CN102246960B - 虫草银杏功能性食品、制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了虫草银杏功能性食品，涉及生物技术领域。本发明采用三种酶水解银杏白果，获得银杏白果水解液，该水解液中含有银杏黄酮、萜类化合物、氨基酸和肽类、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽类含量≥1％，淀粉含量≥2%，该水解液添加银杏叶提取物后通过虫草菌种转化、打浆、浓缩和干燥后获得虫草银杏功能性食品。该产品中由于含有黄酮类化合物，萜类以及虫草素等活性成分，因而具有降低血压和体内氧化压力之功效。
Description
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，特指利用三种酶水解白果，再经过虫草真菌发酵生产的虫草银杏功能性食品的方法和用途。
背景技术：
银杏的果实俗称白果，白果的主要成分是蛋白质、淀粉和脂肪，另外含有黄酮、萜类化合物、银杏酸、氢化白果酸、氢化白果亚酸、银杏醇、白果酚、五碳多糖；脂面醇瓣虞分。我国中医古书，一直将白果列为重要药材，白果酸抑制多种杆菌及皮肤真菌，并对葡萄球菌、链球菌、白喉、炭瘟杆菌，枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、伤寒菌等都有不同程度的抑制作用。从鲜白果中提取出来的白果酚甲，有降压作用，并且使血管的渗透性增加。近年来各地临床试验证明，经常食用白果，可治高血压、止白带、咳锹发热；心脑血管、呼吸***、皮肤病、牙痛等疾病，还有清热扰菌、温肺益气、扩张血管、增加血流量、定痰喘、去皱纹、防衰老、润音喉、健身美容、延年益寿等功效。但是白果中由于含有微量的白果酚、白果酸，易导致人体食欲不振、脱皮、触痛，不等程度的肝损害、肾小球肾炎，白果酸有溶血作用引起惊厥和死亡。由于这些副作用阻碍了白果的大量的食用。因此采用一方面可以强化白果的药用价值，同时具有降低白果毒性的技术开发利用白果资源具有重要社会学意义，同时也会带来巨大的经济价值。
在银杏资源综合开发方面，国外主要集中在药剂和保健品的开发利用上，利用银杏叶为原料开发的银杏制品已达30多种，年销售额在20-40亿美元。发展趋势仍集中在银杏叶上，一是对银杏叶有效成份的新发现和分离；二是银杏叶制剂的复配；三是银杏叶药用新功效的开发。在叶的利用上，以采用水或乙醇等作为溶剂生产银杏叶提取物为主，产品大部分出口，少量的制成保健食品销售；也有研制出用银杏叶提取物制作专用化妆护肤品的报道。有些地区还生产银杏叶茶和药枕。在银杏花粉的利用上，以果用树人工授粉为主，未见银杏花粉类产品。在果的利用上，以出口或内销干果为主，消费主要集中在餐饮行业。国内在银杏叶果方面的专利主要在提取和功能，而利用生物工程技术转化同时转化银杏果和叶的提取物国内外还没有报道，也未查到相关专利。如发明专利“猴头菌转化银杏叶提取物的制备方法及用途” (申请号: 200710190182.3)描述了利用猴头菌转化银杏叶提取物提高发酵液的降血糖活性，没有涉及银杏果，同时也未涉及银杏毒素的降解；发明专利“一种复合银杏保健品及制备方法”（专利号: 99127020.7）描述了银杏提取物与其它药物复配制得保健品，该保健品具有调节血脂、保护心脑血管、延缓衰老等功效；发明专利“一种银杏食品添加剂”（申请号: 200610068947.1）描述了银杏果仁与人参、枸杞和红花复配制成的食品添加剂；“银杏提取物在药物组合物制备中的应用,以及银杏提取物用作美容性治疗的方法”（申请号：97192462.7）描述了用银杏的一种活性组分制作一种有免疫调节活性的组合物。关于银杏脱毒的专利几乎全部集中在提取方法的改进，如“制备具有低含量的4’-O-甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏提取物的改进方法”（申请号：200680013412.2）描述了利用吸附树脂和离子交换树脂降低银杏提取物中4′-O-甲基吡哆醇和/或双黄酮的方法；“一种从银杏提取物中去除银杏酚酸的方法”（01133794.X）描述了采用反复萃取技术从银杏提取物中去除银杏酚酸的方法。所能查到的银杏提取物脱毒的方法均采用化学方法。这些方法脱毒也只能去除其中某一种毒性物质。
银杏叶都含有白果酸、氢化白果酸和氢化白果亚酸等毒性物质，其中白果酚和银杏酚分别为烃基取代的苯酚和间苯二酚衍生物，是银杏的主要有毒物质，它们在银杏果实中分布最多，是过多食用白果造成中毒的主要成分。这些银杏毒素使得银杏白果的食用量受到了一定的限制，限制了银杏叶提取物及银杏果的销售量，尽管发明专利（申请号：201010145686.5）涉及药用真菌金耳液体发酵转化白果技术，获得的产品低毒或无毒，同时具有降低体内氧化压力，增强肌体免疫力，调节血糖、血脂，缓解老年性哮喘等功效。本技术采用生物工程技术极大的降低了银杏毒素的含量，使产品变得更加安全，同时产品具有降低血压和体内氧化压力之功效。
发明内容：
本发明提供的是虫草银杏功能性食品生产技术，该食品含有银杏活性成分（黄酮和萜类）和虫草活性成分（虫草多糖和胆固醇），具有预防高血压、降低体内氧化压力之功效。
本发明虫草银杏功能性食品，特征在于采用三种酶水解银杏白果，获得银杏白果水解液，该水解液中含有银杏黄酮、萜类化合物、氨基酸和肽类、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽类含量≥1％，淀粉含量≥2%，该水解液添加银杏叶提取物后通过虫草菌种转化、打浆、浓缩和干燥后获得虫草银杏功能性食品。
虫草银杏功能性食品，其中总黄酮含量0.5～2mg/g，银杏内酯0.1～0.6 mg/g，总萜类化合物含量3～80mg/g, 蛋白质6～20mg/g，可溶性糖0～0.2mg/g，虫草酸0.1～0.3mg/g,虫草素0.05～0.2mg/g，银杏酚酸0～5ug/g,氢氰酸0～0.1μg/g。
本发明的目的在于提供一种虫草银杏功能性食品的制备方法，其特征在于按下述步骤制备得到：
精确称取已经脱壳的银杏白果，打浆加入1～5倍的水，煮沸糊化，加入0.2～5.0%（质量/体积）液化酶，80℃水浴10～50分钟，冷却到50～70℃后，加入0.1～4.0%（质量/体积）糖化酶，50～70℃水浴10～50分钟，待冷却至40～60℃以下后加入0.2～3.0%（质量/体积）蛋白酶40～60℃水解0.5～9小时，制得银杏白果水解液；银杏白果水解液100～120℃灭菌10～60分钟，冷却后接入虫草试管斜面菌种，在转速60～180转/分钟，温度22～33℃培养5～10天，制得虫草液体摇瓶菌种；银杏白果水解液经过100～120℃灭菌，以体积比3～10％接种量接入虫草液体摇瓶菌种，在温度22～33℃，搅拌转速60～250转/分，通风量1：0.3～1：1.2v/v/m培养3～8天，制得虫草银杏一级液体菌种；银杏水解液经过100～120℃灭菌10～60分钟，以体积比为3～10％接种量接入虫草银杏一级液体菌种，在温度22～33℃，搅拌转速60～250转/分，通风量1：0.3～1：1.2v/v/m培养3～10天，制得虫草银杏发酵液；虫草银杏发酵液经过薄膜浓缩，喷雾干燥（喷雾干燥时进口温度160℃，出口温度120℃）得到虫草银杏发酵液干粉；菌丝体经过80℃烘干，干燥物粉碎，过200目筛，得到菌丝体干粉，菌丝体干粉与发酵液干粉混合均匀即为虫草银杏白果功能性食品。
其中银杏白果水解液制备过程中所使用的蛋白酶包括：风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、高效水解蛋白酶、小麦蛋白水解专用酶等。
用该工艺生产的虫草银杏白果功能性食品，其特征在于色质黄色至褐色，具有淡淡白果香味和虫草发酵的特有香味。
本发明提供的虫草银杏功能性食品，其特征在于该食品含有银杏活性成分（黄酮和萜类）和虫草活性成分（如虫草多糖、甘露醇和虫草酸），具有降低血压和体内氧化压力之效。
附图说明：
图1是本发明的工艺流程图
具体实施方式
本发明中所述的虫草银杏白果功能性食品中活性成分分别按下列方法检测：总黄酮含量的测定采用亚硝酸钠－硝酸铝法（邓斌, 蒋刚彪, 陈六平：分光光度法测定食品包装纸用紫甘薯总黄酮的含量.包装工程,2008,29(1):27～29.）；萜类含量的测定采用王翔飞介绍的测定方法（王翔飞,潘旭东,刘雯霞,等：黄花瓦松中总三萜成分的含量的测定.中国民族民间医药,2009,18(10):11.）；银杏内酯含量测定采用分光光度法（张渝阳，王鑫， 赵丽娟，荀绍馨，田明，张新，王晓宁，邓桂春：分光光度法测定银杏萜内酯的含量.辽宁化工,2006,35(10):618～620）；氢氰酸含量测定依据中华人民共和国国家标准GB/T15665-1995：豆类、配糖氢氰酸含量的测定;银杏酚酸采用荧光分析法测定（田亚平,尤文元,李彧娜：荧光分析法测定银杏酚酸. 分析化学研究简报.2006年特刊，s155-s157），虫草酸测定采用比色法（董巍巍,吕效平,李祥,陈建伟2,孙东东2,左坚：人工虫草及野生虫草的成分比较研究。现代中药研究与实践2007，22（2）：39～41）；虫草素含量测定采用高效液相色谱法（夏敏：反相高效液相色谱法测定蛹虫草中虫草素的含量.淮阴工学院学报，2004, 13(3)22～24）。
下面结合实施例对本发明做进一步阐述：
本发明中实施例1～3中所使用的虫草菌种为可以购买到的任意一种虫草菌种。虫草斜面菌种采用PDA培养基制备。1000mLPDA培养基含 200g马铃薯提取液（去皮马铃薯切成碎片、1000mL蒸馏水煮沸30分钟，八层纱布过滤，滤液定容至1000mL，滤液即为马铃薯提取液）加入蔗糖20g、琼脂20g，煮沸待琼脂完全溶化后分装试管，塞上棉塞，121℃灭菌，制成斜面。无菌接种虫草菌种，28℃培养7天，4℃冷藏待用。
实施例1
精确称取已经脱壳的白果200g，打浆加入200mL的水，煮沸糊化，温度降至60℃，加入0.4mL液化酶（无锡赛德生物工程有限公司，16万单位/mL）60℃水解50分钟，降温到50℃，加入0.2mL糖化酶（无锡赛德生物工程有限公司，2万单位/mL）50℃水解50分钟，降温到30℃，加入0.4g木瓜蛋白酶（广西南宁东恒华道生物科技有限公司，80万单位/g），水解9小时，制得银杏白果水解液；银杏白果水解液分装到250mL三角瓶，每瓶100mL，100℃灭菌60分钟，冷却后接入虫草试管斜面菌种，在转速60转/分钟，温度22℃培养10天，制得虫草液体摇瓶菌种；白果水解液经过100℃灭菌60分钟，以10％接种量接入虫草的液体摇瓶菌种，在温度22℃，搅拌转速60转/分，通风量1：0.3v/v/m培养8天，制得虫草银杏一级液体菌种；银杏白果水解液经过100℃灭菌60分钟，以3％接种量接入虫草的一级液体菌种，在温度22℃，搅拌转速60转/分，通风量1：0.3v/v/m培养10天，制得虫草银杏发酵液；虫草银杏发酵液经过薄膜浓缩，喷雾干燥（喷雾干燥时进口温度160℃，出口温度120℃）得到虫草银杏发酵液干粉；菌丝体经过80℃烘干，干燥物粉碎，过200目筛，得到菌丝体干粉，菌丝体干粉与发酵液干粉混合均匀即为虫草银杏白果功能性食品，该食品色质是黄色。
实施例2
精确称取已经脱壳的白果200g，打浆加入1000mL水，煮沸糊化，降温至70℃加入加入1.6mL液化酶（无锡赛德生物工程有限公司，16万单位/mL）70℃水解30分钟，降温到60℃，加入1.6mL糖化酶（无锡赛德生物工程有限公司，2万单位/mL）60℃水解30分钟，降温到40℃，加入0.4g木瓜蛋白酶（广西南宁东恒华道生物科技有限公司，80万单位/g），水解6小时，制得银杏白果水解液；银杏白果水解液分装到250mL三角瓶，每瓶100mL，110℃灭菌30分钟，冷却后接入虫草试管斜面菌种，在转速120转/分钟，温度28℃培养7天，制得虫草液体摇瓶菌种；白果水解液经过110℃灭菌30分钟，以7％接种量接入虫草的液体摇瓶菌种，在温度28℃，搅拌转速160转/分，通风量1：0.8v/v/m培养5天，制得虫草银杏一级液体菌种；银杏白果水解液经过110℃灭菌30分钟，以7％接种量接入虫草的一级液体菌种，在温度28℃，搅拌转速160转/分，通风量1：0.8v/v/m培养5天，制得虫草银杏发酵液；虫虫草银杏发酵液经过薄膜浓缩，喷雾干燥（喷雾干燥时进口温度160℃，出口温度120℃）得到虫草银杏发酵液干粉；菌丝体经过80℃烘干，干燥物粉碎，过200目筛，得到菌丝体干粉，菌丝体干粉与发酵液干粉混合均匀即为虫草银杏白果功能性食品，食品色质是浅褐色。
实施例3
精确称取已经脱壳的白果200g，打浆，加入2000mL水，煮沸糊化，降温至80℃，加入100mL液化酶（无锡赛德生物工程有限公司，16万单位/mL）80℃水解10分钟，降温到70℃，加入100mL糖化酶（无锡赛德生物工程有限公司，2万单位/mL）70℃水解10分钟，降温到50℃，加入30g木瓜蛋白酶（广西南宁东恒华道生物科技有限公司，80万单位/g），水解0.5小时，制得银杏白果水解液；其中所述的摇瓶培养工艺是：银杏白果水解液分装到250mL三角瓶，每瓶100mL，120℃灭菌10分钟，冷却后接入虫草试管斜面菌种，在转速180转/分钟，温度33℃培养5天，制得虫草液体摇瓶菌种；白果水解液经过120℃灭菌，以10％接种量接入虫草的液体摇瓶菌种，在温度33℃，搅拌转速250转/分，通风量1：1.2v/v/m培养3天，制得虫草银杏一级液体菌种；银杏白果水解液经过120℃灭菌10分钟，以10％接种量接入虫草的一级液体菌种，在温度33℃，搅拌转速250转/分，通风量1： 1.2v/v/m培养3天，制得虫草银杏发酵液；虫草银杏发酵液经过薄膜浓缩，喷雾干燥（喷雾干燥时进口温度160℃，出口温度120℃）得到虫草银杏发酵液干粉；菌丝体经过80℃烘干，干燥物粉碎，过200目筛，得到菌丝体干粉，菌丝体干粉与发酵液干粉混合均匀即为虫草银杏白果功能性食品，食品色质是褐色。
实施例4
实施例1、实施例2和实施例3的测定结果显示在表1。
表1：实施例1～3成分分析表
| 项目 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 |
| 黄酮（mg/g） | 0.61 | 1.42 | 1.98 |
| 银杏内酯(mg/g) | 0.15 | 0.32 | 0.57 |
| 总萜类(mg/g) | 32．1 | 41.7 | 72．6 |
| 蛋白质(mg/g) | 7.35 | 7.08 | 18.9 |
| 可溶性糖（%） | 0.192 | 0.173 | 0.191 |
| 虫草酸（mg/g） | 0.105 | 0.187 | 0.291 |
| 虫草素（mg/g） | 0.06 | 0.12 | 0.19 |
| 银杏酚酸（μg/g） | 0.32 | 0.34 | 0.31 |
| 氢氰酸（μg/g） | 0.02 | 0.03 | 0.02 |
实施例5
60只ICR小鼠随机分为5 组，每组12 只。正常对照组25 ℃ 饲养;冷激对照组，冷激果酒组每天组每天上午8:00—12:00 置于(4±2)℃ 光照培养箱中，随后取出放回25 ℃ 环境中,冷刺激组分别于每日16:00 灌胃施例1、实施例2和实施例3虫草银杏食品，剂量为10mg/Kg体重，正常对照组、冷激对照组每天灌胃等量生理盐水作对照；所有组别正常投喂饲料，饮自来水。18 d 后按5 mL/Kg体重腹腔注射质量分数20% 氨基甲酸乙酯将小鼠麻醉，颈动脉插管法测量并记录血压。结果（表2）所有供试药物血压和模型对照组相比，均显著降低。
表2：对照组与实验组小鼠血压值比较(1mmHg=0.133KPa，平均值±标准误)
实施例6
虫草银杏食品抗氧化能力评价采用采用普鲁士兰法测定抗氧化能力（赵艳红,李建科,李国秀.天然抗氧化物体外活性评价方法的优选与优化.食品科学,2008,29(6):64-69）。取1 mg虫草银杏食品，加入2.5 mL pH 6.6 的磷酸缓冲液和质量分数1%铁***溶液2.5 mL，混合后在50℃下放置20 min，加入质量分数10%三氯乙酸溶液2.5 mL混合，取混合液2.5 mL，加入2.5 mL蒸馏水和质量分数0.1% 氯化铁2.5 mL，混匀，静置10 min，在700 nm 处测定吸光度。以蒸馏水代替虫草银杏食品重复上述操作作为对照。吸光度越高，抗氧化性越好，还原力越强。每个实施例测定重复三次，结果以平均值表示（表3）。结果显示实施例1～3的吸光度均显著高于对照组，说明实施例制得虫草银杏食品具有显著的降低氧化压力的作用。
表3：实施例1～3虫草银杏食品抗氧化作用评价
| 试验 | 对照 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 |
| 吸光度 | 0.61 | 0.74 | 0.78 | 0.83 |
Claims (2)
1.虫草银杏功能性食品，其特征在于其中总黄酮含量0.5～2mg/g，银杏内酯0.1～0.6 mg/g，总萜类化合物含量3～80mg/g, 蛋白质6～20mg/g，可溶性糖0～0.2mg/g，虫草酸0.1～0.3mg/g,虫草素0.05～0.2mg/g，银杏酚酸0～5μg/g,氢氰酸0～0.1μg/g；且可溶性糖的含量不为0，银杏酚酸的含量不为0，氢氰酸的含量不为0；
按下述步骤制备得到：精确称取已经脱壳的银杏白果，打浆加入1～5倍的水，煮沸糊化，加入以质量与体积比计为0.2～5.0%液化酶，80℃水浴10～50分钟，冷却到50～70℃后，加入以质量与体积比计为0.1～4.0%糖化酶，50～70℃水浴10～50分钟，待冷却至60℃以下后加入以质量与体积比计为0.2～3.0%蛋白酶40～60℃水解0.5～9小时，制得银杏白果水解液；银杏白果水解液100～120℃灭菌10～60分钟，冷却后接入虫草试管斜面菌种，在转速60～180转/分钟，温度22～33℃培养5～10天，制得虫草液体摇瓶菌种；银杏白果水解液经过100～120℃灭菌，以体积比3～10％接种量接入虫草液体摇瓶菌种，在温度22～33℃，搅拌转速60～250转/分，通风量1：0.3～1：1.2v/v/m培养3～8天，制得虫草银杏一级液体菌种；银杏白果水解液经过100～120℃灭菌10～60分钟，以体积比为3～10％接种量接入虫草银杏一级液体菌种，在温度22～33℃，搅拌转速60～250转/分，通风量1：0.3～1：1.2v/v/m培养3～10天，制得虫草银杏发酵液；虫草银杏发酵液经过薄膜浓缩，喷雾干燥得到虫草银杏发酵液干粉，其中喷雾干燥时进口温度160℃，出口温度120℃，菌丝体经过80℃烘干，干燥物粉碎，过200目筛，得到菌丝体干粉，菌丝体干粉与发酵液干粉混合均匀即为虫草银杏白果功能性食品。
2.权利要求1所述的虫草银杏功能性食品，其特征在于其中银杏白果水解液制备过程中所使用的蛋白酶为木瓜蛋白酶。
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20111123 Assignee: JIANGSU BAIKANG BIOTECHNOLOGY CO., LTD. Assignor: Jiangsu University Contract record no.: 2013320000769 Denomination of invention: Chinese caterpillar fungus ginkgo functional food, preparation method and application Granted publication date: 20130123 License type: Exclusive License Record date: 20131114 |
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| LICC | Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model |