发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种检验准确性高,药材易得的龙掌***液的质量检测方法。
本发明的一种龙掌***液的质量检测方法,包括如下步骤:
(1)龙掌***液的鉴别:取本品20ml,加氨试液2ml,用氯仿振摇提取2次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取飞龙掌血叶及飞龙掌血根皮对照药材各1g,加乙醇20ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一以1%磷酸二氢钾与0.5%羧甲基纤维素钠混合液(1∶1)制备的硅胶G薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯(8∶2)为展开剂,展开,取出晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)照高效液相色谱法测定含量:
A、色谱条件与***适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸(13∶87)为流动相;柱温30℃;检测波长为316nm。理论塔板数按异阿魏酸峰计算,应不低于5000;
B、对照品溶液的制备:精密称取异阿魏酸对照品适量,用10%乙醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
C、供试品溶液制备:精密量取本品5ml,置25ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,用0.45μm的微孔滤膜滤过,取续滤液,即得;
D、测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
上述的龙掌***液的质量检测方法,其中:本品每100ml含升麻以异阿魏酸(C10H10O4)计,不得少于4.0mg。
本发明与现有技术相比,具有明显的有益效果,由以上技术方案可知,采用见光不易分解的异阿魏酸作为含测指标。以保证检验准确性。市售的大部份药材异阿魏酸含量都达到了要求,购买符合要求的药材很容易。在液相色谱中异阿魏酸峰与其它峰之间均有良好的分离,从而保证了检验结果的准确性。保证用药的安全性,更好的指导生产,使工艺控制更加严格合理。
具体实施方式
以下通过试验例来进一步说明本发明的龙掌***液的质量检测方法的有益效果:
试验例:
1、对照品、试剂和试药
1.1仪器:Agilent 1100型高效液相色谱仪、VWD检测器、Agilent化学工作站;电子天平(万分之一)BS-210S型(塞多利斯公司);电子天平(十万分之一)AE240型(Mettler公司)。
1.2对照品:异阿魏酸对照品(批号:111698-200501)供含量测定用,购于中国药品生物制品检定所。
1.3试剂:乙醇、磷酸为分析纯;乙腈为色谱纯;水为重蒸馏水。
1.4试药:龙掌***液样品由贵阳新天药业股份有限公司提供。
2、对照品溶液的制备
对照品贮备液:精密称取异阿魏酸对照品11.00mg,置50ml量瓶中,加10%乙醇溶液,溶解并稀释至刻度,摇匀,即得每1ml含0.22mg的溶液。
对照品溶液:精密量取上述对照品贮备溶液5ml,置50ml量瓶中,加10%乙醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,即得每1ml含22μg的溶液。
3、色谱条件试验参照《中国药典》2005年版一部升麻药材异阿魏含量测定方法
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(伊利特ODS2 C18 250mm×4.6mm,5μm)
流动相:乙腈-磷酸(13∶87)
流速:1.0ml/分钟
检测波长:316nm
供试品溶液的制备:精密量取本品5ml,置25ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
分别精密吸取对照品溶液(C=22μg/ml)和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
结果从供试品图谱中可以看出异阿魏酸峰与其它峰之间有良好的分离度、峰形好、柱效高,故将该色谱条件作为本实验的色谱条件。
4、供试品溶液的制备选择:
方法1:精密量取本品5ml,置25ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
方法2:精密量取本品5ml,用乙酸乙酯萃取4次(20ml、15ml、10ml、10ml),合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加乙醇溶解并转移至25ml量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。
方法3:精密量取本品5ml,置25ml量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
方法4:精密量取本品5ml,置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
分别精密吸取异阿魏酸对照品溶液(C=22μg/ml)和4个供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,结果见下表:
结论:从以上试验结果可以看出,各方法中,异阿魏酸峰与其它峰之间均有良好的分离,方法1、4含量最高,综合考虑故将方法1列入正文,即为:精密量取本品5ml,置25ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
5、***适用性试验
精密量取本品5ml,置25ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;另取阴性样品同法制成阴性样品溶液。精密吸取对照品溶液(22μg/ml)、阴性样品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪,记录色谱图。从色谱图中可看出,供试品在与对照品保留时间相应的位置上有峰,且峰形好,而阴性样品在相应的位置上无峰,说明阴性样品对样品测定无干扰。样品在图谱中的异阿魏酸峰的理论板数为20175,与其它物质有良好的分离,峰形好,参照《中国药典》2005年版一部升麻药材异阿魏酸含量测定所规定的理论塔板数,规定本实验的理论塔板数按异阿魏酸峰计算,应不得低于5000。
6、线性关系试验
对照品溶液①:精密量取2项下异阿魏对照品溶液(C=22μg/ml)2ml,置10ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得每1ml含4.4μg的溶液。
对照品溶液②:精密量取2项下异阿魏对照品溶液(C=22μg/ml)5ml,置10ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得每1ml含11μg的溶液。
对照品溶液③:取2项下异阿魏对照品溶液(C=22μg/ml)
对照品溶液④:精密量取2项下异阿魏对照品贮备液(C=220μg/ml)3ml,置20ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得每1ml含33μg的溶液。
对照品溶液⑤:精密量取2项下异阿魏对照品贮备液(C=220μg/ml)2ml,置10ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得每1ml含44μg的溶液。
精密吸取上述5个对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,结果见下表:
以峰面积为纵坐标,以浓度(μg/ml)为横坐标作线性关系图
得线性方程Y=46.063x-9.1529 R=0.9999
拟合过原点的直线方程为:Y=45.776x R=0.9999
将对照品浓度代入上述两式计算,相对标准偏差小于1.0%,故可认为标准曲线过原点,回归方程截距为零,由此含量测定可采用外标一点法计算。对照品溶液浓度在4.4μg/ml~44μg/ml之间线性关系良好。
7、精密度试验 精密吸取异阿魏酸对照品溶液(C=22μg/ml)10μl,注入液相色谱仪,连续进样5次,记录色谱图,结果见下表:
实验结果表明,该方法有良好的精密度。
8、样品稳定性试验:
精密量取本品5ml,置25ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,并将供试品溶液放置0、1、2、4、8、12、24小时后,分别精密吸取供试品溶液10μl进样测定,记录色谱图,结果见下表:
从上述试验结果得出,供试品溶液在24小时内稳定性良好。
9、样品重复性试验
精密量取本品(批号:070701)5ml,置25ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液(浓度为22μg/ml)和6份供试品溶液各10μl进样测定,结果见下表:
通过上述试验结果得出,该方法的样品重复性好。
10、样品加样回收率试验
对照品溶液的制备:精密称定异阿魏酸对照品12.45mg,置50ml量瓶中,加10%乙醇使溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的制备:精密量取本品(批号:070701)5ml(平行样6份),置50ml量瓶中,再精密加入上述异附魏酸对照品溶液(C=0.249mg/ml)3ml,用10%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。分别精密吸取异阿魏酸对照品溶液(C=22μg/ml)及上述6份供试品溶液各10μl,分别进样测定,结果见下表:
从上述实验结果得出,该方法有良好的回收率。
11、样品测定
三批中试样品含量测定结果见下表:
批号 |
含量1(mg/100ml) |
含量2(mg/100ml) |
平均含量(mg/100ml) |
070701 |
14.22 |
14.36 |
14.3 |
070702 |
14.41 |
14.24 |
14.3 |
070703 |
14.39 |
14.35 |
14.4 |
12、含量限度的确定
六批药材、成品的含量数据表
根据《中国药典》中升麻药材异阿魏酸的含量限度,结合本品中升麻药材处方量及上表中异阿魏酸转移率,按下式计算得出本品的含量限度:
含量限度计算公式:
根据上述计算公式计算结果为4mg/100ml,因此规定本品每100ml含升麻以异阿魏酸(C10H10O4)计,不得少于4.0mg。
实施例:
一种龙掌***液的质量检测方法,包括如下步骤:
(1)龙掌***液的鉴别:取本品20ml,加氨试液2ml,用氯仿振摇提取2次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取飞龙掌血叶及飞龙掌血根皮对照药材各1g,加乙醇20ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各10μ1,分别点于同一以1%磷酸二氢钾与0.5%羧甲基纤维素钠混合液(1∶1)制备的硅胶G薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯(8∶2)为展开剂,展开,取出晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)照高效液相色谱法测定含量:
A、色谱条件与***适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸(13∶87)为流动相;柱温30℃;检测波长为316nm。理论塔板数按异阿魏酸峰计算,应不低于5000;
B、对照品溶液的制备:精密称取异阿魏酸对照品适量,用10%乙醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
C、供试品溶液制备:精密量取本品5ml,置25ml量瓶中,加10%乙醇稀释至刻度,摇匀,用0.45μm的微孔滤膜滤过,取续滤液,即得;
D、测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每100ml含升麻以异阿魏酸(C10H10O4)计,不得少于4.0mg。