CN101878230B - 乳液中的交联透明质酸 - Google Patents

Abstract

本发明涉及制备交联的透明质酸微珠的方法以及所制备的微珠，所述的方法包括以下步骤：(a)提供包含透明质酸或其盐的碱性水溶液；(b)在有机相或油相中，从步骤(a)的混合溶液中形成具有所期望尺寸的微滴，以形成有机物包水或油包水(W/O)的乳液，其中基于油相和水的总和，油相的使用量是20重量％至小于50重量％；(c)向乳液中加入包含交联剂的溶液，由此透明质酸与所述交联剂发生反应以提供交联的透明质酸微珠；并且(d)任选地加工步骤(c)中所得的交联的透明质酸微珠的分散体。

Description

乳液中的交联透明质酸

技术领域

本发明涉及制备交联的透明质酸微珠(microbead)的方法，所述的方法包括以下步骤： 

(a)提供包含透明质酸或其盐的碱性水溶液； 

(b)在有机相或油相中，从步骤(a)的混合溶液中形成具有所期望尺寸的微滴，以形成有机物包水或油包水(W/O)的乳液，其中基于油相和水的总和，所用油相的量是20重量％至小于50重量％； 

(c)在连续搅拌W/O乳液下，向乳液中加入包含交联剂的溶液，由此透明质酸与交联剂发生反应而提供交联的透明质酸微珠；并且 

(d)任选地加工(work up)步骤(c)中所得的交联的透明质酸微珠的分散体。 

背景技术

本发明涉及改性透明质酸(HA)，特别是交联的HA乳液的制备方法、涉及其在化妆品以及个人护理应用中的用途。 

透明质酸(HA)是一种天然和直链的碳水化合物聚合物，其属于非硫酸化的氨基多糖类。它是由β-1，3-N-乙酰基葡萄糖胺和β-1，4-葡萄糖醛酸的重复二糖单元组成，并具有高达6MDa的分子量(MW)。透明质酸存在于透明软骨、滑膜关节滑液以及真皮或表皮的皮肤组织中。透明质酸可从包括脊椎动物的***的天然组织中、从人类脐带以及从鸡冠中提取。但目前优选通过微生物的方法制备透明质酸以使转移传染源的潜在危险降至最低，并且提高产品的一致性、质量以及可利用性(WO 03/0175902，Novozymes)。 

已确认了透明质酸在机体内的众多作用。在生物体内它在如皮肤、腱、肌肉以及软骨的许多组织细胞的机械支撑上起着重要的作用。透明质酸涉及关键的生物过程，如组织的润湿以及润滑。据推测，其还具有众多的生 理功能，如粘连、发育、细胞运动性、癌症、血管发生以及伤口愈合。由于透明质酸独特的物理以及生物性质(包括粘弹性、生物相容性、生物降解性)，在化妆品、眼科学、风湿病学、药物递送、伤口愈合以及组织工程中，透明质酸被广泛用于现有应用以及开发性应用中。在一些这种应用中，透明质酸的用途受限于以下事实：透明质酸在室温，即约20℃下溶于水，其在机体内被透明质酸酶快速降解，并且其难以加工入生物材料中。因此，引入透明质酸的交联以改进透明质酸的物理和机械性能、以及其体内的停留时间。 

美国专利4,582,865(Biomatrix Inc.)描述了使用二乙烯基砜(DVS)作为交联剂，单独或与其它亲水性聚合物混合制备透明质酸的交联凝胶。在EP 0161 887 B1中公开了使用多官能化的环氧化合物制备交联透明质酸或其盐。已被用以通过共价键交联透明质酸的其它双官能化或多官能化试剂包括甲醛(U.S.4,713,448，Biomatrix Inc.)、聚氮丙啶(WO 03/089476 A1，GenzymeCorp.)、L-氨基酸或L-氨基酯(WO 2004/067575，Biosphere S.P.A.)。还已报导了将碳二亚胺用于透明质酸的交联(U.S.5,017,229，Genzyme Corp.；U.S.6,013,679，Anika Research，Inc)。在US 4,957,744中公开了使用脂肪醇和透明质酸的交联全酯或偏酯、以及无机或有机碱与该偏酯的盐。在US2006/0040892(University of North Texas)中公开了在水/丙酮混合物中1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(“EDAC”)以及己二酸二酰肼与透明质酸链的交联。WO 2006/56204(Novozymes A/S)也公开了使用二乙烯基砜(DVS)作为交联剂的透明质酸交联凝胶的制备方法。 

WO 2008/100044描述了通过交联透明质酸制备透明质酸水凝胶纳米颗粒的方法，所述的方法包括混合i)包含溶于其中的表面活性剂的油相、和ii)包含溶解在碱性水溶液中的透明质酸以及水溶***联剂的水相，以形成W/O乳液，并且在所述的W/O乳液中将透明质酸交联，所述的油相包括十二烷、庚烷或十六烷基乙基己酸酯。 

EP 0 830 416(等同于US 6,214,331)描述了交联的水溶性聚合物颗粒制备物的制备，其中颗粒直径小于212μm，并且其中至少80％的颗粒是球形的，其可通过向包含油包水乳化剂的油基中加入聚合物(包括选自以下的水溶性聚合物：透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素、纤维 素、甲壳质、壳聚糖、琼脂糖、角叉菜胶、可得然胶(curdlan)、葡聚糖、emulsan、结冷胶、黄原胶、聚(环氧乙烷)、聚(乙烯醇)、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、蛋白、糖蛋白、肽聚糖、蛋白聚糖、脂多糖或它们的组合)水溶液，以及水性介质，搅拌混合物以形成包含聚合物液滴的乳液，并通过交联剂将聚合物液滴原位交联，形成交联聚合物颗粒。为了制备透明质酸微球，将交联剂直接加入水性透明质酸在甲苯中的乳液中。首先通过将水溶液的pH值调节至pH 11使交联剂失活，然后通过将pH值降低至7至8活化所述交联剂。优选地使用甲苯、邻二甲苯或异辛烷作为油相。水相对油相的重量比约为1比1。 

Nurettin Sahiner和Xinqiao Jai(Turk J Chem，32(2008)，397-409)描述了使用异辛烷作为油相制备透明质酸基亚微米水凝胶颗粒。为了制备乳液，将0.54ml透明质酸水溶液加入至15ml异辛烷中，得到大于10比1的水相对油相的重量比。 

发明内容

从上文中清楚表明了多种制备交联的透明质酸-微珠的方法是已知的。在所已知的方法中作为油相使用的一些组分不适合用作化妆品或个人护理组合物的组分。大量的水或油相被用于制备微珠。因此，需要提供制备交联微珠的其它方法，其不显示出已知方法的一个或多个缺点。 

出人意料地是，我们发现了一种制备交联的透明质酸微珠的方法解决了现有技术方法的已知问题，所述的方法包括以下步骤： 

(a)提供包含透明质酸或其盐的碱性水溶液； 

(b)在有机或油相中，从步骤(a)的混合溶液中形成具有所期望尺寸的微滴，以形成有机物包水或油包水(W/O)的乳液，其中基于油相和水的总和，所用油相的量是20重量％至小于50重量％； 

(c)在连续搅拌W/O乳液下，向乳液中加入包含交联剂的溶液，由此透明质酸与交联剂发生反应而提供交联的透明质酸微珠；并且 

(d)任选地加工(work up)步骤(c)中所得的交联的透明质酸微珠的分散体。 

本发明的方法的优点是产生最少的废水或废油相。通过使用对于个人 护理或化妆品用途可接受的软化剂，本发明所得的微珠不显示出任何的皮肤刺激问题，这在当使用烃类作为软化剂时可能出现。本发明的方法的优点有：不需要在形成化妆品或个人护理配制物之前从微珠中完全去除被用作油相的组分。甚至可以经过随后的中和或不经过随后的中和直接使用从步骤(c)中所得到的分散体。 

因此，在第一方面，本发明提供一种制备交联的透明质酸微珠的方法，所述的方法包括以下步骤： 

(a)提供包含透明质酸或其盐的碱性水溶液； 

(b)在有机或油相中，从步骤(a)的混合溶液中形成具有所期望尺寸的微滴，以形成有机物包水或油包水(W/O)的乳液，其中基于油相和水的总和，所用油相的量是20至小于50重量％； 

(c)在连续搅拌W/O乳液下，向乳液中加入包含交联剂的溶液，由此透明质酸与交联剂发生反应而提供交联的透明质酸微珠；并且 

(d)任选地加工(work up)步骤(c)中所得的交联的透明质酸微珠的分散体。 

在第二方面，本发明涉及包含优选地用二乙烯基砜交联的透明质酸或其盐的微珠。这些微珠优选通过第一方面所述的方法制备或得到。 

在第三方面，本发明涉及包含在第二方面中所述微珠的组合物。 

本发明的第四方面涉及根据本发明第二方面所述的微珠、或根据本发明第三方面所述的组合物或通过根据本发明的第一方面所述方法得到的分散体在制备润肤霜、个人护理、头发护理、皮肤护理或化妆品组合物中的用途。 

本发明的其它方面涉及个人护理组合物，其包含第二方面中所述的微珠(有效量的)作为载体，以及优选地封装在所述微珠中的个人护理活性剂；化妆品制品，其包含有效量的、在第二方面中所述的微珠或在第三方面中所述的组合物作为活性成分；卫生制品，其包含在第二方面中所述的微珠或在第三方面中所述的组合物，优选地所述制品是尿布、卫生巾、手术棉球、伤口愈合用纱布或创可贴(band aid)所包括的部件或其它的伤口包扎材料。 

本发明的许多方面涉及在第二方面中所述的微珠或在第三方面中所述 的组合物在保湿剂或化妆品制备物的制备，或在化妆品处理中的用途。 

附图说明

图1至图3通过示例的方式描述了本发明，而非将本发明限制于实施例所明确的实施方案中，本申请的范围从整个说明书以及权利要求书来说很清楚。 

图1显示了根据实施例2所得到的分散体的显微镜图。可见微珠(颗粒)的球形特征。 

图2显示了在实施例2中所得颗粒的粒度分布图。 

图3显示了猪皮的显微镜图。根据实施例7对所述猪皮进行处理。 

图4至图7显示了如实施例11中所测定的皮肤参数：起皮程度(scaliness，图4)、表面和体积(图5)、粗糙度(图6)以及纹理(图7)。 

具体实施方式

定义 

术语“透明质酸”在文字上用以表示具有不同分子量的酸性多聚糖，其由D-葡萄糖醛酸以及N-乙酰基-D-葡萄糖胺酸残基组成，天然存在于细胞表面中、脊椎动物***的碱性细胞外基质中、关节的滑液中、眼球内液(endobulbar fluid of eye)中、人类脐带组织中以及鸡冠中。 

事实上，通常将术语“透明质酸”用作表示具有交替的D-葡萄糖醛酸以及N-乙酰基-D-葡萄糖胺酸残基和可变的分子量或甚至其降解片段的整体系列的多糖，因此使用复数术语“透明质酸类”显得更准确。但是，在本说明书中将全部使用单数术语；此外，缩写“HA”通常用于替代该集合名词。 

在此将“透明质酸”定义为非硫酸化的氨基多糖，其由通过交替的β-1，4以及β-1，3糖苷键相连接的N-乙酰基葡萄糖胺(GlcNAc)以及葡萄糖醛酸(GlcUA)的重复二糖单元组成。透明质酸还被称为透明质素(hyaluronan)、透明质酸盐或HA。在此，可互换地使用术语“透明质素”以及“透明质酸”。 

如果不作明确的其它声明，在本发明中使用“透明质酸”或“HA”以描述透明质酸或其盐。 

在此，可互换地使用术语“微珠”以及微滴(microdrop)、微滴(microdroplet)、微颗粒、微球、纳米珠、纳米滴(nanodrop)、纳米滴(nanodroplet)、纳米颗粒、颗粒、纳米球等。 

可以根据经修改的咔唑方法(Bitter和Muir，1962，Anal Biochem.4：330-334)测定透明质酸的含量。此外，可以使用本领域中的标准方法测定透明质酸的数均分子量，例如如由Ueno等人，1988，Chem.Pharm.Bull.36，4971-4975；Wyatt，1993，Anal.Chim.Acta 272：1-40；以及Wyatt Technologies，1999，“Light Scattering University DAWN Course Manual”和“DAWN EOSManual”Wyatt Technology Corporation，Santa Barbara，California中所描述的那些方法。 

本发明的多个方面涉及多种组合物以及配制物，除其它组分之外，所述组合物以及配制物还包含一定量(有效量)的交联的HA产物(微珠)以及活性成分，优选地，所述活性成分是皮肤病学或化妆品的活性剂；个人护理可接受的载体、赋形剂或稀释剂，优选水溶性的赋形剂，并且最优选乳糖。 

此外，本发明的多个方面涉及包含如在第一方面中所述的产物或在如上的方面以及实施方案中所述的组合物的制品，一般而言，如化妆品制品、清洁制品、个人护理制品。在最后一个方面，本发明涉及包含在第一个方面所述的产物或在本发明的其它方面以及实施方案中所述的组合物的化妆品胶囊或微胶囊。 

发明详述 

在此详细描述得到交联的透明质酸微珠的本发明方法。 

本发明的制备交联的透明质酸微珠的方法包括以下步骤： 

(a)提供包含透明质酸或其盐的碱性水溶液； 

(b)在有机或油相中，从步骤(a)的混合溶液中形成具有所期望尺寸的微滴，以形成有机物包水或油包水(W/O)的乳液，其中基于油相和水的总和，所用油相的量是20重量％至小于50重量％； 

(c)向乳液中加入包含交联剂的溶液，由此透明质酸与交联剂发生反应而提供交联的透明质酸微珠；并且 

(d)任选地加工交联的透明质酸微珠的分散体。 

步骤(a)： 

透明质酸的来源不是关键的。对于透明质酸，公鸡冠已是重要的商业来源。微生物是另一个的来源。美国专利4,801,539描述了使用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)菌株制备透明质酸的发酵方法，其报道的产率是每升约3.6g透明质酸。欧洲专利EP 0 694 616公开了使用改进的兽疫链球菌菌株的发酵方法，其报道的产率是每升约3.5g透明质酸。如在WO03/054163(Novozymes)(将该文献全部内容援引加入本文)中所公开的，如在革兰氏-阳性芽孢杆菌宿主中可重组地制备透明质酸或其盐。 

已描述了来自脊椎动物、细菌病原菌以及藻类病毒的透明质素合酶(DeAngelis，P.L.，1999，Cell.Mol.Life Sci.56：670-682)。WO 99/23227公开了来自马链球菌(Streptococcus equisimilis)的I类透明质酸盐合酶。WO99/51265以及WO 00/27437描述了从败血性巴氏杆菌(Pasturella multocida)中的II类透明质酸盐合酶。Ferretti等人公开了化脓性链球菌(Streptococcuspyogenes)的透明质素合酶操纵子，其由hasA、hasB和hasC三种基因组成，分别编码透明质酸盐合酶、UDP葡萄糖脱氢酶和UDP焦磷酸化酶(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.98，4658-4663，2001)。WO 99/51265描述了具有马链球菌透明质素合酶的编码区域的核酸片段。 

由于重组芽孢杆菌细胞的透明质素直接表达于培养基中，所以可使用简单的方法从培养基中分离透明质素。首先，将芽孢杆菌细胞以及细胞碎片从培养基中物理性地去除。如需要，可首先将培养基稀释以减小培养基的粘度。许多从培养基中移除细胞的方法，如离心或微滤对于本领域技术人员是已知的。如需要，然后可通过如超滤将剩余的上清液过滤以浓缩并从透明质素中去除小分子污染物。在将细胞和细胞碎片去除之后，根据已知的原理从培养基中进行透明质素的简单沉淀。可将盐、醇或盐和醇的组合物用以从过滤物中沉淀出透明质素。一旦缩减得到沉淀物，通过物理方法可容易地从溶液中分离出透明质素。可通过使用本领域已知的蒸发技术，如冷冻干燥或喷雾干燥，从过滤物溶液中将透明质素干燥或浓缩。 

当所用的透明质酸或其盐优选地通过***或宿主细胞，更优选地通过芽孢杆菌属细菌进行重组制备时，可以是有利的。过去已描述 了如何在芽孢杆菌宿主细胞中重组地制备透明质酸，参见WO 2003/054163，Novozymes A/S，在此将其全文援引加入加入本文。由此，在优选的实施方案中，本发明涉及第一方面的所述方法，其中透明质酸或其盐是在芽孢杆菌宿主细胞中重组制备的。 

宿主细胞可以是任何适于透明质酸重组制备的芽孢杆菌细胞。芽孢杆菌宿主细胞可以是野生型的芽孢杆菌细胞或其突变型。在本发明的实践中有利的芽孢杆菌细胞包括但不限于：粘琼脂芽孢杆菌(Bacillusagaraderhens)、嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)以及苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)细胞。在WO 98/22598中描述了特别适合重组表达的变异型枯草芽孢杆菌细胞。在本发明中非微囊化的芽孢杆菌细胞是特别有利的。 

在优选的实施方案中，芽孢杆菌宿主细胞是解淀粉芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌细胞。在更优选的实施方案中，芽孢杆菌细胞是解淀粉芽孢杆菌。在另一个更优选的实施方案中，芽孢杆菌细胞是克劳氏芽孢杆菌细胞。在又一个更优选的实施方案中，芽孢杆菌细胞是迟缓芽孢杆菌。在又一个更优选的实施方案中，芽孢杆菌细胞是地衣芽孢杆菌。在又一个更优选的实施方案中，芽孢杆菌细胞是枯草芽孢杆菌。在最优选的实施方案中，芽孢杆菌细胞是枯草芽孢杆菌A164Δ5(参见U.S.专利No.5,891,701)或枯草芽孢杆菌168Δ4。 

可使用透明质酸本身或可使用透明质酸的盐。使用透明质酸盐，优选透明质酸无机盐可以是有利的。在本发明中有用的优选透明质酸盐是透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸铵、透明质酸钙、透明质酸镁、透明质酸锌或透明质酸钴。 

已描述了透明质酸的多个分子量片段对于特定的用途是有利的。用于本发明的透明质酸或其盐具有优选约10,000至约10,000,000道尔顿(Da)，更优选25,000至5,000,000道尔顿(Da)，并且甚至更优选50,000至3,000,000道尔顿(Da)的数均分子量。 

在本发明的优选实施方案中，透明质酸或其盐具有在300,000至3,000,000Da范围内，优选在400,000至2,500,000Da，更优选500,000至2,000,000Da，并且最优选在500,000至1,000,000Da范围内的数均分子量。 

在又一个优选的实施方案中，透明质酸或其盐具有在10,000至300,000Da之间的范围内，优选在20,000至200,000Da范围内，更优选在25,000至100,000Da范围内，并且最优选在25,000至80,000Da范围内的数均分子量。 

在步骤a)的碱性水溶液中的透明质酸或其盐的初始浓度可影响所得交联微珠的性质。因此，本发明的优选实施方案涉及所述第一方面的方法，其中所述碱性水溶液包含浓度在0.1％至40％(w/v)，优选1％至15％(w/v)，并且更优选4％至6％(w/v)之间的溶解的透明质酸或其盐。 

可以通过将透明质酸或其盐与碱性水溶液混合得到所述碱性水溶液。 

通过向水或包含水的溶液中加入碱，优选无机碱，更优选碱金属氢氧化物，并且最优选氢氧化钠可制备所述碱性水溶液。在交联反应过程中的pH值也影响结果。在本发明的优选实施方案中，碱性溶液包括溶解的碱金属氢氧化物、优选0.001至2.0M浓度的氢氧化钠。 

步骤(a)的溶液优选地具有11至13，更优选11.5至12.5，并且最优选约12的pH值。 

在将溶液用于步骤(b)之前将步骤(a)的溶液进行剧烈地搅拌可能是有利的。 

步骤(b)： 

为形成步骤(b)的乳液，所用的油相量是基于油相和水的总重的20重量％至＜50重量％，优选25重量％至45重量％，并且更优选30重量％至40重量％。 

优选使用在化妆品或个人护理配制物中用作油相的标准软化剂。该标 准软化剂不是烃或芳烃、特别不是甲苯、邻二甲苯、十二烷、庚烷、异辛烷或十六烷基乙基己酸酯。在本发明中所用的优选软化剂选自具有2至44个碳原子的、直链和/或支化的一元羧酸和/或二元羧酸与具有1至22个碳原子的、直链和/或支化的、饱和或不饱和醇的单酯或二酯；具有2至36个碳原子的脂族二官能化醇与具有1至22个碳原子的单官能化酯族羧酸的酯化反应产物；长链芳基酸酯，如苯甲酸与直链和/或支化的C6至C22-醇的酯、或苯甲酸异十八烷基酯、苯甲酸丁基辛酯或苯甲酸辛基十二烷基酯；碳酸酯，优选直链的C6至C22-脂肪醇的碳酸酯、格尔伯特碳酸酯，如二辛酰基碳酸酯、二乙基己基碳酸酯；长链甘油三酯，如甘油与三个酸分子的三酯，其中至少一个所述的酸分子是长链的；基于C6至C10-脂肪酸的甘油三酯、直链或支化的脂肪醇，如油醇或辛基十二醇；以及脂肪醇醚，如二烷基醚，如二辛酰基醚；硅油和蜡，如聚二甲基硅氧烷、环甲基硅氧烷、以及芳基或烷基或烷氧基取代的聚甲基硅氧烷或环甲基硅氧烷；基于具有6至18个、优选8至10个碳原子的脂肪醇的格尔伯特醇；直链C6至C22-脂肪酸与直链C6至C22-脂肪醇的酯；支化C6至C13-羧酸与直链C6至C22-脂肪醇的酯；直链C6至C22-脂肪酸与支化C8至C18-醇的酯，所述的醇特别地是2-乙基己醇或异壬醇；支化C6至C13-羧酸与支化醇的酯，所述的支化醇特别地是2-乙基己醇或异壬醇；直链和/或支化的脂肪酸与多元醇(如丙二醇、二聚醇(dimer diol)或三聚醇(trimer triol))和/或格尔伯特醇的酯；基于C6至C18-脂肪酸的液态甘油单/二/三酯混合物；C6至C22-脂肪醇和/或格尔伯特醇与芳族羧酸的酯；植物油、支化的伯醇、取代的环己烷、环氧化的脂肪酸酯与多元醇和/或硅油的开环产物或这些化合物的两种或多种混合物。所用的软化剂优选不与水无相分离地混容。 

适用作软化剂和油组分的单酯是如具有12至22个碳原子的脂肪酸的甲酯和异丙酯，如月桂酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、芥酸甲酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、油酸异丙酯。其它适合的单酯是如硬脂酸正丁酯、月桂酸正己酯、油酸正癸酯、硬脂酸异辛酯、棕榈酸异壬酯、异壬酸异壬酯、月桂酸2-乙基己酯、棕榈酸2-乙基己酯、硬脂酸2-乙基己酯、硬脂酸2-己基癸酯、棕榈酸2-辛基十二酯、油酸油酯、芥酸油酯、油酸芥醇酯以及从工业级脂族醇馏分和工业级脂族羧酸混合物可 得的酯，如具有12至22个碳原子的不饱和脂肪醇与具有12至22个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸的酯，如从动物和植物脂肪中可得的酯。但是，天然存在的单酯和蜡酯混合物，例如在如荷荷巴油或鲸蜡油中存在的，也是适合的。适合的二羧酸酯是如己二酸二正丁酯、癸二酸二正丁酯、己二酸二(2-乙基己基)酯、琥珀酸二(2-己基癸基)酯、壬二酸二异十三酯。适合的二醇酯是如二油酸乙二醇酯、二异十三酸乙二醇酯、二(2-乙基己酸)丙二醇酯、二异硬脂酸丁二醇酯、二辛酸/癸酸丁二醇酯以及二辛酸新戊二醇酯。 

在此可以示例的方式提及脂肪酸甘油三酯；可将如天然植物油，如橄榄油、葵花油、大豆油、花生油、油菜籽油、杏仁油、芝麻油、鳄梨油、蓖麻油、可可脂、棕榈油，以及如椰子油或棕榈仁油的液体成份；以及如动物油，如鲨鱼肝油、鳕鱼肝油、鲸油、牛油(beeftallow)和黄油脂肪；蜡，如蜂蜡、巴西棕榈蜡、鲸蜡、羊毛脂、牛脚油；牛油的液态成分；或者还如合成的辛酸/癸酸甘油三酯的混合物、来自工业级油酸的甘油三酯、异硬脂酸甘油三酯、或来自棕榈酸/油酸混合物的甘油三酯作为软化剂(油相)使用。 

在本发明中作为油相使用的优选软化剂是碳酸二乙基己酯或椰油酸癸酯或它们的混合物。 

当将软化剂用于配制化妆品或个人护理组合物时，通过使用所述软化剂作为油相，不必从微珠分散体中去除油相。 

在步骤(a)或步骤(b)中加入一种或多种乳化剂以制备乳液可能是有帮助的。在本发明中有用的乳化剂可选自如下作为附加成分列举的那些。 

当在步骤(b)中形成的微滴具有在约1纳米至1毫米范围内的数均直径时是有利的。步骤(b)的微液滴的粒度分布的最大值优选在0.1至100μm，更优选0.5至10μm、并且最优选1至2μm范围内。通过所用乳化剂以及搅拌强度的选择可调节液滴的尺寸。为得到具有期望尺寸的液滴所需的所用乳化剂和搅拌强度的组合可通过简单的系列测试进行测定。用Accusizer仪(使用Accusizer 780AD CW788-Nicomp软件，V 1.68(2000)的Accusizer780光学粒度仪，PSS NICOMP，Santa Barbara，CAL，USA)测定液滴或微珠的尺寸。 

在本发明中所用的优选乳化剂是选自具有3至9，优选4至6、更优选约5的HLB值的那些。优选的乳化剂是选自聚甘油-4-二异硬脂酸酯/聚羟基硬脂酸酯/癸二酸酯(ISOLAN

GPS)、PEG/PPG-10/1二甲硅油(ABIL

EM90)、聚甘油-4-异硬脂酸酯(ISOLANGI 34)、聚甘油-3-油酸酯(ISOLAN

GO33)、异硬脂酸甲基葡萄糖酯(ISOLANIS)、二异硬脂酰基聚甘油-3-二聚亚油酸酯(ISOLAN

PDI)、油酸甘油酯(TEGINOV)、月桂酸脱水山梨醇酯(TEGO

SML)、油酸脱水山梨醇酯(TEGO

SMO V)以及硬脂酸脱水山梨醇酯(TEGO

SMS)。这些优选的乳化剂得自Evonik Goldschmidt GmbH。 

步骤(c)： 

交联剂的浓度可对所得的微珠具有很强的影响。因此，本发明的一个优选实施方案涉及第一方面的方法，其中透明质酸或其盐(HA)/交联剂(CA)(干重)的重量比在1∶1至100∶1之间、优选HA/CA在2∶1至50∶1(干重)之间。 

交联度优选在0.001至1范围内，更优选0.01至0.5、甚至更优选约0.1。交联度为1表示1mol的n-官能化的OH-反应性化合物与n mol透明质酸的单糖进行反应。通过分析在反应混合物中未反应的交联物的量可确定交联度。通过已知的分析方法，如HPLC进行分析。 

适用于本发明的方法的交联剂是例如多官能化(＞＝2)的OH-反应性化合物。合适的交联剂的实例是二乙烯基砜(DVS)或基于双环氧化交联技术的交联剂，例如GDE＝甘油二缩水甘油醚或1，4-丁二醇二缩水甘油醚。本发明最优选的交联剂是二乙烯基砜，优选地按上述的重量比使用。 

可将交联剂直接加入或作为溶液加入。如果交联剂是作为溶液加入的，则交联剂优选溶解在油相中，优选与在步骤(b)中所用的油相相同的油相中。以包含C₁至C₄-醇，优选乙醇的溶液加入交联剂是有利的。以包含上述油相以及C₁至C₄-醇，优选乙醇的溶液加入交联剂是更有利的。使用包含乙醇的交联剂溶液可使得交联剂更快速地分散到微滴中。优选的交联剂溶液包含20至80重量％、优选40至60重量％的油相，以及80至20重量％、优选60至40重量％的C₁至C₄-醇的混合物作为溶剂。 

本发明人发现，为了获得令人满意的胶凝，在步骤(c)中将包含交联剂和HA溶液的溶液混合的过程中和/或紧接混合过程之后进行搅拌的初始阶 段是需要的。因此，在搅拌下，优选强烈搅拌下加入包含交联剂的溶液。在1至180分钟的时间段内，优选在搅拌下在步骤(c)中加入包含交联剂的溶液是有利的。在加入最后量的包含交联剂的溶液之后，可优选地再搅拌1至180分钟的时间段。 

透明质酸或其盐与交联剂，优选二乙烯基砜的反应优选在0℃至100℃，更优选10℃至50℃，甚至更优选20℃至30℃的温度下进行。 

本发明人确定了在混合溶液后的加热步骤是有利的。因此，本发明的一个优选实施方案涉及第一方面的方法，其中将步骤(c)所混合的溶液加热至20℃至100℃的范围内，优选地在25℃至80℃的范围内，更优选地在30℃至60℃的范围内，并且最优选地在35℃至55℃的范围内，并且其中在将所述的溶液混合后保持该温度至少5分钟，优选地至少10分钟、20分钟、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170或最优选地至少180分钟的时间段；优选地不进行搅拌。 

在本发明的另一个实施方案中，在交联反应发生后，仍然在连续搅拌下，将步骤(c)的反应混合物置于室温下较短时间段是有利的。 

在本发明的方法的一个优选的实施方案中，在反应已发生后，将步骤(c)的反应混合物维持在0℃至40℃的范围内，优选地在10℃至30℃的范围内至少5分钟、优选地至少10分钟、20分钟、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170，或最优选地至少180分钟的时间段。 

从步骤(c)中所得的交联微珠优选地具有在约1纳米至1毫米范围内的数均直径，本发明的步骤(c)的交联微珠的粒度分布的最大值优选在0.1至100μm，更优选0.5至10μm、并且最优选1至2μm的范围内。 

在步骤(c)中得到包含几乎没有未反应的交联剂的分散体是有利的。优选地，所述分散剂，更优选地，微珠包含小于10重量ppm(wppm)，更优选小于5wppm的交联剂。因为未反应的交联剂可能是毒物学意义上的威胁物，如果将分散体直接用于配制化妆品或个人护理组合物，则要求在分散体中游离的交联剂浓度是非常低的。因此，优选将步骤(c)的反应持续至得到包含上述浓度的未反应交联剂的分散体。 

任选存在的步骤(d) 

例如，任选存在的步骤(d)可以例如是中和反应和/或分离步骤。 

对于中和反应，可将交联微珠直接地或在从分散体中分离后至少一次地与水、水和酸、水和缓冲液，特别是水和磷酸盐缓冲液、水和盐水缓冲液、或水和磷酸盐缓冲液和盐水缓冲液进行接触。优选地，任选存在的步骤(d)包括用缓冲液或酸将交联微珠的pH值中和。本领域技术人员所熟知的许多类型的缓冲液或酸适于在步骤(d)中将本发明的交联微珠进行溶胀和中和。所用的酸或酸溶液优选地选自25℃下的脂肪酸液体，特别是乳酸、油酸或异硬脂酸。优选使用包含75至95重量％，优选地80至90重量％的水可溶性酸，如乳酸的酸水溶液。优选地将交联微珠与液体接触，所述液体特别是具有2.0至10.0范围内，优选地在5.0至9.5的范围内pH值的酸水溶液或含水缓冲液。如果不分离微珠进行中和反应，因为酸可导致乳液/分散体的破坏，优选不使用无机酸进行中和反应。 

按pH值选择优选的合适缓冲液，这使得交联微珠具有7至9.5，优选地8.5至9.5，更优选地约9的pH值。估计分散体(包含微珠的液体)的pH值与微珠的pH值基本相同。因此，通过熟知的方法，如在分散体中放入pH试纸或pH计的pH电极可容易地测定微珠的pH值。 

优选在第一方面的方法中的缓冲溶液包括磷酸盐缓冲液和/或盐水缓冲液。 

任选存在的纯化步骤可以包括任何在本领域中已知的分离技术，例如，过滤、倾析、离心等。优选地，任选存在的步骤(d)是包括用渗析膜将交联微珠对去离子水进行渗析的纯化步骤，所述渗析膜允许具有小于13000道尔顿尺寸分子的自由扩散。 

优选将一个或多个纯化步骤与一个或多个中和反应步骤组合。 

当使用对于个人护理配制物可接受的软化剂作为油相时，分离或纯化步骤可以不是必需的。可直接或在中和反应后将从步骤(c)中所得的分散体用以配制化妆品或个人护理配制物。 

使用本发明的方法可以得到本发明的微珠。优选的本发明的微珠包含与二乙烯基砜交联的透明质酸或其盐。该优选的本发明的微珠也可通过本发明的方法得到。 

优选的本发明的微珠是近似球形的。本发明的微珠优选地具有在1纳米至1毫米之间，更优选0.01至1000μm，甚至更优选0.1至100μm，并且最优选0.5至10μm范围内的截面或直径分布的最大值。但是，通常本发明的微珠将被制为在窄地多的范围内的期望尺寸，即它们将是相当均匀的。从步骤(c)所得的交联微珠优选地具有在约1纳米至1毫米范围内的数均直径。所述微珠优选地具有在约100至1000纳米范围内；或者在大于1000纳米至1000微米范围内的数均直径。本发明的微珠的多分散性优选地是较窄的，这是指大于95％，优选大于97％的颗粒小于或等于粒度分布最大值的10倍。使用上述的Accusizer方法，通过单颗粒光学尺寸测量(sizing)可测定所述多分散性。 

使用具有约10000至约10000000Da，更优选25000至5000000Da，甚至更优选50000至3000000Da的数均分子量的透明质酸或其盐得到了优选的本发明的微珠。 

在优选的本发明的实施方案中，使用具有300000至3000000Da范围内，更优选400000至2500000Da，甚至更优选500000至2000000Da，并且最优选500000至1000000Da范围内的数均分子量的透明质酸或其盐得到所述微珠。 

在另一个优选的实施方案中，使用具有10000至300000Da范围内，更优选20000至200000Da范围内，甚至更优选25000至100000Da，并且最优选25000至80000Da范围内的数均分子量的透明质酸或其盐得到所述微珠。 

优选的微珠包含作为透明质酸无机盐的透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸铵、透明质酸钙、透明质酸镁、透明质酸锌或透明质酸钴。 

本发明的微珠可包含活性成分、水可溶赋形剂和/或防腐剂或其它成分。优选活性剂是个人护理活性物质。本发明的微珠可在其内部包含至少1种选自以下组的附加成分：软化剂、乳化剂和表面活性剂、增稠剂/粘度调节剂/稳定剂、UV光保护过滤剂、抗氧化剂、水溶助剂(或多元醇)、固体物和填料、成膜剂、珠光助剂、除臭剂和止汗活性化合物、驱虫剂、仿晒剂(self-tanning agent)、防腐剂、调节剂、芳香剂、染料、生物(biogenic)活性化合物、护理助剂、超级油化剂(super-oiling agents)、保湿剂及溶剂。 

由本发明的微珠得到了包含这些微珠的本发明的组合物。本发明的组合物可包含至少1种选自以下组中的附加成分：软化剂、乳化剂和表面活性剂、增稠剂/粘度调节剂/稳定剂、UV光保护过滤剂、抗氧化剂、水溶助剂(或多元醇)、固体物和填料、成膜剂、珠光助剂、除臭剂和止汗活性化合物、驱虫剂、仿晒剂、防腐剂、调节剂、芳香剂、染料、生物活性化合物、护理助剂、超级油化剂、保湿剂以及溶剂。所述附加成分可以是在微珠内部和/或外部。优选地，在本发明的组合物中，所述附加成分仅存在于微珠的外部。 

如上所述，如果本发明的产物例如微珠或包含所述微珠的组合物或分散体也包含其它成分(附加成分)是有利的。如果本发明的产品是组合物或分散体，所述其它成分可以是在微珠内部或在微珠的内部和/或外部的。可用的其它成分优选地是一种或多种活性成分，优选一种或多种个人护理活性物质，特别是生物活性剂和/或一种或多种水可溶的赋形剂。 

为了稳定所述活性成分，可包含水可溶的赋形剂，该赋形剂可包含蛋白，例如白蛋白或明胶；氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸及其盐；糖类，如葡萄糖、乳糖、木糖、半乳糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、葡聚糖、甘露糖、山梨糖醇、海藻糖和硫酸软骨素；无机盐，如磷酸盐；表面活性剂，如TWEE

(ICI)、聚乙二醇及它们的混合物。所述赋形剂或稳定剂的用量占产物的0.001至99重量％。 

优选的附加成分的实例选自以下组：软化剂、乳化剂和表面活性剂、增稠剂/粘度调节剂/稳定剂、UV光保护过滤剂、抗氧化剂、水溶助剂(或多元醇)、固体物和填料、成膜剂、珠光助剂、除臭剂和止汗活性化合物、驱虫剂、仿晒剂、防腐剂、调节剂、芳香剂、染料、生物活性化合物、护理助剂、超级油化剂和溶剂。 

可被用作附加成分的乳化剂或表面活性剂是非离子、阴离子、阳离子或两性表面活性剂。 

可将选自以下的至少一种化合物用作非离子乳化剂或表面活性剂：在具有8至22个碳原子的直链脂肪醇上、在具有12至22个碳原子的脂肪酸上以及在烷基基团中具有8至15个碳原子的烷基酚上的2至100mol的环氧乙烷和/或0至5mol的环氧丙烷的加成产物；在甘油上1至100mol的环 氧乙烷加成产物的C12/18-脂肪酸单酯和二酯；具有6至22个碳原子的饱和及不饱和脂肪酸及其环氧乙烷加成产物、在烷基基团中具有8至22个碳原子的烷基单糖苷和寡糖苷及其环氧乙烷加成产物、在蓖麻油和/或氢化蓖麻油上的2至200mol环氧乙烷的加成产物的甘油单酯和二酯和脱水山梨糖醇单酯和二酯；基于直链、支化、不饱和或饱和的C6至C22-脂肪酸、蓖麻油酸以及12-羟基硬脂酸与甘油、聚甘油、季戊四醇、二季戊四醇、糖醇(如山梨糖醇)、烷基糖苷(如甲基糖苷、丁基糖苷、十二烷基糖苷)以及聚糖苷(如纤维素)的偏酯；单烷基、二烷基和三烷基磷酸酯以及单-PEG-烷基、二-PEG-烷基和三-PEG-烷基磷酸酯及其盐；聚硅氧烷/聚醚共聚物(二甲基硅油共聚多元醇(Dimethicone Copolyols))，例如PEG/PPG-20/6二甲基硅油、PEG/PPG-20/20二甲基硅油、双PEG/PPG-20/20二甲基硅油、PEG-12或PEG-14二甲基硅油、PEG/PPG-14/4或4/12或20/20或18/18或17/18或15/15；聚硅氧烷/聚烷基聚醚共聚物及其衍生物，如十二烷基或十六烷基二甲基硅油共聚多元醇，特别是十六烷基PEG/PPG-10/1二甲基硅油(ABIL 

EM 90(Evonik Degussa))；根据DE 11 65 574的季戊四醇、脂肪酸、柠檬酸和脂肪醇的混合酯和/或具有6至22个碳原子的脂肪酸、甲基葡萄糖和多元醇，如甘油或聚甘油的混合酯；柠檬酸酯，如甘油硬脂酸酯柠檬酸酯(Glyceryl Stearate Citrate)、甘油油酸酯柠檬酸酯以及柠檬酸二月桂酯。 

阴离子乳化剂或表面活性剂可包含提供水溶性的基团，如羧酸根、硫酸根、磺酸根或磷酸根基团以及亲酯基团。大量皮肤耐受的阴离子型表面活性剂是本领域技术人员已知的，并且是可商购的。就此而言，它们可以是碱金属盐、铵盐或烷醇铵盐形式的烷基硫酸盐或烷基磷酸盐；碱金属盐或铵盐形式的烷基醚-硫酸盐、烷基醚-羧酸盐、酰基肌氨酸盐、磺基琥珀酸盐以及酰基谷氨酸盐。 

也可加入阳离子乳化剂和表面活性剂。可使用季铵化合物，特别是具有至少1个直链和/或支化的、饱和或不饱和的、具有8至22个碳原子的烷基链的那些，特别例如烷基三甲基卤化铵，例如十六烷基三甲基氯化铵或十六烷基三甲基溴化铵或二十二烷基三甲基氯化铵、以及二烷基二甲基卤化铵，如二(十八烷基)二甲基氯化铵。 

另外还可使用单烷基酰胺基季铵化合物，例如十六烷基酰胺基丙基三 甲基氯化铵，或相应的二烷基酰胺基季铵化合物。 

另外还可使用易于生物降解的季酯化合物，其可是基于单乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺季铵化的脂肪酸酯。另外还可混合入烷基胍盐作为阳离子乳化剂。 

温和的表面活性剂，即皮肤特别耐受的表面活性剂的典型实例是脂肪醇聚二醇醚-硫酸盐、硫酸单甘油酯、磺基琥珀酸单烷基酯和/或二烷基酯、脂肪酸羟乙磺酸盐、脂肪酸肌氨酸盐、脂肪酸牛磺酸盐、脂肪酸谷氨酸盐、醚-羧酸、烷基寡糖苷、脂肪酸葡糖酰胺盐、烷基酰氨基甜菜碱和/或蛋白-脂肪酸缩合物，如基于小麦蛋白。 

此外，还可使用两性表面活性剂，如甜菜碱、两性乙酸盐(amphoacetate)或两性丙酸盐，例如N-烷基-N，N-二甲基甘氨酸铵，如椰油烷基二甲基甘氨酸铵、N-酰基氨基丙基-N，N-二甲基甘氨酸铵，如椰油-酰基氨基丙基二甲基甘氨酸铵、2-烷基-3-羧基甲基-3-羟基乙基咪唑啉，其在烷基或酰基基团中各自具有8至18个碳原子，以及椰油-酰基氨基乙基羟基乙基羧基甲基甘氨酸酯。 

在两性表面活性剂中，除了C8/18-烷基或C8/18-酰基基团之外，可使用在分子中包含至少1个游离氨基以及至少1个-COOH或-SO₃H基团，并且能够可形成内盐的那些表面活性化合物。适合的两性表面活性剂的实例是N-烷基甘氨酸、N-烷基丙酸、N-烷基氨基丁酸、N-烷基亚氨基二丙酸、N-羟基乙基-N-烷基酰氨基丙基甘氨酸、N-烷基牛磺酸、N-烷基肌氨酸、2-烷基氨基丙酸以及烷基氨基乙酸，其在各自烷基基团中具有约8至18个碳原子。两性表面活性剂的其它实例是N-椰油-烷基氨基丙酸盐、椰油-酰基氨基乙基氨基丙酸盐以及C12/18-丙烯酰基肌氨酸。 

用于配制组合物的优选乳化剂或表面活性剂与用于微珠制备的那些乳化剂或表面活性剂相同。 

适合的增稠剂是，例如多糖，特别是黄原胶、瓜尔胶-瓜尔胶、琼脂-琼脂、藻酸盐和纤基乙酸钠(tylose)、羧甲基纤维素和羟乙基纤维素；此外如高分子量脂肪酸聚乙二醇单酯和二酯；聚丙烯酸酯(如Carbopols^TM或Synthalens^TM)；聚丙烯酰胺；聚乙烯基醇和聚乙烯基吡咯酮；表面活性剂，如乙氧基化的脂肪酸甘油酯；脂肪酸与多元醇的酯，如季戊四醇或三羟甲 基丙烷；具有有限的同系物分布的脂肪醇乙氧基化物或烷基寡糖苷，以及电解质，如氯化钠和氯化铵。 

用于增稠油相的增稠剂是所有本领域技术人员所已知的增稠剂。就此而言，特别提及蜡，如氢化蓖麻油蜡、蜂蜡或微晶蜡。还可使用无机增稠剂，如二氧化硅、氧化铝或层状硅酸盐(如锂蒙脱石、锂藻土、皂石)。就此而言，可将这些用于油相的无机增稠剂进行疏水性改性。就此而言，可将Aerosil、层状硅酸盐和/或脂肪酸的金属盐，如硬脂酸锌特别地用于将油包水乳液进行增稠/稳定。 

作为用于水性表面活性剂体系的粘度调节剂，配制物可包含例如NaCl、低分子量非离子表面活性剂，如Cocoamide DEA/MEA和Laureth-3、或聚合的高分子量缔合高乙氧基化的脂肪衍生物，如PEG-200氢化棕榈酸甘油酯。 

可使用的UV光保护过滤剂是例如能够吸收紫外光线并且能够以更长的波长辐射方式如热能再次释放所吸收能量的有机物质。UVB过滤剂可以是油溶的或水溶的。可提及的油溶的UVB光保护过滤剂是如：3-苯亚甲基樟脑及其衍生物，如3-(4-甲基苯亚甲基)樟脑(INCI：4-甲基苯亚甲基樟脑，商用名Eusolex 6300)、4-氨基苯甲酸衍生物，如4-(二甲基氨基)-苯甲酸2-乙基己酯、4-(二甲基氨基)苯甲酸2-乙基己酯和4-(二甲基氨基)苯甲酸戊酯、肉桂酸的酯，如4-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯(INCI：甲氧基肉桂酸辛酯，商用名：Parsol MCX)、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸2-乙基己酯(INCI：氰双苯丙烯酸辛酯；商用名Uvinul N-539)、水杨酸酯，如水杨酸2-乙基己酯、水杨酸4-异丙基苯甲酯、原膜散酯(salicylic acidhomomenthyl ester)、二苯甲酮衍生物，如2-羟基-4甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4′-甲基二苯甲酮、2，2′-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-(4′-二乙基氨基-2′-羟基苯甲酰基)-苯甲酸己酯(亦称为：氨基二苯甲酮)、亚苯甲基丙二酸的酯、如4-甲氧基亚苯甲基丙二酸二-2-乙基己酯；三嗪衍生物，如4，4′，4″-(1，3，5-三嗪-2，4，6-三基三亚氨基)-三苯甲酸三(2-乙基己酯)(亦称为：2，4，6-三-[苯胺基-(对羰基-2′-乙基-1′-己氧基)]-1，3，5-三嗪、INCI：辛基三嗪酮，由BASF Aktiengesellschaft以商用名UVINUL 

T 150进行市售)、2，4-双-{[4-(2-乙基-己氧基)-2-羟基]-苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪(INCI：非 均三嗪(Aniso Triazine)，以商用名Tinosorb 

S可商购)、二辛基丁基酰胺基三嗪酮(INCI：二辛基丁酰胺基三嗪酮)、CAS号：288254-16-0的2，4-双-[5-1(二甲基丙基)苯并噁唑-2-基-(4-苯基)-亚胺基]-6-(2-乙基己基)-亚胺基-1，3，5-三嗪，其以商用名Uvasorb 

K2A可得自3V Sigma、2，4-双-{[4-(2-乙基-己基氧基)-2-羟基]-苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪(INCI：双-乙基己基氧基苯酚甲氧基苯基三嗪)，以商用名Tinosorb 

S可得自CIBA-Che-mikalien GmbH以及2-[4，6-双(2，4-二甲基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基]-5-(辛基氧基)苯酚(CAS号：2725-22-6)；丙烷-1，3-二酮，如1-(4-叔丁基苯基)-3-(4′-甲氧基苯基)丙烷-1，3-二酮。 

在此特别优选使用的UV-B过滤剂是UV光保护过滤物质2-氰基-3-苯基-肉桂酸2-乙基己酯、2，4-双-[[4-(2-乙基-己基氧基)-2-羟基]-苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪、二辛基丁基酰胺基三嗪酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4′-甲基二苯甲酮、2，2′-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮、4-甲氧基苯丙二酸二-2-乙基己酯、2，4，6-三-[苯胺基-(对羰基-2′-乙基-1′-己基氧基)]-1，3，5-三嗪、2，4-双-[5-1(二甲基丙基)苯并噁唑-2-基-(4-苯基)-亚胺基]-6-(2-乙基己基)-亚胺基-1，3，5-三嗪、2，4-双-{[4-(2-乙基-己基氧基)-2-羟基]-苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪以及2-[4，6-双(2，4-二甲基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基]-5-(辛基氧基)苯酚。 

优选使用的UV-A过滤剂是1-(4-叔丁基苯基)-3-(4′-甲氧基苯基)丙烷-1，3-二酮、1-苯基-3-(4′-异丙基苯基)丙烷-1，3-二酮。 

特别优选的UV-A过滤剂是4-(叔丁基)-4′-甲氧基二苯甲酰基甲烷(CAS号：70356-09-1)，其由Givaudan以商标Parsol 

1789，以及由Merck以商用名Eusolex 

9020进行商售，以及根据DE 102004027475所述的羟基二苯甲酮，特别优选2-(4′-二乙基氨基-2′-羟基苯甲酰基)-苯甲酸己酯(亦称为：氨基二苯甲酮)，其以商用名Uvinul APlus可得自BASF。 

此外，其它优选的UV过滤物质是所谓的宽谱(broad-band)过滤剂，也就是既吸收UV-A也吸收UV-B辐射的过滤物质。在该类物质中，优选使用以商用名Tinosorb 

M的可得自CIBA-Chemikalien GmbH的2，2′-亚甲基-双-(6-(2H-苯并***-2-基)-4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚、以及INCI名为甲酚曲唑三硅氧烷的2-(2H-苯并***-2-基)-4-甲基-6-[2-甲基-3-[1，3，3，3-四甲 基-1-[(三甲基甲硅烷基)氧基]二硅氧烷基]丙基]-苯酚(CAS号：155633-54-8)。 

可优选多种不同UV过滤剂的组合使用。 

除了所述的可溶性物质之外，不溶性的颜料，即细分散的金属氧化物和盐也可以用于此目的，如二氧化钛、氧化锌、氧化铁、氧化铝、氧化铈、氧化锆、硅酸盐(滑石)、硫酸钡和硬脂酸锌。就此而言，颗粒应当具有小于100nm，如在5至50nm之间，并且特别是在15至30nm之间的平均直径。它们可具有球形，但是也可使用那些具有椭圆形或其它偏离球形的形状的颗粒。微粉化的有机颜料，如具有＜200nm粒度的2，2′-亚甲基-双-{6-(2H-苯并***-2-基)-4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯酚}是相对较新型的光保护过滤剂，其可得自如50％浓度的水性分散体。 

此外，其它适合的UV光保护过滤剂参见在 

 122，543(1996)的P.Finkel的综述。 

UV光保护过滤剂的用量优选地是基于配制物0.01至15％、优选0.05至10％、特别优选0.1至5％。 

除了如上所述的两组主要的UV光保护过滤剂之外，还可使用抗氧化剂类型的次级光保护过滤剂，其阻断当UV辐射渗透入皮肤时触发的光化学反应。可使用的抗氧化剂是如超氧化物歧化酶、生育酚(维生素E)、二丁基羟基甲苯以及抗坏血酸(维生素C)。 

可用于提高流体性质以及使用性质的水溶助剂是如乙醇、异丙醇或多元醇。在此可使用的多元醇可具有2至15个碳原子以及至少两个羟基基团。典型的实例是：丙三醇、亚烷基二醇，如乙二醇、二甘醇、丙二醇、丁二醇、己二醇以及具有100至1000道尔顿平均分子量的聚乙二醇；具有1.5至10的自缩合度的工业级低聚甘油混合物，如具有40至50重量％一缩二甘油含量的工业级一缩二甘油混合物；羟甲基化合物，特别是如三羟甲基乙烷、三羟甲基丙烷、三羟甲基丁烷、季戊四醇以及二季戊四醇；低级烷基糖苷，特别是如那些在烷基基团具有1至4个碳原子的烷基糖苷，如甲基糖苷、丁基糖苷；具有5至12个碳原子的糖醇，如山梨糖醇或甘露糖醇；具有5至12个碳原子的糖，如葡萄糖或蔗糖；氨基糖，如葡萄糖胺。 

可使用的固体物是如氧化铁颜料、二氧化钛或氧化锌颗粒以及其它的 以“UV稳定剂”提及的固体物。还可使用产生特定的感知效果的颗粒，如尼龙12、氮化硼、聚合物颗粒，如聚丙烯酸酯或聚甲基丙烯酸酯颗粒、或聚硅氧烷弹性体。可使用的填料包括淀粉以及淀粉衍生物，如木薯淀粉、二淀粉磷酸酯、辛烯基琥珀酸淀粉铝或辛烯基琥珀酸淀粉钠、以及不具有主要的UV过滤剂以及着色作用的颜料，如Aerosile 

(CAS号：7631-86-9)。 

可使用的如用于改进耐水性的成膜剂是如聚氨酯、二甲基硅油共聚多元醇、聚丙烯酸酯或PVP/VA共聚物(PVP＝聚乙烯基吡咯烷酮、VA＝乙酸乙烯酯)。可使用的脂肪可溶的成膜剂是：如基于聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)的聚合物、聚乙烯基吡咯烷酮共聚物、PVP/十六碳烯共聚物或PVP/二十碳烯共聚物。 

可使用的珠光助剂是如乙二醇二硬脂酸酯或PEG-3二硬脂酸酯。 

可能的除臭活性化合物是如气味遮蔽剂，如通常的芳香成分、气味吸收剂，如在专利公开说明书DE 4009347中所描述的层状硅酸盐，以及特别在这些化合物之中的蒙脱石、高岭石、ilite、贝得石、绿脱石、皂石、锂蒙脱石、膨润土、蒙皂石，此外，如蓖麻油酸的锌盐。也可以加入微生物抑制物质。微生物抑制物质是如2，4，4′-三氯-2′-羟基二苯基醚(Irgasan)、1，6-二-(4-氯苯基-二胍基)-己烷(氯己定)、3，4，4′-三氯对称二苯脲、季铵化合物、丁香油、薄荷油、百里香油、柠檬酸三乙酯、法呢醇(3，7，11-三甲基-2，6，10-十二烷三烯-1-醇)、乙基己基甘油醚、3-辛酸聚甘油酯(TEGO 

CosmoP813，Evonik Degussa)以及在专利公开说明书DE 198 55 934、DE 37 40 186、DE 39 38 140、DE 42 04 321、DE 42 29 707、DE 42 29 737、DE 42 38 081、DE 43 09 372、DE 43 24 219和EP 0 666 732中所描述的活性剂。 

可使用的止汗活性化合物是收敛剂、如碱性氯化铝，如羟铝基氯化物(“ACH”)和甘氨酸铝锆盐(“ZAG”)。 

可使用的驱虫剂是如N，N-二乙基-间甲苯甲酰胺、1，2-戊二醇或驱虫剂3535。 

可使用的仿晒剂是如二羟基丙酮和赤藓酮糖。 

可使用的防腐剂是如单独或多种的对羟基苯甲酸烷基酯与苯氧基乙醇的混合物。所述的对羟基苯甲酸烷基酯可以是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和/或对羟基苯甲酸丁酯。除了苯氧基乙醇 之外，还可使用其它的醇，如苯甲醇或乙醇。还可使用其它常规的防腐剂，如山梨酸或苯甲酸、水杨酸、2-溴-2-硝基丙烷-1，3-二醇、氯乙酰胺、重氮烷基脲、DMDM乙内酰脲、丁基氨基甲酸碘代丙炔酯、羟基甲基甘氨酸钠、甲基异噻唑啉、氯甲基异噻唑啉、乙基己基丙三醇或辛乙二醇(CaprylylGlycol)。 

可使用的调节剂是如有机四价化合物，如十六烷基三甲基氯化铵、二鲸蜡基二甲基氯化铵、二十二烷基三甲基氯化铵、二硬脂基二甲基氯化铵、二十二烷基三甲基甲基硫酸铵、二硬脂酰基乙基二甲基氯化铵(distearoylethyldimonium chloride)、棕榈酰胺丙基三甲基氯化铵、瓜儿胶羟丙基三甲基氯化铵、羟丙基-瓜尔胶、羟丙基-三甲基氯化铵或Quaternium-80，或还可是胺衍生物，如氨基丙基二甲硅油或硬脂酰胺丙基二甲基胺。 

可使用的芳香剂是天然或合成的散发气味物质或其组合物。天然的散发气味物质是得自花(百合、薰衣草、玫瑰、茉莉、橙花、依兰)、茎和叶(天竺葵、广藿香、橙叶)、果实(茴香籽、芫荽、香菜、杜松子)、果皮(佛手柑、柠檬、橙)、根(肉豆蔻、当归、西芹、小豆蔻、木香、鸢尾、百里香)、针和侧枝(云杉、冷杉、松树、中欧山松)、树脂和香脂(白松香、榄香、安息香、没药、乳香、防风根)的提取物。此外还可以是动物类原材料，如麝猫香和海狸香。典型的散发香气的合成化合物是酯、醚、醛、酮和烃类的产物。酯类的散发香气的化合物是如乙酸苯甲酯、异丁酸苯氧基乙酯、乙酸对叔丁基环己酯、乙酸里哪酯、乙酸二甲基苯甲基甲酯、乙酸苯基乙酯、苯甲酸里哪酯、甲酸苯甲酯、苯基甘氨酸乙基甲酯、环己基丙酸烯丙酯、丙酸苏合香酯和水杨酸苯甲酯。所述的醚包括如苯甲基乙基醚，所述的醛包括如具有8至18个碳原子的直链烷醛、柠檬醛、香茅醛、香茅基氧基乙醛、兔耳草醛、羟基香茅醛、铃兰醛以及波洁洪醛(bourgeonal)，所述的酮包括如紫罗兰酮、α-异甲基紫罗兰酮和甲基柏木酮，所述的醇包括茴香脑、香茅醇、丁香酚、异丁香酚、香叶醇、里哪醇、苯基乙醇和萜品醇，所述的烃主要包括萜类和香脂类。可使用一同产生令人愉悦的芳香气氛的多种散发香气物质的混合物。通常作为芳香组分使用的低挥发性的精油也是适于作为芳香剂的，如鼠尾草油、春黄菊油、丁香油、蜂花油、薄荷油、肉 桂叶油、菩提花油、杜松子油、香根油、乳香油、格蓬油、labolanum油和杂薰衣草油。可单独地或混合地使用佛手柑油、二氢月桂烯醇、铃兰醛、新铃兰醛、香茅醇、苯乙醇、α-己基肉桂醛、香叶醇、苯甲基丙酮、兔耳草醛、里哪醇、乙氧基甲氧基环十一烷(Boisambrene Forte)、龙涎呋喃、吲哚、二氢茉莉酮酸甲酯(hedione)、sandelice、柠檬油、橘油、橙油、戊基羟乙酸烯丙酯、cyclovertal、杂薰衣草油、香紫苏油、β-突厥酮、波旁天竺葵油、水杨酸环己酯、Vertofix Coeur、Iso-E-Super、Fixolide NP、evernyl、iraldein gamma、苯乙酸、乙酸香叶酯、乙酸苯甲酯、玫瑰醚、romilate、irotyl、floramate。 

可使用的染料是适合并被批准用于化妆品目的的物质，如在出版物“Kosmetische  

[Cosmetic Colouring Agents]”，DeutscheForschungsgemeinschaft染料委员会，Verlag Chemie，Weinheim，1984的第81至106页所汇总的物质。这些染料常规地以基于混合物总重的0.001至0.1重量％的浓度进行使用。 

应理解生物活性化合物是指如生育酚、生育酚乙酸酯、生育酚棕榈酸酯、抗坏血酸、脱氧核糖核酸、辅酶Q10、视黄醇、红没药醇、尿囊素、植烷三醇、泛醇、AHA酸、氨基酸、透明质酸、α-羟基酸、聚谷氨酸、肌酸(及肌酸衍生物)、胍(及胍衍生物)、神经酰胺、植物鞘氨醇(及植物鞘氨醇衍生物)、鞘氨醇(及鞘氨醇衍生物)、假神经酰胺、精油、缩氨酸、蛋白水解物、植物提取物、鞘脂以及维生素复合物。 

配制物可包含的护理助剂是例如乙氧基化的脂肪酸甘油酯，如PEG-7甘油椰油酸酯、或阳离子聚合物，如聚季铵盐-7或聚甘油酯。 

可使用的超级油化剂是如羊毛脂和卵磷脂、以及聚乙氧基化或酰基化的羊毛脂和卵磷脂衍生物、脂肪酸多元醇酯、单酸甘油酯和脂肪酸烷醇酰胺，后者同时作为泡沫稳定剂。 

可使用的溶剂是如脂族醇，如乙醇、丙醇或1，3-丙二醇；环状碳酸酯，如碳酸乙烯酯、碳酸丙烯酯、碳酸甘油酯；单羧酸酯或多羧酸酯，如乙酸乙酯、乳酸乙酯、己二酸二甲酯和己二酸二乙酯、丙二醇、一缩二丙二醇、丙三醇、碳酸甘油酯或水。 

为了提高组合物的耐水性并因此还提高UV保护的性能，另一优选使 用的附加成分是成膜剂的组类。优选使用的成膜剂是聚氨酯、二甲硅油共聚多元醇、聚丙烯酸酯或PVP/VA共聚物(PVP＝聚乙烯基吡咯烷酮、VA＝乙酸乙烯酯)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯基吡咯烷酮共聚物、PVP/十六碳烯共聚物或PVP/二十碳烯共聚物 

另一优选使用的附加成分是除臭剂和止汗剂活性化合物的组类。从该组中，优选使用收敛剂，特别优选碱性氯化铝，如羟铝基氯化物(“ACH”)和甘氨酸铝锆盐(“ZAG”)。 

在本发明方法的步骤(c)结束后或在步骤(a)、(b)和/或(c)进行期间，可将所述的附加成分加入至组合物中。特别地，在当进行步骤(b)和/或(c)时，可加入防腐剂。优选将所述的附加成分加入至步骤(c)中所得的分散体中。 

可将本发明的组合物用作如皮肤护理、面部护理、头部护理、身体护理、私密护理、足部护理、头发护理、指甲护理、牙齿护理或口腔护理产品。因此，本发明的组合物可以是选自皮肤护理、面部护理、头部护理、身体护理、私密护理、足部护理、头发护理、指甲护理、牙齿护理或口腔护理组合物的个人护理或化妆品组合物。 

可将本发明的组合物以乳液、悬浮液、溶液、乳霜、油膏、糊、凝胶、油、粉末、气雾、条状物、喷雾、清洁产品、彩妆(make-up)或防晒配制物或面部洗液的形式使用。因此，本发明的组合物可以是乳液、悬浮液、溶液、霜、油膏、糊、凝胶、油、粉末、气雾、条状物、喷雾、清洁产品、彩妆或防晒配制物或脸部洗液。 

本发明的组合物，优选化妆品、皮肤病学或个人护理的组合物，优选地包含0.1至60重量％，优选0.5至25重量％，更优选1至10重量％，并且特别优选2至5重量％的本发明的微珠。 

可将本发明的微珠或本发明的组合物或通过本发明的方法得到的分散体用于保湿剂、个人护理、头发护理、皮肤护理或化妆品组合物的制备。 

特别地，可将本发明的微珠或本发明的组合物或通过本发明的方法得到的分散体用作局部真皮填充剂。本发明的微珠优选地聚集在皮肤的皱纹以及褶皱上。因此，当被用于配制物或作为局部真皮填充剂时，本发明的产品显示出许多益处。特别的益处是皱纹深度的减少以及皮肤粗糙度的减少。皮肤变得更有光泽并具有更好的亮度(radiance)。因此，本发明的另一 方面是本发明的微珠或本发明的组合物或通过本发明的方法得到的分散体在制备局部真皮填充剂用于处理皱纹和粗糙皮肤中的用途。 

以下所列的实施例以示例的方式描述了本发明，而不是将本发明限制在所述实施例所明确的实施方案中，从整体的说明书和权利要求，本发明的范围是清楚明显的。 

实施例 

实施例1：在椰油酸癸酯中的交联微颗粒的制备 

在2分钟内，使用手持搅拌机(SG Zauberstab，Typ M 1222-Speed)在1档下通过强烈搅拌将70g 6重量％的透明质酸钠(HyaCare EvonikGoldschmidt GmbH)在NaOH水溶液(0.2M)中的溶液加入至27g椰油酸癸酯(TEGOSOFT 

DC，Evonik Goldschmidt GmbH)以及3g聚甘油4-二异硬脂酸酯/聚羟基硬脂酸酯/癸二酸酯(ISOLAN GPS，Evonik GoldschmidtGmbH)的混合物中。使用手持搅拌机在2档下将所得混合物匀化3分钟。通过搅拌将512μl二乙烯基砜在3g椰油酸癸酯和5ml乙醇混合物中的溶液加入至匀化的混合物中。将所得的乳液再搅拌1.5小时。然后通过在搅拌下加入乳酸(在水中90重量％)将pH值调节至9。所得产物是白色的分散体。 

实施例2：在碳酸二乙基己酯中的交联微颗粒的制备 

在2分钟内，使用手持搅拌机(1档)通过强烈搅拌将在66g NaOH(0.2M)水溶液中的4.2g透明质酸钠(HyaCare 

Evonik Goldschmidt GmbH)的溶液加入至27g碳酸二乙基己酯(TEGOSOFT 

DEC，Evonik GoldschmidtGmbH)以及3g聚甘油4-二异硬脂酸酯/聚羟基硬脂酸酯/癸二酸酯(ISOLAN 

GPS，Evonik Goldschmidt GmbH)的混合物中。使用手持搅拌机在2档下将所得预制备-乳液匀化2分钟。将358μl二乙烯基砜在3g碳酸二乙基己酯中的溶液逐滴加入至匀化的预制备-乳液中。在50℃下将所得的混合物再搅拌0.5小时。所得产物是白色的分散体。 

使用显微镜拍摄的分散体的照片(图1)清楚地显示了微珠(颗粒)的球形特征。 

使用光学粒度仪(Accusizer，公司：Particle Sizing Systems)测定粒度分 布。在图2中显示了粒度分布。 

实施例3：使用PEG/PPG-10/1二甲硅油作为乳化剂，在椰油酸癸酯中的交联微颗粒分散体的制备 

在2分钟内，使用手持搅拌机(1档)通过强烈搅拌将在92g NaOH(0.2M)水溶液中的5.9g透明质酸钠(HyaCare 

Evonik Goldschmidt GmbH)的溶液加入至38.2g椰油酸癸酯(TEGOSOFT 

DC，Evonik Goldschmidt GmbH)以及4.2g PEG/PPG-10/1二甲硅油(ABIL EM 90，Evonik GoldschmidtGmbH)的混合物中。使用手持搅拌机在2档下将所得预制备-乳液匀化2分钟。将在3.8g椰油酸癸酯中的450μl二乙烯基砜的溶液逐滴加入至匀化的预制备-乳液中。在室温下将所得的混合物再搅拌0.5小时。所得产物是白色的分散体。 

实施例4：使用单油酸甘油酯作为乳化剂，在碳酸二乙基己酯中的交联微颗粒分散体的制备

根据实施例2进行制备。使用3g单油酸甘油酯(TEGIN 

O V，EvonikGoldschmidt GmbH)代替3g聚甘油4-二异硬脂酸酯/聚羟基硬脂酸酯/癸二酸酯。 

实施例5：荧光标记的透明质酸钠交联微颗粒的制备 

在2分钟内，使用手持搅拌机(1档)通过强烈搅拌将在88g NaOH(0.2M)水溶液中的5.6g透明质酸钠(HyaCare 

Evonik Goldschmidt GmbH)的溶液加入至36g碳酸二乙基己酯(TEGOSOFT 

DEC，Evonik GoldschmidtGmbH)以及4g聚甘油4-二异硬脂酸酯/聚羟基硬脂酸酯/癸二酸酯(ISOLAN 

GPS，Evonik Goldschmidt GmbH)的混合物中。使用手持搅拌机在2档下将所得预制备-乳液匀化2分钟。将4g碳酸二乙基己酯中的486μl二乙烯基砜的溶液逐滴加入至匀化的预制备-乳液中。在50℃下将所得的混合物再搅拌0.5小时。所得产物是淡绿色的分散体。 

实施例6：将交联透明质酸钠微颗粒分散体应用于猪皮 

将约2cm²的冷冻猪皮解冻并随后进行剃毛。使用抹刀将0.1ml实施例5的分散体分散至猪皮上。然后使用荧光显微镜(相差显微镜，公司：Leica，放大倍数：10x)检查猪皮。在图3中显示了该显微镜图片的照片。可清楚地看到荧光颗粒聚集在皮肤皱纹处。 

实施例7：使用异硬脂酸用于中和反应的交联微颗粒分散体的制备 

根据实施例1进行制备。使用异硬脂酸(基于分散体总重的1重量％)代替乳酸调节pH值。所得的产物是白色的分散体。 

实施例8：透明质酸钠的荧光改性 

将10g透明质酸钠(HyaCare 

)悬浮于100ml甲苯中。将0.025g DTAF(5-(4，6-二氯-均三嗪-2-基氨基)荧光素盐酸盐，Sigma)溶解于15ml乙醇中，并将该溶液加入至HyaCare 悬浮液中。在室温下将悬浮液搅拌16小时并进行过滤。使用乙醇洗涤固体残余物，并在减压条件下进行干燥。 

实施例9：荧光标记的颗粒分散体的制备 

在搅拌下(手持搅拌机，1档)将116g在0.2M NaOH中的实施例9的6％(重量比)荧光透明质酸钠溶液加入至43.3g椰油酸癸酯(TEGOSOFT 

DC)以及4.8g ISOLAN 

GPS的混合物中。使用手持搅拌机在2档下将所得乳液匀化3分钟。在搅拌下将在4.8g椰油酸癸酯和5ml乙醇的混合物中的572μl二乙烯基砜加入至乳液中。在室温下继续搅拌1小时，然后在搅拌下加入8g异硬脂酸。所得的分散体的pH值为9。 

实施例10：包含HA颗粒的化妆品配制物： 

将在实施例9中所得的荧光标记的颗粒分散体配制为化妆品乳霜。在表1中给出了该乳霜的组成(以重量％计)。 

表1：包含荧光标记颗粒的化妆品乳霜的组成 

实施例11：包含交联透明质酸的乳霜 

在搅拌下通过混合以下组分(表2)制备含0.11％交联透明质酸(CL-HA)的乳霜： 

表2：实施例11的乳霜组成(以重量％计) 

聚甘油3-甲基葡萄糖二油酸酯    3.0％ 

硬脂酸甘油酯                  2.0％ 

硬脂醇                        1.0％ 

硬脂酸乙基己酯                9.5％ 

辛酸/癸酸甘油三酯             9.5％ 

水                            72.4％ 

交联HA分散体(实施例7)         2.6％ 

将配制物涂敷在12位评审员的前臂内侧。使用数码相机(Visioscan VC98，Courage & Khazaka，科隆，德国)拍摄涂覆前以及涂覆2和7小时后前臂内侧的照片。该照片是分为256灰度级的数码黑白照片。根据灰度级分布，软件(Visioscan VC 98随附的)计算了不同的皮肤参数，如起皮程度(scaliness)、粗糙度、表面、体积或纹理的参数。 

1.皮肤起皮程度 

基于灰度级分布，软件计算了光像素的比例以评估皮肤起皮程度的参数。以下的表3显示了起皮程度的下降。 

表3：皮肤起皮程度的结果(％) 

在涂覆2小时后，对照区域(未处理)与使用载体或CL-HA处理的区域显示了皮肤起皮程度的降低。对于对照区域和经载体处理的区域，该效果在7小时后降低，而由CL-HA产生的起皮程度的降低在7小时后仍然保持。在图4中给出了显示皮肤起皮程度测试结果的图。

2.表面和体积 

参数“表面”计算了皮肤的总表面积。这意味着皱纹数越少或皱纹越小，表面积也越小。参数“体积”描述了需要将皱纹填充的体积。如果由于试验配制物而减少了皱纹的深度和数量，这两个参数将下降。由此，计算了在使用试验配制物处理后两个参数变化的总和： 

总和_{表面积-体积}＝Δ表面积+Δ体积[％]。 

在表4中给出了所述的结果。 

表4：总和_{表面积-体积}的结果(％) 

在涂覆2小时后，表面和体积因载体和包含CL-HA的配制物而降低。 对于经载体处理的皮肤，在7小时后该积极效果消失，而对于使用CL-HA处理的测试区域，效果甚至提高了。在图5中给出了显示表面和体积测试结果的图。 

3.粗糙度参数R1-R5 

粗糙度参数R1、R2、R3、R4和R5来自金属工业。它们相当于在DIN4762-4768中所定义的粗糙度参数Rt、Rm、Rz、Rp和Ra。它们描述了深层和微细皱纹的深度。如果皱纹的深度减少，所有的粗糙度参数将下降。由此，将所述的参数概括为： 

总和_R1-R5＝ΔR1+ΔR2+ΔR3+ΔR4+ΔR5

以下的表5显示了总和_R1-R5的结果。 

表5：总和_R1-R5的结果(％) 

在涂覆2小时后，皮肤粗糙度因载体和包含CL-HA的配制物而降低。对于经载体处理的测试区域，在7小时后该积极效果消失，而对于使用CL-HA处理的测试区域，效果几乎保持不变。在图6中给出了显示粗糙度测试结果的图。

4.纹理参数 

纹理参数(能量NRJ、熵ENT、均匀性HOM、对比度CONT和方差VAR)涉及邻近像素的色彩差异。它们描述了皮肤的色调的均匀性，这表示纹理参数的改进与经改善的皮肤外观是相关联的。使用以下方程式概况了该参数： 

总和_tex-par＝ΔNRJ+ΔENT+ΔHOM-ΔCONT-ΔVAR 

以下的表6显示了总和_tex-par的结果。 

表6：总和_tex-par(％)的结果 

在涂覆2小时后，载体和具有CL-HA的试验配制物改进了纹理参数。对于经CL-HA处理的测试区域，在7小时后该效果依旧保持，而对于使用载体处理的皮肤，该效果降低。在图7中给出了显示纹理参数测试结果的图。 

因此，本发明的微珠在减少皱纹和皮肤起皮程度上，以及在改进皮肤纹理参数以产生更加均匀的皮肤色调上是有效的。 

Claims (24)

1.制备交联的透明质酸微珠的方法，所述的方法包括以下步骤：

(a)提供包含透明质酸或其盐的碱性水溶液；

(b)在油相中，从步骤(a)的混合溶液中形成具有1纳米至1毫米的平均直径的微滴，以形成油包水的乳液，其中基于油相和水的总和，油相的使用量是20重量％至小于50重量％；

(c)向乳液中加入包含交联剂的溶液，由此透明质酸与所述交联剂发生反应以提供交联的透明质酸微珠；并且

(d)任选地加工步骤(c)中所得的交联的透明质酸微珠的分散体；

其中使用选自除烃、芳烃以及十六烷基乙基己酸酯之外的用于化妆品或个人护理配制物的标准软化剂的软化剂作为油相。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述透明质酸或其盐是在芽孢杆菌宿主细胞中重组制备的。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述透明质酸或其盐具有在50至3000kDa之间的平均分子量。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述碱性水溶液包含浓度在0.1％至40％(w/v)之间的溶解的透明质酸或其盐。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述碱性水溶液包含浓度在0.001至2.0M之间的溶解的氢氧化钠。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中在步骤(c)的混合溶液中包含其量使得透明质酸或其盐∶交联剂的重量比在1∶1至100∶1之间的交联剂，所述重量比基于干重。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述交联剂选自二乙烯基砜、甘油二缩水甘油醚或1，4-丁二醇二缩水甘油醚。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中任选存在的步骤(d)包括使用渗析膜将交联微珠对去离子水进行渗析，所述渗析膜允许具有小于13000道尔顿尺寸的分子的自由扩散。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其中任选存在的步骤(d)包括使用缓冲液或酸将交联微珠的pH值中和至7.0至9.5。

10.根据权利要求1或2所述的方法，其中在步骤(b)中，将聚甘油-4-二异硬脂酸酯/聚羟基硬脂酸酯/癸二酸酯或PEG/PPG-10/1二甲硅油用作乳化剂。

11.包含使用二乙烯基砜交联的透明质酸或其盐的微珠，所述微珠通过根据权利要求1至10中任一项所述的方法得到。

12.根据权利要求11所述的微珠，其具有在1纳米至1毫米范围内的平均直径。

13.根据权利要求11或12所述的微珠，其是通过使用透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸铵、透明质酸钙、透明质酸镁、透明质酸锌或透明质酸钴作为透明质酸的无机盐而得到的。

14.根据权利要求11或12所述的微珠，其还包含活性成分、水可溶的赋形剂和/或防腐剂。

15.根据权利要求14所述的微珠，其中所述活性成分是个人护理活性物质。

16.组合物，其包含如在权利要求11至15中任一项所定义的微珠。

17.根据权利要求16所述的组合物，其包含至少一种选自以下组的附加成分：软化剂、乳化剂和表面活性剂、增稠剂/粘度调节剂/稳定剂、UV光保护过滤剂、抗氧化剂、水溶助剂、固体物和填料、成膜剂、珠光助剂、除臭剂和止汗活性化合物、驱虫剂、仿晒剂、防腐剂、调节剂、芳香剂、染料、生物活性化合物、护理助剂、超级油化剂和溶剂。

18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述水溶助剂包括多元醇。

19.根据权利要求16至18中任一项所述的组合物，其中所述组合物是选自皮肤护理、头部护理、私密护理、指甲护理、或口腔护理组合物的个人护理或化妆品组合物。

20.根据权利要求16至18中任一项所述的组合物，其中所述组合物是选自面部护理、身体护理、足部护理、头发护理或牙齿护理组合物的个人护理或化妆品组合物。

21.根据权利要求16至18中任一项所述的组合物，其中所述组合物是乳液、悬浮液、溶液、乳霜、油膏、糊、凝胶、油、粉末、气雾、条状物、喷雾、清洁产品、彩妆或防晒配制物或面部洗液。

22.如根据权利要求11至15中任一项所定义的微珠、或如根据权利要求16至21中任一项所定义的组合物、或通过根据权利要求1至10中任一项方法所得到的分散体在制备保湿剂、个人护理、头发护理、皮肤护理或化妆品组合物中的用途。

23.如根据权利要求11至15中任一项所定义的微珠、或如根据权利要求16至21中任一项所定义的组合物、或通过根据权利要求1至10中任一项方法所得到的分散体作为局部真皮填充剂的用途。

24.如根据权利要求11至15中任一项所定义的微珠、或如根据权利要求16至21中任一项所定义的组合物、或通过根据权利要求1至10中任一项方法所得到的分散体在制备用于皱纹和粗糙皮肤处理的局部真皮填充剂中的用途。

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