CN101485835B - 一种治疗骨关节炎的药物组合物及制备方法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物组合物，尤其是一种治疗骨关节炎的药物组合物及其制备方法和质量检测方法，属于中药领域。该药物组合物的有效成分是由牛膝、桂枝、杜仲、肉苁蓉、雪莲、防风、鹿茸、龟甲120、石斛、当归、赤芍、木瓜、知母、甘草等原料药制得，并根据临床需要被制成片剂、胶囊剂、颗粒剂及丸剂等剂型。该药物组合物对于治疗和改善骨关节炎具有明显的效果。

Description

一种治疗骨关节炎的药物组合物及制备方法和检测方法

技术领域

本发明涉及一种用于治疗骨关节炎的药物组合物，确切地说，是一种用于治疗骨关节炎的中药组合物，以及该中药组合物的制备方法和质量检测方法。属中药领域。 

背景技术

骨关节炎又称“骨关节病”、“骨关节退行性改变”、“骨质增生”等，俗称“骨刺”。本病是临床常见病、多发病，主要发生在50岁以上的老年人，随着年龄的增长，本病的发病率越高，有人统计55岁以上年龄组发生率高达80％，但有症状和活动障碍者只占1/8。女性多见，女∶男约为2∶1。本病的病因与年龄、肥胖、职业及遗传等因素有关。其病理特点为关节软骨损伤、关节边缘和软骨下骨反应性增生，主要表现为缓慢发展的关节疼痛、僵硬、肿大伴活动受限，骨关节炎多发生于负重的关节如颈椎、腰椎和膝关节等。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种用于治疗或改善骨关节炎的药物组合物；目的之二是提供该药物组合物的制备方法；目的之三是提供其质量检测方法。 

本发明的目的之一是通过如下技术手段实现的： 

本发明提供一种药物组合物，该药物组合物的有效成分是由如下原料药制成的： 

牛膝150～210重量份    桂枝70～110重量份    杜仲100～140重量份 

肉苁蓉100～140重量份  雪莲25～35重量份     防风70～110重量份 

鹿茸45～75重量份      龟甲100～140重量份   石斛70～110重量份 

当归70～110重量份     赤芍70～110重量份    木瓜70～110重量份 

知母45～75重量份      甘草45～75重量份。 

其原料药的比例可以优选为： 

牛膝180重量份    桂枝90重量份    杜仲120重量份    肉苁蓉120重量份 

雪莲30重量份     防风90重量份    鹿茸60重量份     龟甲120重量份 

石斛90重量份     当归90重量份    赤芍90重量份     木瓜90重量份 

知母60重量份     甘草60重量份。 

也可以优选为： 

牛膝162重量份    桂枝84重量份    杜仲108重量份    肉苁蓉108重量份 

雪莲30重量份    防风84重量份    鹿茸60重量份    龟甲108重量份 

石斛84重量份    当归84重量份    赤芍84重量份    木瓜84重量份 

知母60重量份    甘草60重量份。 

依据骨关节炎的临床表现，骨关节炎应属中医学“痹证”、“骨痹”、“腰痛”等病的范畴，因而上述组方体现了补益肝肾、强壮筋骨以治本，祛风散寒、除湿通络以治其标的原则。方中以牛膝、杜仲为君药。牛膝入肾经，为补肝肾、强腰膝之要药，又能祛瘀通利关节。杜仲入肝肾经，能补肝肾、强筋健骨，专治肝肾不足引起的腰膝疼痛痿软无力症，牛膝、杜仲相伍，补肝肾、强筋骨，以治其本。桂枝、雪莲、肉苁蓉、鹿茸为本方之臣药。其中桂枝辛湿祛风散寒，通络止痛。雪莲花生于雪线以上，其性温热，是治疗寒痹关节冷痛之良药。肉苁蓉甘酸咸温，既能补肾温阳，又能益髓生津，治肾虚骨弱、腰膝冷痛。鹿茸壮元阳、生精髓、强筋骨。龟甲、当归、赤芍、防风、木瓜、石斛、知母为佐。其中，龟甲咸甘而平、益肾健骨，治腰膝酸软，筋骨不健。痹证日久、气血不利，多兼血瘀，需活血通络以削除血瘀，故用当归，甘苦平温，补血和血，养血柔筋、活血止痛。赤芍苦微寒，活血止痛。防风辛甘微温，祛风胜温，与桂枝等合用以散风寒湿邪。石斛甘微寒，能生津益胃顾护中焦，亦能补肾养阴除痹。木瓜酸温，化湿活络，舒盘缓急以缓关节疼痛，屈伸不利。知母苦寒滋肾清热以制约本方温热之弊。甘草甘平，调和诸药，为本方之使药。本方诸药合用共奏补益肝肾，强壮筋骨，祛风散寒，除湿通络之效。 

所述原料药中： 

牛膝，为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata BL.的干燥根； 

桂枝，为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥嫩枝； 

杜仲，为杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥树皮； 

肉苁蓉，为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma的干燥带鳞叶的肉质茎； 

雪莲，为菊科植物绵头雪莲花Saussuraea lanipeps Hand-Mazz的干燥带花全草，主要产地：新疆；本品应符合北京市中药饮片标准2000年版雪莲花项下有关规定； 

防风，为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根； 

鹿茸，为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervus elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角； 

龟甲，为龟科动物乌龟Chinemys reevesii(Gray)的背甲及腹甲； 

石斛，为兰科植物环草石斛Dendrobium loddigesii Rolfe.、马鞭石斛Dendrobiumfimbriatum Hook.var.oculatum Hook.、黄草石斛Dendrobium chrysanthum Wall.、铁皮石斛Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.或金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.的新鲜或 干燥茎； 

当归，为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根； 

赤芍，为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根； 

木瓜，为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果实； 

知母，为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎； 

甘草，为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflataBat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根茎。 

上述药物组合物配以相应辅料，被制成多种剂型应用于临床，如颗粒剂、胶囊剂、片剂等。本发明的另一目的即提供本发明药物组合物的制备方法，该方法的步骤为： 

A、取上述原料药，将鹿茸碎成细粉，备用； 

B、将石斛、雪莲加浓度为50％～80％乙醇提取1～3次，每次1～2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至清膏，备用； 

C、将防风、桂枝、当归加水提取挥发油，水液另存，收集挥发油，备用； 

D、将提油后的药渣与牛膝等其余8味药合并，加水煎煮1～3次，每次1～2小时，滤过，合并煎液，加入C中提油后的水液，浓缩，加乙醇调至含醇量60％～75％，静置分层，过滤，上清液回收乙醇，余液与B中备用清膏合并，继续浓缩成稠膏，干燥，粉碎，与步骤A中鹿茸细粉及C中所得挥发油混合后，加入常规制剂辅料，按照常规制剂工艺，制成临床所需剂型。 

在上述步骤C中所得挥发油，既可以按照步骤D的方法直接入药使用，也可以先按以下任一方法处理后再按步骤D的方法使用： 

A、将挥发油与倍他环糊精和水，按1∶7～9∶70～90的比例混合，于55～65℃下搅拌1～3小时，冷藏，滤过，低温干燥，制成挥发油的倍他环糊精包合物； 

B、将挥发油溶于足量的无水乙醇中，制得挥发油的乙醇溶液。 

经反复实验研究，发明人提供了将该药物组合物制成多种剂型的方法，其中胶囊剂的制备方法为： 

A、取上述原料药，将鹿茸碎成细粉，备用； 

B、将石斛、雪莲加70％乙醇提取3次，每次加5倍量，提取2小时，滤过，合并滤液， 回收乙醇并浓缩至相对密度1.02-1.05(60℃测)的清膏，备用； 

C、将防风、桂枝、当归加水提取挥发油8小时，水液另存；将所得挥发油与倍他环糊精、水按1∶8∶80比例混合，在60℃条件下搅拌2小时，冷藏，滤过，低温干燥，得挥发油包合物，备用； 

D、将提油后的药渣与牛膝等其余8味药合并，加水煎煮3次，每次加水8倍量，煎煮1小时，滤过，合并煎液，加入步骤C中提油后的水液，浓缩至相对密度1.10-1.12(60℃测)，加乙醇调至含醇量70％，静置分层，过滤，上清液回收乙醇，余液与步骤B中备用清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.20-1.25(60℃测)的稠膏，真空干燥，粉碎成细粉，和步骤A中鹿茸细粉及C中挥发油包合物混合后，加入常规辅料，按照常规制剂工艺，制成胶囊剂。 

最后，发明人还提取了该药物组合物的质量检测方法，其中除中国药典规定的常规检测项目外，还包含该药物组合物的含量测定方法和定性鉴别方法。 

具体地说，含量测定方法以正丁醇提取物含量为指标，步骤为：称取该药物组合物2～5g，精密称定，置100ml锥形瓶中，精密加入正丁醇100ml，闭塞，称定重量，静置1h，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h，放冷后取下锥形瓶，密闭，称定重量，用正丁醇补足减失重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取50ml滤液，置于干燥恒重蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，移至干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；该药物组合物中含正丁醇提取物应不少于8.0％。 

定性鉴别方法则包括如下检测项目： 

a、取所述药物组合物3～5g，加70％～90％乙醇30～50ml，回流20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加70％～90％乙醇1～2ml使之溶解，作为供试品溶液；另取甜菜碱对照品，加70％～90％乙醇溶解制成每1ml含4～6mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为8～10∶1～3∶0.4～0.6的甲醇∶水∶醋酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

b、取所述药物组合物3～5g，加水30～50ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取2～3次，每次20～30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇15～30ml使之溶解，加盐酸2～4ml，加热回流1～2小时后水液浓缩至10～15ml，加水至15～25ml，加苯30～50ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯1～3ml溶解，作为供试品溶液；另取菝葜皂苷元对照品加苯制成每1ml含4～6mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为90～100∶4～6的氯仿∶乙醇混合液为展开剂展开，取出晾 干；将浓硫酸以水稀释至原体积的10/7倍，按0.4～0.6∶4～6的体积比与含8％香草醛的无水乙醇溶液混合，喷于展开板上，在100℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

c、取所述药物组合物3～5g，加乙醇30～50ml，回流提取1～2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～2ml使之溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇溶液，制成每1ml含1～3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为38～42∶4～6∶8～12∶0.1～0.3的氯仿-乙酸乙酯甲醇-甲酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

d、取所述药物组合物3～5g，用20～40ml水溶解，再用乙酸乙酯提取2～3次，每次20～30ml，合并提取液置水浴上蒸干，残渣用95％乙醇1～3ml溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1～3g同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～5μl，分别占于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8～10∶1的正己完∶乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，在365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点； 

e、取所述药物组合物3～5g，加水30～50ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取2～3次，每次20～30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇15～30ml使之溶解，加盐酸2～4ml，加热回流1～2小时后水液浓缩至10～15ml，加水至15～25ml，加苯30～50ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯1～3ml溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品加苯制成每1ml含3～5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8～10∶1的氯仿∶丙酮混合液为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

如对本发明药物组合物的胶囊剂进行质量检测，除应满足中国药典规定的常规检测项目外，还应满足以下检测要求： 

正丁醇提取物的含量测定： 

精密称取胶囊剂内容物3g，置100ml锥形瓶中，精密加入正丁醇100ml，闭塞，称定重量，静置1h，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h，放冷后取下锥形瓶，密闭，称定重量，用正丁醇补足减失重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取50ml滤液，置于干燥恒重蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，移至干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称 定重量，计算，即得；胶囊剂内容物中含正丁醇提取物不少于8.0％； 

定性鉴别： 

a、取胶囊内容物5g，加80％乙醇40ml，回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％乙醇1ml使之溶解，作为供试品溶液；另取甜菜碱对照品，加80％乙醇溶解制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为9∶2∶0.5的甲醇∶水∶醋酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

b、取胶囊内容物5g，加水40ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20～30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇20ml使之溶解，加盐酸2ml，加热回流1小时后水液浓缩至10ml，加水至20ml，加苯40ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml溶解，作为供试品溶液；另取菝葜皂苷元对照品加苯制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为95∶5的氯仿∶乙醇混合液为展开剂展开，取出晾干；将浓硫酸以水稀释至原体积的10/7倍，按0.5∶5的体积比与含8％香草醛的无水乙醇溶液混合，喷于展开板上，在100℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

c、取胶囊内容物2.5g，加乙醇40ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使之溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇溶液，制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40∶5∶10∶0.2的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

d、取胶囊内容物5g，用30ml水溶解，再用乙酸乙酯提取3次，每次20～30ml，合并提取液置水浴上蒸干，残渣用95％乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别占于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己完∶乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，在365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点； 

e、取胶囊内容物5g，加水40ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20～30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇20ml使之溶解，加盐酸2ml，加热回流1小时后水液浓缩至10ml，加水至20ml，加苯40ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml溶解，作为供试品溶液；取齐墩果酸对照品加苯制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验， 吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的氯仿∶丙酮混合液为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

本发明药物组合物具有补益肝肾，强壮筋骨，祛风散寒，除湿通络的功效，用于痹症肝肾亏虚，风寒湿痹阻证，症见关节冷痛，喜暖畏寒，屈伸不利，劳累后加重，腰膝酸软，舌淡苔白，脉沉弦细及骨关节炎见上述证候者。为证明该药物组合物的效果，发明人进行了如下动物实验。 

【试验材料】 

受试药物本发明骨康胶囊，按实施例1方法制得，含4.0g生药/g膏。 

剂量设计人临床用量20.0g生药/天，按60公斤体重计算为0.333g生药/kg，按动物与人公斤等效剂量折算，小鼠用3.6g生药/kg、大鼠用1.8g生药/kg为中剂量，相当于临床等效剂量，高剂量为中剂量的2倍，低剂量为中剂量的1/2倍。实验用量：小鼠为0.2ml/10g、大鼠为1ml/100g。 

阳性对照药通络开痹片，中外合资邢台通络药业有限公司产品，批号20021015，临床用量0.015g/kg体重，小鼠用量0.32g/kg，大鼠用量0.16g/kg为临床2倍量。 

动物CD-1(ICR)小鼠18-22g，雌雄各半；Wistar种大鼠，雄性，体重140-160g，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号为SCXK(京)2002-0003。 

试剂Freund’s完全佐剂，Sigma公司产品，批号P1503；巴豆油，日本和光株式会社产品，批号DCCL7737。 

仪器Sartorius电子天平，型号：BP110S，德国生产。GJ-8402型热板测痛仪，浙江产。 

【试验方法和结果】 

1.骨康胶囊的抗炎作用 

1.1骨康胶囊对实验性(佐剂)关节炎的影响  选取140-160g雄性大鼠，按体重随机分为5组，对照组，骨康胶囊高、中、低(3.6、1.8、0.9g/kg体重)三个剂量组，通络开痹片组(0.16g/kg)，每组10只。试验前，先用自制软尺测量每鼠左、右后踝关节周长(cm)，作为基础值。大鼠提前两天给药，1ml/100g体重，共26天。给药第3天，于右后足垫皮内注射Freund’s完全佐剂0.1ml/只致炎，分别于致炎后2、18小时、第4天测量大鼠右后踝关节周长；于致炎后第8天开始每4天测量各组大鼠左、右后踝关节周长，并观查大鼠耳、尾部是否出现异常及关节变形等现象，测量时间均在给药后2小时。分别比较各时间点给药组与对照组之间 的差异性，按下列公式计算各时间点肿胀值和抑制率。 

肿胀值＝致炎后踝关节周长-致炎前踝关节周长 

实验结果表明，对照组在致炎后2小时开始肿胀，致炎后10天左右踝关节肿胀达高峰，20天以后逐渐消退，对侧踝关节于致炎后第8天开始肿胀，前肢继发肿胀，骨康胶囊给药三天，在致炎后2小时开始起效，并在给药期间不同剂量组均出现不同程度的抑制作用，且可抑制对侧继发的肿胀，高、中剂量组作用明显。上述症状均较对照组明显减轻。 

1.2对巴豆油致小鼠耳肿胀的抑制作用  小鼠按体重随机分组，灌胃给药，对照组给予相同体积的蒸馏水。连续3天，每天一次，末次给药后1小时，以2％巴豆油0.05ml涂于左耳前后两面，右耳作对照，致炎后4小时将小鼠处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8mm的不锈钢冲子在同一部位分别冲下耳片，用电子天平称重。以左右耳片的重量差为肿胀值，以t检验，进行组间差异性比较。 

表1骨康胶囊对小鼠耳水肿的抑制作用 

与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01 

表1结果表明，骨康胶囊所试剂量对巴豆油致小鼠耳肿胀均有明显的抑制作用。 

1.3对大鼠棉球肉芽肿形成的影响^]  大鼠***浅麻醉，在无菌条件下作腹部切口，将20mg的灭菌棉球植入两侧腹股沟皮下。术后随机分为五组，对照组，骨康胶囊高、中、低(3.6、1.8、0.9g/kg体重)三个剂量组，通络开痹片组(0.16g/kg)，每组10只。手术当天开始给药，每天一次，1ml/100g体重，连续7天，第7天药后1小时将大鼠断头处死，剥离并取出棉球肉芽组织。于60℃烘箱内干燥12小时后称重，减去棉球重量，即为肉芽肿净重，进行统计学处理，比较各组间肉芽肿有无显著性差异。 

表2骨康胶囊对大鼠棉球肉芽肿增生的影响(X±SD) 

与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01 

由表2结果可见，骨康胶囊三个剂量组对大鼠肉芽组织增生均有显著的抑制作用。 

2骨康胶囊镇痛作用 

2.1采用小鼠扭体法  方法  取18-22g小鼠，按体重随机分组，灌胃给药，药后1小时小鼠腹腔注射0.7％醋酸0.2ml/只，5分钟后观察15分钟内典型的扭体发生次数(伸展后肢、腹部收缩和扭曲身体)，以扭体数进行统计学处理，并计算给药组扭体次数的减少率。 

表3骨康胶囊对小鼠的镇痛作用(扭体法)(X±SD) 

注：与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01 

表3结果表明，骨康胶囊三个剂量组均能明显降低小鼠因醋酸刺激引起扭体的发生频率，说明对化学性刺激引起的疼痛有明显的抑制作用。 

2.2小鼠热板法，取19-20g雌性小鼠，用热板测痛仪测定小鼠自放入热板至出现舔足所需时间(秒)作为该鼠的痛阈值，凡小鼠舔足时间小于5秒或大于30秒或跳跃者均弃之不用，将合格小鼠随机分为5组，给药，测定药后30、60、90、120分钟的痛阈值。以t检验进行统计学处理。 

表4骨康胶囊的镇痛作用(热板法) 

与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01 

试验结果  采用小鼠热板法测定结果显示，骨康胶囊三个剂量组均有不同程度的镇痛作用，高、中剂量组作用可持续2小时。 

上述实验结果表明本发明胶囊剂具有抗炎和镇痛作用，提示本发明药物组合物具有治疗或改善骨关节炎的作用。且以下实施例所制得的药物组合物均具有上述治疗效果。 

具体实施方式

实施例1：胶囊剂的制备 

原料药：牛膝16.2kg    桂枝8.4kg    杜仲10.8kg    肉苁蓉10.8kg 

        雪莲3.0kg     防风8.4kg    鹿茸6.0kg     龟甲10.8kg 

        石斛8.4kg     当归8.4kg    赤芍8.4kg     木瓜8.4kg 

        知母6.0kg     甘草6.0kg 

制备工艺：以上十四味，鹿茸碎成细粉。石斛、雪莲加70％乙醇提取3次，每次加5倍量提取2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.02-1.05(60℃)的清膏。防风、桂枝、当归加水提取挥发油8小时，挥发油用倍他环糊精包合(油-倍他环糊精-水＝1∶8∶80，60℃搅拌2小时)，冷藏，滤过，低温干燥备用。药渣和牛膝等其余8味加水煎煮3次，每次加水8倍量，煎煮1小时，滤过，合并煎液，加入上述提油后的水溶液，浓缩至相对密度1.10-1.12(60℃)，加乙醇调至含醇量70％，静置过夜，上清液回收乙醇，余液与上述清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.20-1.25(60℃)的稠膏，真空干燥，粉碎成细粉，和鹿茸细粉和包合物干粉混合后，加入适量糊精，混匀，用适当浓度乙醇制粒，干燥，装成胶囊即得。 

实施例2：胶囊剂的制备 

原料药：牛膝18.0kg   桂枝9.0kg  杜仲12.0kg    肉苁蓉12.0kg 

        雪莲3.0kg    防风9.0kg  鹿茸6.0kg     龟甲12.0kg 

        石斛9.0kg    当归9.0kg  赤芍9.0kg     木瓜9.0kg 

        知母6.0kg    甘草6.0kg 

制备工艺：同实施例1。 

实施例3：颗粒剂的制备 

原料药：牛膝15.0kg    桂枝7.0kg    杜仲10.0kg    肉苁蓉10.0kg 

        雪莲2.5kg     防风7.0kg    鹿茸4.5kg     龟甲10.0kg 

        石斛7.0kg     当归7.0kg    赤芍7.0kg     木瓜7.0kg 

        知母4.5kg     甘草4.5kg 

制备工艺：以上十四味，将鹿茸碎成细粉，备用；将石斛、雪莲加10倍量50％乙醇提取1次1小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.02-1.05(60℃)的清膏，备用；将防风、桂枝、当归加水提取挥发油，水液另存，收集挥发油，备用；将提油后的药渣与牛膝等其余8味药合并，加水10倍量煎煮1次1小时，滤过，合并滤液，加入提油后的水液，浓缩，加乙醇调至含醇量60％，静置过夜，过滤，上清液回收乙醇，余液与上述备用清膏合并，继续浓缩成相对密度为1.20-1.25(60℃)的稠膏，干燥，粉碎，与鹿茸细粉及挥发油混合后，加入适量淀粉和糊精，制成颗粒剂，包装即得。 

实施例4：片剂的制备 

原料药：牛膝21.0kg    桂枝11.0kg    杜仲14.0kg    肉苁蓉14.0kg 

        雪莲3.5kg     防风11.0kg    鹿茸7.5kg     龟甲14.0kg 

        石斛11.0kg    当归11.0kg    赤芍11.0kg    木瓜11.0kg 

        知母7.5kg     甘草7.5kg 

制备工艺：以上十四味，将鹿茸碎成细粉，备用；将石斛、雪莲加80％乙醇提取3次，每次加6倍量，提取2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.00-1.03(60℃)的清膏，备用；将防风、桂枝、当归加水提取挥发油，水液另存；收集挥发油，将挥发油与倍他环糊精和水按1∶7∶90的比例混合，于60℃下搅拌1小时，冷藏，滤过，低温干燥，制成倍他环糊精包合物；将提油后的药渣与牛膝等其余8味药合并，加水煎煮3次，每次加水6倍量，煎煮2小时，滤过，合并煎液，加入上述提油后的水液，浓缩，加乙醇调至含醇量75％，静置分层，过滤，上清液回收乙醇，余液与上述备用清膏合并，继续浓缩成相对密度 1.18-1.22(60℃)的稠膏，干燥，粉碎，与鹿茸细粉及倍他环糊精包合物混合后，加入适量淀粉和羧甲基纤维素，混均，压制成片。 

实施例5：颗粒剂的制备 

原料药：牛膝15.0kg    桂枝11.0kg    杜仲14.0kg    肉苁蓉10.0kg 

        雪莲3.5kg     防风7.0kg     鹿茸4.5kg     龟甲10.0kg 

        石斛11.0kg    当归7.0kg     赤芍11.0kg    木瓜7.0kg 

        知母7.5kg     甘草7.5kg 

制备工艺：以上十四味，将鹿茸碎成细粉，备用；将石斛、雪莲加60％乙醇提取2次，每次加8倍量，提取1.5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.05-1.06(60℃)的清膏，备用；将防风、桂枝、当归加水提取挥发油，水液另存；收集挥发油，加足量无水乙醇溶解，制成挥发油的乙醇溶液，备用；将提油后的药渣与牛膝等其余8味药合并，加水煎煮2次，每次加8倍量，煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，加入上述提油后的水液，浓缩至相对密度1.12-1.15(60℃)，加乙醇调至含醇量65％，静置分层，过滤，上清液回收乙醇，余液与上述备用清膏合并，继续浓缩成相对密度为1.20-1.25(60℃)的稠膏，干燥，粉碎，加入鹿茸细粉、淀粉、糊精，喷入挥发油的乙醇溶液，制粒，低温干燥，即得颗粒剂。 

实施例6：丸剂的制备 

原料药：牛膝19.0kg    桂枝8.5kg    杜仲13.0kg    肉苁蓉13.0kg 

        雪莲3.5kg     防风8.0kg    鹿茸5.0kg     龟甲11.0kg 

        石斛8.0kg     当归8.0kg    赤芍8.0kg     木瓜10.0kg 

        知母6.0kg     甘草6.0kg 

制备工艺：以上十四味，将鹿茸碎成细粉，备用；将石斛、雪莲加75％乙醇提取3次，每次加5倍量，提取1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.02-1.05(60℃)的清膏，备用；将防风、桂枝、当归加水提取挥发油6小时，水液另存；将所得挥发油与倍他环糊精、水按1∶9∶70比例混合，在60℃条件下搅拌2小时，冷藏，滤过，低温干燥，得挥发油包合物，备用；将提油后的药渣与牛膝等其余8味药合并，加水煎煮2次，每次加水10倍量，煎煮2小时，滤过，合并煎液，加入上述提油后的水液，浓缩至相对密度1.10-1.12(60℃)，加乙醇调至含醇量70％，静置分层，过滤，上清液回收乙醇，余液与上述备用清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.20-1.25(60℃)的稠膏，真空干燥，粉碎成细粉，与鹿茸细粉及挥发油包合物混合后，制软材，压制成丸剂。 

实施例7：对实施例1的胶囊剂进行质量检测 

性状：本品为胶囊剂，内容物为棕褐色颗粒，气微，味微苦，微甜。 

鉴别： 

1)取本品内容物5g，加80％乙醇40ml，回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％乙醇1ml使之溶解，作为供试品溶液；另取甜菜碱对照品，加80％乙醇溶解制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲醇∶水∶醋酸(9∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

2)取本品内容物5g，加水40ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取3次(30，20，20)，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇20ml使之溶解，加盐酸2ml，加热回流1小时后水液浓缩至10ml，加水至20ml，加苯40ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml溶解，作为供试品溶液；另取菝葜皂苷元对照品加苯制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶乙醇(95∶5)为展开剂展开，取出晾干，喷以8％的香草醛无水乙醇溶液与硫酸溶液(7→10)的混合液(0.5∶5)，在100℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

3)取本品内容物2.5g，加乙醇40ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使之溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇溶液，制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

4)取本品内容物5g，用30ml水溶解，再用乙酸乙酯提取3次(30ml，20ml，20ml)，合并提取液置水浴上蒸干，残渣用95％乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别占于同一硅胶G薄层板上，以正己完∶乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯下(365nm)检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。 

5)取齐墩果酸对照品加苯制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取鉴别2项下供试品溶液和上述对照品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶丙酮(9∶1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热 至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

正丁醇浸出物： 

精密称取本品内容物3g，置100ml锥形瓶中，精密加入正丁醇100ml，闭塞，称定重量，静置1h，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h，放冷后取下锥形瓶，密宗，称定重量，用正丁醇补足减失重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取50ml滤液，置于干燥恒重蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，移至干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。本品含正丁醇提取物不少于8.0％。 

实施例8：对实施例3颗粒剂进行质量检测 

鉴别： 

1)取本品颗粒5g，加70％乙醇30ml，回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加70％乙醇1ml使之溶解，作为供试品溶液；另取甜菜碱对照品，加70％乙醇溶解制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为8∶3∶0.4的甲醇∶水∶醋酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

2)取本品颗粒5g，加水50ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇30ml使之溶解，加盐酸4ml，加热回流2小时后水液浓缩至15ml，加水至25ml，加苯50ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯3ml溶解，作为供试品溶液；另取菝葜皂苷元对照品加苯制成每1ml含6mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为90∶4的氯仿∶乙醇混合液为展开剂展开，取出晾干；将浓硫酸以水稀释至原体积的10/7倍，按0.4∶4的体积比与含8％香草醛的无水乙醇溶液混合，喷于展开板上，在100℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

3)取本品颗粒3g，加乙醇30ml，回流提取2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使之溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇溶液，制成每1ml含3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为38∶6∶8∶0.3的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

4)取本品颗粒3g，用40ml水溶解，再用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并提取液置 水浴上蒸干，残渣用95％乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材3g同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别占于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶1的正己完∶乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，在365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点； 

5)取本品颗粒5g，加水30ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇30ml使之溶解，加盐酸4ml，加热回流2小时后水液浓缩至15ml，加水至15ml，加苯30ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯1溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品加苯制成每1ml含3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶1的氯仿∶丙酮混合液为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

含量测定： 

称取本发明颗粒剂5g，精密称定，置100ml锥形瓶中，精密加入正丁醇100ml，闭塞，称定重量，静置1h，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h，放冷后取下锥形瓶，密闭，称定重量，用正丁醇补足减失重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取50ml滤液，置于干燥恒重蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，移至干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；本品含正丁醇提取物不少于8.5％。 

Claims (10)

1.一种用于治疗骨关节炎的药物组合物，其特征在于该药物组合物的有效成分是由如下原料药制成的：

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的有效成分是由如下原料药制成的：

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的有效成分是由如下原料药制成的：

4.如权利要求1、2或3所述药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

A、取原料药，将鹿茸碎成细粉，备用；

B、将石斛、雪莲加50％～80％乙醇提取1～3次，每次1～2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至清膏，备用；

C、将防风、桂枝、当归加水提取挥发油，水液另存，收集挥发油，备用；

D、将提油后的药渣与牛膝等其余8味药合并，加水煎煮1～3次，每次1～2小时，滤过，合并煎液，加入C中提油后的水液，浓缩，加乙醇调至含醇量60％～75％，静置分层，过滤，上清液回收乙醇，余液与B中备用清膏合并，继续浓缩成稠膏，干燥，粉碎，与A中鹿茸细粉及C中所得挥发油混合后，加入常规制剂辅料，按照常规制剂工艺，制成临床所需剂型。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于将提取的挥发油按如下任一方法处理后再与鹿茸细粉及其他药物提取物合并：

A、将挥发油与倍他环糊精和水，按1∶7～9∶70～90的比例混合，于55～65℃下搅拌1～3小时，冷藏，滤过，低温干燥，制成挥发油的倍他环糊精包合物；

B、将挥发油溶于足量的无水乙醇中，制得挥发油的乙醇溶液。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于该药物组合物为胶囊剂，其制备方法为：

A、取原料药，将鹿茸碎成细粉，备用；

B、将石斛、雪莲加70％乙醇提取3次，每次加5倍量，提取2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至60℃时相对密度1.02-1.05的清膏，备用；

C、将防风、桂枝、当归加水提取挥发油8小时，水液另存；将所得挥发油与倍他环糊精、水按1∶8∶80比例混合，在60℃条件下搅拌2小时，冷藏，滤过，低温干燥，得挥发油包合物，备用；

D、将提油后的药渣与牛膝等其余8味药合并，加水煎煮3次，每次加水8倍量，煎煮1小时，滤过，合并煎液，加入上述提油后的水液，浓缩至60℃时相对密度1.10-1.12，加乙醇调至含醇量70％，静置分层，过滤，上清液回收乙醇，余液与B中备用清膏合并，继续浓缩至60℃时相对密度为1.20-1.25的稠膏，真空干燥，粉碎成细粉，和A中鹿茸细粉及C中挥发油包合物混合后，加入常规辅料，按照常规制剂工艺，制成胶囊剂。

7.如权利要求1、2或3所述药物组合物的有效成分检测方法，其特征在于该方法中含有如下正丁醇提取物的含量测定方法：

称取所述药物组合物2～5g，精密称定，置100ml锥形瓶中，精密加入正丁醇100ml，闭塞，称定重量，静置1h，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h，放冷后取下锥形瓶，密闭，称定重量，用正丁醇补足减失重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取50ml滤液，置于干燥恒重蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，移至干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；该药物组合物中含正丁醇提取物不少于8.0％。

8.根据权利要求7所述的有效成分检测方法，其特征在于该方法中还含有如下定性鉴别项目：

a、取所述药物组合物3～5g，加70％～90％乙醇30～50ml，回流20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加70％～90％乙醇1～2ml使之溶解，作为供试品溶液；另取甜菜碱对照品，加70％～90％乙醇溶解制成每1ml含4～6mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为8～10∶1～3∶0.4～0.6的甲醇∶水∶醋酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b、取所述药物组合物3～5g，加水30～50ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取2～3次，每次20～30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇15～30ml使之溶解，加盐酸2～4ml，加热回流1～2小时后水液浓缩至10～15ml，加水至15～25ml，加苯30～50ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯1～3ml溶解，作为供试品溶液；另取菝葜皂苷元对照品加苯制成每1ml含4～6mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为90～100∶4～6的氯仿∶乙醇混合液为展开剂展开，取出晾干；将浓硫酸以水稀释至原体积的10/7倍，按0.4～0.6∶4～6的体积比与含8％香草醛的无水乙醇溶液混合，喷于展开板上，在100℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c、取所述药物组合物3～5g，加乙醇30～50ml，回流提取1～2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～2ml使之溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇溶液，制成每1ml含1～3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为38～42∶4～6∶8～12∶0.1～0.3的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d、取所述药物组合物3～5g，用20～40ml水溶解，再用乙酸乙酯提取2～3次，每次20～30ml，合并提取液置水浴上蒸干，残渣用95％乙醇1～3ml溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1～3g同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～5μl，分别占于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8～10∶1的正己完∶乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，在365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；

e、取所述药物组合物3～5g，加水30～50ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取2～3次，每次20～30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇15～30ml使之溶解，加盐酸2～4ml，加热回流1～2小时后水液浓缩至10～15ml，加水至15～25ml，加苯30～50ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯1～3ml溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品加苯制成每1ml含3～5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8～10∶1的氯仿∶丙酮混合液为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

9.根据权利要求6所述制备方法制得的胶囊剂的有效成分检测方法，其特征在于该方法包含如下项目：

正丁醇提取物的含量测定：

精密称取胶囊剂内容物3g，置100ml锥形瓶中，精密加入正丁醇100ml，闭塞，称定重量，静置1h，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h，放冷后取下锥形瓶，密闭，称定重量，用正丁醇补足减失重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取50ml滤液，置于干燥恒重蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，移至干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；胶囊剂内容物中含正丁醇提取物不少于8.0％；

定性鉴别：

a、取胶囊内容物5g，加80％乙醇40ml，回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％乙醇1ml使之溶解，作为供试品溶液；另取甜菜碱对照品，加80％乙醇溶解制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为9∶2∶0.5的甲醇∶水∶醋酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b、取胶囊内容物5g，加水40ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20～30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇20ml使之溶解，加盐酸2ml，加热回流1小时后水液浓缩至10ml，加水至20ml，加苯40ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml溶解，作为供试品溶液；另取菝葜皂苷元对照品加苯制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为95∶5的氯仿∶乙醇混合液为展开剂展开，取出晾干；将浓硫酸以水稀释至原体积的10/7倍，按0.5∶5的体积比与含8％香草醛的无水乙醇溶液混合，喷于展开板上，在100℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c、取胶囊内容物2.5g，加乙醇40ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使之溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇溶液，制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40∶5∶10∶0.2的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d、取胶囊内容物5g，用30ml水溶解，再用乙酸乙酯提取3次，每次20～30ml，合并提取液置水浴上蒸干，残渣用95％乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别占于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己完∶乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，在365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；

e、取胶囊内容物5g，加水40ml使之溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20～30ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇20ml使之溶解，加盐酸2ml，加热回流1小时后水液浓缩至10ml，加水至20ml，加苯40ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml溶解，作为供试品溶液；取齐墩果酸对照品加苯制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的氯仿∶丙酮混合液为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

10.如权利要求1、2或3所述药物组合物在制备用于治疗或改善骨关节炎的药物中的应用。