CN102000085B - 一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法，包括药物有效成份为：3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮和药用辅料制成的药剂，按重量百分比计药物有效成份为1%-90%、药用辅料为10%-99%，药物有效成份的结构式为：

。其制备方法包括以下步骤：①取地榆炭粉碎后为药物原料加入甲醇或乙醇提取过滤，滤液浓缩得到流浸膏；②将步骤①中流浸膏用水分散氯仿萃取，将萃取液回收溶剂得浸膏；③将步骤②的浸膏进行硅胶柱层析分离，抽滤所得固体重结晶得到化合物药物有效成份；④按重量比取药物有效成份，其余为药用辅助料制成药剂。本发明用于治疗乳腺癌使其治疗效果好，并可替代手术后化疗期内口服用的西药。

Description

一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及药品，是一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法。

背景技术

乳腺癌是一种发病率较高的疾病，据初步统计，近10年发病率呈逐渐上升趋势。目前治疗乳腺癌的方法是药物和手术，大多数患者需要手术治疗，手术切除肿瘤后化疗是一种较好的治疗方法，无论药物治疗还是手术后的化疗期内服用的药物，有效的药物一般均为西药，然而，西药的副作用经临床证明是非常明显的。虽然已公开的资料中有治疗乳腺癌的中药，但是，尚未有数据表明其疗效显著。因此，为了降低乳腺癌患者服用西药的毒副作用，本领域多年来一直在不断研究毒副作用小，疗效显著的治疗乳腺癌的药物，以期降低西药的服用量。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法，它用于治疗乳腺癌，使其治疗效果好，并可替代手术后化疗期内口服用的西药。

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：包括药物有效成份为：3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮和药用辅料制成的药剂，按重量百分比计药物有效成份为 1%-90%、药用辅料为10%-99%，3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮的结构式为：

。

所述药剂剂型为片剂，片剂的药物有效成份为20%-70%、药用辅料为30%-80%。

所述药剂剂型为胶囊，胶囊的药物有效成份为20%-90%、药用辅料为10%-80%。

所述药剂剂型为水针剂或冻干粉剂,药物有效成份为1%-5%、药用辅料为95%-99%。

所述药剂剂型为散剂或颗粒剂,药物有效成份10%-20%、药用辅料为80%-90%。

一种治疗乳腺癌的药物的制备方法，包括以下步骤：

①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇类，常温或加热至60℃-90℃，提取1—24小时，重复提取1—3次，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏；

②将步骤①中流浸膏用5-10倍重量水分散，以加水量1/3体积氯仿萃取，可重复萃取5-8次，将萃取液常压或减压回收溶剂，得浸膏；

③将步骤②的浸膏进行柱层析分离，采用石油醚-丙酮***梯度洗脱，通过薄层层析将90:10洗脱部分合并，再经重结晶纯化得到化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮；

④按重量百分比取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮为 1%-90%、药用辅料为10%-99%，按照药剂的常规制备方法制成药剂。

本发明药物有效成份的结构式，以高分辨快原子轰击质谱给出准分子离子峰m/z为425.3393 [M+H]⁺（C₂₉H₄₅O₂，计算值：425.3414）确定化合物的分子式为C₂₉H₄₄O₂。DEPT谱显示分子中含有7个CH₃，8个CH₂，6个CH和8个季C。核磁共振氢谱 (600兆赫兹, 氘代氯仿)显示5个甲基单峰信号δ 1.01（H-23），0.81（H-24），0.98（H-25），0.86（H-26），0.89（H-27）和2个甲基双峰信号0.94（H-29, 3H, d, J=7.2Hz），1.03 (H-30, 3H, d, J=5.4Hz）；一个连氧碳上的氢信号δ3.25（H-3, 1H, dd, J=11.4, 4.8Hz）和一个烯氢信号δ6.24（H-12, br s）。核磁共振炭谱显示4个烯碳特征信号δ128.4（C-12），δ137.4（C-13），δ129.2（C-17）和δ156.1（C-18），1个连氧碳信号δ78.9（C-3）以及1个羰基碳信号δ200.5 (C-22)，推测该化合物可能为28位羧酸缺失的乌苏烷型化合物。化合物的异核多重键相关谱（HMBC谱）和异核多量子相干谱（HMQC谱）显示H-11与C-12、C-13，H-27与C-13，H-19、H-29与C-18，H-15、H-16与C-17，H-21与C-22分别有远程相关。综合化合物的核磁共振炭谱、氢谱、无畸变极化转移增强谱（DEPT谱）、异核多重键相关谱（HMBC谱）和异核多量子相干谱（HMQC谱）使化合物的C、H归属得以确认，故确定该化合物的结构，即3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮。

表1  化合物的核磁共振炭谱（溶剂为二甲基亚砜-d₆）及无畸变极化转移增强谱（DEPT谱）数据

用。申请人研究发现，地榆炭中的3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮对乳腺肿瘤细胞有显著的抑制其生长的作用，并且还能抑制乳腺肿瘤新生血管的形成，从而为治疗乳腺癌提供了极好的基础。

实验表明3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮具有显著的抗乳腺肿瘤的作用。

1、抗肿瘤

本发明药物的有效成份为乌苏烷型五环三萜苷类化合物，熊果酸（乌苏酸）是该类化合物的代表性成分。熊果酸为一广谱的抗肿瘤化合物，在体外对多种肿瘤细胞有毒性作用。熊果酸不但能抑制乳腺肿瘤细胞生长，而且还能抑制乳腺肿瘤新生血管的形成。

实验材料：

人乳腺癌MCF-7细胞细胞株。

培养方法：

人乳腺癌细胞MCF-7在含10%胎牛血清的DMEM（一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基）中采用开放式单层贴壁培养，培养条件为37摄氏度， 5%二氧化碳，饱和湿度，待细胞生长至80%浓度时， 0.25%胰酶消化，每3天更换1次培养液。加受试物前7天将细胞用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤后改为含10%去***胎牛血清的无酚红DMEM中培养，以耗尽细胞内储存的***。

噻唑兰（MTT）实验：

将在去***培养基中培养7 天的MCF-7细胞接种于96孔板，细胞接种浓度为5 000个/孔。培养12小时待细胞贴壁后弃去旧培养基，每孔加入200微升含各浓度受试物的去***培养基。以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照组，设8个剂量组，每组3个平行样。培养48 小时后加入噻唑兰（MTT）溶液20微升/孔，继续孵育4 小时后终止培养， PBS洗涤3次，每孔加入150微升二甲基亚砜，振荡10 分钟，酶联免疫检测仪上于波长490 纳米测各孔吸光度(A)值，结果以各组5孔吸光度值的x±s表示。计算在不同浓度作用下MCF-7细胞的存活率。

细胞存活率（%）=实验组吸光度/正常组吸光度×100%

由图1可知,本发明药物有效成份对人乳腺癌细胞MCF-7的生长具有较强的抑制作用,并且显示一定的剂量依赖关系,在0.01毫摩尔/升时,对细胞的抑制作用最强,达80%作用。

本发明所述药物经动物实验表明对乳腺癌具有极显著的治疗作用；

本发明药物对乳腺癌细胞MCF-7荷瘤小鼠的治疗作用动物实验如下：

1、实验材料：

人乳腺癌MCF-7。裸鼠，雌性，体重20±2克（山东大学动物中心，实验动物许可号SCXK鲁20030004）。

受试药物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮注射液，生理盐水稀释至所需浓度。

2、实验方法：

取对数生长的乳腺癌细胞,在无菌条件下,用1毫升注射器将肿瘤细胞接种于裸小鼠左侧第二***的脂肪垫,接种量为1×10⁶/只；待成瘤后(肿瘤长、短径大于1毫米×1毫米)开始治疗。

将植瘤小鼠随机分为5组,阳性组为环磷酰胺，空白组和模型组为生理盐水，每天给药1次,共用3周后停药。治疗4周后,处死实验动物,完整切除肿瘤,测量肿瘤长短径,肿瘤体积采用ab²/2公式计算(a为瘤体长径, b为瘤体短径)，剥离胸腺，计算抑瘤率、胸腺指数。

抑瘤率=（对照组平均肿瘤体积-给药组平均肿瘤体积）/对照组平均肿瘤体积×100%

胸腺指数=胸腺重量/体重*10

与模型组相比*P<0.05 **P<0.01  与正常组相比：#P<0.05 ##P<0.01

受试本发明药物可抑制小鼠移植性肿瘤的生长，高、中剂量组抑瘤率分别为53.76%、3.14%，与模型组相比P<0.01或P<0.05；阳性对照环磷酰胺可明显抑制小鼠肿瘤的生长,但小鼠体重明显偏小，胸腺指数明显偏低，本发明药物各剂量组不会降低小鼠体重和胸腺指数，本发明药物对正常机体影响较小,无明显毒副作用。

实验表明由于本发明药物对治疗乳腺癌有显著的效果，因此，患者可以在乳腺癌治疗中使用本发明所述的各种药物剂型。本发明药物还可以替代手术后的化疗期联合使用的西药，从而彻底消除西药的毒副作用。

附图说明

图1为本发明药物有效成份对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用曲线图。

具体实施方式

实施例

本发明药物由药物有效成份及药用辅料制成药剂，药物有效成份的结构式为3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮

按重量百分比计药物有效成份为 1%-90%、药用辅料为10%-99%，本发明药物可以制成各种剂型，如：注射剂：水针剂、冻干粉剂，片剂、胶囊、颗粒剂、散剂或口服液。

所述药剂剂型为片剂，片剂的药物有效成份为20%-70%、药用辅料为30%-80%。

所述药剂剂型为胶囊，胶囊的药物有效成份为20%-90%、药用辅料为10%-80%。

所述药剂剂型为水针剂或冻干粉剂,药物有效成份为1%-5%、药用辅料为95%-99%。

所述药剂剂型为散剂或颗粒剂,药物有效成份10%-20%、药用辅料为80%-90%。

本发明药物的制备方法是先采用地榆炭提取药物有效成份，然后按照常规制药方法制备成所需药剂，包括以下步骤：

①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇类，常温或加热至60℃-90℃，提取1—24小时，重复提取1—3次，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏；

②将步骤①中流浸膏用5-10倍重量水分散，以加水量1/3体积氯仿萃取，可重复萃取5-8次，将萃取液常压或减压回收溶剂，得浸膏；

③将步骤②的浸膏进行柱层析分离，采用石油醚-丙酮***梯度洗脱，通过薄层层析将90:10洗脱部分合并，再经重结晶纯化得到化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮；

④按重量百分比取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮为 1%-90%、药用辅料为10%-99%，按照药剂的常规制备方法制成药剂。

举例说明几种剂型：

一、水针剂：

1．含药物有效成分1%，其余为辅料

1000亳升

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮10克，吐温80  10毫升，氯化钠8克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮10克，加吐温80 10毫升，注射用水250毫升，加热溶解，滤过，加10%碳酸钠调酸碱度至7.0-7.5，加入氯化钠，加注射用水至1000毫升，G₃垂熔漏斗（玻璃）滤过，分装，灌封，100摄氏度流通蒸汽灭菌30分钟，分装于1毫升安瓿瓶中，每支含有含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮10毫克。

2．含药物有效成分2.5%，其余为辅料

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮25克，吐温80  10毫升，氯化钠8克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮25克，加吐温80 10毫升，注射用水250毫升，加热溶解，滤过，加10%碳酸钠调酸碱度至7.0-7.5，加入氯化钠，加注射用水至1000毫升，G₃垂熔漏斗（玻璃）滤过，分装，灌封，100摄氏度流通蒸汽灭菌30分钟，分装于1毫升安瓿瓶中，每支含有含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮25毫克。

3．含药物有效成分5%，其余为辅料

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮50克，吐温80  10毫升，氯化钠8克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮50克，加吐温80 10毫升，注射用水250毫升，加热溶解，滤过，加10%碳酸钠调酸碱度至7.0-7.5，加入氯化钠，加注射用水至1000毫升，G₃垂熔漏斗（玻璃）滤过，分装，灌封，100摄氏度流通蒸汽灭菌30分钟，分装于1毫升安瓿瓶中，每支含有含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮50毫克。

二、胶囊剂：

1、含药物有效成分20%，其余为辅料

1000粒

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮40克，微晶纤维素160克，硬脂酸镁1克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮、微晶纤维素、硬脂酸镁，混匀，装胶囊，每粒重0.2克，含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮40毫克。

2、含药物有效成分50%，其余为辅料

1000粒

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮100克，微晶纤维素100克，硬脂酸镁1克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮、微晶纤维素、硬脂酸镁，混匀，装胶囊，每粒重0.2克，含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮100毫克。

3、含药物有效成分70%，其余为辅料

1000粒

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮140克，微晶纤维素60克，硬脂酸镁1克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮、微晶纤维素、硬脂酸镁，混匀，装胶囊，每粒重0.2克，含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮140毫克。

4、含药物有效成分90%，其余为辅料

1000粒

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮180克，微晶纤维素20克，硬脂酸镁1克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮90克，微晶纤维素10克，硬脂酸镁1克，混匀，装胶囊，每粒重0.2克，含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮180毫克。

三、散剂：100包

1、含药物有效成分10%，其余为辅料

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮5克，乳糖495克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮、乳糖，研细，混匀，过筛，分包，每包重5克，含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮50毫克。

2、含药物有效成分15%，其余为辅料

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮7.5克，乳糖492.5克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮、乳糖，研细，混匀，过筛，分包，每包重5克，含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮75毫克。

3、含药物有效成分20%，其余为辅料

3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮10克，乳糖490克。

取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮、乳糖，研细，混匀，过筛，分包，每包重5克，含3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮100毫克。

四、片剂：

1、含药物有效成分20%、辅料80%

1000片

化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮40克，羟丙甲纤维素60克，糊精100克，硬脂酸镁1克。

化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮、羟丙甲纤维素、糊精混合，以75%乙醇为粘合剂制湿颗粒，过22目筛，50摄氏度干燥3小时，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混匀压片，每片重0.2克，含化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮40毫克。

2、含药物有效成分50%、辅料50%：

1000片

化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮100克，羟丙甲纤维素40克，糊精60克，硬脂酸镁1克。

化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮、羟丙甲纤维素、糊精混合，以75%乙醇为粘合剂制湿颗粒，过22目筛，50摄氏度干燥3小时，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混匀压片，每片重0.2克，含化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮100毫克。

3、含药物有效成分70%、辅料30%：

1000片

化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮140克，羟丙甲纤维素20克，糊精30克，硬脂酸镁1克。

化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮、羟丙甲纤维素、糊精混合，以75%乙醇为粘合剂制湿颗粒，过22目筛，50摄氏度干燥3小时，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混匀压片，每片重0.2克，含化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮140毫克。

Claims (6)

1.一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：包括药物有效成份为：3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮和药用辅料制成的药剂，按重量百分比计药物有效成份为 1%-90%、药用辅料为10%-99%，3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮的结构式为：

。

2.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为片剂，片剂的药物有效成份为20%-70%、药用辅料为30%-80%。

3.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为胶囊，胶囊的药物有效成份为20%-90%、药用辅料为10%-80%。

4.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为水针剂或冻干粉剂,药物有效成份为1%-5%、药用辅料为95%-99%。

5.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为散剂或颗粒剂,药物有效成份10%-20%、药用辅料为80%-90%。

6.一种治疗乳腺癌的药物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇类，常温或加热至60℃-90℃，提取1—24小时，重复提取1—3次，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏；

②将步骤①中流浸膏用5-10倍重量水分散，以加水量1/3体积氯仿萃取，可重复萃取5-8次，将萃取液常压或减压回收溶剂，得浸膏；

③将步骤②的浸膏进行柱层析分离，采用石油醚-丙酮***梯度洗脱，通过薄层层析将90:10洗脱部分合并，再经重结晶纯化得到化合物3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮；

④按重量百分比取3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮为 1%-90%、药用辅料为10%-99%，按照药剂的常规制备方法制成药剂。