CN101300254A

CN101300254A - N－{2－[4－氨基－2－(乙氧基甲基)－1H－咪唑并[4,5－c]喹啉－1－基]－1,1－二甲基乙基}甲磺酰胺的酰胺和氨基甲酸酯衍生物和方法

Info

Publication number: CN101300254A
Application number: CNA2006800405529A
Authority: CN
Inventors: T·A·柯舍萨加; S·尼瓦斯; B·A·莫里尔
Original assignee: Coley Pharmaceutical Group Inc
Current assignee: Coley Pharmaceutical Group Inc
Priority date: 2005-09-09
Filing date: 2006-09-08
Publication date: 2008-11-05
Also published as: US20100317684A1; EA200800782A1; BRPI0615788A2; IL190033A0; US8476292B2; KR20080045269A; ZA200803028B; EP1922317A2; CA2621831A1; WO2007030775A2; JP2009507856A; AU2006287270A1; WO2007030775A3; EP1922317A4

Abstract

披露了N－{2－[4－氨基－2－(乙氧基甲基)－1H－咪唑并[4，5－c]喹啉－1－基]－1，1－二甲基乙基}甲磺酰胺的酰胺和氨基甲酸酯衍生物，包含这些化合物的药物组合物，制备所述化合物的方法和这些化合物在调节免疫***、诱导动物细胞因子生物合成和治疗包括病毒和肿瘤病的疾病中的应用。

Description

N-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺的酰胺和氨基甲酸酯衍生物和方法

相关申请的交叉参考

本发明要求2005年9月9日提交的美国临时申请顺序号US60/715,950的优先权，将该文献引入本文作为参考。

背景技术

已经发现某些取代的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，喹啉-4-胺，四氢喹啉-4-胺，萘啶-4-胺和四氢萘啶-4-胺化合物以及某些类似噻唑并和噁唑并化合物可用作免疫应答调节剂(IRMs)，从而使得它们可用于治疗各种病症。

对化合物存在持续的关注和需求，给予这些化合物可以通过诱导细胞因子生物合成或其它机制对免疫应答产生调节作用。

发明概述

目前已经发现N-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺的某些酰胺和氨基甲酸酯衍生物对细胞因子生物合成产生诱导作用。本发明提供了这类化合物及其药学上可接受的盐，所述的化合物具有下式I：

其中R和Y如下文所定义。

式I的化合物或盐因其对细胞因子生物合成产生调节作用的能力而是有用的(例如诱导一种或多种细胞因子的生物合成或产生)并且还在对动物给药时对免疫应答产生调节作用。这使得所述化合物可用于治疗各种疾患，诸如病毒病和肿瘤病，这些疾病对免疫应答中的这类改变起反应。

本发明还提供了包含式I的化合物的药物组合物和诱导动物细胞中细胞因子生物合成、治疗动物病毒病和/或治疗动物肿瘤病的方法，通过对该动物给予式I的一种或多种化合物和/或其药学上可接受的盐或通过对该动物给予包含式I的一种或多种化合物和/或其药学上可接受的盐的药物组合物来进行。

本发明在另一个方面中提供了合成式I的化合物的方法。

本文所用的″一种(a)″、″一种(an)″、″该(the)″、″至少一种″和″一种或多种″可以互换使用。

术语″包含″及其变化形式出现在说明书和权利要求中不具有限定含义。

本发明的上述概括并非打算描述每一披露的实施方案或本发明的每一种实施方式。下文的描述更具体地举例说明了实施方案。本文还通过可以以不同组合使用的实施例的举例提供了指导原则。在每种情况下，所述的例子仅用作代表性的部分，但不应解释为排除其它例子。

本发明例示性实施方案的详细描述

本发明提供了下式I的化合物及其药学上可接受的盐：

其中R和Y如下文所定义。

本发明在一个实施方案中提供了下式I的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

Y选自-C(O)-和-C(O)-O-；且

R选自烷基、芳基、芳基亚烷基(aryalkylenyl)、杂芳基、杂芳基亚烷基(heteroarylalkylenyl)、杂环基和杂环基亚烷基(heterocyclylalkylenyl)；其中芳基和芳基亚烷基未被取代或被一个或多个选自烷基、烷氧基、芳基和卤素的取代基取代；且其中与Y连接的杂环基上的原子为碳原子。

本领域技术人员将会理解的是，对于本文出现的任意化合物而言，其任意实施方案中的下述变量中的每一个(例如R和Y)可以与其任意实施方案中和涉及式I的其它变量中的任意一个或多个组合。所得变量的组合中的每一种为本发明的一种实施方案。

例如，就式I中的某些实施方案而言，Y选自-C(O)-和-C(O)-O-。

例如，就式I中的某些实施方案而言，Y为-C(O)-。

例如，就式I中的某些实施方案而言，Y为-C(O)-O-。

就某些实施方案而言，包括上述式I实施方案中的任意一种，R选自烷基、芳基、芳基亚烷基、杂芳基、杂芳基亚烷基、杂环基和杂环基亚烷基；其中芳基和芳基亚烷基未被取代或被一个或多个选自烷基、烷氧基、芳基和卤素的取代基取代；且其中与Y连接的杂环基上的原子为碳原子。

就某些实施方案而言，包括上述式I实施方案中的任意一种，R为烷基、芳基或芳基亚烷基。就这些实施方案中的某些而言，R为C_1-10烷基。就这些实施方案中的某些而言，R为C_1-5烷基。就这些实施方案中的某些而言，R选自甲基、乙基、正-为基、异丙基、正-丁基、异丁基和叔-丁基。

就某些实施方案而言，包括上述式I实施方案中的任意一种，其中不排除R为芳基。就这些实施方案中的某些而言，R为苯基。

就某些实施方案而言，包括上述式I实施方案中的任意一种，其中不排除R为芳基亚烷基。就这些实施方案中的某些而言，R为苄基。

就某些实施方案而言，本发明提供了药物组合物，其包含治疗有效量的式I的上述实施方案中的任意一种的化合物或盐和药学上可接受的载体。

就某些实施方案而言，本发明提供了诱导动物细胞因子生物合成的方法，包含对该动物给予有效量的式I的上述实施方案中的任意一种的化合物或盐，或包含治疗有效量的式I的上述实施方案中的任意一种的化合物或盐的药物组合物。

就某些实施方案而言，本发明提供了治疗动物病毒病的方法，包含对该动物给予有效量的式I的上述实施方案中的任意一种的化合物或盐，或包含治疗有效量的式I的上述实施方案中的任意一种的化合物或盐的药物组合物。

就某些实施方案而言，本发明提供了治疗动物肿瘤病的方法，包含对该动物给予有效量的式I的上述实施方案中的任意一种的化合物或盐，或包含治疗有效量的式的上述实施方案中的任意一种的化合物或盐的药物组合物。

本文所用的术语″烷基″和前缀″烷-″包括直链和支链基团和环状基团，例如环烷基和环烯基。除非另有说明，否则这些基团包含1-20个碳原子。在某些实施方案中，这些基团具有总计至多10个碳原子，至多8个碳原子，至多6个碳原子或至多4个碳原子。环状基团可以为单环或多环且优选具有3-10个环碳原子。典型的环状基团包括环丙基、环丙基甲基、环丁基、环丁基甲基、环戊基、环戊基甲基、环己基、环己基甲基、金刚烷基和取代和未被取代的冰片基、降冰片基和降冰片烯基。

除非另有说明，否则″亚烷(alkylene)″为如上述定义的″烷基″的二价形式。术语″亚烷基(alkyleneyl)″在″亚烷″被取代时使用。例如，芳基亚烷基包含连接芳基的″亚烷″部分。

本文所用的术语″芳基″包括碳环芳族环或环系。芳基的实例包括苯基、萘基、联苯基、芴基和茚基。

除非另有说明，术语″杂原子″指原子O、S或N。

术语″杂芳基″包括包含至少一个环杂原子(例如O、S、N)的芳族环或环系。在某些实施方案中，术语″杂芳基″包括包含2-12个碳原子、1-3环、1-4个杂原子和O、S和/或N作为杂原子的环或环系。合适的杂芳基包括呋喃基、噻吩基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、***基、吡咯基、四唑基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、咔唑基、苯并噁唑基、嘧啶基、苯并咪唑基、喹喔啉基、苯并噻唑基、萘啶基、异噁唑基、异噻唑基、嘌呤基、喹唑啉基、吡嗪基、1-氧化吡啶基、哒嗪基、三嗪基、四嗪基、噁二唑基、噻二唑基等。

术语″杂环基″包括包含至少一个环杂原子(例如O、S、N)的非-芳族环或环系，并且包括上述杂芳基的所有的完全饱和和部分不饱和的衍生物。在某些实施方案中，术语″杂环基″包括包含2-12个碳原子、1-3环，1-4个杂原子和O、S和/或N作为杂原子的环或环系。典型的杂环基包括吡咯烷基、四氢呋喃基、吗啉基、硫代吗啉基、1，1-二氧代硫代吗啉基、哌啶基、哌嗪基、噻唑烷基、咪唑烷基、异噻唑烷基、四氢吡喃基、奎宁环基、高哌啶基(氮杂庚环基)、1，4-氧杂氮杂庚环基、高哌嗪基(二氮杂庚环基)、1，3-二氧戊环基、氮丙定基、氮杂环丁烷基、二氢异喹啉-(1H)-基、八氢异喹啉-(1H)-基、二氢喹啉-(2H)-基、八氢喹啉基-(2H)-基、二氢-1H-咪唑基、3-氮杂双环[3.2.2]壬-3-基等。

术语″杂环基″包括双环和三环杂环系。这类环系包括稠合和/或桥连环和螺环。稠合环除包括饱和或部分饱和环外还可以包括芳族环，例如，苯环。螺环包括通过一个螺原子连接的两个环和通过两个螺原子连接的三个环。

当″杂环基″包含氮原子时，除非另有说明，否则杂环基的连接点可以为氮原子。

本发明包括任意药学上可接受形式的本文所述的化合物(包括中间体)，包括异构体(例如非对映体和对映体)、盐、溶剂合物、多晶型物等。特别地，如果化合物为旋光的，那么本发明特别包括化合物对映体中的每一种和这些对映体的外消旋和scalemic混合物。应理解术语″化合物″包括这类形式中的任意种或全部，无论是否清楚地提及(不过有时，清楚地提及了″盐″)。

化合物的制备

可以通过包括与化学领域众所周知的那些方法类似的方法的合成途径，特别是根据本文包含的描述合成本发明的化合物。试剂一般可从商业来源获得，诸如Aldrich Chemicals(Milwaukee，Wisconsin，USA)或使用本领域技术人员众所周知的方法方便地制备(例如一般通过下列文献中所述的方法制备：Louis F.Fieser和Mary Fieser，Reagents for Organic Synthesis，v.1-19，Wiley，NewYork，(1967-1999ed.)；Alan R.Katritsky，Otto Meth-Cohn，Charles W.Rees，Comprehensive Organic Functional GroupTransformations，v 1-6，Pergamon Press，Oxford，England，(1995)；Barry M.Trost和Ian Fleming，Comprehensive Organic Synthesis，v.1-8，Pergamon Press，Oxford，England，(1991)；or BeilsteinsHandbuch der organischen Chemie，4，Aufl.Ed.Springer-Verlag，Berlin，Germany，包括增刊(也可以通过Beilstein在线数据库得到))。

为例示的目的，下述反应方案提供了用于合成本发明化合物的可能的途径。为了更详细描述各反应步骤，参见下文的实施例部分。本领域技术人员将会理解可以使用其它合成途径合成本发明的化合物。

分离和纯化的常规方法和技术可以用于分离本发明的化合物及其各种药学上可接受的盐。这类技术可以包括，例如所有类型的色谱法(高效液相色谱法(HPLC)，使用常用吸附剂，诸如硅胶的柱色谱法和薄层色谱法)，重结晶和差示(即液-液)萃取技术。

可以按照反应方案I制备本发明的化合物，其中R如上述所定义。在反应方案I中，使式I I的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺与式III的酸酐反应而得到式IV的N-(1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)酰胺，其为式I的亚组。通过任选在有碱，诸如三乙胺存在下的合适的溶剂，诸如N，N-二甲基甲酰胺中合并式II的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺与式III的酸酐进行该反应。该反应可以在环境温度下进行并且可以使用常规方法分离产物或其药学上可接受的盐。式II的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺为公知的并且可以使用公知的合成方法制备，参见美国专利US 6,677,349和其中引述的技术文件。

反应方案I

可以按照反应方案II制备本发明的化合物，其中R如上述所定义。在反应方案II中，使式II的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺与式V的氯甲酸酯反应而得到式VI的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基氨基甲酸酯，其为式I的亚组。通过在碱，诸如三乙胺存在下以受控方式将式V的氯甲酸酯加入到式II的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺的合适的溶剂，诸如二氯甲烷的混悬液或溶液中进行该反应。添加可以在低于室温下进行，诸如，例如0℃。可以使用常规方法分离产物或其药学上可接受的盐。

反应方案II

可以按照反应方案III制备本发明的化合物，其中R如上述所定义。在反应方案III中，使式II的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺与式VII的酰基氯反应而得到式IV的N-(1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)酰胺，其为式I的亚组。通过在有碱，诸如三乙胺存在下的合适的溶剂，诸如二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺中合并式II的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺与式VII的酰基氯进行该反应。该反应可以在环境温度下进行并且可以使用常规方法分离产物或其药学上可接受的盐。

反应方案III

药物组合物和生物活性

本发明的药物组合物包含治疗有效量的上述化合物或盐与药学上可接受的载体。

术语“治疗有效量”和″有效量″意旨足以诱导治疗或预防作用的化合物或盐的用量，所述的治疗或预防作用诸如细胞因子诱导，免疫调节，抗肿瘤活性和/或抗病毒活性。用于本发明药物组合物的化合物或盐的确切量将根据本领域技术人员公知的因素的不同而改变，诸如化合物或盐的物理和化学性质、载体的性质和指定的给药方案。

在某些实施方案中，本发明的组合物包含足量的活性组分或前体药物以便为受试者提供约100纳克/千克(ng/kg)-约50毫克/千克(mg/kg)，优选约10微克/千克(μg/kg)-约5mg/kg的化合物或盐的剂量。

在其它实施方案中，本发明的组合物包含足量的活性组分或前体药物以便提供得到按照Duboi法计算的剂量，例如约0.01mg/m²-约5.0mg/m²，其中使用受试者体重计算受试者的体表面积(m²)：m²＝(wtkg^0.425×身高cm^0.725)×0.007184，不过，在某些实施方案中，可以提供给予在该范围外的剂量的化合物或盐或组合物。在这些实施方案的某些中，该方法包括给予足量的化合物以便为受试者提供约0.1mg/m²-约2.0mg/m²的剂量，例如约0.4mg/m²-约1.2mg/m²的剂量。

可以使用各种剂型，诸如片剂、锭剂、非肠道用制剂、糖浆剂、霜剂、软膏剂、气雾剂、透皮贴剂、跨粘膜贴剂等。可以使用常用的药学上可接受的载体和添加剂，使用常规方法制备这些剂型，所述的常规方法一般包括将活性组分与载体混合的步骤。

可以将本发明的化合物或盐作为单一治疗剂在治疗方案中给予，或将本文所述的化合物或盐彼此或与其它活性剂联合给药，所述的其它活性剂包括其它的免疫应答调节剂、抗病毒药、抗生素、抗体、蛋白质、肽类、寡核苷酸等。

已经证实本发明的化合物或盐在按照下述测试进行的实验中诱导某些细胞因子产生。这些结果表明所述的化合物或盐可用于以大量不同方式调节免疫应答，从而使得它们可用于治疗各种病症。

其产生可以通过给予本发明的化合物或盐诱导的细胞因子一般包括干扰素-α(IFN-α)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及某些白细胞介素(IL)。其生物合成可以由本发明的化合物或盐诱导的细胞因子包括IFN-α、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10和IL-12和各种其它细胞因子。在其它作用中，这些和其它细胞因子可以抑制病毒产生和肿瘤细胞生长，从而使得所述的化合物或盐可用于治疗病毒病和肿瘤病。因此，本发明提供了诱导动物细胞因子生物合成的方法，包含对该动物给予有效量的本发明化合物或盐。给予所述化合物或盐以便诱导细胞因子生物合成的动物可以具有如上文所述的疾病，例如病毒病或肿瘤病，并且给予所述化合物或盐可以提供治疗作用。或者，可以在动物得病前对该动物给予所述的化合物或盐，以便给予所述化合物或盐可以提供预防性的治疗。

除诱导细胞因子产生的能力外，本文所述的化合物或盐还可以影响先天免疫应答中的其它方面。例如，可以刺激天然杀伤细胞活性，即一种可能因细胞因子诱导产生的作用。所述的化合物或盐还可以活化巨噬细胞，由此刺激一氧化氮分泌和额外的细胞因子产生。此外，所述的化合物或盐可以导致B-淋巴细胞增殖和分化。

本文所述的化合物或盐还可以对获得性免疫应答具有作用。例如，可以间接诱导T辅助细胞类型1(T_H1)细胞因子IFN-γ产生，并且在给予所述化合物或盐时，可以抑制T辅助细胞类型2(T_H2)细胞因子IL-4、IL-5和IL-13产生。

无论是预防还是治疗疾病而言，且无论是就影响先天或获得性免疫而言，均可以单独或与例如疫苗佐剂中的一种或多种活性成分联合给予所述的化合物或盐或组合物。当与其它成分一起给予时，可以分别给予所述的化合物或盐或组合物和其它成分或多种成分；一起但独立地以诸如溶液形式给予，或一起并且彼此结合地给予，所述的结合诸如(a)共价连接或(b)非-共价结合，例如以胶体混悬液的形式。可以为治疗使用的本文确定的化合物或盐或组合物所针对的疾患包括，但不限于：

(a)病毒病，诸如，例如因如下病毒感染导致的疾病：腺病毒；疱疹病毒(例如HSV-I、HSV-II、CMV或VZV)；痘病毒(例如正痘病毒属，诸如天花或牛痘或触染性软疣)；微小核醣核酸病毒(例如鼻病毒或肠病毒)；正粘病毒(例如流感病毒)；副粘液病毒(例如副粘液病毒，腮腺炎病毒，麻疹病毒和呼吸道合胞病毒(RSV))；冠状病毒(例如SARS)；乳多空病毒(例如***瘤病毒，诸如导致生殖器疣，寻常性疣或跖疣的那些)；嗜肝性DNA病毒(例如乙型肝炎病毒)；黄病毒属(例如丙型肝炎病毒或登革热病毒)或逆转录病毒(例如慢病毒属诸如HIV)；

(b)细菌病，诸如，例如因细菌感染导致的疾病，所述的细菌例如为埃希氏杆菌属(Escherichia)、肠杆菌属(Enterobacter)、沙门菌属(Salmonella)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、志贺氏菌属(Shigella)、利斯特氏菌属(Listeria)、气杆菌属(Aerobacter)、螺杆菌属(Helicobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链球菌属(Streptococcus)、衣原体属(Chlamydia)、支原体属(Mycoplasma)、肺炎球菌属(Pneumococcus)、奈瑟球菌属(Neisseria)、梭菌属(Clostridium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、棒杆菌属(Corynebacterium)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、弧菌属(Vibrio)、沙雷菌属(Serratia)、普罗威登斯菌属(Providencia)、色杆菌属(Chromobacterium)、布鲁杆菌属(Brucella)、耶尔森氏菌属(Yersinia)、嗜血菌属(Haemophilus)或博德特菌属(Bordetella)；

(c)其它传染病，诸如衣原体属，真菌疾病，包括，但不限于念珠菌病、曲霉菌病、组织胞浆菌病、隐球菌性脑膜炎；或寄生虫病，包括，但不限于疟疾、卡氏肺囊虫性肺炎、利什曼病、隐孢子虫病、弓形体病和锥虫感染；

(d)肿瘤病，诸如上皮内瘤样变；宫颈发育不良；光化性角化病；基底细胞癌；鳞状细胞癌；肾细胞癌；卡波西肉瘤；黑素瘤；白血病，包括，但不限于急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓样白血病、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、何杰金淋巴瘤、非-何杰金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤和多毛细胞白血病和其它癌症；

(e)T_H2-介导的特应性疾病，诸如特应性皮炎或湿疹、嗜酸性细胞增多症、哮喘、过敏反应、过敏性鼻炎和Ommen综合征；

(f)某些自身免疫病，诸如***性红斑狼疮、特发性血小板增多、多发性硬化、盘状狼疮、斑秃；和

(g)与创伤修复相关的疾病，诸如，例如抑制瘢痕疙瘩形成和其它类型的疤痕(例如促进伤口愈合，包括慢性伤口)。

另外，本文确定的化合物或盐可以作为疫苗佐剂，以便与任意升高体液和/或细胞介导的免疫应答的物质联合使用，所述的任意升高体液和/或细胞介导的免疫应答的物质诸如，例如肝病毒，细菌或寄生虫免疫原；失活的病毒，肿瘤衍生的，原生动物，生物体衍生的，真菌或细菌免疫原；类毒素；毒素；自身抗原；多糖类；蛋白质；糖蛋白；肽类；细胞疫苗；DNA疫苗；自体疫苗；重组蛋白等；应用于如下方面：例如BCG、霍乱、瘟疫、伤寒、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、A型流感、B型流感、副流感、脊髓灰质炎、狂犬病、麻疹、腮腺炎、风疹、黄热病、破伤风、白喉、流感嗜血杆菌b、肺结核、脑膜炎球菌和肺炎球菌疫苗、腺病毒、HIV、水痘、巨细胞病毒、登革热、猫白血病、鸡瘟、HSV-1和HSV-2、猪霍乱、日本脑炎、呼吸道合胞病毒、轮状病毒、***瘤病毒、黄热病和阿尔茨海默病。

本文确定的化合物或盐特别有助于缺乏免疫功能的个体。例如，化合物或盐可以用于在例如移植患者，癌症患者和HIV患者中治疗细胞介导的免疫性抑制后发生的机会致病菌感染和肿瘤。

因此，可以在有此需要的动物中(具有所述疾病)通过对动物给予治疗有效量的本发明化合物或盐治疗上述疾病或疾病类型中的一种或多种，例如病毒病或肿瘤病。

还可以通过将有效量的本文所述的化合物或盐作为疫苗佐剂对动物给药进行疫苗接种。在一个实施方案中，提供了对动物进行疫苗接种的方法，包含对该动物给予有效量的本文所述的化合物或盐作为疫苗佐剂。

有效诱导细胞因子生物合成的化合物或盐的用量为足以产生一种或多种细胞类型的用量，诸如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞和B-细胞以便产生一定量的一种或多种细胞因子，诸如，例如IFN-α、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10和IL-12，该量在这类细胞因子背景水平上得以增加(诱导)。确切用量根据本领域中公知的因素的不同而改变，但预计剂量约为100ng/kg-约50mg/kg，优选约10μg/kg-约5mg/kg。在其它实施方案中，预计该用量为，例如约0.01mg/m²-约5.0mg/m²的剂量(根据如上所述的Dubois法计算)，不过，在某些实施方案中，可以通过给予该范围外的剂量的化合物或盐对细胞因子生物合成进行诱导或抑制。在这些实施方案中的某些中，该方法包括对受试者给予足量的化合物或盐或组合物，以便提供约0.1mg/m²-约2.0mg/m²的剂量，例如，约0.4mg/m²-约1.2mg/m²的剂量。

本发明还提供了治疗动物病毒感染的方法和治疗动物肿瘤病的方法，包含对该动物给予有效量的本发明化合物或盐。有效治疗或抑制病毒感染的用量为导致病毒感染表现中的一种或多种减轻的用量，所述的病毒感染的表现诸如与未治疗的的对照组动物相比的病毒损害、病毒载量、病毒产生速度和死亡率。有效进行这类治疗的确切用量将根据本领域中公知的因素的不同而改变，但预计剂量约为100ng/kg-约50mg/kg，优选约10μg/kg-约5mg/kg。有效***疾患的化合物或盐的用量为导致肿瘤大小减小或肿瘤病灶数量减少的用量。此外，确切用量将根据本领域中公知的因素的不同而改变，但预计剂量约为100ng/kg-约50mg/kg，优选约10μg/kg-约5mg/kg。在其它实施方案中，预计该用量例如约为0.01mg/m²-约5.0mg/m²的剂量(根据如上所述的Dubois法计算)，不过，在某些实施方案中，这些方法中的任一种可以通过给予该范围外的剂量的化合物或盐来进行。在这些实施方案的某些中，该方法包括对受试者给予足量的化合物或盐以便提供约0.1mg/m²-约2.0mg/m²的剂量，例如约0.4mg/m²-约1.2mg/m²的剂量。

因此，可以在有此需要的动物中(具有所述疾病)，通过对动物给予治疗有效量的任意本申请所述实施方案或其组合的式I的化合物或盐治疗上述疾病或疾病类型中的一种或多种，例如病毒病或肿瘤病。还可以通过将有效量的任意本申请所述实施方案或其组合的式I的化合物或盐作为疫苗佐剂给药对动物进行疫苗接种。在一个实施方案中，提供了对动物进行疫苗接种的方法，包含对该动物给予有效量的本文所述的化合物或盐作为疫苗佐剂。

可以对任意合适的受试者实施本发明的方法。合适的受试者包括，但不限于动物，诸如但不限于人、非-人的灵长类、啮齿动物、狗、猫、马、猪、绵羊、山羊或牛。

除本文特别描述的制剂和应用外，例如，在下列文献中还描述了适合于本发明化合物的其它制剂、应用和给药装置：国际公开号WO03/077944和WO02/036592；美国专利US6,245,776；和美国公开号US2003/0139364、US2003/185835、US2004/0258698、US2004/0265351、US2004/076633和US2005/0009858。

通过下列实施例进一步例示本发明的目的和优点，但在这些实施例中描述的具体物质和用量以及其它条件和详细描述不应视为是对本发明的过度限定。

实施例

在下文的实施例中，使用COMBIFLASH***(购自Teledyne Isco，Inc.，Lincoln，Nebraska，USA的自动高效快速纯化产品)或HORIZONHPFC***(购自Biotage，Inc，Charlottesville，Virginia，USA的自动高效快速纯化产品)进行自动快速色谱。在实施例中给出了用于每一纯化的洗脱液。在某些色谱分离中，将溶剂混合物80/18/2v/v/v氯仿/甲醇/浓氢氧化铵(CMA)用作洗脱液中的极性成分。在这些分离中，将CMA与氯仿按照所示比例混合。

实施例1

N-(2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)乙酰胺

将乙酰氯(150μL，1.1当量(eq))加入到在三乙胺(401μL，1.5eq)和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(5mL)的混合物中的N-{2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺(750mg，1eq)中并且在环境温度下搅拌所得溶液。2小时后，加入乙酐(1mL)。将该反应混合物在环境温度下搅拌1小时且然后在减压下浓缩。通过自动快速色谱法纯化残余物(硅胶，使用在包含1％氢氧化铵的二氯甲烷中的0-10％甲醇梯度洗脱)而得到278mg N-(2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)乙酰胺，为白色粉末，mp 75-76℃。对计算C₂₀H₂₇N₅O₄S0.40H₂O的分析值：C，54.50；H，6.36；N，15.89。测定值：C，54.70；H，6.10；N，15.58。

实施例2

N-(2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)苯甲酰胺

将苯甲酸酐(636mg，1.1eq)加入到在三乙胺(533μL，1.5eq)和DMF(5mL)的混合物中的N-{2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺(1g，1eq)中并且在环境温度下搅拌所得溶液。在4小时后，再加入苯甲酸酐(约0.1eq)并且将该反应混合物搅拌过夜。用水(约40mL)稀释该反应混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液将所得混悬液调整至pH 7，然后用乙酸乙酯和二氯甲烷萃取。在减压下浓缩合并的有机相。通过自动快速色谱法纯化残余物(硅胶，用在包含1％氢氧化铵的二氯甲烷中的0-10％甲醇梯度洗脱)而得到894mg N-(2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)苯甲酰胺，为白色粉末，mp80-83℃。对C₂₅H₂₉N₅O₄S·0.60CH₄O的分析计算值：C，59.73；H，6.15；N，13.06。测定值：C，59.44；H，5.75；N，13.69。

实施例3

N-(2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)-2-甲基丙酰胺

将异丁酸酐(459μL，1eq)加入到在DMF(3mL)中的N-{2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺(1.08g，1eq)中并且在环境温度下搅拌所得溶液。在4小时后，再加入异丁酸酐(约0.5eq)并且将该反应混合物搅拌过夜。用***(约25mL)稀释该反应混合物，搅拌15分钟，然后在减压下浓缩。用水(约30mL)稀释残余物，然后用乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机层，用硫酸镁干燥，过滤，然后在减压下浓缩而得到油状物。通过自动快速色谱法纯化该油状物(硅胶，用在包含1％氢氧化铵的二氯甲烷中的0-10％甲醇梯度洗脱)而得到0.77g黄色粉末。在60℃下的真空中将该物质干燥过夜，得到N-(2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)-2-甲基丙酰胺，为黄色粉末，mp 67-70℃。对C₂₂H₃₁N₅O₄S·0.60H₂O的分析计算值：C，55.94；H，6.87；N，14.83。测定值：C，55.70；H，6.57；N，14.49。

实施例4

N-(2-(乙氧基甲基)-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)-2，2-二甲基丙酰胺

将三甲基乙酐(564μL，1eq)加入到在DMF(3mL)中的N-{2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺(1.08g，1eq)中并且在环境温度下搅拌所得溶液。在4小时后，再加入三甲基乙酐(约0.5eq)并且将该反应混合物搅拌过夜。用***(约25mL)稀释该反应混合物，搅拌15分钟，然后在减压下浓缩。用水(约30mL)洗涤有机层，用硫酸镁干燥，过滤，然后在减压下浓缩而得到黄色固体。通过自动快速色谱法纯化该油状物(硅胶，用在包含1％氢氧化铵的二氯甲烷中的0-10％甲醇梯度洗脱)而得到。在真空中干燥固体，然后通过自动快速色谱法纯化该固体(硅胶，用在包含1％氢氧化铵的二氯甲烷中的0-10％甲醇梯度洗脱)而得到0.89g黄色粉末。在60℃下的真空中将该物质干燥过夜而得到N-(2-(乙氧基甲基)-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基)-2，2-二甲基丙酰胺，为黄色粉末，mp 85-89℃。对C₂₃H₃₃N₅O₄S·0.50H₂O的分析计算值：C，57.00；H，7.07；N，14.45。测定值：C，57.34；H，6.89；N，14.24。

实施例5

2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基氨基甲酸乙酯

将三乙胺(2.67mL，5eq)加入到冷却的(冰/水浴)在二氯甲烷(150mL)中的N-{2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺(1.5g，1eq)的混悬液中。滴加氯甲酸乙酯(1.37g，3.3eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液而得到澄清溶液。使该反应混合物在搅拌24小时的情况下达到环境温度。用水(150mL)、4％碳酸钠(150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)依次洗涤该反应混合物。在减压下浓缩有机层。通过自动快速色谱法纯化残余物(硅胶，使用0-20％在氯仿中的CMA线性梯度洗脱，1500mL)，随后从***中重结晶而得到1.25g 2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基氨基甲酸乙酯，为白色粉末，mp 163-165℃。对C₂₁H₂₉N₅O₅S的分析计算值：C，54.41；H，6.31；N，15.11。测定值：C，54.52；H，6.43；N，14.91。

实施例6

2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基氨基甲酸丙酯

将三乙胺(2.67mL，5eq)加入到冷却的(冰/水浴)在二氯甲烷(150mL)中的N-{2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺(1.5g，1eq)中的混悬液中。滴加氯甲酸丙酯(1.55g，3.3eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液而得到澄清溶液。使该反应混合物在搅拌24小时的情况下达到环境温度下。用水(150mL)、4％碳酸钠(150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)依次洗涤该反应混合物。在减压下浓缩有机层。通过自动快速色谱法纯化残余物(硅胶，使用0-20％在氯仿中的CMA线性梯度洗脱，1500mL)，随后从***中重结晶而得到1.23g 2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基氨基甲酸丙酯，为白色粉末，mp 177-179℃。对C₂₂H₃₁N₅O₅S的分析计算值：C，55.33；H，6.54；N，14.66。测定值：C，55.41；H，6.47；N，14.45。

实施例7

2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基氨基甲酸丁酯

将三乙胺(2.67mL，5eq)加入到冷却的(冰/水浴)在二氯甲烷(150mL)中的N-{2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺(1.5g，1eq)的混悬液中。滴加氯甲酸丁酯(1.73g，3.3eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液而得到澄清溶液。使该反应混合物在搅拌24小时的情况下达到环境温度下。用水(150mL)、4％碳酸钠(150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)依次洗涤该反应混合物。在减压下浓缩有机层。通过自动快速色谱法纯化残余物(硅胶，使用0-20％在氯仿中的CMA线性梯度洗脱，1500mL)，随后从***中重结晶而得到1.23g 2-乙氧基甲基-1-{2-甲基-2-[(甲基磺酰基)氨基]丙基}-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-基氨基甲酸丙酯，为白色粉末，mp 125-127℃。对C₂₃H₃₃N₅O₅S的分析计算值：C，56.19；H，6.77；N，14.25。测定值：C，56.35；H，6.65；N，14.24。

典型化合物

某些典型化合物，包括上述实施例中所述的某些具有下式Ia和下表中所示的Y和R取代基，其中该表中的每一行与式Ia匹配，代表本发明的具体实施方案。

Y	R
Y	R	-C(O)-	甲基
-C(O)-	乙基	-C(O)-	甲基
-C(O)-	乙基	-C(O)-	n-丙基
-C(O)-	异丙基	-C(O)-	n-丙基
-C(O)-	异丙基	-C(O)-	正-丁基
-C(O)-	异丁基	-C(O)-	正-丁基
-C(O)-	异丁基	-C(O)-	叔-丁基
-C(O)-	苯基	-C(O)-	叔-丁基
-C(O)-	苯基	-C(O)-	苄基
-C(O)-O-	甲基	-C(O)-	苄基
-C(O)-O-	甲基	-C(O)-O-	乙基
-C(O)-O-	正-丙基	-C(O)-O-	乙基
-C(O)-O-	正-丙基	-C(O)-O-	异丙基
-C(O)-O-	正-丁基	-C(O)-O-	异丙基
-C(O)-O-	正-丁基	-C(O)-O-	异丁基
-C(O)-O-	叔-丁基	-C(O)-O-	异丁基
-C(O)-O-	叔-丁基	-C(O)-O-	苯基
-C(O)-O-	苄基	-C(O)-O-	苯基

正如通过在使用下述方法测试时干扰素α和/或肿瘤坏死因子α在人细胞中的水平增加所证实的，已经发现本发明的化合物可以对细胞因子生物合成进行调节。

人细胞中的细胞因子诱导

将体外人血细胞***用于评价细胞因子诱导。活性基于如Testerman等在“Cytokine Induction by the ImmunomodulatorsImiquimod and S-27609”，Journal of Leukocyte Biology，58，365-372(9月，1995)所述对分泌入培养基的干扰素(α)和肿瘤坏死因子(α)(分别为IFN-α和TNF-α)的测定。

培养物的血细胞制备

通过静脉穿刺将来自健康人供体的全血采集入包含EDTA的vacutainer管或注射器。通过使用HISTOPAQUE-1077(Sigma，St.Louis，MO)或Ficoll-Paque Plus(Amersham Biosciences Piscataway，NJ)进行梯密度离心从全血中分离外周血单核细胞(PBMC)。使用Dulbecco磷酸缓冲盐水(DPBS)或Hank平衡盐溶液(HBSS)按照1∶1稀释血液。或者将全血放入包含密度梯度培养基的Accuspin(Sigma)或LeucoSep(Greiner Bio-One，Inc.，Longwood，FL)玻璃料离心管。采集PBMC层并且用DPBS或HBSS洗涤两次，且重新以4×10⁶个细胞/mL悬浮于完全RPMI中。将PBMC混悬液加入到包含等体积RPMI完全培养基的96孔平底无菌组织培养板中，所述的培养基中包含测试化合物。

化合物制备

使化合物在二甲亚砜(DMSO)中增溶。DMSO浓度不应超过1％的终浓度以便添加到培养孔中。化合物的测试浓度范围一般在30-0.014μM。对照组包括仅含培养基的细胞样品、仅含DMSO的细胞样品(无化合物)和含参比化合物的细胞样品。

孵育

将测试化合物溶液以60μM加入到包含完全RPMI的第一个孔中并且在孔中进行3倍系列稀释。然后将PBMC混悬液以等体积加入到各孔中，使测试化合物浓度达到所需范围(通常为30-0.014μM)。PBMC混悬液的终浓度为2×10⁶细胞/mL。用无菌塑料盖覆盖平板，缓慢混合且然后在37℃下和5％二氧化碳气体环境中孵育18-24小时。

分离

在孵育后，在4℃下将平板以1000rpm(约200xg)离心10分钟。取出不含细胞的培养物上清液并且转入无菌聚丙烯管。将样品维持在-30--70℃下，直到分析为止。通过ELISA分析样品的IFN-α并且通过IGEN/BioVeris测定法分析样品的TNF-α。

干扰素(α)和肿瘤坏死因子(α)分析

使用来自PBL Biomedical Laboratories，Piscataway，NJ的人多-亚型比色夹心式ELISA(Catalog Number 41105)测定IFN-α浓度。用pg/mL表示结果。

通过ORIGEN M-系列免疫测定来测定TNF-α浓度并且用来自BioVeris Corporation，先前为IGEN International，Gaithersburg，MD的IGEN M-8分析仪读取数据。该免疫测定法使用来自BiosourceInternational，Camarillo，CA人TNF-α俘获和检测抗体对(CatalogNumbers AHC3419和AHC3712)。用pg/mL表示结果。

测定数据和分析

总之，测定的数据输出由作为化合物浓度(x-轴)的函数的TNF-α和IFN-α浓度值(y-轴)组成。

数据分析分两步。首先，从每一读数值中扣除平均DMSO(DMSO对照孔)或实验本底(通常IFN-α为20pg/mL，TNF-α为40pg/mL)中的较大者。如果从本底扣除中产生任何负值，那么将读数报导为″*″，并且标注为并非可靠地检测到的。在随后的计算和统计中，将″*″处理为0。第二步，用所有的本底扣除值乘以单一调整比以便减少实验与实验之间的变异性。调整比为新实验中的参比化合物的面积除以基于前61次实验的参比化合物的预计面积(未调整的读数)。这在不改变剂量-响应曲线形状的情况下产生新数据的读数标度(y-轴)。所用的参比化合物为2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-6，7，8，9-四氢-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]乙醇水合物(美国专利US5,352,784；实施例91)且预计的面积为来自前61次实验中的剂量中位值的总和。

基于指定实验和化合物的本底扣除的参比物调整的结果计算最小有效浓度。最小有效浓度(μmolar)为对测试细胞因子而言在固定生长因子浓度(通常IFN-α为20pg/mL，TNF-α为40pg/mL)范围内诱导应答的测试化合物浓度的最低值。最大应答为在剂量-响应中产生的细胞因子的最大量(pg/ml)。

人细胞中细胞因子的诱导

(高流通量筛选)

如下为高通量筛选改进上述人细胞中细胞因子诱导的试验方法。

培养物的血细胞制备

通过静脉穿刺将来自健康人供体的全血采集入包含EDTA的vacutainer管或注射器。通过使用HISTOPAQUE-1077(Sigma，St.Louis，MO)或Ficoll-Paque Plus(Amersham Biosciences Piscataway，NJ)进行梯密度离心从全血中分离外周血单核细胞(PBMC)。将全血放入包含密度梯度培养基的Accuspin(Sigma)或LeucoSep(GreinerBio-One，Inc.，Longwood，FL)玻璃料离心管。采集PBMC层并且用DPBS或HBSS洗涤两次，且重新以4×10⁶个细胞/mL悬浮于完全RPMI中(2-倍于最终细胞密度)。将PBMC混悬液加入到96孔平底无菌组织培养板中。

化合物制备

使化合物在二甲亚砜(DMSO)中增溶。一般在30-0.014μM范围浓度下测试化合物。对照组包括在每一平板上仅含培养基的细胞样品，仅含DMSO的细胞样品(无化合物)和含参比化合物2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-6，7，8，9-四氢-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]乙醇水合物(美国专利US5,352,784；实施例91)的细胞样品。以7.5mM将测试化合物溶液加入到给药平板的第一个孔中并且对7个随后在DMSO中的浓度进行3倍系列稀释。然后将RPMI完全培养基加入到测试化合物稀释液中以便达到高于最终测试浓度范围2-倍的最终化合物浓度(60-0.028μM)。

孵育

然后将化合物溶液加入到包含使测试化合物浓度达到所需范围(通常30-0.014μM)以且DMSO浓度达到0.4％的PBMC混悬液的孔中。PBMC混悬液的终浓度为2×10⁶个细胞/mL。用无菌塑料盖覆盖平板，缓慢混合且然后在37℃下和5％二氧化碳气体环境中孵育18-24小时。

分离

在孵育后，在4℃下将平板以1000rpm(约200xg)离心10分钟。用MesoScale Discovery，Inc.(MSD，Gaithersburg，MD)的适当俘获抗体预包被4-plex Human Panel MSD MULTI-SPOT 96-孔平板。取出不含细胞的培养物上清液并且转入MSD平板。一般测试新鲜样品，不过，可以将它们维持在-30--70℃下，直到分析为止。

干扰素-α和肿瘤坏死因子-α分析

MSD MULTI-SPOT平板在每个孔内包含人TNF-α和已经在具体斑点上预包被的人IFN-α的俘获抗体。每个孔包含4个斑点：1个人TNF-α俘获抗体(MSD)斑点，1个人IFN-α俘获抗体(PBL BiomedicalLaboratories，Piscataway，NJ)斑点和2个无活性的牛血清清蛋白斑点。人TNF-α俘获和检测抗体对来自MesoScale Discovery。人IFN-α多-亚型抗体(PBL Biomedical Laboratories)俘获所有的IFN-α亚型，但IFN-αF(IFNA21)除外。标准品由重组人TNF-α(R&D Systems，Minneapolis，MN)和IFN-α(PBL Biomedical Laboratories)组成。在分析时将样品和单独的标准品加入到各MSD平板上。将两种人IFN-α检测抗体(Cat.Nos.21112&21100，PBL)以2∶1的比例彼此使用(重量∶重量)以便测定IFN-α浓度。使用SULFO-TAG试剂(MSD)标记细胞因子-特异性检测抗体。在将SULFO-TAG标记的检测抗体添加到各孔中后，使用MSD’s SECTOR HTS READER读取各孔的电化学发光水平。在使用已知细胞因子标准品计算时用pg/mL表示结果。

测定数据和分析

总之，测定的数据输出由作为化合物浓度(x-轴)的函数的TNF-α或IFN-α浓度值(y-轴)组成。

在指定实验中进行分板标度(plate-wise scaling)分析，目的在于减少相同实验内相关的平板与平板之间的变异性。首先，从每一读数值中扣除中值(median)DMSO(DMSO对照孔)或实验背景(通常IFN-α为20pg/mL，TNF-α为40pg/mL)中的较大者。将从背景扣除中可能产生的负值设定为0。在指定实验内每一平板具有用作对照的参比化合物。将该对照组用于计算在测定中通过所有平板的曲线下的预计中值面积。对每一平板将分板标度因子计算为特定平板上参比化合物的面积与整个实验预计的平均面积之比。然后使来自每一平板的数据乘以分板标度因子。仅报导了来自具有标度因子为0.5-2.0(就两种细胞因子IFN-α，TNF-α而言)的平板的数据。对来自具有上述区间外的比例因子的平板的数据重新测试，直到它们具有上述区间内的标度因子。上述方法在不改变曲线形状的情况下产生了y-值的标度。所用的参比化合物为2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-6，7，8，9-四氢-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]乙醇水合物(美国专利US5,352,784；实施例91)。预计的中值面积为通过指定实验的组成部分的所有平板的中值面积。

还可以进行第二种标度分析以便减少实验之间的变异性(通过多次实验)。使所有背景扣除的值乘以单一调整比以便减少实验与实验之间的变异性。调整比为新实验中的参比化合物的面积除以基于在先实验的平均值的参比化合物的预计面积(未调整的读数)。这在不改变剂量-响应曲线形状的情况下产生新数据的读数标度(y-轴)。所用的参比化合物为2-[4-氨基-2-乙氧基甲基-6，7，8，9-四氢-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]乙醇水合物(美国专利US5,352,784；实施例91)且预计的面积为来自在先实验的剂量平均值中值剂量值的总和。

基于指定实验和化合物的背景扣除的参比物调整的结果计算最小有效浓度。最小有效浓度(μmolar)为对测试细胞因子而言在固定生长因子浓度(通常IFN-α为20pg/mL，TNF-α为40pg/mL)范围内诱导应答的测试化合物浓度的最低值。最大应答为在剂量-响应中产生的细胞因子的最大量(pg/ml)。

将本文引述的专利、专利对比文件和公开文献的全部披露内容完整地引入作为参考，就如同将它们各自引入一样。本领域技术人员显然可以在不脱离本发明范围和精神的情况下对本发明进行各种变型和改变。应理解本发明并非受到本文所述的例示性实施方案和实施例的过度限定，并且这类实施例和实施方案仅作为实例提供，而本发明的范围仅由本申请所附的权利要求书限定。

Claims

1.式I的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

Y选自-C(O)-和-C(O)-O-；且

R选自烷基、芳基、芳基亚烷基、杂芳基、杂芳基亚烷基、杂环基和杂环基亚烷基；其中芳基和芳基亚烷基未被取代或被一个或多个选自烷基、烷氧基、芳基和卤素的取代基取代；且其中与Y连接的杂环基上的原子为碳原子。

2.权利要求1所述的化合物或盐，其中Y为-C(O)-。

3.权利要求1所述的化合物或盐，其中Y为-C(O)-O-。

4.权利要求1、2或3所述的化合物或盐，其中R为烷基，芳基或芳基亚烷基。

5.权利要求4所述的化合物或盐，其中R为C_1-10烷基。

6.权利要求5所述的化合物或盐，其中R为C_1-5烷基。

7.权利要求6所述的化合物或盐，其中R选自甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基和叔-丁基。

8.权利要求4所述的化合物或盐，其中R为芳基。

9.权利要求8所述的化合物或盐，其中R为苯基。

10.权利要求4所述的化合物或盐，其中R为芳基亚烷基。

11.权利要求10所述的化合物或盐，其中R为苄基。

12.药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1-11中任意一项的化合物或盐和药学上可接受的载体。

13.诱导动物细胞因子生物合成的方法，包含对该动物给予有效量的权利要求1-11中任意一项的化合物或盐或权利要求12所述的药物组合物。

14.治疗动物病毒病的方法，包含对该动物给予治疗有效量的权利要求1-11中任意一项的化合物或盐或权利要求12所述的药物组合物。

15.治疗动物肿瘤病的方法，包含对该动物给予治疗有效量的权利要求1-11中任意一项的化合物或盐或权利要求12所述的药物组合物。