CN102218122B - 一种海龙蛤蚧口服液的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种海龙蛤蚧口服液的质量控制检测方法，在原检测标准基础上增加了海龙蛤蚧口服液处方中陈皮、黄芪的薄层色谱检测方法，改进了人参和黄芩的薄层色谱法，增加了处方中淫羊藿的高效液相色谱法测定含量。本发明设计的检测项目合理，提供的检测方法先进，精密度及重现性好，用于海龙蛤蚧口服液药物的质量控制，能够全面的对海龙蛤蚧口服液进行质量控制，保证产品质量的稳定性均一性。
Description
技术领域
本发明公开了一种具有温肾壮阳，补益精血功效的海龙蛤蚧口服液的检测方法。
背景技术
“海龙蛤蚧口服液”功能主治：温肾壮阳，补益精血。用于腰足酸软，面色白光白，阳萎遗精，宫冷***，头目眩晕。
“海龙蛤蚧口服液”的原检测标准收载于中华人民共和国***药品标准中药成方制剂第十三册。原标准中只有药材人参和黄芩的薄层色谱鉴别，由于原标准的检测项目少，方法单一，因此不能保证对该药品的质量进行全面的控制和检测。
发明内容
本发明提供了海龙蛤蚧口服液的检测方法，用于海龙蛤蚧口服液药物的质量控制，本发明设计的检测项目合理，提供的检测方法先进，精密度及重现性好，能够全面的对海龙蛤蚧口服液进行质量控制，保证产品质量的稳定性均一性。
本发明海龙蛤蚧口服液的检测方法，将海龙39.1g 、蛤蚧0.73g、人参4.68g、羊鞭4.68g、羊外肾4.68g、黄芩4.68g、熟地黄3.1g 、菟丝子3.1g、何首乌3.1g、 地黄3.1g、陈皮3.1g、当归1.56g、黄芪4.68g、阳起石1.56g、莲须1.56g、甘草1.56g、川芎1.56g、泽泻1.56g、锁阳1.56g、豆蔻1.56g、沉香1.56g、鹿茸1.56g、枸杞子1.56g、肉苁蓉0.78g、羊油炙淫羊藿1.56g、肉桂 1.56g、韭菜子1.56g、蛇床子1.56g、花椒0.31g二十九味成分加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，在80℃浓缩至相对密度为1.04～1.06的清膏，加乙醇二倍量，冷藏12小时，滤过，浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液加苯甲酸适量使溶解，用8％氢氧化钠调PH值4.6～4.8，加矫味剂木糖醇3％，调整总量至1000ml，滤过，分装，灭菌，即得。淡棕色至红棕色的液体；味微苦。
本发明海龙蛤蚧口服液的检测方法，1）取海龙蛤蚧口服液30ml，加***20ml，振摇提取，放置，弃去***液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，用量依次为20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，加4％氢氧化钾溶液30ml洗涤一次，弃去洗液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以65:35:10的三氯甲烷－甲醇－水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
2）取海龙蛤蚧口服液40ml，用盐酸酸化，pH 值3～4，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1:1:1的乙酸丁酯－甲酸－水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％的三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
3）取海龙蛤蚧口服液60ml，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照品溶液10μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的硅胶G薄层板上，以100:17:13的乙酸乙酯－甲醇－水为展开剂，展开5cm，再以20:10:1:1的甲苯－乙酸乙酯－甲酸－水的上层溶液为展开剂，展开13cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下检视，波长为365nm；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
4）取海龙蛤蚧口服液60ml，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，加1％氢氧化钠溶液振摇提取3次，每次20ml，弃去氢氧化钠溶液，正丁醇层加正丁醇饱和的水洗涤3次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10:20:11:5的三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
5）检查：pH值为4.0～5.0，相对密度 无糖型应不低于1.01；低糖型应不低于1.05；其他应符合合剂中国药典2010年版一部附录I J项下有关的各项规定；
6）含量测定：淫羊藿苷照高效液相色谱法测定
淫羊藿苷：照中国药典2010年版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定；
色谱条件与***适用性试验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以25：75的乙腈-水为流动相；检测波长为270nm，柱温为室温。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备： 精密称取淫羊藿苷对照品适量，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，淫羊藿苷每1ml含8μg；
供试品溶液的制备： 精密量取海龙蛤蚧口服液40ml，加***振摇提取3次，每次40ml，弃去***液，水层加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，加0.5mol/L碳酸钠溶液振摇提取3次，每次40ml，弃去碳酸钠溶液，正丁醇层置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇25ml使溶解，作为供试品溶液；
测定法： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
海龙蛤蚧口服液每1ml含淫羊藿以淫羊藿苷分子式为C33H40O15计，不得少于1.35μg。
本发明的积极效果在于：在原检测标准基础上增加了海龙蛤蚧口服液处方中陈皮、黄芪的薄层色谱检测方法，改进了人参和黄芩的薄层色谱法，增加了处方中淫羊藿的高效液相色谱法测定含量；本发明设计的检测项目合理，提供的检测方法先进，精密度及重现性好，用于海龙蛤蚧口服液药物的质量控制，能够全面的对海龙蛤蚧口服液进行质量控制，保证产品质量的稳定性均一性。
本发明在原低糖口服液的基础上，创新增加了无糖型口服液，使得很多糖尿病的适用者可以服用本口服液，增加了适应症人群。
附图说明
图1：人参薄层色谱图
1、人参皂苷对照品Rg1 2、3、4、三批样品；5、阴性对照
图2：黄芩薄层色谱图
1、黄芩苷；2、3、4、三批样品；5、阴性对照
图3：陈皮薄层色谱图
1、橙皮苷；2、；3、；4、三批样品；5、阴性对照
图4：黄芪薄层色谱图
1、黄芪甲苷；2、3、4、三批样品；5、阴性对照
图5：淫羊藿苷对照品紫外吸收图
图6：淫羊藿苷对照品标准曲线图
图7：淫羊藿苷对照品HPLC色谱图
图8：供试品溶液的HPLC色谱图
图9：阴性对照液的HPLC色谱图
具体实施方式
为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。
实施例1
取海龙39.1g 、蛤蚧0.73g、人参4.68g、羊鞭4.68g、羊外肾4.68g、黄芩4.68g、熟地黄3.1g 、菟丝子3.1g、何首乌3.1g、 地黄3.1g、陈皮3.1g、当归1.56g、黄芪4.68g、阳起石1.56g、莲须1.56g、甘草1.56g、川芎1.56g、泽泻1.56g、锁阳1.56g、豆蔻1.56g、沉香1.56g、鹿茸1.56g、枸杞子1.56g、肉苁蓉0.78g、淫羊藿(羊油炙)1.56g、肉桂 1.56g、韭菜子1.56g、蛇床子1.56g、花椒0.31g二十九味成分加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，在80℃浓缩至相对密度为1.04～1.06的清膏，加乙醇二倍量，冷藏12小时，滤过，浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液加苯甲酸适量使溶解，用8％氢氧化钠调PH值4.6～4.8，加矫味剂木糖醇3％，调整总量至1000ml，滤过，分装，灭菌，即得。其检测方法包括一下步骤：
1）取海龙蛤蚧口服液30ml，加***20ml，振摇提取，放置，弃去***液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，用量依次为20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，加4％氢氧化钾溶液30ml洗涤一次，弃去洗液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以65:35:10的三氯甲烷－甲醇－水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见附图1；
2）取海龙蛤蚧口服液40ml，用盐酸酸化，pH 值3～4，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1:1:1的乙酸丁酯－甲酸－水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％的三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见附图2；
3）取海龙蛤蚧口服液60ml，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照品溶液10μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的硅胶G薄层板上，以100:17:13的乙酸乙酯－甲醇－水为展开剂，展开5cm，再以20:10:1:1的甲苯－乙酸乙酯－甲酸－水的上层溶液为展开剂，展开13cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下检视，波长为365nm 。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见附图3；
4）取海龙蛤蚧口服液60ml，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，加1％氢氧化钠溶液振摇提取3次，每次20ml，弃去氢氧化钠溶液，正丁醇层加正丁醇饱和的水洗涤3次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10:20:11:5的三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见附图4；
5）检查：pH值为4.0～5.0，相对密度 无糖型应不低于1.01；低糖型应不低于1.05；其他应符合合剂中国药典2010年版一部附录I J项下有关的各项规定；
6）含量测定：照高效液相色谱法测定；
淫羊藿苷：照中国药典2005年版一部录Ⅵ D高效液相色谱法测定。
色谱条件与***适用性试验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以25：75的乙腈-水为流动相；检测波长为270nm，柱温为室温。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，淫羊藿苷每1ml含8μg；
供试品溶液的制备：精密量取海龙蛤蚧口服液40ml，加***振摇提取3次，每次40ml，弃去***液，水层加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，加0.5mol/L碳酸钠溶液振摇提取3次，每次40ml，弃去碳酸钠溶液，正丁醇层置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇25ml使溶解，作为供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
海龙蛤蚧口服液每1ml含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H40O15）计，不得少于1.35μg。
高效液相色谱测定淫羊藿苷含量法标准确定说明：
一、仪器、试药与试剂：仪器：高效液相色谱仪（TSP，美国）；UV100紫外检测器；试药：淫羊藿苷对照品购于中国药品生物制品检定所，批号：110737-200413；规格：供含量测定用。试剂：乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水。
二、对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，淫羊藿苷每1ml含8μg；
三、供试品溶液的制备与测定：精密量取海龙蛤蚧口服液40ml，加***振摇提取3次，每次40ml，弃去***液，水层加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，加0.5mol/L碳酸钠溶液振摇提取3次，每次40ml，弃去碳酸钠溶液，正丁醇层置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇25ml使溶解，作为供试品溶液；
四、最大吸收波长的确定：用762型紫外分光光度计测得淫羊藿苷标准品（甲醇定容）的最大吸收波长为269nm，与中国药典2010版一部淫羊藿药材项下含量测定的波长相近，因此确定检测波长为270nm，见附图5。
五、流动相选择：乙腈－水（25:75）作为本制剂淫羊藿含量测定流动相。
六、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（25：75）为流动相；检测波长为270nm；柱温40℃；流速1ml/min。 七、理论板数的计算：依前述色谱条件测定，测定结果以淫羊藿苷峰计为：N=5.54×（46.3/1.4）2 =6046，故确定以淫羊藿苷峰计算理论板数不少于1500。
八、方法学考察
1、标准曲线的制备
精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含37.00、18.50、9.25、4.63、2.31、1.16μg的对照品溶液，分别吸取20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积分值为纵坐标，淫羊藿苷浓度为横坐标，绘制标准曲线，得一直线，回归方程Y＝74988x+22920，r＝1.0，结果表明，淫羊藿苷在0.0232μg～0.74μg范围内具有良好的线性关系，见附图6。
2、空白试验
按照处方比例和海龙蛤蚧口服液制备工艺，制成不含淫羊藿的空白样品，再按供试液的制备方法制成空白对照溶液，依法测定，结果表明，空白对样品测定无干扰，见附图7、8、9。
3、精密度试验
3.1重复性试验
对同一供试品重复测定6次，计算相对标准偏差，结果淫羊藿苷RSD为1.73％。表明该方法重复性良好，结果见表1。
3.2重现性试验
不同实验人员、不同实验室、不同实验仪器，对同一供试品重复测定6次，计算相对标准偏差，结果淫羊藿苷RSD为2.84％。表明该方法重复性良好，结果见表2。
4、稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12小时进样测定，结果样品在12小时内稳定，淫羊藿苷相对标准偏差RSD为2.27％。表明该方法稳定性良好，结果见表3。
5、回收率试验
系采用加样回收试验，取已经测知含量的样品20ml，精密称定，精密加入淫羊藿苷对照品适量，按照供试品制备方法进行提取、测定，计算，结果淫羊藿苷平均回收率为99.07％，n＝6，RSD＝2.31％。表明本法方法准确，结果见表4。
回收率＝（C－A）÷B×100％ A：样品所含被测成分含量 B:加入纯品量 C：实测值
九、样品测定
1、五批样品含量测定
依法对5批样品进行了测定，结果见表5。依测定结果，暂定制剂中淫羊藿苷含量为每ml不低于1.35μg。限度制定依据：5批平均含量为2.25 μg/ml，下浮40％，即1.35 μg/ml。
2、药材转移率
2.1《中国药典》2005版一部淫羊藿药材测定方法
淫羊藿苷照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（25:75）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含45μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取淫羊藿叶片药材粉末（过三号筛）0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声处理1小时，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
海龙蛤蚧口服液叶片按干燥品计算，含淫羊藿苷（C33H40O15）计，不得少于0.50％，结果见表6。
2.2淫羊藿药材制剂含量测定方法
淫羊藿苷：照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。
色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（25:75）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.18mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取淫羊藿叶片药材粉末（过三号筛）1.0g，精密称定，按照制剂工艺将药材水煮后，滤过，滤液加***振摇提取3次，每次40ml，弃去***液，水层加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，加0.5mol/L碳酸钠溶液振摇提取3次，每次40ml，弃去碳酸钠溶液，正丁醇层置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇25ml使溶解，作为供试品溶液。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得，结果见表7。
2.3药材转移率
由于海龙蛤蚧口服液为口服液，不适合用药典方法测定药材含量，因此用制剂的方法测定，然后计算其转移率平均为55.02％，药材三批分别对应制剂三批批号为0603001、0603002、0603003，结果见表8。
Claims (1)
1.一种海龙蛤蚧口服液的检测方法，将海龙39.1g 、蛤蚧0.73g、人参4.68g、羊鞭4.68g、羊外肾4.68g、黄芩4.68g、熟地黄3.1g 、菟丝子3.1g、何首乌3.1g、 地黄3.1g、陈皮3.1g、当归1.56g、黄芪4.68g、阳起石1.56g、莲须1.56g、甘草1.56g、川芎1.56g、泽泻1.56g、锁阳1.56g、豆蔻1.56g、沉香1.56g、鹿茸1.56g、枸杞子1.56g、肉苁蓉0.78g、羊油炙淫羊藿1.56g、肉桂 1.56g、韭菜子1.56g、蛇床子1.56g、花椒0.31g加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，在80℃浓缩至相对密度为1.04～1.06的清膏，加乙醇二倍量，冷藏12小时，滤过，浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液加苯甲酸适量使溶解，用8％氢氧化钠调pH值4.6～4.8，加矫味剂木糖醇3％，调整总量至1000ml，滤过，分装，灭菌，即得，其特征包括以下步骤：
1）取海龙蛤蚧口服液30ml，加***20ml，振摇提取，放置，弃去***液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，用量依次为20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，加4％氢氧化钾溶液30ml洗涤一次，弃去洗液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以65:35:10的三氯甲烷－甲醇－水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
2）取海龙蛤蚧口服液40ml，用盐酸酸化， pH 值3～4，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1:1:1的乙酸丁酯－甲酸－水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％的三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
3）取海龙蛤蚧口服液60ml，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，置蒸发皿中蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照品溶液10μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的硅胶G薄层板上，以100:17:13的乙酸乙酯－甲醇－水为展开剂，展开5cm，再以20:10:1:1的甲苯－乙酸乙酯－甲酸－水的上层溶液为展开剂，展开13cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下检视，波长为365nm ；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
4）取海龙蛤蚧口服液60ml，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，加1％氢氧化钠溶液振摇提取3次，每次20ml，弃去氢氧化钠溶液，正丁醇层加正丁醇饱和的水洗涤3次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10:20:11:5的三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
5）检查：pH值为4.0～5.0，相对密度 无糖型不低于1.01，低糖型不低于1.05；其他应符合合剂中国药典2010年版一部附录I J项下有关的各项规定；
6）含量测定：淫羊藿苷照高效液相色谱法测定
淫羊藿苷：照中国药典2010年版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定；
色谱条件与***适用性试验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以25：75的乙腈-水为流动相；检测波长为270nm，柱温为室温；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备： 精密称取淫羊藿苷对照品适量，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，淫羊藿苷每1ml含8μg；
供试品溶液的制备： 精密量取海龙蛤蚧口服液40ml，加***振摇提取3次，每次40ml，弃去***液，水层加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，加0.5mol/L碳酸钠溶液振摇提取3次，每次40ml，弃去碳酸钠溶液，正丁醇层置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇25ml使溶解，作为供试品溶液；
测定法： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
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