CN101554420A - 黄芩地锦草散及其制备工艺和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明黄芩地锦草散由下列重量份数的药物制成：黄芩600－1000份，地锦草1200－2000份，秦皮600－1000份，地榆600－1000份。黄芩地锦草散制备方法，包括以下步骤：黄芩加水煎煮三次，合并煎液，滤过，低温干燥，粉碎；地锦草、秦皮、地榆加8～12倍量水煎煮二次，喷雾干燥制成粉状，加入黄芩提取物及50－100份淀粉，均匀，即得。黄芩地锦草散制剂应用于治疗畜禽大肠湿热，痢疾，血热毒盛，泻泄腹痛，肠炎菌痢症状。本药具有剂量小、有效成分含量高、无毒副作用、无药残，高效、速效，而且贮存方便、运输方便、给药方便等特点，符合新中兽药制剂特点，具有潜在的社会效益和经济效益。

Description

黄芩地锦草散及其制备工艺和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种具有清热燥湿，凉血解毒，止泻止痢功效的中兽药配方及其质量控制方法。本发明属中药领域。

背景技术

痢疾、泄泻是畜禽的常见病、多发病，除可引起死亡外，还可降低饲料利用率，使生长发育受阻，危害养殖业的发展。西医认为痢疾、泄泻多由细菌引起，如大肠杆菌、C型魏氏梭菌、沙门氏杆菌、密螺旋体等。治疗中主要以抗菌药为主，如氯霉素、痢菌净、土霉素、二硝基咪唑等，而该类药物容易产生药物蓄积中毒现象，被杀灭的细菌溶解后直接被机体吸收.造成毒素危害，人们长期食用该类肉、蛋品，可能影响人们的身体健康，并且在杀灭有害菌的同时对肠道有益菌也有杀灭作用。

目前，有很多中药制剂广泛用于治疗痢疾、泄泻，安全性高。该类中药制剂主要是以散剂为主，由于传统散剂通常是由中药直接粉碎，因此吸收功能低、生物利用度低、疗效缓慢、用量大。

发明内容

本发明目的是提供一种具有清热燥湿，凉血解毒，止泻止痢的功效中兽药配方黄芩地锦草散及其制备工艺和质量控制方法。

本发明黄芩地锦草散由下列重量份数的药物制成：黄芩600-1000份地锦草1200-2000份  秦皮600-1000份  地榆600-1000份。

本发明的黄芩地锦草散制备方法包括以下步骤：

上述黄芩加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.05～1.10(80℃测)，于60～80℃时加2mol/L盐酸溶液调节PH值至1.0～2.0，保温30～60分钟，静置12～24小时，滤过，沉淀用水洗至PH值4.0～5.0，继用50～70％乙醇洗至PH值为7.0，低温干燥，粉碎，备用；地锦草、秦皮、地榆加8～12倍量水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.02(90～95℃测)，喷雾干燥制成粉状，加入黄芩提取物及50-100份的淀粉，均匀，即得。

本发明的黄芩地锦草散制剂的质量控制方法为：

(一)鉴别方法

秦皮：取本品2g，加乙醇10ml，加热回流10分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取秦皮甲素与秦皮乙素对照品，加乙醇制成每1ml各含5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国兽药典》2005年版二部附录31页)试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-乙醇-甲酸(3∶4∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(二)含量测定方法

色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)为流动相；检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50％甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含黄芩苷0.1mg)。

供试品溶液的制备取装量差异项下的本品约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理20分钟使溶解，放置至室温，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，每1g不得少于20mg。

本发明黄芩地锦草散是一种纯中药制剂，由黄芩、地锦草、秦皮、地榆经提取制成的，具有清热燥湿，凉血解毒，止泻止痢。中兽医认为痢疾主要有间湿热痢、疫毒痢、寒湿痢、阴虚痢等，其中湿热痢和疫毒痢多见。湿热痢、疫毒痢为暑湿、疫毒之邪，侵及肠胃，湿热郁蒸或疫毒弥漫，气血阻滞，与暑湿、疫毒相搏结，化为脓血而成为湿热痢或疫毒痢，当以清热燥湿，凉血解毒治之。方中以地锦草清热解毒、止血为主药；黄芩苦寒燥湿，泄下焦湿热，为清热止血的辅药；秦皮性寒，味苦而涩，而固下焦，与上药相配，清热解毒，凉血止痢之效俱备；地榆性寒苦降，味涩收敛，清下焦血分湿热，以使热清毒解，痢止而后重自除。故黄芩地锦草散具有清热燥湿，凉血解毒，止泻止痢。主治大肠湿热，痢疾，血热毒盛，泻泄腹痛，肠炎菌痢。本发明黄芩地锦草散用于治疗大肠湿热，痢疾，血热毒盛，泻泄腹痛，肠炎菌痢症状者，比传统用的散剂生物利用度高，疗效更好，同时避免了抗菌药药物残留的弊端；本发明的制剂质量控制方法技术先进、重现性好，能较好的控制药品的质量，且通过临床试验证明本产品疗效确切。

为了验证本发明黄芩地锦草散对畜禽痢疾的治疗效果，特进行了以下试验。

实验1

黄芩地锦草散对人工感染治疗试验效果如下：

(1)菌液的制备：将大肠杆菌接种于普通肉汤培养基中，37℃培养18h。纯检、活菌计数，置-20℃保存备用。

(2)人工感染仔猪：试验猪灌服2×10⁷CFU/Kg的大肠杆菌菌液0.5ml。

(3)试验动物分组见表1

表1人工感染试验动物的分组及处理

(4)病原分离与鉴别：

①采样：选临床症状明显的病危仔猪，无菌操作，取肠***、空肠内容物各2份作为供检病料。

②分离培养：用稀释液10倍稀释被检病料后接种于普通琼脂培养基，置37℃培养18h，挑取典型菌落，接种于麦康凯琼脂培养基上和普通营养肉汤培养物中，置37℃培养18h，取菌落适量，革兰氏染色，镜检呈两端略显钝圆的短小杆菌，散在或成对存在，两端着色较深，革兰氏染色呈阴性。

③生化反应：按《兽医微生物学实验指导》方法进行。结果为葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、M-R、V-P、吲哚、枸橼酸钠试验均呈阳性。

④致病性试验：选10只健康昆明小白鼠，腹腔注射普通肉汤培养物菌液，每只0.5ml，10只小白鼠在24h内全部死亡，从小白鼠的脏壁上分离出细菌，进行染色镜检和生化试验，判定为大肠杆菌。

(5)病例标准：符合临床诊断标准，经微生物鉴定确定为大肠杆菌者为试验动物。试验过程中，如该组动物继发其他传染病，或者不明原因的死亡则该动物退出试验，另选符合试验要求的动物补上。

(6)试验动物分组及给药剂量、方法

将选定的150头试验动物随机分为5组，每组30头。另选健康猪只30头作为健康对照组，试验前对动物进行安全性检查，包括体格检查，称重等。给药剂量及方法见表2

表2自然发病试验动物分细及处理

人工感染大肠杆菌20h后，或确定为大肠杆菌自然发病病例后，各试验组按设计用药剂量、给药途径，连续用药3d，停药，观察7d。

(7)疗效判定标准：试验期间，观察各组试验动物的临床症状，如精神状态、食欲、呼吸、粪便、体温等，判定标准如下：

①治愈：连续用药一个疗程(3天)后，患畜各种症状消失，粪便、食欲及精神恢复正常，7天内不再复发，判为治愈，据此计算治愈率。

②有效：连续用药一个疗程(3天)后，患畜各种症状明显减轻，粪便、精神、食欲基本恢复正常，判为有效，据此计算有效率。

③无效：连续用药一个疗程(3天)后，患畜病情无变化，甚至加重出现死亡，剖解后细菌培养鉴定为大肠杆菌，判无效，据此计算无效率。

(8)人工感染治疗试验结果

①感染对照组所有仔猪全部在接种大肠杆菌后1～5d死亡，病猪主要出现的临床症状是：腹泻，粪便呈白色，精神不振，少食或拒食，消瘦，死亡剖检尸体严重脱水，皮下常有水肿，肠管肿胀，有大量白色液体状内容物和气体，肠粘膜呈急性卡他性炎症变化，肠系膜***有弥漫性出血点，粪便中人工感染菌检出率为100％。

②药物对照组所有仔猪在接种大肠杆菌后1天内全部发病，用环丙沙星肌内注射3d后，死亡6头，剩余14头存活，粪便中接种菌检出头数呈逐渐减少。

③试验对照组治疗试验中仔猪成活率、治愈率和病料中接种菌分离情况见表3结果表明仔猪混饮给药黄芩地锦草散后，与感染对照组比较，能迅速减轻临床症状。总有效率均在95％以上，疗效较好，且黄芩地锦草散的高、中、低剂量组的有效率，治愈率比较理想，治愈后观察病情况无复发，无明显不良后果；药物对照组在治愈后有复发的情况，其疗效较差。

表3黄芩地锦草散混饮给药对仔猪人工感染大肠杆菌病的疗效

实验2

黄芩地锦草散对自然发病治疗试验效果如下：

结果见表4，结果表明，黄芩地锦草散中剂量组对仔猪大肠杆菌病的总有效率达95％以上，疗效较环丙沙星极显著(P＜0.01)，且黄芩地锦草散治愈后观察病情无复发，无明显不良反应，药物对照组在治愈后仍有复发的情况。

表4黄芩地锦草散混饮给药对仔猪感染大肠杆菌病的疗效

黄芩地锦草散治疗仔猪大肠杆菌引起的仔猪黄白痢的疗效较好，治愈后不易复发，在使用高剂量(4g/L)、中剂量(2g/L)治疗时，治愈率均在85％以上，有效率100％，疗效确切。由此推荐剂量2g/L，混饮，连用3天。

本发明的黄芩地锦草散应用现代科学技术，采用新工艺制成的散剂，有效成分含量高，质量控制方法稳定。可以避免传统中兽药散剂吸收功能低、生物利用度低、疗效缓慢、用量大等特点。通过临床试验证明，黄芩地锦草散对畜禽痢疾疗效确切。

具体实施例

实施例1

作为中兽药的黄芩地锦草散，由下列重量份数的药物制成：黄芩800份地锦草1600份  秦皮800份  地榆800份。

本发明的黄芩地锦草散制备方法包括以下步骤：

黄芩加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.05(80℃测)，于60℃时加2mol/L盐酸溶液调节PH值至1.2，保温30分钟，静置12小时，滤过，沉淀用水洗至PH值4.0，继用60％乙醇洗至PH值为7.0，低温干燥，粉碎，备用；地锦草、秦皮、地榆加8倍量水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.02(90℃测)，喷雾干燥制成粉状，加入黄芩提取物及50份淀粉，均匀，即得。

本发明的中药制剂的质量控制方法为：

(一)鉴别方法

秦皮：取本品2g，加乙醇10ml，加热回流10分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取秦皮甲素与秦皮乙素对照品，加乙醇制成每1ml各含5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法包括以下步骤：

吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-乙醇-甲酸(3∶4∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(二)含量测定方法

黄芩苷含量测定方法包括以下步骤：

色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)为流动相；检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50％甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含黄芩苷0.1mg)。

供试品溶液的制备取装量差异项下的本品约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理20分钟使溶解，放置至室温，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，每1g 25mg。

实施例2

作为中兽药的黄芩地锦草散，由下列重量份数的药物制成：黄芩900份地锦草1600份  秦皮900份  地榆800份。

作为中兽药的黄芩地锦草散制备工艺，包括以下步骤：

黄芩加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10(80℃测)，于80℃时加2mol/L盐酸溶液调节PH值至2.0，保温50分钟，静置16小时，滤过，沉淀用水洗至PH值5.0，继用70％乙醇洗至PH值为7.0，低温干燥，粉碎，备用；地锦草、秦皮、地榆加12倍量水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.02(95℃测)，喷雾干燥制成粉状，加入黄芩提取物及70份淀粉，混匀，即得。

本发明的中药制剂的质量控制方法同实施例1

实施例3

作为中兽药的黄芩地锦草散，由下列重量份数的药物制成：黄芩800份地锦草1500份  秦皮800份  地榆900份。

本发明的黄芩地锦草散制备工艺及质量控制方法同实施例1。

Claims (5)

1、黄芩地锦草散，其特征在于：由下列重量份数的药物制成：黄芩600-1000份 地锦草1200-2000份 秦皮600-1000份 地榆600-1000份。

2、如权利要求1所述的黄芩地锦草散，其特征在于：由下列重量份数的药物制成：黄芩800份 地锦草1600份 秦皮800份 地榆800份。

3、黄芩地锦草散制备方法，其特征在于：包括以下步骤：黄芩加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.05～1.10，于60～80℃时加2mol/L盐酸溶液调节PH值至1.0～2.0，保温30～60分钟，静置12～24小时，滤过，沉淀用水洗至PH值4.0～5.0，继用50～70％乙醇洗至PH值为7.0，低温干燥，粉碎，备用；地锦草、秦皮、地榆加8～12倍量水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.02，喷雾干燥制成粉状，加入黄芩提取物及50-100份淀粉，混匀，即得。

4、黄芩地锦草散制剂的质量控制方法，其特征在于：按以下步骤控制：

(1)鉴别方法

秦皮：取本品2g，加乙醇10ml，加热回流10分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取秦皮甲素与秦皮乙素对照品，加乙醇制成每1ml各含5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)含量测定方法

色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)为流动相；检测波长为274nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500；

对照品溶液的制备，精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50％甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含黄芩苷0.1mg)；

供试品溶液的制备，取装量差异项下的本品约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理20分钟使溶解，放置至室温，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明黄芩地锦草散含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，每1g不得少于20mg。

5、黄芩地锦草散制剂应用于治疗畜禽大肠湿热，痢疾，血热毒盛，泻泄腹痛，肠炎菌痢症状。