CN103394016A - 草果油在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了草果油在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途;所述细菌为凝固酶阴性葡萄球菌、吉氏库特氏菌、巨型球菌、棒状杆菌、粪肠球菌、芽孢杆菌、大肠埃希菌、单胞菌、鲁氏不动杆菌、产吲哚金黄杆菌、阴沟肠杆菌、弗氏志贺氏菌或普通变形菌。本发明药物对革兰氏阳性菌和阴性菌具有抗菌活性,对其中的耐药株也有较强的抑菌作用,并且在体内同样具有良好的抗菌作用,能有效治疗临床革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的各类菌株所致的感染性疾病,为临床提供了一种新的用药选择。
Description
本申请是申请号:201010622746.8的专利申请的分案申请。原申请的申请日:2010年12月28日,发明名称:草果油在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途。
技术领域
本发明涉及细菌感染性疾病,具体地,是在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途。
背景技术
细菌感染性疾病为目前常见的感染性疾病之一,它是细菌在一定条件下侵入人体一些部位时,引发的感染性疾病,例如因侵入部位不同,会发生各类腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎、阑尾炎、肺炎、新生儿脑膜炎等;还可侵入血液,进入体循环,从而引起宿主发热、毒血症、败血症、心包炎、肝周炎、气囊炎等,甚至会引起休克死亡。
目前,针对细菌感染性疾病多采用抗生素治疗。抗生素的发展和运用曾使细菌性疾病得到有效的控制,但随之而来的细菌耐药性等难题给广大国内外科技工作者提出了更大的挑战,积极开发新的抗菌药及从天然药物中寻找“抗生素替代品”等研究成了目前国内外的研究热点和难点。中药作为祖国医学的宝贵遗产,具有独特的资源优势,且毒副作用小、不易产生抗药性。因此,从中药中寻找抗生素替代品显得尤为必要。
草果为姜科豆蔻属植物草果Amomum tsa-ko Crevost et Lemaire的成熟果实,主产于云南、广西、贵州等地。中医认为,其性温,味辛,归脾、胃经,有燥湿,温中的功效,用于寒湿阻中证,适用于胸腹满闷,不思饮食,或胸闷脘痛,气逆作呕,噎膈反胃及痰饮积聚等。含有挥发油和黄酮类物质,其挥发油为黄色油状透明物质,具有特殊的刺激性气味。目前国内外关于草果油的研究报道较少,主要有提取工艺、化学成分、包合工艺及作为香料运用等方面的研究。
草果及其挥发油有浓郁的香味,是我国传统的药食同源植物,在食品、医药工业中被广泛应用,除用于调味品之外,还具有抗氧化、抗诱变、镇定、抗乙肝病毒等作用;草果挥发油还有明显的抗霉菌作用,它能够直接杀灭霉菌从而达到抗霉菌的效果。(冯雪,等,调味香料草果挥发油的研究进展,《中国调味品》,2009年8期。)在医药上,多将草果用于抗炎、驱虫、镇咳或治疗肠胃病等。如专利申请号:200410022726.1,发明名称:一种含草果挥发油的制剂、制备方法及用途,该发明涉及一种中药制剂,具体涉及姜科植物草果Amomumtaso-kocrevost etlemaire的果仁、果实、茎、叶、根提取挥发油和制备的制剂方法。取新鲜或干的草果植物的果仁、果实、茎、叶、根等,制得浅黄色、气味芳香辛辣的草果挥发油,并按常规制剂的制造方法制作各种口服滴丸、软胶囊、硬胶囊、片剂、颗粒剂、口服液、注射液等制剂,用于治疗肠胃病的药剂。另有专利申请号:200410008132.5,发明名称:草果精粉及其制备方法,该发明涉及一种草果精粉及其制备方法,以新鲜草果为原料,将其洗净、沥水、破壳,将草果壳和种子进行水中蒸馏,油水分离,提取草果挥发油备用,将经过蒸馏的草果壳和种子磨成草果浆,将草果浆加入乙醇稀释醇化,将稀释醇化液分离过滤去渣,先回收乙醇,再进行浓缩,将浓缩液进行喷雾干燥,将挥发油与干燥物混合,粉碎即得草果精粉,用作食品增香调味料和抗炎、驱虫、镇咳、化痰、散寒等的药物。
目前还未见将草果油用于治疗细菌感染性疾病的相关报道。
发明内容
本发明的技术方案提供了草果油的新用途。
本发明提供了草果油在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途;所述细菌为凝固酶阴性葡萄球菌、吉氏库特氏菌、巨型球菌、棒状杆菌、粪肠球菌、芽孢杆菌、大肠埃希菌、单胞菌、鲁氏不动杆菌、产吲哚金黄杆菌、阴沟肠杆菌、弗氏志贺氏菌或普通变形菌。
进一步地,所述的细菌感染性疾病是指由临床耐药菌株引起的感染性疾病。
其中,所述的草果油来源于姜科豆蔻属植物草果Amomum tsa-ko Crevostet Lemaire的成熟果实提取的挥发油。
进一步地,所述的草果油是通过如下方法制备得到的:取草果,粉碎成粗粉,加入10-14倍重量的蒸馏水,浸泡1-5小时后,采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时,即得草果油。
其中,所述药物是由草果油为活性成分,加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
进一步地,所述的药剂是口服制剂、注射制剂、乳池灌注制剂或外用制剂。
更进一步地,所述的制剂中含有草果油的含量为0.1%~100%w/w。
本发明所指的临床耐药菌株是指凝固酶阴性葡萄球菌、吉氏库特氏菌、巨型球菌、棒状杆菌、粪肠球菌、芽孢杆菌、大肠埃希菌、单胞菌、鲁氏不动杆菌、阴沟肠杆菌、产吲哚金黄杆菌、弗氏志贺氏菌或普通变形菌等细菌中,对β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、喹诺酮类等5类抗生素已产生不同程度的抗药性的耐药菌株。
本发明药物对革兰氏阳性菌和阴性菌具有抗菌活性,对其中的耐药株也有较强的抑菌作用,并且在体内同样具有良好的抗菌作用,能有效治疗临床革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的各类菌株所致的感染性疾病,为临床提供了一种新的用药选择。
具体实施方式
实施例1本发明草果油的制备
取草果,粉碎过20-40目筛,加入10-14倍重量的蒸馏水,浸泡1-5小时后,采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时,即得本发明草果油。
本发明草果油也可按照药典(2005年版)附录XD挥发油测定法提取,还可采用有机溶剂提取、超临界CO2萃取等现有技术进行提取,或者通过购买市售产品获得。实施例1对本发明草果油的制备方法,不应理解为是对本发明保护范围的限制,凡基于上述技术思想,利用本领域普通技术知识和惯用手段所做的修改、替换、变更均属于本发明的范围。
以下通过药效学试验进一步证明本发明的有益效果。
试验例1
1材料及仪器
1.1实验仪器
多点接种仪(日本佐久间制作所,SAKUMA MIT-P型),电热恒温水浴锅(北京同华医疗器械厂,DSY-1-6孔),实验室用高压灭菌器(SANYO,MLS-3780型),CO2INCUBATOR(SANYO,MOC-15A),节能净化工作台(成都新光非兰特净化工程有限公司)。
1.2实验菌株
①标准菌株:大肠埃希菌标准株(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌标准株(ATCC25923);大肠埃希菌标准株[CMCC(B)44102]和金黄色葡萄球菌标准株[CMCC(B)26003];绿脓杆菌标准株(NCTC10662)。
②受试菌株:见表1。
采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的K-B法测定其对β-内酰胺类(青霉素、头孢噻吩、头孢噻肟)、氨基糖苷类(链霉素、庆大霉素)、大环内酯类(红霉素)、四环素类(四环素)、喹诺酮类(环丙沙星)共5类抗菌药物的敏感性,其耐药性分析见表2。
表1:受试菌株的种类和数量
表2:受试菌株对8种抗菌药物的耐药性分析
单位:株
注:S表示敏感,I表示中介,R表示耐药。多重耐药性试验是在已筛选出耐药菌的前提下进行的,分别对每个菌株进行了1-5类抗生素多重耐药的筛选。
1.3药物
试验药物:本发明药物。阳性药物:头孢克肟片(哈高科白天鹅药液集团有限公司,批号:080403),注射用头孢噻肟钠(四川制药制剂有限公司,批号:080301),注射用盐酸头孢吡肟(山东罗欣药业股份有限公司,批号:0903238),青霉素VK(华北制药股份有限公司,批号:0902206)。
1.4实验动物
小鼠(SPF级)[成都中医药大学实验动物研究中心,生产许可证号:SCXK(川)2008-11,使用合格证号:SCXK(川)2008-049]。
1.5培养基、试剂及耗材
Mueller-Hinton agar(OXOID,批号:729683),Mucin from porcine stomach,Type II(SIGMA,批号:108k0010),营养琼脂(北京奥博星生物技术有限责任公司,批号:20082502),氯化钠(天津市大茂化学试剂厂,批号:20080328),吐温-80(成都市科龙化工试剂厂,批号:20080925),一次性无菌培养皿(江苏康健生物有限公司),Mcfarland Standard(bioMeriéux,Inc.批号:821772701)等。
2试验方法
2.1草果油的提取
采用水蒸气蒸馏法对草果的挥发油进行提取,提取方法参考《中国药典》(2005年版)。
2.2体外抑菌活性试验
含药平板的制备:采用倍比稀释法用1%吐温-80对草果油进行稀释,分别稀释成1:2~1:256共8个梯度,在一次性无菌培养皿中分别加入不同浓度梯度的药液1ml和14ml灭菌的MH培养基,即各药物在平板中的稀释梯度分别为30.70mg/ml~0.24mg/ml,充分混匀,烘干后备用,以平板内加入等量生理盐水代替药物制备阳性对照平板。
菌液配置:将受试菌株和药敏质控菌株用无菌生理盐水调至菌液浓度1.5×106CFU/ml。
体外抑菌活性测定:采用多点接种仪将实验菌株的菌液加入不同浓度梯度的含药平板和阳性对照平板,并以生理盐水代替菌液作阴性对照。37℃恒温培养18~24h,观察各菌株在含不同浓度梯度药物平板中的生长情况。
结果判定及数据统计:以无细菌生长平板内药物的最小浓度为此药对该菌株的最低抑菌浓度(MIC),并统计药物抑制同种属50%和90%细菌时的最小浓度,即MIC50和MIC90。
2.2本发明药物的体内抗菌试验
实验菌株:选择金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌各1株,分别代表革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。(金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌为两类典型的革兰氏细菌,感染率较高,耐药性较强,因此,选择这两类细菌分别作为革兰氏阳性菌和阴性菌的代表,进行体内抑菌试验;其中,该株金黄色葡萄球菌对青霉素和红霉素耐药,大肠埃希菌对链霉素和四环素耐药。)
菌株毒力的测定:将实验菌株于37℃恒温培养至对数期,采用2倍稀释法用生理盐水分别对其进行稀释,配置成不同浓度梯度的菌液。取1份稀释的菌液与1份10%胃膜素混合,对小鼠进行腹腔注射,并以5%胃膜素做阴性对照。在对照小鼠不死亡的前提下,记录各剂量组小鼠24~48h内的死亡率,测定SPF小鼠全部死亡的最低细菌量(稀释度),即该菌液的最小致死量(MLD)。
体内抗菌试验:选择标准体重的KM小鼠(SPF),雌雄各半,每组10只。以高、中、低3个剂量分别肌肉注射小鼠,连续预防给药6天,并在第6天给药的同时进行攻毒,即分别对小鼠腹腔注射金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌。同时以既不给药也不攻毒为空白组;以生理盐水代替药物为模型组;以只注射不含细菌的5%胃膜素为胃膜素对照组。
数据统计:观察和记录两周内小鼠的死亡或存活数,并统计其存活率。
3结果与分析
3.1本发明药物的体外抑菌活性
采用琼脂平板二倍稀释法测定了本发明药物对120株33种乳腺炎病原菌和标准菌株的MIC,统计分析其对革兰氏阳性菌(葡萄球菌、链球菌、巨型球菌、吉氏库特氏菌、芽孢杆菌)和革兰氏阴性菌(大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、鲁氏不动杆菌、产吲哚金黄杆菌、单胞菌属)的MIC50和MIC90,其中对革兰氏阳性菌的体外抑菌活性结果见表3,对革兰氏阴性菌的体外抑菌活性结果见表4。
表3:发明药物对革兰氏阳性菌的体外抑菌活性
单位:mg/ml
由上表可知,本发明药物对革兰氏阳性菌有较强的抑菌活性,MIC值主要介于0.96~7.67mg/ml;对不同种属菌株的抑菌活性存在一定的差异,其中对链球菌、吉氏库特氏菌和芽孢杆菌的MIC50为0.96mg/ml,而对葡萄球菌和巨型球菌的MIC50为1.92mg/ml。此外,即使对同一种属的菌株,也因菌株来源等的不同而呈现较大差异,如对吉氏库特氏菌的不同菌株的MIC值差异较大,MIC介于0.96mg/ml~7.67mg/ml。
表4:发明药物对革兰氏阴性菌的体外抗菌活性
单位:mg/ml
本发明药物对革兰氏阴性菌的抑菌活性较强,对于不同种属的菌株,其抑菌活性差异较大,其中对大肠埃希菌的抑菌活性最差;其次为阴沟肠杆菌和单胞菌;抑菌活性相对较高的是弗氏志贺氏菌、普通变形菌、产吲哚金黄杆菌和鲁氏不动杆菌。此外,本发明药物对同一种属不同菌株的抑菌活性差异较大,如对单胞菌不同菌株的抑菌活性差异较大,MIC介于0.96~30.70mg/ml。
对比分析表3和表4,发现本发明对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较强的体外抑菌活性,且对革兰氏阳性菌的活性明显强于对革兰氏阴性菌的抑菌活性。
3.2本发明药物的体内抗菌活性
3.2.1注射给药
采用肌肉注射给药的方式对SPF小鼠进行预防给药6天,同时在第6天分别用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌对小鼠进行攻毒,观察14d内小鼠的存活情况,结果见表5。
表5:发明药物肌肉注射对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的体内抗菌活性
由上表可知,本发明药物在高、中、低三个剂量对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠和大肠埃希菌感染模型小鼠均有较强的保护力,并呈量效关系。其中高剂量对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌引起的感染模型小鼠保护力均达100%,中剂量对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌引起的感染小鼠保护力分别为90%和50%;低剂量对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌引起的感染小鼠的保护力分别为30%和0%。此外,对比分析药物对两种不同菌种诱发的感染小鼠的保护力情况,发现随着剂量的降低,相同量的药物对金葡菌感染模型小鼠保护力强于大肠埃希菌感染模型小鼠。结合体外抑菌活性试验本发明药物对革兰氏阳性菌的体外抗菌活性明显强于对革兰氏阴性菌的活性,说明本发明药物在体内、外对革兰氏阳性菌的抗菌活性均强于对革兰氏阴性菌的活性。
3.2.2口服给药
用本发明药物对SPF小鼠进行灌胃,预防给药6天,同时在第6天分别用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌对小鼠进行攻毒,并观察其攻毒后14d内小鼠的死亡情况,对其进行统计分析。结果见表6。
表6:发明药物灌胃对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的体内抗菌活性
由上表可知,本发明药物口服对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌引起的感染模型小鼠有较强的保护力,感染保护力分别为100%和70%,说明本发明药物对革兰氏阳性菌的抗菌活性强于对革兰氏阴性菌的活性。
综上所述,本发明药物对革兰氏阳性菌和阴性菌具有抗菌活性,对其中的耐药株也有较强的活性,且在体内同样具有良好的抗菌作用,能有效治疗临床革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的各类菌株所致的感染性疾病,为临床提供了一种新的用药选择。
Claims (7)
1.草果油在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途;所述细菌为凝固酶阴性葡萄球菌、吉氏库特氏菌、巨型球菌、棒状杆菌、粪肠球菌、芽孢杆菌、大肠埃希菌、单胞菌、鲁氏不动杆菌、产吲哚金黄杆菌、阴沟肠杆菌、弗氏志贺氏菌或普通变形菌。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的细菌感染性疾病是指由临床耐药菌株引起的感染性疾病。
3.根据权利要求1或2所述的用途,其特征在于:所述的草果油来源于姜科豆蔻属植物草果Amomum tsa-ko Crevost et Lemaire的成熟果实提取的挥发油。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的用途,其特征在于:所述的草果油是通过如下方法制备得到的:取草果,粉碎成粗粉,加入10-14倍重量的蒸馏水,浸泡1-5小时后,采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时,即得草果油。
5.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述药物是由草果油为活性成分,加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
6.根据权利要求5所述的用途,其特征在于:所述的药剂是口服制剂、注射制剂、乳池灌注制剂或外用制剂。
7.根据权利要求7所述的用途,其特征在于:所述的制剂中含有草果油的含量为0.1%~100%w/w。
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