CN102584547A - 一种没药烷倍半萜二聚体类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种没药烷倍半萜二聚体类化合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102584547A CN102584547A CN2012100097953A CN201210009795A CN102584547A CN 102584547 A CN102584547 A CN 102584547A CN 2012100097953 A CN2012100097953 A CN 2012100097953A CN 201210009795 A CN201210009795 A CN 201210009795A CN 102584547 A CN102584547 A CN 102584547A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- ethyl acetate
- gained
- dimer compound
- sesquiterpene dimer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 0 CC(C)CCC[C@@](C)c1c(*)cc(*)cc1 Chemical compound CC(C)CCC[C@@](C)c1c(*)cc(*)cc1 0.000 description 3
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及一种没药烷型倍半萜二聚体化合物及其制备方法与应用，制备时先在菌种培养基中对海洋真菌Aspergillus sp.进行菌种培养，再在发酵培养基中发酵培养，将所得发酵液过滤，得到滤液和菌体。将所得滤液用乙酸乙酯提取，得到滤液乙酸乙酯粗提物；将所得菌体先用丙酮提取，提取液合并浓缩后，再用乙酸乙酯提取，得到菌体乙酸乙酯粗提物。再将所得的两部分乙酸乙酯粗提物合并，减压浓缩后进行色谱分离，将所得洗脱液浓缩，得无色油状物，即为没药烷型倍半萜二聚体。本发明的化合物具有抗肿瘤活性，可用作抗肿瘤药，并且原料可以进行大规模生产，应用前景广阔。
Description
技术领域
本发明涉及一种从海绵内生真菌的菌体中提取分离的没药烷倍半萜二聚体类化合物及其制备方法和作为抗肿瘤药的应用。
背景技术
来自于海洋生物(珊瑚，海绵等)和海洋微生物的没药烷型倍半萜是一类具有广泛药理活性的化合物。研究表明，该类化合物多具有抗肿瘤，抗菌，抗病原微生物，酶抑制等药用价值。然而关于该类化合物的二聚体及其生物活性的报道还极为少见。到目前为止，仅有一例关于该类化合物二聚体的报道。本发明人研究发现来自于海绵(Xestospongia testudinaria)内生真菌Aspergillus sp.的液体发酵产物的粗提物显示较强的细胞毒活性，遂对其活性成分进行了研究，结果发现了具有抗肿瘤活性的没药烷型倍半萜二聚体化合物。目前尚未见任何对这些化合物的化学结构及抗肿瘤活性的研究报道，市场上也未见与此有关的药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种来源于海洋真菌的没药烷型倍半萜二聚体化合物及其制备方法与作为抗肿瘤药的应用，它能弥补现有技术的上述需求。菌种保藏信息：保藏单位名称：中国科学院微生物研究所；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2011年11月03日；保藏编号：5440；分类命名：曲霉Aspergillus sp.。
一种没药烷型倍半萜二聚体化合物，其特征在于分子式为C30H46O5，结构式为：
式中R1＝OH， 
或 
或R1＝OH，
上述没药烷型倍半萜二聚体的制备方法，其特征在于先在菌种培养基中对海洋真菌进行菌种培养，再在发酵培养基中发酵培养，将所得发酵液过滤，得到滤液和菌体。将所得滤液用乙酸乙酯提取，得到滤液乙酸乙酯粗提物；将所得菌体先用丙酮提取，提取液合并浓缩后，再用乙酸乙酯提取，得到菌体乙酸乙酯粗提物。再将所得的两部分乙酸乙酯粗提物合并，减压浓缩后进行色谱分离，将所得洗脱液浓缩，得无色油状物，即为没药烷型倍半萜二聚体化合物。
上述的没药烷型倍半萜二聚体化合物在制备抗肿瘤药中的应用。
本发明制备的没药烷型倍半萜二聚体化合物对人肝癌细胞HepG-2和人***细胞Caski具有较强的细胞毒活性，可用作抗肿瘤药物，并且原料可以进行大规模生产，应用前景广阔。
具体实施方式
制备本发明的化合物时，采取下述各步骤：
(1)先在菌种培养基中对海洋真菌(Aspergillus sp.)进行菌种培养，所用的培养基含有葡萄糖1.0％(重量百分数，下同)、酵母膏0.1％、蛋白胨0.2％、琼脂1.0％、氯化钠3.0％，其余为水。使用时将其制成试管斜面，上述真菌菌株在30℃下培养5天。
所述的菌种培养基含有葡萄糖0.1％-5.0％、酵母膏0.01％-1％、蛋白胨0.01％-1％、琼脂0.1％-3.0％、氯化钠0.05％-5％，其余为水。培养温度为15-35℃，培养时间为3-10天。
(2)上述培养所得的真菌菌种进行发酵培养，所用的发酵培养基含有葡萄糖1.0％、酵母膏0.1％、蛋白胨0.2％、氯化钠3.0％，其余为水。真菌菌株于25℃ 培养30天。
所述的发酵培养基含有葡萄糖0.1％-5.0％、酵母膏0.01％-1％、蛋白胨0.01％-1％、氯化钠0.05％-5％，其余为水。培养温度为15-35℃，培养时间为7-40天。
(3)化合物的提取分离
将前一步骤所得发酵液过滤，得到滤液和菌体。滤液用等体积的乙酸乙酯提取3次，提取液合并浓缩后，得到滤液乙酸乙酯粗提物；菌体先用丙酮提取3次，提取液合并浓缩后，再用乙酸乙酯提取3次，提取液再次合并浓缩，得到菌体乙酸乙酯粗提物。将上述所得的两部分乙酸乙酯粗提物合并减压浓缩后，得到滤液和菌体的乙酸乙酯相总浸膏。上述乙酸乙酯相总浸膏(82.5g)经过减压硅胶柱层析(VLC)，石油醚-乙酸乙酯梯度(90∶10，80∶20，60∶40，50∶50，30∶70，0∶100)洗脱，将其按照极性大小分成10个组分(Fr.1～Fr.10)。Fr.5(1.5g，石油醚-乙酸乙酯10∶2)经反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱层析(CHCl3∶MeOH＝1∶1)，最后经高效液相色谱层析(MeOH∶H2O＝85∶15)得化合物disydonol B (6.4mg，tR 21.4min)，disydonol A (10.2mg，tR 22.1min)和disydonol C(5.6mg，tR 23.5min)。
所得化合物的波谱数据
Disydonol A：无色油状物； 
(c 0.36，CHCl3)；UV λmax(log ε，MeOH)226.0(4.30)，256.0(4.08)，279.0(4.00)nm；IR(KBr)υmax 3267，2953，2869，1575，1507，1464，1382，1288，1164，1018，875，814cm-1；ESIMS(pos.)m/z509.6[M+Na]+，996.3[2M+Na]+；HR-ESI-MS m/z 509.3234[M+Na]+(calcd for C30H46O5Na 509.3243)；1H及13C NMR数据分别见表1和表2。
Disydonol B：无色油状物； (c 0.35，CHCl3)；UVλmax(log ε，MeOH)226.0(4.30)，256.0(4.08)，279.0(4.00)nm；IR(KBr)υmax 3268，2953，2869，1574， 1506，1421，1369，1287，1163，1017，875cm-1；ESI-MS m/z 509.6[M+Na]+，996.3[2M+Na]+；HR-ESI-MSm/z 509.3225[M+Na]+(calcd for C30H46O5Na，509.3243)；1H及13C NMR数据分别见表1和表2。
Disydonol C：无色油状物； 
(c 0.64，CHCl3)；UVλmax(logε，MeOH)224.0(4.31)，257.0(4.08)，278.0(4.01)nm；IR(KBr)υmax 3296，2953，2904，1575，1506，1422，1380，1287，1164，1019，875，813cm-1；ESI-MS m/z 509.6[M+Na]+，996.2[2M+Na]+；HR-ESI-MSm/z 509.3253[M+Na]+(calcd for C30H46O5Na509.3243)；1H及13C NMR数据分别见表1和表2。
表1.化合物disydonols A-C的1H NMR数据(600MHz in CDCl3)
a Signals are overlapped.
表2.化合物disydonols A-C的13C NMR数据(150MHz in CDCl3)
a and b Close δc values may be interchangeable in the same column.
本实施例制得的没药烷型倍半萜二聚体化合物的结构式为：
式中R1＝OH， 
或 
或R1＝OH， 
本发明的化合物在制备抗肿瘤药中的应用
本发明的化合物的抗肿瘤活性试验
(1)抗肿瘤活性测试
采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法，对人肝癌细胞HepG-2和人***细胞Caski的体外抗肿瘤活性进行测试。
(2)活性测试方法
实验设阴性对照组(水)、DMSO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉素C)和8个不同浓度(0.2，0.4，0.8，1.6，3.2，6.4，12.8，25.6)的待测样品组，每个浓度设3个平行。选取对数生长期细胞，用RPMI1640完全培养基制成单细胞悬浮液，用血球计数板计数，按50000个/mL接种90μL于96孔平底细胞培养板，置于体积分数为5％CO2、湿度90％以上、37℃温箱中培养。24h后取出，加入1mg待测样品，继续培养72h后取出，置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况。然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液50μL，37℃反应4h后，吸弃上清液，再向各孔加入100μL DMSO，充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用570nm波长测量各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率：
根据样品浓度与抑制率的关系，求出抑制率为50％时样品的半数抑制浓度 (IC50)，样品活性结果即以IC50表示。
(3)活性测试结果
试验结果显示，本发明制备的没药烷型倍半萜二聚体化合物能有效的抑制人肝癌细胞HepG-2和人***细胞Caski的生长。没药烷型倍半萜二聚体化合物disydonol A对上述两种细胞株的IC50值分别为9.31和12.4μg/mL，没药烷型倍半萜二聚体化合物disydonol C对上述两种细胞株的IC50值分别为2.91和10.2μg/mL。实验表明，本发明的二聚体化合物对人肝癌细胞HepG-2和人***细胞Caski具有明显的细胞毒活性，因此可作为抗肿瘤药物，并且原料可以进行大规模生产，应用前景广阔。
Claims (5)
1.一种没药烷型倍半萜二聚体化合物，其特征在于分子式为C30H46O5，结构式为
式中R1＝OH，
R1＝OH，
2.权利要求1所述的没药烷型倍半萜二聚体化合物的制备方法，其特征在于先在菌种培养基中对海洋真菌Aspergillus sp.进行菌种培养，再在发酵培养基中发酵培养，将所得发酵液过滤，得到滤液和菌体。将所得滤液用乙酸乙酯提取，得到滤液乙酸乙酯粗提物；将所得菌体先用丙酮提取，提取液合并浓缩后，再用乙酸乙酯提取，得到菌体乙酸乙酯粗提物。再将所得的两部分乙酸乙酯粗提物合并，减压浓缩后进行色谱分离，将所得洗脱液浓缩，得无色油状物，即为没药烷型倍半萜二聚体化合物。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的菌种培养基含有葡萄糖0.1％-5.0％、酵母膏0.01％-1％、蛋白胨0.01％-1％、琼脂0.1％-3.0％、氯化钠0.05％-5％，其余为水。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的发酵培养基含有葡萄糖0.1％-5.0％、酵母膏0.01％-1％、蛋白胨0.01％-1％、氯化钠0.05％-5％，其余为水。
5.权利要求1所述的没药烷型倍半萜二聚体化合物在制备抗肿瘤药中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012100097953A CN102584547A (zh) | 2012-01-05 | 2012-01-05 | 一种没药烷倍半萜二聚体类化合物及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012100097953A CN102584547A (zh) | 2012-01-05 | 2012-01-05 | 一种没药烷倍半萜二聚体类化合物及其制备方法与应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102584547A true CN102584547A (zh) | 2012-07-18 |
Family
ID=46473883
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2012100097953A Pending CN102584547A (zh) | 2012-01-05 | 2012-01-05 | 一种没药烷倍半萜二聚体类化合物及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102584547A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106831410A (zh) * | 2017-01-23 | 2017-06-13 | 南通大学 | 异普耳文酸衍生物及其制备方法与应用 |
| CN109096056A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-28 | 中山大学 | 红树林内生真菌来源的没药烷倍半萜类化合物及制备方法和在抗ii型糖尿病药物中的应用 |
-
2012
- 2012-01-05 CN CN2012100097953A patent/CN102584547A/zh active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| LING-LING SUN ET AL: "New bisabolane sesquiterpenoids from a marine-derived fungus Aspergillus sp. isolated from the sponge Xestospongia testudinaria", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106831410A (zh) * | 2017-01-23 | 2017-06-13 | 南通大学 | 异普耳文酸衍生物及其制备方法与应用 |
| CN106831410B (zh) * | 2017-01-23 | 2019-10-29 | 南通大学 | 异普耳文酸衍生物及其制备方法与应用 |
| CN109096056A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-28 | 中山大学 | 红树林内生真菌来源的没药烷倍半萜类化合物及制备方法和在抗ii型糖尿病药物中的应用 |
| CN109096056B (zh) * | 2018-08-07 | 2021-04-30 | 中山大学 | 红树林内生真菌来源的没药烷倍半萜类化合物及制备方法和在抗ii型糖尿病药物中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107298671B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸h及制备抗人结肠癌药物的应用 | |
| Ma et al. | New benzoate derivatives and hirsutane type sesquiterpenoids with antimicrobial activity and cytotoxicity from the solid-state fermented rice by the medicinal mushroom Stereum hirsutum | |
| CN107353274B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸i及制备抗人食管癌药物的应用 | |
| CN107298672B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸i在制备抗人结肠癌药物的应用 | |
| CN107841466B (zh) | 一种由海洋青霉属真菌大规模制备青霉酸的方法 | |
| Feng-Wu | Bioactive metabolites from Guignardia sp., an endophytic fungus residing in Undaria pinnatifida | |
| CN107485607B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸h在制备抗人食管癌药物的应用 | |
| CN106432168B (zh) | 红树尖瓣海莲内生真菌来源的抗弧菌活性化合物及其制备方法 | |
| CN109134574B (zh) | 甾体化合物及其制备方法与应用和抗肿瘤的药物 | |
| CN107298669B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸i及抗人口腔表皮样癌药物应用 | |
| CN104059040B (zh) | 具有抗肿瘤活性的倍半萜类化合物及其制备方法 | |
| CN103911407B (zh) | 一种海洋真菌来源的Azaphilone类二聚体化合物的制备方法及应用 | |
| CN102584547A (zh) | 一种没药烷倍半萜二聚体类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN103910701A (zh) | 一种海洋真菌来源的萘醌类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN109134416B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸h在制备人子***药物的应用 | |
| CN107739362B (zh) | 源于杂色曲霉蒽醌类化合物及制备抗人食管癌药物的应用 | |
| CN106432169B (zh) | 一种抗弧菌活性的异香豆素类化合物及其晶体 | |
| CN104804020A (zh) | 硫代二酮哌嗪类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN110407794B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸k及在抑制癌细胞增殖上的应用 | |
| CN110407797B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸类化合物Secalonic acid K及制备方法 | |
| CN109134417B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸i及抗人子***药物的应用 | |
| CN102633616B (zh) | 蒽醌二聚体衍生物Alterporriol P及其制备方法与应用 | |
| CN102168119B (zh) | 一种制备diaporthein B的方法及diaporthein B在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| KR101999273B1 (ko) | 고순도 코디세핀의 제조 방법, 고함량의 코디세핀을 함유하는 동충하초 및 그로부터 얻어지는 고순도 코디세핀 | |
| CN104059038A (zh) | 一种倍半萜类化合物及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20120718 |