基任选被卤素或3-6元杂环基取代。

在某些实施方案中，R¹选自NR^aR^b、OR^c、SR^d、5-6元杂芳基、C₃-C₆环烷基和任选被1至3个R^f基团取代的C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，R^a和R^b独立地选自氢和任选被烷基取代的C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R^c是任选被卤素、OH、OCH₃或NR^aR^b取代的C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，R^d是C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，每个R^f是卤素。

在某些实施方案中，R¹选自NR^aR^b、OR^c、SR^d、5-6元杂芳基、C₃-C₆环烷基和任选被1至3个R^f基团取代的C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，R^a和R^b独立地选自氢和C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R^c是任选被卤素、OH、OCH₃或NR^aR^b取代的C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，R^d是C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，每个R^f是卤素。

在某些实施方案中，R¹选自甲基、乙基、异丙基、CF₃、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂OCH₃、-OCH₂CH₂N(CH₃)₂、-NHCH₃、-N(CH₃)₂、-NC(＝O)CH₃、-SCH₃、环丙基、1-甲基-环丙基和呋喃-2-基。

在某些实施方案中，R¹选自甲基、乙基、异丙基、CF₃、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂OCH₃、-OCH₂CH₂N(CH₃)₂、-NHCH₃、-N(CH₃)₂、-SCH₃、环丙基、1-甲基-环丙基和呋喃-2-基。

在某些实施方案中，R¹是任选被1至3个R^f基团取代的C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，每个R^f独立地选自卤素、OH、OCH₃、氧代、NR^aR^b或C₃-C₆环烷基。在某些实施方案中，每个R^f是卤素。在某些实施方案中，R¹选自甲基、乙基、异丙基和CF₃。

在某些实施方案中，R¹是OR^c。在某些实施方案中，R^c选自4-6元杂环基和C₁-C₆烷基，所述基团任选被卤素、OH、OCH₃、C₃-C₆环烷基、4-6元杂环基或NR^aR^b取代。在某些实施方案中，R^c是任选被卤素、OH、OCH₃或NR^aR^b取代的C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，R^a和R^b独立地选自氢和C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R¹选自-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂OCH₃和-OCH₂CH₂N(CH₃)₂。

在某些实施方案中，R¹是NR^aR^b。在某些实施方案中，R^a和R^b独立地选自氢、苯基和任选被氧代取代的C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R^a和R^b独立地选自氢和任选被烷基取代的C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R¹选自-NHCH₃、-N(CH₃)₂和-NC(＝O)CH₃。

在某些实施方案中，R¹是NR^aR^b。在某些实施方案中，R^a和R^b独立地选自氢、苯基和任选被氧代取代的C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R^a和R^b是独立地选自氢和C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R¹选自-NHCH₃和-N(CH₃)₂。

在某些实施方案中，R¹是SR^d。在某些实施方案中，R^d是C₁-C₆烷基。在某些实施方案中，R¹是-SCH₃。

在某些实施方案中，R¹是任选被卤素或C₁-C₄烷基取代的C₃-C₆环烷基。在某些实施方案中，R¹是C₃-C₆环烷基。在某些实施方案中，R¹选自环丙基和1-甲基-环丙基。

在某些实施方案中，R¹是任选被C₁-C₄烷基取代的5-6元杂芳基。在某些实施方案中，R¹是5-6元杂芳基。在某些实施方案中，R¹是5-6元杂芳基，其中所述杂芳基含有一个、两个或三个选自氧、氮和硫的杂原子。在某些实施方案中，R¹是5-6元杂芳基，其中所述杂芳基是呋喃基。在某些实施方案中，R¹是呋喃-2-基。

在某些实施方案中，R²、R³、R⁴和R⁵独立地选自氢、卤素和C₁-C₃烷基。在某些实施方案中，R²、R³、R⁴和R⁵独立地选自氢、卤素和甲基。在某些实施方案中，R²、R³、R⁴和R⁵独立地选自氢、F、Cl和甲基。

在某些实施方案中，R²和R³独立地选自氢、卤素和C₁-C₃烷氧基和C₁-C₃烷氧基。

在某些实施方案中，R²和R⁴独立地选自氢、卤素或C₁-C₃烷基；R³是Cl；并且R⁵是氢或F。在某些实施方案中，R²和R⁴独立地选自氢、F、Cl和甲基；R³是Cl；并且R⁵是氢或F。

在某些实施方案中，R²是氢、卤素、C₁-C₃烷基或C₁-C₃烷氧基。

在某些实施方案中，R²是氢。

在某些实施方案中，R²是卤素。在某些实施方案中，R²是F或Cl。

在某些实施方案中，R²是C₁-C₃烷基。在某些实施方案中，R²是甲基。

在某些实施方案中，R³是氢、卤素、C₁-C₃烷基或C₁-C₃烷氧基。

在某些实施方案中，R³是氢。

在某些实施方案中，R³是卤素。在某些实施方案中，R³是F或Cl。

在某些实施方案中，R³是C₁-C₃烷基。在某些实施方案中，R³是甲基。

在某些实施方案中，R³是Cl。

在某些实施方案中，R³是氢。

在某些实施方案中，R⁴是氢、卤素或C₁-C₃烷基。

在某些实施方案中，R⁴是氢。

在某些实施方案中，R⁴是卤素。在某些实施方案中，R⁴是F或Cl。

在某些实施方案中，R⁵是氢、卤素或C₁-C₃烷基。在某些实施方案中，R⁵是氢或卤素。在某些实施方案中，R⁵是氢或F。

在某些实施方案中，R²和R³是F；并且R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²是F；R³是Cl；并且R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²是Cl；R³是F；并且R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²是F，并且R³、R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²、R⁴和R⁵是氢，并且R³是F。

在某些实施方案中，R³和R⁴是F，并且R²和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²是Cl，并且R³、R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²、R³和R⁴是F，并且R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²是F；R³是甲基；并且R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²是甲基；R³是F；并且R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²是F，并且R³、R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²是Cl，并且R³、R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R³是F，并且R²、R⁴和R⁵是氢。

在某些实施方案中，R²、R³和R⁵是F，并且R⁴是氢。

在某些实施方案中，式I中的残基

选自：

其中波浪线表示残基在式I中的连接点。

在某些实施方案中，R⁶选自苯基、5-6元杂芳基、9-10元双环杂环基或9-10元双环杂芳基，其中所述苯基、杂芳基和杂环基任选被1、2或3个R^g基团取代。在某些实施方案中，R^g选自卤素、CN、SO₂CH₃、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，其中所述烷基任选被卤素或3-6元杂环基取代。在某些实施方案中，R⁶选自苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、4-碘苯基、2，4-二氟苯基、2-氟代-4-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-三氟甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氰基苯基、4-(甲基磺酰基)苯基、3-(吗啉代甲基)苯基、4-(吗啉代甲基)苯基、4-环丙基苯基、呋喃-2-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基、5-甲基异噁唑-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、2-甲基噻唑-4-基、4-甲基噻唑-5-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、5-氯吡啶-2-基、5-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-3-基、5-(三氟甲基)吡啶-2-基、6-(三氟甲基)吡啶-3-基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、吡嗪-2-基、2，3-二氢苯并呋喃-5-基、苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基、喹啉-6-基和1H-吲哚-4-基。

在某些实施方案中，R⁶选自苯基、5-6元杂芳基、9-10元双环杂环基或9-10元双环杂芳基，其中所述苯基、杂芳基和杂环基任选被1、2或3个R^g基团取代。在某些实施方案中，R^g选自卤素、CN、SO₂CH₃、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，其中所述烷基任选被卤素或3-6元杂环基取代。在某些实施方案中，R⁶选自苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、4-碘苯基、2，4-二氟苯基、2-氟代-4-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-三氟甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氰基苯基、4-(甲基磺酰基)苯基、3-(吗啉代甲基)苯基、呋喃-2-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基、5-甲基异噁唑-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、2-甲基噻唑-4-基、4-甲基噻唑-5-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、5-氯吡啶-2-基、5-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-3-基、5-(三氟甲基)吡啶-2-基、6-(三氟甲基)吡啶-3-基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、吡嗪-2-基、2，3-二氢苯并呋喃-5-基、苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基和喹啉-6-基。

在某些实施方案中，R^g选自卤素、CN、SO₂CH₃、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基或C₃-C₆环烷基，其中所述烷基任选被卤素或3-6元杂环基取代。在某些实施方案中，R^g选自卤素、SO₂CH₃、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基或C₃-C₆环烷基，其中所述烷基任选被卤素或3-6元杂环基取代。在某些实施方案中，R^g选自卤素和C₁-C₃烷基，其中所述烷基任选被卤素或3-6元杂环基取代。

在某些实施方案中，R^g选自卤素、CN、SO₂CH₃、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，其中所述烷基任选被卤素或3-6元杂环基取代。在某些实施方案中，R^g选自卤素、SO₂CH₃、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，其中所述烷基任选被卤素或3-6元杂环基取代。在某些实施方案中，R^g选自卤素和C₁-C₃烷基，其中所述烷基任选被卤素取代。

在某些实施方案中，R⁶任选被1、2或3个R^g基团取代的苯基。在某些实施方案中，R⁶选自苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、4-碘苯基、2，4-二氟苯基、2-氟代-4-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-三氟甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氰基苯基、4-(甲基磺酰基)苯基、3-(吗啉代甲基)苯基、4-(吗啉代甲基)苯基和4-环丙基苯基。

在某些实施方案中，R⁶是任选被1、2或3个R^g基团取代的苯基。在某些实施方案中，R⁶选自苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、4-碘苯基、2，4-二氟苯基、2-氟代-4-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-三氟甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氰基苯基、4-(甲基磺酰基)苯基和3-(吗啉代甲基)苯基。

在某些实施方案中，R⁶是任选被1、2或3个R^g基团取代的5-6元杂芳基。在某些实施方案中，R⁶是任选被1、2或3个R^g基团取代的5-6元杂芳基，其中所述杂芳基含有一个、两个或三个选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子。在某些实施方案中，R⁶是任选被1、2或3个R^g基团取代的5-6元杂芳基，其中所述杂芳基选自呋喃基、吡唑基、异噁唑基、噻唑基、吡啶基、嘧啶基和吡嗪基。在某些实施方案中，R⁶选自呋喃-2-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基、5-甲基异噁唑-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、2-甲基噻唑-4-基、4-甲基噻唑-5-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、5-氯吡啶-2-基、5-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-3-基、5-(三氟甲基)吡啶-2-基、6-(三氟甲基)吡啶-3-基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基和吡嗪-2-基。

在某些实施方案中，R⁶是任选被1、2或3个R^g基团取代的9-10元双环杂环基。在某些实施方案中，R⁶是9-10元双环杂环基。在某些实施方案中，R⁶是9-10元双环杂环基，其中所述杂环基含有一个、两个或三个选自氧、氮和硫的杂原子。在某些实施方案中，R⁶是9-10元双环杂环基，其中所述杂环基选自二氢苯并呋喃基、苯并间二氧杂环戊烯基。在某些实施方案中，R⁶选自2，3-二氢苯并呋喃-5-基和苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基。

在某些实施方案中，R⁶是任选被1、2或3个R^g基团取代的9-10元双环杂芳基。在某些实施方案中，R⁶是9-10元双环杂芳基。在某些实施方案中，R⁶是9-10元双环杂芳基，其中所述杂芳基含有一个、两个或三个选自氧、氮和硫的杂原子。在某些实施方案中，R⁶是9-10元双环杂芳基，其中所述杂芳基是喹啉基或吲哚基。在某些实施方案中，R⁶是喹啉-6-基或1H-吲哚-4-基。

在某些实施方案中，R⁶是任选被1、2或3个R^g基团取代的9-10元双环杂芳基。在某些实施方案中，R⁶是9-10元双环杂芳基。在某些实施方案中，R⁶是9-10元双环杂芳基，其中所述杂芳基含有一个、两个或三个选自氧、氮和硫的杂原子。在某些实施方案中，R⁶是9-10元双环杂芳基，其中所述杂芳基是喹啉基。在某些实施方案中，R⁶是喹啉-6-基。

在某些实施方案中，R⁷选自氢和甲基。

在某些实施方案中，R⁷是氢。

在某些实施方案中，R⁷是甲基。

应理解的是，某些本文所描述的化合物可能含有不对称或手性中心，并且因此以不同的立体异构体形式存在。意欲本文所描述的化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及其混合物(诸如外消旋混合物)，均构成本发明化合物的部分。

在本文中展示的结构中，当没有指定任何特定的手性原子的立体化学时，则涵盖所有的立体异构体并且将其作为本文所描述的化合物予以包括。当通过表示特定构型的实心楔形或虚线来指定立体化学时，则该立体异构体由此指定和定义。

还应理解的是，式I化合物包括互变异构形式。互变异构体是可通过互变异构作用相互转化的化合物。这种互变异构作用通常由于氢原子或质子的迁移而发生，伴有单键和邻近双键的转换。举例来说，1H-吡唑并[3，4-b]吡啶基是一种互变异构形式，而7H-吡唑并[3，4-b]吡啶基是另一种互变异构形式。式I的其它互变异构体也可在其它位置形成。式I化合物意欲包括所有互变异构形式。

式I化合物包括如式II所示的互变异构体7H-吡唑并[3，4-b]吡啶：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷如本文所定义。

一个实施方案包括式I化合物并且在实施例1-78中命名。一个实施方案包括式I化合物并且在实施例1-21、23-67和69-78中命名。一个实施方案包括式I化合物并且在实施例3-20、23、25-66、69-74和76-78中命名。一个实施方案包括式I化合物和在实施例4、19、29-31、42-48、51、55、56、60、62-66、71-74和77中命名。

还应理解的是，某些式I化合物可用作其它式I化合物的中间体。

应进一步理解，本文所描述的化合物可以非溶剂化形式以及与药学上可接受的溶剂(诸如水、乙醇等)溶剂化的形式存在，并且所述化合物意欲包涵盖溶剂化形式和非溶剂化形式。

还应进一步理解的是，式I化合物包括不同点仅在于存在一种或多种同位素富集的原子的化合物。例如，一个或多个氢原子被氘或氚替换，或一个或多个碳原子被¹³C或¹⁴C富集碳替换的式I化合物是在本发明的范畴之内。

化合物的合成

本文所描述的化合物可通过包括与化学领域中众所周知方法类似的方法的合成途径，特别是根据纳入本文的描述的合成途径来合成。起始物质通常可以从诸如Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)、Alfa Aesar(Ward Hill，MA)或TCI(Portland，OR)的商业来源获得，或使用本领域技术人员熟知的方法容易地制备(例如，通过通常在Louis F.Fieser和Mary Fieser，Reagents for Organic Synthesis.v.1-23，New York：Wiley 1967-2006版(也可通过WileyInterScience

网站得到)或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie，4，Aufl编.Springer-Verlag，Berlin，包括增刊(也可通过Beilstein在线数据库得到)中描述的方法来制备)。

出于说明的目的，方案1-1展展示用于制备本文所描述的化合物以及关键中间体的一般方法。对于各个反应步骤的更详细的描述，参见以下实施例部分。本领域技术人员应理解，其它合成途径可用于合成所述化合物。虽然在以下方案中描述并讨论具体的起始物质和试剂，但是可轻易替换为其它起始物质和试剂以提供各种衍生物和/或反应条件。此外，通过以下描述的方法制备的许多化合物可根据本公开，使用本领域技术人员熟知的常规化学方法进行进一步修饰。

方案1

方案1展示用于制备苯甲酸3的一般方法，其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷如本文所定义。将苯甲酸1用路易斯酸(诸如BBr₃)去甲基以得到羟基苯甲酸2。可在碱(诸如NaH或K₂CO₃)存在下，在溶剂(诸如二甲基甲酰胺(“DMF”)或四氢呋喃(“THF”))中，将化合物2烷基化(其中X是卤素)，以得到苯甲酸/醚3。或者，可在MeOH中，经由(诸如)用TMSN₂的酯化作用将化合物2保护，以得到酯4(其中R’是甲基)。烷基化得到醚5之后，在溶剂(诸如MeOH、THF或其混合物)中用碱水溶液(诸如NaOH或KOH)的去保护提供化合物3。

方案2

方案2展示用于制备式I化合物的一般方法，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷如本文所定义。在存在或缺少添加剂(诸如羟基苯并***(“HOBt”))的情况下，在合适的溶剂(诸如DMF、THF或乙腈)中，用活化试剂(诸如N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(“EDCI”))进行5-氨基吡唑并吡啶6与酸3的偶联。

方案3

方案3展示制备化合物10的一般方法，其中R¹如本文所定义。α-氰基酮9是通过α-取代的酮7(其中X是卤素或合适的离去基团(诸如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯))与NaCN或KCN在合适的有机溶剂(诸如DMF)中反应来制备。或者，α-氰基酮9是通过用CH₃CN和合适的碱(诸如NaH或NaOtBu)处理酯8(其中R”是甲基)来制备。在约80℃的温度下，使α-氰基酮9与肼在溶剂(诸如EtOH)中反应，提供3-取代-1H-吡唑-5-胺10。

方案4

方案4展示用于制备化合物6的一般方法，其中R¹如本文所定义。在约90℃的温度下，将3-取代-1H-吡唑-5-胺10在合适的溶剂(诸如AcOH或水)中用硝基丙二醛钠一水合物11处理，得到3-取代-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶12。化合物12中的硝基官能团的标准还原(诸如，通过用Pd/C和H₂处理)，得到3-取代-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺6。

方案5

方案5展示用于制备合物6a的一般方法，其中R^c和R^d如本文所定义。在90℃下，将1H-吡唑-5-胺10a在合适的溶剂(诸如AcOH或水)中用硝基丙二醛钠一水合物11处理，得到5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶12a。在碱(诸如NaOH)存在下，(例如)通过溴将吡唑并吡啶12a溴化以得到溴硝基吡唑12b。在高温(例如，120℃至160℃)下，用氮亲核试剂处理化合物12b，得到3-氨基吡唑并[3，4-b]吡啶12c。化合物12c中的硝基官能团的标准还原(诸如，通过用Pd/C和H₂处理)，得到3-N-取代-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺6a。

方案6

方案6展示用于制备式Ia化合物的一般方法，其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R^e如本文所定义。在HCl存在下，在有机溶剂(诸如***)中，通过用醇R^eOH的处理将丙二睛13转化为亚氨酸酯HCl盐14。然后，在合适的溶剂(诸如MeOH)中使化合物14与肼单盐酸盐缩合以提供3-烷氧基-1H-吡唑-5-胺10b。在90℃下，在合适的溶剂(诸如AcOH或H₂O)中，用硝基丙二醛钠一水合物11将10b环化，得到3-烷氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶12d。化合物12d中的硝基官能团的标准还原(诸如，通过用Pd/C和H₂处理)，得到3-取代-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺6b。标准的酰胺键偶联提供式Ia的吡唑并吡啶。

方案7

方案7说明用于安置R^1a基团以提供式Ib化合物的方法，其中R^1a是芳基或杂芳基。可在溶剂(诸如二氯甲烷或THF)中，在碱(诸如K₂CO₃或NaH)存在下，(例如)通过使用甲苯磺酰氯将吡唑并吡啶15(其中X是卤素)用甲苯磺酰基保护。(例如)用硝酸四丁铵的硝化，接着在标准条件(诸如SnCl₂二水合物)下将硝基还原，提供5-胺基吡唑并吡啶16，其中PG是氮保护基(诸如甲苯磺酰基)。在标准条件下使苯胺16和苯甲酸3偶联以提供酰胺17。在适当的温度下(例如0℃至回流)，在碱性条件下(例如用K₂CO₃)将保护基除去，接着通过在催化剂(诸如四(三苯基膦)钯)存在下的交叉偶联反应(例如Suzuki、Stille或Negishi反应)，可安置各种芳基和杂芳基，从而提供式Ib的吡唑并吡啶。

方案8

方案8说明用于在R²位置安置Me基团以提供式Ic化合物的方法，其中R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R’如本文所定义。经由(诸如)用TMSN₂的酯化作用将苯甲酸1a(其中X是卤素，优选Br或I)保护，以得到酯18。将酯18用路易斯酸(诸如BBr₃)去甲基，并然后重新酯化以得到酚酯4a。可在碱(诸如NaH或K₂CO₃)存在下，在溶剂(诸DMF或THF)中，将化合物4a烷基化(其中X是卤素)，以得到苯甲酸/醚5a。在溶剂(诸如MeOH、THF或其混合物)中用碱水溶液(诸如NaOH或KOH)的去保护，接着酰胺键偶联提供式Ic的吡唑并吡啶。

方案9

方案9说明用于制备3-取代-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺6b的替代方法，其中R^e如本文所定义。将氨基吡唑10c用保护基保护，从而得到化合物19，其中PG为保护基(诸如甲苯磺酰基(“tosyl”))。在90℃下，在合适的溶剂(诸如AcOH或H₂O)中，用硝基丙二醛钠一水合物11将19环化，得到受保护的吡唑并吡啶20。经由利用(例如)三苯基膦和偶氮二羧酸二乙酯的Mitsunobu反应将化合物20用醇转化为醚。在碱性条件下(诸如K₂CO₃水溶液)，以THF和MeOH作为溶剂进行去保护，接着通过在标准条件下的还原提供3-取代-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺6b。

方案10

方案10说明用于制备式I化合物的替代方法，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷如本文所定义。在合适的溶剂(诸如乙腈)中，用活化试剂(诸如EDCI)进行5-氨基吡唑并吡啶6与酸21的偶联以提供醇22。醇22与适当取代的醇23在活化试剂(诸如三苯基磷化氢和偶氮二羧酸二乙酯)存在下的Mitsunobu反应提供式I的吡唑并吡啶。

在式I化合物的制备中，中间体的远端官能团(例如，伯胺或仲胺等)的保护可能是必要的。对于此保护的需要是取决于远端官能团的性质和制备方法的条件而变化。合适的氨基-保护基(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(“Boc”)、苄氧羰基(“CBz”)和9-芴基亚甲基氧羰基(“Fmoc”)。对于此保护的需要可由本领域技术人员容易地确定。对于保护基及其用途的一般描述，参见T.W.Greene等，Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis.New York：Wiley Interscience，2006。

因此，另一个实施方案提供用于制备式I、Ia、Ib或Ic化合物的方法，其包括：

(a)将式6化合物：

其中R¹如本文所定义；

与式3化合物偶联：

其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷如本文所定义；

以提供式I化合物；

(b)将式6b化合物：

其中R^e如本文所定义；

与式3化合物偶联：

其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷如本文所定义；

以提供式Ia化合物；

(c)使式17化合物去保护：

其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷如本文所定义，X是卤素，并且PG氮保护基；并且

在催化剂存在下进行交叉偶联反应以提供式Ib化合物；

(d)使式5a化合物去保护：

其中R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R’如本文所定义；并且

与式6化合物偶联：

其中R¹如本文所定义；

以提供式Ic化合物；和

(e)用式22化合物：

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如本文所定义；

和式23化合物进行Mitsunobu反应：

其中R⁶和R⁷如本文所定义；

以提供式I化合物。

分离方法

将反应产物互相分离和/或从起始物质中分离可能是有利的。通过本领域中常用的技术，将每一步或一系列步骤的所要产物分离和/或纯化(在下文中，分离)至所要的同质程度。通常，此类分离涉及多相萃取，从溶剂或溶剂混合物中结晶，蒸馏，升华或色谱法。色谱法可涉及许多方法，包括(例如)：反相和正相；尺寸排阻；离子交换；高、中和低压液相色谱方法和装置；小规模分析；模拟移动床(“SMB”)和制备薄层或厚层色谱法，以及小规模薄层和快速色谱法的技术。本领域技术人员将会应用最可能实现所要分离的技术。

通过本领域技术人员熟知的方法，诸如通过色谱法和/或分步结晶，可基于非对映异构体混合物的物理化学差异将它们分离成其单独的非对映异构体。对映异构体可如下分离：通过与适当的光学活性化合物(例如手性助剂，诸如手性醇或Mosher氏酰基氯)反应，将对映异构体混合物转化成非对映异构体混合物，分离所述非对映异构体并将单独的非对映异构体转化(例如水解)成对应的纯对映异构体。也可使用手性HPLC柱来分离对映异构体。

使用诸如用光学活性拆分剂形成非对映异构体的方法(Eliel，E.和Wilen，S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York：John Wiley & Sons，Inc.，1994；Lochmuller，C.H.等“Chromatographic resolution of enantiomers：Selective review.”J.Chromatogr.，113(3)(1975)：283-302页)，通过拆分外消旋混合物，可得到实质上不含有其立体异构体的单一立体异构体，例如对映异构体。本文所描述的手性化合物的外消旋混合物可通过任何合适的方法分离和分开，所述方法包括：(1)用手性化合物形成离子性非对映异构体的盐并通过分步结晶或其它方法分离，(2)用手性衍生试剂形成非对映异构体化合物，分离非对映异构体并转化成纯的立体异构体，以及(3)在手性条件下直接分离实质上纯的或富集的立体异构体。参见：Wainer，Irving W.编，Drug Stereochemistry：Analytical Methods and Pharmacology.New York：MarcelDekker，Inc.，1993。

在方法(1)下，非对映异构体的盐可通过对映异构纯的手性碱(诸如马钱子碱、奎宁、麻黄碱、番木鳖碱、α-甲基-β-苯乙胺(安非他明)等)与带有酸性官能团(诸如羧酸和磺酸)的不对称化合物的反应形成。通过分步结晶或离子色谱法可诱导非对映异构体盐的分离。对于氨基化合物的光学异构体的分离，添加手性羧酸或磺酸(诸如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸)可引起非对映异构体盐的形成。

或者，通过方法(2)，使要拆分的底物与手性化合物的一种对映异构体反应，以形成非对映异构体对(Eliel，E.和Wilen，S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York：John Wiley & Sons，Inc.，1994，322页)。通过使不对称化合物与对映异构体纯的手性衍生试剂(诸如薄荷基衍生物)反应，可形成非对映体化合物，随后分离所述非对映异构体并水解产生纯的或富集的对映异构体。测定光学纯度的方法涉及，制备外消旋混合物的手性酯，诸如薄荷基酯(例如，在碱存在下制备(-)氯甲酸薄荷酯)，或Mosher酯，乙酸α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯酯(Jacob III，Peyton.“Resolution of(±)-5-Bromonornicotine.Synthesis of(R)-and(S)-Nornicotine of High Enantiomeric Purity.”J.Org.Chem.第47卷，第21期(1982)：4165-4167页)，并分析¹HNMR光谱中的两种阻转异构对映异构体或非对映异构体的存在。按照分离阻转异构萘基-异喹啉的方法(WO 96/15111)，通过正相和反相色谱法，可使阻转异构体化合物的稳定非对映异构体分离和分开。

通过方法(3)，通过使用手性固定相的色谱法可将两种对映异构体的外消旋混合物分离(Lough，W.J.编Chiral Liquid Chromatography.New York：Chapman和Hall，1989；Okamoto，Yoshio等，“Optical resolution ofdihydropyridine enantiomers by high-performance liquid chromatography usingphenylcarbamates of polysaccharides as a chiral stationary phase.”J.of Chromatogr.第513卷(1990)：375-378页)。通过用于区分具有不对称碳原子的其它手性分子的方法，诸如旋光度和圆二色性，可区分富集或纯化的对映异构体。

生物学评价

将B-Raf突变型蛋白447-717(V600E)与伴侣蛋白Cdc37共同表达，并与Hsp90复合(Roe，S.Mark等“The Mechanism of Hsp90 Regulation by theProtein Kinase-Specific Cochaperone p50^cdc37.”Cell.第116卷(2004)：87-98页；Stancato，LF等“Raf exists in a native heterocomplex with Hsp90 and p50that can be reconstituted in a cell free system.”J.Biol.Chem.268(29)(1993)：21711-21716页)。

可能通过许多直接和间接的检测方法(US 2004/0082014)来测定样品中的Raf的活性。根据US 2004/0127496和WO 03/022840，通过将放射性标记的磷酸酯与重组MAP激酶(MEK，一种已知的B-Raf的生理底物)合并的试验，可以体外评定人重组B-Raf蛋白的活性。V600E全长B-Raf的活性/抑制是通过测量放射性标记的磷酸酯从[γ-³³P]ATP到FSBA-修饰的野生型MEK中的合并来评价(参见生物实施例1)。

施用和药物制剂

本文所描述的化合物可通过适合于要治疗的病状的任何适当途径来施用。适当的途径包括口服、肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)、透皮、直肠、鼻部、局部(包括口腔和舌下)、***、腹膜内、肺内和鼻内。

所述化合物可以任何适当的施用形式来施用，所述施用形式例如片剂、粉末、胶囊、溶液、分散剂、混悬剂、糖浆、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳剂、贴片等。此类组合物可含有药物制剂中的常规组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其它活性剂。如果期望肠胃外施用，则组合物将是无菌的并且是适于注射或输注的溶液或混悬剂形式。

通过将本文所描述的化合物与载体或赋形剂混合来制备典型的制剂。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员熟知的并且详细地描述于，例如Ansel，Howard C.等，Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia：Lippincott，Williams & Wilkins，2004；Gennaro，Alfonso R.等，Remington：The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia：Lippincott，Williams & Wilkins，2000；和Rowe，Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago，Pharmaceutical Press，2005中。所述制剂也可包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、混悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、调味剂、稀释剂和其它已知提供药物(即本文所描述的化合物或其药物组合物)的优美外观或辅助制造药物产品(即药剂)的添加剂。

一个实施方案包括包含式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐的药物组合物。在进一步实施方案中，本发明提供包含式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。

使用本发明化合物治疗的方法

还提供了通过施用一种或多种本文所描述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐来治疗或预防疾病或病状的方法。在一个实施方案中，用可检测到抑制B-Raf活性的量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物治疗人类患者。

在另一个实施方案中，提供一种治疗哺乳动物的过度增殖性疾病的方法，其包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，提供一种治疗哺乳动物的癌症的方法，其包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，提供一种治疗哺乳动物的肾病的方法，其包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。在进一步的实施方案中，所述肾病是多囊性肾病。

在另一个实施方案中，提供一种治疗或预防需要此治疗的哺乳动物的癌症的方法，其中所述方法包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、子***、***癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、NSCLC、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、骨髓样疾病、淋巴样疾病、毛细胞癌、口腔癌和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌、霍奇金氏(Hodgkin′s)病或白血病。另一个实施方案提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

在另一个实施方案中，提供一种治疗或预防需要此治疗的哺乳动物的肾病的方法，其中所述方法包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。在进一步实施方案中，所述肾病是多囊性肾病。

在另一个实施方案中，提供一种治疗或预防由B-Raf调节的疾病或病症的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物施用有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。此类疾病和病症的实例包括但不限于过度增殖性疾病(包括癌症)和肾病(包括多囊性肾病)。

另一个实施方案提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐在制备用于治疗过度增殖性疾病的药物中的用途。

另一个实施方案提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

另一个实施方案提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐在制备用于治疗肾病的药物中的用途。在进一步实施方案中，所述肾病是多囊性肾病。

在另一个实施方案中，提供一种预防或治疗癌症的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物单独施用或与具有抗癌性质的一种或多种其它化合物组合施用有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方案提供用于治疗的式I化合物。

本发明的另一个实施方案提供用于治疗过度增殖性疾病的式I化合物。在进一步实施方案中，所述过度增殖性疾病是癌症。

本发明的另一个实施方案提供用于治疗肾病的式I化合物。在进一步实施方案中，所述肾病是多囊性肾病。

在一个进一步实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、子***、***癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、NSCLC、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、骨髓样疾病、淋巴样疾病、毛细胞癌、口腔癌和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌、霍奇金氏病和白血病。

在一个进一步实施方案中，所述癌症是肉瘤。

在另一个进一步实施方案中，所述癌症是癌瘤。在一个进一步实施方案中，所述癌瘤是鳞状细胞癌。在另一个进一步实施方案中，所述癌瘤是腺瘤或腺癌。

组合治疗

本文所描述的化合物及其立体异构体和药学上可接受的盐可单独使用或与用于治疗的其它治疗剂组合使用。本文所描述的化合物可与一种或多种其它药物组合使用，所述其它药物例如经由对不同目标蛋白的作用来工作的抗过度增殖(或抗癌)剂。药物组合制剂或给药方案的第二化合物优选具有与本文所描述的化合物互补的活性，以使它们不会相互产生不良影响。此类分子适合以有效达到预定目的的量存在于组合中。所述化合物可在单一药物组合物中一起施用，或独立施用，并且当独立施用时，可同时或以任何顺序依次进行。此依次施用可在时间上接近或在时间上疏远。

不考虑作用机理，“化学治疗剂”是适用于治疗癌症的化合物。化学治疗剂包括在“靶治疗”和常规化学治疗中使用的化合物。涵盖用作组合治疗剂的许多合适的化学治疗剂以用于本发明的方法中。本发明涵盖(但不限于)施用大量的抗癌剂，诸如：诱导细胞凋亡的药剂；多核苷酸(例如核糖酶)；多肽(例如酶)；药物；生物模拟物；生物碱；烷化剂；抗肿瘤抗生素；抗代谢物；激素；铂化合物；与抗癌药共轭的单克隆抗体、毒素和/或放射性核素；生物反应调节剂(例如干扰素[例如IFN-a等)和白细胞介素[例如IL-2等]等)；过继性免疫治疗剂；造血生长因子；诱导肿瘤细胞分化的药剂(例如全反式视黄酸等)；基因治疗试剂；反义治疗试剂和核苷酸；肿瘤疫苗；血管生成抑制剂等。

化学治疗剂的实例包括埃罗替尼(TARCEVA

Genentech/OSIPharm)、硼替佐米(VELCADE

Millennium Pharm)、氟维司群(FASLODEX

AstraZeneca)、舒尼替尼(SUTENT

Pfizer)、来曲唑(FEMARA

Novartis)、甲磺酸伊马替尼(GLEEVECNovartis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、奥沙利铂(Eloxatin

Sanofi)、5-FU(5-氟尿嘧啶)、亚叶酸、雷帕霉素(西罗莫司，RAPAMUNEWyeth)、拉帕替尼(TYKERB

GSK572016，Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(SCH 66336)、索拉非尼(NEXAVARBayer)、伊立替康(CAMPTOSAR

Pfizer)和吉非替尼(IRESSA

AstraZeneca)、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、烷化剂，诸如噻替派和CYTOXAN

环磷酰胺；烷基磺酸酯，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮杂环丙烷，诸如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌、meturedopa和uredopa；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三甲蜜胺；乙酰精宁(特别是布拉他辛和布拉他辛酮)；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康)；苔藓抑素；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；念珠藻素(cryptophycin)(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物、KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱；sarcodictyin；海绵素(spongistatin)；氮芥，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、氮芥氧化物盐酸盐、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲，诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如卡奇霉素，尤其卡奇霉素γ1I和卡奇霉素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33：183-186)；达内霉素，包括达内霉素A；二膦酸盐，诸如氯膦酸盐；埃斯培拉霉素；以及新制癌菌素生色团和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团)、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博莱霉素、放线菌素C、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN

(多柔比星)、吗啉基-多柔比星、氰基吗啉基-多柔比星、2-吡咯啉并-多柔比星和去氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素，诸如丝裂霉素C、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、左柔比星；抗代谢药，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双去氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素，诸如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺素药，诸如氨格鲁米特、米托坦、曲洛斯坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；埃坡西龙；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登醇，诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSK

多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生；根霉素(rhizoxin)；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素(特别是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和anguidine)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷，例如TAXOL

(紫杉醇；Bristol-Myers SquibbOncology，Princeton，N.J.)、ABRAXANE^TM(无氢化蓖麻油)、紫杉醇的白蛋白工程化纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，Illinois)和TAXOTERE

(多西他赛；

-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；GEMZAR

(吉西他滨)；6-硫代鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；NAVELBINE

(长春瑞滨)；诺安托；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨(XELODA

)；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，诸如视黄酸；和上述任何的药学上可接受的盐、酸和衍生物。

在“化学治疗剂”的定义中也包括：(i)起调节或抑制对肿瘤的激素作用的抗激素剂，诸如抗***和选择性***受体调节剂(SERMs)(包括，例如他莫昔芬(包括NOLVADEX

枸橼酸他莫西芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬、LY117018、奥那司酮和FARESTON

(枸橼酸托米芬))；(ii)抑制酶芳香酶的芳香酶抑制剂(所述芳香酶调节肾上腺中***的产生)，例如4(5)-咪唑、氨格鲁米特、MEGASE

(醋酸甲地孕酮)、AROMASIN(依西美坦；Pfizer)、福美坦、法倔唑、RIVISOR

(伏氯唑)、FEMARA

(来曲唑；Novartis)和ARIMIDEX(阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(1，3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制牵连异常细胞增殖的信号传导通路中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如PKC-α、Raff和H-Ras；(vii)核糖酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如ANGIOZYME

)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因治疗疫苗，例如ALLOVECTINLEUVECTIN

和VAXID

PROLEUKIN

rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如LURTOTECAN

ABARELIXrmRH；(ix)抗血管生成剂，诸如贝伐珠单抗(AVASTIN

Genentech)；(x)PI3k/AKT/mTOR通路抑制剂，包括GDC-0941(2-(1H-吲唑-4-基)-6-(4-甲基磺酰氯-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶)、XL-147、GSK690693和西罗莫司脂化物；(xi)Ras/MEK/ERK通路抑制剂；以及(xii)上述任何的药学上可接受的盐、酸和衍生物。

在“化学治疗剂”的定义中也包括治疗性抗体，诸如阿仑珠单抗(Campath)、贝伐珠单抗(AVASTINGenentech)；西妥昔单抗(ERBITUX

Imclone)；帕尼单抗(VECTIBIX

Amgen)、利妥昔单抗(RITUXAN

Genentech/Biogen Idec)、帕妥珠单抗(OMNITARG

2C4，Genentech)、曲妥珠单抗(HERCEPTIN

Genentech)、托西莫单抗(Bexxar，Corixia)和抗体药物缀合物，吉妥珠单抗奥唑米星(MYLOTARG

Wyeth)。

与本发明的Raf抑制剂组合的具有作为化学治疗剂的治疗潜力的人源化单克隆抗体包括：阿仑珠单抗、阿泊珠单抗、阿塞珠单抗、那他珠单抗、巴品珠单抗、贝伐珠单抗、莫比伐单抗、莫坎妥珠单抗、西利珠单抗、赛妥珠单抗、cidfusituzumab、cidtuzumab、达利珠单抗、依库珠单抗、依法珠单抗、依帕珠单抗、厄利珠单抗、非维珠单抗、芳妥珠单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、奥英妥珠单抗、伊匹单抗、拉贝珠单抗、林妥珠单抗、马妥珠单抗、美泊利单抗、莫维珠单抗、motovizumab、那他珠单抗、尼妥珠单抗、nolovizumab、numavizumab、奥瑞珠单抗、奥马珠单抗、帕利珠单抗、帕考珠单抗、pecfusituzumab、pectuzumab、帕妥珠单抗、培克珠单抗、ralivizumab、雷珠单抗、reslivizumab、瑞利珠单抗、resyvizumab、罗维珠单抗、卢利珠单抗、西罗珠单抗、西利珠单抗、索土珠单抗、替他珠单抗、他度珠单抗、他利珠单抗、特非珠单抗、托珠单抗、托利珠单抗、曲妥珠单抗、西莫白介素单抗、tucusituzumab、umavizumab、乌珠单抗和维西珠单抗。

实施例

出于说明目的，本发明包括以下实施例。然而，应理解的是，这些实施例不限制本发明并且仅仅意在提出实践本发明的方法。本领域技术人员将会认识到，可容易地改变所描述的化学反应，以制备本文所描述的许多其它化合物，并且将制备所述化合物的替代方法视为属于本发明的范畴之内。例如，通过对本领域技术人员显而易见的修改，例如，通过适当地保护干扰基团，通过使用除描述的试剂以外的本领域已知的其它合适的试剂，和/或通过对反应条件进行常规的改变，可成功地进行非示例性化合物的合成。此外，本文中公开或本领域已知的其它反应视为对制备本文所描述的其它化合物具有适用性。

在以下描述的实施例中，除非另外指明，否则所有温度是以摄氏温度来给出。试剂是购自商业供应商，诸如Sigma-Aldrich、Alfa Aesar或TCI，并且无需进一步纯化即使用，除非另外指明。

下述反应通常在氮气或氩气的正压下进行，或用干燥管(除非另外说明)在无水溶剂中进行，并且反应烧瓶通常配备橡胶塞以便经由注射器来引入底物和试剂。玻璃器皿是烘箱干燥和/或加热干燥的。

柱色谱法是在具有硅胶柱的Biotage***(制造商：Dyax Corporation)上或在硅石SepPak柱(Waters)上进行(除非另外说明)。¹H NMR光谱是由以400MHz操作的Varian仪器进行记录。¹H-NMR光谱是以CDCl₃、CD₃OD、D₂O、(CD₃)₂SO、(CD₃)₂CO、C₆D₆、CD₃CN溶液形式来获得(以ppm报告)，使用四甲基硅烷(0.00ppm)或残留溶剂(CDCl₃：7.26ppm；(CD₃)₂CO：2.05ppm；D₂O：4.79ppm；(CD₃)₂SO：2.50ppm；(CD₃)₂CO：2.05ppm；C₆D₆：7.16；CD₃CN：1.94ppm)作为参照标准。当报告多重峰时，使用以下缩写：s(单峰)，d(双重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，br(宽峰)，dd(双二重峰)，dt(双三重峰)。当给出耦合常数时，是以赫兹(Hz)报告。

生物实施例1

B-Raf IC ₅₀ 试验方案

根据US 2004/0127496和WO 03/022840，通过将放射性标记的磷酸酯与重组MAP激酶(MEK，一种已知的B-Raf的生理底物)合并的试验，可以体外评定人重组B-Raf蛋白的活性。催化活性的人重组B-Raf蛋白是通过从由人B-Raf重组杆状病毒表达载体感染的sf9昆虫细胞中纯化来获得。

V600E全长B-Raf的活性/抑制是通过测量放射性标记的磷酸酯从[γ-³³P]ATP到FSBA-修饰的野生型MEK中的合并来评价。30-μL试验混合物含有25mM Na Pipes，pH 7.2，100mM KCl，10mM MgCl₂，5mM β-甘油磷酸酯，100μM钒酸钠，4μM ATP，500nCi[γ-³³P]ATP，1μM FSBA-MEK和20nM V600E全长B-Raf。在22℃下，在Costar 3365板(Corning)中孵育。在试验之前，将B-Raf和FSBA-MEK一起在1.5X(30nM和1.5μM，各20μL)试验缓冲液中预孵育15分钟，通过添加10μL的10μM ATP开始试验。孵育60分钟之后，通过添加100μL的25％TCA淬灭试验混合物，将板在旋转震荡器上混合1分钟，使用Tomtec Mach III Harvester，在Perkin-ElmerGF/B滤板上俘获产物。将板的底部密封之后，向各孔中添加35μL的Bio-SafeII(Research Products International)闪烁混合物，再从顶部将板密封，并在Topcount NXT(Packard)中计数。

在上述试验中测试了实施例1-74的化合物并且测得化合物的IC₅₀小于1μM。

在上述试验中测试了实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、69、70、71、72、73和74的化合物并且测得化合物的IC₅₀小于500nM。

在上述试验中测试了实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、69、70、71、72、73、74、75、76、77和78的化合物并且测得化合物的IC₅₀小于500nM。

在上述试验中测试了实施例2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、69、70、71、72、73和74的化合物并且测得化合物的IC₅₀小于100nM。

在上述试验中测试了实施例2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、69、70、71、72、73、74、76、77和78的化合物并且测得化合物的IC₅₀小于100nM。

在上述试验中测试了以下化合物。将一些化合物制备多次并且在多次上述试验中测试。以下数据代表那些测试：

实施例#	IC₅₀(nM)
		实施例1	429.46
实施例2	55.84
		实施例3	0.44
实施例4	0.62
		实施例5	1.06
实施例6	2.52
		实施例7	4.76
实施例8	5.83
		实施例9	1.17
实施例10	2.29
		实施例11	7.03
实施例12	1.85
		实施例13	1.91
实施例14	0.93
		实施例15	2.63
实施例16	1.71
		实施例17	11.09
实施例18	0.82
		实施例19	2.04
实施例20	3.48

实施例21	72.42
		实施例22	584.94
实施例23	4
		实施例24	64.88
实施例25	12.26
		实施例26	2.41
实施例27	2.95
		实施例28	0.84
实施例29	0.65
		实施例30	0.74
实施例31	0.56
		实施例32	34.88
实施例33	17.17
		实施例34	4.83
实施例35	2.1
		实施例36	37.45
实施例37	3.8
		实施例38	15.1
实施例39	64.17
		实施例40	27.02
实施例41	151.99
		实施例42	1.76
实施例43	2.63
		实施例44	0.64
实施例45	0.53
		实施例46	6.09
实施例47	4.14
		实施例48	1.68
实施例49	3.91
		实施例50	1.22

实施例51	2.01
		实施例52	70.43
实施例53	13.19
		实施例54	3.36
实施例55	1.47
		实施例56	1.31
实施例57	26.03
		实施例58	37.07
实施例59	10.59
		实施例60	1.28
实施例61	80.09
		实施例62	1.45
实施例63	1.71
		实施例64	9.29
实施例65	0.63
		实施例66	1.5
实施例67	61.01
		实施例68	658.18
实施例69	1.66
		实施例70	25.66
实施例71	0.66
		实施例72	0.4
实施例73	0.86
		实施例74	0.51
实施例75	138.7
		实施例76	13
实施例77	0.56
		实施例78	5.19

生物实施例2

肿瘤生长抑制(LOX)

以100μLPBS中大约3.5x10⁶个LOX细胞对雌性裸小鼠进行右侧腹皮下植入。五至七天后，测量肿瘤并将小鼠以6只进行随机分组，各组的平均肿瘤体积为约200mm³。在给药之前，将实施例30和42溶于80％PEG400/20％乙醇中，并以5mL/kg的体积PO施用。在第1、2、3和4天仅进行媒介物给药；并在第1、2、3和4天以30mg/kg进行实施例30和42给药。在第5天测量动物体重并使用电子卡尺测量肿瘤体积。使用以下公式计算肿瘤体积：体积＝(宽度²X长度)/2。在单独的研究中操作每个实施例，并对比该研究本身所用的媒介物。结果在图1和2中展示。

中间体实施例1

2-(溴甲基)-5-氯吡啶

步骤A：将5-氯代-2-吡啶羧酸乙酯(104.0mg，0.560mmol)溶于THF(5.6mL)中并且冷却至0℃。随后，将反应混合物用氢化铝锂的THF(0.392μL，0.392mmol)1.0M溶液缓慢处理并升温至环境温度。将反应混合物在环境温度下搅拌1小时并随后冷却至0℃。随后将反应混合物用水(15μL)处理，接着用1.0N NaOH(15μL)随后再用水(45μL)处理。使反应混合物升温至环境温度并使其搅拌30分钟。将反应混合物用EtOAc稀释，由玻璃微纤维过滤(″GF/F″)纸过滤并且浓缩。用50％己烷/EtOAc至100％己烷/EtOAc的梯度进行洗脱的硅胶色谱法提供(5-氯吡啶-2-基)甲醇(60.0mg，0.418mmol，产率74.6％)。

步骤B：将(5-氯吡啶-2-基)甲醇(40.0mg，0.279mmol)溶于二氯甲烷(“DCM”)(2.8mL)中并且用DCM(0.31μL，0.306mmol)中的1.0M三溴化磷处理。使反应混合物在环境温度下搅拌1小时。将混合物用过量的三溴化磷并用几滴水终止，并且搅拌10分钟。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO₃(2X)、盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥并且浓缩以得到2-(溴甲基)-5-氯吡啶(57.5mg，0.278mmol，产率100％)。

实施例1

3-(苄氧基)-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺

步骤A：将3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺(0.84g，7.43mmol；如JP 01013072所述来制备)和硝基丙二醛钠一水合物(1.23g，7.81mmol)的水(40mL)混悬液加热至90℃进行16小时。使反应混合物冷却至室温并且倾入乙酸乙酯(200mL)中。将水层的pH值用乙酸调节至约5。进行分层，并且将有机层干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱将粗产物纯化以得到为固体的3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(0.625g，3.22mmol，产率43％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ13.46(br s，1H)，9.30(s，1H)，8.96(s，1H)，4.07(s，3H)；m/z(APCI-neg)M-1＝193.0。

步骤B：向3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(7.3g，38.0mmol)的乙酸乙酯/MeOH混合物(1∶1，240mL)溶液中加入10％wt Pt/C(4.03，3.8mmol)。将反应混合物在30psi氢下氢化16小时。通过过滤除去Pd/C，并且浓缩滤液以得到为固体的3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(5.1g，31.1mmol，产率82％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.09(d，J＝2.5Hz，1H)，7.33(d，J＝2.5Hz，1H)，4.02(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝165.1。

步骤C：将3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(33mg，0.201mmol)溶于DMF(2mL)中，并且在环境温度下，依次用3-(苄氧基)苯甲酸(50.5mg，0.221mmol)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、无水(42.4mg，0.221mmol)和1-羟基苯并***(29.9mg，0.221mmol)处理。16小时后，将反应混合物用EtOAc稀释并且用水(4X)、碳酸氢钠(2X)和盐水(1x)洗涤，经硫酸钠干燥并且浓缩。用3％甲醇/DCM至15％甲醇/DCM的梯度进行洗脱的硅胶色谱法得到为固体的3-(苄氧基)-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(42.1mg，0.112mmol，产率55.9％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.49(s，1H)，10.40(s，1H)，8.72-8.72(d，1H)，8.46-8.45(d，1H)，7.63-7.57(t，2H)，7.49-7.35(m，6H)，7.27-7.25(m，1H)，5.20(s，2H)，4.01(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝375.2。

实施例2

5-(苄氧基)-2-氟代-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺

步骤A：将2-氟代-5-羟基苯甲酸(0.100g，0.642mmol)溶于DMF(5mL)中并且冷却至0℃。添加NaH(0.128g，60％wt，3.20mmol)，并且使反应升温至室温并且搅拌20分钟。添加溴化苄(0.229mL，1.92mmol)，并且将反应在室温下搅拌过夜。将反应在EtOAc和0.1N HCl之间分配，并且进行分层。将有机层用0.1N NaOH(2X)萃取，并且将水层用1N HCl酸化至pH值为2，并用DCM(2X)萃取。将有机溶液经Na₂SO₄干燥并且浓缩以得到为油状物的5-(苄氧基)-2-氟苯甲酸(0.104g，65.9％)，其直接用于下一步。

步骤B：根据实施例1步骤C的一般操作，用5-(苄氧基)-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备5-(苄氧基)-2-氟代-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(65.6％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.55(s，1H)，10.58(s，1H)，8.66(s，1H)，8.48(s，1H)，7.46-7.48(m，2H)，7.40-7.43(m，2H)，7.32-7.36(m，3H)，7.21-7.23(m，1H)，5.17(s，2H)，4.02(s，3H)；m/z(APCI-neg)M-1＝391.0。

实施例3

6-氯代-2-氟代-3-(2-氟苄氧基)-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基) 苯甲酰胺

步骤A：将6-氯代-2-氟代-3-甲氧基苯甲酸(1.83g，8.95mmol)溶于DCM(44.8mL)中并且冷却至0℃。添加三溴化硼(26.9mL，在DCM中1.0M，26.9mmol)，并且使反应混合物升温至环境温度并且将其搅拌3小时。将反应混合物倾倒在冰上并且用DCM萃取。将有机层用1.0N NaOH(2X)洗涤，并且将水层用1.0N HCl酸化至pH值为2，并用乙酸乙酯(2X)萃取。将有机溶液用水(2X)和盐水(1X)洗涤并且经Na₂SO₄干燥且浓缩以得到为固体的6-氯代-2-氟代-3-羟基苯甲酸(1.47g，7.70mmol，产率86.0％)。m/z(APCI-neg)M-1＝188.6，190.6。

步骤B：将6-氯代-2-氟代-3-羟基苯甲酸(69.9mg，0.367mmol)溶于DMF(3.7mL)中并且冷却至0℃。添加NaH(44.0mg，60％wt，1.10mmol)，并且使反应升温至室温并且搅拌30分钟。随后，添加1-(溴甲基)-2-氟苯(48.7μL，0.404mmol)，并且将反应在环境温度下搅拌2小时。将反应在EtOAc和0.1N HCl之间分配，并且进行分层。将有机层用0.1N NaOH(2X)萃取并用己烷(2X)分配。将水层用1N HCl酸化至pH值为3并且用EtOAc(2X)萃取。将有机溶液用水(2X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥且浓缩以得到6-氯代-2-氟代-3-(2-氟苄氧基)苯甲酸(30.4mg，0.102mmol，27.8％)。m/z(APCI-neg)M-1＝296.5，298.6。

步骤C：根据实施例1步骤C的一般操作，用6-氯代-2-氟代-3-(2-氟苄氧基)苯甲酸(30.4mg，0.102mmol)代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备6-氯代-2-氟代-3-(2-氟苄氧基)-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(10.4mg，0.023mmol，产率23.0％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.59(s，1H)，11.03(s，1H)，8.59-8.58(d，1H)，8.47-8.46(d，1H)，7.61-7.56(m，1H)，7.50-7.34(m，3H)，7.31-7.25(m，2H)，5.30(s，2H)，4.01(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝445.1，447.1。

实施例4

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺

步骤A：将6-氯代-2-氟代-3-甲氧基苯甲酸(5.25g，25.7mmol)溶于DCM(128mL)中并且冷却至0℃。添加三溴化硼(77.0mL，在DCM中1.0M，77.0mmol)，并且使反应混合物升温至环境温度并且将其搅拌3小时。将反应混合物倾倒在冰上并且用DCM萃取。将有机层用1.0N NaOH(2X)洗涤，并且将水层用1.0N HCl酸化至pH值为2，并用乙酸乙酯(2X)萃取。将有机萃取液用水(2X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥且浓缩以得到为固体的6-氯代-2-氟代-3-羟基苯甲酸(4.71g，24.7mmol，产率96.3％)。m/z(APCI-neg)M-1＝188.8，190.8。

步骤B：将6-氯代-2-氟代-3-羟基苯甲酸(185.0mg，0.971mmol)溶于MeOH(1.9mL)中，并且在环境温度下，用(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2.4mL，在己烷中2.0M，4.85mmol)缓慢处理10分钟。使反应混合物在环境温度下搅拌10分钟并且随后浓缩。用5％EtOAc/己烷至50％EtOAc/己烷的梯度进行洗脱的硅胶色谱法得到6-氯代-2-氟代-3-羟基苯甲酸甲酯(185mg 0.906mmol，产率93.3％)。m/z(APCI-neg)M-1＝203.1，205.1。

步骤C：将6-氯代-2-氟代-3-羟基苯甲酸甲酯(185mg，0.906mmol)溶于DMF(2.2mL)中，并且依次用(溴甲基)苯(162μL，1.36mmol)和碳酸钾(376mg，2.72mmol)处理，并在环境温度下搅拌1.5小时。将反应用1.0N HCl酸化至pH值为7，用EtOAc萃取，用水(4X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥并且浓缩。用5％EtOAc/己烷至50％EtOAc/己烷的梯度进行洗脱的硅胶色谱法得到3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸甲酯(178mg，0.604mmol，产率66.7％)。

步骤D：将3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸甲酯(178mg，0.604mmol)溶于4∶1THF∶MeOH(6.0mL)中，并且用2.0M氢氧化钾(1.5mL，3.02mmol)处理并加热至50℃进行6小时。冷却至环境温度并用1.0N HCl酸化至pH值为4后，除去挥发物并且将溶液用EtOAc萃取。将有机物用水(2X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥且浓缩以得到3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸(137mg，0.488mmol，产率80.8％)。m/z(APCI-neg)M-1＝278.6，280.6。

步骤E：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸(11.3mg，0.0403mmol)代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(22.1％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.60-8.59(d，1H)，8.50-8.49(d，1H)，7.48-7.22(m，7H)，5.22(s，2H)，4.09(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝427.1，429.1。

实施例5

3-(苄氧基)-2-氟代-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-6-甲基苯甲酰胺

步骤A：将6-溴代-2-氟代-3-甲氧基-苯甲酸(1.01g，4.07mmol)溶于MeOH(20.0mL)中，并且在环境温度下，用(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(10.2mL，在己烷中2.0M，20.4mmol)缓慢处理10分钟。试剂添加完成后，使反应混合物在环境温度下搅拌10分钟并且随后浓缩。用5％EtOAc/己烷至50％EtOAc/己烷的梯度进行洗脱的硅胶色谱法得到6-溴代-2-氟代-3-甲氧基苯甲酸甲酯(1.04g，3.94mmol，产率96.8％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ7.53-7.50(m，1H)，7.31-7.27(t，1H)，3.91(s，3H)，3.88(s，3H)。

步骤B：将6-溴代-2-氟代-3-甲氧基苯甲酸甲酯(846mg，3.21mmol)溶于DMF(16.1mL)中，并且用N₂气体持续充气，同时用碳酸铯(3.14g，9.64mmol)、二氯[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(264mg，0.321mmol)和三甲基环三硼氧烷(444mg，3.54mmol)处理。试剂添加完成后，将反应再用N₂充气进行5分钟，并随后加热至115℃进行16小时。使反应冷却至环境温度，用EtOAc稀释并由GF/F纸过滤。将溶液用EtOAc稀释，用水(4X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥且浓缩。用5％EtOAc/己烷至50％EtOAc/己烷的梯度进行洗脱的硅胶色谱法得到2-氟代-3-甲氧基-6-甲基苯甲酸甲酯(435mg，2.20mmol，产率68.3％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ7.23-7.18(t，1H)，7.08-7.05(d，2H)，3.87(s，3H)，3.83(s，3H)，2.23(s，3H)。

步骤C：将2-氟代-3-甲氧基-6-甲基苯甲酸甲酯(435mg，2.20mmol)溶于4∶1THF∶MeOH(11.0mL)中，用2.0M氢氧化钾(8.2mL，16.5mmol)处理并且加热至50℃进行16小时。使反应冷却至环境温度并且用1.0N HCl酸化至pH值为3。除去挥发物，并且将水溶液用水(2X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥并且浓缩以得到2-氟代-3-甲氧基-6-甲基苯甲酸(278mg，1.51mmol，产率68.8％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ13.49(s，1H)，7.16-7.12(t，1H)，7.04-7.01(d，1H)，3.82(s，3H)，2.24(s，3H)。

步骤D：将2-氟代-3-甲氧基-6-甲基苯甲酸(278mg，1.51mmol)溶于DCM(10.0mL)中并且冷却至0℃。添加三溴化硼(4.5mL，在DCM中1.0M，4.53mmol)，并且使反应混合物升温至环境温度并将其搅拌2小时。将反应混合物倾倒在冰上并且用DCM萃取。将有机层用1.0N NaOH(2X)洗涤，并且将水层用1.0N HCl酸化至pH值为2，并用乙酸乙酯(2X)萃取。将有机萃取液用水(2X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥且浓缩以得到2-氟代-3-羟基-6-甲基苯甲酸(220mg，1.30mmol，产率85.8％)。m/z(APCI-neg)M-1＝168.8。

步骤E：将2-氟代-3-羟基-6-甲基苯甲酸(220mg，1.30mmol)溶于MeOH(6.5mL)中，并且在环境温度下，用(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(3.2mL，在己烷中2.0M，6.47mmol)缓慢处理10分钟。试剂添加完成后，使反应混合物在环境温度下搅拌10分钟并随后浓缩为2-氟代-3-羟基-6-甲基苯甲酸甲酯(238mg，1.30mmol，产率100.0％)。m/z(APCI-neg)M-1＝183.0。

步骤F：将2-氟代-3-羟基-6-甲基苯甲酸甲酯(238mg，1.30mmol)溶于DMF(6.5mL)中，并且依次用(溴甲基)苯(231μL，1.94mmol)和碳酸钾(537mg，3.88mmol)处理，并在环境温度下搅拌2小时。将反应用EtOAc稀释，用水(4X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥且浓缩。用2％EtOAc/己烷至45％EtOAc/己烷的梯度进行洗脱的硅胶色谱法得到3-(苄氧基)-2-氟代-6-甲基苯甲酸甲酯(276mg，1.01mmol，产率77.7％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ7.46-7.18(m，6H)，7.08-7.03(t，1H)，5.18(s，2H)，3.87(s，3H)，2.22(s，3H)。

步骤G：将3-(苄氧基)-2-氟代-6-甲基苯甲酸甲酯(276mg，1.01mmol)溶于4∶1THF∶MeOH(5.0mL)中，用2.0M氢氧化钾(2.5mL，5.03mmol)处理并且加热至50℃进行16小时。使反应混合物冷却至环境温度并且用1.0NHCl酸化至pH值为3。将有机溶剂浓缩除去，用EtOAc萃取，用水(2X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥并且浓缩。用5％乙腈/水至95％乙腈/水的梯度进行洗脱的C18反相色谱法得到3-(苄氧基)-2-氟代-6-甲基苯甲酸(158mg，0.607mmol，产率60.3％)。m/z(APCI-neg)M-1＝258.8。

步骤H：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-(苄氧基)-2-氟代-6-甲基苯甲酸(158mg，0.607mmol)代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-2-氟代-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-6-甲基苯甲酰胺(60.8％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.55(s，1H)，10.81(s，1H)，8.62-8.61(d，1H)，8.50-8.49(d，1H)，7.48-7.35(m，5H)，7.27-7.23(t，1H)，7.07-7.05(d，1H)，5.21(s，2H)，4.01(s，3H)，2.26(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝407.1。

实施例6

3-(苄氧基)-6-氯代-N-(3-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酰胺

步骤A：根据实施例1步骤A的一般操作，用3-乙基-1H-吡唑-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺，制备3-乙基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(52％)。

步骤B：根据实施例1步骤B的一般操作，用3-乙基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备3-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(92％)。

步骤C：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-N-(3-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酰胺(66％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ13.23(s，1H)，11.01(s，1H)，8.63-8.62(d，1H)，8.56-8.56(d，1H)，7.49-7.35(m，7H)，5.28(s，2H)，2.96-2.91(q，2H)，1.34-1.30(t，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝425.1，427.1。

实施例7

3-(苄氧基)-6-氯代-N-(3-(二甲基氨基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酰胺

步骤A：将1H-吡唑-5-胺(0.804g，9.48mmol)和硝基丙二醛钠一水合物(1.56g，9.96mmol)的乙酸(12mL)混悬液加热至90℃过夜。使反应混合物冷却至室温并且倾入水(50mL)中。所得固体通过过滤收集。将固体用水(3X 20mL)洗涤并且真空干燥以得到为固体的5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(1.40g，84％)。

步骤B：向5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(0.84g，5.12mmol)的二噁烷(30mL)冰冷(0℃)溶液中加入4N NaOH(5.12mL，20.5mmol)，接着加入溴(1.05mL，20.5mmol)。除去冷浴，并且使反应混合物在室温下保持30分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释并且用饱和Na₂S₂O₃(50mL)水溶液终止。将水层用乙酸乙酯(100mL)萃取。将合并的有机层干燥，过滤并且浓缩。通过柱色谱法，用己烷/乙酸乙酯(9∶1)洗脱将粗产物纯化以得到为固体的3-溴代-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(1.10g，88％)。

步骤C：向3-溴代-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(0.063g，0.26mmol)的DMF(6.0mL)溶液中加入水中40％二甲胺(2.6mL，21mmol)，并且将混合物放入140℃下的微波反应器中15小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，并且将有机层用水(3X50mL)洗涤。将有机层干燥，过滤并且浓缩。通过柱色谱法，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱将粗产物纯化以得到为固体的N，N-二甲基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺(0.012g，22％)。

步骤D：根据实施例1步骤B的一般操作，用N，N-二甲基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备N3，N3-二甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3，5-二胺(78％)。

步骤E：根据实施例1步骤C的一般操作，用N3，N3-二甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3，5-二胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-N-(3-(二甲基氨基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酰胺(5％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.74-8.73(d，1H)，8.53-8.52(d，1H)，7.47-7.23(m，7H)，5.22(s，2H)，3.12(s，6H)；m/z(APCI-pos)M+1＝440.1，442.1。

实施例8

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基) 苯甲酰胺

步骤A：向在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃的THF(20mL)中加入二异丙基酰胺锂(8.2mL，14.8mmol，在庚烷中1.8M)。逐滴滴加2-氟吡啶(1.07mL，12.4mmol)，并且将所得混合物在-78℃下搅拌3小时。向所述混悬液中逐滴滴加三氟乙酸乙酯(2.06mL，17.2mmol)。使反应混合物缓慢升温至室温。1小时后，将混合物倾入1M盐酸(35mL)中并且用乙酸乙酯萃取两次。将合并的乙酸乙酯萃取液用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并且蒸发以产生为半固体的2，2，2-三氟-1-(2-氟吡啶-3-基)乙酮(1.9g，90％)的水合物。

步骤B：向无水乙醇(50mL)中的2，2，2-三氟代-1-(2-氟吡啶-3-基)乙酮(1.9g，9.0mmol)中加入水合肼(3.06mL，63.0mmol)并且将混合物加热回流过夜。将冷却的反应混合物蒸发以得到固体。将固体在水和乙酸乙酯之间分配。将水层用另一份乙酸乙酯萃取。将合并的乙酸乙酯萃取液用盐水洗涤两次，经硫酸镁干燥，过滤并且蒸发以产生为固体的3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(1.43g，85％)。

步骤C：向在冰浴中冷却至0℃的四丁基硝酸铵(5.7g，18.7mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入三氟乙酸酐(2.6mL，18.7mmol)。5分钟后，分批添加3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(0.5g，2.67mmol)。将所得溶液在室温下搅拌整夜。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液处理，并且进行分层。用二氯甲烷萃取水层。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并且蒸发成油状物。通过柱色谱法，用己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱将粗产物纯化以得到为固体的5-硝基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(0.19g，31％)。

步骤D：向乙酸乙酯(20mL)中的5-硝基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(0.19g，0.82mmol)中加入SnCl₂·2H₂O(1.3g，5.7mmol)。将所得溶液加热回流3小时。将冷却的溶液用稀碳酸氢钠水溶液处理。将所得浆液由Celite

过滤，并且将滤饼用乙酸乙酯洗涤。进行分层，并且将有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并且蒸发以产生为膜状物的3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(0.17g，99％)。

步骤E：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(25％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.75(m，2H)，7.46-7.23(m，7H)，5.21(s，2H)；m/z(APCI-nega)M-1＝463.2，465.2。

实施例9

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(呋喃-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基) 苯甲酰胺

步骤A：根据实施例1步骤A的一般操作，用3-(呋喃-2-基)-1H-吡唑-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺，制备3-(呋喃-2-基)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(21％)。

步骤B：根据实施例1步骤B的一般操作，用3-(呋喃-2-基)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备3-(呋喃-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(91％)。

步骤C：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-(呋喃-2基)-1H-比唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(呋喃-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(45％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ13.89(s，1H)，11.15(s，1H)，8.96(s，1H)，8.68(s，1H)，7.92(s，1H)，7.38-7.49(m，7H)，6.96-6.97(d，1H)，6.69-6.70(d，1H)，5.28(s，2H)；m/z(APCI-pos)M+1＝463.1，465.2。

实施例10

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-异丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺

步骤A：根据实施例1步骤A的一般操作，用3-异丙基-1H-吡唑-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺，制备3-异丙基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(45％)。

步骤B：根据实施例1步骤B的一般操作，用3-异丙基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备3-异丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(76％)。

步骤C：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-异丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-异丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(30％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ13.24(s，1H)，11.02(s，1H)，8.68-8.67(d，1H)，8.60-8.59(d，1H)，7.50-7.37(m，7H)，5.28(s，2H)，3.39-3.32(m，1H)，1.39-1.37(d，6H)；m/z(APCI-pos)M+1＝439.1，441.1。

实施例11

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基) 苯甲酰胺

步骤A：向3-溴代-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(74.3mg，0.306mmol)的水(1.0mL)溶液中加入无水(952μL，7.64mmol)中的甲胺(33wt.％)，并且将混合物放入160℃下的微波反应器中24小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，并且将有机层用水(3X)洗涤。将有机层干燥，过滤并且浓缩。通过柱色谱法，用己烷/乙酸乙酯洗脱将粗产物纯化以得到为固体的N-甲基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺(0.012g，21％)。

步骤B：根据实施例1步骤B的一般操作，用N-甲基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备N3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3，5-二胺(20％)。

步骤C：根据实施例1步骤C的一般操作，用N3-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3，5-二胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(38％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.62-8.61(d，1H)，8.46-8.45(d，1H)，7.47-7.45(m，2H)，7.41-7.25(m，5H)，5.22(s，2H)，2.97(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝426.1，428.1。

实施例12

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(甲基硫代)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基) 苯甲酰胺

步骤A：向NaH(1.50g，37.5mmol，在矿物油中60％)的苯(20mL)冰冷混悬液(0℃)中逐滴滴加2-氰基乙酸乙酯(2.00mL，18.7mmol)，接着添加CS₂(1.7mL，28.1mmol)。缓慢添加DMF(4mL)。将混合物搅拌30分钟，之后添加MeI(3.52mL，56.2mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。添加苯(50mL)，并且用冰-水终止浆液。将有机层分离，干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱将粗产物纯化以得到为固体的2-氰基-3，3-双(甲基硫代)丙烯酸乙酯(2.2g，54％)。

步骤B：将2-氰基-3，3-双(甲基硫代)丙烯酸乙酯(2.2g，10.1mmol)和肼(0.325mL，10.1mmol)的2-丙醇(20mL)溶液加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温并且浓缩。通过柱色谱法，用己烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱将粗产物纯化以得到为固体的5-氨基-3-(甲基硫代)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(1.2g，59％)。m/z(APCI-pos)M+1＝202.0。

步骤C：将5-氨基-3-(甲基硫代)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(1.2g，5.96mmol)溶于LiOH(1.14g，47.7mmol)的MeOH/H₂O(40mL，9∶1)溶液中。将所得溶液加热回流72小时。将反应混合物冷却至室温并且浓缩。将残留物用水稀释，并且通过过滤除去不可溶的物质。将滤液用乙酸乙酯(4X 100mL)萃取，并且将合并的有机层干燥，过滤并浓缩以得到为固体的3-(甲基硫代)-1H-吡唑-5-胺(0.61g，79％)。m/z(APCI-pos)M+1＝130.0。

步骤D：根据实施例1步骤A的一般操作，用3-(甲基硫代)-1H-吡唑-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺，制备3-(甲基硫代)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(86％)。

步骤E：根据实施例1步骤B的一般操作，用3-(甲基硫代)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备3-(甲基硫代)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(96％)。

步骤F：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-(甲基硫代)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(甲基硫代)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(61％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.64(s，1H)，8.60(s，1H)，7.47-7.24(m，7H)，5.21(s，2H)，2.63(s，3H)；m/z(APCI-neg)M-1＝441.0，443.0。

实施例13

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(2-甲氧基乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 -5-基)苯甲酰胺

步骤A：经过15分钟的时期(内部温度＜15℃)，向5-氨基-1H-吡唑-3-醇(2.0g，19.8mmol)和PPh₃(6.23g，23.7mmol)的DCM(30mL)冰冷(0℃)溶液中逐滴滴加偶氮羧酸二异丙酯(5.05g，23.7mmol)。在0℃下搅拌1小时后，经过10分钟逐滴滴加2-甲氧基乙醇(1.81g，23.7mmol)。使反应混合物经过1小时升温最多到室温，并且在N₂下搅拌3天。将固体通过过滤除去，并且将滤饼用DCM洗涤。随后，将DCM用1N HCl(2X 50mL)萃取。将合并的水层用DCM(100mL)洗涤，并且将DCM层废弃。将水层用2N NaOH碱化至约pH值8，并且用乙酸乙酯(200mL X 3)萃取。将合并的有机物干燥，过滤并且浓缩。通过快速色谱法，用乙酸乙酯/MeOH(50∶1)洗脱将粗产物纯化以得到为油状物的3-(2-甲氧基乙氧基)-1H-吡唑-5-胺(0.40g，2.55mmol，产率13％)。m/z(APCI-pos)M+1＝158.2。

步骤B：根据实施例1步骤A的一般操作，用3-(2-甲氧基乙氧基)-1H-吡唑-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺，制备3-(2-甲氧基乙氧基)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(11％)。

步骤C：根据实施例1步骤B的一般操作，用3-(2-甲氧基乙氧基)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备3-(2-甲氧基乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(100％)。

步骤D：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-(2-甲氧基乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(2-甲氧基乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(53％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.60(s，1H)，11.04(s，1H)，8.56-8.55(d，1H)，8.51-8.51(d，1H)，7.49-7.36(m，7H)，5.28(s，2H)，4.46-4.44(m，2H)，3.75-3.73(m，2H)，3.33(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝471.2，473.1。

实施例14

3-(苄氧基)-6-氯代-N-(3-乙氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酰胺

步骤A：将丙二腈(10.0g，151mmol)、乙醇(6.97g，151mmol)和***(120mL)的溶液冷却至0℃，并经由加料漏斗迅速添加***中的2.0MHCl(98.4mL，197mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将固体通过过滤收集并且用***(100mL)洗涤，以得到2-氰基乙亚氨酸乙酯盐酸盐(12.6g，56％)。

步骤B：将2-氰基乙亚氨酸乙酯盐酸盐(12.6g，84.8mmol)和肼(3.67g，114mmol)的EtOH(50mL)溶液回流16小时。将反应混合物浓缩，并且将残留物溶于水(100mL)、乙酸乙酯(500mL)中，并且放入冰浴中。向此溶液中加入2N NaOH(约6mL)直到将pH值调节至约7。将固体通过过滤除去(废弃)，并且将滤液转移至分液漏斗。进行分层并且将水层用乙酸乙酯(200mL)萃取。将合并的有机物干燥，过滤并且浓缩。通过快速色谱法，用己烷/乙酸乙酯(1∶1)、己烷/乙酸乙酯(1∶2)洗脱将粗产物纯化以得到为固体的3-乙氧基-1H-吡唑-5-胺(1.15g，9.04mmol，产率11％)。m/z(APCI-pos)M+1＝128.1。

步骤C：根据实施例1步骤A的一般操作，用3-乙氧基-1H-吡唑-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺，制备3-乙氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(23％)。

步骤D：根据实施例1步骤B的一般操作，用3-乙氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备3-乙氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(72％)。

步骤E：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-乙氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-N-(3-乙氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酰胺(41％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.56(s，1H)，11.03(s，1H)，8.56-8.56(d，1H)，8.50-8.49(d，1H)，7.49-7.35(m，7H)，5.28(s，2H)，4.42-4.36(q，2H)，1.43-1.40(t，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝441.1，443.1。

实施例15

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(2-羟基乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5- 基)苯甲酰胺

步骤A：向5-氨基-3-(2-羟基乙氧基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(2.00g，9.29mmol，如Neidlein，Richard等″Heterocyclic Compounds from2-(Alkoxycarbonylcyanomethylene)-1，3-dioxolanes.″J.Het.Chem.第26卷(1989)：第1335-1340页所述来制备)的乙醇(30mL)溶液中加入1MNaOH(46.5mL，46.5mmol)，并且将混合物回流过夜。将溶液用具有25％异丙醇(″IPA″)的DCM洗涤，并随后用浓HCl酸化至pH值为3。观察到气体逸出。将溶液用具有25％IPA的DCM洗涤，并且将水层蒸发。将残留物用甲醇处理，过滤并且将滤液蒸发以产生粗产物2-(5-氨基-1H-吡唑-3-基氧基)乙醇(3.28g)连同无机盐。m/z(APCI-pos)M+1＝144.0。

步骤B：根据实施例1步骤A的一般操作，用2-(5-氨基-1H-吡唑-3-基氧基)乙醇代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺，制备2-(5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)乙醇(8.5％)。

步骤C：根据实施例1步骤A的一般操作，用2-(5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)乙醇代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备2-(5-氨基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)乙醇(100％)。

步骤D：根据实施例1步骤C的一般操作，用2-(5-氨基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)乙醇代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(2-羟基乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(55％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.59-8.56(m，2H)，7.46-7.25(m，7H)，5.21(s，2H)，4.47-4.45(t，2H)，3.97-3.95(t，2H)；m/z(APCI-pos)M+1＝457.1，459.1。

实施例16

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-异丙氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺

步骤A：根据实施例1步骤A的一般操作，用3-异丙氧基-1H-吡唑-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺，制备3-异丙氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(52％)。

步骤B：根据实施例1步骤B的一般操作，用3-异丙氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备3-异丙氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(96％)。

步骤C：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-异丙氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-异丙氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(27％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.55(s，1H)，11.03(s，1H)，8.54-8.53(d，1H)，8.50-8.49(d，1H)，7.49-7.36(m，7H)，5.28(s，2H)，5.09-5.03(m，1H)，1.41-1.39(d，6H)；m/z(APCI-pos)M+1＝455.1，457.1。

实施例17

3-(苄氧基)-6-氯代-N-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 -5-基)-2-氟苯甲酰胺

步骤A：向5-氨基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-3-醇(5.00g，19.7mmol；参见Elgemeie，Galal H.等“Novel Synthesis of5-amino-1-arylsulfonyl-4-pyrazolin-3-ones as a New Class of N-SulfonylatedPyrazoles.”J.Chem.Res.(S).Issue 6(1999)：第384-385页)的乙酸(30mL)混悬液中加入硝基丙二醛钠盐一水合物(3.57g，22.7mmol)。将混合物在50℃下加热4小时。使部分混悬液冷却并用水稀释。通过真空过滤收集所得固体并且高真空干燥以得到为固体的5-硝基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-醇(4.21g，12.6mmol，产率63.8％)。

步骤B：将5-硝基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-醇(207mg，0.619mmol)溶于THF(6.2ml)中并且用2-(二甲基氨基)乙醇(74.67μL，0.743mmol)和三苯基膦(357mg，1.36mmol)处理。将反应混合物冷却至0℃并且用偶氮羧酸二乙酯(214μL，1.36mmol)处理，使其升温至环境温度并且搅拌16小时。将溶液用EtOAc稀释，用碳酸氢钠(2X)和盐水(1X)洗涤，经硫酸钠干燥且浓缩。用5％乙腈/水至95％乙腈/水的梯度进行洗脱的C18反相色谱法得到N，N-二甲基-2-(5-硝基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)乙胺(178mg，0.439mmol，产率71.0％)。m/z(APCI-pos)M+1＝406.0。

步骤C：将N，N-二甲基-2-(5-硝基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)乙胺(178mg，0.439mmol)溶于MeOH(4.40mL)中并且用碳酸钾(4.40mL，2.20mmol)的0.5M水溶液处理，并加热至50℃进行1小时。将反应混合物浓缩，用EtOAc稀释，用碳酸氢钠(2X)和盐水(1X)洗涤，经硫酸钠干燥并且浓缩以得到N，N-二甲基-2-(5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)乙胺(77.1mg，0.307mmol，产率69.9％)。m/z(APCI-neg)M-1＝250.0。

步骤D：根据实施例1步骤B的一般操作，用N，N-二甲基-2-(5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)乙胺代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(100％)。

步骤E：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-N-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-2，6-二氟苯甲酰胺(26％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.61(s，1H)，11.05(s，1H)，8.55-8.53(m，2H)，7.49-7.36(m，7H)，5.28(s，2H)，4.47-4.45(t，2H)，2.88-2.86(t，2H)，2.35(s，6H)；m/z(APCI-pos)M+1＝484.1，485.1。

实施例18

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基) 苯甲酰胺

步骤A：根据实施例17步骤B的一般操作，用2-氟乙醇代替2-(二甲基氨基)乙醇，制备3-(2-氟乙氧基)-5-硝基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶并且无需进一步纯化即用于步骤B。

步骤B：根据实施例17步骤C的一般操作，用3-(2-氟乙氧基)-5-硝基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替N，N-二甲基-2-(5-硝基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)乙胺，制备3-(2-氟乙氧基)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶并且无需进一步纯化即用于步骤C。

步骤C：根据实施例1步骤B的一般操作，用3-(2-氟乙氧基)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备3-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(经过三个步骤为42％)。

步骤D：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(37％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.67(s，1H)，11.06(s，1H)，8.59-8.58(d，1H)，8.54-8.53(d，1H)，7.49-7.35(m，7H)，5.28(s，2H)，4.91-4.89(m，1H)，4.79-4.77(m，1H)，4.64-4.62(m，1H)，4.56-4.54(m，1H)；m/z(APCI-pos)M+1＝459.1，461.1。

实施例19

6-氯代-2-氟代-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-3-(4-(三氟甲基) 苄氧基)苯甲酰胺

步骤A：向3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(3.7g，22.5mmol)和6-氯代-2-氟代-3-羟基苯甲酸(5.15g，27.0mmol)的MeCN(100mL)溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(5.18g，27.0mmol)。将反应混合物加热至50℃进行16小时。将反应混合物冷却至室温并且浓缩除去MeCN。将所得固体用水(500mL)、DCM(500mL)和乙酸乙酯(200mL)洗涤。将剩余固体真空干燥以得到为固体的6-氯代-2-氟代-3-羟基-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(2.7g，8.02mmol，产率36％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.58(br s，1H)，10.98(br s，1H)，10.50(br s，1H)，8.60(s，1H)，8.48(s，1H)，7.20(m，1H)，7.08(m，1H)，4.02(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝337.1，339.1。

步骤B：将6-氯代-2-氟代-3-羟基-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(7.2mg，0.0214mmol)溶于THF中并且用(4-(三氟甲基)苯基)甲醇(3.22μL，0.0235mmol)和三苯基膦(6.17mg，0.0235mmol)处理。将反应冷却至0℃，用偶氮羧酸二乙酯(7.4μL，0.0471mmol)处理并且将其在室温下搅拌16小时。将反应用EtOAc稀释，用水(2X)和盐水(1X)洗涤，经Na₂SO₄干燥且浓缩。通过柱色谱法，用己烷/乙酸乙酯(40％至100％EtOAc/己烷)洗脱将粗产物纯化以得到为固体的6-氯代-2-氟代-N-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-3-(4-(三氟甲基)苄氧基)苯甲酰胺(4.0mg，38％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ12.59(s，1H)，11.03(s，1H)，8.59-8.58(d，1H)，8.48-8.47(d，1H)，7.82-7.79(d，2H)，7.71-7.68(d，2H)，7.41-7.39(m，2H)，5.40(s，2H)，4.02(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝495.1，497.1。

实施例20

3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5- 基)苯甲酰胺

步骤A：将3-(1-甲基-环丙基)-3-氧代-丙腈(1.0g，8.12mmol)溶于EtOH(10mL)中。添加肼一水合物(3.03mL，40.6mmol)，并且将反应混合物加热至80℃进行30分钟，并随后冷却至室温。将反应浓缩并且通过柱色谱法，用EtOAc洗脱来纯化以得到为油状物的3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-胺(311mg，产率28％)。

步骤B：根据实施例1步骤A的一般操作，用3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺，制备3-(1-甲基环丙基)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(9％)。

步骤C：根据实施例1步骤B的一般操作，用3-(1-甲基环丙基)-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶制备3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺(96％)。

步骤D：根据实施例1步骤C的一般操作，用3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟代-N-(3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺(36％)。¹HNMR(400MHz，(CD3)2SO)δ13.21(s，1H)，11.01(s，1H)，8.63(s，1H)，8.60(s，1H)，7.36-7.49(m，7H)，5.28(s，2H)，1.56(s，3H)，1.12-1.15(m，2H)，0.83-0.86(m，2H)；m/z(APCI-pos)M+1＝451.1，453.2。

表1中的以下化合物是根据方法列中给出的实施例编号来制备。

表1

实施例78

N-(3-乙酰胺基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酰胺

步骤A：根据实施例1步骤A的一般操作，用1H-吡唑-3，5-二胺(US2007/0082902)代替3-甲氧基-1H-吡唑-5-胺并用乙酸代替水，制备N-(5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)乙酰胺(74％)。

步骤B：根据实施例1步骤A的一般操作，用N-(5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)乙酰胺代替3-甲氧基-5-硝基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶，制备N-(5-氨基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)乙酰胺(96％)。

步骤C：根据实施例1步骤C的一般操作，用N-(5-氨基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)乙酰胺代替3-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-胺并且用3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酸代替3-(苄氧基)苯甲酸，制备N-(3-乙酰胺基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)-3-(苄氧基)-6-氯代-2-氟苯甲酰胺(61％)。¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)δ13.22(s，1H)，10.99(s，1H)，10.63(s，1H)，8.72(s，1H)，8.64(s，1H)，7.36-7.49(m，7H)，5.27(s，2H)，2.12(s，3H)；m/z(APCI-pos)M+1＝452.2，454.2。

应理解的是，不希望所列举的实施方案限制本发明。相反地，本发明意欲涵盖所有替代方案、修改方案和等价方案，它们均可包括在如由权利要求书所界定的本发明的范畴之内。因此，前文描述仅视为是对本发明的原理的说明。

在本说明书和前文权利要求书中使用的词语“包含”、“包括”意在指定所述特征、整数、组分或步骤的存在，但它们并不排除一个或多个其它的特征、整数、组分、步骤或其组合的存在或加入。

Claims

1.选自式I的化合物及其立体异构体、互变异构体和药学上可接受的盐，所述化合物为：

其中：

R¹选自：

氢、

卤素、

CN、

NR^aR^b、

OR^c、

SR^d、

任选被1至3个R^e基团取代的苯基、

任选被C₁-C₄烷基取代的5-6元杂芳基、

任选被C₁-C₄烷基取代的饱和或部分不饱和4-6元杂环基、

任选被卤素、OR^c或NR^aR^b取代的C₂-C₆炔基、

任选被卤素、OR^c或NR^aR^b取代的C₂-C₆烯基，或

任选被1至3个R^f基团取代的C₁-C₆烷基；

R²和R³独立地选自氢、卤素、C₁-C₃烷基和C₁-C₃烷氧基；

R⁴和R⁵独立地选自氢、卤素或C₁-C₃烷基；

R⁷是氢或甲基；

R^d是C₁-C₆烷基；

2.根据权利要求1所述的化合物，R¹选自NR^aR^b、OR^c、SR^d、5-6元杂芳基、C₃-C₆环烷基和任选被1至3个R^f基团取代的C₁-C₆烷基。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R¹选自甲基、乙基、异丙基、CF₃、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂OCH₃、-OCH2CH₂N(CH₃)₂、-NHCH₃、-N(CH₃)₂、-NC(＝O)CH₃、-SCH₃、环丙基、1-甲基-环丙基和呋喃-2-基。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R⁶选自苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、4-碘苯基、2，4-二氟苯基、2-氟代-4-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-三氟甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氰基苯基、4-(甲基磺酰基)苯基、3-(吗啉代甲基)苯基、4-(吗啉代甲基)苯基、4-环丙基苯基、呋喃-2-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基、5-甲基异噁唑-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、2-甲基噻唑-4-基、4-甲基噻唑-5-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、5-氯吡啶-2-基、5-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-3-基、5-(三氟甲基)吡啶-2-基、6-(三氟甲基)吡啶-3-基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、吡嗪-2-基、2，3-二氢苯并呋喃-5-基、苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基、喹啉-6-基和1H-引哚-4-基。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R²、R³、R⁴和R³独立地选自氢、卤素和C₁-C₃烷基。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中式I中的残基

选自：

其中波浪线表示所述残基在式I中的连接点。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R²和R⁴独立地选自氢、卤素或甲基；R³是Cl；并且R⁵是氢或F。

8.一种如权利要求1所定义并且在本文的实施例1至78中任一个实施例中命名的式I化合物。

9.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至8中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

10.一种预防或治疗由b-Raf调节的疾病或病症的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物施用有效量的根据权利要求1至8中任一项所述的化合物。

11.一种预防或治疗癌症的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物单独施用或与具有抗癌性质的一种或多种其它化合物组合施用有效量的根据权利要求1至8中任一项所述的化合物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述癌症是肉瘤。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述癌症是癌瘤。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述癌瘤是鳞状细胞癌。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述癌瘤是腺瘤或腺癌。

16.根据权利要求11所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、卵巢癌、子***、***癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、骨髓样疾病、淋巴样疾病、毛细胞癌、口腔癌和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌、霍奇金氏(病或白血病。

17.一种治疗哺乳动物的过度增殖性疾病的方法，其包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求1至8中任一项所述的化合物。

18.一种用于治疗的根据权利要求1-8中任一项所述的化合物。

19.一种用于治疗过度增殖性疾病的根据权利要求1-8中任一项所述的化合物。

20.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物在制备用于治疗过度增殖性疾病的药物中的用途。

21.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物在制备作为b-Raf抑制剂用于对患者进行癌症治疗的药物中的用途。

22.一种预防或治疗肾病的方法，其包括对需要此治疗的哺乳动物单独施用或与一种或多种其它化合物组合施用有效量的根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述肾病是多囊性肾病。

24.一种用于治疗肾病的根据权利要求1-8中任一项所述的化合物。

25.根据权利要求24所述的化合物，其中所述肾病是多囊性肾病。

26.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物在制备用于治疗肾病的药物中的用途。

27.根据权利要求26所述的用途，其中所述肾病是多囊性肾病。

28.一种用于治疗过度增殖性疾病的包含根据权利要求1-8中任一项所述的化合物的药物组合物。

29.一种用于治疗癌症的包含根据权利要求1-8中任一项所述的化合物的药物组合物。

30.一种用于治疗肾病的包含根据权利要求1-8中任一项所述的化合物的药物组合物。

31.根据权利要求30所述的化合物，其中所述肾病是多囊性肾病。