CN101249132A

CN101249132A - 一种地锦草有效成分的制备工艺

Info

Publication number: CN101249132A
Application number: CNA200810103792XA
Authority: CN
Inventors: 张树祥; 熊国裕
Original assignee: BEIJING XINGHAO MEDICAL Co Ltd
Current assignee: BEIJING XINGHAO MEDICAL Co Ltd
Priority date: 2008-04-11
Filing date: 2008-04-11
Publication date: 2008-08-27

Abstract

本发明涉及一种地锦草有效成分的制备方法，地锦草药材经溶媒提取后，采用碱溶酸沉和聚酰胺树脂吸附想结合的方式制备其有效成分，所得提取物有效成分含量高，工艺操作简易可行。

Description

一种地锦草有效成分的制备工艺

技术领域

本发明属于天然药物有效成分制备领域，具体涉及一种地锦草有效成分的制备工艺。

背景技术

地锦草为大戟科大戟属植物地锦草(Euphorbia himifusa Willd.)的地上全草，又名血见愁、红茎草、铺地草、奶汁草等，生于原野荒地、田间路旁，资源丰富，分布较广。地锦草属清热解毒类中药，具有清热解毒、活血止血、利湿通乳之功效，常用于治疗泄痢、臃肿疔疮、出血、湿热黄疸和乳汁不通等，已被广泛应用于临床，其水煎剂、酊剂对菌痢、肠炎等有很好的疗效。其成分主要有黄酮类和鞣质类，其中叶中鞣质成分较多。目前，地锦草相应的制剂与传统中药制剂普遍存在的问题相似，即服用量较大。中国专利CN1895331A公开了地锦草有效部位及其有效成分在制备抗真菌作用的药物中的用途，其所得的有效部位为地锦草药材经简单的水煎煮或乙醇简单提取，或最多经大孔吸附处理，所得的提取物中成分较杂，服用量较大。张纪兴等(张纪兴，李坚，等.大孔树脂吸附法富集地锦草总黄酮的工艺研究.中药材[J]2002，25(2)：123～125)采用大孔吸附树脂法处理地锦草总黄酮，经大孔树脂吸附后所得提取物中总黄酮的含量约为16％。

发明内容

本发明的目的在于提供一种地锦草有效成分的制备方法，本发明方法中，地锦草药材粗提物经碱溶解酸沉后，再用聚酰胺柱富集，所得有效成分杂质少，成分较为单一。

地锦草中由于含有较多的黄酮类成分和鞣质类成分，黄酮是地锦草的有效成分，在分离过程中，由于鞣质与黄酮类成分在结构上有较多的相似，单纯大孔树脂富集纯化黄酮类成分时常容易带入较多的鞣质类，且由于其均含有较多的酚羟基，呈现一定的酸性，用碱溶酸沉除去别的非酸性的杂质成分的同时，鞣质和黄酮类成分并没有得到较好的分离。聚酰胺是一类对具有酚羟基结构的化合物吸附能力较强的树脂，尤其是对多邻酚羟基化合物，吸附非常牢固，通常需用碱才能达到洗脱的目的。利用聚酰胺的吸附特点，以及黄酮和鞣质的成酸性的性质，本发明采用碱溶酸沉结合聚酰胺树脂吸附的方法，纯化地锦草黄酮类化合物，所得提取物中，黄酮类成分含量高，且由于事先经碱溶酸沉步骤，除去很多非酸性成分杂质，处理后增加聚酰胺树脂的负荷量，同样多的树脂可以处理更多的地锦草药材。

具体地，本发明的制备工艺可以是：

地锦草药材经溶媒提取后，所得药材提取液减压浓缩，浓缩物用碱性水溶液提取，得到碱性水提清液，碱性水提液以酸调pH至1～4后，过滤，得沉淀，沉淀物以低于10％的醇分散溶解后，上聚酰胺树脂柱处理，收集富含黄酮类的流份即得地锦草活性提取物。

更为详细地，本发明地锦草活性成分的制备方法为：

地锦草干燥药材，以50％～80％的乙醇提取，乙醇提取液合并，浓缩至浸膏状，浸膏以pH值大于10的碱液提取，过滤，取碱提取清液，碱提液以酸调pH至1～4后，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至蒸馏水流出液呈中性，沉淀以小于10％的乙醇分散，将分散液上已处理好的聚酰胺吸附树脂，先以低于10％的乙醇洗脱至洗脱液颜色变淡，改用45％到80％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，收集后部分乙醇洗脱液，合并，浓缩，干燥，即得地锦草活性成分提取物。

更为具体地，本发明活性成分的制备方法可以为：

地锦草干燥药材，以60％～75％的乙醇回流提取3次，过滤，合并乙醇提取液，减压浓缩成浸膏状，浸膏以5％～15％的NaOH溶液提取2～3次，过滤，去清液，清液以HCl调pH至1～3，摇匀，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至水洗液呈中性，沉淀再以5％的乙醇分散溶解，分散液上已处理好的聚酰胺吸附树脂，先以10％的乙醇洗脱至10％的醇洗液颜色变淡，改用65％的乙醇洗脱，至颜色变淡，黄酮类反应呈阴性，合并70％的乙醇洗脱液，浓缩，干燥即得地锦草活性提取物。

本发明中，药材提取用溶剂除可以是乙醇外，还可以是水、甲醇、丙酮等一些极性较大的溶剂或其含水溶剂，甲醇水溶液、丙酮水溶液等。提取时，本发明还可以时煎煮提取、浸泡提取、渗漉提取、超声提取等，只要能将地锦草黄酮类成分从药材中提取出即可。

本发明中，所用的酸可以是盐酸、硫酸、醋酸等无机或有机酸，优选盐酸；所用的碱可以是NaOH、KOH、Na₂CO₃、NaHCO₃、K₂CO₃或KHCO₃中的任一种。

对几个实验分别进行结果比较，采用紫外分光光度法测定其总黄酮的含量，高效液相色谱法测定槲皮素含量，以体现本发明的优势所在。

实验一：测定地锦草药材1000g中总黄酮含量、槲皮素含量。

实验二：地锦草药材1000g，以60％的乙醇回流提取三次，过滤，合并各次提取液，减压浓缩至无醇味，上已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至水洗脱液颜色变淡，改用60％的乙醇洗脱，至60％的乙醇洗脱液颜色变淡，收集60％的乙醇洗脱液，合并，减压浓缩，干燥，得提取物61.8g。分别测定提取物中总黄酮含量和槲皮素含量。

实验三：地锦草药材1000g，以60％的乙醇回流提取三次，过滤，合并各次提取液，减压浓缩至成浸膏状，用5％的NaOH水溶液溶解浸膏，过滤，取NaOH清液，以10％的盐酸调pH至约3，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至水洗液成中性，不溶物再用10％的乙醇溶解分散，将分散液上聚酰胺吸附树脂柱，树脂先用10％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，改用65％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，基本上无黄酮反应，收集65％的乙醇洗脱液部分，合并，减压浓缩，干燥，得提取物14.6g。测定提取物中总黄酮含量和槲皮素含量。

槲皮素的测定方法为：去药材或提取物1g，以25％的盐酸-乙醇液回流半小时，将槲皮素苷水解完全后，再测定其槲皮素含量。

上述各实验对比结果见表1

表1总黄酮、槲皮素含量结果比较

从上表结果可知，才用本发明方法制备地锦草提取物，与大孔树脂方法相比，无论从提取物中总黄酮含量还是提取物中槲皮素含量，都较大孔吸附树脂法明显要高。

具体实施例

实施例1

地锦草药材1000g，以50％的乙醇回流提取三次，过滤，合并各次提取液，减压浓缩至成浸膏状，用10％的NaOH水溶液溶解浸膏，过滤，取NaOH清液，以15％的盐酸调pH至约3.5，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至水洗液成中性，不溶物再用5％的乙醇溶解分散，将分散液上聚酰胺吸附树脂柱，树脂先用5％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，改用45％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，基本上无黄酮反应，收集45％的乙醇洗脱液部分，合并，减压浓缩，干燥，得提取物12.3g。总黄酮含量57.32％，总槲皮素含量为11.69％。

实施例2

地锦草药材1000g，以70％的乙醇回流提取三次，过滤，合并各次提取液，减压浓缩至成浸膏状，用5％的KOH水溶液溶解浸膏，过滤，取KOH清液，以10％的盐酸调pH至约2，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至水洗液成中性，不溶物再用5％的乙醇溶解分散，将分散液上聚酰胺吸附树脂柱，树脂先用5％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，改用80％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，基本上无黄酮反应，收集80％的乙醇洗脱液部分，合并，减压浓缩，干燥，得提取物17.9g，总黄酮含量为46.7％，总槲皮素含量为9.58％。

实施例3

地锦草药材1000g，以80％的乙醇回流提取2次，过滤，合并各次提取液，减压浓缩至成浸膏状，用10％的Na₂CO₃水溶液溶解浸膏，过滤，取Na₂CO₃清液，以10％的硫酸调pH至约3，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至水洗液成中性，不溶物再用15％的乙醇溶解分散，将分散液上聚酰胺吸附树脂柱，树脂先用15％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，改用55％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，基本上无黄酮反应，收集70％的乙醇洗脱液部分，合并，减压浓缩，干燥，得提取物11.6g，总黄酮含量为60.12％，总槲皮素含量为12.34％。

实施例4

地锦草药材1000g，以60％的乙醇回流提取三次，过滤，合并各次提取液，减压浓缩至成浸膏状，用5％的K₂CO₃水溶液溶解浸膏，过滤，取K₂CO₃清液，以5％的盐酸调pH至约2，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至水洗液成中性，不溶物再用5％的乙醇溶解分散，将分散液上聚酰胺吸附树脂柱，树脂先用5％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，改用50％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，基本上无黄酮反应，收集50％的乙醇洗脱液部分，合并，减压浓缩，干燥，得提取物15.8g，总黄酮含量为51.7％，总槲皮素含量为9.97％。

实施例5

地锦草药材1000g，以55％的乙醇回流提取三次，过滤，合并各次提取液，减压浓缩至成浸膏状，用5％的KHCO₃水溶液溶解浸膏，过滤，取KHCO₃清液，以5％的盐酸调pH至约3，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至水洗液成中性，不溶物再用8％的乙醇溶解分散，将分散液上聚酰胺吸附树脂柱，树脂先用8％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，改用65％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，基本上无黄酮反应，收集65％的乙醇洗脱液部分，合并，减压浓缩，干燥，得提取物13.7g，总黄酮含量为52.4％，总槲皮素含量为10.18％。

Claims

1、一种地锦草有效成分的制备方法，其特征在于地锦草药材经溶媒提取后，所得药材提取液减压浓缩，浓缩物用碱性水溶液提取，得到碱性水提清液，碱性水提液以酸调pH至1～4后，过滤，得沉淀，沉淀物以低于10％的醇分散溶解后，上聚酰胺树脂柱处理，收集富含黄酮类的流份即得地锦草活性提取物。

2、如权利要求1所述的制备方法，其特征在于地锦草干燥药材，以50％～80％的乙醇提取，乙醇提取液合并，浓缩至浸膏状，浸膏以pH值大于10的碱液提取，过滤，取碱提取清液，碱提液以酸调pH至1～4后，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至蒸馏水流出液呈中性，沉淀以小于10％的乙醇分散，将分散液上已处理好的聚酰胺吸附树脂，先以低于10％的乙醇洗脱至洗脱液颜色变淡，改用45％到80％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色变淡，收集后部分乙醇洗脱液，合并，浓缩，干燥，即得地锦草活性成分提取物。

3、如权利要求2所述的制备方法，其特征是地锦草干燥药材，以60％～75％的乙醇回流提取3次，过滤，合并乙醇提取液，减压浓缩成浸膏状，浸膏以5％～15％的NaOH溶液提取2～3次，过滤，去清液，清液以HCl调pH至1～3，摇匀，静置，过滤，沉淀以蒸馏水洗至水洗液呈中性，沉淀再以5％的乙醇分散溶解，分散液上已处理好的聚酰胺吸附树脂，先以10％的乙醇洗脱至10％的醇洗液颜色变淡，改用65％的乙醇洗脱，至颜色变淡，黄酮类反应呈阴性，合并70％的乙醇洗脱液，浓缩，干燥即得地锦草活性提取物。

4、如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是所述的碱液可以是NaOH、KOH、Na₂CO₃、NaHCO₃、K₂CO₃或KHCO₃中的任一种。

5、如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是所述的酸可以是盐酸或硫酸。

6、如权利要求1、2或3中任一权利要求所述的制备方法，其特征在于所述的地锦草活性提取物中黄酮类成分的含量应不低于40％。

7、如权利要求4所述的制备方法，其特征是地锦草活性提取物中黄酮类成分含量优选为不低于50％。

8、如权利要求4所述的制备方法，其特征是所述的总黄酮标示性成分为槲皮素，该提取物中槲皮素的总量为8％～13％。