CN104614475A - 一种消渴清颗粒的含量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种消渴清颗粒的含量检测方法，所述方法包括以下步骤：供试品溶液制备：取消渴清制剂，加入提取溶剂甲醇或乙醇适量，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得；对照品储备液的制备：取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加甲醇溶解，得到对照品储备液；含量测定：将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量。
Description
技术领域：
本发明涉及一种药物的有效成分测定方法，特别涉及一种消渴清颗粒中药物有效成分含量检测方法
背景技术：
消渴清颗粒为一种已经上市的治疗糖尿病的中成药，其配方组成如下：知母、苍术、黄连、蒲黄、地锦草、以及适量辅料，其制备方法包括以下步骤：
(a)取知母、苍术、黄连、蒲黄、地锦草、备用；
(b)苍术用水蒸气蒸馏法提取挥发油5小时，将苍术挥发油用β-环糊精包合，苍术油与β-环糊精按1∶6投料，在50℃干燥，制得β-环糊精包合物备用，提取液滤过，得滤液1；
(c)知母、黄连、蒲黄、地锦草以及苍术水提后的残渣加8倍量水煎煮两次，第一次煎煮2小时，第二次煎煮1小时，合并两次煎液，过滤得滤液2，合并滤液1与2，浓缩滤液成比重为1.10～1.15的清膏，干燥得干浸膏；
(d)：上述干浸膏及挥发油包合物，充分混合，即得药物活性物质，进一步和药物可接受的辅料混合制成颗粒等制剂形式。
消渴清颗粒中，各味药起着不同的功效，其中，苍术辛苦温，入脾胃二经，气味芳香，善行而不守，既可燥湿健脾，又能行气开郁，故朱丹溪谓其：“苍术为足阳明经药，气味辛烈，强胃健脾发谷之气”，“能解诸郁”。知母甘寒，入肺、胃、肾经，具有滋阴降火，清热润燥之功，《本草纲目》认为，“知母下则润胃燥而滋阴，上则清肺金而泻火。”，《本经》谓“主消渴热中，除邪气。”，二药皆为君，二药相互配伍，共行滋肾阴，健脾运，化郁之功；黄连气味苦寒，具有清热燥湿，泻火解毒，以之为臣，辅知母以护肾阴，助苍术以化湿浊；生蒲黄性凉味甘辛，入心、肝二经，凉血化瘀，血行津布而燥热可解，瘀去气行，而阴津自生，且能改善糖尿病合并心脑血管病变，以之为佐；地锦草乃民间天然降糖妙品，味微苦辛而性平，清热解毒，活血通脉不仅善降血糖，且对糖尿病并发痈疽疮疖也有良效，以之为使，诸药合用，则共奏滋阴清火，健脾活血之功，诸症可缓解而愈之。以上诸药，按照中医方剂学的基础理论，巧妙配伍，严密组合，共奏滋阴降火、清热化湿、活血化瘀之功，从而达到向愈的目的。
消渴清颗粒（XiaoKeQing granules，XKQ）是由知母、苍术、黄连、蒲黄及地锦草5味药组成。中国专利：200310107286，200410048002.4公开了有关的配方和制备。目前，消渴清颗粒质量标准含量测定项下仅对知母水解产物中的菝葜皂苷元进行了含量测定，无法全面表征中药制剂的整体性和复杂性，由于消渴清颗粒由5种中药材制备而成，其有效成分复杂多样，有必要寻找一种可以检测其中多种成分的方法，以有效的控制生产过程中产品的含量和质量，为此发明人进行了多种检测方法的实验，最终获得一种适合消渴清颗粒的方法，并对其中含量较高的5个成分新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱进行了含量测定。
发明内容：
本发明采用UPLC-PDA-ELSD色谱法对消渴清制剂中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱进行了含量测定，为消渴清的质量提供了安全、有效、准确的控制。
本发明提供一种消渴清制剂的检测方法，特别包括消渴清颗粒的检测方法。
所述方法包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂，加入提取溶剂甲醇或乙醇适量，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得。
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加甲醇溶解，得到对照品储备液。
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量。
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：选自：UPLC C18或T3柱；
流动相：选自：溶剂A（醋酸盐缓冲溶液（含0.3-0.5%乙酸及0.05-0.1%三乙胺））–溶剂B（乙腈）；溶剂A（0.1%甲酸水溶液）–溶剂B（乙腈）；溶剂A（0.1%醋酸水溶液）–溶剂B（乙腈）中的一种。
本发明采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：选自以下四个不同的洗脱方案中的一种：
①0～4min，5%–10%B，4～10min，10%–15%B，10～13min，15%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；
②0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-15%B，10～11min，15-12%B，11～13min，12%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；
③0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-15%B，10～11min，15-12%B，11～13min，12%–20%B，13～14min，20%–25%B，14～18min，25–30%B，20～23min，80%–5%B；
④0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-20%B，10～13min，20%B，13～14min，20%–25%B，14～18min，25–30%B，20～22min，80%–5%B；
柱温：25-35℃
流速：0.15-0.25ml/min
ELSD空气流速：2.0-3.0L·min-1；
漂移管温度：100-110℃；
进样量为2-4μL。
检测波长：240-340nm
优选的，本发明的供试品溶液制备方法如下：
取消渴清制剂1-7g,用50-80%乙醇或25-80%甲醇超声提取，超声时间为20-40min；
更优选的，本发明的供试品溶液制备方法如下：提取溶剂为75%的乙醇，或70-80%的甲醇。
最优选的本发明的供试品溶液制备方法如下：
取消渴清制剂（优选消渴清颗粒）6g，精密称定，置25ml量瓶中，加75%甲醇适量，超声（功率500w）30min，放置至室温，加75%甲醇定容至刻度，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，既得。
优选的，本发明的对照品储备液的制备制备方法如下：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加70-80%的甲醇。溶解，得到对照品储备液。
更优选的，本发明的对照品储备液的制备制备方法如下：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加75%的甲醇。
溶解，得到对照品储备液。
最优选的，本发明的对照品储备液的制备制备方法如下：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品适量，精密称定，加75%甲醇溶解，得到质量浓度分别为0.244、0.784、0.772、0.070和0.224μg·μL-1的对照品储备液。
优选的，本发明的色谱条件如下：
色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS C18(2.1×100mm，1.8μm)；
流动相：溶剂A（醋酸盐缓冲溶液（含0.5%乙酸及0.1%三乙胺））–溶剂B（乙腈），
梯度洗脱（0～4min，5%–10%B，4～8min，10%–15%B，8～13min，15%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；梯度洗脱过程只说明了溶剂B的含量，其余部分为溶剂A)；柱温：30℃；
流速：0.2mL·min-1；
进样量：3μL；
检测波长：258nm；
ELSD空气流速：2.5L·min-1；
漂移管温度：105℃，
增益值：1。
与本发明相关的相关术语解释
UPLC-PDA-ELSD：超高效液相多波长可见紫外和蒸发光检测法。
消渴清制剂，包括消渴清颗粒，消渴清片剂，消渴清胶囊剂，消渴清滴丸剂，消渴清栓剂，消渴清口服液剂，消渴清注射剂。可以根据已知专利中的方法制备。新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱均为已知药物成分，可以从市场上购买得到。
本发明可以用于检测药物制剂中的上述五种成分及其含量，因此本发明也适用于同时含有上述五种成分的其他药物制剂。
本发明的优选方法是经过实验筛选获得的，筛选结果如下：
***适应性试验
取供试品（批号130301）溶液、对照品溶液（0.50mL对照品储备液加75%甲醇定容至2mL）及阴性对照溶液，按照实施例1中色谱方法检测，记录色谱图比较紫外及蒸发光检测谱图确定供试品紫外色谱图中1号峰为新芒果苷、2号峰为芒果苷、4号峰为巴马汀、5号峰为小檗碱，ELSD色谱图中3号峰为知母皂苷BII。此***条件2号峰理论塔板数≥120000。(文中标示1：新芒果苷2芒果苷；3知母皂苷BII；4.巴马汀；5.小檗碱)
线性关系考察
精密量取实施例1方法制备的对照品储备液各0.10，0.25，0.50，0.60和1.00mL置2mL容量瓶，加75%甲醇精密稀释至刻度，得到5个不同质量浓度的对照品溶液，按照实施例1中色谱条件进样测定，新芒果苷、芒果苷、巴马汀和小檗碱以对照品浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，知母皂苷BII以对照品浓度的对数值X为横坐标，峰面积的对数值Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程，结果见表1，表明在相应浓度范围内各对照品溶液线性良好。
表1各成分线性方程及其浓度范围
精密度试验
精密吸取上述线性对照品溶液（0.50mL对照品储备液加75%甲醇定容至2mL），连续进样5次，测得新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱保留时间的RSD值分别为0.3%，0.3%，0.1%，0.1%和0.1%，峰面积的RSD分别为2.5%，2.3%，2.7%，2.4%和2.5%，表明仪器精密度良好。
精密度数据：
重复性试验
取样品（批号130301）5份，按实施例1方法制备供试品溶液，按实施例1方法进行检测，结果新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱峰面积的保留时间的RSD值分别为0.1%，0.2%，0.1%，0.1%和0.1%，RSD分别为2.9%，2.6%，2.9%，2.7%和2.9%,表明该方法重复性良好。
重复性数据：
稳定性试验
精密吸取上述线性对照品溶液（0.50mL对照品储备液加75%甲醇定容至2mL），分别于0，2，4，8，12，24h进样分析，结果新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的保留时间的RSD值分别为0.3%，0.3%，0.1%，0.1%和0.1%，RSD分别为3.0%，2.6%，2.5%，2.8%和3.0%，表明该溶液在24h内稳定性良好。
加样回收率试验
取9份已知含量的消渴清颗粒（批号130301），每份3.0g，按照样品中每种待测成分量的80%、100%、120%定量加入适宜浓度的对照品溶液，按实施例1方法制备供试品溶液，得到三种不同浓度的溶液，各3份，按实施例1的色谱条件进行测定，计算回收率和相对标准偏差值。结果测得新芒果苷的平均回收率为98.5%，RSD值为1.1%；芒果苷的平均回收率为98.8%，RSD值为0.7%；知母皂苷BII的平均回收率为99.2%，RSD值为0.6%；巴马汀的平均回收率为98.0%，RSD值为1.1%；小檗碱的平均回收率为98.0%，RSD值为1.2%。
样品含量测定
精密称取11批样品，分别按实施例1方法制备供试品溶液，按实施例1条件测定。结果见表2。
表211批样品中5种化学成分的含量测定结果（mg·g-1）
本发明的有益效果
目前，消渴清颗粒质量标准含量测定项下仅对知母水解产物中的菝葜皂苷元进行了含量测定，且检测方法为HPLC-ELSD法，消渴清颗粒是由知母、苍术、黄连、蒲黄及地锦草5味药组成，仅对知母水解产物的一种成分进行测定无法有效得知消渴清颗粒的质量，因此，我们实验室对消渴清颗粒制剂进行了充分提取并对所含成分进行了色谱分离。在提取上以全面获取制剂化学成分为目的，并以UPLC-PDA-ELSD法对成分进行色谱分离，较原始含测方法检验方法更快速、准确，能更全面的分析制剂质量。
附图说明
图1消渴清颗粒（A）、对照品（B）和阴性对照（缺知母C；缺黄连D；缺苍术E；缺蒲黄F；缺地锦草G）的UPLC-PDA色谱图
图2消渴清颗粒（A）、对照品（B）和阴性对照（缺知母C；缺黄连D；缺苍术E；缺蒲黄F；缺地锦草G）的UPLC-ELSD色谱图
具体实施方式：
以下通过实施例进一步说明本发明。
实施例1
仪器与试药
ACQUITY UPLC（美国Waters公司，包括四元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、PDA检测器、Empower3色谱工作站），蒸发光散射检测器（ELSD）（Alltech ELSD2000），KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），分析天平（XS105型电子分析天平，Mettler Toledo），MilliporeSimplicity超纯水***。
乙腈、甲醇（色谱级，Merck）；冰乙酸（色谱级，天津康科德有限公司）；三乙胺（色谱纯，天津市元立化工有限公司）；无水乙醇（分析纯，利安隆博华天津医药化学有限公司）；芒果苷（批号111607-200402）、知母皂苷BII（批号222839-201102）及小檗碱（批号110713-201212）对照品购自中国食品药品检定研究院；新芒果苷及巴马汀对照品购自天津马克生物技术有限公司。
对照药材：知母（Rhizoma Anemarrhenae）、黄连（Coptis chinensis Franch）、茅苍术（Atractylodes lancea(Thunb.)DC.）、蒲黄（Typha angustifolia L.）和地锦草（Herba Euphorbiae Humifusae）均由天津天士力现代中药资源有限公司提供；
待检测消渴清颗粒样品由天津天士力制药集团股份有限公司提供。
色谱条件
色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS C18(2.1×100mm，1.8μm)；流动相：溶剂A（醋酸盐缓冲溶液（含0.5%乙酸及0.1%三乙胺））–溶剂B（乙腈），梯度洗脱（0～4min，5%–10%B，4～8min，10%–15%B，8～13min，15%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；梯度洗脱过程只说明了溶剂B的含量，其余部分为溶剂A)；柱温：30℃；流速：0.2mL·min-1；进样量：3μL；检测波长：258nm；ELSD空气流速：2.5L·min-1；漂移管温度：105℃，增益值：1。
供试品溶液和对照品储备液的制备
供试品溶液的制备
取消渴清颗粒约6.0g，精密称定，置25ml量瓶中，加75%甲醇适量，超声（功率500w）30min，放置至室温，加75%甲醇定容至刻度，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，既得。
对照品储备液的制备
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品适量，精密称定，加75%甲醇溶解，得到质量浓度分别为0.244、0.784、0.772、0.070和0.224μg·μL-1的对照品储备液。
实施例2
1、一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂1g,用50%乙醇超声提取，超声时间为20min。
再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得，
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品适量，精密称定，加75%甲醇溶解，得到质量浓度分别为0.244、0.784、0.772、0.070和0.224μg·μL-1的对照品储备液。
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量，
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：选自：UPLC C18柱；
流动相：选自：溶剂A（醋酸盐缓冲溶液（含0.3-0.5%乙酸及0.05-0.1%三乙胺））–溶剂B（乙腈）；
采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：选自：
①0～4min，5%–10%B，4～10min，10%–15%B，10～13min，15%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；
柱温：25℃
流速：0.15ml/min
ELSD空气流速：2.0L·min-1；
漂移管温度：100℃；
进样量为2μL，
检测波长：240nm。
实施例3
1、一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂7g,用80%乙醇超声提取，超声时间为40min。
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品适量，精密称定，加75%甲醇溶解，得到质量浓度分别为0.244、0.784、0.772、0.070和0.224μg·μL-1的对照品储备液。
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量，
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：选自：T3柱；
流动相：选自：溶剂A（0.1%甲酸水溶液）–溶剂B（乙腈）；
采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：选自
0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-15%B，10～11min，15-12%B，11～13min，12%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；
柱温：35℃
流速：0.25ml/min
ELSD空气流速：3.0L·min-1；
漂移管温度：110℃；
进样量为4μL，
检测波长：340nm。
实施例4
1、一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂3.5g,用25%甲醇超声提取，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得，
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品适量，精密称定，加75%甲醇溶解，得到质量浓度分别为0.244、0.784、0.772、0.070和0.224μg·μL-1的对照品储备液。
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量，
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：选自：UPLC C18柱；
流动相：选自：溶剂A（0.1%醋酸水溶液）–溶剂B（乙腈），
采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：选自
0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-15%B，10～11min，15-12%B，11～13min，12%–20%B，13～14min，20%–25%B，14～18min，25–30%B，20～23min，80%–5%B；
柱温：25-35℃
流速：0.15-0.25ml/min
ELSD空气流速：2.0-3.0L·min-1；
漂移管温度：100-110℃；
进样量为2-4μL，
检测波长：240-340nm。
实施例5
1、一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂5g,用80%甲醇超声提取，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得，
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品适量，精密称定，加75%甲醇溶解，得到质量浓度分别为0.244、0.784、0.772、0.070和0.224μg·μL-1的对照品储备液。
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量，
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：选自：T3柱；
流动相：选自：溶剂A（醋酸盐缓冲溶液（含0.3-0.5%乙酸及0.05-0.1%三乙胺））–溶剂B（乙腈）；
采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：选自
0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-20%B，10～13min，20%B，13～14min，20%–25%B，14～18min，25–30%B，20～22min，80%–5%B；
柱温：25-35℃
流速：0.15-0.25ml/min
ELSD空气流速：2.0-3.0L·min-1；
漂移管温度：100-110℃；
进样量为2-4μL，
检测波长：240-340nm。
实施例6
一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂3g,用75%乙醇超声提取，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得，
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加甲醇溶解，得到对照品储备液，
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量，
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：选自：UPLC C18或T3柱；
流动相：选自：溶剂A（醋酸盐缓冲溶液（含0.3-0.5%乙酸及0.05-0.1%三乙胺））–溶剂B（乙腈）
采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：0～4min，5%–10%B，4～10min，10%–15%B，10～13min，15%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；
柱温：35℃
流速：0.15ml/min
ELSD空气流速：3.0L·min-1；
漂移管温度：100℃；
进样量为2μL，
检测波长：240nm。
实施例7
一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂3g,用75%甲醇超声提取，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得，
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加甲醇溶解，得到对照品储备液，
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量，
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：选自：UPLC C18或T3柱；
流动相：选自：溶剂A（0.1%甲酸水溶液）–溶剂B（乙腈）；
采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：
0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-15%B，10～11min，15-12%B，11～13min，12%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；
柱温：25℃
流速：0.25ml/min
ELSD空气流速：2.0L·min-1；
漂移管温度：100℃；
进样量为4μL，
检测波长：340nm。
实施例8
一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂3g,用50%甲醇醇超声提取，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得，
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加甲醇溶解，得到对照品储备液，
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量，
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：选自：UPLC C18或T3柱；
流动相：选自：溶剂A（0.1%醋酸水溶液）–溶剂B（乙腈），
采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：
0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-15%B，10～11min，15-12%B，11～13min，12%–20%B，13～14min，20%–25%B，14～18min，25–30%B，20～23min，80%–5%B；
柱温：30℃
流速：0.2ml/min
ELSD空气流速：2.5L·min-1；
漂移管温度：105℃；
进样量为3μL，
检测波长：258nm。
实施例9
一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂3g,用50%甲醇醇超声提取，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得，
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加甲醇溶解，得到对照品储备液，
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量，
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：选自：UPLC C18或T3柱；
流动相：选自：溶剂A（醋酸盐缓冲溶液（含0.3-0.5%乙酸及0.05-0.1%三乙胺））–溶剂B（乙腈）；采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：
0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-20%B，10～13min，20%B，13～14min，20%–25%B，14～18min，25–30%B，20～22min，80%–5%B；
柱温：30℃
流速：0.2ml/min
ELSD空气流速：2.5L·min-1；
漂移管温度：105℃；
进样量为3μL，
检测波长：258nm。
Claims (10)
1.一种消渴清制剂的检测方法，包括以下步骤：
供试品溶液制备：
取消渴清制剂，加入提取溶剂甲醇或乙醇适量，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得，
对照品储备液的制备：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加甲醇溶解，得到对照品储备液，
含量测定：
将上述供试品溶液和对照品储备液分别注入UPLC-PDA-ELSD色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用峰面积法计算供试品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱的含量，并得到消渴清制剂中这些成分的含量，
其中，所述UPLC-PDA-ELSD色谱仪，其色谱条件如下：
色谱柱：UPLC C18或T3柱；
流动相：选自：溶剂A醋酸盐缓冲溶液其中含0.3-0.5%乙酸及0.05-0.1%三乙胺–溶剂B乙腈；溶剂A0.1%甲酸水溶液–溶剂B乙腈；溶剂A0.1%醋酸水溶液–溶剂B乙腈，中的一种；
采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：选自以下四个不同的洗脱方案中的一种：
①0～4min，5%–10%B，4～10min，10%–15%B，10～13min，15%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；
②0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-15%B，10～11min，15-12%B，11～13min，12%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；
③0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-15%B，10～11min，15-12%B，11～13min，12%–20%B，13～14min，20%–25%B，14～18min，25–30%B，20～23min，80%–5%B；
④0～4min，5%B，4～5min，5%–10%B，5～8min，10%B，8～10min，10-20%B，10～13min，20%B，13～14min，20%–25%B，14～18min，25–30%B，20～22min，80%–5%B；
柱温：25-35℃
流速：0.15-0.25ml/min
ELSD空气流速：2.0-3.0L·min-1；
漂移管温度：100-110℃；
进样量为2-4μL，
紫外检测波长：240-340nm。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液制备方法如下：
取消渴清制剂1-7g,用50-80%乙醇或25-80%甲醇超声提取，超声时间为20-40min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液制备方法如下：
提取溶剂为75%的乙醇，或70-80%的甲醇。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液制备方法如下：
取消渴清制剂6g，精密称定，置25ml量瓶中，加75%甲醇适量，功率500w超声30min，放置至室温，加75%甲醇定容至刻度，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，既得。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对照品储备液的制备方法如下：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加70-80%的甲醇，溶解，得到对照品储备液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对照品储备液的制备方法如下：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品，加75%的甲醇，溶解，得到对照品储备液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对照品储备液的制备方法如下：
取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴马汀和小檗碱对照品适量，精密称定，加75%甲醇溶解，得到质量浓度分别为0.244、0.784、0.772、0.070和0.224μg·μL-1的对照品储备液。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件如下：
色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS C18；
流动相：溶剂A为醋酸盐缓冲溶液其中含0.5%乙酸及0.1%三乙胺–溶剂B为乙腈，
梯度洗脱条件为：
0～4min，5%–10%B，4～8min，10%–15%B，8～13min，15%–22%B，13～15min，22%–30%B，15～18min，30%B，18～20min，30%–80%B，20～23min，80%–5%B；梯度洗脱过程只说明了溶剂B的含量，其余部分为溶剂A。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件如下：
柱温：30℃；
流速：0.2mL·min-1；
进样量：3μL；
检测波长：258nm；
ELSD空气流速：2.5L·min-1；
漂移管温度：105℃，
增益值：1。
10.如权利要求1所述的消渴清制剂为消渴清颗粒。
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107991416A (zh) * | 2018-01-26 | 2018-05-04 | 江苏省中医院 | 具有治疗急慢性肾盂肾炎和***增生功效的中药复方的质量检测方法 |
| CN109187820A (zh) * | 2018-11-09 | 2019-01-11 | 湖南国华制药有限公司 | 一种复方菝葜颗粒uplc指纹图谱的建立方法及其指纹图谱与应用 |
| CN110274963A (zh) * | 2018-03-13 | 2019-09-24 | 天士力医药集团股份有限公司 | 一种消渴清指纹图谱检测方法 |
| CN110618231A (zh) * | 2019-10-23 | 2019-12-27 | 山东省中医药研究院 | 白虎汤颗粒的制备工艺及质量标准研究 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030102265A1 (en) * | 2001-12-03 | 2003-06-05 | Thierry Gandelheid | Method of separating compound(s) from mixture(s) |
| EP1380329A1 (en) * | 2002-07-12 | 2004-01-14 | Shimadzu Corporation | Preparative liquid chromatograph using plural detectors |
| US20110300547A1 (en) * | 2010-06-08 | 2011-12-08 | Tang ke xuan | Method of utilizing the pts gene and anti-sense ads to increase patchouli alcohol content in artemisia annua l. |
-
2013
- 2013-11-01 CN CN201310538597.0A patent/CN104614475B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030102265A1 (en) * | 2001-12-03 | 2003-06-05 | Thierry Gandelheid | Method of separating compound(s) from mixture(s) |
| EP1380329A1 (en) * | 2002-07-12 | 2004-01-14 | Shimadzu Corporation | Preparative liquid chromatograph using plural detectors |
| US20110300547A1 (en) * | 2010-06-08 | 2011-12-08 | Tang ke xuan | Method of utilizing the pts gene and anti-sense ads to increase patchouli alcohol content in artemisia annua l. |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 孙海胜等: "HPLC法测定消渴清颗粒中菝葜皂苷元的含量", 《西北药学杂志》 * |
| 韩健等: "用HPLC-ELSD法同时测定不同产地知母饮片中芒果苷、新芒果苷和知母皂苷BII的含量", 《药学服务与研究》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107991416A (zh) * | 2018-01-26 | 2018-05-04 | 江苏省中医院 | 具有治疗急慢性肾盂肾炎和***增生功效的中药复方的质量检测方法 |
| CN107991416B (zh) * | 2018-01-26 | 2020-10-09 | 江苏省中医院 | 具有治疗急慢性肾盂肾炎和***增生功效的中药复方的质量检测方法 |
| CN110274963A (zh) * | 2018-03-13 | 2019-09-24 | 天士力医药集团股份有限公司 | 一种消渴清指纹图谱检测方法 |
| CN109187820A (zh) * | 2018-11-09 | 2019-01-11 | 湖南国华制药有限公司 | 一种复方菝葜颗粒uplc指纹图谱的建立方法及其指纹图谱与应用 |
| CN109187820B (zh) * | 2018-11-09 | 2021-07-23 | 湖南国华制药有限公司 | 一种复方菝葜颗粒uplc指纹图谱的建立方法 |
| CN110618231A (zh) * | 2019-10-23 | 2019-12-27 | 山东省中医药研究院 | 白虎汤颗粒的制备工艺及质量标准研究 |
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