CN102153558B - 多靶点抗肿瘤抑制剂2-氨吡咯-三嗪的衍生物及其合成方法 - Google Patents
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Abstract
多靶点抗肿瘤抑制剂2-氨吡咯-三嗪的衍生物及其合成方法，涉及治疗哺乳动物体内非正常细胞的技术领域。以异氰基乙酸乙酯为起点通过化学合成法合成，具有合成工艺成熟、生产周期短、对环境友好、成本低等优越性。产品可应用于作为热休克蛋白质类90多靶点抗肿瘤的抑制剂，能够抑制Hsp90，促使在肿瘤生长信号通路中起重要作用的Hsp90效应蛋白通过泛素化降解，从而阻断肿瘤增殖生长信号通路的多个靶点，有效阻止肿瘤的生长。本发明与肿瘤细胞有更高的亲和力，可选择性地杀伤肿瘤细胞，促进其底物蛋白通过泛素-蛋白酶体通路降解,从而发挥靶点治疗、抗肿瘤的功效，其作用强，副作用小。
Description
技术领域
本发明涉及治疗哺乳动物体内非正常细胞，特别是癌症细胞的技术领域。
背景技术
热休克蛋白 (heat shock proteins，Hsps) 是1962年由遗传学家Ritossa发现的。这是一类在生物进化过程中高度保守并广泛存在于原核及真核生物中的蛋白质。Hsp是一个多基因家族，其中不同基因的产物在细胞中的表达、功能和定位都有不同。本领域内常以分子量的异来区分该家族成员，比如Hsp90、Hsp70和Hsp27等。除此之外，还有一部分热休克蛋白是以相关糖蛋白来分类的，比如GRP 94和GRP 75。Hsps在机体内作为分子伴侣，参与维持蛋白的正常折叠以形成蛋白的正常结构，并在调节蛋白合成与降解的平衡及蛋白定位中起着重要的作用。当细胞受到环境的各种刺激时，细胞内热休克蛋白的表达增加，能快速短暂地保护细胞对抗内源性应激的进攻，增强细胞的修复功能以及提高细胞对应激的耐受程度。人类很多疾病的发生与蛋白的错误折叠相关。因此开发调控分子伴侣的药物成为一种新的思路。现有大量文献表明Hsps与肿瘤的发生、发展密切相关。有证据表明，在肿瘤进展的不同阶段，肿瘤中Hsps的表达情况也相应改变。而且肿瘤细胞比正常细胞更容易适应周围的恶劣环境，这显然与分子伴侣所起的作用密切相关。近年来的研究 认为Hsp90在肿瘤细胞的存活过程中有非常重要的作用，它是很多癌基因通路中的重要组成部分；热休克蛋白90（Hsp90）已成为抗肿瘤的新靶点，并且一些天然产物所具有的抗肿瘤活性正是针对Hsp90这个分子靶点。Hsp90及其抑制剂是目前抗肿瘤研究的热点和前沿。
Hsp90的生物学特性：Hsp90是细胞内最活跃的分子伴侣蛋白之一，许多信号转导蛋白的正常功能发挥都依赖于Hsp90。它在细胞发生应激反应时，可以和那些由于环境刺激而使自身构象发生改变的蛋白相互作用，保证蛋白进行适当的折叠并防止蛋白非特异性聚集，从而维持细胞的正常活性。此外Hsp90在细胞突变过程中也是一个重要的缓冲因子，推测它可能同样可以纠正突变蛋白所发生的错误折叠 。细胞处于正常生理情况时，Hsp90同样是一个重要的调节者。目前所知它调控着40种左右蛋白的空问结构和突变 这些蛋白主要可以分为三类：甾体激素类受体；丝氨酸／苏氨酸或酪氨酸激酶；其它蛋白，比如突变型p53，端粒酶hTERT亚基等。所有这些蛋白都是细胞生理、生化变化过程中的重要调控蛋白。胞浆内有Hsp90ct和Hsp9013两型，GRP94存在于内质网，Hsp75／肿瘤坏死因子受体相关蛋白1 (tumor necrosis factor receptorassociated protein1，TRAP1) 则存在于线粒体基质内。现在认为这4个成员的作用方式几乎是一致的，但因为它们本身在细胞内的定位不同，所以它们所结合的蛋白也各不相同。例如酪氨酸激酶ErbB2受体是GRP94专一的下游蛋白 (client protein) ，I型肿瘤坏死因子受体 (type I tumour necrosis factor receptor．TNFR1) 和视网膜神经胶质瘤蛋白R(retinoblastoma protein) 则是TRAP1的下游作用蛋白 。Hsp90单体由一个保守的25 kDa的N一末端和一个55 kDa的c一末端通过一个连接区 (TRAP1不含这个区) 相连而成。这两端都可以和下游蛋白或其它共同作用的分子伴侣等底物多肽相结合 。此外，N端还有一个特殊的ATP结合位点，这个位点的结构和Topo II 13的结构类似，是一个新的核苷酸结合域 。
Hsp90发挥作用依赖于ATP的存在，ATP／ADP结合部位承担着构象转换区的作用，调节其参与的多分子伴侣复合物的装配。Hsp90处于ADP结合构象时，Hsp90与p60HOP形成复合物以便和Hsp70相结合。因为Hsp90的作用蛋白通常和Hsp70／Hsp40复合物先结合，然后再与Hsp90 相结合。当ATP取代ADP后，Hsp90发生构象改变，p60HOP和Hsp70／Hsp4O复合物被释放，这时另外一些辅分子伴侣，包括p23，某些亲免素或p50cdc37与之结合，使作用蛋白稳定，并处于能够与配体结合 (如果作用蛋白是甾体激素受体) 或能对刺激作出反应 (例如作用蛋白是一些蛋白激酶) 的构象状态。当然这个转换是一个动态的、双向的过程。当ATP水解为ADP，Hsp90的构象再次发生改变，于是它所结合的辅分子伴侣再次发生相应的转换，所结合的作用蛋白被释放并在蛋白酶体的作用下被降解”。
2O世纪9O年代初，Srivastava证实从肿瘤细胞中提得的热休克蛋白可以导致宿主产生很强的免疫反应，这可能是由于这种热休克蛋白可以作为一些肿瘤抗原的分子伴侣 。Ciocca等在1992年又发现高表达Hsps的乳腺癌细胞对一些化疗药物有耐受作用 。这些结果都提示Hsps可能是肿瘤细胞生长中所必需的一些蛋白的分子伴侣。由于Hsp90有很多的下游作用蛋白，可以参与调节不同的信号转导通路，因此其在肿瘤发生发展中的作用机制也变得十分复杂。对于Hsp90作用的研究更多是通过使用它的抑制剂来发现的。大量的实验还证明在不同的细胞株，Hsp90被抑制后其作用效果也有所不同，这与不同肿瘤细胞具有不同的遗传背景和生物学特征相关。但总的看来，Hsp90抑制剂的抗肿瘤作用谱是十分广泛的。
1992年，Whitesell等 发现苯醌安莎霉素类 (benzoquinone ansamycins) 抗生素在体外和体内都能显示强大的抗肿瘤活性，该效应用已知的对一些酪氨酸激酶的抑制作用难以解释。深入研究发现该类抗生素尤其是GA可以专一地与Hsp90结合，阻碍Hsp90和v—Src蛋白联结，从而导致该蛋白不稳定，抑制v．Src激酶的活性。该类抑制剂的发现使Hsp90成为肿瘤治疗的一个令人振奋的新靶点。目前有的Hsp90抑制剂已进入临床试验阶段。
Geldanamycin(GA)是最早被发现的Hsp90抑制剂，它的被发现使得研究Hsp90的生物学功能，研究依赖Hsp90的蛋白在癌症发展中的作用成为可能。GA属于苯醌安莎霉素类抗生素 。这类抗生素在结构上都由一个苯醌部分和一个平面性大环安沙桥相连。它是一个天然产物，最早是20世纪70年代从放射菌类肉汤中分离得到的，但直到20世纪80年代才发现该化合物具有抗肿瘤活性。它可以逆转转染了v—Src原癌基因的成纤维细胞的恶变，在体外实验和动物体内也相继证实了它的抗肿瘤活性。最初这类化合物被认为是酪氨酸激酶的抑制剂。然而随着研究的深入，发现它的抗肿瘤作用的发挥主要依赖于通过蛋白水解的途径使那些癌基因蛋白、蛋白激酶失活，而不是直接抑制激酶的催化活性。免疫沉淀和亲和力实验揭示GA的主要作用机制是通过和Hsp90的结合实现的。虽然GA显示了较好的抗肿瘤活性，但其严重的肝脏毒性使其临床应用受到了限制，然而它独特的作用靶点和生物活性仍然引起药物学家和生物学家的重视。目前它更多的作为研究Hsp90体内生物学功能的工具药，并作为开发以Hsp90为作用靶点的药物的先导化合物来被研究。
由于Hsp90在维持多种肿瘤蛋白的正常结构、功能和稳定性中的重要作用，它已被认为是肿瘤治疗的一个新靶点。此外Hsp90在正常组织中的广泛分布，也为它成为肿瘤治疗靶点设置了障碍。最近体内外实验发现肿瘤组织来源的Hsp90与17-AAG的亲和力比正常组织来源的Hsp90要高100倍。Kamal等 认为这是由于肿瘤组织内的Hsp90通常和另一些蛋白组成有活性的多伴侣复合物，且ATP酶的活性也比正常组织内的Hsp90要高，而在正常组织内Hsp90是以无活性形式存在的。因此该治疗靶点的发掘有可能为肿瘤治疗提供一个特异、有效、副作用少的新方法。Hsp90抑制剂的寻找正成为时下的研究热点。苯醌安沙霉素类化合物作为第一代Hsp9O抑制剂已经进入临床研究，另外还有一些不同结构的天然产物也能显示出对Hsp90的抑制作用。但是现有的抑制剂都有较强的毒副作用，限制了其临床应用。此外能否确立合适的给药方案，也是该类化合物发挥抗肿瘤效果的制约性因素。因此寻找抗Hsp90生物活性好，毒副作用小的小分子化合物已成为目前研究的方向。这些热休克蛋白90抑制化合物的例子包括那些已公布的专利申请内的描述，这些专利包括 WO2006/071789, WO2006/008503, WO2006/090094, WO2005/021552。
发明内容
本发明目的在于提出一种小分子化合物的主体分子结构及其衍生物、活性强，低毒和副作用小的热休克蛋白90（Hsp90）抑制剂——多靶点抗肿瘤抑制剂2-氨吡咯-三嗪的衍生物。
本发明的化学分子式为：
其中，
R1a为氢基、C1-C6的烷基、C2 -C8的烯基、C2-C8的炔基、C6-C14的芳基、C2-C9的杂芳基、C2-C9的异环烷基或C3-C8的环烷基中的任选一个官能团；
R1b为氢基、C1-C6的烷基、C2 -C8的烯基、C2-C8的炔基、C6-C14的芳基、C2-C9的杂芳基、C2-C9的异环烷基或C3-C8的环烷基中的任选一个官能团；
R2为氯、氟、C1-C3 烷基或1至6的氟取代C1-C3烷基；
R3为氯、氟、C1-C3 烷基或1至6的氟取代C1-C3烷基；
R4为—(C1-C6烯基)-OH、-O-(C1-C6烷基)、—(C1-C6烯基)-O-(C1-C6烷基)、—(C1-C6烯基) p -O-(C1-C6烯基) p -(C6-C10-芳基)、—(C1-C6烯基) p -O-(C1-C6烯基) p -(C3-C10-环烷基)、—(C1-C6烯基) p -O-(C1-C6烯基) p -(5-10杂环)、—(C1-C6烯基) p -O-(C1-C6烯基) p -(3-10杂环)、—(C1-C6烯基) p -O-(C2-C6烯基)、-O-(C2-C6烯基)-(3-10杂环)、-O-(C2-C6烷基)-(3-10杂环)或C1-C8烷氧基中至任意一个官能团。
本发明2-氨基苯基吡咯并 [2, 1-f]-1,2,4-三嗪羧胺的衍生物是多靶点抗肿瘤抑制剂2-氨吡咯-三嗪的衍生物，（按sFDA的规则，该多靶点抗肿瘤抑制剂属于一类创新药）。可应用于作为热休克蛋白质类90多靶点抗肿瘤的抑制剂，能够抑制Hsp90，促使在肿瘤生长信号通路中起重要作用的Hsp90效应蛋白通过泛素化降解，从而阻断肿瘤增殖生长信号通路的多个靶点，有效阻止肿瘤的生长。本发明的化合物及其盐类可促进其底物蛋白通过泛素-蛋白酶体通路降解, 从而发挥其抗肿瘤的功效。本发明作为热休克蛋白90抑制剂有明确的抗肿瘤活性，并与肿瘤细胞有更高的亲和力，可选择性地杀伤肿瘤细胞。靶点治疗的特异性，决定了靶点药物的治疗作用强，而副作用小。
本发明另一目的在于提供具有以上分子结构特征的化合物的合成方法。
合成步骤如下：
1）合成二乙酯的1H -吡咯-2,4二羧酸：
先将异氰基乙酸乙酯和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯溶解在四氢呋喃中，形成溶液，再向溶液中添加甲醛，并将反应混合物在50±0.5℃环境下搅拌反应；待反应结束后，将反应混合物冷却至常温，再用乙酸乙酯分别与饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗反应混合物，合并萃洗后的乙酸乙酯有机层，经脱水干燥、真空浓缩，取得二乙酯的1H -吡咯-2,4二羧酸；
2）合成1-氨基二乙基-1H -吡咯-2, 4二羧酸：
将二乙酯的1H -吡咯-2,4二羧酸、氯化铵、甲基三辛基氯化铵、氢氧化钠水溶液与甲基叔丁基醚混合形成溶剂，在溶剂里添加浓铵，然后再添加漂白水，再将形成的反应混合物在室温条件下搅拌反应；反应完成后，将反应混合物过滤，取滤液用乙酸乙酯分别与饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗，合并萃洗后的乙酸乙酯有机层，经脱水干燥、真空浓缩，取得1-氨基二乙基-1H -吡咯-2, 4二羧酸；
3）合成二乙基氨基- 4 - 4 -羟基吡咯并 [2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸：
将1-氨基二乙基-1H -吡咯-2, 4二羧酸和氯甲脒盐酸盐与二甲亚砜在150±0.5℃环境条件下混合搅拌反应；反应混合物冷却至常温后，用乙酸乙酯分别与饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗反应混合物，合并萃洗后的乙酸乙酯有机层，经脱水干燥、真空浓缩，取得二乙基氨基- 4 - 4 -羟基吡咯并 [2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品，最后用重结晶方法纯化，取得纯化的二乙基氨基- 4 - 4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸；
4）合成乙基-2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基} -4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸：
将二乙基氨基- 4 - 4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸与 二甲基甲酰胺、亚硫酰氯、二氯甲烷混合进行回流反应；反应混合物冷却至常温后，用乙酸乙酯分别与饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗反应混合物，合并萃洗后的乙酸乙酯有机层，经脱水干燥、真空浓缩，取得乙基-2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基} -4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品；再用重结晶法纯化，取得纯化的乙基-2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基} -4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸；
5）合成乙基4 -氯- 2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f][1,2,4]三嗪- 6 -羧酸：
将乙基-2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基} -4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸和三氯氧磷在100±0.5℃条件下搅拌反应，使反应混合物的颜色变成了均匀褐色后保温30分钟；然后将反应混合物迅速冷却到0℃，然后用NaOH溶液调整反应混合物的pH值至7.2，过滤后取白色悬浮物，用乙酸乙酯洗净，取过滤的滤液用盐水撮取有机层，再经脱水干燥和真空浓缩，取得乙基4 -氯- 2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f][1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产物；最后用硅胶柱进行纯化，取得纯化的乙基4 -氯- 2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f][1,2,4]三嗪- 6 -羧酸；
6）合成乙基4 - （2,4-二氯- 6 -羟基苯基）-2- {（五） - [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸：
将碳酸钠水溶液与乙基4 -氯- 2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f][1,2,4]三嗪- 6 -羧酸、（3,5-二氯-2 -（羟基硼）苯酚）（7）和1,4二氧杂环己烷混合，并用氮气吹扫后再加入四（三苯基膦）钯，在80±0.5℃条件下搅拌反应；待反应结束后冷却到室温，然后再加入水形成水混合物，将水混合物用乙酸乙酯萃取，以饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层；然后经脱水干燥和真空浓缩，取得乙基4 - （2,4-二氯- 6 -羟基苯基）-2- {（五） - [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品；最后将乙基4 - （2,4-二氯- 6 -羟基苯基）-2- {（五） - [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的乙基4 - （2,4-二氯- 6 -羟基苯基）-2- {（五） - [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸；
7）合成二乙基氨基- 4 -（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸：
将4M盐酸的二恶烷溶液与乙基4 - （2,4-二氯- 6 -羟基苯基）-2- {（五） - [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸和甲醇在室温下搅拌反应；取反应液经真空蒸发后再用饱和碳酸钠溶液进行中和，再用乙酸乙酯萃取；用饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层，然后经脱水干燥和真空浓缩，取得二乙基氨基- 4 -（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品；最后将二乙基氨基- 4 -（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的二乙基氨基- 4 -（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸；
8）合成二乙基氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （氢-吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6-羧酸：
将碳酸钾和1 - （2-氯乙基）-1H -吡唑(10)、二乙基氨基- 4 -（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸、二甲基甲酰胺在120±0.5oC条件下搅拌反应；待反应结束后冷却到室温，再向反应混合物加入水和乙酸乙酯，再搅拌30分钟，得到水混合物；取水混合物用乙酸乙酯萃取，以饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层，然后经脱水干燥和真空浓缩，取得二乙基氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （氢-吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6-羧酸粗产品；最后将二乙基氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （氢-吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6-羧酸粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的二乙基氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （氢-吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6-羧酸；
9）合成2 -氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸：
将氢氧化钠水溶液与二乙基氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （氢-吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6-羧酸、乙醇在室温下搅拌反应；待反应结束后加入盐酸水溶液，得到pH值为7.0±1的混合物；将混合物用乙酸乙酯萃取，以饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层，然后经脱水干燥和真空浓缩，取得2 -氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸；
10）合成2 -氨基- N-环丙基- 4 -（2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺：
将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐与2 -氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸、 环丙胺、三乙胺、二甲基甲酰胺在室温下搅拌反应；待反应结束后用乙酸乙酯萃取，以饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层， 然后经脱水干燥和真空浓缩，取得2 -氨基- N-环丙基- 4 -（2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺粗产品；最后将2 -氨基- N-环丙基- 4 -（2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的2 -氨基- N-环丙基- 4 -（2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺。
另外，本发明所述3,5-二氯-2 -（羟基硼）苯酚的合成步骤是：
1）合成二碘- 3,5 -二氯苯酚：
将对3,5-二氯苯酚与无水甲苯混合后在0℃和氮气气氛下加入氢化钠水溶液进行反应；将反应混合物升温到室温并搅拌30分钟，将形成的悬浮液冷却回0℃，然后加入碘进一步反应；取最后的反应混合物搅拌后置于0℃至室温的环境下至少24小时后，依次用盐酸水溶液淬解、用乙酸乙酯淬取、用乙酸乙酯层分离、用饱和氯化钠水溶液淬洗，再取淬洗后的有机层经脱水干燥和真空浓缩，取得二碘- 3,5 -二氯苯酚粗产品；再将二碘- 3,5 -二氯苯酚粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的二碘- 3,5 -二氯苯酚；
2）合成1,5-二氯-3 -（甲氧基乙氧基）-2 -碘苯：
将二碘- 3,5 -二氯苯酚、氯甲氧基乙烷 、碳酸铯和二甲基甲酰胺在室温下搅拌反应；先后用水和盐水淬洗反应后的混合物，取淬洗后的有机层经脱水干燥和真空浓缩，取得1,5-二氯-3 -（甲氧基乙氧基）-2 -碘苯粗产品；再将1,5-二氯-3 -（甲氧基乙氧基）-2 -碘苯粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的1,5-二氯-3 -（甲氧基乙氧基）-2 -碘苯；
3）合成2 - [2,4 -二氯- 6 -（甲氧基乙氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二氧硼巷：
将1,5-二氯-3 -（甲氧基乙氧基）-2 -碘苯和4,4,5,5-甲基- [1,3,2]二氧硼巷和三乙基胺在二恶烷溶液中用氮气吹扫30分钟后，再将醋酸钯和联苯- 2 -基-二环己基膦加入到反应混合物中，将反应混合物在80℃条件下搅拌反应至反应结束；待反应混合物冷却后，用饱和氯化铵溶液、水和饱和氯化钠水溶液先后淬洗反应混合物；取淬洗后的有机层经脱水干燥和真空浓缩，取得2 - [2,4 -二氯- 6 -（甲氧基乙氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二氧硼巷粗产品；再将2 - [2,4 -二氯- 6 -（甲氧基乙氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二氧硼巷粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的2 - [2,4 -二氯- 6 -（甲氧基乙氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二氧硼巷；
4）合成3,5-二氯-2 -（羟基硼）苯酚：
将2 - [2,4 -二氯- 6 -（甲氧基乙氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二氧硼巷和无水二氯甲烷混合后在0℃和氮气氛围下加入三溴化硼进行反应；待反应结束后将反应混合物倒入水中，再加入氢氧化钠水溶液，调节反应混合物的pH值至10±1；经分离，去除有机层；以1NHCl溶液调整分离得到的水层溶液的pH值至3，再用乙酸乙酯萃取，以饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层，然后经脱水干燥和真空浓缩，取得3,5-二氯-2 -（羟基硼）苯酚。
本发明的合成方法成功地运用了计算机辅助药物小分子设计技术，为抗癌科题设计和研发并且成功地合成了一些全新的而且活性很高的小分子，具有合成工艺成熟、生产周期短、对环境友好、成本低等优越性。
具体实施方式
一、合成方法：
本发明使用的原料都来自于市场销售。
以下“DMF”是二甲基甲酰胺，“DMAP”是二甲基氨基吡啶，“TBME”是甲基叔丁基醚，“Me” 是指甲基，“TEA”是三乙基胺，“i - PrOH”是异丙醇，“DMSO”是二甲基砜, “DCM”是二氯甲烷, “TLC”是薄层色谱法, “MTBE”是甲基叔丁基醚。
以下反应步骤说明了本发明的一种合成路线：
各反应步骤的具体操作说明：
1、化合物二乙酯的1H -吡咯-2,4二羧酸 （2）的合成方法：
先将（4.56克，40mmol)异氰基乙酸乙酯（1）和（9.2克，60mmol）1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)溶解在200 ml的四氢呋喃中，形成溶液，再向溶液中添加80mmol的 p型甲醛，并将反应混合物置于50±0.5℃环境下搅拌反应；经5小时，待反应结束后将反应混合物冷却至常温，再用500ml乙酸乙酯分别与100ml饱和碳酸氢钠水溶液和100ml饱和氯化钠水溶液两次萃洗反应混合物，然后将合并的乙酸乙酯有机层用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，收集到3.0克、收率为36%的二乙酯的1H -吡咯-2,4二羧酸粗产品（2），粗产品呈淡黄色固体状，无需进一步纯化并可直及用于下一步的反应。1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 1.52-1.58 (t,6H)， 1.891.98 (m, 6H)， 2.45-2.55 (m, 4H) ，4.32 (br,s,1H)， 5.23(s, 1H) ，7.09(s, 1H) ，8.23 (s, 1H)。
2、化合物1-氨基二乙基-1H -吡咯-2, 4二羧酸（3）的合成：
将（3.0克，14.3mmol)二乙酯的1H -吡咯-2,4二羧酸（2），（2.3克，42.9mmol）氯化铵、（6.9克，17.16mmol）甲基三辛基氯化铵和（14.3毫升，28.6mmol）的2N个氢氧化钠水溶液与200ml甲基叔丁基醚混合，形成溶剂，在溶剂里添加40ml浓铵，然后再添加30ml漂白水，再将形成的反应混合物在室温条件下搅拌6小时。反应完成后，将反应混合物过滤，除去固体盐，取滤液用500ml乙酸乙酯分别与100ml饱和碳酸氢钠水溶液和100ml饱和氯化钠水溶液萃洗两次，然后将合并的乙酸乙酯有机层用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，收集到呈淡黄色固体状的2.4克1-氨基二乙基-1H -吡咯-2, 4二羧酸粗产品（3），收率为75%，无需进一步纯化并可直及用于下一步的反应。1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 1.52-1.58 (t,6H)， 2.45-2.55 (m, 4H)， 4.45 (br,s,2H)， 7.24 (s, 1H)， 8.34 (s, 1H)。
3、化合物二乙基氨基- 4 - 4 -羟基吡咯并 [2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸（4）的合成：
将（2.4克，10.7mmol）1-氨基二乙基-1H -吡咯-2, 4二羧酸（3）和（19.7克，171.2mmol）氯甲脒盐酸盐投入200ml的二甲亚砜（DMSO）溶剂里在150℃搅拌1小时。反应结束后冷却至常温，再用500ml乙酸乙酯分别与100ml饱和碳酸氢钠水溶液和100ml饱和氯化钠水溶液萃洗反应混合物两次，合并萃洗后的乙酸乙酯有机层，用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，取得二乙基氨基- 4 - 4 -羟基吡咯并 [2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品（4），再用重结晶方法进行纯化收集到呈灰白色粉末状的1.45克二乙基氨基- 4 - 4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸（4），收率为61%。1H NMR (400MHz, DMSO-D6). ppm 1.52-1.58 (t,3H)， 2.45-2.55 (m, 2H)， 6.53 (br,s,2H)， 7.12(s, 1H)， 8.35(s, 1H)， 10.23(s, 1H)。
4、化合物乙基-2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基} -4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸 （5）的合成：
将（1.45克，6.6mmol）二乙基氨基- 4 -4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸（4）、6ml二甲基甲酰胺、（1.01ml，3.2mmol）亚硫酰氯和二氯甲烷溶液进行回流反应3小时。冷却反应混合物，再用500ml乙酸乙酯分别与100ml饱和碳酸氢钠水溶液和100ml饱和氯化钠水溶液两次萃洗反应混合物，取合并萃洗后的乙酸乙酯有机层用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，取得乙基-2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基} -4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品（5）。再用重结晶方法对粗产品（5）进行纯化，收集到呈灰白色粉末状的1.8克乙基-2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基} -4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸 （5），收率为91%。1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 1.28（d, J=5.81Hz, 6H），1.52-1.58 (t,3H)， 2.45-2.55 (m, 2H)， 4.56-4.89(m, 1H)， 6.53 (br,s,2H) 7.12(s, 1H)， 8.35(s, 1H)， 10.23(s, 1H)。
5、化合物乙基4 -氯- 2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f][1,2,4]三嗪- 6 -羧酸（6）的合成：
将（1.8克，6.5mmol）乙基-2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基} -4 -羟基吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸 （5）和（31ml，332mmol）三氯氧磷在100℃大力搅拌30分钟，待反应混合物的颜色变成了均匀褐色然后继续加热额外的30分钟。然后将反应混合物置于冰或水池中迅速冷却到0℃，然后用2N 的NaOH水溶液滴定，调整反应混合物的pH值至7.2。由此产生的白色悬浮液，然后过滤，用600ml乙酸乙酯洗净，滤液用盐水撮取，有机层用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，得到乙基4 -氯- 2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f][1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品（6）；再用硅胶柱对粗产品（6）进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，0-30%溶剂），收集纯化的产品为呈淡黄色固体状的1.2克（4.23mmol）乙基4 -氯- 2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f][1,2,4]三嗪- 6 -羧酸（6），收率为65%。1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 1.28（d, J=5.81Hz, 6H），1.52-1.58 (t,3H)， 2.45-2.55 (m, 2H)， 4.56-4.89(m, 1H)， 6.53 (br,s,2H)， 7.12(s, 1H) 8.35(s, 1H)。
6、化合物3,5-二氯-2 -（羟基硼）苯酚 （7即F）的合成路线：
6.1 化合物二碘- 3,5 -二氯苯酚（2）的合成：
对（70克，0.43mol）对3,5-二氯苯酚在1升的无水甲苯混合后在0℃和氮气气氛下加入（51.5克，1.29mol）氢化钠。将反应混合物升至室温，并搅拌30分钟，将由此产生的悬浮液冷却回0℃，然后慢慢加入（253.8克，91.5mol）碘。取最后的反应混合物搅拌后置于0℃至室温的环境下，经过至少24小时后，依次用1升的1N盐酸溶液淬解反应混合物，用1升乙酸乙酯淬取，用乙酸乙酯层分离，然后用100 ml饱和氯化钠水溶液淬洗，取淬洗后的有机层用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，得到二碘- 3,5 -二氯苯酚粗产物。 再将二碘- 3,5 -二氯苯酚粗产物用硅胶柱进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，0-20%溶剂），收集纯化的产品为85克、收率为68%的二碘- 3,5 -二氯苯酚（2），呈白色固体状。
6.2 化合物1,5-二氯-3 -（甲氧基乙氧基）-2 -碘苯（3）的合成：
将（67克，0.23mol）二碘- 3,5 -二氯苯酚（2）、（31.8克，0.29mol）氯甲氧基乙烷和（63.7克，0.2mol）碳酸铯与600 ml二甲基甲酰胺混合并在室温条件下搅拌2小时。待反应结束后，用500ml乙酸乙酯和先后和100 ml x3次水和100ml饱和氯化钠水溶液淬洗，取淬洗后的有机层用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，取得1,5-二氯-3 -（甲氧基乙氧基）-2 -碘苯粗产物。 再用硅胶柱对粗产物进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，0-50%溶剂），收集纯化的产品为呈黄色固体状的80克1,5-二氯-3 -（甲氧基乙氧基）-2 -碘苯（3），收率为99%。
6.3 化合物2 - [2,4 -二氯- 6 -（甲氧基乙氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二氧硼巷（4）的合成：
将（77克，0.22mol）1,5-二氯-3 -（甲氧基乙氧基）-2 -碘苯（3）、（57克，0.44mol）4,4,5,5-甲基- [1,3,2]二氧硼巷和（92ml，0.66mol）三乙基胺投入到500 ml二恶烷溶液中，再用氮气吹扫30分钟，然后将（2.7克，0.011mol）醋酸钯和（8.5克，0.22mol）联苯- 2 -基-二环己基膦加入到反应混合物中，并将反应混合物在升温至80℃，搅拌1.5小时。冷却下来后，反应混合物用500ml乙酸乙酯先后同100ml饱和氯化铵溶液、100ml水和100ml饱和氯化钠水溶液淬洗。取淬洗后的有机层，用硫酸钠脱水干燥，并经真空浓缩，取得2 - [2,4 -二氯- 6 -（甲氧基乙氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二氧硼巷粗产物。 再用硅胶柱对粗产物进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，0-50%溶剂），收集纯化的产品为呈棕色固体状、35克的2 - [2,4 -二氯- 6 -（甲氧基乙氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二氧硼巷（4），收率为45%。
6.4 化合物3,5-二氯-2 -（羟基硼）苯酚 （F）的合成：
将（35克，0.1mol）2 - [2,4 -二氯- 6 -（甲氧基乙氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二氧硼巷（4）和200ml无水二氯甲烷混合搅拌，在0℃环境条件和氮气氛围下缓慢加入（125克，0.5mol）三溴化硼，再搅拌20分钟后，将反应混合物倒入水中，然后加入100ml 3N氢氧化钠溶液调整反应混合物的pH值约为10，然后经分离去除有机层。将500 ml 1NHCl溶液加入到分离的水层中，使分离的水层混合液的pH值约为3，再分别用500毫升乙酸乙酯萃取分离的水层混合液3次。合并萃取后的有机层，分别用500 ml和饱和氯化钠水溶液萃洗两次，然后用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，收集到呈白色固体状的40克3,5-二氯-2 -（羟基硼）苯酚（F），收率为80%，无需进一步纯化并可直及用于下一步的反应。1H NMR (400MHz, MeOD).ppm 6.875-6.878(d, 1H), 6.727-6.737 (d, 1H)。
7、化合物乙基4 - （2,4-二氯- 6 -羟基苯基）-2- {（五） - [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸（8）的合成：
将（1.84克，16.92mmol）碳酸钠、33ml水、（1.2克，4.23mmol）乙基4 -氯- 2 -{（五）- [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f][1,2,4]三嗪- 6 -羧酸（6）（1.2克，5.8mmol）（3,5-二氯-2 -（羟基硼）苯酚）（F）和70ml1,4二氧杂环己烷混合反应后，对反应液用氮气吹扫数次后再加入（490毫克，0.423mmol）四（三苯基膦）钯到反应混合物中。将反应混合物在80℃条件下搅拌12小时。冷却到室温后再加入100ml水，将这水混合物分别用500ml乙酸乙酯萃取2次。合并萃取后的有机层，用100ml饱和氯化钠水溶液进行萃洗，然后用硫酸钠脱水干燥、再经真空浓缩，收集到乙基4 - （2,4-二氯- 6 -羟基苯基）-2- {（五） - [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品，再将粗产物用硅胶柱进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，0-50%溶剂），收集纯化的产品为呈淡灰色固体的（1.34克，3.17mmol）乙基4 - （2,4-二氯- 6 -羟基苯基）-2- {（五） - [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸（8），收率为75%。1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 1.28（d, J=5.81Hz, 6H），1.52-1.58 (t,3H)， 2.45-2.55 (m,2H)， 4.56-4.89(m,1H)， 6.53 (br,s,2H)， 6.95(d,J=1.77Hz, 1H)， 7.08-7.21 (m,1H)， 7.32(s, 1H)， 8.35(s, 1H),10.67(s, 1H)。
8、化合物二乙基氨基- 4 -（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸 （9）的合成：
将（12 ml，48mmol）4M盐酸的二恶烷溶液、（1.34克，3.17mmol）乙基4 - （2,4-二氯- 6 -羟基苯基）-2- {（五） - [（二甲氨基）亚甲基]氨基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸（8）与10 ml甲醇混合并在室温下搅拌反应12小时。反应液经真空蒸发后再用饱和碳酸钠溶液进行中和，取得水混合物。将水混合物分别用500 ml乙酸乙酯萃取2次，合并萃取后的有机层用100ml和饱和氯化钠水溶液萃洗，然后用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩收集到二乙基氨基- 4 -（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸粗产品。将粗产物用硅胶柱进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，0-50%溶剂），收集纯化的产品为呈淡灰色固体、（1.01克，2.69mmol）的二乙基氨基- 4 -（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸 （9），收率为85%。1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 1.52-1.58 (t,3H)， 2.45-2.55 (m,2H)，6.53 (br,s,2H)， 6.95(d,J=1.77Hz, 1H)， 7.08-7.21 (m,1H)， 7.32(s, 1H)， 8.35(s, 1H),10.67(s, 1H)。
9、化合物二乙基氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （氢-吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6-羧酸(11) 的合成：
将（1.12克，8.07mmol）碳酸钾、（1.05克，8.07mmol）1 - （2-氯乙基）-1H -吡唑(10)、（1.01克，2.69mmol）二乙基氨基- 4 -（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸 （9）和70 ml二甲基甲酰胺在120oC条件下混合搅拌反应，经12小时，待冷却到室温后，向反应混合物加入100ml水和500ml乙酸乙酯，并搅拌30分钟，形成水混合物。将这水混合物分别用500ml的乙酸乙酯萃取2次，合并萃取后的有机层，用100ml和饱和氯化钠水溶液萃洗，然后用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，收集到二乙基氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （氢-吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6-羧酸粗产品。再将粗产物用硅胶柱进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，0-50%溶剂），收集纯化的产品为呈淡黄色固体状的（0.741克，1.64mmol）二乙基氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （氢-吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6-羧酸(11)，收率为 61%。1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 1.52-1.58 (t,3H)， 2.45-2.55 (m,2H),3.29-3.59（m,1H）, 3.77(d,J=22.8Hz,1H),4.20-4.28(m, 1H), 4.29-4.35(m, 2H), 6.53 (br,s,2H)， 6.95(d,J=1.77Hz, 1H)，7.01(s, 1H),7.04(s, 1H), 7.08-7.21 (m,1H)， 7.32(s, 1H)， 8.35(s, 1H)。
10、化合物2 -氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸(12) 的合成：
将（4 ml，8.2mmol）2N氢氧化钠水溶液、（0.741克，1.64mmol）二乙基氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （氢-吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6-羧酸(11)和20ml乙醇混合并在室温下搅拌反应12小时。然后加入2N盐酸水溶液溶液，使反应的混合物的pH值约为7.0。再分别以500 ml乙酸乙酯萃取反应的混合物2次。合并萃取后的有机层，用100ml和饱和氯化钠水溶液进行萃洗，再用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，收集到呈淡灰色固体、（0.554克，1.28mmol）2 -氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸(12)，收率为78%,无需进一步纯化并可直及用于下一步的反应。1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 3.29-3.59（m,1H）, 3.77(d,J=22.8Hz,1H),4.20-4.28(m, 1H), 4.29-4.35(m, 2H), 6.53 (br,s,2H)， 6.95(d,J=1.77Hz, 1H)，7.01(s, 1H),7.04(s, 1H), 7.08-7.21 (m,1H)， 7.32(s, 1H)， 8.35(s, 1H)，10.67（s，1H）。
11、化合物2 -氨基- N-环丙基- 4 -（2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺（13）的合成：
将（490毫克，2.56mmol）1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC HCl）、（0.554克，1.28mmol）2 -氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -羧酸(12)、（146毫克，2.56mmol）环丙胺、（0.53 ml，3.84mmol）三乙胺和10 ml二甲基甲酰胺混合并在室温下搅拌反应12小时。待反应结束后，反应混合物分别用500 ml乙酸乙酯萃取2次。合并萃取后的有机层，用100ml饱和碳酸氢钠水溶液和100ml和饱和氯化钠水溶液进行萃洗，然后用硫酸钠脱水干燥，再经真空浓缩，收集到2 -氨基- N-环丙基- 4 -（2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺粗产品。将粗产物用硅胶柱进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，0-50%溶剂），收集纯化的产品为呈淡灰白色固体、（490毫克，1.04mmol）2 -氨基- N-环丙基- 4 -（2,4-二氯- 6- [2 - （的1H -吡唑- 1 -基）乙氧基苯基）吡咯并[2,1 - f]的[1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺（13），收率为 81%。1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 0.33-0.44(m, 2H),0.46-0.59(m,2H), 0.80-0.91(m,1H),3.29-3.59（m,1H）, 3.77(d,J=22.8Hz,1H),4.20-4.28(m, 1H), 4.29-4.35(m, 2H), 6.23(d, J=2.78Hz, 1H),6.53 (br,s,2H)， 6.95(d,J=1.77Hz, 1H)，7.01(s, 1H),7.04(s, 1H), 7.08-7.21 (m,1H)， 7.32(s, 1H)， 8.35(s, 1H)。
二、采用上面描述的类似的合成方法还可以合成化合物14-17，其分子结构式和分析数据见下表：
三、热休克蛋白90的生化分析:
本发明化合物的生物活性评价使用闪烁接近（SPA）竞争结合实验检测热休克蛋白90的生物活性。无论是全长或N-端热休克蛋白90，其中载有其C-端结合6点击标签对钇硅酸盐闪烁珠结合铜通过它的标签。氚丙基格尔德霉素，其结构如下所示是一个天然抑制剂衍生物。氚处理的格尔德（pGA）其包含氚处理的丙基胺组添加在17号位置上，热休克蛋白90的结合并使其带小球眼帘同位素。17-N-丙基胺-格尔德可以按美国专利号为4261,989编写中所描述的来合成并作为参考文件。第二氚处理的的化合物，也可以在本实验中使用如下所示，并作为一个指定的化合物A。
上式中，“T”在化合物A的结构中指示氚处理的氢原子标记的位置。这种化合物具有Kd：40nM的生物活性并且可以按如下步骤来合成。化合物A从母体化合物来合成。N -烯丙基- 2 -（5 -氯-2 ,4 -二羟基苯甲酰）异二氢吲哚- 1 -甲酰胺按下面的合成说明：
烯丙基胺（2.5毫升， 5.0mmol， 在2M四氢呋喃溶液里）加入到反应液混合物叔丁基氨基甲酸（R,S）1,3-二氢- 2H-异吲哚羧酸（263毫克,1.0mmol），二异丙基乙基胺（0.9毫升， 5.0mmol）和2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯; 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU）（420毫克,1.1mmol）在 5。0毫升的二甲基甲酰胺里并在在氮气气氛下，并在室温下搅拌12小时。这混合物用乙酸乙酯（500毫升x2）萃取，合并的有机层是用饱和碳酸氢钠水溶液（100毫升）和卤水（100毫升）来萃洗然后用（硫酸钠）脱水干燥然后经真空浓缩收集到粗产品，粗产物用硅胶柱进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，0-50%溶剂）收集纯化的产品为叔丁基- 1- [（烯丙基氨基）羰基] -1,3-二氢- 2H-异吲哚- 2 -羧酸（321毫克, 定量产量）。
4M盐酸溶液在二恶烷中（3.0毫升, 12mmol）加入到反应混合物叔丁基- 1- [（烯丙基氨基）羰基] -1, 3-二氢- 2H-异吲哚- 2 -羧酸（1.0mmol）在5.0毫升二氯甲烷中并在40oC下（约4小时再在室温下搅拌12小时。这混合物经真空浓缩收集到油状产品N -烯丙基异二氢吲哚- 1 -甲酰胺无需进一步纯化并可直及用于下一步的反应。
N -烯丙基异二氢吲哚- 1 -甲酰胺（1.0mmol）加入到反应液混合物五氯-2 ,4 -双（甲氧基甲氧基）苯甲酸（可以按专利号为WO2006/1175669编写中所描述的来合成并作为参考文件）（340毫克,1.2mmol），4 -甲基吗啉（2.2毫升，20.0mmol），1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC HCl）（460毫克，2.4mmol）和1 -羟基苯并三氮唑（330毫克，2.4mmol）在 12毫升的二甲基甲酰胺里并在在氮气气氛下，并在室温下搅拌12小时。加水（50毫升）到反应混合物中停止反应，这混合物用乙酸乙酯（500毫升x2）萃取，合并的有机层是用饱和碳酸氢钠水溶液（100毫升）和卤水（100毫升）来萃洗然后用（硫酸钠）脱水干燥然后经真空浓缩收集到粗产品，粗产物用硅胶柱进行纯化（用乙酸乙酯/正己烷，50-60%溶剂）收集纯化的所需的中间产品（423毫克,92%的收益率）N -烯丙基- 2- [5-氯-2 ,4 -双（甲氧基甲基）苯甲酰基]异二氢吲哚- 1 -甲酰胺。
4M盐酸溶液在二恶烷中（3.0毫升, 12mmol）加入到反应混合物N -烯丙基- 2- [5-氯-2 ,4 -双（甲氧基甲基）苯甲酰基]异二氢吲哚- 1 -甲酰胺（392毫克,0.85mmol）在5.0毫升二氯甲烷中并在室温下搅拌12小时。然后加入饱和碳酸氢钠水溶液中和至pH值约为7.0。这混合物用乙酸乙酯（500毫升x2）萃取，合并的有机层是用卤水（100毫升）来萃洗然后用（硫酸钠）脱水干燥然后经真空浓缩收集到需要的最终产品为母体化合物（221毫克,70%的收益率）N -烯丙基- 2-（5-氯-2 ,4 -二羟基苯甲酰）异二氢吲哚- 1 -甲酰胺呈白色固体。
1H NMR (400MHz, DMSO-D6).ppm 3.57（d,J=79.33Hz,2H）,4.65-4.93(m,1H),4.97-5.19(m,1H),5.42-5.60(m,1H),5.68-5.95(m,1H),6.40-6.71(m,1H),6.92(s,1H),7.15-7.67(m,4H),8.28(s,1H),10.06(s,1H),10.40(s,1H)。Anal.Calcd.forC19H17ClN2O4: C,61.21;H,4.60;N,7.51,Found:C,61.02;H,4.62;N,7.36 。
一旦制备了母体化合物，化合物A的制备便使用标准加氢制备方法并使用氚气。在测试信号发射发出同位素兴奋的闪烁这将创建一个可衡量的发出闪烁的信号。当具有竞争力的化合物添加到测试的混合物中时，它们竞争的约束氚处理的格尔德（pGA）或化合物A在对ATP结合位点N-端热休克蛋白90终端。当化合物替换格尔德（pGA）或标记化合物A时，信号降低（β粒子不再与与珠接近）。这个减少的信号是用来量化在某种程度上的抑制剂/化合物与格尔德（pGA）或化合物A之间的激烈竞争。
对于3H-pGA (指定为G1)和化合物A (指定为G2) SPA的测检，热休克蛋白90的结合是在96孔平底白盘中进行的（科宁Corning#3604）。对于G1，典型的反应液中包含30nM热休克蛋白90和200nM 3H-pGA的结合缓冲液（100mM培养基, pH7.5 和150mM氯化钾）。对于G2，典型的反应液中包含5nM热休克蛋白90和50nM化合物A。对于G1，3H-pGA首先稀释至33％的标签和未标注的pGA其被合成和纯化给予终浓度为200nM。对于G2，标记的化合物A与非标记化合物A稀释提供一个标记：无标签比例为1:2其终浓度为50nM。抑制剂加入到热休克蛋白90/3H-pGA（或热休克蛋白90/化合物A）在11种不同浓度的溶液中作为酶的活性（Ki）的测定。抑制剂的浓度范围为100uM或对于固体样品可用适当的浓度范围，对于目标化合物库可用10uM的浓度范围，液体样品可用10mM的浓度范围。为了确定抑制活性的百分比，化合物将在1和10uM进行测试。样品在二甲基亚砜溶液中浓度为4%。铜标签-Ysi珠 （Amersham#RPNQ5096）用于稀释在结合缓冲液中然后加到每盘孔中给予最终浓度为100ug/每孔。样板被密封后，用铝箔盖盖上盖子，并在室温下摇动30分钟。样板内珠被允许澄定30分钟然后使用惠普topcount NXT的仪器来计数。此过程也采用了中型吞吐量并使用贝克曼Biomek FX的仪器来测试。样品一式两份进行测试并用两个独立日子以保证准确的酶的活性（Ki）的测定。
对于酶的活性（Ki）的测定，使用GraphPad Prim软件并用正确的cpm’s（实际cpm’s减背景）与抑制剂的浓度来绘制。这些数据是适合一般的IC50方程，Y=YI/ (1+[X]/IC50), 其中YI= Y-截距和[X]是竞争配体/抑制剂。其IC50当时用于计算的Ki并通过Cheng-Prusoss方程式：
其中，Cl=为冷的配体浓度（可变），hI=为热的配体浓度（200nM 或50nM）并且Kd{hI}=240nM (对于3H-pGA)或40nM（对于化合物A）。误差计算方法如下其IC50误差/IC50值=相对误差，分数误差：*Ki值/Ki误差。
在某些情况中，抑制剂如此紧密与热休克蛋白90结合使自由抑制剂分子显注亏损由此形成的酶抑制剂复合物，因此上述方程不再有价值。这通常是当所观察到的IC50为大约与热休克蛋白90的浓度相同。对于紧密结合抑制剂而言将适用下面的公式：
EL和EL是放射配体-热休克蛋白90存在和缺乏抑制剂的复合物，EL/ELo 表示在抑制剂存在分数信号，Io，Eo 和Lo 分别为抑制剂，热休克蛋白90和放射配体的浓度。Ki是配体的抑制常数配体，KL是酶（热休克蛋白90）和配体之间的亲和力常数。
下表是化合物13-17的Ki检测数据：
| 化合物# | （G2）酶的活性 Ki （nM） | 半抑制率 Akt Lum: IC 50（uM） |
| 13 | 50.65 | 0.55 |
| 14 | 100.75 | 2.44 |
| 15 | 10.32 | 0.051 |
| 16 | 25.82 | 0.61 |
| 17 | 210.75 | 4.55 |
上表中化合物13-17的酶的活性Ki和半抑制率 Akt Lum: IC50检测数据显明该化合物具有一定抗肿瘤的生物活性，当本发明的化合物及其盐类与ATP结合位点N-端热休克蛋白90终端紧密合时，能够抑制热休克蛋白90（Hsp90），促使在肿瘤生长信号通路中起重要作用的Hsp90效应蛋白通过泛素化降解，从而阻断肿瘤增殖生长信号通路的多个靶点，有效阻止肿瘤的生长。酶的活性 Ki 和半抑制率 Akt Lum: IC50的数值越小表明该化合物的生物活性越强，与肿瘤细胞有更高的亲和力，可选择性地杀伤肿瘤细胞。
热休克蛋白90(Hsp90)作为分子伴侣参与调控、维持细胞内多种蛋白的构象和功能，以帮助细胞在应激环境刺激下正常生长。很多癌基因蛋白均为Hsp90的作用靶点，因此抑制Hsp90的功能将促进这些癌基因蛋白的降解，有助于癌症治疗。
本发明的化合物及其盐类通过热休克蛋白90的生化分析和体内外实验证实了Hsp90抑制剂的抗肿瘤活性，本发明的化合物13至17的特征为它们的抗肿瘤作用的发挥主要依赖于通过蛋白水解的途径使那些癌基因蛋白、蛋白激酶失活，而不是直接抑制激酶的催化活性。免疫沉淀和亲和力实验揭示本发明的化合物的主要作用机制是通过和Hsp90的结合实现的。x一射线晶体衍射和生物化学实验结果表明本发明的化合物可以竞争Hsp90的ATP结合位点，抑制Hsp90的内源性和ATP酶的活性。体外实验证实：本发明的化合物可以使肿瘤细胞进入静止期，也可以诱发细胞发生凋亡。本发明的化合物通过和Hsp90的N端结合，抑制内源性的ATP酶活性。本发明的化合物作用于Hsp90的N端ATP／ADP结合位点。它是根据x一射线晶体衍射的结果设计得到的小分子化合物。本发明的化合物同样可以降解很多Hsp90的作用蛋白。
四、相关术语的注解：
“药学上可接受的制剂”指本项发明的化合物或生理/药学上可接受的盐与载体和辅料的组合。应用已知的艺术技能和普通程序来进行药剂配方的制备。例如，本发明的化合物可以制定共同辅料稀释剂或载体形成了片剂，胶囊，等等。这些辅料稀释剂或载体包括以下内容：填料和填充剂如淀粉，糖，甘露醇，和硅酸衍生物；如羧甲基纤维素和其他纤维素衍生物粘合剂，藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮，保湿剂如甘油；崩解剂如聚维酮，淀粉钠乙醇酸，羧甲基纤维素钠，琼脂，碳酸钙，碳酸氢钠；缓凝剂如石蜡，吸收加速剂如季铵盐化合物；表面活性剂如十六醇，甘油单硬脂酸酯；吸附载体如高岭土，膨润土；润滑油如滑石粉，硬脂酸钙，镁和固体聚乙二醇。最后制剂可能是丸剂，片剂，粉剂，锭剂，囊，或无菌包装粉末，这取决于辅料的使用的类型。此外，它是专门的药学上可接受的制剂。
“热休克蛋白90-抑制量”是指本发明化合物数量或生理/药学上可接受的盐需要在体内抑制热休克蛋白90酶的的活性如在哺乳动物，或在体外。这种化合物所需的量造成这种抑制可以确定无需试验使用方法所述和那些已知的普通技术。
“热休克蛋白90抑制酶的活性”意味着通过本发明化合物与酶的接触而减少热休克蛋白90酶在体外或体内的功能活动如在哺乳动物和人类内。
“治疗有效量”是指本发明的化合物或生理/药学上可接受的盐的数量给药到哺乳动物对这种治疗所需要足够的治疗效果。所谓“治疗有效量“是指一定数量足以调节或抑制热休克蛋白90酶的活动，它通过介导的热休克蛋白90酶的活性使得疾病的状况降低或缓解。
“治疗”中“治”是指任何热休克蛋白90介导对哺乳动物，特别是人类的疾病治疗。其中包括：1）防止发生的疾病或状况的发生，2）调节或抑制疾病或状况，即阻止其发展，3）减轻疾病或状况，即造成复原引起的疾病或情况或4）缓解和/或减轻疾病或状况，造成这些症状的疾病或情况，例如减轻炎症反应。关于癌症，这只是意味着一个人的寿命与癌症的影响将增加或一种或多种疾病的症状会减少。
在谈到癌症的治疗，治疗有效量指的至少有以下效果之一：1）减少肿瘤的大小；2）抑制（即，在一定程度上放缓，最好停止）肿瘤转移；3）在一定程度上抑制（即，在一定程度上放缓，最好停止）肿瘤的生长；4）在一定程度上缓解（或最好，消除）与癌症相关的一个或多个症状。
“化合物”指任何上述化合物，还包括那些笼统的描述或介绍的化合物。也指药学上可接受的盐或这些化合物的溶剂化物。
“不正常细胞的生长”，除非另有说明，是指细胞的生长，它是独立的正常调控机理（例如，抑制性接触的损失），包括对正常细胞生长异常及异常细胞的生长。这包括，但不限于，生长异常：肿瘤细胞这包括但不限于，异常增长：肿瘤细胞增殖的酪氨酸激酶表达了突变或过度表达的受体酪氨酸激酶；其他良性和恶性增殖性疾病细胞中酪氨酸激酶激活发生异常；任何肿瘤细胞增殖的受体酪氨酸激酶；任何肿瘤的异常增生丝氨酸/苏氨酸激酶激活发生；良性和恶性细胞增殖性疾病中的其他异常丝氨酸/苏氨酸激酶的激活发生；良性和恶性一个激活的RAS癌基因表达；肿瘤细胞，良性和恶性，其中RAS蛋白是在另一种基因突变导致激活致癌；良性和恶性细胞增殖的其他疾病，其中RAS的活化发生异常。这种良性增生性疾病的例子是牛皮癣，良性***增生症，人类***状瘤病毒（HPV）。“不正常细胞的生长”亦指，包括细胞的异常生长，良性和恶性，从法尼基蛋白转移酶活动产生的。
“异常细胞的生长”和“超增生症”的应用是可以互换使用。
“立体结构” 指具有相同的化合物的化学结构，但对于不同的原子或官能团安排的空间。
“对映体”指两个立体异构体的化合物是彼此不超可施加镜像。
“消旋”或”消旋混合物”指某一特定化合物对映体1:1的混合。
“非对映体”，另一方面，是指之间的异构体组成的两个或两个以上非对称中心，并不能反映图像对彼此的关系。
“药剂组合”指一个或更多的化合物所述的混合物，或生理/药学上可接受的盐, 溶剂化物，水合物，或前药及其与其他化学成分，如或生理/药学上可接受的载体和辅料。药品成份的目的是为了促进对一个化合物进到如哺乳动物的生物体，包括人类。
本发明用于处理异常细胞生长的癌症细胞包括但不限于：间皮瘤，肝胆（肝和胆道），一期或二期中枢神经***肿瘤，一期或二期脑肿瘤，肺癌（非小细胞肺癌和非小细胞肺癌），骨癌，胰脏癌，皮肤癌，头或颈部癌，皮肤或眼内黑色素肿瘤，卵巢，结肠，直肠癌，***区域癌，胃癌，胃肠道（胃，大肠，十二指肠）癌，乳腺癌，子宫癌，输卵管癌，子宫内膜癌，子宫颈，***，外阴癌，霍奇金病，食道，小肠肿瘤，内分泌***的癌，甲状腺，甲状旁腺，肾上腺癌，软组织肉瘤癌，尿道，***癌，***癌，睾丸癌，慢性或急性白血病，慢性髓性白血病，淋巴细胞性淋巴瘤，膀胱，肾，输尿管，输尿管癌，肾细胞癌，肾盂癌，中枢神经***肿瘤，原发性中枢神经***淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，脊柱轴肿瘤，脑干胶质瘤，垂体腺瘤，肾上腺皮质，胆膀胱癌，多发性骨髓瘤，胆管癌，纤维肉瘤，神经母细胞瘤，视网膜母细胞瘤，或由一个或更多的上述癌症的组合。
本发明用于处理异常细胞生长的癌症细胞包括：一个良性增生性疾病但不限于银屑病，良性***增生。
在本发明实施例癌症是首选选自肺癌（非小细胞肺癌和非小细胞肺癌），头部或颈部，卵巢癌，结肠癌，直肠癌，***区域，胃癌，乳腺癌，肾或输尿管癌，肾细胞癌，肾盂癌，中枢神经***肿瘤，原发性中枢神经***淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，脊柱轴肿瘤或由一个或更多的上述癌症的组合。
在另一本发明的优选实施例癌症是选自肺癌（非小细胞肺癌和非小细胞肺癌），头部或颈部，卵巢癌，结肠癌，直肠癌，***区域，胃癌，乳腺癌，肾或输尿管癌，肾细胞癌，肾盂癌，中枢神经***肿瘤，原发性中枢神经***淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，脊柱轴肿瘤或由一个或更多的上述癌症的组合。
在优选实施例中，本发明的癌症是选自肺癌（非小细胞肺癌和非小细胞肺癌），头部或颈部，卵巢癌，结肠癌，直肠癌，***区域癌或由一个或更多的上述癌症的组合。
Claims (3)
1.多靶点抗肿瘤抑制剂2-氨吡咯-三嗪的化合物，其分子式如下：
上式中，
R1a为氢基或C3-C8的环烷基；
R1b为C3-C8的环烷基；
R2为氯；
R3为氯；
R4为-O-(C2-C6烷基)-(3-10杂环)。
2.一种2 -氨基- N-环丙基- 4 -{2,4-二氯- 6- [2 - （1H -吡唑- 1 -基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1 - f][1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺的合成方法，其特征在于包括以下步骤：
1）合成吡咯-2,4-二羧酸二乙酯：
先将异氰基乙酸乙酯和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯溶解在四氢呋喃中，形成溶液，再向溶液中添加甲醛，并将反应混合物在50±0.5℃环境下搅拌反应；待反应结束后，将反应混合物冷却至常温，再用乙酸乙酯分别与饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗反应混合物，合并萃洗后的乙酸乙酯有机层，经脱水干燥、真空浓缩，取得吡咯-2,4-二羧酸二乙酯；
2）合成1-氨基吡咯-2,4-二羧酸二乙酯：
将吡咯-2,4-二羧酸二乙酯、氯化铵、甲基三辛基氯化铵、氢氧化钠水溶液与甲基叔丁基醚混合形成溶剂，在溶剂里添加浓铵，然后再添加漂白水，再将形成的反应混合物在室温条件下搅拌反应；反应完成后，将反应混合物过滤，取滤液用乙酸乙酯分别与饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗，合并萃洗后的乙酸乙酯有机层，经脱水干燥、真空浓缩，取得1-氨基吡咯-2,4-二羧酸二乙酯；
3）合成2-氨基-4-羟基吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯：
将1-氨基吡咯-2,4-二羧酸二乙酯和氯甲脒盐酸盐与二甲亚砜在150±0.5℃环境条件下混合搅拌反应；反应混合物冷却至常温后，用乙酸乙酯分别与饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗反应混合物，合并萃洗后的乙酸乙酯有机层，经脱水干燥、真空浓缩，取得2-氨基-4-羟基吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯粗产品，最后用重结晶方法纯化，取得纯化的2-氨基-4-羟基吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯；
4）合成2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]-4 -羟基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6 -羧酸乙酯：
将2-氨基-4-羟基吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯与二甲基甲酰胺、亚硫酰氯、二氯甲烷混合进行回流反应；反应混合物冷却至常温后，用乙酸乙酯分别与饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗反应混合物，合并萃洗后的乙酸乙酯有机层，经脱水干燥、真空浓缩，取得2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]-4-羟基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯粗产品；再用重结晶法纯化，取得纯化的2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]-4 -羟基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯；
5）合成4-氯- 2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯：
将2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]-4-羟基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯和三氯氧磷在100±0.5℃条件下搅拌反应，使反应混合物的颜色变成了均匀褐色后保温30分钟；然后将反应混合物迅速冷却到0℃，然后用NaOH溶液调整反应混合物的pH值至7.2，过滤后取白色悬浮物，用乙酸乙酯洗净，取过滤的滤液用盐水撮取有机层，再经脱水干燥和真空浓缩，取得4-氯-2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯粗产物；最后用硅胶柱进行纯化，取得纯化的4-氯-2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6 -羧酸乙酯；
6）合成2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]-4-（2,4-二氯- 6 -羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6 -羧酸乙酯：
将碳酸钠水溶液与4-氯- 2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6 -羧酸乙酯、2,4-二氯-6-羟基苯硼酸和1,4二氧杂环己烷混合，并用氮气吹扫后再加入四（三苯基膦）钯，在80±0.5℃条件下搅拌反应；待反应结束后冷却到室温，然后再加入水形成水混合物，将水混合物用乙酸乙酯萃取，以饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层；然后经脱水干燥和真空浓缩，取得2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]-4-（2,4-二氯-6-羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯粗产品；最后将2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]-4-（2,4-二氯-6-羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6 -羧酸乙酯粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]-4-（2,4-二氯-6-羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯；
7）合成2-氨基-4-（2,4-二氯-6-羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯：
将4M盐酸的二噁烷溶液与2-[（E）-二甲氨基亚甲基氨基]-4-（2,4-二氯-6-羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6 -羧酸乙酯和甲醇在室温下搅拌反应；取反应液经真空蒸发后再用饱和碳酸钠溶液进行中和，再用乙酸乙酯萃取；用饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层，然后经脱水干燥和真空浓缩，取得2-氨基-4-（2,4-二氯-6-羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯粗产品；最后将2-氨基-4-（2,4-二氯-6-羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的2-氨基-4-（2,4-二氯-6-羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯；
8）合成2-氨基-4-{2,4-二氯-6-[2-（1H -吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯：
将碳酸钾和1-（2-氯乙基）-1H-吡唑、2-氨基-4-（2,4-二氯-6-羟基苯基）吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯、二甲基甲酰胺在120±0.5oC条件下搅拌反应；待反应结束后冷却到室温，再向反应混合物加入水和乙酸乙酯，再搅拌30分钟，得到水混合物；取水混合物用乙酸乙酯萃取，以饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层，然后经脱水干燥和真空浓缩，取得2-氨基-4-{2,4-二氯-6-[2-（1H-吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯粗产品；最后将2-氨基-4-{2,4-二氯-6-[2-（1H-吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的2-氨基-4-{2,4-二氯- 6- [2 -（1H -吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯；
9）合成2 -氨基- 4- {2,4-二氯- 6- [2-（1H -吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸：
将氢氧化钠水溶液与2-氨基-4-{2,4-二氯-6-[2-（1H-吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸乙酯、乙醇在室温下搅拌反应；待反应结束后加入盐酸水溶液，得到pH值为7.0±1的混合物；将混合物用乙酸乙酯萃取，以饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层，然后经脱水干燥和真空浓缩，取得2 -氨基- 4- {2,4-二氯- 6-[2-（1H -吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸；
10）合成2-氨基-N-环丙基-4-{2,4-二氯-6-[2-（1H-吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺：
将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐与2-氨基-4-{2,4-二氯-6-[2-（1H-吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧酸、环丙胺、三乙胺、二甲基甲酰胺在室温下搅拌反应；待反应结束后用乙酸乙酯萃取，以饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层， 然后经脱水干燥和真空浓缩，取得2-氨基-N-环丙基-4-{2,4-二氯-6-[2 -（1H-吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺粗产品；最后将2-氨基-N-环丙基-4-{2,4-二氯-6-[2 -（1H -吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的2-氨基-N-环丙基-4-{2,4-二氯- 6- [2 -（1H-吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺。
3.根据权利要求2所述2-氨基-N-环丙基-4-{2,4-二氯-6-[2 -（1H -吡唑-1-基）乙氧基]苯基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪- 6 -甲酰胺的合成方法，其特征在于所述2,4-二氯-6-羟基苯硼酸的合成步骤是：
1）合成2-碘- 3,5 -二氯苯酚：
将对3,5-二氯苯酚与无水甲苯混合后在0℃和氮气气氛下加入氢化钠水溶液进行反应；将反应混合物升温到室温并搅拌30分钟，将形成的悬浮液冷却回0℃，然后加入碘进一步反应；取最后的反应混合物搅拌后置于0℃至室温的环境下至少24小时后，依次用盐酸水溶液淬解、用乙酸乙酯淬取、用乙酸乙酯层分离、用饱和氯化钠水溶液淬洗，再取淬洗后的有机层经脱水干燥和真空浓缩，取得2-碘- 3,5 -二氯苯酚粗产品；再将2-碘- 3,5 -二氯苯酚粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的2-碘- 3,5 -二氯苯酚；
2）合成1,5-二氯-3 -（乙氧基甲氧基）-2 -碘苯：
将2碘- 3,5 -二氯苯酚、氯甲氧基乙烷 、碳酸铯和二甲基甲酰胺在室温下搅拌反应；先后用水和盐水淬洗反应后的混合物，取淬洗后的有机层经脱水干燥和真空浓缩，取得1,5-二氯-3 -（乙氧基甲氧基）-2 -碘苯粗产品；再将1,5-二氯-3 -（乙氧基甲氧基）-2 -碘苯粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的1,5-二氯-3 -（乙氧基甲氧基）-2 -碘苯；
3）合成2- [2,4 -二氯- 6 -（乙氧基甲氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二杂氧戊硼烷：
将1,5-二氯-3 -（乙氧基甲氧基）-2 -碘苯和双联频哪醇硼酸酯和三乙基胺在二噁烷溶液中用氮气吹扫30分钟后，再将醋酸钯和联苯- 2 -基-二环己基膦加入到反应混合物中，将反应混合物在80℃条件下搅拌反应至反应结束；待反应混合物冷却后，用饱和氯化铵溶液、水和盐水先后淬洗反应混合物；取淬洗后的有机层经脱水干燥和真空浓缩，取得2- [2,4 -二氯- 6 -（乙氧基甲氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二杂氧戊硼烷粗产品；再将2- [2,4 -二氯- 6 -（乙氧基甲氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二杂氧戊硼烷粗产品用硅胶柱进行纯化，取得纯化的2- [2,4 -二氯- 6 -（乙氧基甲氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二杂氧戊硼烷；
4）合成2,4-二氯-6 -羟基苯硼酸：
将2 - [2,4 -二氯- 6 -（乙氧基甲氧基）苯基] -4,4,5,5 -四甲基-1,3,2 - 二杂氧戊硼烷和无水二氯甲烷混合后在0℃和氮气氛围下加入三溴化硼进行反应；待反应结束后将反应混合物倒入水中，再加入氢氧化钠水溶液，调节反应混合物的pH值至10±1；经分离，去除有机层；以1NHCl溶液调整分离得到的水层溶液的pH值至3，再用乙酸乙酯萃取，以饱和氯化钠水溶液萃洗萃取后的有机层，然后经脱水干燥和真空浓缩，取得2,4-二氯-6 -羟基苯硼酸。
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|---|---|---|---|---|
| WO2004043912A2 (en) * | 2002-11-06 | 2004-05-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for the preparation of pyrrolotriazine compounds useful as kinase inhibitors |
| CN1882589A (zh) * | 2003-09-18 | 2006-12-20 | 康福玛医药公司 | 作为hsp90－抑制剂的新的杂环化合物 |
| WO2005066176A1 (en) * | 2003-12-29 | 2005-07-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Pyrrolotriazine compounds as kinase inhibitors |
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| WO2010018481A1 (en) * | 2008-08-13 | 2010-02-18 | Pfizer Inc. | 2-amino pyrimidine compounds as potent hsp-90 inhibitors |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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