CN102125546B - 一种用于预防肾结石的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于预防肾结石的组合物,所述的组合物含有以下成分:a.10-70重量份黄豆苷(Daidzin),b.3-25重量份染料木苷(Genistin),c.5-35重量份黄豆黄苷(Glycitin),d.0.1-2重量份黄豆苷元(Daidzein),e.0.005-0.05重量份染料木素酮(Genistein),和f.0.01-0.1重量份黄豆黄素(Glycitein);所述成分(a)+(b)+(c)+(d)+(e)+(f)的总量占组合物总重量的80w/w%以上。
Description
技术领域
本发明涉及预防保健的医药食品领域,尤其涉及一种用于预防肾结石的组合物。
背景技术
草酸钙结石的形成机制复杂。尿液中草酸钙浓度的过饱和有助于晶体的成核和生长过程。但是,单个草酸钙晶体形成以后,只有粘附于肾小管上皮细胞的表面或者迅速地聚集形成较大的结晶以堵塞肾小管,否则,将被尿液迅速冲走,肾结石亦不会发生(Atmani F,Slimani Y,Mimouni M,et al.Effect ofaqueous extract from Herniaria hirsuta L.on experimentallynephrolithiasic rats[J].J Ethnopharmacol,2004,95(1):87-93)。由于正常人和草酸钙患者尿液中的成分对于草酸钙的形成都是处于过饱和状态的,因此,尿液过饱和只是形成结石的条件之一,而肾上皮细胞的损伤对于促进结石形成的作用十分重要。
已有研究发现,在结石的形成过程中,结晶黏附于肾小管是个必要环节。肾小管上皮细胞受损可以明显促进结晶的黏附,而高草酸是导致肾小管上皮细胞损伤的主要因素。若能有效地阻止或减轻尿草酸对肾小管上皮细胞的损伤,将有助于肾草酸钙结石的预防。研究发现大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)具有一定的细胞保护作用,本实验通过动物活体实验,了解大豆异黄酮能否有效地拮抗高浓度尿草酸的细胞毒作用并减少肾草酸钙结石的形成。
大豆异黄酮是黄酮类化合物中的异黄酮成分,是一类物质的总称,它们母核结构与黄酮类化合物类似。大豆异黄酮类化合物在通常情况下为固体,大部分熔点在100℃以上,常温下性质稳定,呈白色粉末状,无毒、无味,易于贮存,不溶于水,在醇和酮类溶剂中有一定的溶解度,极易溶于二甲基亚砜。
迄今为止,从大豆中共分离出12种大豆异黄酮异构体,分为游离型苷元(Anglicans)和结合型糖苷(Glucosides)两类,大豆异黄酮苷元结构如通式I和表1所示,大豆异黄酮糖苷结构如通式II和表2所示:
表1大豆异黄酮苷元结构
R1 | R2 | 苷元 |
H | H | 黄豆苷元(Daidzein) |
OH | H | 染料木黄酮(Genistein) |
H | OCH3 | 黄豆黄素(Glycitein) |
表2大豆异黄酮糖苷结构
研究表明大豆异黄酮具有多种生物学活性,但其对大鼠草酸钙肾结石生成的干预效果尚未见文献报道。***是一个多发病,复发率也很高,目前尚无一劳永逸的预防方法。因此,尿结石的预防是一项终身性的任务,寻找一种来源简便、价格低廉、患者依从性好的有效预防方法有着重要的现实意义。
发明内容
本发明旨在提供一种可预防肾结石的方法。
在本发明中,提供了一种组合物的用途,用于制备预防肾结石的药物组合物或食品组合物,所述的组合物含有以下成分:
a.10-70重量份黄豆苷(Daidzin),
b.3-25重量份染料木苷(Genistin),
c.5-35重量份黄豆黄素苷(Glycitin),
d.0.1-2重量份黄豆苷元(Daidzein),
e.0.005-0.05重量份染料木黄酮(Genistein),和
f.0.01-0.1重量份黄豆黄素(Glycitein);
所述成分(a)+(b)+(c)+(d)+(e)+(f)的总量占组合物总重量的80w/w%以上。
较佳地,所述的组合物含有:
a.25-70重量份黄豆苷(Daidzin),
b.8-20重量份染料木苷(Genistin),
c.12-30重量份黄豆黄素苷(Glycitin),
d.0.5-1.5重量份黄豆苷元(Daidzein),
e.0.01-0.03重量份染料木黄酮(Genistein),和
f.0.03-0.08重量份黄豆黄素(Glycitein)。
在另一优选例中,所述的组合物中还可含有结合型大豆异黄酮糖苷;所述的结合型大豆异黄酮糖苷选自下述的一种或一种以上:乙酰基黄豆苷(Acetydaidzin)、乙酰基染料木苷(Acetygenistin)、乙酰基黄豆黄素苷(Acetyglycitin)、丙二酰基黄豆苷(Malonydaidzin)、丙二酰基染料木苷(Malonygenistin)、丙二酰基黄豆黄素苷(Malonyglycitin)。
在另一优选例中,所述成分a+b+c+d+e+f的总量占组合物总重量的90w/w%以上。
在上述用途中,所述的肾结石是草酸钙肾结石。
在另一优选例中,所述的药物组合物的剂型选自口服剂型、注射剂、或局部给药剂型。
在另一优选例中,所述的预防肾结石是减少尿草酸浓度和/或尿草酸***量。
在另一优选例中,所述的预防肾结石是增加尿枸橼酸***量。
在另一优选例中,所述的预防肾结石是减少肾草酸钙结晶的粘附、聚集和生长成结石。
在另一优选例中,所述的预防肾结石是减少肾细胞凋亡指数。
据此,本发明提供了一种来源简便、价格低廉、患者依从性好的有效预防尿结石的方法。
附图说明
图1是实施例中检测本发明的组合物预防大鼠肾结石形成的实验路线图。
图2显示实验例中各组大鼠实验结束日体重情况;其中
A表示空白对照组,B表示单纯乙二醇组即单纯诱石组,C表示乙二醇加30mg/kg·d大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)组,D表示乙二醇加60mg/kg·d大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)组,E表示乙二醇加150mg/kg·d大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)组。
图3显示实验例中各组大鼠尿量情况;其中
A表示空白对照组,B表示单纯乙二醇组即单纯诱石组,C表示乙二醇加30mg/kg·d大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)组,D表示乙二醇加60mg/kg·d大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)组,E表示乙二醇加150mg/kg·d大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)组。
图4显示实验例中空白对照组大鼠肾组织切片(HE染色×200)。
图5显示实验例中单纯诱石组大鼠肾组织切片(HE染色×200)。
图6显示实验例中诱石+大豆异黄酮30mg/kg·d干预组大鼠肾组织切片(HE染色×200)。
图7显示实验例中诱石+大豆异黄酮60mg/kg·d干预组大鼠肾组织切片(HE染色×200)。
图8显示实验例中诱石+大豆异黄酮150mg/kg·d干预组大鼠肾组织切片(HE染色×200)。
图9显示实验例中空白对照组大鼠肾组织切片(TUNEL染色×200)。
图10显示实验例中单纯诱石组大鼠肾组织切片(TUNEL染色×200)其中,黑箭头指向TUNEL染色阳性细胞。
图11显示实验例中诱石+大豆异黄酮30mg/kg·d干预组大鼠肾组织切片TUNEL染色×200);其中黑箭头指向TUNEL染色阳性细胞。
图12显示实验例中诱石+大豆异黄酮60mg/kg·d干预组大鼠肾组织切片TUNEL染色×200);其中黑箭头指向TUNEL染色阳性细胞。
图13显示实验例中诱石+大豆异黄酮150mg/kg·d干预组大鼠肾组织切(TUNEL染色×200);其中黑箭头指向TUNEL染色阳性细胞。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究,发现几种大豆异黄酮苷元和大豆异黄酮糖苷混合形成的组合物,可以有效预防肾结石的发生。在此基础上,完成了本发明。
如本文所用,术语“含有”或“包括”包括了“包含”、“基本上由……构成”、和“由……构成”。
如本文所用,术语“基本上由……构成”指在组合物中,除了含有必要成分或必要组份之外,还可含有少量的且不影响有效成分的次要成分和/或杂质。例如,可以含有甜味剂以改善口味、抗氧化剂以防止氧化,以及其他本领域常用的添加剂。
如本文所用,术语“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
如本文所用,“重量份”或“重量份数”可互换使用,所述的重量份可以是任何一个固定的以毫克、克数或千克数表示重量(如1mg、1g、2g、5g、或1kg等)。例如,一个由1重量份组分a和9重量份组分b构成的组合物,可以是1克组分a+9克组分b,也可以是10克组分a+90克组分b等构成的组合物。在所述组合物,某一组分的百分比含量=(该组分的重量份数/所有组分的重量份数之和)×100%。因此,由1重量份组分a和9重量份组分b构成的组合物中,组分a的含量为10%,组分b为90%。
组合物
如本发明所用,“组合物”含有以下成分:
a.10-70重量份黄豆苷(Daidzin),b.3-25重量份染料木苷(Genistin),c.5-35重量份黄豆黄素苷(Glycitin),d.0.1-2重量份黄豆苷元(Daidzein),e.0.005-0.05重量份染料木黄酮(Genistein),和f.0.01-0.1重量份黄豆黄素(Glycitein);较佳地,还含有0.003-0.5重量份结合型大豆异黄酮糖苷;其中(a)+(b)+(c)+(d)+(e)+(f)的总量占组合物总重量的80w/w%以上,较佳地为90w/w%以上。
药物组合物和食品组合物
如本发明所用,“药物组合物”或“食品组合物”是指本发明提供的组合物和药学上或食品学上可接受的载体形成的物质。所述的食品组合物可以是饮食补充剂。
所述的药物组合物可以是药学上常规的制剂形式,例如但不限于,颗粒剂、胶囊、片剂、粉末剂、口服液、混悬液、或乳剂。
如本文所用,术语“药学上可接受的”或“食品学上可接受的”的成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和***反应)的,即有合理的效益/风险比的物质。
如本文所用,术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体,包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体:它们本身并不是必要的活性成分,且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.,N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体,如水、盐水、甘油和乙醇。另外,这些载体中还可能存在辅助性的物质,如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。
所述的“药学上可接受的载体”或“食品学上可接受的载体”还包括具有预防肾结石的成分,例如但不限于,酸奶、豆奶、豆奶粉、豆浆、黄豆粉、富氢水、富氢饮料、乳酸菌饮料、枸杞饮料等。
用途
本发明提供的组合物可以用于预防肾结石,尤其是预防草酸钙肾结石。可以给予哺乳动物有效量的本发明提供的组合物以预防肾结石的发生。所述的哺乳动物包括小鼠、大鼠、猪、牛、羊、猫、狗、猴、和人。
本发明组合物的使用剂量和使用方法取决于诸多因素,包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、活性成分强度、服用、代谢速率、病症的严重程度以及诊治医师的主观判断。当各成分的总量占组合物总重量的80w/w%以上时,建议剂量为每日10mg/kg。
本发明提到的上述特征,或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用,说明书中所揭示的各个特征,可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明,所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的主要优点在于:
1、本发明的组合物可减少诱石模型大鼠肾草酸钙结石的形成,其效果呈剂量依赖型。
2、本发明的组合物可减少尿草酸***量,拮抗高尿草酸的细胞毒性,减少肾小管上皮细胞的凋亡,增加尿枸橼酸盐浓度,从而阻断了肾草酸钙结石形成链中的关键环节。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的,例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。
除非另行定义,文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外,任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实验例
材料
大豆异黄酮粉:购自华北制药股份公司,含量80%,其中黄豆苷Daidzin45.9%、染料木苷Genistin13.36%、黄豆黄素苷Glycitin20.99%、黄豆苷元Daidzein0.96%、染料木黄酮Genistein0.02%、黄豆黄素Glycitein0.05%。临用前用去离子水配成不同浓度的大豆异黄酮悬液。
动物分组及给药方法
选用上海斯莱克实验动物有限责任公司(SLAC)提供的健康清洁级成年雄性Wistar大鼠50只,体重180-220g,随机分为5组,每组10只,在同一环境下适应性喂养1周,随后按下列方法处理4周:
A组(空白对照组):饮去离子水;
B组(单纯诱石组):以1%乙二醇溶液为唯一饮用水源;
C组-E组(诱石+大豆异黄酮干预组):以1%乙二醇溶液为唯一饮用水源,同时分别给予大豆异黄酮粉30、60、150mg/kg·d,即30mg SIF组、60mgSIF组、150mg SIF组。参见图1。
检测指标及方法
1.实验结束前1天用代谢笼收集24小时尿液并计量,计量后,均分为三份:一份用生化仪测定钙、钠、钾浓度;一份测草酸浓度(加浓盐酸防腐);一份测尿枸橼酸盐浓度(加麝香草酚防腐)。4℃保存。用4%戊巴比妥钠麻醉后脱臼处死大鼠,切取肾脏。
2.尿液
尿草酸浓度的测定采用铬酸钾氧化甲基红催化光度法(麻全生,杨文初.铬酸钾氧化甲基红催化光度法测定微量草酸[J].理化检验:化学分册,1998,34(7):309-310)
尿枸橼酸浓度的测定采用五溴丙酮硫脲比色法(曹履诚、章绍舜主编.尿石症基础与临床研究[M].济南:山东科学技术出版社,1990:60-86)
3.取出双肾,纵向剖开左肾,用4%多聚甲醛固定,石蜡切片HE染色,200倍光镜下观察肾组织草酸钙微结石情况,按文献标准(Thamilselvan S,Menon M.Vitamin E therapy prevents hyperoxaluria-induced calcium oxalate crystaldeposition in the kidney by improving renal tissue antioxidant status[J].BJU Int,2005,96(1):117-26)分级:
0级:无任何结晶亮点;
I级:细小的结晶亮点广泛但不成堆;
II级:结晶***大、成堆,但散在不连接;
III级:成堆结晶局部互相连接;
IV级:广泛成堆结晶连接成片。
4.采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)对肾组织切片进行免疫组化染色,200倍光镜下观察肾小管,蓝棕色核为凋亡细胞。用图像分析软件Imagine-Pro Phs 5.0计数凋亡细胞,计算凋亡指数(每个视野计数100个细胞中凋亡的细胞数)。
统计学分析
用SPSS 13.0统计软件分析,计量资料组间均值比较用方差分析。所有数据均按照以下方法统计:
(1)首先进行正态性检验;
(2)如果资料符合正态性(P>0.05),则进行方差齐性分析,如果数据方差齐性(P>0.05),则进行方差分析检验(F检验)。如果方差分析检验结果显著(P<0.05),则进一步用SNK参数检验法进行多重比较检验;如果方差分析结果不显著(P>0.05),则统计结束。
(3)如果数据方差不齐性,则进行Dunett-T3参数检验法进行多重比较检验。
(4)如果资料不符合正态性,则进行Kruskal-Wallis检验(H检验)和Median检验。如果Kruskal-Wallis检验结果显著(P<0.05),则进一步用非参数检验法进行两两比较检验;如果Kruskal-wallis检验结果不显著,则统计结束。
对于等级资料,采用Kruskal-Wallis非参数检验,如果结果显著(P<0.05),则用非参数检验法进行两两比较检验;如果Kruskal-Wallis检验结果不显著,则统计结束。
结果
1.各组大鼠体重和尿量变化
空白对照组、单纯诱石组、30mg SIF组、60mg SIF组、150mg SIF组大鼠体重分别为296g、290g、296g、295g、293g,但差异无统计学意义(P>0.05),三种剂量大豆异黄酮干预组之间差异无显著性意义(图2)。各组大鼠尿量均值差异无显著性意义。
2.实验结束日各组大鼠尿钠、钙、草酸浓度情况及24小时尿钠、钙、草酸***量(见表3)
各组大鼠尿钠、尿钙浓度、24小时尿钠、钙***量无明显差异(P>0.05)。B组-E组尿草酸浓度及24小时尿草酸***量均显著高于A组(P<0.05)。C组尿草酸浓度及24小时尿草酸***量均低于B组,但差异无统计学意义。中、高剂量干预组(D、E组)尿草酸浓度及24小时尿草酸***量均显著低于B、C两组(P<0.05)。D、E两组尿草酸浓度及24小时尿草酸***量差异无统计学意义(P>0.05)。
*与空白对照组比P<0.05;▲与单纯诱石组比P<0.01;★与30mg SIF组比P<0.05
3.实验结束日各组大鼠尿枸橼酸浓度比较(见表4)
B组-E组尿枸橼酸浓度及24小时尿枸橼酸***量均显著低于A组(P<0.05)。C组尿枸橼酸浓度及24小时尿枸橼酸***量均高于B组,但差异无统计学意义。中、高剂量干预组(D、E组)尿枸橼酸浓度及24小时尿枸橼酸***量均显著高于B、C两组(P<0.05)。C-E不同浓度大豆异黄酮组尿枸橼酸浓度及24小时尿枸橼酸***量均逐级升高,但D、E两组无统计学差异。
表4各组尿枸橼酸情况
*与空白对照组比P<0.05;▲与单纯诱石组比P<0.01;★与30mg SIF组比P<0.05
4.各组大鼠肾小管草酸钙结晶等级评分
各组大鼠肾脏病理切片中草酸钙晶体形成和肾小管扩张情况:A组大鼠肾小管未见扩张和任何草酸钙晶体沉积,细胞排列整齐、规则,结构清晰(见图4);B组大部分鼠肾组织肿胀,表面点状分布黄白色结晶,肾小球多有形状不规则,管腔扩张明显,多数管腔内存在黄白色透明的草酸钙结晶,部分管腔内结晶聚集成团(见图5);C组肾小管扩张,管腔内存在黄白色透明的草酸钙结晶(见图6),少见成片状,管腔扩大较B组有所减轻;D组和E组肾小管结构及草酸钙结晶沉积情况居于A组(P<0.05)与B组之间(P<0.05)(见图7-8),肾小管腔内偶见点状散在草酸钙结晶,管腔扩大较B组明显减轻;随着大豆异黄酮剂量的增加,肾小管结晶有减少的趋势(r=-0.569,P<0.05),C组与B组之间的草酸钙结晶评分差异无统计学意义,D组、E组与B组草酸钙结晶评分差异有统计学意义。D组草酸钙结晶评分值高于E组,但差异无统计学意义(P>0.05)。
表5各组大鼠肾草酸钙结晶等级分布及评分
5.各组大鼠肾小管上皮细胞凋亡水平情况
表6显示,B组为单纯诱石组,其肾细胞凋亡指数最高;C组为低剂量大豆异黄酮干预组,与B组相比,两组肾小管上皮细胞凋亡水平无明显差异(P>0.05),但是D组和E组显示中、高剂量的大豆异黄酮对此有明显的干预作用,其效果呈剂量依赖性。三个不同剂量干预组中,中、高剂量的D、E两组肾细胞凋亡指数,与低剂量干预的C组相比,差异有统计学意义,但D、E两组的组间差异无统计学意义(P>0.05)。
组别 | 凋亡指数 | 降幅(与B组比较) |
A | 2.6±0.97 | / |
B | 20.1±2.02* | / |
C | 18.4±3.83* | 8.4% |
D | 12.2±1.75*▲★ | 39.3% |
E | 10.6±1.96*▲★ | 47.3% |
*与空白对照组比P<0.05;▲与单纯诱石组比P<0.01;★与30mg SIF组相比P<0.05
草酸浓度、枸橼酸浓度与肾小管上皮细胞凋亡指数之间的相关系数分别为0.882和-0.855,均P<0.01。枸橼酸浓度、肾小管上皮细胞凋亡指数与结晶评分之间的相关系数分别为0.690和0.714,均P<0.01。
讨论
为了阐明肾结石发病机理,寻找有效的防治方法,复制出符合人类肾结石发病过程的动物模型极为必要。目前,诱发动物肾结石有多种方法,不同方法可以产生不同成分和不同部位的结石和钙化,成石的成功率和时间也不一致。一般的慢性成石方法实验周期长,成石率低。现在国内科研中最常见用乙二醇法造模,其操作简便,成石率高、重复性好,形成的结石大多分布在肾***、髓质及皮质等部位,且为慢性成石,适用于防石药物的筛选和疗效观察及成石过程中病理学研究(叶章群,董诚.泌尿系结石[M].北京:人民卫生出版社,2003.31),是国际上公认的泌尿系结石的动物造模方法。
乙二醇是草酸的前体,进入体内后转化成羟乙酸,后者既可以在羟乙酸氧化酶的作用下直接转化为草酸,也可以通过乳酸脱氧酶的催化转化成乙醛酸,乙醛酸又可以直接在非酶作用下最终转化为草酸。给动物喂食乙二醇,经体内代谢后最终转化成草酸,经尿排出,增加尿中草酸的浓度,肾内结石形成率极高。
鉴于此,发明人采用了以乙二醇给予大鼠饮用的方法,进行4周的造模,考虑到自由摄取的方便性以及符合大鼠饮水规律,直接配成溶液予饮用。
草酸是形成含钙***的最重要因素之一。正常尿液中草酸和钙的浓度比约为1∶5,而在易形成草酸钙结晶的尿液中,草酸与钙的比例是1∶1,草酸钙晶体中,草酸与钙的比例也是1∶1,这提示草酸钙结石形成中,草酸所起的的作用远远大于钙的作用。Rodgers等(Rodgers A.Aspects of calcium oxalatecrystallization:theory,in vitro studies,and in vivo implementation[J].J Am SocNephrol,1999,10 Suppl 14:S351-4)的研究显示,草酸对草酸钙过饱和度的贡献是钙的23倍,而钙对尿草酸的分泌也有影响。孙西钊等(孙西钊,郭宏骞,叶章群.尿石的成因[J].临床泌尿外科杂志,2003,18(6):321-326.)研究也表明,尿中草酸浓度由日***量增加10%,就等于尿钙增加100%,即尿液中草酸浓度的提高对草酸钙饱和度的贡献是钙的10倍。因此,尿液中草酸***量增高是一种更为危险的成石因素。
本发明结果表明,本发明实验例中大鼠24小时尿量及体重各组之间无明显差异性(P>0.05)。单纯乙二醇诱石组尿草酸浓度由0.99mmol/L增加到3.00mmol/L,增加了3倍多,24小时尿草酸***量由27.95μmol/24h升高到79.05μmol/24h,增加了2.82倍。尿钠和尿钙浓度及其24小时***量均未明显发生改变(P>0.05)。三个不同剂量的干预组尿草酸浓度和24小时***量均不同程度地高于空白对照组,但升高程度低于单纯诱石组,尤其是中、高剂量干预组。
国内外研究表明,草酸可以对培养的肾小管上皮细胞产生损伤作用,而草酸钙晶体更易于粘附于损伤的肾小管上皮细胞表面,最终可能诱发草酸钙结石的形成。体外细胞培养研究和动物模型方面的研究均发现,暴露于高浓度的草酸和/或草酸钙晶体的肾小管上皮细胞会出现细胞膜损伤,细胞损伤的程度与晶体的浓度和接触晶体的时间成正比,长时间暴露于高浓度的草酸、草酸钙之下甚至出现细胞凋亡或坏死。
本发明实验例中对服用诱石剂的大鼠用大豆异黄酮进行同步干预后,显示每天给大鼠灌喂大豆异黄酮30mg/kg时,该剂量对饮用诱石剂大鼠的干预效果不十分明显,高尿草酸导致的肾结晶评分和肾小管上皮细胞凋亡指数与单纯诱石组相比无明显差异;但当剂量达到60mg/kg时,则干预效果十分明显,可使高尿草酸导致的肾小管上皮细胞凋亡指数增幅减少40.9%(P<0.05),肾小管草酸钙结晶等级评分降低39.3%(P<0.05);随着大豆异黄酮灌喂剂量加大至150mg/kg,肾小管上皮细胞凋亡指数均比单纯诱石组有很好改善,但与60mg/kg组相比差异无统计学意义。以上结果提示,大豆异黄酮通过降低高草酸对肾小管上皮细胞的损伤,从而减少草酸盐晶体的粘附、聚集、生长,达到对肾脏的保护作用。而且,大豆异黄酮60mg/kg即可充分发挥对高草酸肾脏的保护作用。本研究证明,大豆异黄酮能够对抗尿草酸对肾小管上皮细胞的毒性作用,具有抑制肾草酸钙结石形成的功效,并且表现出良好的量效关系。
枸橼酸是尿中抑制含钙结石生成的重要成分,流行病学研究证实肾结石患者低枸橼酸尿发生率达到20-60%,而低枸橼酸尿是肾结石发病和复发的独立危险因素。在本发明实验例中,各草酸钙肾结石大鼠模型组的尿枸橼酸浓度水平明显低于空白对照组,尤其是单纯乙二醇诱石组,其与空白对照组相比,尿枸橼酸浓度降低于空白对照组34.7%。而3个不同剂量的SIF干预组与单纯乙二醇诱石组相比,尿枸橼酸浓度则分别升高了12.2%、30.7%和35.7%。与单纯乙二醇诱石组相比,30mg/kg SIF干预组尿枸橼酸浓度的升高无统计学意义,而60mg/kg组、150mg/kg组尿枸橼酸浓度的改变则有统计学意义;但60mg/kg组和150mg/kg组之间的尿枸橼酸浓度差异却无统计学意义。
从本发明实验例的统计结果来看,大豆异黄酮具有对抗草酸的细胞毒、保护肾小管上皮的作用,能够降低肾小管上皮细胞的凋亡,从而减少草酸钙结晶的沉积和生长成石。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并非用以限定本发明的实质技术内容范围,本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中,任何他人完成的技术实体或方法,若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同,也或是一种等效的变更,均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。
Claims (9)
1.一种组合物的用途,用于制备预防肾结石的药物组合物或食品组合物,所述的组合物含有以下成分:
a.10-70重量份黄豆苷(Daidzin),
b.3-25重量份染料木苷(Genistin),
c.5-35重量份黄豆黄素苷(Glycitin),
d.0.1-2重量份黄豆苷元(Daidzein),
e.0.005-0.05重量份染料木黄酮(Genistein),和
f.0.01-0.1重量份黄豆黄素(Glycitein);
所述成分(a)+(b)+(c)+(d)+(e)+(f)的总量占组合物总重量的80w/w%以上;
所述的肾结石是草酸钙肾结石。
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的组合物含有:
a.25-70重量份黄豆苷(Daidzin),
b.8-20重量份染料木苷(Genistin),
c.12-30重量份黄豆黄素苷(Glycitin),
d.0.5-1.5重量份黄豆苷元(Daidzein),
e.0.01-0.03重量份染料木黄酮(Genistein),和
f.0.03-0.08重量份黄豆黄素(Glycitein)。
3.如权利要求1或2任一所述的用途,其特征在于,所述的组合物中还可含有结合型大豆异黄酮糖苷。
4.如权利要求3所述的用途,所述的结合型大豆异黄酮糖苷选自下述的一种或一种以上:乙酰基黄豆苷(Acetydaidzin)、乙酰基染料木苷(Acetygenistin)、乙酰基黄豆黄素苷(Acetyglycitin)、丙二酰基黄豆苷(Malonydaidzin)、丙二酰基染料木苷(Malonygenistin)、丙二酰基黄豆黄素苷(Malonyglycitin)。
5.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述成分a+b+c+d+e+f的总量占组合物总重量的90w/w%以上。
6.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的预防肾结石是减少尿草酸浓度和/或尿草酸***量。
7.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的预防肾结石是增加尿枸橼酸***量。
8.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的预防肾结石是减少肾草酸钙结晶的粘附、聚集和生长成结石。
9.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的预防肾结石是减少肾细胞凋亡指数。
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