CN102131802A

CN102131802A - 用作凝血酶抑制剂的新型杂环甲酰胺

Info

Publication number: CN102131802A
Application number: CN2009801338686A
Authority: CN
Inventors: J·布拉纳尔特; D·古斯塔夫松; I·尼尔松; M·波拉
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2008-06-23
Filing date: 2009-06-22
Publication date: 2011-07-20
Also published as: EP2321301A4; JP2011525487A; CA2727925A1; US8119673B2; WO2009157860A1; KR20110025970A; UY31923A; US20090318517A1; CR11873A; BRPI0914323A2; IL210076A0; US20110130432A1; DOP2010000402A; ECSP10010710A; ZA201100568B; EA201001823A1; TW201002689A; AR072278A1; EA018502B1; AU2009263076B2

Abstract

本发明涉及式(I)的新的药学上有用的化合物，尤其为胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶特别是凝血酶的竞争性抑制剂的化合物，它们作为药物的用途，包含它们的药物组合物及制备它们的合成路线。

Description

用作凝血酶抑制剂的新型杂环甲酰胺

发明领域

本发明涉及新的药学上有用的化合物，尤其为胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶特别是凝血酶的竞争性抑制剂的化合物，它们作为药物的用途，包含它们的药物组合物及制备它们的合成路线。

背景技术

血液凝结是既参与止血(即防止血液从损坏的血管损失)又参与血栓形成(即血管中血块的形成，有时导致血管阻塞)的关键过程。

凝血是一复杂系列的酶反应的结果。该系列反应的最终步骤之一是酶原凝血酶原转化成活性酶凝血酶。

已知凝血酶在凝血中起主要作用。它激活血小板，导致血小板聚集，将纤维蛋白原转化成纤维蛋白单体，所述纤维蛋白单体自发聚合成纤维蛋白聚合物，并激活XIII因子，所述XIII因子反过来使所述聚合物交联形成不可溶的纤维蛋白。此外，凝血酶激活V因子、VIII因子和XI因子，导致从凝血酶原“正反馈”产生凝血酶。

通过抑制血小板的聚集和纤维蛋白的形成与交联，预期凝血酶的有效抑制剂显示抗血栓形成活性。此外，预期抗血栓形成活性可通过对正反馈机理的有效抑制而提高。实际上，凝血酶抑制剂在人内的具有说服力的抗血栓形成效果已由S.Schulman等人在N.Engl.J.Med.349，1713-1721(2003)，L.Wallentin等人在Lancet 362，789-97(2003)和H.-C.Diener等人在Cerebrovasc.Dis.21，279-293(2006)中描述。

凝血酶的低分子量抑制剂的早期开发已由Claesson在Blood Coagul.Fibrinol.5，411(1994)中描述。

等人(在J.Clin.Lab.Invest.24，suppl.107，59(1969)中)报道了基于位于纤维蛋白原Aα链的断裂位点附近的氨基酸序列的凝血酶抑制剂。讨论的氨基酸序列中，这些作者提出了三肽序列Phe-Val-Arg(P9-P2-P1，下文中称为P3-P2-P1序列)会是最有效的抑制剂。

基于2-杂芳基取代的1-基苄胺结构单元的凝血酶抑制剂(位于分子的P1-位置)已在US 7,144,899和WO2004032834中公开。

基于1-乙酰基-吡咯烷-2-甲酰胺、1-乙酰基-哌啶-2-甲酰胺或1-乙酰基-氮杂环庚烷-2-甲酰胺结构单元的凝血酶抑制剂(位于分子的P2-位置)已在US 7,144,899中公开。

基于1-乙酰基-吡咯烷-2-甲酰胺或1-乙酰基-二氢吡咯-2-甲酰胺结构单元的凝血酶抑制剂(位于分子的P2-位置)已在US 6,515,011和WO2004032834中公开。

基于1-乙酰基-氮杂环庚烷-2-甲酰胺结构单元的凝血酶抑制剂(位于分子的P2-位置)已在US 6,528,503中公开。

基于氮杂-双环[3.1.0]己烷-1-甲酰胺结构单元的凝血酶抑制剂(位于分子的P2-位置)已在US 6,288,077中公开。

1，3-噻唑烷-2-甲酰胺、1，3-噻唑烷-4-甲酰胺、吡唑烷-3-甲酰胺和4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺结构单元的凝血酶抑制剂(位于分子的P2-位置)已在US6,740,647中公开且也由Lange等人在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 16，2648-2653(2006)中描述。

基于芳基杂环的凝血酶抑制剂的定量结构活性关系研究已由Roy等人在European Journal of Medicinal Chemistry 41，1339-1346(2006)中描述。

基于4-氟脯氨酸的凝血酶抑制剂(位于分子的P2-位置)已由Staas等人在Bioorganic & Medicinal Chemistry 14，6900-6916(2006)中描述。

基于位于分子P1-位置的带有各种芳基杂环的吡嗪酮(pyrazinone)的凝血酶抑制剂(位于分子的P2-位置)已由Young等人在Journal of Medicinal Chemistry 47，2995-3008(2004)中描述。

仍需要胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶如凝血酶的有效抑制剂。也还需要具有有利的药物动力学性能的化合物。希望这种化合物可用作抗凝血剂并因此可用于血栓形成和相关病症的治疗性治疗中。

发明内容

本发明的一个方面提供式(I)化合物或药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐：

其中

X为N、O或NH；

当X为O或NH时，Y为CH₂，X和Y通过单键相连，

或，或者

当X为N时，Y为CH，X和Y通过双键相连；

R¹为包含2、3或4个选自N、O和S的杂原子的5元杂芳基环，其中至少2个杂原子为N，0或1个杂原子为O或S，其中所述5元杂环在任何碳环原子上被0、1或2个选自C_1-6烷基和包含1或2个氮原子的6元杂芳基环的取代基取代，其中所述6元杂芳基环在任何碳环原子上被0、1、2或3个选自C_1-6烷基的取代基取代；

R²为H、卤素、氰基、C_1-6烷基和C_1-6烷氧基，其中所述C_1-6烷基或C_1-6烷氧基被0、1、2、3、4或5个卤素取代；

G表示

其中

R³为H、R⁵、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或C_3-6环烷基，其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基和C_3-6环烷基各自独立被0、1、2、3、4或5个选自卤素的取代基和0、1或2个选自OH、氧代、氰基、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、C_4-7环烯基、环杂烷基、R⁵和R⁶的取代基取代；

R⁵为苯基、

包含1、2或3个独立选自O、S和N的杂原子的5或6元杂芳环、

包含1或2个独立选自O、S或N的杂原子的4、5或6元杂烷基环，或

包含1或2个独立选自O、S和N的杂原子的苯环稠合的5或6元环杂烷基，其中所述苯基、所述杂芳环、所述环杂烷基环和所述苯基稠合的环杂烷基环在任何碳环原子上被0、1、2、3、4或5个独立选自COOH、OH、卤素、CF₃、CHF₂、CH₂F、氰基、C_1-6烷基、R⁶和SO₂R⁷的取代基取代；

R⁶为C_1-6烷氧基，其中所述C_1-6烷氧基被0、1、2、3、4或5个卤素取代；

R⁷为C_1-6烷基；

R⁴为OH、OC(O)R⁷、OC(O)R⁸或NHR⁹；

R⁸为苯基，其中所述苯基被0、1、2、3、4或5个独立选自C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、氰基、F、CF₃、CHF₂和CH₂F的取代基取代

或

C_1-4烷基，其中所述C_1-4烷基被0、1、2或3个独立选自甲基和乙基的取代基和0或1个选自苯基的取代基取代，其中所述苯基被0、1、2、3、4或5个独立选自C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、氰基、F、CF₃、CHF₂、CH₂F和OC(O)R⁷的取代基取代；

R⁹为H、COOR⁷或SO₂R⁷，其中所述R⁷被0、1、2或3个独立选自OH、卤素、氰基、R⁶和C_3-7环烷基的取代基取代；

Q为O、CH₂或S(O)_n；

W为C或N；

n独立为0、1或2；

各t独立为0、1或2；

u独立为0或1；

R¹⁰为0、1、2、3、4或5个选自卤素、OH、氧代、氰基、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、R⁵和R⁶的取代基，其中所述C_1-4烷基被0或1个选自R⁵、NH₂、NH(C_1-4烷基)或N(C_1-4烷基)₂的取代基取代；和

R¹¹为0、1、2、3、4或5个选自卤素、OH、氰基、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、R⁵和R⁶的取代基，其中所述C_1-4烷基被0或1个选自R⁵、NH₂、NH(C_1-4烷基)或N(C_1-4烷基)₂的取代基取代。

式(I)化合物具有手性中心且有些具有几何异构中心(E-和Z-异构体)，应理解本发明包括所有这种光学的、非对映异构的和几何的异构体。

本发明的一个方面提供式(I)化合物在治疗中的用途。

本发明的另一方面提供式(I)化合物在抗凝血治疗中的用途。

本发明的另一方面提供式(I)化合物在治疗其中抑制凝血酶是有益的病症中的用途。

本发明的另一方面提供式(I)化合物在治疗和预防血栓栓塞疾病中的用途。

本发明的另一方面提供治疗其中抑制凝血酶是有益的病症的方法，所述方法包括给予患有或易患这种病症的人治疗有效量的式(I)化合物。

本发明的另一方面提供治疗和预防血栓栓塞疾病的方法，所述方法包括给予患有或易患血栓形成倾向(thrombophilia)的人治疗有效量的式(I)化合物。

本发明的另一方面提供药物组合物，所述药物组合物包含与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂和/或惰性载体混合的治疗有效量的式(I)化合物。

本发明的另一方面提供一种药物制剂，所述药物制剂包含式(I)化合物用于治疗其中抑制凝血酶是有益的病症如血栓栓塞疾病和/或其中需要抗凝血治疗的病症。

本发明的另一方面提供制备式(I)化合物的方法及用于制备式(I)化合物的中间体。

下面对本发明的这些和其它方面进行更详细的描述。

发明详述

本发明的目的是提供作为胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶特别是凝血酶的竞争性抑制剂的化合物，它们作为药物的用途，包含它们的药物组合物及制备它们的合成路线。

下面列出的是在说明书和权利要求书中用于描述本发明的定义。

为了避免疑义，应该理解本说明书中基团被“在上文中定义的”或“以上定义的”限定时，所述基团包括第一次出现的和最广的定义及该基团的各个和所有其它定义。

为了避免疑义，应该理解本说明书中“C_1-6”是具有1、2、3、4、5或6个碳原子的碳基团而“C_1-4”是具有1、2、3或4个碳原子的碳基团。

本说明书中，除非另外指出，术语“烷基”包括直链和支链烷基，可为但不局限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、叔戊基、新戊基、正己基、异己基或叔己基。

本说明书中，除非另外指出，术语“环烷基”是指饱和环烃环体系。术语“C_3-6环烷基”可为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

本说明书中，除非另外指出，术语“烯基”包括直链和支链烯基。术语C_2-6烯基包括具有2-6个碳原子和一个或两个双键的烯基，可为，但不局限于乙烯基、烯丙基、丙烯基、丁烯基、巴豆基、戊烯基或己烯基，丁烯基可为，例如丁烯-2-基、丁烯-3-基或丁烯-4-基。

本说明书中，除非另外指出，术语“炔基”包括直链和支链炔基。术语C_2-6炔基包括具有2-6个碳原子和一个或两个三键的炔基，可为，但不局限于乙炔基(etynyl)、炔丙基、戊炔基或己炔基，丁炔基可为，例如丁炔-3-基或丁炔-4-基。

本说明书中，除非另外指出，术语“环烯基”是指包含一个或两个双键的非芳族环烃环体系。术语“C_4-7环烯基”可为，但不局限于环丁烯基、环戊烯基、环己烯基或环庚烯基，环戊烯基可为，例如环戊烯-3-基或环戊烯-4-基。

本说明书中，除非另外指出，术语“烷氧基”包括直链或支链烷氧基。C_1-6烷氧基可为，但不局限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、叔戊氧基、新戊氧基、正己氧基、异己氧基或叔己氧基。

本说明书中，除非另外指出，术语“包含2、3或4个选自N、O和S的杂原子的5元杂芳基环，其中至少2个杂原子为N，0或1个杂原子为O或S”包括芳族杂环环。这种环的实例有咪唑、四唑、***、噻二唑或噁二唑。

本说明书中，除非另外指出，术语“包含1或2个氮原子的6元杂芳基环”包括吡啶、哒嗪、嘧啶或吡嗪。

本说明书中，除非另外指出，术语“具有1或2个选自O、S和N的杂原子的4、5或6元环杂烷基环”包括氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、氧氮杂环丁烷、吡咯烷、咪唑啉、四氢呋喃、噁唑烷、哌啶、哌嗪、六氢哒嗪、六氢嘧啶、吗啉、噁嗪、硫杂环丁烷、硫杂环丁烷1-氧化物、硫杂环丁烷1，1-二氧化物、四氢噻吩、四氢噻吩1-氧化物、四氢噻吩1，1-二氧化物、四氢噻喃、四氢噻喃1-氧化物或四氢噻喃1，1-二氧化物。

本说明书中，除非另外指出，术语“包含1、2或3个独立选自O、S和N的杂原子的5或6元杂芳环”包括呋喃、噻吩、吡咯、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、***、噻二唑、噁二唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪或三嗪。

本说明书中，除非另外指出，术语“包含1或2个独立选自O、S和N的杂原子的苯环稠合的5或6元环杂烷基环”包括二氢吲哚、二氢异吲哚、二氢苯并呋喃、二氢异苯并呋喃、二氢苯并噻吩、二氢苯并咪唑、二氢吲唑、二氢苯并噁唑、二氢苯并噻唑、四氢喹啉、四氢异喹啉、四氢喹喔啉、四氢喹唑啉、四氢二氮杂萘、色满、异色满、硫代色满、异硫代色满、二氢苯并噁嗪或二氢苯并噻嗪。

本说明书中，除非另外指出，术语“卤素”可为氟、氯、溴或碘。

本说明书中，

表示以下结构的基元：

在本发明的一个实施方案中，R¹为包含2、3或4个选自N、O和S的杂原子的5元杂芳基环，其中至少2个杂原子为N，0或1个杂原子为O或S，其中所述5元杂环在任何碳环原子上被0、1或2个选自C_1-6烷基和包含1或2个氮原子的6元杂芳基环的取代基取代，其中所述6元杂芳基环在任何碳环原子上被0、1、2或3个选自C_1-6烷基的取代基取代。

在本发明的另一实施方案中，R¹为包含2、3或4个选自N、O和S的杂原子的5元杂芳基环，其中至少2杂原子为N，0或1个杂原子为O或S。

在本发明的另一实施方案中，R¹为四唑。

在本发明的一个实施方案中，R²为H、卤素、氰基、C_1-6烷基和C_1-6烷氧基，其中所述C_1-6烷基或C_1-6烷氧基被0、1、2、3、4或5个卤素取代。

在本发明的另一实施方案中，R²为H或卤素。

在本发明的另一实施方案中，R²为H、Cl或F。

在本发明的一个实施方案中，与羰基共价连接的吡唑烷、二氢吡唑或异噁唑烷即包含X和Y的环中的碳周围的立体化学构型为(S)。

在本发明的一个实施方案中，G为

在本发明的另一实施方案中，G为

R³为H、R⁵、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或C_3-6环烷基，其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基和C_3-6环烷基各自独立被0、1、2、3、4或5个选自卤素的取代基和0、1或2个选自OH、氧代、氰基、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、C_4-7环烯基、环杂烷基、R⁵和R⁶的取代基取代，

其中R⁵为苯基、包含1、2或3个独立选自O、S和N的杂原子的5或6元杂芳环、包含1或2个独立选自O、S或N的杂原子的4、5或6元杂烷基环，或包含1或2个独立选自O、S和N的杂原子的苯环稠合的5或6元环杂烷基环，其中所述苯基、所述杂芳环、所述环杂烷基环和所述苯基稠合的环杂烷基环在任何碳环原子上被0、1、2、3、4或5个独立选自COOH、OH、卤素、CF₃、CHF₂、CH₂F、氰基、C_1-6烷基、R⁶和SO₂R⁷的取代基取代；

R⁷为C_1-6烷基；

R⁴为OH、OC(O)R⁷、OC(O)R⁸或NHR⁹；

或

其中R⁶为C_1-6烷氧基，其中所述C_1-6烷氧基被0、1、2、3、4或5个卤素取代；

R⁷为C_1-6烷基。

在本发明的另一实施方案中，G为

R³为C_1-6烷基、C_3-6环烷基、包含1、2或3个独立选自O、S和N的杂原子的5或6元杂芳环，

包含1或2个独立选自O、S和N的杂原子的4、5或6元环杂烷基环，或R¹²，其中所述C_1-6烷基、所述C_3-6环烷基、所述杂芳环和所述环杂烷基环被0或1个选自NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、C₃环烷基、R⁶或R¹²的取代基取代，

R¹²为苯基，其中所述苯基被被0、1或2个选自卤素和R⁶的取代基取代；和

R⁴为OH、OC(O)R⁷、OC(O)R⁸或NH₂，

其中R⁷为C_1-6烷基；

或

C_1-4烷基，其中所述C_1-4烷基被0、1、2或3个独立选自甲基和乙基的取代基和0或1个选自苯基的取代基取代，其中所述苯基被0、1、2、3、4或5个独立选自C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、氰基、F、CF₃、CHF₂、CH₂F和OC(O)R⁷的取代基取代。

在本发明的另一实施方案中，G为

R³为C_3-6环烷基、R¹²或C_1-6烷基，其中所述C_1-6烷基被0或1个选自C₃环烷基、N(C_1-4烷基)₂、R⁶或R¹²的取代基取代，

其中R⁶为C_1-6烷氧基，其中所述C_1-6烷氧基被0、1、2、3、4或5个卤素取代；和

R¹²为苯基，其中所述苯基被0、1或2个选自卤素的取代基取代；和

R⁴为OH或OC(O)R⁷。

在本发明的一个实施方案中，G中被R³和R⁴取代的碳周围的立体化学构型为(R)。

在另一实施方案中，G为

R¹⁰为0、1、2、3、4或5个选自卤素、OH、氧代、氰基、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、R⁵和R⁶的取代基，其中所述C_1-4烷基被0或1个选自R⁵、NH₂、NH(C_1-4烷基)或N(C_1-4烷基)₂的取代基取代；

R⁵为苯基，其被0、1、2、3、4或5个独立选自COOH、OH、卤素、CF₃、氰基、C_1-6烷基、R⁶和SO₂R⁷的取代基取代，

R⁷为C_1-6烷基；

Q为O、CH₂或S(O)_n；

n独立为0、1或2；和

各t独立为0、1或2。

在本发明的另一实施方案中，G为

Q为O或CH₂；

各t独立为0或1；

R¹⁰为0、1或2个选自氧代、C_1-4烷基、R⁵和R⁶的取代基；和

R⁵为苯基，其被0、1、2、3、4或5个独立选自COOH、OH、卤素、CF₃、氰基、C_1-6烷基、R⁶和SO₂R⁷的取代基取代；

R⁷为C_1-6烷基；

在本发明的另一实施方案中，G为

Q为O或CH₂；和

各t独立为0或1；和

R¹⁰为0、1或2个选自氧代和C_1-4烷基的取代基。

在本发明的另一实施方案中，G为

R⁴为OH、OC(O)R⁷、OC(O)R⁸或NHR⁹；

其中R⁷为C_1-6烷基；

或

C_1-4烷基，其中所述C_1-4烷基被0、1、2或3个独立选自甲基和乙基的取代基和0或1个选自苯基的取代基取代，其中所述苯基被0、1、2、3、4或5个独立选自C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、氰基、F、CF₃、CHF₂、CH₂F和OC(O)R⁷的取代基取代；和

Q为O、CH₂或S(O)_n；

W为C或N；

n独立为0、1或2；

u独立为0或1；和

R¹¹为0、1、2、3、4或5个选自卤素、OH、氰基、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、R⁵和R⁶的取代基，其中所述C_1-4烷基被0或1个选自R⁵、NH₂、NH(C_1-4烷基)或N(C_1-4烷基)₂的取代基取代；

R⁷为C_1-6烷基。

在本发明的另一实施方案中，G为

R⁴为OH、OC(O)R⁷、OC(O)R⁸或NH₂，

其中R⁷为C_1-6烷基；

或

Q为O或CH₂；

u独立为0或1；和

R¹⁰为0、1或2个选自C_1-4烷基、卤素和R⁶的取代基；

R¹¹为0、1或2个选自C_1-4烷基、卤素和R⁶的取代基，

其中R⁶为C_1-6烷氧基，其中所述C_1-6烷氧基被0、1、2、3、4或5个卤素取代。

在本发明的另一实施方案中，G为

R⁴为OH或OC(O)R⁷；

R¹⁰为0、1或2个选自C_1-4烷基、F、C1、OCH₃、OCF₃、OCHF₂和OCH₂F的取代基；

R¹¹为0、1或2个取代基选自C_1-4烷基、F、Cl、OCH₃、OCF₃、OCHF₂和OCH₂F；

Q为O或CH₂；和

u独立为0或1。

在本发明的一个实施方案中，式(I)化合物选自如下或药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐：

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2，3-二氟苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-1-[(2R)-3-叔丁氧基-2-羟丙酰基]-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(3，5-二氟苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-环戊基-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2，4-二氟苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-2-(3-甲基苯基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-5-甲基己酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2-氟苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟己酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-3-(1-甲基环丙基)丙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(4-羟基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)羰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-2-苯基乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-4，4-二甲基戊酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-环己基-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-3-甲氧基-3-甲基丁酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-3-苯基丙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-(4-甲基-D-亮氨酰基)-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-3-环丙基-2-羟丙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-3，3-二甲基丁酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(3-氰基苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2S)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

乙酸[(1R)-2-[(5S)-5-[[5-氯-2-(四唑-1-基)苯基]甲基氨基甲酰基]-4，5-二氢吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代-乙基]酯、

3-甲基丁酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯、

丁酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯、

丙酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙基2-甲基酯、

戊酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯、

丙酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯、

苯甲酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯、

3-(2，4-二甲基-6-(丙酰氧基)苯基)-3-甲基丁酸(R)-2-((S)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基氨基甲酰基)-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-2-(O-叔丁基-D-丝氨酰)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2，4-二氟苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2，3-二氟苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(3，5-二氟苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2-氟苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[羟基(3-甲基苯基)乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟己酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-5-甲基己酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-2-[(2R)-3-叔丁氧基-2-羟基丙酰基]-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-环戊基-2-羟乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-环己基-2-羟乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3-(1-甲基环丙基)丙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-2-苯基乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3，3-二甲基丁酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-4，4-二甲基戊酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3-苯基丙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(3-氰基苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-2-苯基乙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2-氟苯基)(羟基)乙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2，4-二氟苯基)(羟基)乙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(4-羟基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)羰基]吡唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-4，4-二甲基戊酰基]吡唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-环己基-2-羟乙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3-苯基丙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺或

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3，3-二甲基丁酰基]吡唑烷-3-甲酰胺。

本发明的另一方面提供式(X)化合物：

X为N、O或NH；

当X为O或NH时，Y为CH₂，X和Y通过单键相连，

或

当X为N时，Y为CH，X和Y通过双键相连；

R³为C_1-6烷基、C_3-6环烷基、包含1、2或3个独立选自O、S和N的杂原子的5或6元杂芳环、包含1或2个独立选自O、S和N的杂原子的4、5或6元环杂烷基环，或R¹²，其中所述C_1-6烷基、所述C_3-6环烷基、所述杂芳环和所述环杂烷基环被0或1个选自NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、C₃环烷基、R⁶或R¹²的取代基取代；

R⁶为C_1-6烷氧基，其中所述C_1-6烷氧基被0、1、2、3、4或5个卤素取代；和

R¹²为苯基，其中所述苯基被0、1或2个选自卤素和R⁶的取代基取代。

本发明的另一方面提供式(XI)化合物：

X为N、O或NH；

当X为O或NH时，Y为CH₂，X和Y通过单键相连，

或

当X为N时，Y为CH，X和Y通过双键相连；

Q为O或CH₂；

u独立为0或1；和

R¹⁰为0、1或2个选自C_1-4烷基、卤素和R⁶的取代基；

R¹¹为0、1或2个选自C_1-4烷基、卤素和R⁶的取代基；

R⁶为C_1-6烷氧基，其中所述C_1-6烷氧基被0、1、2、3、4或5个卤素取代。

本发明还提供制备如上定义的式(I)化合物的方法，所述方法包括：

(A)使式(II)化合物或其氨基受保护的衍生物：

其中X和Y如式(I)中所定义，与式(III)的胺反应：

其中R¹和R²如式(I)中所定义，以产生式(IV)化合物或其氨基受保护的衍生物：

(B)使式(IV)化合物：

其中X、Y、R¹和R²如式(I)中所定义，与式(V)化合物或其羟基取代基受保护的衍生物或羟基取代基与羧酸都受保护的衍生物反应：

其中R³如上所定义，R⁴为OH，以产生式(I)化合物；(C)使式(IV)化合物：

其中X、Y、R¹和R²如式(I)中所定义，与式(VI)化合物或其羟基取代基受保护的衍生物或羟基取代基与羧酸都受保护的衍生物反应：

其中R¹⁰、R¹¹、W、Q和u如上所定义，R⁴为OH，以产生式(I)化合物；

(D)使式(IV)化合物：

其中X、Y、R¹和R²如式(I)中所定义，与式(V)化合物或其氨基取代基受保护的衍生物反应：

其中R³如上所定义，R⁴为NHR⁹，其中R⁹如上所定义，以产生式(I)化合物；

(E)使式(IV)化合物：

其中X、Y、R¹和R²如式(I)中所定义，与式(VI)化合物或其氨基取代基受保护的衍生物反应：

其中R¹⁰、R¹¹、W、Q和u如上所定义，R⁴为NHR⁹，其中R⁹如上所定义，以产生式(I)化合物；

(F)使式(IV)化合物：

其中X、Y、R¹和R²如式(I)中所定义，与式(VII)化合物或其氨基取代基受保护的衍生物反应：

其中R¹⁰、Q和t如上所定义，以产生式(I)化合物；

(G)使式(II)化合物或其羧酸受保护的衍生物：

其中X和Y如式(I)中所定义，与式(V)化合物或其羟基取代基受保护的衍生物或羟基取代基与羧酸都受保护的衍生物反应：

其中R³如上所定义，R⁴为OH，以产生式(VIII)化合物：

(H)使式(II)化合物或其羧酸受保护的衍生物：

其中X和Y如式(I)中所定义，与式(VI)化合物或其羟基取代基受保护的衍生物或羟基取代基与羧酸都受保护的衍生物反应：

其中R¹⁰、R¹¹、W、Q和u如上所定义，R⁴为OH，以产生式(IX)化合物：

(I)使式(VIII)化合物或其羧酸受保护的衍生物：

其中X、Y和R³如上所定义，R⁴为OH，或其OH基团受保护的衍生物，以产生式(X)化合物：

(J)使式(IX)化合物或其羧酸受保护的衍生物：

其中R¹⁰、R¹¹、X、Y、W、Q和u如上所定义，R⁴为OH，或其OH基团受保护的衍生物，以产生式(XI)化合物：

(K)使式(X)或式(XI)化合物，其中R³、R¹⁰、R¹¹、X、Y、W、Q和u如上所定义，与式(III)化合物反应，其中R¹和R²如上所定义，以产生式(I)化合物；

(L)使式(II)化合物或其羧酸受保护的衍生物：

其中X和Y如式(I)中所定义，与式(XII)化合物反应：

其中R³如上所定义，以产生式(XIII)化合物：

(M)使式(XIII)化合物或其羧酸受保护的衍生物在还原条件下反应，其中X、Y和R³如上所定义，以产生式(VIII)化合物：

(N)使式(XIV)化合物：

其中R¹²为OH、烷氧基、芳氧基或R¹³，其中R¹³为手性辅助剂(auxiliary)，例如2，10-樟脑磺内酰胺(camphorsultam)、6，6-二甲基-7，10-亚甲基-3-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-2-酮或4-苄基-2-噁唑烷酮，与三甲基甲硅烷基重氮甲烷反应以产生式(XV)化合物：

其中Y为CH，X为N，R¹²为OH、烷氧基、芳氧基或R¹³，X和Y之间的键为双键。

(O)使式(XVI)化合物或其受保护的衍生物：

其中R¹²为OH或烷氧基，L为Cl、Br、I或OSO₂CF₃，X为O、N，在碱存在下反应以产生式(XV)化合物：

其中Y为CH₂，X为N或O，R¹²为OH或烷氧基，X和Y之间的键为单键。

方法(A)-(H)和(L)可采用从羧酸制备酰胺的已知方法或类似地(例如下文中在实施例中所述)进行。其可在溶剂例如DCM、MeCN、H₂O、EtOAc或DMF中在合适的碱例如吡啶、DMAP、NMM、TEA、NaHCO₃、2，4，6-可力丁(collidine)或DIPEA和合适的试剂例如草酰氯、氰尿酰氟、EDC/HOBt、DCC/HOBt、HBTU、HATU、PyBOP、T3P或TBTU存在下进行。反应温度可为0℃至100℃，或在溶剂的回流温度(如果＜100℃)，但方便地为室温。

方法(I)和(J)可采用制备内酯的已知方法或类似地(例如下文中在实施例中所述)进行。其可在有机溶剂例如CHCl₃、苯、甲苯、EtOH或THF中在合适的试剂例如TsOH、MsOH、NaOH、新戊酰氯/TEA或DMAP/BOP存在下进行。反应温度可为0℃至100℃，或在溶剂的回流温度(如果＜100℃)，但方便地为室温。

方法(K)可采用从内酯制备酰胺的已知方法或类似地(例如下文中在实施例中所述)进行。其可在有机溶剂例如DCM、THF或MeOH中在合适的试剂例如TEA存在下进行。反应温度可为0℃至100℃，或在溶剂的回流温度(如果＜100℃)，但方便地为室温。

方法(M)可采用从酮制备醇的已知方法或类似地(例如下文中在实施例中所述)进行。其可在有机溶剂例如THF中在合适的试剂例如NaBH₄、Zn(BH₄)₂、Ph₂SiH₂存在下、在合适的催化剂例如Rh(PPh₃)₃Cl或Rh(I)-2-(2-吡啶基)-4-甲酯基-1，3-噻唑烷存在下或，或者在H₂和合适的催化剂例如Ru/C、Rh-DIOP或Rh-CYDIOP存在下进行。反应温度可为0℃至100℃，或在溶剂的回流温度(如果＜100℃)，但方便地为室温。

方法(N)可采用从烯烃制备吡唑啉的已知方法或类似地(例如下文中在实施例中所述)进行。其可在有机溶剂例如二氯甲烷、己烷或THF中进行。反应温度可为-100℃至100℃，或在溶剂的回流温度(如果＜100℃)，但方便地为室温。

方法(O)可采用制备吡唑烷或异噁唑烷的已知方法或类似地(例如下文中在实施例中所述)进行。其可在有机溶剂例如THF中在合适的试剂例如NaHMDS、LiHMDS或四丁基氟化铵存在下进行。反应温度可为0℃至100℃，或在溶剂的回流温度(如果＜100℃)，但方便地为室温。

用于将羧酸酯水解成羧酸的方法可采用已知方法或类似地(例如下文中在实施例中所述)进行。其可在溶剂例如MeCN或H₂O中在合适的碱例如TEA或DIPEA或合适的酸例如HCl和任选合适的试剂例如LiBr存在下进行。反应温度可为0℃至100℃，或在溶剂的回流温度(如果＜100℃)，但方便地为室温。式(II)和式(XV)化合物可商购或可通过已知方法制备(例如Tetrahedron Letters 1997，38，4935-4938(N-NH-CH₂)；J.Am.Chem.Soc.1997，119，8379-8380(N-N＝CH)；Helv.Chim.Acta 1983，66，1241(N-O-C))。

式(III)化合物可商购或可通过已知方法制备(例如J.Med.Chem.2004，47，2995)。

式(V)、(VI)、(VII)、(XII)和(XIV)化合物可商购或可通过已知方法制备。

官能团的保护和脱保护已在‘Protective Groups in Organic Synthesis’，第2版，T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience(1991)和‘ProtectingGroups’，P.J.Kocienski，Georg Thieme Verlag(1994)中描述。

本发明的另一实施方案包括式(I)化合物的药学上可接受的盐。如果所述化合物为足够酸性的，药学上可接受的盐包括但不局限于碱金属盐例如钠盐或钾盐、碱土金属盐例如钙盐或镁盐、有机胺盐例如三乙胺、吗啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、普鲁卡因(procaine)、二苄胺、N，N-二苄基乙胺或氨基酸例如赖氨酸。如果所述化合物为足够碱性的，药学上可接受的盐包括但不局限于酸加成盐如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、甲磺酸盐或对甲苯磺酸盐。

根据带电官能团的数目和阳离子或阴离子的价数可存在超过一个阳离子或阴离子。

关于合适盐的评论，参见Berge等人，J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)。

式(I)化合物可以前药的形式给药，所述前药在人或动物体内分解(broke down)以产生式(I)化合物。某些式(I)化合物本身可作为其它式(I)化合物的前药。式(I)前药可展示改善的物理化学、生物药物或药物动力学性能。前药的实例包括式(I)化合物的体内可水解酯。

包含羧基或羟基的式(I)化合物的体内可水解(或裂解)酯为例如药学上可接受的酯，所述酯在人或动物体内水解以产生母体酸或醇。关于酯前药衍生物的实例参见：Curr.Drug.Metab.2003，4，461。

各种其它形式的前药在本领域中是已知的。关于前药衍生物的实例参见：Rautio，J.等人，Nature Reviews Drug Discovery 2008，7，255和本文中引用的参考文献。

医学和药学用途

因此希望本发明化合物可用于其中抑制凝血酶是有益的那些病症(通过参考临床相关端点确定的，例如其中需要或希望抑制凝血酶的病症如血栓栓塞，和/或其中需要抗凝血治疗的病症)，包括如下：

动物包括人的血液和/或组织中血栓症和血凝过快的治疗和/或预防。已知血凝过快可导致血栓栓塞疾病。与血凝过快和血栓栓塞疾病有关的病症通常称为血栓形成倾向症(thrombophilia conditions)。这些病症包括但不局限于遗传或后天的活化蛋白C抗性如因子V突变(因子V Leiden)、遗传或后天的抗凝血酶III、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、肝素辅助因子II的缺乏及凝血因子的血浆水平提高的病症如前凝血酶G20210A突变导致的。已知与血凝过快和血栓栓塞疾病有关的其它病症包括循环抗磷脂抗体(狼疮抗凝血剂)、同型半胱氨酸血症、肝素诱导性血小板减少症和纤维蛋白溶解缺陷及凝血综合征(例如弥漫性血管内凝血(DIC))和整体血管损伤(例如由于外伤或外科手术)。此外，已知低的身体活动、低的心输出量或高年龄增加血栓症的风险而血凝过快可能仅为导致风险提高的几个因素之一。这些情况包括但不局限于长期卧床休息、长期空中旅游、急性医疗疾病如心功能不全或呼吸功能不全导致的住院。血凝过快作为一个组成的血栓症风险提高的其它情况是怀孕和激素疗法(例如***)。

其中存在不需要的过量凝血酶而没有凝血过快征兆的病症的治疗，例如神经退行性疾病如阿尔茨海默(Alzheimer’s)病中，动脉粥样硬化的进展和/或预防中和癌的生长和扩散(spreading)中。

可提及的具体疾病状态包括如下疾病的治疗性治疗和/或预防性治疗：静脉血栓(例如深静脉血栓，DVT)和肺栓塞、动脉栓塞(例如心肌梗塞、不稳定型心绞痛和急性冠状动脉综合征、血栓性中风和周围动脉血栓栓塞中)和通常源自心房纤颤(例如非瓣膜性或瓣膜性心房纤颤)过程中的心房或透壁性心肌梗塞后的左心室或充血性心力衰竭导致的***性栓塞(其可导致中风)；血栓溶解、经皮介入治疗(PTI)和冠状动脉旁通手术之后再闭塞(即血栓症)的预防；显微外科和普通血管外科、器官移植和整形手术之后血栓症的预防。

其它适应征包括细菌、多发性创伤、中毒或任何其它机理导致的弥漫性血管内凝血的治疗性和/或预防性治疗；当血液与体内的外来表面如血管移植物、血管支架、血管内插管、机械和生物人工瓣膜或任何其它医疗设备接触时的抗凝血治疗；和如采用心肺机的心血管手术过程中或血液透析中当血液与体外的医疗设备接触时的抗凝血治疗；先天和成人呼吸窘迫综合征、用放射或化学疗法治疗后肺纤维化、慢性阻塞性肺病、感染性休克、败血症、炎性反应(其包括但不局限于水肿)急性或慢性动脉粥样硬化如冠状动脉疾病和动脉粥样硬化斑块的形成、心功能不全、脑动脉疾病、脑梗塞、脑血栓、脑栓塞、外周动脉疾病、贫血、心绞痛(包括不稳定型心绞痛)、再灌注损伤、经皮介入治疗(PTI)和冠状动脉旁通手术之后再狭窄的治疗性和/或预防性治疗。

抑制胰蛋白酶和/或凝血酶的本发明化合物还可用于治疗胰腺炎。

因此这些病症的治疗性和/或预防性治疗中都需要本发明化合物。

本发明的一个方面提供了式(I)化合物在治疗中的用途。

本发明的另一方面提供式(I)化合物在抗凝血治疗中的用途。

本发明的另一方面提供(I)化合物在治疗其中抑制凝血酶是有益的病症中的用途。

本发明的另一方面提供式(I)化合物用于制备用于治疗其中抑制凝血酶是有益的病症的药物的用途。

本发明的另一方面提供式(I)化合物用于制备用于治疗和预防血栓栓塞疾病的药物的用途。

本发明的另一方面提供治疗其中抑制凝血酶是有益的病症的方法，所述方法包括给予患有或易患这种疾病的人治疗有效量的式(I)化合物。

本发明的另一方面提供治疗和预防血栓栓塞疾病的方法，所述方法包括给予患有或易患血栓形成倾向症的人治疗有效量的式(I)化合物。

本发明化合物具有优点，它们可能比现有技术中已知的化合物更有效(efficacious)、毒性更小、更具有选择性(例如，抑制凝血酶超过其它丝氨酸蛋白酶，尤其胰蛋白酶和参与止血的那些)、更有效力(potent)、产生较少副作用、更容易被吸收，和/或具有更好的药物动力学性能(例如更高的口服生物利用度和/或较低的清除率)。

药物制剂

本发明的另一方面提供治疗需要抑制凝血酶的疾病的方法，所述方法包括给予患有或易患这种疾病的人治疗有效量的本发明化合物。

本发明化合物通常以包含是游离碱或药学上可接受的无毒有机或无机酸加成盐的本发明化合物的药物组合物的形式，以药学上可接受的剂型口服、静脉内、皮下、口腔、直肠、皮肤、鼻内、气管、支气管给药，通过任何其它胃肠外途径或通过吸入给药。

本发明化合物的优选给药途径是口服。

根据待治的病症和患者及给药途径，可以不同剂量给予所述组合物。

本发明化合物还可与如以下中的一种或多种具有不同作用机理的任何抗血栓药组合和/或联合给药：抗凝血药物未分级肝素、低分子量肝素、其它肝素衍生物、合成肝素衍生物(例如fondaparinux)、维生素K拮抗剂、除凝血酶之外的其它凝血因子的合成或生物技术抑制剂(例如合成的FXa、FVIIa、FIXa和FXIa抑制剂和rNAPc2)、抗血小板药物乙酰基水杨酸和双嘧达莫(dipyridamole)、血栓素受体和/或合成酶抑制剂、纤维蛋白原受体拮抗剂、前列环素模拟物、磷酸二酯酶抑制剂、ADP受体(P2X₁、P2Y₁、P2Y₁₂[例如噻氯匹啶、氯吡格雷(clopidogrel)、坎格雷洛(cangrelor)、沙替格雷(satigrel)和AZD6140])拮抗剂、磷酸肌醇-3激酶β或γ的抑制剂、羧肽酶U(CPU或TAFIa)的抑制剂和纤溶酶原激活剂抑制剂-1的抑制剂(PAI-1，例如SCH530348和E-5555)。

本发明化合物可还在治疗血栓性疾病尤其是心肌梗塞中与溶血栓药如一种或多种组织纤溶酶原激活剂(天然、重组或改性的)、链激酶、尿激酶、尿激酶原、茴香酰化纤溶酶原-链激酶激活剂复合物(APSAC)等组合和/或联合给药。

本发明的另一方面提供药物组合物，包括与至少一种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体混合的式(I)化合物。

对人的治疗性治疗中，本发明化合物的合适日剂量为约0.001-100mg/kg体重(经口给药)和0.001-50mg/kg体重(肠胃外给药)。

为了避免疑义，本文中所用的术语“治疗”包括治疗性和/或预防性治疗。

实施例

现在将参考以下实施例对本发明进行进一步解释。

实施例中，在装备有电喷雾接口(LC-HRMS)的Micromass LCT质谱仪上记录高分辨率质谱。在配有分别在400、500和600MHz的¹H频率工作的400、500和600质谱仪的Varian UNITY上进行¹HNMR测试。采用溶剂作为内标以ppm表示化学位移。一些报道的NMR图谱的(CH₃)₂SO^*是指取自溶解于(CH₃)₂SO并用(CD₃)₂SO稀释的浓样品的溶液。由于大量(CH₃)₂SO存在于样品中，首先进行预扫描并进行分析以自动抑制(CH₃)₂SO(2.54ppm)和H₂O(3.3ppm)峰。因此，3.3ppm和2.54ppm周围这些区域中峰的强度被改变。由于这样，可能省略了化合物在这些频率附近的一些信号并在具体实施例中标出省略的面积。采用Merck硅胶60(0.063-0.200mm)进行快速层析法分离。采用ACD/Labs的ACD/Name 9.04对下面指名的化合物命名。

使用以下缩写：

实施例1

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5- 二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

(i)(2R)-(4-氟苯基)(羟基)乙酸

该反应在1L反应器中氮气气氛下进行，以200rpm搅拌。将2-(4-氟苯基)-2-羟基乙酸(139g，816.98mmol)投入该反应器中。加入乙醇(800mL)，这样得到混浊混合物。以1℃/min的变速(ramp)将所得混合物加热回流。接着在5分钟内加入(R)-(+)-1-苯基乙胺(68.5mL，531.04mmol)。然后以1℃/min的速率让所得透明均匀溶液缓慢冷却到60℃。当达到该温度时，加入95∶5非对映体纯的晶种(～100mg)。现在缓慢开始结晶。以0.5℃/min使温度下降到20℃。当达到该温度时，将混合物搅拌另外2小时。接着过滤混合物。这样得到铵盐晶体(95g)。采用以下步骤使该盐从EtOH(99.5％，800mL)中再结晶出来：在1L反应器和氮气气氛下，将以上获得的盐投入反应器中。加入EtOH(800mL)(获得悬浮液)，然后以1℃/min的速率将温度提高到回流温度。当所有盐溶解时，以1℃/min将温度降至65℃。当达到该温度时(透明均匀溶液)，加入接种晶体(加入约0.5g)。结晶立即开始，但非常缓慢。接着以0.5℃/min的速率让温度下降至20℃。接着将所得混合物搅拌(200rpm)过夜。过滤并真空干燥后，获得67.9g盐。该盐的游离酸的手性HPLC分析显示：对映体过量为95.2％(97.62.4er)。采用如上所述的相同步骤(但仅将混合物在室温搅拌2小时而不是搅拌过夜)使该盐从EtOH(99.5％，500mL)中再一次重结晶。过滤并干燥后，获得56.3g铵盐的晶体。该游离酸的手性HPLC分析显示：对映体过量为99.1％。

使以上铵盐在甲基叔丁基醚(400mL)和1M HCl(aq.，300mL)之间分层。水相用TBME(2X100mL)萃取。合并的有机相用水(100mL)洗涤，接着干燥(MgSO₄)并浓缩。这样得到固体状的标题化合物(32.5g)。

(ii)(2R)-(4-氟苯基)[(三甲基甲硅烷基)氧基]乙酰氯

向(2R)-(4-氟苯基)(羟基)乙酸(20g，117.55mmol)、DMAP(0.718g，5.88mmol)和吡啶(19.93mL，246.86mmol)在二氯甲烷(250mL)中的0℃溶液中缓慢(10min)加入三甲基氯硅烷(30.6mL，240.98mmol)。将所得混合物冰冷却搅拌15分钟，接着在室温下搅拌过夜。然后在冰浴中将混合物冷却，加入DMF(0.211mL，2.74mmol)，接着缓慢(15min)加入草酰氯(10.25mL，121.08mmol)。将所得悬浮液在0℃搅拌1小时并在室温搅拌30分钟。接着将所得混合物原样用于下一步骤。(2R)-(4-氟苯基)[(三甲基甲硅烷基)氧基]乙酰氯的产率假定为100％。

(iii)(备选1)(5S)-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酸乙酯

在氮气气氛和冰冷却下，将丙烯酸乙酯(13.00mL，120mmol)溶解于庚烷(60mL)和甲苯(60mL)中。加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(在己烷中的2M溶液，60.0mL，120.00mmol)。接着让所得溶液达到室温并搅拌1.5小时。然后将该混合物在30℃减压浓缩。这样得到粗中间体环加成产物，其不经过进一步纯化而使用。在氮气气氛、冰冷下，向(2R)-(4-氟苯基)[(三甲基甲硅烷基)氧基]乙酰氯(30.7g，117.7，mmol，参见(ii)在二氯甲烷(250mL)中的溶液中缓慢(5分钟)加入以上获得的粗中间体环加成产物。接着让所得混合物达到室温并搅拌2小时。粗混合物的LC/MS分析显示了正确的产物和一种副产物，其中三甲基甲硅烷基仍保持完整。加入水(300mL)。水相用CH₂Cl₂(100mL)萃取。将合并的有机相浓缩，得到粘油(45g)。接着向其中加入Me-THF(100mL)和TFA(44.6mL，600.00mmol)。将所得混合物加热至78℃并搅拌过夜。加入水(200mL)，接着将所得混合物剧烈搅拌15分钟。加入EtOAc(300mL)，将各相分离并将有机相浓缩。接着通过硅胶层析法采用在庚烷中的20-60％EtOAc作为洗脱剂将粗非对映异构体混合物纯化。收集包含所需非对映异构体的纯流分并浓缩。从热的EtOAc/庚烷(30/70，200mL)中再结晶，得到固体状的所需化合物(8.9g，25％产率)。1H NMR(600MHz，CDCl₃)δ1.29(t，3H)，2.91(ddd，1H)，3.16(ddd，1H)，4.12(d，1H)，4.21-4.27(m，2H)，4.70(dd，1H)，5.72(d，1H)，6.88-6.90(m，1H)，6.97-7.01(2H)，7.39-7.43(m，2H).

(iii)(备选2)(5S)-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酸乙酯

20℃、氮气气氛下，将丙烯酸乙酯(288g，2877mmol)溶解于二氯甲烷(4000mL)，搅拌速率为150rpm。30min时间内加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(在己烷中的2M溶液，1150mL，2301mmol)，之后将所得混合物在20℃搅拌19.5h。冷却到-30℃后，在35min时间内缓慢加入三氟乙酸(443mL，5752mmol)。在110min内缓慢加入(R)-2-(4-氟苯基)-2-(三甲基甲硅烷基氧基)乙酰氯(600g，2301mmol)在二氯甲烷(4000ml)中的粗混合物，在此期间将温度升至20℃。将所得混合物在20℃搅拌45min，之后一次加入EtOH(500mL)和水(500mL)。将所得混合物以200rpm搅拌50min，加入(2500mL)水，以200rpm搅拌5分钟，接着让各层分离10分钟。

将水层(4L)与有机层(10.5L)分离，向有机层中加入NaHCO3溶液(aq.，8％，2.5L)。以200rpm将所得混合物搅拌10分钟，之后将有机层(V＝9.75L)与水层(3000mL)分离。将在CH₂Cl₂溶液中的粗产物在40℃真空浓缩15h。向所得固体加入EtOAc(2000mL)和庚烷(1000mL)并将所得混合物加热回流。加入另外1000mL庚烷，之后加入接种晶体(200mg)(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺，导致立即结晶。将搅拌速率设定在100rpm并以1℃/min将温度降至20℃，接着将混合物搅拌过夜。通过P3过滤器将该混合物过滤，滤饼用EtOAc/庚烷(50/50，3x300ml)洗涤。接着将固体真空干燥，得到标题混合物(345g，51％产率)。

(iv)(5S)-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酸

向乙腈(70mL)、水(1.5mL)和LiBr(12.69g，146.12mmol)的溶液中先后加入(5S)-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(8.6g，29.22mmol)和三乙胺(10.13mL，73.06mmol)。接着将所得均匀透明溶液在室温搅拌过夜。加入EtOAc(200mL)和1M HCl(aq.，150mL)。水相用EtOAc(100mL)萃取。接着将合并的有机层浓缩。这样得到7.2g固体状的所需酸。合并的水层用EtOAc(2X50mL)萃取，然后用水(50mL)洗涤合并的有机层，分离出另外0.42g产物。总产率98％。1H NMR[400MHz，(CD₃)₂SO]δ2.86(ddd，1H)，3.23(ddd，1H)，4.53(dd，1H)，5.71-5.77(m，2H)，7.07-7.15(m，3H)，7.36-7.42(m，2H)，12.97(s，br，1H).

(v)(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

在开口容器中，将5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(14g，45.20mmol，如J.Med.Chem.2004，47，2995中所述制备的)悬浮于乙腈(80mL)中。加入HCl(6M水溶液，37.7mL，225.99mmol)，接着将所得混合物在室温搅拌4小时。加入水(200mL)和TBME(100mL)。冰冷却下向水相中加入EtOAc(200mL)，之后缓慢加入2M NaOH(aq.，130mL)。接着用水(100mL)洗涤有机相。然后向包含粗(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)甲胺的EtOAc溶液(220mL)中先后加入(5S)-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酸(7.53g，28.28mmol)和N-甲基吗啉(4.66mL，42.43mmol)。接着向该透明均匀溶液中一次加入TBTU(10.90g，33.94mmol)。然后将所得混合物在室温搅拌过夜。将形成的沉淀物过滤，然后用TBME(100mL)洗涤。真空干燥后，获得固体状的所需化合物(7.65g，59％)。母液用EtOAc稀释并用Na₂CO₃(aq.，sat)、水和1M HCl(aq.)洗涤。从CH₃CN/水中结晶，得到4.59g标题化合物。总产率88％。1H NMR(600MHz，CD₃CN)δ2.93(ddd，1H)，3.10(ddd，1H)，4.15-4.19(m，2H)，4.25(dd，1H)，4.60(dd，1H)，5.73-5.76(m，1H)，6.97-6.99(m，1H)，7.07-7.10(m，2H)，7.28-7.30(m，1H)，7.42-7.46(m，3H)，7.54-7.56(m，1H)，7.71(d，1H)，9.20(s，1H).

以类似于上述实施例1的方式采用合适的原料制备实施例2-22。

实施例2

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2，3-二氟苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

最强力(potent)异构体的¹HNMR(400MHz，CD₃OD)：δ9.55(s，1H)，7.75(d，1H)，7.56(dd，1H)，7.49(d，1H)，7.22-7.13(m，2H)，7.13-7.06(m，1H)，6.95(br.t，1H)，6.06(s，1H)，4.64(dd，1H)，4.30(d，1H)，4.24(d，1H)，3.21-3.08(m，1H)，2.90-2.82(m，1H)，C₂₀H₁₆ClF₂N₇O₃的HRMS(ESI)计算值：476.1049(M+H)⁺，实验值：476.1050。

实施例3

(5S)-1-[(2R)-3-叔丁氧基-2-羟丙酰基]-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.03(s，1H)，7.92(br.t，1H)，7.59(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.28(d，1H)，7.06(s，1H)，4.90(d，1H)，4.89(dd，1h)，4.33-4.21(m，2H)，3.69-3.62(m，2H)，3.65-3.58(m，1H)，3.07-2.98(m，1H)，1.13(s，9H)，C₁₉H₂₄ClN₇O₄的HRMS(ESI)计算值：450.1660(M+H)⁺，实验值：450.1680。

实施例4

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(3，5-二氟苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.96(s，1H)，7.67(br.t，1H)，7.63(d，1H)，7.48(dd，1H)，7.29(d，1H)，7.04(br.，1H)，7.00-6.94(m，2H)，6.75-6.68(m，1H)，5.79(d，1H)，4.76(dd，1H)，4.29(d，2H)，4.15(d，1H)，3.60-3.52(m，1H)，3.03-2.93(m，1H)，C₂₀H₁₆ClF₂N₇O₃的HRMS(ESI)计算值：476.1049(M+H)⁺，实验值：476.1019。

实施例5

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-环戊基-2-羟乙酰基]-4，5-二氢 -1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δppm 8.99(s，1H)，7.88(br.s.，1H)，7.59(d，1H)，7.46(dd，1H)，7.30-7.25(m，1H)，7.06(s，1H)，4.86(dd，1H)，4.73(dd，1H)，4.27(d，2H)，3.64(ddd，1H)，3.16(d，1H)，3.03(dd，1H)，2.28-2.17(m，1H)，1.71-1.60(m，3H)，1.56-1.40(m，5H).

实施例6

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2，4-二氟苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CD₃CN)：δ9.23(s，1H)，7.73(d，1H)，7.57(dd，1H)，7.48(d，1H)，7.40(q，1H)，7.33(bt，1H)，6.93-7.01(m，3H)，5.89(d，1H)，4.68(dd，1H)，4.17-4.31(m，3H)，3.12(dd，1H)，2.95(dd，1H).C₂₀H₁₇ClF₂N₇O₃的HRMS(ESI)计算值：476.1049(M+H)⁺，实验值：476.1042。

实施例7

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-2-(3-甲基苯基)乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.00(s，1H)，7.83(t，1H)，7.62(d，1H)，7.46(dd，1H)，7.27-7.16(m，4H)，7.11-7.07(m，1H)，6.95(s，1H)，5.77(s，1H)，4.74(dd，1H)，4.28(d，2H)，4.02(br.，1H)，3.49(dd，1H)，2.91(m，1H)，2.32(s，3H)，C₂₁H₂₀ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：454.1394(M+H)⁺，实验值：454.1407。

实施例8

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-5-甲基己酰基]-4，5-二氢 -1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.01(s，1H)，7.86(br.t，1H)，7.60(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.29(d，1H)，7.07(s，1H)，4.87(dd，1H)，4.74(br.t，1H)，4.28(d，2H)，3.61(dd，1H)，3.20(d，1H)，3.06(dd，1H)，1.78-1.69(m，1H)，1.61-1.50(m，2H)，1.40-1.29(m，2H)，0.89(t，6H)，C₁₉H₂₄ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：434.1707(M+H)⁺，实验值：434.1703。

实施例9

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2-氟苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢 -1H-吡唑-5-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.00(s，1H)，7.81(br.t，1H)，7.62(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.35(ddd，1H)，7.31-7.27(m，2H)，7.10(dd，1H)，7.02(dd，1H)，6.91(br.s，1H)，5.96(d，1H)，4.81(dd，1H)，4.29(d，2H)，4.08(d，1H)，3.53(dddd，1H)，2.98-2.87(m，1H)，C₂₀H₁₈ClFN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：458.1143(M+H)⁺，实验值：458.1136。

实施例10

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟己酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑 -5-甲酰胺

¹H NMR(600MHz，CD₃CN)：δ9.19(s，1H)，7.69(d，1H)，7.54(dd，1H)，7.44(d，1H)，7.30(br.t，1H)，7.04(br.t，1H)，4.68-4.63(m，2H)，4.25-4.13(m，2H)，3.29(d，1H)，3.20-3.14(dd，1H)，2.99-2.94(dd，1H)，1.76-1.69(m，1H)，1.55-1.48(m，1H)，1.42-1.28(m，4H)，0.91(t，3H)，C₁₈H₂₂ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：420.1551(M+H)⁺，实验值：420.1556。

实施例11

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-3-(1-甲基环丙基)丙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.03(s，1H)，7.90(bt，1H)，7.61(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.29(d，1H)，7.06(s，1H)，4.97(ddd，1H)，4.84(dd，1H)，4.28(d，2H)，3.61(ddd，1H)，3.17(d，1H)，3.04(ddd，1H)，1.70(dd，1H)，1.47(dd，1H)，1.16(s，3H)，0.20-0.42(m，4H).C₁₉H₂₃ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：432.1551(M+H)⁺，实验值：432.1541。

实施例12

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(4-羟基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)羰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ8.95(s，1H)，7.64(bt，1H)，7.57(d，1H)，7.45(dd，1H)，7.26(d，1H)，7.13(ddd，1H)，6.82-6.88(m，2H)，6.74-6.78(m，2H)，4.96(bs，1H)，4.86(dd，1H)，4.18-4.38(m，4H)，3.36(ddd，1H)，2.78-2.93(m，2H)，1.99(dt，1H).

实施例13

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-2-苯基乙酰基]-4，5-二氢 -1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)：δ9.56(s，1H)，7.75(d，1H)，7.57(dd，1H)，7.50(d，1H)，7.43-7.47(m，2H)，7.23-7.33(m，3H)，7.00(bs，1H)，5.88(s，1H)，4.59(dd，1H)，4.27(q，2H)，3.13(ddd，1H)，2.86(ddd，1H).C₂₀H₁₉ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：440.1238(M+H)⁺，实验值：440.1246。

实施例14

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-4，4-二甲基戊酰基]-4，5- 二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.05(s，1H)，7.89(bt，1H)，7.61(d，1H)，7.46(dd，1H)，7.28(d，1H)，7.05(s，1H)，4.89(ddd，1H)，4.83(dd，1H)，4.27(d，2H)，3.55(ddd，1H)，3.16(d，1H)，3.06(ddd，1H)，1.53(dd，1H)，1.40(dd，1H)，1.01(s，9H).C₁₉H₂₅ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：434.1707(M+H)⁺，实验值：434.1702。

实施例15

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-环己基-2-羟乙酰基]-4，5-二氢 -1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.08(s，1H)，7.92(bt，1H)，7.61(d，1H)，7.44(dd，1H)，7.28(d，1H)，7.05(s，1H)，4.85(dd，1H)，4.58(d，1H)，4.26(d，2H)，3.50(ddd，1H)，3.09(ddd，1H)，2.80(bs，1H)，1.43-1.76(m，6H)，1.06-1.36(m，5H).C₂₀H₂₅ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：446.1707(M+H)⁺，实验值：446.1739。

实施例16

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-3-甲氧基-3-甲基丁酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：非对映异构体的约3∶2混合物，主要异构体的数据：δ9.02(s，1H)，7.91(bt，1H)，7.53(d，1H)，7.40(dd，1H)，7.25(d，1H)，7.01(s，1H)，4.75-4.93(m，2H)，4.10-4.25(m，2H)，3.17(s，3H)，2.95-3.60(m，3H)，1.19(s，3H)，1.17(s，3H).

实施例17

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-3-苯基丙酰基]-4，5-二氢 -1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)：δ9.54(s，1H)，7.73(s，1H)，7.55(d，1H)，7.48(d，1H)，7.15-28(m，5H)，7.03(s，1H)，5.05(bs，1H)，4.58-4.65(m，1H)，4.25(q，2H)，3.13-3.23(m，1H)，3.01-3.08(m，1H)，2.82-2.93(m，2H).C₂₁H₂₁ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：454.1394(M+H)⁺，实验值：454.1381。

实施例18

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-(4-甲基-D-亮氨酰基)-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)：δ9.54(s，1H)，8.90(bs，1H)，7.76(s，1H)，7.58(d，1H)，7.51(d，1H)，7.23(s，1H)，4.75(bt，1H)，4.67(dd，1H)，4.35(d，1H)，4.22(d，1H)，3.35(dd，1H)，2.96(dd，1H)，2.02(dd，1H)，1.66(dd，1H)，0.99(s，9H).C₁₉H₂₆ClN₈O₂的HRMS(ESI)计算值：433.1867(M+H)⁺，实验值：433.1877。

实施例19

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-3-环丙基-2-羟丙酰基]-4，5-二氢 -1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)：δ9.55(s，1H)，7.74(s，1H)，7.56(d，1H)，7.49(d.1H)，7.05(s，1H)，4.90(bs，1H)，4.65(dd，1H)，4.25(q，2H)，3.23(dd，1H)，2.90(dd，1H)，1.68-1.75(m，1H)，1.40-1.48(m，1H)，0.85-0.94(m，1H)，0.35-0.50(m，2H)，0.00-0.10(m，2H).C₁₈H₂₁ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：418.1394(M+H)⁺，实验值：418.1386。

实施例20

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-3，3-二甲基丁酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.01(s，1H)，7.91(bt，1H)，7.58(d，1H)，7.43(dd，1H)，7.25(d，1H)，7.03(s，1H)，4.87(dd，1H)，4.63(s，1H)，4.20-4.30(m，2H)，3.56(dd，1H)，3.15(bs，1H)，2.99(dd，1H)，0.93(s，9H).C₁₈H₂₃ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：420.1551(M+H)⁺，实验值：420.1534。

实施例21

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(3-氰基苯基)(羟基)乙酰基]-4，5-二氢 -1H-吡唑-5-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(400MHz，CD₃CN)：δ9.19(s，1H)，7.64-7.78(m，4H)，7.43-7.57(m，3H)，7.27(bt，1H)，7.00(s，1H)，5.80(d，1H)，4.60(dd，1H)，4.30(d，1H)，4.25(dd，1H)，4.16(dd，1H)，3.10(ddd，1H)，2.92(ddd，1H).C₂₁H₁₈ClN₈O₃的HRMS(ESI)计算值：465.1190(M+H)⁺，实验值：465.1185。

实施例22

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2S)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CD₃CN)：δ9.19(s，1H)，7.67(d，1H)，7.57(dd，1H)，7.47(d，1H)，7.40-7.45(m，2H)，7.21(bt，1H)，7.01-7.09(m，3H)，5.69(d，1H)，4.74(dd，1H)，4.25(dd，1H)，4.14(d，1H)，4.12(dd，1H)，3.19(ddd，1H)，2.95(ddd，1H).C₂₀H₁₈ClFN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：458.1143(M+H)⁺，实验值：458.1135。

实施例23

乙酸[(1R)-2-[(5S)-5-[[5-氯-2-(四唑-1-基)苯基]甲基氨基甲酰基]-4，5-二氢吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代-乙基]酯

向在二氯甲烷(10mL)中的(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺(实施例1)(483mg，1.05mmol)加入吡啶(2mL)和乙酸酐(100μL，1.06mmol)。将所得混合物搅拌4h。加入另一份乙酸酐(600μL，6.34mmol)和DMAP(23mg，0.19mmol)并将所得混合物搅拌另外15h。通过蒸发除去溶剂，通过HPLC(在含5％MeCN的0.1M NH₄OAc水缓冲液中的0-100％梯度MeCN，C8柱：50x300mm)将残余物纯化。将相关流分收集、合并并冻干，得到固体材料状的标题化合物(476mg，90％)。

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.07(s，1H)，7.60(d，1H)，7.53(m，2H)，7.46(dd，1H)，7.43(bt，1H)，7.28(d，1H)，7.06(m，2H)，7.02(bt，1H)，6.53(s，1H)，4.81(dd，1H)，4.27(dd，1H)，4.18(dd，1H)，3.30(ddd，1H)，3.11(ddd，1H)，2.13(s，3H)，C₂₂H₁₉ClFN₇O₄的HRMS(ESI)计算值：500.1249(M+H)⁺，实验值：500.1267。

以类似于上述实施例23的方式采用合适的原料制备实施例24-27。

实施例24

3-甲基丁酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯

¹H NMR(500MHz，(CH₃)₂SO^*)：δ9.79(s，1H)，8.76(t，1H)，7.66(1H)，7.60(m，2H)，7.45(m，2H)，7.19(t，2H)，7.15(s，1H)，6.59(s，1H)，4.54(dd，1H)，4.20(dd，1H)，4.04(dd，1H)，3.13(dd，1H)，2.73(dd，1H)，2.20(m，1H)，1.92，(m，1H)，0.84(dd，6H)，C₂₅H₂₅ClFN₇O₄(M+H)⁺的HRMS(ESI)计算值：542.1719，实验值：542.1715。

实施例25

丁酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑 -1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯

¹H NMR(500MHz，(CH₃)₂SO^*)：δ9.80(s，1H)，8.49(t，1H)，7.67(1H)，7.60(m，2H)，7.45(m，2H)，7.18(t，2H)，7.15(s，1H)，6.59(s，1H)，4.54(dd，1H)，4.20(dd，1H)，4.05(dd，1H)，3.14(dd，1H)，2.31(m，2H)，1.50，(m，2H)，0.83(t，3H)，C₂₄H₂₃ClFN₇O₄(M+H)⁺的HRMS(ESI)计算值：528.1563，实验值：528.1573。

实施例26

2-甲基丙酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢 -1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯

¹H NMR(500MHz，(CH₃)₂SO^*)：δ9.79(s，1H)，8.47(t，1H)，7.67(1H)，7.60(m，2H)，7.45(m，2H)，7.19(t，2H)，7.15(s，1H)，6.58(s，1H)，4.54(dd，1H)，4.21(dd，1H)，4.05(dd，1H)，3.15(dd，1H)，2.57(m，1H)，1.07(d，3H)，1.03(d，3H)，C₂₄H₂₃ClFN₇O₄(M+H)⁺的HRMS(ESI)计算值：528.1563，实验值：528.1569。

实施例27

戊酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑 -1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯

¹H NMR(500MHz，(CH₃)₂SO^*)：δ9.80(s，1H)，8.49(t，1H)，7.67(1H)，7.60(m，2H)，7.45(m，2H)，7.19(t，2H)，7.15(s，1H)，6.58(s，1H)，4.54(dd，1H)，4.20(dd，1H)，4.05(dd，1H)，3.14(dd，1H)，2.73(dd，1H)，2.33(m，2H)，1.45，(m，2H)，1.24(m，2H)，0.80(t，3H)，

C₂₅H₂₅ClFN₇O₄(M+H)⁺的HRMS(ESI)计算值：542.1719，实验值：542.1719。

实施例28

丙酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H- 吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯

向(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺(实施例1)(276g，603mmol)在2-甲基THF(4.6L)中的悬浮液中加入吡啶(62mL)，接着加入N，N-二甲基吡啶-4-胺(7.36g，723mmol)和丙酸肝(93mL，723mmol)。2h后，该悬浮液变得稠一点，3h后，该悬浮液非常稠。加入另一份2-甲基THF(2L)并将另外的叶轮装到搅拌棒上。将所得悬浮液在30℃(夹套温度)搅拌过夜。接着将温度降至15℃，30分钟后，通过P3烧结的玻璃漏斗过滤反应混合物，滤饼用乙酸乙酯(2x250mL)洗涤。将白色产物在40℃真空干燥，得到固体材料状的标题化合物(238g，77％)。向母液(7.6L)中加入水(2L)并将各相分离。缓慢蒸发有机相直到观察到稠的沉淀物。将浆液过滤掉，干燥后得到第二批标题化合物(37g，12％)。

¹H NMR(500MHz，(CDCl₃)：δ9.05(s，1H)，7.55(m，3H)，7.43(m，2H)，7.25(s，1H)，7.04(m，3H)，6.52(s，1H)，4.79(dd，1H)，4.22(dd，2H)，3.25(ddd，1H)，3.09(ddd，1H)，2.41(m，2H)，1.03(t，3H).

C₂₃H₂₁ClFN₇O₄(M+H)⁺的HRMS(ESI)计算值：514.1406，实验值：514.1405。

实施例29

苯甲酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢 -1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯

向(3S)-N-[[5-氯-2-(四唑-1-基)苯基]甲基]-2-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟基-乙酰基]-3，4-二氢吡唑-3-甲酰胺(0.48g，1.05mmol)、吡啶(6mL，74mmol)和DMAP(0.023g，0.188mmol)在CH₂Cl₂(8mL)中的-10℃混合物中加入苯甲酰氯(135μL，1.15mmol)。让反应混合物达到室温并搅拌5h。加入另一份苯甲酰氯(400μL，3.4mmol)。将所得混合物搅拌60h。LCMS分析显示了仅微量产物。通过蒸发除去溶剂并先后加入吡啶(5mL，62mmol)和另一份苯甲酰氯(400μL，3.4mmol)。将反应混合物加热至70℃过夜。LCMS分析显示约20％的原料转化。将溶剂蒸发掉，通过HPLC(在含5％MeCN的0.1M NH₄OAc缓冲液中的0-100％梯度MeCN)将残余物纯化。将相关流分合并并冻干，得到标题化合物(77mg，13％)和289mg未反应原料。

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.07(s，1H)，7.86(d，2H)，7.64(m，2H)，7.59(m，1H)，7.55(d，1H)，7.50(bt，1H)，7.42(t，2H)，7.36(dd，1H)，7.23(d，1H)，7.12-7.05(m，3H)，6.77(s，1H)，4.81(dd，1H)，4.28(ddd，2H)，3.27(ddd，1H)，3.13(ddd，1H)，C₂₇H₂₁ClFN₇O₄的HRMS(ESI)计算值：562.1406(M+H)⁺，实验值：562.1390。

实施例30

3-(2，4-二甲基-6-(丙酰氧基)苯基)-3-甲基丁酸(R)-2-((S)-5-(5-氯-2-(1H-四唑 -1-基)苄基氨基甲酰基)-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯

向3-(2，4-二甲基-6-(丙酰氧基)苯基)-3-甲基丁酸(160mg，0.57mmol)和(S)-N-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基)-1-((R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基)-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺(263mg，0.57mmol)在DCM(3mL)和DMF(3mL)中的溶液中加入EDC(165mg，0.86mmol)和DMAP(7mg，0.06mmol)。将所得透明无色溶液在室温搅拌48h。该混合物用DCM稀释并用水、1M HCl和饱和NaHCO₃洗涤。将有机相干燥、过滤、蒸发并通过快速层析法(4∶1-2∶1的DCM/EtOAc梯度)纯化，得到半固体状的3-(2，4-二甲基-6-(丙酰氧基)苯基)-3-甲基丁酸(R)-2-((S)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基氨基甲酰基)-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯(380mg，92％)。

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.08(s，1H)，7.33-7.48(m，5H)，7.22-7.26(m，1H)，6.95-7.03(m，3H)，6.70(s，1H)，6.48(s，1H)，6.40(s，1H)，4.77(dd，1H)，4.03(dd，1H)，3.96(dd，1H)，3.21(ddd，1H)，2.90-3.10(m，3H)，2.52(q，2H)，2.48(s，3H)，2.11(s，3H)，1.54(s，3H)，1.46(s，3H)，1.19(t，3H).C₃₆H₃₇ClFN₇O₆的HRMS(ESI)计算值：718.17(M+H)+，实验值：718.2556(M+H)+，实验值：718.2578。

实施例31

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺

(i)(2S)-4-溴-2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}氨基)丁酸乙酯

0℃下向(R)-4-溴-2-羟基-丁酸乙酯(890mg，4.217mmol)在DCM(20mL)中的溶液中逐滴加入三氟甲磺酸酐(1.309g，4.639mmol)。5min后，加入2，6-二甲基吡啶(542mg，5.060mmol)并让所得混合物达到室温。30min后，加入O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)羟胺(932mg，6.326mmol)和2，6-二甲基吡啶(1.808g，16.87mmol)并将反应混合物在室温搅拌48h。将溶剂蒸发，通过快速层析法(庚烷/EtOAc 20∶1，接着9∶1)将残余物纯化，得到油状的(S)-4-溴-2-N-(叔丁基二甲基甲硅烷基)羟氨基丁酸乙酯(870mg，61％)。

(ii)(3S)-异噁唑烷-3-甲酸乙酯

向(2S)-4-溴-2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}氨基)丁酸乙酯(870mg，2.556mmol)在THF(25mL)中的溶液中加入四丁基氟化铵三水合物(887mg，2.812mmol)并将所得混合物在室温搅拌1h。蒸发溶剂，通过快速层析法(DCM/EtOAc 9∶1，接着4∶1)将残余物纯化，得到油状的(3S)-异噁唑烷-3-甲酸乙酯(340mg，91％)。

(iii)(3S)-异噁唑烷-2，3-二甲酸2-叔丁基3-乙酯

向(3S)-异噁唑烷-3-甲酸乙酯(1.452g，10.00mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入boc-酸酐(2.62g，12.00mmol)、三乙胺(2.02g，20.00mmol)和二甲氨基吡啶(61mg，0.500mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜，接着用TBME稀释并先后用1M HCl和饱合NaHCO₃(aq)洗涤。将有机相干燥、过滤并蒸发，通过快速层析法(庚烷/EtOAc 4∶1，接着2∶1)将残余物纯化，得到油状的(3S)-异噁唑烷-2，3-二甲酸2-叔丁基3-乙酯(2.20g，90％)。

(iv)(3S)-3-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}异噁唑烷-2-甲酸叔丁酯

向(3S)-异噁唑烷-2，3-二甲酸2-叔丁基3-乙酯(245mg，1.00mmol)在乙腈(2.5mL)和水(1mL)中的溶液中加入氢氧化锂(在水中的1M溶液，1.00mL，1.00mmol)并将所得混合物在室温搅拌30min。向该溶液中加入5-氯-2-四唑-1-基-苄胺盐酸盐(295mg，1.20mmol，如J.Med.Chem.2004，47，2995中所述制备的)、羟基苯并***(135mg，1.00mmol，20％水溶液，约0.65mL)、EDC(288mg，1.50mmol)和NMM(202mg，2.00mmol)。将所得混合物在室温搅拌过夜，接着用DCM稀释并用1M HCl和饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将有机相干燥、过滤、蒸发并通过快速层析法(4∶1-1∶1的DCM/EtOAc梯度)纯化，得到油状的(3S)-3-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}异噁唑烷-2-甲酸叔丁酯(357mg，87％)。

(v)(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]异噁唑烷-3-甲酰胺盐酸盐

向(3S)-3-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}异噁唑烷-2-甲酸叔丁酯(357mg，0.873mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中加入浓HCl(aq.，5mL)并将所得混合物在室温搅拌1h，接着蒸发至干，得到固体状的粗(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]异噁唑烷-3-甲酰胺盐酸盐，其原样用于下一步骤而不经进一步纯化。

(vi)(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺

向含有二氯甲烷(150mL)和吡啶(11mL)的溶液先后加入(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]异噁唑烷-3-甲酰胺盐酸盐(8.40g，27.21mmol)和(R)-2-(4-氟苯基)-2-(三甲基甲硅烷基氧基)乙酰氯(7.80g，29.93mmol，参见制备2)在二氯甲烷(～0.3M，100mL)中的粗溶液。将所得溶液在室温搅拌12h。加入MeOH(10mL)并将反应混合物搅拌另外1h。混合物用二氯甲烷(200mL)稀释，用1M HCl(3x200mL)、饱和NaHCO₃(100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥、过滤并蒸发，得到粗产物。加入CH₂Cl₂/EtOAc(50mL，1∶1)并将所得混合物加热回流。获得溶液。接着逐滴加入甲苯/EtOAc(1∶1，50mL)，得到一些沉淀物。12h后，将沉淀物(6.1g)过滤出来。¹H NMR分析显示为纯产物。蒸发母液。向残余物中加入CH₂Cl₂/EtOAc(30mL，1∶1)并将混合物加热回流。获得溶液。逐滴加入甲苯/EtOAc(1∶1，30mL)。另外12h后，可将另外500mg沉淀物过滤出来(根据¹HNMR，该材料为纯的)。共得到(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺(6.6g，53％)。

最强力异构体的¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ2.25-2.33(1H)，2.58-2.67(1H)，2.75-2.82(1H)，3.84-3.89(1H)，4.11-4.15(1H)，4.24-4.34(2H)，4.60-4.65(1H)，5.47-5.51(1H)，7.01-7.06(2H)，7.26-7.30(1H)，7.31-7.36(3H)，7.45-7.48(1H)，7.60-7.62(1H)，8.97(1H).C₂₀H₁₈ClFN₆O₄的HRMS(ES+)计算值：461.1140(M+H)⁺，实验值：461.1122。

以类似于上述实施例31的方式采用合适的原料制备实施例32-48。

实施例32

(3S)-2-(O-叔丁基-D-丝氨酰)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]异噁唑烷-3-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ8.99(s，1H)，8.00(br.s，1H)，7.64(d，1H)，7.44(dd，1H)，7.26(m，1H)，6.99(br.t，1H)，5.41(br.s，1H)，4.44(m，1H)，4.27-4.02(m，4H)，3.89(dd，1H)，3.63(dd，1H)，3.43(dd，1H)，2.70(m，1H)，2.50(m，1H)，1.17(s，9H)，C₁₉H₂₇ClN₇O₄的HRMS(ESI)计算值：452.1813(M+H)⁺，实验值：452.1821。

实施例33

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2，4-二氟苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ2.32-2.41(1H)，2.62-2.72(1H)，2.85-2.93(1H)，3.89-3.96(1H)，4.20(1H)，4.26-4.37(2H)，4.66-4.73(1H)，5.74(1H)，6.81-6.95(2H)，7.26-7.34(2H)，7.37-7.44(1H)，7.46-7.52(1H)，7.61-7.66(1H)，9.01(1H).C₂₀H₁₇ClF₂N₆O₄的HRMS(ES+)计算值：479.1046(M+H)⁺，实验值：479.1059。

实施例34

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2，3-二氟苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.97(s，1H)，7.62(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.33(br.t，1H)，7.29(d，1H)，7.18-7.03(m，3H)，5.78(s，1H)，4.67(dd，1H)，4.36-4.24(m，2H)，4.16(br.，1H)，3.94-3.88(m，1H)，2.91-2.83(m，1H)，2.73-2.62(m，1H)，2.40-2.30(m，1H)，C₂₀H₁₇ClF₂N₆O₄的HRMS(ESI)计算值：479.1046(M+H)⁺，实验值：479.1053。

实施例35

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(3，5-二氟苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.96(s，1H)，7.62(d，1H)，7.48(dd，1H)，7.31(br.t，1H)，7.28(d，1H)，6.96-6.89(m，2H)，6.81-6.73(m，1H)，5.49(d，1H)，4.64(dd，1H)，4.36-4.25(m，2H)，4.21(d，1H)，4.03-3.97(m，1H)，3.14-3.05(m，1H)，2.76-2.66(m，1H)，2.42-2.32(m，1H)，C₂₀H₁₇ClF₂N₆O₄的HRMS(ESI)计算值：479.1046(M+H)⁺，实验值：479.1030。

实施例36

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2-氟苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷-3- 甲酰胺

¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ2.27-2.35(1H)，2.60-2.68(1H)，2.70-2.77(1H)，3.81-3.87(1H)，4.24-4.34(2H)，4.65-4.70(1H)，5.76(1H)，7.04-7.10(1H)，7.11-7.16(1H)，7.26-7.34(4H)，7.45-7.50(1H)，7.59-7.62(1H)，8.96(1H).C₂₀H₁₈ClFN₆O₄的HRMS(ES+)计算值：461.1140(M+H)⁺，实验值：461.1151。

实施例37

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[羟基(3-甲基苯基)乙酰基]异噁唑烷 -3-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.02(s，1H)，7.60(d，1H)，7.47(br.t，1H)，7.44(dd，1H)，7.24-7.09(m，5H)，5.45(d，1H)，4.64(dd，1H)，4.34-4.21(m，2H)，4.14(d，1H)，3.85-3.78(m，1H)，2.76-2.67(m，1H)，2.62-2.51(m，1H)，2.32(s，3H)，2.32-2.22(m，1H)，C₂₁H₂₁ClN₆O₄的HRMS(ESI)计算值：457.1391(M+H)⁺，实验值：457.1390。

实施例38

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟己酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺

¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.86-0.92(3H)，1.23-1.54(5H)，1.58-1.66(1H)，2.47-2.55(1H)，2.77-2.84(1H)，3.22(1H)，3.85-3.91(1H)，4.16-4.22(1H)，4.22-4.31(2H)，4.47-4.52(1H)，4.69-4.74(1H)，7.24-7.26(1H)，7.42-7.45(1H)，7.50-7.56(1H)，7.57-7.60(1H)，9.00(1H).C₁₈H₂₃ClN₆O₄的HRMS(ES+)计算值：423.1548(M+H)⁺，实验值：423.1535。

实施例39

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-5-甲基己酰基]异噁唑烷 -3-甲酰胺

¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.84-0.92(6H)，1.24-1.40(2H)，1.47-1.69(3H)，2.46-2.55(1H)，2.81-2.89(1H)，3.11(1H)，3.86-3.93(1H)，4.17-4.33(3H)，4.48-4.53(1H)，4.69-4.75(1H)，7.26-7.28(1H)，7.42-7.48(2H)，7.57-7.60(1H)，8.96(1H).C₁₉H₂₅ClN₆O₄的HRMS(ES+)计算值：437.1704(M+H)⁺，实验值：437.1715。

实施例40

(3S)-2-[(2R)-3-叔丁氧基-2-羟丙酰基]-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]异噁唑烷-3-甲酰胺

¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.14(9H)，2.45-2.54(1H)，2.74-2.83(1H)，3.51-3-57(1H)，3.64-3.69(1H)，3.92-3.99(1H)，4.13-4.19(1H)，4.21-4.31(2H)，4.65-4.70(1H)，4.73-4.79(1H)，7.24-7.28(1H)，7.42-7.46(1H)，7.48-7.54(1H)，7.56-7.60(1H)，9.00(1H).C₁₉H₂₅ClN₆O₅的HRMS(ES+)计算值：453.1653(M+H)⁺，实验值：423.1571。

实施例41

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-环戊基-2-羟乙酰基]异噁唑烷 -3-甲酰胺

¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.40-1.72(8H)，2.12-2.20(1H)，2.46-2.55(1H)，2.80-2.90(1H)，3.87-3.94(1H)，4.16-4.31(3H)，4.49-4.52(1H)，4.70-4.75(1H)，7.26-7.28(1H)，7.43-7.47(1H)，7.52-7.60(2H)，8.99(1H).C₁₉H₂₃ClN₆O₄的HRMS(ES+)计算值：435.1548(M+H)⁺，实验值：435.1559。

实施例42

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-环己基-2-羟乙酰基]异噁唑烷 -3-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ8.99(s，1H)，7.59(d，1H)，7.57(br.t，1H)，7.45(dd，1H)，7.27(m，1H)，4.73(dd，1H)，4.37(d，1H)，4.27(m，2H)，4.20(m，1H)，3.89(q，1H)，2.85(m，1H)，2.51(m，1H)，1.82-1.70(m，2H)，1.69-1.53(m，3H)，1.52-1.42(m，1H)，1.41-1.30(m，1H)，1.29-1.07(m，4H).C₂₀H₂₆ClN₆O₄的HRMS(ESI)计算值：449.1704(M+H)⁺，实验值：449.1725。

实施例43

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3-(1-甲基环丙基)丙酰基] 异噁唑烷-3-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：9.02(s，1H)，7.60(d，1H)，7.57(bt，1H)，7.44(dd，1H)，7.26(d，1H)，4.66-4.72(m，2H)，4.23-4.33(m，2H)，4.18(ddd，1H)，3.92(q，1H)，3.17(d，1H)，2.77-2.85(m，1H)，2.46-2.54(m，1H)，1.60(dd，1H)，1.38(dd，1H)，1.13(s，3H)，0.21-0.45(m，4H).C₁₉H₂₄ClN₆O₄的HRMS(ESI)计算值：435.1548(M+H)⁺，实验值：435.1535。

实施例44

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-2-苯基乙酰基]异噁唑烷 -3-甲酰胺

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.02(s，1H)，7.61(d，1H)，7.47(bt，1H)，7.44(dd，1H)，7.12-7.35(m，6H)，5.49(d，1H)，4.64(dd，1H)，4.22-4.33(m，2H)，4.20(d，1H)，3.81(ddd，1H)，2.64-2.72(m，1H)，2.52-2.62(m，1H)，2.22-2.31(m，1H).C₂₀H₂₀ClN₆O₄的HRMS(ESI)计算值：443.1234(M+H)⁺，实验值：443.1234。

实施例45

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3，3-二甲基丁酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.04(s，1H)，7.73(bt，1H)，7.58(d，1H)，7.42(dd，1H)，7.25(d，1H)，4.75(dd，1H)，4.22-4.30(m，3H)，4.11-4.17(ddd，1H)，3.97(q，1H)，3.12(bs，1H)，2.77-2.88(m，1H)，2.40-2.50(m，1H)，0.94(s，9H).C₁₈H₂₄ClN₆O₄的HRMS(ESI)计算值：423.1548(M+H)⁺，实验值：423.1552。

实施例46

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-4，4-二甲基戊酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ8.97(s，1H)，7.59(d，1H)，7.44-7.50(m，2H)，7.27(d，1H)，4.69(dd，1H)，4.63(dd，1H)，4.27(d，2H)，4.18(ddd，1H)，3.93(q，1H)，2.80-2.88(m，1H)，2.47-2.55(m，1H)，1.40(d，2H)，1.01(s，9H).C₁₉H₂₆ClN₆O₄的HRMS(ESI)计算值：437.1704(M+H)⁺，实验值：437.1700。

实施例47

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3-苯基丙酰基]异噁唑烷 -3-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ8.97(s，1H)，7.59(d，1H)，7.48(dd，1H)，7.45(bt，1H)，7.20-7.35(m，6H)，4.85(ddd，1H)，4.66(dd，1H)，4.24-4.34(m，2H)，4.06(ddd，1H)，3.40(q，1H)，3.23(d，1H)，3.02(dd，1H)，2.97(dd，1H)，2.76-2.84(m，1H)，2.32-2.40(m，1H).C₂₁H₂₂ClN₆O₄的HRMS(ESI)计算值：457.1391(M+H)⁺，实验值：457.1394。

实施例48

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(3-氰基苯基)(羟基)乙酰基]异噁唑烷 -3-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.95(s，1H)，7.60-7.70(m，4H)，7.45-7.52(m，2H)，7.25-7.31(m，2H)，5.54(s，1H)，4.63(dd，1H)，4.31(d，2H)，3.97(ddd，1H)，2.98(ddd，1H)，2.70(dddd，1H)，2.34(dddd，1H).C₂₁H₁₉ClN₇O₄的HRMS(ESI)计算值：468.1187(M+H)⁺，实验值：468.1223。

实施例49

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-2-苯基乙酰基]吡唑烷-3- 甲酰胺

(i)2-[(1S)-3-溴-1-(乙氧基羰基)丙基]肼甲酸叔丁酯

通过注射器向(2R)-4-溴-2-羟基丁酸乙酯(1.1g，5.2mmol，按照J.Med.Chem.2003，46，2057或J.Am.Chem.Soc.，2004，126，12432和Tetrahedron Letters 1997，38，4935-4938中所述制备)在无水DCM(20mL)中的0℃溶液中加入Tf₂O(1.62g，5.7mmol)。5min后，加入2，6-卢剔啶(lutidine)(0.67g，6.2mmol)。另外5min后加入在DCM(5mL)中的肼基甲酸叔丁酯(t-butylcarbazate)(1.38g，10.4mmol)。让所得溶液达到室温并搅拌过夜。蒸发溶剂并采用快速层析法(庚烷/EtOAc 4∶1、3∶1、2∶1)将残余物纯化，得到稍微不纯的油状的2-[(1S)-3-溴-1-(乙氧基羰基)丙基]肼甲酸叔丁酯(1.65g，97％)。

(ii)(3S)-吡唑烷-1，3-二甲酸1-叔丁基3-乙酯

向稍微不纯的2-[(1S)-3-溴-1-(乙氧基羰基)丙基]肼甲酸叔丁酯(1.57g，4.83mmol)在无水THF(50mL)中的0℃溶液中加入LiHMDS(在THF中的1M溶液，4.83mmol，4.83mL)。让所得溶液达到室温，接着搅拌2h。通过加入饱和NH₄Cl(aq)淬灭反应并用TBME稀释。将各相分离，将有机相干燥、过滤并蒸发。采用快速层析法(DCM/EtOAc 4∶1，1∶1)将残余物纯化，得到油状的纯(3S)-吡唑烷-1，3-二甲酸1-叔丁基3-乙酯(610mg，52％)。

1HNMR(CDCl₃)500MHz：δ1.30(t，3H)，1.51(s，9H)，2.13(m，1H)，2.41(m，1H)，3.48(m，1H)，3.65(m，1H)，3.88(t，1H)，4.24(m，2H)，4.55(bs，1H).

(iii)(3S)-3-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}吡唑烷-1-甲酸叔丁酯

向(S)-吡唑烷-1，3-二甲酸1-叔丁基酯3-乙基醚(1.920g，7.86mmol)在THF(60mL)中的溶液中加入氢氧化锂溶液(188mg，在20mL水中的7.86mmol溶液)并将混合物在室温搅拌1h。蒸发溶剂并将固体残余物悬浮于DCM(70mL)中。向该悬浮液中加入5-氯-2-四唑-1-基-苄基胺盐酸盐(2.13g，8.645mmol，如J.Med.Chem.2004，47，2995中所述制备)、羟基苯并***(1.17g，8.645mmol，在10mL DMF中的溶液)，接着加入EDC(2.26g，11.79mmol)和三乙胺(0.795mg，7.895mmol)。将所得混合物在室温搅拌3h，然后用EtOAc稀释并用1M HCl、饱和NaHCO₃(aq)和盐水洗涤。将有机相干燥、过滤、蒸发并采用快速层析法(EtOAc，接着20∶1-10∶1梯度的EtOAc/MeOH)纯化，得到油状的(3S)-3-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}吡唑烷-1-甲酸叔丁酯(2.05g，64％)。

(iv)(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-2-苯基乙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺

向(3S)-3-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}吡唑烷-1-甲酸叔丁酯(82mg，0.200mmol)在DCM(2mL)和吡啶(0.080mL)中的溶液中加入(R)-2-苯基-2-(三甲基甲硅烷基氧基)乙酰氯溶液(在DCM中的约0.3M，1mL，0.3mmol，参见制备2)。将所得溶液在室温搅拌过夜。加入TFA(约1mL)并将所得混合物再搅拌一小时，然后蒸发。采用快速层析法(2∶1-1∶1梯度的DCM/MeCN)将残余物纯化，得到油状的(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-2-苯基乙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺(52mg，59％)。

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.04(s，1H)，7.69(bt，1H)，7.61(d，1H)，7.45(dd，1H)，7.35-7.38(m，2H)，7.25-7.33(m，4H)，5.61(d，1H)，4.51(d，1H)，4.42(t，1H)，4.35(dd，1H)，4.18-4.26(m，2H)，3.01-3.08(m，1H)，2.25-2.35(m，1H)，2.14-2.17(m，2H).C₂₀H₂₁ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：442.1394(M+H)⁺，实验值：442.1418。

以类似于上述实施例49的方式采用合适的原料制备实施例50-57。

实施例50

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2-氟苯基)(羟基)乙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.04(s，1H)，7.65-7.58(m，2H)，7.45(dd，1H)，7.30-7.18(m，3H)，7.07(t，1H)，7.01(dd，1H)，5.78(s，1H)，4.47(dd，1H)，4.36(dd，1H)，4.22(dd，1H)，4.14(br.d，1H)，2.96(br.dd，1H)，2.31(m，1H)，2.13(m，1H)，1.96-1.81(m，1H).C₂₀H₂₀ClFN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：460.1300(M+H)⁺，实验值：460.1314。

实施例51

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2，4-二氟苯基)(羟基)乙酰基]吡唑烷 -3-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：.9.03(s，1H)，7.62(d，1H)，7.55(bt，1H)，7.48(dd，1H)，7.30(d，1H)，7.22(ddd，1H)，6.76-6.86(m，2H)，5.75(s，1H)，4.48(t，1H)，4.39(dd，1H)，4.30(bs，1H)，4.23(dd，1H)，4.16(dd，1H)，3.02(ddd，1H)，2.32-2.40(m，1H)，2.13-2.20(m，1H)，1.87-1.97(m，1H).C₂₀H₁₉ClF₂N₇O₃的HRMS(ESI)计算值：478.1206(M+H)⁺，实验值：478.1201。

实施例52

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-(4-氟苯基)-2-羟乙酰基]吡唑烷-3-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.00(s，1H)，7.62(d，1H)，7.55(bt，1H)，7.48(dd，1H)，7.35-7.40(m，2H)，7.30(d，1H)，6.96-7.03(m，2H)，5.62(d，1H)，4.37-4.45(m，2H)，4.21(dd，1H)，3.08(dd，1H)，2.30-2.44(m，1H)，2.05-2.20(m，2H).C₂₀H₂₀ClFN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：460.1300(M+H)⁺，实验值：460.1302。

实施例53

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(4-羟基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)羰基] 吡唑烷-3-甲酰胺

最强力异构体的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：9.05(s，1H)，7.69(d，1H)，7.45-7.55(m，2H)，7.30(d，1H)，7.10-7.17(m，1H)，6.67-6.85(m，3H)，5.12(bs，1H)，4.56(dd，1H)，4.15-4.45(m，4H)，3.35-3.42(m，1H)，3.12-3.22(m，1H)，2.60-2.80(m，2H)，2.20-2.40(m，2H)，1.94(dt，1H).C₂₂H₂₃ClN₇O₄的HRMS(ESI)计算值：484.1500(M+H)⁺，实验值：484.1503。

实施例54

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-4，4-二甲基戊酰基]吡唑烷-3-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.02(s，1H)，7.64(bt，1H)，7.59(d，1H)，7.46(dd，1H)，7.28(d，1H)，4.69(dd，1H)，4.52(t，1H)，4.40(dd，1H)，4.18(dd，1H)，3.33(dd，1H)，2.75(ddd，1H)，2.46-2.56(m，1H)，2.27-2.37(m，1H)，1.46(dd，1H)，1.35(dd，1H)，1.01(s，9H).C₁₉H₂₇ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：436.1864(M+H)⁺，实验值：436.1881。

实施例55

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-环己基-2-羟乙酰基]吡唑烷-3- 甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)：δ9.54(s，1H)，7.72(d，1H)，7.55(dd，1H)，7.48(d，1H)，4.38-4.43(m，2H)，4.25(s，2H)，3.23(ddd，1H)，2.73(ddd，1H)，2.41-2.48(m，1H)，1.95-2.03(m，1H)，1.50-1.80(m，6H)，1.06-1.32(m，5H).C₂₀H₂₇ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：448.1864(M+H)⁺，实验值：448.1859。

实施例56

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3-苯基丙酰基]吡唑烷-3- 甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)：δ9.53(s，1H)，7.70(d，1H)，7.54(dd，1H)，7.47(d，1H)，7.05-7.28(m，5H)，4.93(dd，1H)，4.35(t，1H)，4.24(s，2H)，3.10-3.17(m，1H)，3.01(dd，1H)，2.79(dd，1H)，2.32-2.46(m，2H)，1.90-2.00(m，1H).C₂₁H₂₃ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：456.1551(M+H)⁺，实验值：456.1531。

实施例57

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基-3，3-二甲基丁酰基]吡唑烷-3-甲酰胺

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ9.03(s，1H)，7.68(bt，1H)，7.59(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.28(d，1H)，4.62(dd，1H)，4.46(dd，1H)，4.37(d，1H)，4.28(dd，1H)，4.10-4.25(m，2H)，3.30-3.37(m，1H)，2.78-2.88(m，1H)，2.54-2.64(m，1H)，2.25-2.33(m，1H)，0.97(s，9H).C₁₈H₂₅ClN₇O₃的HRMS(ESI)计算值：422.1707(M+H)⁺，实验值：422.1708。

生物学测试

可采用以下测试方法：

测试A

采用发色自动(Chromogenic Robotic)检验确定凝血酶抑制

采用发色底物法在Plato 3300自动微板处理器(Rosys AG，CH-8634Hombrechtikon，Switzerland)中采用96孔半容积式微量滴定板(Costar，Cambridge，MA，USA；Cat No 3690)对凝血酶抑制剂功效进行测定。用DMSO对测试物质在DMSO的储备溶液(72μL)，0.1-1mmol/L进行系列地1∶3(24+48μL)稀释以获得十个不同浓度，在检验中将其作为样品进行分析。用124μL检验缓冲剂稀释2μL测试样品，加入12μL发色底物(S-2366，Chromogenix，

，Sweden)在检验缓冲剂中的溶液和最后12μLα-凝血酶(人α-凝血酶，Sigma Chemical Co.或Hematologic Technologies)在检验缓冲剂中的溶液并将样品混合。最终检验浓度为：测试物质0.00068-133μmol/L、S-2366 0.30mmol/L、α-凝血酶0.020NIHU/mL。采用在37℃下40分钟培养过程中的线性吸收增量计算与没有抑制剂的空白样品相比测试样品的百分抑制率。从浓度对数对％抑制曲线计算对应于抑制50％凝血酶活性的抑制剂浓度的IC₅₀值。

测试B

活化的部分促凝血酶原激酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time) (APTT)的确定

在合并的正常人柠檬酸钠血浆中采用产自Stago的试剂PTT Automated5确定APTT。将抑制剂加入该血浆(10μL抑制剂溶液加入90μL血浆)中并用APTT试剂培养3分钟，接着加入100μL氯化钙溶液(0.025M)并采用凝血分析仪(Amelung)按照试剂厂家的指导确定APTT。

将凝血时间表示成绝对值(秒)及无抑制剂的APTT(APTT₀)与含抑制剂的APTT(APTT_i)之比值。将后者比值(1-0之内)对抑制剂浓度(转化成对数)作图并按照以下方程拟合成S形剂量-效应曲线：

y＝a/[1+(x/IC₅₀)^s]

其中：a＝最大范围，即1；s＝剂量-效应曲线的斜率；而IC₅₀＝使凝血时间加倍的抑制剂的浓度。在PC上采用软件程序GraFit Version 3设定方程等于：以0开始，定义端点＝1(Erithacus Software，Robin Leatherbarrow，Imperial College of Science，London，UK)进行计算。

将IC₅₀APTT定义为将活化的部分促凝血酶原激酶时间加倍的人血浆中抑制剂浓度。

结果

如上所述在测试A中对实施例化合物进行测试并发现具有小于1μM的IC₅₀值。下表显示了代表性选择的化合物的IC₅₀值：

Claims

1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐：

其中

X为N、O或NH；

当X为O或NH时，Y为CH₂，X和Y通过单键相连，

或者，

当X为N时，Y为CH，X和Y通过双键相连；

R¹为包含2、3或4个选自N、O和S的杂原子的5元杂芳基环，其中至少2个杂原子为N，并且0或1个杂原子为O或S，其中所述5元杂芳基环在任何碳环原子上被0、1或2个独立地选自C_1-6烷基和包含1或2个氮原子的6元杂芳基环的取代基取代，其中所述6元杂芳基环在任何碳环原子上被0、1、2或3个独立地选自C_1-6烷基的取代基取代；

G表示

其中

R³为H、R⁵、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或C_3-6环烷基，其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基和C_3-6环烷基各自独立地被0、1、2、3、4或5个选自卤素的取代基和0、1或2个选自OH、氧代、氰基、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、C_4-7环烯基、环杂烷基、R⁵和R⁶的取代基取代；

R⁵为苯基、

包含1、2或3个独立选自O、S和N的杂原子的5或6元杂芳环，

包含1或2个独立选自O、S和N的杂原子的4、5或6元环杂烷基环，或

包含1或2个独立选自O、S和N的杂原子的苯环稠合的5或6元环杂烷基环，其中所述苯基、所述杂芳环、所述环杂烷基环和所述苯基稠合的环杂烷基环在任何碳环原子上被0、1、2、3、4或5个独立选自COOH、OH、卤素、CF₃、CHF₂、CH₂F、氰基、C_1-6烷基、R⁶和SO₂R⁷的取代基取代；

R⁷为C_1-6烷基；

R⁴为OH、OC(O)R⁷、OC(O)R⁸或NHR⁹；

或

Q为O、CH₂或S(O)_n；

W为C或N；

n独立为0、1或2；

各t独立为0、1或2；

u独立为0或1；

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中G为

3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中

R¹为包含2、3或4个选自N、O和S的杂原子的5元杂芳基环，其中至少2个杂原子为N，并且0或1个杂原子为O或S；

R²为H或卤素；

R³为C_1-6烷基、C_3-6环烷基、包含1、2或3个独立选自O、S和N的杂原子的5或6元杂芳环、包含1或2个独立选自O、S和N的杂原子的4、5或6元环杂烷基环、或R¹²，其中所述C_1-6烷基、所述C_3-6环烷基、所述杂芳环和所述环杂烷基环被0或1个选自NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、C₃环烷基、R⁶或R¹²的取代基取代；

R¹²为苯基，其中所述苯基被0、1或2个选自卤素和R⁶的取代基取代；和

R⁴为OH、OC(O)R⁷、OC(O)R⁸或NH₂。

4.根据权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中

R¹为四唑；

R²为H、Cl或F；

R³为C_3-6环烷基、R¹²或C_1-6烷基，其中所述C_1-6烷基被0或1个选自C₃环烷基、N(C_1-4烷基)₂、R⁶或R¹²的取代基取代；和

R⁴为OH或OC(O)R⁷。

5.根据权利要求3-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中

与羰基共价连接的吡唑烷、二氢吡唑或异噁唑烷即包含X和Y的环中的碳周围的立体化学构型为(S)，而G中被R³和R⁴取代的碳周围的立体化学构型为(R)。

6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中G为

7.根据权利要求6所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中

R²为H或卤素；

Q为O或CH₂；

各t独立为0或1；

R¹⁰为0、1或2个选自氧代、C_1-4烷基、R⁵和R⁶的取代基；和

R⁵为苯基，其被0、1、2、3、4或5个独立选自COOH、OH、卤素、CF₃、氰基、C_1-6烷基、R⁶和SO₂R⁷的取代基取代。

8.根据权利要求7所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中

R¹为四唑；

R²为H、Cl或F；和

R¹⁰为0、1或2个选自氧代和C_1-4烷基的取代基。

9.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中G为

10.根据权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中

R²为H或卤素；

R⁴为OH、OC(O)R⁷、OC(O)R⁸或NH₂；

Q为O或CH₂；

u独立为0或1；

R¹⁰为0、1或2个选自C_1-4烷基、卤素和R⁶的取代基；和

R¹¹为0、1或2个选自C_1-4烷基、卤素和R⁶的取代基。

11.根据权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中

R¹为四唑；

R²为Cl；

R⁴为OH或OC(O)R⁷；

R¹⁰为0、1或2个选自C_1-4烷基、F、Cl、OCH₃、OCF₃、OCHF₂和OCH₂F的取代基；和

R¹¹为0、1或2个选自C_1-4烷基、F、Cl、OCH₃、OCF₃、OCHF₂和OCH₂F的取代基。

12.根据权利要求7-8、10-11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中

与羰基共价连接的吡唑烷、二氢吡唑或异噁唑烷即包含X和Y的环中的碳周围的立体化学构型为(S)。

13.根据权利要求3-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中X为NH，Y为CH₂，X和Y通过单键相连。

14.根据权利要求3-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中X为O，Y为CH₂，X和Y通过单键相连。

15.根据权利要求3-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，其中X为N，Y为CH，X和Y通过双键相连。

16.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或对映体或所述对映体的药学上可接受的盐，所述化合物选自：

(5S)-1-[(2R)-3-叔丁氧基-2-羟丙酰基]-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺，

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-2-苯乙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

(5S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-1-[(2R)-2-羟基-3-苯丙酰基]-4，5-二氢-1H-吡唑-5-甲酰胺、

2-甲基丙酸(1R)-2-[(5S)-5-{[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]氨基甲酰基}-4，5-二氢-1H-吡唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙酯、

(3S)-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]-2-[(2R)-2-羟基己酰基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

(3S)-2-[(2R)-3-叔丁氧基-2-羟丙酰基]-N-[5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苄基]异噁唑烷-3-甲酰胺、

17.药物制剂，其包含与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合的权利要求1-16中任一项所述的式(I)化合物。

18.权利要求1-16中任一项所述的式(I)化合物，用于治疗。

19.权利要求1-16中任一项所述的式(I)化合物，用于抗凝血治疗。

20.权利要求1-16中任一项所述的式(I)化合物，用于治疗病症，所述病症中抑制凝血酶是有益的。

21.权利要求1-16中任一项所述的式(I)化合物，用于血栓栓塞疾病的治疗和预防。

22.权利要求1-16中任一项所述的式(I)化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗病症，所述病症中抑制凝血酶是有益的。

23.权利要求1-16中任一项所述的式(I)化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和预防血栓栓塞疾病。

24.治疗病症的方法，所述病症中抑制凝血酶是有益的，所述方法包括给予患有或易患这种病症的人治疗有效量的权利要求1-16中任一项所述的化合物。

25.治疗和预防血栓栓塞疾病的方法，所述方法包括给予患有或易患血栓形成倾向疾病的人治疗有效量的权利要求1-16中任一项所述的化合物。