CN101212961A

CN101212961A - 羟甲基丁酸盐组合物及其应用

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Publication number: CN101212961A
Application number: CNA2005800095960A
Authority: CN
Inventors: J·H·巴克斯特; P·穆克尔吉; A·C·沃斯; M·J·蒂斯达尔
Original assignee: Abbott Laboratories
Current assignee: Abbott Laboratories
Priority date: 2004-03-26
Filing date: 2005-03-14
Publication date: 2008-07-02
Also published as: TWI369981B; US20120189717A1; US20120189714A1; JP2007530542A; ECSP066873A; US20070093553A1; WO2005102301A3; EP2444082B1; US8778994B2; CA2560042A1; US8217077B2; EP2301529B1; US20120177752A1; KR20130010912A; AU2005235133B2; JP2015147773A; KR20060134181A; HK1155972A1; US20050215640A1; US20130011498A1

Abstract

本发明涉及预防和治疗慢性炎性疾病、癌症和偶然体重减轻的方法。在本发明的实施过程中，对患者经肠给予单独的HMB或HMB与二十碳五烯酸(20:5 w－3)、FOS、肉碱及其混合物的组合。可以向包括富含大的中性氨基酸，诸如亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸、苏氨酸和苯丙氨酸并且基本上不含游离氨基酸的氨基－氮源的食品中添加HMB。

Description

羟甲基丁酸盐组合物及其应用

本发明涉及预防和治疗慢性炎性疾病、癌症和偶然体重减轻的方法。在本发明的实施过程中，对患者经肠给予单独的HMB或HMB与二十碳五烯酸(20∶5 w-3)、FOS、肉碱及其混合物的组合。可以向包括富含大的中性氨基酸，诸如亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸、苏氨酸和苯丙氨酸并且基本上不含游离氨基酸的氨基-氮源的食品中添加HMB。

背景技术

不希望的体重减轻，特别是瘦体重降低相对常见地存在于临床疾病中，并且对发病率和死亡率具有显著的影响。这种情况在癌症患者中特别确切，其中这类质量下降可以使治疗受限并且由此影响总体预后。

恶病质是特征在于食欲缺乏、体重减轻、过早饱满感、虚弱、瘦体重降低和多器官机能障碍的综合征。它是慢性疾病(恶性和非恶性的)的常见结果并且与慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性心力衰竭(CHF)、肾衰竭、AIDS、痴呆、慢性肝病和癌症有关。它通常与疾病严重程度的其它指示物无关。(Witte，K.K.A.和Clark，A.L.“导致慢性疾病中的恶病质的营养异常”(Nutritional abnormalities contributing tocachexia in chronic illness.)-International Journal of Cardiology 85：23-31，2002)。

肺病通常与恶病质相关并且大量患有COPD，特别是肺气肿的患者在该病的过程中变得虚弱。体重减轻是预后的独立的危险因素并且通常与耗氧量增加相关。这种情况与发生无力进行相关肌肉能量代谢(Kutsuzawa，T，等：“患有慢性阻塞性肺病的患者中的肌肉能量代谢和营养状态”(Muscle energy metabolism and nutritional status inpatients with chronic obstructive pulmonary disease.)-Am.J.Respir.Crit.Care Med.152(2)：647-652，1995)。COPD还与由外周血液中促炎细胞因子和急性期蛋白质的浓度升高反映出的一般性全身炎症反应升高有关(Schols，A.M.等：“患有慢性阻塞性肺病的患者小组中代谢紊乱与炎症介体之间的相关性证据”(Evidence for a relation betweenmetabolic derangements and increased levels of inflammatorymediators in a subgroup of patients with chronic obstructivepulmonary disease.)-Thorax 51：819-824，1996；Takabatake，N.等：“患有慢性阻塞性肺病的患者中的循环瘦蛋白”(Circulating leptin inpatients with chronic obstructive pulmonary disease.)-Am J RespirCrit Care Med 159：1215-1219，1999；Dentener，M.A.等：“COPD中的全身抗炎介体：在恶化的治疗过程中可溶性细胞介素I受体II增加”(Systemic anti-inflammatory mediators in COPD：increase in solubleinterleukin I receptor II during treatment of exacerbations.)-Thorax56：721-726，2001.)。这类改变通常与肌肉萎缩综合征有关。

使用温育的肌肉和肌肉提取物进行的研究提示ATP-依赖性泛蛋白-蛋白体途径是造成大部分最终导致肌肉萎缩的蛋白水解增加的原因。特别地，泛蛋白-缀合的蛋白的水平增加和聚泛蛋白、某些蛋白体亚单位和泛蛋白缀合的酶E2_14K的mRNA水平增加是在大部分萎缩肌肉中发现的特征(Schols，A.M.W.J.“肺恶病质”(Pulmonarycachexia.)-Intl J Cardiology 85：101-110，2002；Jagoe，R.T.和Goldberg，A.L.“我们缺失了解肌肉萎缩中的泛蛋白-蛋白体途径吗？”(What do we really know about the ubiquitin-proteosome pathway inmuscle atrophy？)-Curr Opin Clin Nutr Metab Care 4：183-190，2001)。

患有疾病发展至转移性疾病的癌症的大部分患者在其治疗程序过程中发生恶病质并且该恶病质导致其死亡。癌症患者体重减轻的频率对患有乳腺癌、急性髓细胞性白血病和肉瘤的患者而言在40％左右，而在患有胰腺和胃癌的患者中达80％以上。约60％患有肺、结肠或***癌的患者在开始化疗前已经发生了体重减轻。尽管预治疗营养不良(体重减轻)与不良后果之间的相关性得到确立，但是尚未证实恶病质发生与肿瘤大小、疾病阶段和恶性肿瘤类型或持续时间之间存在一致的相关性。

癌症恶病质并非单纯是肿瘤的局部作用。通常发生蛋白质、脂肪和碳水化合物代谢的改变。例如，碳水化合物代谢异常包括总葡萄糖更新率增加、肝葡萄糖异生增加、葡萄糖耐受不良和葡萄糖水平升高。通常注意到脂解增加、游离脂肪酸和甘油更新增加、高脂血症和脂蛋白脂肪酶活性下降。与癌症恶病质相关的体重减轻不仅因体脂肪储存减少，而且因全身蛋白质质量下降所致，其中骨骼肌广泛萎缩。蛋白质更新增加和难以调节的氨基酸氧化也可能是重要的。作为对癌症反应而产生的宿主衍生的因子的存在涉及到作为恶病质的病原体，例如肿瘤坏死因子-α(TNF)或恶液质素、白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、γ-干扰素(IFN)和***素(PGs)(例如PGE₂)。

体重减轻常见于患有肺和胃肠道癌的患者，导致体脂肪和肌肉蛋白质大量缺失，而非肌肉蛋白质保持不受影响。尽管体脂肪缺失在能量储存方面是重要的，但是骨骼肌蛋白的缺失产生不动性和最终呼吸肌功能损伤，从而导致死于坠积性肺炎。尽管恶病质通常伴随食欲缺乏，但是单独的营养补充不能维持稳定的体重并且任何增加的体重均是因脂肪组织增加和水增加而非瘦体重所致。对嗜欲刺激剂，诸如醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮同样是确切的，提示瘦体重缺失是因非能量不足的因素所致。

骨骼肌质量是蛋白质合成率与降解率之间的平衡。患有癌症恶病质的患者表现出骨骼肌中蛋白质合成阻滞和蛋白质降解增加，这反映在泛蛋白-蛋白酶体蛋白水解途径的表达增加方面，即蛋白质降解的主要决定因素。因此，来自恶病质癌症患者的骨骼肌表现出泛蛋白和蛋白酶体亚单位的mRNA的表达增加，而蛋白酶体的蛋白水解活性与泛蛋白表达平行增加。合成代谢刺激物不能增加恶病质患者的瘦体重提示在肌肉质量可能增加前，蛋白质降解必须得到减弱。二十碳五烯酸(EPA)下调恶病质小鼠骨骼肌中泛蛋白-蛋白酶体蛋白水解途径的表达增加，并且已经证实可使患有胰腺癌的恶病质患者的体重保持稳定。当患者消耗时，含有32g蛋白质和2g EPA体重的高密度能量补充剂增加并且这仅归因于瘦体重增加(Barber，M.D.Ross，J.A.Voss，A.C.Tisdale，M.J.Fearon，K.C.H.“富含鱼油的口服营养补充剂对患有胰腺癌的患者体重减轻的作用”(The effect of an oralnutritional supplement enriched with fish oil on weight-loss in patientswith pancreatic cancer.)-Br.J.Cancer，81：80-86，1999)。

近期May等的研究(May，P.E.Barber，A.D′Olimpio，J.T.Hourihane，A.和Abumrad，N.N.“使用口服补充给药法与β-羟基-β-甲基丁酸酯、精氨酸和谷氨酰胺的组合逆转与癌症相关的消瘦”(Reversal of cancer-related wasting using oral supplementation witha combination of β-羟基-β-methylbutyrate，arginine and glutamine.)-Am.J.Surg.183：471-479，2002)证实showed a mixture of HMB、精氨酸和谷氨酰胺的混合物可有效增加患有晚期(IV阶段)癌症的体重减轻患者的体重。此外，正如使用EPA观察到的，体重增加归因于不含脱脂物质增加。

提示了多不饱和脂肪酸二十碳五烯酸通过抑制体液中脂解剂的脂解活性和酶胍基-苯甲酸guanidino-benzoatase的活性在治疗恶病质中的应用。参见Tisdale，M.J.和Beck，A.的1995年10月10日授权的美国专利US5,457,130；和Tisdale等Cancer Research 50：5022-5026(1990年8月)。然而，Tisdale教导的产品为固体剂型，要求已经患病的患者每天吞咽12-16粒胶囊。这种方法存在严重的缺陷，包括吞咽困难、嗳气和不良气味。

已经发现在不同申请的上下文中使用了HMB。特别地，在Nissen等的美国专利US6,031,000中描述了包括：约0.5g-约30g HMB的组合物，其中约0.5g-约30g基于HMB的钙盐的重量；以及约0.5g-约50g的游离L-精氨酸和约0.5g-约50g的游离L-谷氨酰胺。本专利还提供了治疗动物与疾病相关的消瘦的方法，降低动物甘油三酯血清水平的方法，降低动物血清病毒载量的方法，和使具有内脏区和皮下区的动物的脂肪重新分布的方法。所有方法均包括对所述动物给予包括HMB和至少一种游离氨基酸的组合物。

Nissen等的美国专利US5,348,979中描述了HMB在人体受试者的氮保留中的应用。正如通过尿氮减少所确定的，给予的HMB的量有效保存蛋白质。该方法可以用于存在因疾病情况导致的负氮平衡的患者，并且还可以用于发生蛋白质缺失的正常大龄人。可以通过口服或通过静脉内注射给予HMB。HMB的有效量基于其钙盐/千克体重/24小时在0.01-0.20克HMB范围。

Nissen等的美国专利US 5,028,440中描述了饲养产肉家畜以增加瘠瘦组织发育的方法。对动物给予HMB或其可食用盐，其用量持续获得瘠瘦组织重量大量增加的足够时间长度。该方法特别适用于反刍动物，包括肉牛和羔羊，因为HMB未经可感觉到的瘤胃破坏。还可以使用其它家畜实施该方法，包括小鸡和火鸡。饲喂0.5-100mg范围的HMB。

Nissen等的美国专利US 4,992,470中描述了HMB显著地比α-酮异己酸(KIC)更为有效地在激活哺乳动物T淋巴细胞的免疫功能中的应用。为了激活T淋巴细胞，通过经HMB进入哺乳动物血液的途径对该哺乳动物给予HMB或其可食用的水溶性盐。给予量足以有效促进其T淋巴细胞的种质遗传。该方法适用于驯养哺乳动物，特别包括牛、绵羊和猪。HMB还可以作为免疫***刺激剂用于人。通过口服或非肠道给予500-2,500毫克(mg)/人体受试者/24小时用量的HMB(基于Ca-HMB)。

Kunz的德国专利DE 29707308中描述了支链氨基酸与HMB组合在促进负重练习群体中肌肉产生中的应用。Kunz教导了每日服用3gm补充剂并且消耗200gm蛋白质/天提高了营养蛋白的价值并且显著增加了蛋白质功效。Kunz还教导了当HMB与蛋白质水解产物和/或游离氨基酸混合物而非与完整(纯的)蛋白质联用时可以获得更为良好的作用。

Engel等的美国专利US5,976,50中描述了用于体重减轻的由基于糖的混合物的糖果构成的膳食补充剂，所述基于糖的糖果混合物由含有治疗量的脱乙酰壳多糖、醉椒根和可以包括胆碱/inusital、吡啶甲酸铬、HMB、肉碱和丙酮酸盐的脂肪燃烧营养物组成。混有脱乙酰壳多糖和醉椒根的营养组分起燃烧无论何种身体消耗的脂肪的作用，即更好地代谢任意摄入并且不会吸引至脱乙酰壳多糖的脂肪。

为举重群体设计的含有HMB的商品包括Golden，Colorado的EAS Inc.的Lean DynamX。Lean DynamX提供了不使用强刺激剂支持脂肪消耗的组分掺合物。这些组分包括HMB、吡啶甲酸铬、共轭亚油酸、巴拉圭茶叶叶和茎和酒石酸肉碱。将粉末组合物与水混合并且每天服用2-3份，其中在练习比赛前30分钟服用一份。

额外的商品包括来自Hauppauge，NY的Twinlab Corporation的Mega HMBFuel

。Mega HMBFuel

在1粒胶囊中含有750mgHMB。提示的每日剂量为4粒胶囊以便对可能在激烈抗阻训练后发生的对肌细胞损害提供援助。

Garleb等的美国专利US5,444,054和相关美国专利US5,780,451也受到关注。这些对比文件中描述了用于治疗溃疡性结肠炎的组合物和方法。这类组合物包括：蛋白质源，它可以是高生物值的完整或水解蛋白(col.21)；不消化的寡糖，诸如果糖寡聚体；和含有相对高比例二十碳五烯酸的脂质掺合物，它可以提供相对高的ω-3-ω-6脂肪酸之比。

DeMichele等的美国专利US5,223,285中讨论了长链脂肪酸生物途径和生理作用，将该文献的内容引入本文作为参考。

预防和/或治疗恶病质仍然是一个破坏性的问题。动物和人体研究均提示营养物支持大多在充实患有癌症的宿主的体重方面无效。探讨完全胃肠外营养(TPN)支持法作为细胞毒性抗肿瘤疗法辅助法的随机化试验已经证实治疗效果几乎没有改善。例如，参见Brennan，M.F.和Burt，M.E.1981，Cancer Treatment Reports 65(Suppl.5)：67-68。这一结果与TPN可以刺激动物肿瘤生长的明确证明提示TPN在癌症治疗中的常规应用并未得到证明。Kisner，D.L.1981，CancerTreatment Reports 65(Suppl.5)：1-2。

发明概述

本发明涉及预防和治疗慢性炎性疾病、癌症和偶然体重减轻的方法。在本发明的实施过程中，通过非肠道对患者单独给予HMB或HMB与二十碳五烯酸(20∶5ω-3)、FOS、肉碱及其混合物的组合。

本发明在另一个实施方案中提供了治疗患者与疾病相关的消瘦的方法。该方法包括对所述患者给予上述组合物，它包括足以治疗与疾病相关的消瘦的用量的HMB，其中在对患者给予该组合物时，与疾病相关的消瘦得到治疗。

本发明在另一个实施方案中提供了减缓患者肿瘤生长率的方法。该方法包括对所述患者给予上述组合物，它包括足以减缓患者肿瘤生长率的用量的HMB，其中在对患者给予该组合物时，肿瘤生长率减缓。

本发明在另一个实施方案中提供了预防或治疗患者疾病的方法，通过下调蛋白激酶C、核因子κ-B、泛蛋白缀合酶和26S蛋白酶体的成分的表达和/或活性来进行。这些方法包括对所述患者给予HMB、其盐、其代谢物或衍生物。

在另一个实施方案中，可以将HMB加入到食品中，所述食品包括富含大的中性氨基酸，诸如亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸、苏氨酸和苯丙氨酸的氨基-氮源并且基本上不含游离氨基酸。

附图简述

附图1显示了描述PIF诱导的蛋白酶体活化中涉及的骨骼肌中潜在胞内情况的流程图。

附图2显示了HMB对具有MAC16肿瘤的小鼠体重(A)和肿瘤体积(B)的作用的剂量响应曲线。通过管饲法使用0.05(●)、0.125(○)和0.25g/kg(×)的浓度经口服给予HMB(在PBS中)。对照组小鼠接受单独的PBS(◆)。所示的结果为平均值±SEM，其中n＝20。

附图3显示了HMB(0.25g/kg；■)、EPA(0.6g/kg；X)和与PBS对照品(●)的组合(○)对具有MAC16肿瘤的小鼠体重的作用。所示的结果为平均值±SEM，其中n＝20。

附图4显示了具有MAC16肿瘤并且用EPA(0.6g/kg)、HMB(0.25g/kg)或其组合治疗3天的小鼠的比目鱼肌(A)重量和比目鱼肌(B)的蛋白质降解率。所示的值为平均值±SEM，其中n＝6。

附图5显示了正如糜蛋白酶-类′酶活性确定的HMB和EPA对具有MAC16肿瘤并且治疗3天的小鼠腓肠肌中蛋白酶体功能活性的作用。所示的结果为平均值±SEM，其中n＝6。

附图6显示了通过蛋白质印迹检测的用PBS(对照组)、HMB(0.25g/kg)、EPA(0.6glkg)或其组合治疗3天的小鼠腓肠肌中蛋白酶体20Sα-亚单位(A)和β-亚单位(B)的表达。显示了印迹(n＝6)的光密度分析。A.对照组(实心条)，HMB(空心条)，EPA(杂点条)和组合(斑点条)

附图7显示了通过蛋白质印迹检测的用PBS(对照组)、HMB(0.25g/kg)、EPA(0.6g/kg)或其组合(HMB+EPA)治疗3天的小鼠腓肠肌中蛋白酶体19S亚单位、MSS1(A)和p42(B)的表达。显示了印迹(n＝6)的光密度分析。A.对照组(实心条)，HMB(空心条)，EPA(杂点条)和组合(斑点条)显示了印迹(n＝6)的光密度分析。

附图8显示了通过蛋白质印迹检测的用PBS(对照组)、HMB(0.25g/kg)、EPA(0.6g/kg)或其组合(HMB+EPA)治疗3天的小鼠腓肠肌中E2_14k的表达。显示了印迹(n＝6)的光密度分析。A.对照组(实心条)，HMB(空心条)，EPA(杂点条)和组合(斑点条)显示了印迹(n＝6)的光密度分析。

附图9(A)显示了在没有(X)或有50μM EPA(□)或25μM(○)或50μM(●)HMB存在下PIF对C₂C₁₂肌管中总蛋白质降解的作用。在添加PIF后24小时进行测定并且表示为平均值±SEM，其中n＝9.1。(B)显示了在有或没有EPA(50μM)或HMB(25或50μM)存在下用PIF处理的鼠肌管的可溶性提取物的胰凝乳蛋白酶活性。符号与(A)中的相同。将结果表示为平均值±SEM，其中n＝9.1。

附图10显示了EPA和HMB对PIF-诱导20S蛋白酶体α-亚单位(A)、β-亚单位(B)和p42(C)的作用。(D)中显示了肌动蛋白加载控制。在用单独PIF(泳道A-C)或用PIF在有50μM EPA(泳道D-F)、50μMHMB(泳道G-I)或25μM HMB(泳道J-L)存在下以PIF 4.2nM(泳道B、E、H和K)或10nM(泳道C、F、I和L)的浓度处理后24小时对C₂C₁₂肌管的可溶性提取物进行蛋白质印迹。对照组培养物接受PBS(泳道A)、50μM EPA(泳道D)、50μM HMB(泳道G)或25μM HMB(泳道J)。所示的印迹为三次单独实验的代表。

附图11显示了PIF对鼠肌管中胞质(A)和膜结合(B)PKC_α作用的蛋白质印迹。用单独的PIF(泳道A-C)或用PIF在有50μM EPA(泳道D-F)、50μM HMB(泳道G-I)或25μM HMB(泳道J-L)存在下以4.2nM(泳道B、E、H和K)或10nM PIF(泳道C、F、I和L)处理细胞。对照组细胞接受PBS(泳道A)，50μM EPA(泳道D)、50μM HMB(泳道G)或25μM HMB(泳道J)。所示的印迹为三次单独实验的代表。

附图12显示了用单独的PIF(泳道A-C)或用PIF在有50μMEPA(泳道D-F)、50μM HMB(泳道G-I)或25μM HMB(泳道J-L)存在下以4.2nM(泳道B、E、H和K)或10nM(泳道C、F、I和L)的PIF浓度处理的鼠肌管的可溶性提取物中总ERK 1/2(p44和p42)(A)和活性(磷酸化)ERK 1/2(B)的蛋白质印迹。对照组细胞接受PBS(泳道A)，50μM EPA(泳道D)、50μM HMB(泳道G)或25μM HMB(泳道J)。所示的印迹为三次单独实验的代表。

附图13显示了通过蛋白质印迹测定的C₂C₁₂微管暴露30分钟对IκB[α](A)胞质水平的作用和如EMSA(B和C)测定的与DNA结合的NF-κB活化。光密度分析为3个重复印迹或EMSAs的平均值。(A)用单独的PIF(泳道A-E)或用PIF在有50μM HMB存在下以0(泳道A和F)、2.1(泳道B和G)、4.2(泳道C和H)、10.5(泳道D和I)或16.8nMPIF(泳道E和J)的浓度处理肌管。在(B)和(C)中，用、2.1、4.2、10.5或16.8nM PIF在没有(深色条)或有(空心条)25M HMB(B)或50MHMB(C)存在下处理肌管。

发明详述

术语HMB也称作β-羟基-β-甲基丁酸或β-羟基-异戊酸，它可以以其游离酸的形式表示为(CH₃)₂(OH)CCH₂COOH。HMB为肌肉转氨基成α-酮异己酸(KIC)形成的亮氨酸的代谢物，随后KIC在肝胞质溶胶中氧化得到HMB。

术语“大的中性氨基酸”指的是亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸、苏氨酸和苯丙氨酸。氨基酸为蛋白质的构建单元。其特征在于在化合物的末端上存在与相同碳连接的羧基(COOH)和氨基(NH₂)。

“基本上不含游离氨基酸”指的是每日剂量的组合物中含有低于0.4克总游离氨基酸含量的组合物。例如，如果将产品设计成以1罐/天的速率给予，那么1罐产品婚育低于总计0.4克的游离氨基酸。所述氨基酸为那些天然存在的L-异构体，它们由一种或多种如下化合物组成：L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸(或L-胱氨酸)、L-谷氨酸、L-谷氨酸、谷氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-赖氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸和L-缬氨酸或其食品-或药物上-可接受的盐、酯类、盐或衍生物(诸如甲酯类或乙酯类)。

术语“恶病质”指的是全身性的不健康和营养不良状态。通常与恶性癌症有关并且由其诱导，且特征在于食欲不振、体重减轻，尤其是瘦体重和肌肉萎缩。

术语“脂肪酸”指的是带有一般约12-24个碳长的烃链的羧酸族。当烃链中的至少一个位置上不饱和(带有双键)时，根据第一个双键的位置命名这类脂肪酸。ω-3脂肪酸在来自链的甲基端的第三个碳上带有第一个双键；并且包括，但不限于α-亚麻酸、十八碳四烯酸、二十碳五烯酸(“EPA”)、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸(“DHA”)等。ω-6脂肪酸在来自链的甲基端的第六个碳上带有第一个双键；并且包括，但不限于亚油酸、β-亚麻酸、花生四烯酸(“AA”)等。

本文所用的术语“食品”指的是含有脂肪、氨基氮和碳水化合物中的一种或多种并且以推荐的每日量给患者提供营养支持中的某些或全部的膳食载体。食品通常含有维生素、矿物、微量矿物等以便提供膳食替代物、药膳、补充剂的平衡营养。食品可以为任意典型形式，诸如饮料、粉末、方条状食品、汁、碳酸盐饮料、瓶装水。

术语“参考日摄取量或RDI”指的是基于基本维生素和矿物的拟定饮食供应量的一组膳食参考。拟定饮食供应量为一组由NationalAcademy of Sciences确立的一组估计的营养素供给量，它们定期更新以反映出最新的科学知识。

术语“患者”指的是人、狗、猫和任意其它非反刍动物。

应将在本申请中任意涉及的数值范围视为由形容词“约”修饰。此外，应将任意数值范围视为提供涉及对该范围中的小组的权利要求的支持。例如，在本说明书中应将公开的1-10的范围视为提供支持并且要求保护该范围中的任意小组(即2-9、3-6、4-5、2.2-3.6、2.1-9.9等的范围)。

尽管本发明并不限于任何特定的操作理论，但是申请人描述了下列可能的机理。

在极端必需(例如饥饿等)的情况下，骨骼肌通常由身体利用为氨基酸和能量的贮器。这种情况由肌肉中蛋白水解的增量调节和蛋白质合成的下调介导。氨基酸从肌肉中释放至全身环境的净结果用于维持危急的***。当良好的健康和足够的营养物利用得以恢复时，肌肉重建。就恶病质而言，这种***不适当地活化，由此甚至在营养足够的情况中，肌肉组织蛋白质持续分解。

不适当活化的关键蛋白水解***之一为泛蛋白蛋白体***。当正常起作用时，该***识别老化或以某种其它方式受损或不再需要的蛋白质并且标记它们以便通过与泛蛋白缀合而除去。这类泛蛋白化的蛋白由蛋白体识别并且被其降解，从而释放游离泛蛋白和肽类以及能量-消耗过程中的游离氨基酸。存在大量活化或增量调节这种***的信号分子，包括蛋白水解-诱导因子(PIF)，它是由某些诱导恶病质的肿瘤产生的蛋白质因子。PIF与肌肉细胞结合导致对磷脂酶A(PLA)的增量调节。该过程由此产生最终活化蛋白激酶C的信号传导因子，导致用于泛蛋白缀合和蛋白体的某些亚单位的基因活化(通过核因子κB，NFκB)。这种信号传导的所有净结果为泛蛋白蛋白体***的增量调节，并且不适当的情况是肌肉中持续的蛋白质降解。附图1表示这种活化顺序的详细途径。

蛋白激酶C

蛋白激酶C为一族钙-和脂质-活化的丝氨酸-苏氨酸激酶，它们在大量胞内信号传导级联中起关键作用。存在至少12种不同的PKC同种型，基于其一级结构和生化特性将它们分成三类(CA Carter：“作为药物靶的蛋白激酶C：药物或膳食预防和治疗癌症的内含”(″Proteinkinase C as a drug target：Implications for drug or diet prevention andtreatment of cancer.″)-Current Drug Targets 1：163-183(2000)。它们是常规的-(cPKC[α]、βI、βII和[γ])，需要二酰基甘油、磷脂酰丝氨酸和钙用于活化；新的(nPKCδ、ε、η、θ和μ)，需要二酰基甘油和磷脂酰丝氨酸，但不依赖于钙；和非典型的(aPKCλ、τ和ζ)，为不依赖于钙和二酰基甘油的。

将PKC合成为膜结合酶原。通过蛋白水解裂解除去前序列且随后磷酸化可以将感受态酶从膜释放至胞质溶胶。随后与特定组的激活物发生相互作用而产生活性酶。因此，存在几种水平的调节可能，包括控制表达、控制蛋白酶解加工、控制起始的磷酸化结果和最终调节完整活性所需的各种激活物的胞质水平。

蛋白激酶C涉及某些信号传导途经，它们可导致细胞有丝***和增殖、编程性细胞死亡、血小板活化、改建肌动蛋白细胞骨架、调节离子通道和分泌。此外，PKC还为助长肿瘤的佛波酯类的主要受体的其它观察结果为研究这种酶的作用机理提供了关键的试剂。PKC调节与炎症、心血管、外周微血管、CNS、肿瘤学、免疫和传染性疾病状态相关的途经并且被视为药物研发的重大和重要的靶物(P.G.Goekjian和M.R.Jirousek：“治疗疾病中的蛋白激酶C：研发中的信号转导途经、抑制剂和试剂”(″Protein Kinase C in the Treatment ofDisease：Signal Transduction Pathways，Inhibitors，and Agents inDevelopment″)-Current Medicinal Chemistry 6(9)：903，(1999)；CAO′Brian，NE Ward，KR Gravitt和KP Gupta：“肿瘤促进剂受体蛋白激酶C：人结肠癌的化学预防和疗法的新靶物”(″The tumor promoterreceptor protein kinase C：A novel target for chemoprevention andtherapy of human colon cancer.″)-Growth Factors and TumorPromotion：Implications for Risk Assessment，117-120页

1995，Wiley-Liss，Inc.F Battaini：“作为中枢***疾病状态中的治疗靶的蛋白激酶C”(″Protein Kinase C isoforms as therapeutic targets innervous system disease states.″)-Pharmacological Research44(5)：353-361，RN Frank：“用于糖尿病性视网膜病的潜在新医学疗法：蛋白激酶C抑制剂”(″Potential new medical therapies for diabeticretinopathy：Protein Kinase C inhibitors.)-Am J Ophthalmol133：693-698(2002)；M Meier和GL King：“血管疾病中蛋白激酶C的活化及其药理学抑制”(″Protein Kinase C activation and itspharmacological inhibition in vascular disease.″)-Vascular Medicine5：173-185(2000))。

NFκB

核因子κB(NFκB)为一族在各种哺乳动物细胞中发现的转录因子。成熟分子为由如下5种基因产物中的一种或两种构成的同型二聚体或异二聚体：(RelA(p65)、p50，RelB，c-Rel和p52)-最常见的是RelA和p50的二聚体。在非活化条件下，NFκB通过与抑制蛋白IκB[α]结合而局限在胞质溶胶中。上游信号传导包括IκB激酶，并且结合的IκB[α]的磷酸化导致其从NFκB中释放，使得后者转移至核并且活化特异性基因转录。磷酸化的IκB[α]被泛蛋白-蛋白体途经所降解。

NFκB被广泛认为是与炎症相关的关键调节分子。因此，它在急性和慢性炎性疾病中均起关键作用(AB Lentsch和PA Ward：“急性炎症过程中NFκB的活化和调节”(″Activation and regulation of NFκBduring acute inflammation.″) -Clin Chem Lab Med 37(3)：205-208。它还在其它疾病的某些方面中起作用，诸如转移癌(VB Andela，AHGordon，G Zotalis，RN Rosier，JJ Goater，GD Lewis，EM Schwarz，JE Puzas和RJ O′Keefe：“NFκB：***癌转移至骨中的关键性转录因子”(″NFκB：A pivotal transcription factor in prostate cancermetastasis to bone.″)-Clinical Orthopaedics and Related Research415S：S75-S85(2003))。这种转录因子涉及糖尿病综合征的发生(E.Ho和TM Bray：“抗氧化剂NFκB的活化和致糖尿病性”(″Antioxidants，NFκB activation and diabetogenesis.″)-Proceedings of the Societyfor Experimental Biology and Medicine 222：205-213(1999))和免疫发展和调节(J Moscat，MT Diaz-Meco和P Rennert：“蛋白激酶C同种型导致的NFκB活化和B-细胞功能”(″NFκB activation by propteinkinase C isoforms and B-cell function.″)-EMBO Reports 4：31-36(2003))。最后，NFκB与控制编程性细胞死亡以及生长和分化相关。实际上，认为PIF(蛋白水解诱导因子，由肿瘤释放并且涉及癌症-诱导瘦体重量减轻)是胚胎发育的调节物并且最终通过NFκB引起信号传导级联(F.Delfino和WH Walker：“NFκB信号传导途经的激素调节”(″Hormonal regulation of the NFKB signaling pathway.″)-Molecular and Cellular Endocrinology 157：1-9(1999)；TM Watchorn，I Waddell，N Dowidar和JA Ross：“蛋白水解诱导因子通过转录因子NFκB和STST3调节肝基因表达”(″Proteolysis-inducing factorregulates hepatic gene expression via the transcription factor NFκBand STST3.″)-FASEB J 15：562-564(2001))。

另外众所周知EPA通过抑制因PLA活化，特别是花生四烯酸(AA)释放产生的信号传导对恶病质发挥其有益作用。这一过程通过除去起始信号传导事件防止了随后泛蛋白-蛋白体途经的增量调节和活化。尽管未防止PLA的活化或AA的释放，但是HMB确实可以防止蛋白激酶C的增量调节，防止所有随后的信号传导途经的活化，也最终防止了泛蛋白-蛋白体***的活化。

目前令人意外和出人意料地发现，单独的HMB可以减缓肿瘤生长率并且与亚适剂量水平的EPA联用可以促进抗恶病质作用。EPA与HMB的组合通过经下调泛蛋白-蛋白酶体蛋白水解途经中的关键调节成分的表达增加衰减蛋白质降解而保护了肌肉质量。

术语″HMB″指的是具有上述化学通式的化合物，为其游离酸和盐形式、其代谢物和衍生物。尽管本发明上下文中可以使用HMB的任意合适的形式，但是HMB优选自游离酸、盐、酯和内酯；更优选HMB为盐。

尽管本发明上下文中可以使用HMB的任意药物上合适的盐，但是优选HMB盐为水溶性的或在患者胃或肠中变成水溶性的。更优选HMB盐选自钠盐、钾盐、镁盐、铬盐和钙盐。最优选HMB盐为钙盐。不过，可以使用其它无毒性的盐，诸如其它碱金属或碱土金属盐。

类似地，在本发明的上下文中可以使用任意药物上可接受的酯。理想的情况是，HMB酯被快速转化成其游离酸形式的HMB。优选HMB酯为甲酯或乙酯。HMB甲酯和HMB乙酯被快速转化成HMB的游离酸形式。

同样，在本发明上下文中可以使用任意药物上可接受的内酯。理想的情况是，HMB内酯被快速转化成其游离酸形式的HMB。优选HMB内酯为异戊内酯或类似的内酯。这类内酯被快速转化成HMB的游离酸形式。

生产HMB及其衍生物的方法在本领域中众所周知。例如，可以通过氧化二丙酮醇合成HMB。一种合适的操作方法描述在Coffman等的J.Am.Chem.Soc.80：2882-2887(1958)中。正如其中所述，通过对二丙酮醇进行碱性次氯酸钠氧化合成HMB。以游离酸的形式回收产物，可以将其转化成理想的盐。例如，可以通过使用冷的次氯酸盐水溶液(漂白剂)氧化由二丙酮醇(4-羟基-4-甲基戊-2-酮)合成3-羟基-3-甲基丁酸(HMBA)。在使用HCl酸化反应混合物后，通过使用乙酸乙酯提取并且从提取混合物中分离和保留有机层来回收HMBA产物。通过蒸发除去乙酸乙酯并且将残余物溶于乙醇。在添加Ca(OH)2并且冷却后，可以通过过滤回收CaHMB晶体，用乙醇洗涤该晶体且然后干燥。或者，HMB的钙盐商购自Salt Lake City，Utah的TSI。

可以将癌症患者的营养支持分类为：(i)支持性的，其中制定营养支持以便防止滋养充分的患者中的营养损耗或在确定的疗法前使衰竭的患者恢复；(ii)辅助性的，其中营养支持在治疗计划中起整合作用；和(iii)决定性的，其中强有力的营养支持是患者生存必需的。提供营养支持的途经包括口服膳食、管喂食和周围或全胃肠外营养。用于本发明营养方法和组合物的优选实施方案为通过口服途经进行。

口服喂食的备选为通过鼻胃、鼻十二指肠、食管造口、胃造口或空肠造口管进行管喂食。

HMB对瘦体重患者具有有益作用可以通过许多方式来实现。如果需要，可以不使用载体单独给予HMB。可以将HMB单纯溶于水并且由患者服用。或者，可以将HMB喷在食物上，溶于咖啡等。患者的日总剂量可以广泛改变，但患者一般得益于消耗至少2gm/天的HMB。或者，20-40mg/kg/天。

在另一个实施方案中，可以将HMB掺入丸剂、胶囊、速熔片、锭剂等。活性成分的剂量可以广泛改变，但一般在250mg-1gm/剂量，其中患者消耗2-8个剂量/天以便达到最低2gm/天的目标。制备这类剂型的方法为本领域众所周知。读者的注意力可以集中在指导任何制备这类剂型的最新版Remingtons Pharmaceutical Sciences中。

尽管可以将HMB作为单一本体给予，但是一般将其掺入食品并且由患者在其食用膳食或点心过程中服用。如果需要，患者可以单纯改变他们通常通过喷在食物、溶于咖啡等中消耗的食谱。

在另一个实施方案中，将HMB掺入饮料、方条状食品、饼干等，特别设计这些食品以便提高HMB的适口性并且增加备选形式的分泌，由此提高患者/消费者的可接受性。

一般来说，将HMB掺入膳食替代物，诸如Ensure

、Boost

、Glucerna、Pediasure、Pedialyte

等。还可以将HMB掺入膳食替代物的方条状食品，诸如PowerBars

、Glucerna方条状食品、ChoiceDM

方条状食品、Ensure

方条状食品和Boost

方条状食品等。或者，可以将HMB掺入汁、碳酸盐饮料、瓶装水等。另外可以将HMB掺入医用营养物，诸如ProSure

、Promote

、Jevity

和Advera

，设计它们是为了救助具体的疾病状态，诸如癌症、HIV/AIDS、COPD、关节炎等。用于生产任意这类食品的方法为本领域技术人员众所周知。下面的讨论用于解释这类食品及其制备。

大部分膳食替代产品(即方条装食品或液体)从脂肪、碳水化合物和蛋白质中提供卡路里。这些产品一般还含有维生素和矿物，因为它们适合于用作营养的惟一来源。尽管这些膳食替代品可以用作营养的惟一来源，但是它们一般不会照此使用。个体消耗这些产品是为了替代每天一次或两次的膳食或提供保健点心。本发明的营养产品应包括这些实施方案中的任意种。

这些营养组分的量可以广泛改变，这取决于靶向的患者群体(即癌症、HIV/AIDS、关节炎、器官感觉考虑、培养的选择、应用等)。然而，作为一般性的非显著性指导，本发明的膳食替代品含有下列相对量的蛋白质、脂肪和碳水化合物A(基于总卡路里的相对百分比)：提供5-80％总卡路里含量的蛋白质成分；提供10-70％总卡路里含量的碳水化合物成分；和提供5-50％总卡路里含量的脂质成分。

膳食替代物含有合适的碳水化合物、脂质和蛋白质，正如制造营养制品的本领域技术人员所公知的。合适的碳水化合物包括，但不限于：来源于玉米、木薯、稻米或马铃薯的蜡或非蜡形式的水解的、完整的、天然和/或化学修饰的淀粉；和糖类，诸如葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、高果糖玉米糖浆、玉米糖浆固体、果糖寡聚体及其混合物。

合适的脂质包括，但不限于椰子油、大豆油、玉米油、橄榄油、红花油、高油酸红花油、MCT油(中链甘油三酯类)、向日葵油、高油酸向日葵油、棕榈油、棕榈油精、芸苔油、棉子油、鱼油、棕榈仁油、鲱油、大豆油、卵磷脂、花生四烯酸和二十二碳六烯酸的脂质来源及其混合物。花生四烯酸和二十二碳六烯酸的脂质来源包括，但不限于鱼油、卵黄油和真菌或藻油。

这些脂肪的大量商品来源易于获得并且公知为本领域中可实施的一种。例如，大豆油和芸苔油购自Decatur，Illinois的Archer DanielsMidland。玉米油、椰子油、棕榈油和棕榈仁油购自Portland，Organ的Premier Edible Oils Corporation。分级分离的椰子油购自LaGrange，Illinois的Henkel Corporation。高油酸红花油和高油酸向日葵油购自Eastlake，Ohio的SVO Specialty Products。鱼油购自Tokyo，Japan的Mochida International。橄榄油购自NorthHumberside，United Kingdom的Anglia Oils。向日葵油和棉子油购自Minneapolis，Minnesota的Cargil。红花油购自Richmond，California的California Oils Corporation。

除这些食品级油外，如果需要，还可以将有结构的脂质掺入食品。有结构的脂质为本领域中公知的。有结构的脂质的简要描述可以在INFORM，Vol..8，No.10，1004页中找到；标题为“有结构的脂质允许制造脂肪”(Structured lipids allow fat tailoring)1997年10月)。另外参见美国专利US 4,871,768。有结构的脂质主要为在相同甘油母核上含有中链和长链脂肪酸混合物的三酰基甘油类。有结构的脂质及其在肠制品中的应用还描述在美国专利US 6,194,379和US6,160,007中。

可选地，ω-3脂肪酸可以占油掺合物的约30％，优选ω-3脂肪酸主要由二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸组成。制备营养组合物中使用的食用油一般含有甘油三酯形式的ω-3脂肪酸并且包括，但不限于芸苔油、中链甘油三酯类、鱼油、大豆油、大豆卵磷脂、玉米油、红花油、向日葵油、高油酸向日葵油、高油酸红花油、橄榄油、琉璃苣油、黑加仑花油、月见草油和亚麻籽油。可选地，ω-6脂肪酸与ω-3脂肪酸在本发明脂质掺合物中的重量比约为0.1-3.0。每日递送的ω-3脂肪酸至少应为450mg并且可以根据个体体重、性别、年龄和医学情况的不同而改变。正如所述，成年人消耗需要高水平：例如每天约0.5-50gm daily，更优选每天约2.5-5gm。

合并ω-3脂肪酸与HMB的令人意外的优点在于膳食替代物的味道改善。ω-3脂肪酸的典型来源为鱼油和藻油。每种来源均给膳食替代品带来了令人不愉快的味道。本发明者发现通过添加HMB，甚至在产品中使用最适度以下或低水平的ω-3脂肪酸时，也可以获得与预防偶然体重减轻相关的相同或更好的临床效果。因此，本发明者已经发现，在ω-3脂肪酸与HMB的水平之间存在反相关性。例如，如果ω-3脂肪酸的有效剂量为在2罐膳食替代物中递送3gm，那么在配制成在2罐中含有2gm ω-3脂肪酸的产品并且递送1gm HMB的产品或在配制成含有1gm ω-3脂肪酸和在2罐中递送2gm HMB的产品中可以观察到相同的临床效果。品尝出配制成仅含有1gm ω-3脂肪酸的产品会远优于使用2或3gmω-3脂肪酸配制的产品的味道，同时获得相同的临床有效性。此外，由于ω-3脂肪酸为公知的AA，即炎症介体抑制剂，所以含有ω-3脂肪酸和HMB的产品可以具有比仅含有所述组分的那些产品更宽泛的有益性。

合适的蛋白质来源包括，但不限于牛奶、乳清和乳清级分、大豆、稻米、肉(例如牛肉)、动物和植物(例如豌豆、马铃薯)、蛋(卵清蛋白)、明胶和鱼。合适的完整蛋白质来源包括，但不限于基于大豆的产品、基于牛奶的产品、酪蛋白、乳清蛋白、稻米蛋白、牛肉胶原蛋白、豌豆蛋白、马铃薯蛋白及其混合物。

可选地，所述完整蛋白来源富含在大的中性氨基酸(LNAA)中，包括缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。一般约40％的酪蛋白、乳清和大豆蛋白来源为大的中性氨基酸。例如，酪蛋白酸盐含有约38 wt/wt％LNAA，乳清蛋白浓缩物含有约39wt/wt％LNAA且大豆蛋白分离物含有约34wt/wt％ LNAA。一般来说，使用蛋白质来源配制膳食替代物，该替代物可递送约1-25gm的LNAA/天，优选约1-20gm的LNAA/天，更优选约4-20gm的LNAA/天。作为实例，每天3次消耗的含有包括4.8gm LNAA的膳食替代物可以递送14.4gm LNAA/天。

膳食替代物优选还含有维生素和矿物，其用量被设计为可提供或补充接受该制品的人的每日营养需求。本领域技术人员认为营养制品通常包括某些过量的维生素和矿物以确保它们满足产品贮存期限内的靶水平。这些相同的个体还认为某些微量组分可能对人具有潜在的有益作用，这取决于患者所患的任何潜在的病患或疾病。例如，癌症患者得益于诸如β-胡萝卜素、维生素E、维生素C和硒这类抗氧化剂。食品优选包括，但不限于下列维生素和矿物：钙、磷、钠、氯化物、镁、锰、铁、铜、锌、硒、碘、铬、钼、条件必需营养物m-肌醇、肉碱和牛磺酸以及维生素A、C、D、E、K和B复合物及其混合物。

条件必需营养物肉碱为由甲硫氨酸和赖氨酸形成的天然存在的氨基酸。其主要代谢作用与长链脂肪酸通过线粒体膜转运相关，由此刺激这些代谢能的燃料物质氧化。肉碱补充是诸如肝和肾病这类疾病和因营养不良并发的主要慢性疾病或广泛损伤中的重要代谢手段。可选地，可以用足以提供达4gm/天的肉碱的水平的肉碱补充膳食替代物。

膳食替代物还可以含有纤维和稳定剂。合适的纤维和/或稳定剂来源包括，但不限于黄原胶、瓜尔胶、***胶、印度胶、卡拉牙胶、西黄蓍胶(gum tracacanth)、琼脂、帚叉藻聚糖、胞外多糖胶、刺槐豆胶、果胶、低和高甲氧基果胶、燕麦和大麦葡聚糖、角叉藻聚糖、欧车前、明胶、微晶纤维素、CMC(羧甲基纤维素钠)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、DATEM(单酸甘油酯和二脂酰甘油酯的二乙酰基酒石酸酯类)、葡聚糖、角叉藻聚糖、FOS(果糖寡聚体)及其混合物。可溶性膳食纤维的大量商品来源为可得到的。例如，***树胶、水解的羧甲基纤维素、瓜尔胶、果胶和低和高甲氧基果胶购自Belcamp，Maryland的TIC Gums，Inc.燕麦和大麦葡聚糖购自Omaha，Nebraska的Mountain Lake Specialty Ingredients，Inc.欧车前购自North Bergen，New Jersey的Meer Corporation，而角叉藻聚糖购自Philadelphia，Pennsylvania的FMC Corporation。

掺入的纤维还可以为不溶性的膳食纤维，其有代表性的实例包括燕麦壳纤维、大豆壳纤维、大豆子叶纤维、甜菜纤维、纤维素和玉米糠。不溶性膳食纤维的大量来源也是可获得的。例如，玉米糠购自Chicago，Illinois的Quaker Oats；燕麦壳纤维购自Cambridge，Minnesota的Canadian Harvest；豌豆壳纤维购自Winnipeg，Canada的Woodstone Foods；大豆壳纤维和燕麦壳纤维购自LaVale，Maryland的The Fibrad Group；大豆子叶纤维购自St.Louis，Missouri的ProteinTechnologies International；甜菜纤维购自Minneapolis，Minnesota的Delta Fiber Foods；且纤维素购自Saddle Brook，New Jersey JamesRiver Corp.

纤维的实例及其掺入水平的更为详细的讨论可以在授权给Garleb等的美国专利US5,085,883中找到。

制品中使用的纤维的量可以改变。使用的具体纤维类型并不关键。适合于人消耗并且在食品基质中稳定的任意纤维均可以使用。

除纤维外，膳食替代物还可以含有寡糖类，诸如果糖寡聚体(FOS)或葡糖寡糖(GOS)。寡糖类可以被居于大肠的厌氧微生物快速并且广泛地发酵成短链脂肪酸。这些寡糖类为大部分双歧杆菌属种类的优选能量来源，但无法被潜在的病原性生物利用，诸如产气荚膜梭菌(Clostridium perfingens)、艰难梭菌或大肠埃希氏杆菌。

一般来说，FOS占0-5gm/份的膳食替代物，优选1-5gm/份，更优选2-4gm/份的膳食替代物。

膳食替代物还可以含有提高其适口性的香料。可以添加人造甜味剂以便补充香味并且掩蔽含盐的味道。有用的人造甜味剂包括糖精、nutrasweet、三氯半乳蔗糖、乙酰舒泛(acesulfane)-K(ace-K)等。

可以使用本领域技术人员众所周知的技术制备膳食替代物。存在各种加工技术。一般来说，这些技术包括由一种或多种溶液形成淤浆，它们可以含有水和下列成分中的一种或多种：碳水化合物、蛋白质、脂质、稳定剂、维生素和矿物。一般在加入其它矿物前将HMB添加到碳水化合物淤浆中。将该淤浆乳化、匀化并且冷却。可以在加工前，在加工后或同时加入各种其它溶液。然后给加工的制品灭菌并且可以稀释以便干燥成粉末，基于立即可食使用或以浓缩液体形式包装。当得到的制品指的是立即可食的液体或浓缩液体时，在灭菌前可以加入适量的水。

还可以使用本领域技术人员公知的技术制备固体组合物，诸如方条形食品、饼干等。例如，可以使用本领域中公知的冷挤压技术制备它们。为了制备这类组合物，一般将所有粉状成分彼此干燥掺合。这类成分一般包括蛋白质、维生素预混合物、某些碳水化合物等。然后将脂溶性成分彼此混合并且与上述粉状预混合物混合。最终将任意液体成分混入组合物，从而形成可塑类组合物或生面团。

上述方法用于得到可塑性的物质团，然后可以通过称作冷成形或挤压的操作步骤使它们在不进一步发生物理或化学改变的情况下成形。在该方法中，以相对低的压力通过提供所需形状的模头挤压可塑性物质团。然后在适当的位置切断所得的挤出物而得到所需重量的产品。如果需要，然后可以给固体产品包衣，以便提高适口性，并且包装用于分配。一般来说，包装为最终的消费者提供了使用说明(即癌症患者消耗以便有助于防止瘦型肌肉缺失等)。

还可以通过烘焙应用或加热挤压制备本发明的固体组合物以便产生加工过的谷类食物、饼干和脆点心。本领域技术人员能够选择适合于生产所需终产品的许多制备方法之一。

如上所述，还可以将HMB掺入汁、不充二氧化碳的饮料、充二氧化碳的饮料、电解质溶液、香味水(下文统称为″饮料″)等。HMB一般占0.5-2gm/份的饮料。用于生产这类饮料的方法为本领域众所周知。读者的注意力可以集中在美国专利US6,176,980和US 5,792,502，将每篇文献的内容各自引入本文作为参考。例如，将所有组分，包括HMB溶于适当体积的水。然后可选地加入香料、着色剂、维生素等。随后对该混合物进行巴氏消毒、包装并且贮存至出货为止。

可以按照本发明的方法治疗与消瘦或炎症相关的任意疾病，诸如心血管、外周微血管、中枢神经***、肿瘤、免疫和传染性疾病状态。优选所述疾病选自癌症、恶病质、与年龄相关的消瘦、与长期住院相关的消瘦、HIV/AIDS、关节炎、创伤、肝病、克罗恩病或其它炎性肠病(IBD)、肾机能不全和COPD(慢性阻塞性肺病)。更优选所述疾病为恶病质。

本发明在另一个实施方案中提供了治疗与所述疾病相关的患者，诸如哺乳动物，优选人的消瘦的方法。该方法包括对所述患者给予上述组合物，该组合物包括足以治疗与所述疾病相关的消瘦的用量的HMB，其中在对患者给予该组合物时，与所述疾病相关的消瘦得以治疗。

可以按照本领域众所周知的方法测定足以治疗指定患者与疾病相关的消瘦的HMB的用量。当治疗患者与疾病相关的消瘦时，理想的情况是对患有与疾病相关的消瘦的患者给予包括这类用量的HMB的组合物，按照这类方式并且在这类时间期限内，患者的瘠瘦组织量增加，同时不会出现患者脂肪量的减少。在治疗与癌症恶病质相关的消瘦过程中的一个实例为：当每天约两次口服给予所述组合物最少两周时；该剂量足以提供至少2gm HMB/天。

本发明在另一个实施方案中提供了减缓患者，诸如哺乳动物，优选人的肿瘤生长率的方法。该方法包括对所述患者给予上述组合物，该组合物包括足以减缓肿瘤生长率的用量的HMB，其中在对患者给予该组合物时，肿瘤生长率得以减缓。

可以按照本领域众所周知的方法测定足以衰减指定患者肿瘤生长的HMB的用量。当治疗患者肿瘤生长时，理想的情况是对患有肿瘤生长的患者给予包括这类用量的HMB的组合物，按照这类方式并且在这类时间期限内，患者的肿瘤生长减缓。在治疗成年人肿瘤生长过程中的一个实例为：当每天约两次口服给予所述组合物最少两周时；该剂量足以提供至少2gm HMB/天。

本发明在另一个实施方案中提供了下调蛋白激酶C的表达和/或活性的方法。实施例I-IV表示EPA和HMB减弱了PIF-诱导的蛋白激酶C(PKC)活化和随后的IκBα降解以及核因子-κB(NF-κB)的核蓄积。

本发明在另一个实施方案中提供了下调核因子κ-B的表达和/或活性的方法。实施例I-IV表示EPA和HMB减弱了PIF-诱导的蛋白激酶C(PKC)活化和随后的IκBα降解以及核因子-κB(NF-κB)的核蓄积。

本发明在另一个实施方案中提供了下调泛蛋白缀合酶的表达和/或活性的方法。实施例I-IV表示该过程伴随有E2_14k泛蛋白-缀合酶表达的减少。EPA与HMB组合至少为有效的或比单独治疗更为有效。这些结果表明EPA和HMB均可通过减弱经下调泛蛋白-蛋白酶体蛋白水解途经的关键调节成分的表达增加的蛋白质降解保护了肌肉量。

本发明在另一个实施方案中提供了下调26S蛋白酶体的成分的表达和/或活性的方法。实施例I-IV表示通过′胰凝乳蛋白酶类′酶活性确定的蛋白酶体活性被HMB弱化。20Sα或β-亚单位的蛋白质表达减少了至少50％，此时为ATPase亚单位MSS1和19S蛋白酶体调节亚单位的p42。

实施例I

患有癌症恶病质的动物中体重减轻的预防和蛋白质降解的弱化

本研究评价了HMB与EPA或组合相比对MAC16肿瘤诱导的体重减轻的作用和涉及的机理。MAC16肿瘤诱导的体重减轻主要由PIF诱导。

纯品系的雄性NMRI小鼠(平均重量25g)获自我们自己的近交集落，并且如Bibby，M.C.等在“在受体动物中产生恶病质的可植入小鼠结肠腺癌的表征”(Characterization of a transplantableadenocarcinoma of the mouse colon producing cachexia in recipientanimals.)-J.Natl.Cancer Inst.78：539-546，1987所述，通过套管针经皮下将MAC16肿瘤片段植入了选自存在确定的体重减轻的供体动物的胁腹侧。使移植的动物饲喂大鼠和小鼠饲养膳食(Special DietServices，Witham，United Kingdom)并且随意饮水，且在肿瘤移植后10-12天体重减轻明显。恰在体重减轻发生前将动物随机分组以便接受每日的EPA(在橄榄油中)、HMB(在PBS中)或如通过附图说明中所述通过管饲法口服给予的组合，而对照组动物接受橄榄油或PBS。EPA(98％作为游离酸)购自Biomol Research Laboratories Inc.PA，USA。HMB(作为钙盐)获自Abbott Laboratories，Columbus，Ohio，USA。所有的组均最少包含6只小鼠。每日监测肿瘤体积、体重以及食物和水的摄取。当体重减轻达到25％时，通过脱颈椎处死动物，并且所有研究均按照实验室动物护理和应用UKCCR Guidelines的要求进行。快速剖离比目鱼肌与完整的腱并且维持在等渗冰冷盐水中，此后测定蛋白质降解。

将新近剖离的比目鱼肌通过腱与铝线支持物固定在腱下近似静息长度上以便防止肌肉缩短并且在含有5mM葡萄糖和0.5mM环己酰亚胺的3ml充氧的(95％氧：5％二氧化碳)Krebs-Henseleit碳酸氢盐缓冲液(pH 7.4)中预保温45分钟。如Waalkes，T.P.等在“评估血浆和组织中酪氨酸的荧光法”(A fluorimetric method for the estimation oftyrosine in plasma and tissues.)-J.Lab.Clin.Med.50：733-736，1957中所述，根据2小时内酪氨酸的释放确定蛋白质降解。

按照Orino，E.等在“蛋白酶体与多蛋白成分ATP-依赖性可逆结合而形成在人HL-60细胞中降解泛蛋白化蛋白的26S复合物”(ATP-dependent reversible association ofproteasones with multiple proteincomponents to form 26S complexes that degrade ubiquitinatedproteins in human HL-60 cells.)-FEBS Lett.284：206-210，1991中所述方法，通过测定′胰凝乳蛋白酶类′酶活性，即蛋白酶体的β-亚单位的显著蛋白水解活性来确定功能性蛋白酶体的活性。用冰冷的PBS冲洗肌肉，切碎并且在20mM Tris.HCl，pH 7.5，2mM ATP，5mMMgC1₂和1 mM DTT中进行声处理。然后在4℃下将声处理物以18,000g离心10分钟并且将上清液用于根据氨甲基香豆素(AMC)从荧光底物琥珀酰-LLVY-AMC中的释放确定′胰凝乳蛋白酶类′酶活性。在没有和有特异性蛋白酶体抑制剂乳胞素(10μM)存在下测定活性。仅将乳胞素可抑制活性视为蛋白酶体特异性的。

为了进行蛋白质印迹，在10％SDS-PAGE上分离获自上述试验的比目鱼肌胞质蛋白(2-5g)的样品并且转移至已经用在PBS中的5％Marvel封闭的0.45μm硝化纤维膜(Hybond^TM，Amersham Life ScienceProducts，Bucks，United Kingdom)上。对以1∶5000的稀释度使用MSS1和p42的初级抗体，其中对20S蛋白酶体α-亚单位使用1∶1500且对β-亚单位使用1∶1000，而以1∶500的稀释度使用E2_14k的抗体。以1∶2000的稀释度使用二次抗体。20S蛋白酶体亚单位α1、2、3、5、6和7(快乐MCP 231)、20S蛋白酶体亚单位β3(HC10)、19S调节物ATPase亚单位Rpt1(S7，Mss1；克隆MSS1-104)和19S调节物ATPase亚单位Rpt 4(S106，p42；克隆p42-23)的小鼠单克隆抗体购自AffinitiResearch Products，Exeter，United Kingdom。泛蛋白-缀合酶E2的家兔多克隆抗血清(抗-UBC2抗体)为来自Dr.Simon Wing，McGillUniversity，Montreal，Quebec，Canada的赠品。过氧化物酶-缀合的山羊抗-家兔和家兔抗-小鼠二次抗体来自Dako Ltd.Cambridge，United Kingdom。在室温下将保温进行2小时并且通过化学发光展开(ECL；Amersham)。

HMB对具有MAC16肿瘤的小鼠中体重减轻的剂量响应相关性如附图2中所示。大于0.125g/kg的HMB剂量导致体重减轻显著减少(附图2A)。与对照组的差异显示为：a，p＜0.05；b，p＜0.01；和c，p＜0.005。体重减轻的弱化并未伴随食物和水摄取的改变。选择0.25g/kg的剂量水平用于所有随后的实验。HMB、EPA和HMB与EPA的组合对具有MAC16恶病质肿瘤小鼠的体重减轻的作用如附图3中所示。与对照组的差异显示为：a，p＜0.05；b，p＜0.01；或c，p＜0.005。选择亚适量的EPA以便研究与HMB的相互作用。所有的治疗均导致比目鱼肌重量显著增加(附图4A)，并且酪氨酸释放显著减少(附图4B)，表明总蛋白降解减少。与PBS对照组的差异显示为：a，p＜0.05；b，p＜0.01；或c，p＜0.005。在选择的剂量下，HMB与EPA同样有效。

已经证实蛋白酶体表达在具有MAC16肿瘤的小鼠腓肠肌中升高并且已经证实这种增加的基因表达被EPA弱化。附图5中的结果表明如通过′胰凝乳蛋白酶类′酶活性所确定的功能性蛋白酶体活性被HMB弱化至与在选择剂量下的EPA相同的程度，并且HMB与EPA的组合不会产生活性上的进一步阻抑。与对照组的差异显示为：c，p＜0.005。通过对来自声处理的肌肉组织的上清液进行蛋白质印迹来分析蛋白酶体亚单位的蛋白质表达。20S蛋白酶体α-亚单位，即蛋白酶体结构单位的表达被HMB和EPA弱化，并且对该组合而言存在带2的进一步减少一些指征(附图6A)。与对照组的差异显示为：c，p＜0.001，而与HMB的差异显示为：e，p＜0.01。20S蛋白酶体β-亚单位，即蛋白酶体的催化亚单位的表达也被HMB和EPA弱化，但这种组合比单独的活性剂更为有效(附图6B)。与对照组的差异显示为：c，p＜0.001。

19S蛋白酶体调节复合物的ATPase亚单位MSS1的表达如附图7A中所示。HMB和EPA均弱化了MSS1的表达，但这种组合看起来不会产生额外的减少。使用19S调节物的另一种ATPase亚单位p42获得了类似的结果，其中p42促进20S蛋白酶体与19S调节物的ATP依赖性结合而形成26S蛋白酶体(附图7B)。与对照组的差异显示为：c，p＜0.001。此外，HMB和EPA看起来有效性等同，而该组合确实显示出进一步减少p42表达。泛蛋白-缀合酶E2_14k的表达也被HMB和EPA减少，而该组合使得表达额外减少(附图8)。与对照组的差异显示为：b，p＜0.01；和c，p＜0.001，而与单独的HMB的差异显示为：d，p＜0.05；和f，p＜0.001。这些结果证实HMB在弱化肌肉量缺失、蛋白质降解和下调泛蛋白-蛋白酶体蛋白水解途径方面与EPA功效相同，并且这种机理看起来是导致具有MAC16肿瘤的恶病质小鼠肌肉量得到保护的原因。

本研究已经证实HMB有效地弱化具有MAC16肿瘤的小鼠恶病质或偶然体重减轻的发生并且通过下调泛蛋白-蛋白酶体途径的表达增加对骨骼肌中的蛋白质降解产生减少作用。因此，HMB在减少20S蛋白酶体α和β亚单位以及19S调节物MSS1和p42的两种亚单位的蛋白质表达、E2_14k和蛋白酶体蛋白水解活性的表达方面与EPA功效相同。

实施例II

动物肿瘤生长的弱化

上述实施例I中所示的动物研究还评价了HMB对具有MAC16恶病质肿瘤的小鼠中肿瘤生长的作用。如实施例I中所述进行本实验。

单独的HMB对具有MAC16肿瘤的小鼠中肿瘤生长率的剂量响应相关性如附图2B中所示。与对照组的差异显示为：a，p＜0.05；b，p＜0.01；和c，p＜0.005。大于0.125g/kg的HMB剂量导致肿瘤生长率显著减缓。衰减肿瘤生长并不伴随食物和水摄取的改变。

实施例III

鼠肌管中蛋白质降解的衰减

本研究检验了HMB对鼠肌管中PIF-诱导的蛋白质降解和信号传导途径的作用以便确定泛蛋白-蛋白酶体蛋白水解途径的表达增加弱化的机理。

C₂C₁₂肌管通常在37℃下和在空气中10％CO₂气体环境中的补充了10％FCS、谷氨酰胺和1％青霉素-链霉素的DMEM中传代。通过使铺满培养物在含有2％HS的DMEM中分化而形成肌管，其中每2天改变一次培养基。

从具有20-25％体重减轻的小鼠中切下的MAC16实体瘤中纯化PIF(Todoroy，P.等“癌症恶病质因子的表征”(Characterization of acancer cachectic factor.)-Nature，379：739-742，1996.)。将肿瘤在含有0.5mM苯甲磺酰氟、0.5mM EGTA和1mM二硫苏糖醇的pH 8.0的10mM Tris-HCl中以5ml/g肿瘤的浓度匀化肿瘤。加入固体硫酸铵至40％w/v并且在除去硫酸铵后，如Todoroy，P.等在“肌肉蛋白降解的诱导和肿瘤产物导致的重量减轻”(Induction of muscle proteindegradation and weight loss by a tumor product.)-Cancer Res.56：1256-1261，1996所述使用与固体基质偶联的抗-PIF单克隆抗体对上清液进行亲合色谱。浓缩免疫原性级分并且用于进一步研究。

在含有2％HS的2ml DMEM中用L-[2，6^-3H]苯丙氨酸(0.67mCi/mmole)将6-孔多平皿中的肌管标记24小时。然后在PBS中将它们洗涤3次，随后在37℃和不使用酚红的条件下保温至上清液中不再显示出放射性。然后将这些肌管在有PIF存在下的不含酚红的新鲜DMEM中与和不与EPA或HMB保温24小时，以便防止计数停止，并且在有2mM冷苯丙氨酸存在下保温24小时以便防止重新掺入放射性。将释放入培养基中的放射性的量表示为未接触PIF的对照培养物的百分比以便测定总蛋白降解。

为了测定花生四烯酸的释放，用10μM花生四烯酸(含有1μCi[³H]花生四烯酸盐/ml)将在含有2ml DMEM与2％HS的6-孔多平皿中的肌管标记24小时(Smith，H.等“癌症恶病质因子对鼠C₂C₁₂肌原细胞中蛋白质合成/降解的作用：二十碳五烯酸的调节”(Effect of a cancercachectic factor on protein synthesis/degradation in murine C₂C₁₂myoblasts：Modulation by eicosapentaenoic acid.)-Cancer Res.59：5507-5513，1999)。然后用PBS充分洗涤以便除去微量的未掺入的[³H]花生四烯酸盐并且在PIF前2小时加入EPA或HMB。再经过24小时后，取出1ml培养基以便测定释放的放射性。

将蛋白酶体的β亚单位的功能活性测定为按照′胰凝乳蛋白酶-类′酶活性enzyme activity obtained fluorimetrically according to themethod of Orino，E.等在“蛋白酶体与多蛋白成分的ATP-依赖性可逆结合形成降解人HL-60细胞中的泛蛋白化蛋白的26S复合物”(ATP-dependent reversible association of proteasomes with multiple proteincomponents to form 26S complexes that degrade ubiquitinatedproteins in human HL-60 cells.)-FEBS Lett.284：206-210，1991。使肌管接触PIF 24小时，在PIF前2小时加入或不加入EPA或HMB，并且在有或没有特异性蛋白酶体抑制剂乳胞素(10μM)(Fenteany，G.等“乳胞素、蛋白酶体功能和细胞结局”(Lactacystin，proteasomefunction and cell fate.)-J.Biol.Chem.273：8545-8548，1998)存在下根据氨甲基香豆素(AMC)从琥珀酰-LLVY-AMC(0.1mM)中的释放确定上清液级分中的酶活性(Whitehouse，A.S等“诱导蛋白水解的诱导因子(PIF)对鼠肌管中泛蛋白-蛋白酶体途径的表达增加与转录因子NF-κB的活化有关”(Increased expression of the ubiquitin-proteasomepathway in murine myotubes by proteolysis-inducing factor(PIF)isassociated with activation of the transcription factor NF-κB.)-Br.J.Cancer，89：1116-1122，2003)。仅将乳胞素可抑制活性视为蛋白酶体活性。对样品的蛋白质浓度调整活性，使用Bradford试验(SigmaChemical Co.Dorset，United Kingdom)，应用牛血清清蛋白作为标准品测定。

为了进行蛋白质印迹分析，在10％SDS-PAGE上分离对上述试验获得的胞质蛋白(2-5g)并且在4℃下转移至已经用在PBS中的5％Marvel封闭的0.45μm硝化纤维膜上过夜。以1∶100(抗-肌动蛋白和PKC_α)；1∶500(抗-ERK1和2)；1∶1000(抗-20S蛋白酶体β-亚单位和I-κBα)；1∶1500(抗-20S蛋白酶体α-亚单位)或1∶5000(抗-p42)的稀释度使用初级抗体，而以1∶2000的稀释度使用二次抗体。在室温下进行2小时保温并且通过ECL展开。根据肌动蛋白浓度对装载量进行定量。

通过Andrews，N.C.等在“从有限数量的哺乳动物细胞中提取DNA-结合蛋白的快速微量制备技术”(A rapid micropreparationtechnique for extraction of DNA-binding proteins from limitingnumbers of mammalian cells.)-Nucleic Acids Res.19：2499，1991中使用的方法从肌管中提取DNA结合蛋白，该方法使用低渗裂解，随后对核进行高盐提取。按照制造商的说明进行EMSA(电泳迁移率变动分析)结合试验。

由于认为具有MAC16肿瘤的小鼠中的蛋白质降解和泛蛋白-蛋白酶体蛋白水解途径的活化由PIF介导，所以在用PIF处理的鼠肌管中进行有关HMB对蛋白降解影响的机理研究。正如Gomes-Marcondes等预先在“研究蛋白水解诱导因子诱导的肌肉蛋白分解代谢机理的体外模型***的研发”(Development of an in-vitro model system toinvestigate the mechanism of muscle protein catabolism induced byproteolysis-inducing factor.)-Br.J.Cancer，86：1628-1633，2002中报导的，PIF-诱导的总蛋白以钟形剂量响应曲线的方式分解，其中在4nM下具有最大作用。上述已经证实了EPA的作用(Smith，H.J.等“癌症恶病质因子对鼠C₂C₁₂肌原细胞中蛋白质合成/降解的作用：二十碳五烯酸的调节”(Effect of a cancer cachectic factor on proteinsynthesis/degradation in murine C₂C₁₂ myoblasts：Modulation byeicosapentaenoic acid.)-Cancer Res.59：5507-5513，1999；Whitehouse，A.S.等“15(S)-羟基二十碳四烯酸通过增加的泛蛋白-蛋白酶体途径的表达增加诱导肌管中的蛋白质分解代谢”(Induction ofprotein catabolism in myotubes by 15(S)-hydroxyeicosatetraenoic acidthrough increased expression of the ubiquitin-proteasome pathway.)

Br.J.Cancer，89：737-745，2003；和Whitehouse，A.S.等“蛋白水解诱导因子(PIF)对鼠肌管中泛蛋白-蛋白酶体途径的表达增加与转录因子NF-κB的活化有关”(Increased expression of the ubiquitin-proteasome pathway in murine myotubes by proteolysis-inducingfactor is associated with activation of the transcription factor NF-κB.)-Br.J.Cancer，89：1116-1122，2003)为在50μM下的有效，并且附图9A中的数据表明在50μM浓度下，HMB和EPA在衰减PIF诱导的蛋白质降解中等效。在低至25μM HMB下也存在一定程度的弱化，但在高浓度的PIF下没有。在没有PIF存在下与对照组的差异显示为：a，p＜0.005，而对照组与PIF(就添加HMV或EPA的组而言)的差异显示为：b，p＜0.01和c，p＜0.005。

上述已经证实PIF-诱导的蛋白质降解是因泛蛋白-蛋白酶体蛋白水解途径的调节成分的表达增加所致：Lorite，M.J.Smith，H.J.Arnold，J.A.Morris，A.Thompson，M.G.和Tisdale，M.J.“蛋白水解诱导因子(PIF)对体内骨骼肌中和体外鼠肌原细胞中ATP-泛蛋白-依赖性蛋白水解的活化”(Activation of ATP-ubiquitin-dependentproteolysis in skeletal muscle in vivo and murine myoblasts in vitro bya proteolysis-inducing factor(PIF).)-Br.J.Cancer，85：297-302，2001和Gomes-Marcondes，M.C.C.Smith，H.J.Cooper，J.C.和Tisdale，M.J.“研究蛋白水解诱导因子诱导的肌肉蛋白分解代谢机理的体外模型***的研发”(Development of an in-vitro model system toinvestigate the mechanism of muscle protein catabolism induced byproteolysis-inducing factor.)-Br.J.Cancer，86：1628-1633，2002。

根据′胰凝乳蛋白酶类′酶活性，即蛋白酶体β-亚单位的显性蛋白水解活性确定这种途径的功能活性。PIF诱导在4.2nM下为最大的′胰凝乳蛋白酶类′酶活性增加。PIF的作用完全被50μM EPA以及25和50μM HMB弱化(附图9B，与对照组的差异显示为：a，p＜0.001，而在有EPA或HMB存在下差异显示为：b，p＜0.001)。对蛋白酶体20Sα亚单位、β亚单位和p42，即促进20S蛋白酶体与19S调节物的ATP-依赖性结合而形成26S蛋白酶体的19S调节物的ATPase亚单位的表达观察到了类似的作用(附图10)。在所有情况中，PIF在4.2和10nM时表达增加，并且这一结果被50μM EPA和HMB弱化，而在25μM下不会。这些结果证实HMB通过对泛蛋白-蛋白酶体途径的PIF诱导的作用减弱了蛋白质降解。

实施例IV

对炎症和蛋白水解中信号传导的介体活性的作用

上述实施例III中所述体外研究还评价了HMB对为炎症途径中关键介体的分子的作用。本实验如实施例III中所述进行。

已经证实PKC的活化激活了MAPK信号传导途径的胞外信号调节的激酶(ERK)级联(Toker，A.“通过蛋白激酶C的信号传导”(Signalling through protein kinase C.)-Front.Biosci.3：1134-1147，1998；Wolf，I和Seger，R.“促***原活化蛋白蛋白激酶级联：从工作台到床旁”(The mitogen-activated protein kinase signallingcascade：from bench to bedside.)-IMAJ.4：641-647)。活化的ERKs，例如ERK1(或p44 MAPK)和ERK2(或p42 MAPK)能够磷酸化并且随后活化胞质磷脂酶A2，即涉及炎症中会花生四烯酸释放的途径中的限速酶。此外，已经证实PIF诱导p42/44 MAPK磷酸化，而总MAPK保持不变并且涉及PIF-诱导的蛋白酶体表达(Smith，H.J.等“蛋白水解诱导因子诱导的鼠肌管中蛋白酶体表达涉及的信号转导途径诱导”(Signal transduction pathways involved in proteolysis-inducingfactor induced proteasome expression murine myotubes.)-Br.J.Cancer，89：1783-1788，2003)。EPA和HMB对该过程的作用如附图12中所示。PIF诱导在4.2nM下最大的p42/44磷酸化增加并且这种作用完全被50μM的EPA和HMB弱化，但是在25μM HMB下时不会。The ability of HMB弱化ERK 1/2磷酸化的能力在HMB抑制PIF-诱导的蛋白酶体表达中可能是重要的。

使用PKC的突变体以及这种酶的抑制剂的实验表明它形成PIF产生的胞内信号传导的中枢介体。PKC可能涉及导致NF-κB的核蓄积和基因转录增加的I-κBα的磷酸化(和降解)。PIF刺激PKC[α]从细胞质转移至质膜(附图11)而导致活化，其中因蛋白质降解在4.2nM PIF下具有最大作用(附图9)。该过程被50μM的EPA和HMB有效弱化；而HMB在25μM下有效性较低(附图11)。这提示PIF-诱导的PKC刺激被HMB通过抑制PKC而弱化。

如上所述，PIF诱导I-κBα降解并且刺激NF-κB的核蓄积，且已经证实该过程被50μM EPA弱化(Whitehouse，A.S.等“蛋白水解诱导因子(PIF)对鼠肌管中泛蛋白-蛋白酶体途径的表达增加与转录因子NF-κB活化有关”(Increased expression of the ubiq uitin-proteasomepathway in murine myobutes by proteolysis-inducing factor(PIF)isassociated with activation of the transcription factor NF-κB.)-Br.J.Cancer，89：1116-1122，2003)。附图13A中的结果表明50μM的HMB在有PIF存在下有效减弱鼠肌管中的I-κB[α]降解并且防止NF-κB的核蓄积(附图13C)。

与OnM PIF的差异显示为：b，p＜0.01；和c，p＜0.001。当以25μM的浓度使用HMB时，仅观察到NF-κB与DNA结合的部分抑制(附图13B)。与OnM PIF的差异显示为：b＝p＜0.01和c＝p＜0.001。50uM HMB和PIF治疗与单独的PIF相比在相同浓度下的差异e＝p＜0.01且f＝p＜0.001。这些结果提示在防止NF-κB移入核方面HMB的总体作用与EPA的总体作用相差无几，同时伴随基因表达的活化。

因此，HMB显示出为治疗癌症恶病质中细胞因子诱导的炎症和肌肉萎缩中的有效活性剂。HMB显示出通过PKC活性的抑制和产生的胞质IκB/NF-κB复合物的稳定发挥其作用。因为这些分子为炎症途径中的关键介体，HMB显示出为抗炎化合物。

实施例V

预防偶然体重减轻的营养品组合物

将制备本实施例的营养品的物质的具体目录列在表1中。当然，在不脱离本发明范围的情况下进行具体组分和量的不同改变。

表1：物质目录

组分量

(KG)

水 316

超痕量/痕量矿物预混合物 0.06

硫酸锌 0.033

硫酸镁 0.0082

钼酸钠 0.00023

氯化铬 0.00029

***钠 0.000098

氯化钾 0.072

柠檬酸钠 2.89

碘化钾 0.00009

柠檬酸钾 1.5

玉米糖浆 7.68

麦芽糖糊精 53.6

磷酸二镁 0.26

磷酸二钙 0.99

氯化镁 1.2

蔗糖 11.9

果糖寡聚体 5.9

中链甘油三酯 2.6

芸苔油 1.5

大豆油 0.87

57％维生素A棕榈酸酯 0.007

维生素DEK预混合物 0.04

维生素D 0.0000088

D-α-醋酸维生素E 0.036

叶绿醌 0.00006

角叉藻聚糖 0.03

大豆卵磷脂 0.6

酪蛋白酸钠 15.5

酪蛋白酸钙 4.2

HMB钙一水合物 2.6

乳蛋白质分离物 14

精制除臭的沙丁鱼油 6.9

抗坏血酸 0.12

45％氢氧化钾 0.13

牛磺酸 0.12

水溶性维生素预混合物 0.11

烟酰胺 0.017

泛酸钙 0.01

盐酸氯化硫胺 0.003

盐酸维生素B6 0.003

核黄素 0.002

叶酸 0.0004

生物素 0.00034

维生素B12 0.000038

棕榈酸抗坏血酸酯 0.03

氯化胆碱 0.25

L-肉碱 0.0681

N&A MARSHMALLOW 1.6

VANILLA

N&A DULCE DE LECHE 0.27

通过下列步骤制备本发明的液体营养品：制备制备三种淤浆，将它们彼此掺合，与精制除臭的沙丁鱼油合并，加热处理，标准化，包装并且灭菌。使用来自表7的物质目录制备454kg(1,000磅)液体营养品的方法如下详细描述。

通过首先在搅拌下将约62.6kg水加热至约71℃-77℃的温度下制备碳水化合物/矿物淤浆。将HMB加入到水中并且通过将所得溶液搅拌至少5分钟而溶解。向水中加入所需量的柠檬酸钾和超痕量/痕量矿物预混合物并且通过将所得溶液搅拌至少10分钟而溶解。然后按照所列的顺序加入下列矿物，同时高速搅拌：氯化镁、氯化钾、柠檬酸钠、碘化钾、磷酸镁和磷酸三钙。在中速搅拌下将淤浆混合至完全溶解或分散。然后向该淤浆中加入玉米糖浆、蔗糖和麦芽糖糊精，同时搅拌。加入所需量的FOS并使其混合。在约60-66℃的温度下和高速搅拌的同时将完整的碳水化合物/矿物淤浆保持不超过8小时，直到将其与其它淤浆掺合为止。

通过在约32-43℃的温度下和搅拌的同时合并和加热中链甘油三酯类(分级分离的椰子油)、芸苔油和大豆油制备油淤浆。加入维生素DEK预混合物并且使其混合至完全分散。加入所需量的下列组分：大豆卵磷脂、维生素A、抗坏血酸棕榈酸酯和维生素E。加入角叉菜并且使其混合至完全分散。在约32-43℃的温度和中速搅拌下将完整的油淤浆保持不超过8小时，直到将其与其它淤浆掺合为止。

通过在搅拌的同时首先将196.78kg水加热至约60-63℃温度下制备蛋白质淤浆。使用混合设备将酪蛋白酸钙和酪蛋白酸钠和乳蛋白质分离物掺入所述淤浆。在约54-60℃温度和搅拌下将完整的蛋白质淤浆保持不超过2小时，此后与其它淤浆掺合。

在搅拌下将油与蛋白质淤浆彼此掺合并且将所得掺合的淤浆维持在约54-66℃温度下。在放置至少5分钟后，在搅拌下向来自上述步骤的掺合54-66温度下。然后在搅拌的同时向该淤浆中加入精制除臭的沙丁鱼油(在最优选的制备方法中，当掺合物以恒定速率通过管道时，将沙丁鱼油缓慢计量入产品)。优选在至少5分钟后，测定掺合的淤浆的pH。如果掺合的淤浆的pH低于6.55，那么用稀氢氧化钾将其调整至pH 6.5-6.8。

在放置既不少于1分钟，又不超过2小时的期限后，如下所述将掺合的淤浆进行脱气，超-高-温(UHT)处理并且匀化：使用正泵给掺合的淤浆提供这种操作步骤；将掺合的淤浆加热至约66-71℃的温度；将掺合的淤浆脱气至25.4-38.1cm Hg；在61-75个大气压下乳化掺合的淤浆；通过使掺合的淤浆通过具有约10秒保留时间的板/螺管热交换器将其加热至约120-122℃的温度；使用约为5秒的保留时间将掺合的淤浆UHT加热至约144-147℃的温度；通过使掺合的淤浆通过瞬时冷却器使其温度降至约120-122℃的温度；通过使掺合的淤浆通过具有约10秒保留时间的板/螺管热交换器使其温度降至71-82℃的温度；在约265-266个大气压下匀化掺合的淤浆；在约74-85℃的温度下使掺合的淤浆通过保留管至少16秒；和通过使掺合的淤浆通过大的热交换器将其冷却至约1-70℃的温度。

在约1-7℃温度下，优选在搅拌的同时贮存掺合的淤浆。

优选在此时进行适当的分析测试以便质量控制。基于测试结果，在搅拌的同时将适量的稀释水(10-38℃)加入到掺合的淤浆中。

分别制备维生素溶液和香料溶液且然后加入到掺合的淤浆中。

通过下列步骤制备维生素溶液：在搅拌的同时将约3.94kg水加热至约43-66℃的温度，且此后按照所列顺序加入下列组分：抗坏血酸、45％氢氧化钾、牛磺酸、水溶性维生素预混合物、氯化胆碱和L-肉碱。然后在搅拌的同时将该维生素溶液加入到掺合的淤浆中。

通过在搅拌的同时将药用蜀葵和dulce de leche香料加入到约7.94kg水中制备香料溶液。使用Firmenich Inc.Princeton，New Jersey，U.S.A.发布的人造药用蜀葵香料和Firmenich Inc.发布的人造dulce deleche香料制备本发明的营养品。然后在搅拌的同时将该香料溶液加入到掺合的淤浆中。

如果必要，将稀的氢氧化钾加入到掺合的淤浆中，使得产品在灭菌后具有6.4-7.0的pH。然后将完整的产品放入合适的容器中并且进行灭菌。当然，如果需要，可以使用无菌操作。

实施例VI

控制糖血反应的营养品组合物

表2中提供了用于制备1,000kg液体营养品的物质目录单，它给人提供了营养物，并且限制了产生的胰岛素反应。其制备的详细描述如下。

表2：用于液体营养品的物质目录单

WSV预混合物(每g预混合物)：375mg/g烟酰胺，242mg/g泛酸钙，8.4gm/g叶酸，62mg/g盐酸氯化硫胺，48.4gm/g核黄素，59.6mg/g盐酸维生素B6，165mcg/g维生素B12和7305mcg/g生物素维生素DEK预混合物(每g预混合物)：8130IU/g维生素D3，838IU/g维生素E，1.42mg/g维生素K₁ UTM/TM预混合物(每g预混合物)：45.6mg/g锌，54mg/g铁，15.7锰，6.39mg/g铜，222mcg/g硒，301mcg/g铬和480 mcg/g钼

通过制备彼此掺合、加热处理、标准化、包装和灭菌的四种淤浆生产本发明的糖尿病用液体营养品。

通过实现在搅拌的同时将约82kg水加热至约65℃-约71℃的温度制备碳水化合物/矿物淤浆。在搅拌的同时加入所需量的HMB钙并且搅拌5分钟。加入所需量的Kelco，Division ofMerck和CompanyIncorporated，San Diego，California，U.S.A.发布的柠檬酸钙和胞外多糖胶(gellen gum)并且搅拌5分钟。加入所需量的超痕量矿物/痕量矿物(UTM/TM)预混合物(Fortitech，Schnectady，New York分布)。该淤浆的颜色为淡黄绿色。将搅拌维持至矿物完全分散。然后在搅拌的同时加入所需量的下列矿物：柠檬酸钾、氯化钾、氯化铬、氯化镁和碘化钾。接下来在高速搅拌下向淤浆中加入第一种GrainProcessing Corporation，Muscataine，lowa，U.S.A.发布的麦芽糖糊精和果糖并且使其溶解。在搅拌的同时，加入所需量的RoquetteAmerica，Inc.Keokuk，Iowa发布的麦芽糖醇粉末、AlGroup Lonza，Fair Lawn，New Jersey分布的麦芽糖醇糖浆、Golden TechnologiesCompany，Golden，Colorado，U.S.A.分布的果糖寡聚体和第二种Matsutani Chemical Industry Co.Hyogo，Japan分布的产品名称为nameFibersol2(E)的麦芽糖糊精并且充分搅拌至完全溶解。在搅拌下向该淤浆中加入所需量的磷酸三钙和磷酸镁。在约65℃-约71℃和搅拌下将完整的碳水化合物/矿物淤浆保持不超过12小时，直到将其与其它淤浆掺合为止。

通过合并所需量的高油酸红花油和芸苔油并且在搅拌的同时将其加热至约40.5℃-约49℃的温度制备在油淤浆中的纤维。在搅拌的同时，加入所需量的来自Cognis of LaGrange，Illinois的叶黄素酯类。最少搅拌15分钟。在搅拌的同时，向加热的油中加入所需量的下列组分：卵磷脂(由Central Soya Company，Fort Wayne，Indiana分布)、维生素D、E、K预混合物(由Vitamins Inc.Chicago，Illinois分布)、维生素A、维生素E和β-胡萝卜素。将所需量的Protein TechnologyInternational，St.Louis，Missouri分布的大豆多糖缓慢分散入加热的油中。将完整的油/纤维淤浆在约55℃-约65℃的温度和中速搅拌下保持不超过12小时的期限，直到将其与其它淤浆掺合为止。

通过将293kg水加热至60℃-65℃制备在水淤浆中的第一种蛋白质。在搅拌的同时加入所需量的20％柠檬酸钾并且保持1分钟。在高速搅拌下加入所需量的酸性酪蛋白，随后立即加入所需量的20％氢氧化钠。将搅拌在高速下维持至酪蛋白溶解。在中速搅拌下将该淤浆保持在约60℃-65℃。

通过首先在搅拌的同时将约77 kg水加热至约40℃的温度下制备在水淤浆中的第二种蛋白质。加入酪蛋白酸盐并且将该淤浆充分搅拌至酪蛋白酸盐完全分散。在持续搅拌下，将该淤浆缓慢温至60℃-65℃。将该淤浆保持不超过12小时，直到将其与其它淤浆掺合为止。

通过将344kg蛋白质淤浆1与84kg蛋白质淤浆2掺合组成批量。在搅拌的同时，加入37kg油/纤维淤浆。在放置至少1分钟后，在搅拌的同时向来自上述步骤的掺合的淤浆中加入216kg碳水化合物/矿物淤浆并且将所得掺合的淤浆维持在约55℃-约60℃的温度下。用1N氢氧化钾将掺合批量的pH调整至pH为6.45-6.75。

在放置不少于1分钟，又不超过2小时的期限后，对该掺合物淤浆进行脱气、超-高-温处理和匀化。将该掺合物淤浆加热至约71℃-约82℃的温度并且在真空中脱气。然后通过单级匀化器在900-1100psig下乳化加热的淤浆。乳化后，将该淤浆从约99℃加热至约110℃且然后加热至约146℃的温度下约5秒。使该淤浆通过瞬时冷却器以便将温度降至约99℃-约110℃且然后通过板式冷却器使温度降至约71℃-约76℃。然后在3900-4100/400-600psig下匀化该淤浆。将该淤浆保持在约74℃-约80℃下16秒且然后冷却至1℃-约7℃。此时，取样用于微生物学和分析测试。将该混合物保持在搅拌下。

分别制备水溶性维生素(WSV)溶液并且加入到处理的掺合淤浆中。

通过在搅拌的同时将下列组分加入到9.4kg水中制备维生素溶液：WSV预混合物(J.B.Laboratories，Holland，Michigan发布)，维生素C、氯化胆碱、L-肉碱、牛磺酸、肌醇、叶酸、盐酸维生素B6和维生素B12。加入所需量的45％氢氧化钾以使pH达到7-10。

基于质量控制试验的分析结果，在搅拌的同时将适量的水加入到该批量中以便获得所需的总固体量。另外，在搅拌下向稀释的该批量中加入8.8kg维生素溶液。调整产品的pH以便获得最佳产品稳定性。然后将完整的产品放入合适的容器中并且进行最终的灭菌。

实施例VII

儿科用营养品组合物

表3中提供了制备本发明771kg儿科肠用营养品的物质目录单。其制备的详细描述如下。

表3：用于儿科香草营养品的物质目录单

组分	量/771kg
组分	量/771kg	储备PIF淤浆
高油酸红花油	40.7kg	储备PIF淤浆
高油酸红花油	40.7kg	大豆油	24.4kg
MCT油	16.3kg	大豆油	24.4kg
MCT油	16.3kg	卵磷脂	840.2g
单酸甘油酯类	840.2g	卵磷脂	840.2g
单酸甘油酯类	840.2g	角叉菜聚糖	508.9g
酪蛋白酸盐	32.8g	角叉菜聚糖	508.9g
酪蛋白酸盐	32.8g	储备OSV掺合物
DEK预混合物	83.3g	储备OSV掺合物
DEK预混合物	83.3g	维生素A	7.1g
叶黄素酯类(5％)	92g	维生素A	7.1g
叶黄素酯类(5％)	92g	储备PIW淤浆
水	530kg	储备PIW淤浆
水	530kg	酪蛋白酸盐	11.3kg
乳清蛋白	11.9kg	酪蛋白酸盐	11.3kg
乳清蛋白	11.9kg	储备MIN淤浆
水	18kg	储备MIN淤浆
水	18kg	纤维素胶	1696kg
HMB钙一水合物	4.4kg	纤维素胶	1696kg
HMB钙一水合物	4.4kg	氯化镁	2.7kg
氯化钾	1.0kg	氯化镁	2.7kg
氯化钾	1.0kg	柠檬酸钾	2.7kg
碘化钾	0.25kg	柠檬酸钾	2.7kg
碘化钾	0.25kg	磷酸二钾	1.45kg
最终掺合物		磷酸二钾	1.45kg
最终掺合物		PIW淤浆	251kg
PIF淤浆	53kg	PIW淤浆	251kg

MIN淤浆	12.6kg
MIN淤浆	12.6kg	氯化钠	127.4kg
蔗糖	77.6kg	氯化钠	127.4kg
蔗糖	77.6kg	磷酸三钙	2.5kg
水	167kg	磷酸三钙	2.5kg
水	167kg	储备WSV溶液
水	31.7kg	储备WSV溶液
水	31.7kg	柠檬酸钾	3.74g
UTM/TM预混合物	172.2g	柠檬酸钾	3.74g
UTM/TM预混合物	172.2g	WSV预混合物	134.1g
m-肌醇	176.7g	WSV预混合物	134.1g
m-肌醇	176.7g	牛磺酸	145.5g
L-肉碱	34.92g	牛磺酸	145.5g
L-肉碱	34.92g	氯化胆碱	638.7g
储备抗坏血酸溶液		氯化胆碱	638.7g
储备抗坏血酸溶液		水	18.6g
抗坏血酸	550.0g	水	18.6g
抗坏血酸	550.0g	45％KOH	341g
储备香草溶液		45％KOH	341g
储备香草溶液		水	38.1kg
香草香精	4.3kg	水	38.1kg

DEK预混合物：(每gm预混合物)12,100IU维生素D3，

523IU维生素E，0.962mg维生素K₁

UTM/TM预混合物：(每gm预混合物)132mg锌，147mg铁，10.8mg锰，12.5mg铜，0.328mg硒，0.284mg钼

WSV预混合物：(每gm预混合物)375mg烟酰胺，

242mg d-泛酸钙，8.4mg叶酸，62mg盐酸氯化硫胺，48.4mg核黄素，59.6mg盐酸维生素B6，165.5mcg维生素B12，7305mcg生物素

通过将具体量的DEK预混合物称入大至足以装载54g油溶性维生素的螺旋瓶盖的避光容器制备储备的油溶性维生素掺合物(OSV掺合物)。使用塑料吸量管将所需量的维生素A加入到DEK等分部分中。给容器中充氮气，此后加盖。

通过将所需量的高油酸红花油、大豆油和MCT油加入到掺合罐中制备在脂肪淤浆中的储备蛋白(PIF)。在搅拌的同时将盖混合物加热至40.5℃-49℃。在搅拌的同时加入所需量的来自American RiverNutrition of Hadley，Massachusetts的叶黄素酯类。最少搅拌15分钟。加入乳化剂、卵磷脂(Central Soya of Decatur，Indiana发布)和单酸甘油酯类(Quest of Owings Mills，Maryland发布)并且充分混合至溶解。然后加入所有OSV掺合物。用该油掺合物将容器冲洗4-5次以确保维生素的完全转移。加入角叉菜聚糖(FMC of Rockland，Maine发布)和酪蛋白酸盐。将该淤浆充分混合以分散蛋白质。在60-65℃和中速搅拌下将PIF淤浆保持达6小时，直到使用为止。

通过将所需量的水加入到掺合罐中制备在水淤浆中的储备蛋白(PIW)。将水保持在中速搅拌下并且达到76-82℃。在高速搅拌下向水中加入所需量的酪蛋白酸盐并且高速混合至蛋白质完全分散。将该蛋白质淤浆冷却至54-60℃，此后进行操作。一旦冷却，就加入所需量的乳清蛋白并且充分混合至完全分散/溶解。将PIW淤浆在54-60℃下保持达2小时，直到使用为止。

通过将所需量的水加入到掺合罐中制备储备矿物溶液(MIN)并且加热至60-68℃。向水中加入纤维素胶(FMC of Newark，Delaware发布)并且在中速搅拌下保持最少5分钟，此后进行操作。加入HMB钙并且最少搅拌5分钟，此后进行操作。加入无机盐氯化镁、氯化钾、柠檬酸钾、碘化钾和磷酸二钾，每次添加一种，在每次添加之间进行搅拌以确保矿物溶解。将完整的MIN溶液保持在低-中速搅拌和54-65℃下，直到使用为止。

通过将具体量的PIW淤浆加入到掺合罐中制备最终的掺合物并且在搅拌下加热至54-60℃。向罐中加入具体量的PIF淤浆并且充分混合。向该掺合物中加入具体量的MIN溶液并且充分混合。向该掺合物中加入具体量的氯化钠并且充分混合。向该掺合物中加入具体量的蔗糖并且充分混合至溶解。向该掺合物中加入磷酸三钙并且充分混合以便分散。向该掺合物中再加入具体量的水并且充分混合。将完整的最终掺合物保持在54-60℃和持续搅拌下。如果必要，用1 N KOH将pH调整至6.45-6.8。

在放置不少于1分钟，又不超过2小时的期限后，对该掺合物淤浆进行脱气、超-高-温处理和匀化。将掺合的淤浆加热至约68℃-约74℃的温度并且在真空中脱气。然后在900-1100psig下乳化加热的淤浆。乳化后，将该淤浆加热至约120℃-约122℃且然后加热至约149℃-约150℃的温度下。使该淤浆通过瞬时冷却器以便将温度降至约120℃-约122℃且然后通过板式冷却器使温度降至约74℃-约79℃。然后在3900-4100/400-600psig下匀化该淤浆。将该淤浆保持在约74℃-约85℃下16秒且然后冷却至1℃-约6℃。此时，取样用于微生物学和分析测试。将该混合物保持在搅拌下。

如下进行标准化。通过将具体量的水在掺合罐中加热至48-60℃制备储备维生素溶液(WSV)。按照所列顺序向该溶液中各自加入柠檬酸钾、UTM/TM预混合物(Fortitech of Schenectady，New York发布)、WSV预混合物、m-肌醇、牛磺酸、L-肉碱和氯化胆碱并且使其充分混合以便溶解或分散每种组分。将14.2kg维生素溶液加入到处理的混合罐中。

通过将具体量的水加入到掺合罐中制备储备香草溶液。向水中加入具体量的香草(Givaudan Roure of Cincinnati，Ohio发布)并且充分混合。向处理的混合罐中加入18.5kg香草溶液并且充分混合。

通过将所需量的水加入到掺合罐中制备储备抗坏血酸溶液。加入具体量的抗坏血酸并且充分混合至溶解。加入具体量的45％KOH并且充分混合。向混合罐中加入8.4kg抗坏血酸溶液并且充分混合。

通过添加92.5kg水并且充分混合将最终的混合物稀释至最终的总固体量。将产品填充入合适的容器，此后进行最终的(蒸馏瓶)灭菌。

实施例VIII

完整营养补充剂组合物

表4中提供了用于制备1,000kg典型香草香精膳食替代物液体的物质的目录单。其制备的详细描述如下。

表4：用于香草液体营养品的物质目录单

组分	量/1,000kg
组分	量/1,000kg	水	33kg
玉米糖浆	28kg	水	33kg
玉米糖浆	28kg	麦芽糖糊精	19.4kg
蔗糖	8.7kg	麦芽糖糊精	19.4kg
蔗糖	8.7kg	酪蛋白酸盐	5.7kg
HMB钙一水合物	4.1kg	酪蛋白酸盐	5.7kg
HMB钙一水合物	4.1kg	高油酸红花油	4.1kg
芸苔油	3.7kg	高油酸红花油	4.1kg
芸苔油	3.7kg	大豆蛋白	3.2kg
乳清蛋白	2.9kg	大豆蛋白	3.2kg
乳清蛋白	2.9kg	玉米油	2.0kg
磷酸三钙	1.4kg	玉米油	2.0kg
磷酸三钙	1.4kg	柠檬酸钾	1.3kg
磷酸钾	952gm	柠檬酸钾	1.3kg
磷酸钾	952gm	卵磷脂	658gm
氯化镁	558gm	卵磷脂	658gm
氯化镁	558gm	香草香精	544gm
氯化钠	272gm	香草香精	544gm
氯化钠	272gm	角叉菜聚糖	227gm
氯化胆碱	218gm	角叉菜聚糖	227gm
氯化胆碱	218gm	UTM/TM预混合物	165gm
氯化钾	146gm	UTM/TM预混合物	165gm
氯化钾	146gm	抗坏血酸	145gm
柠檬酸钠	119gm	抗坏血酸	145gm
柠檬酸钠	119gm	氢氧化钾	104gm
叶黄素(5％)	46gm	氢氧化钾	104gm
叶黄素(5％)	46gm	WSV预混合物	33gm
维生素DEK预混合物	29gm	WSV预混合物	33gm
维生素DEK预混合物	29gm	维生素A	3.7gm

碘化钾

86gm

WSV预混合物(每g预混合物)：375mg/g烟酰胺，242mg/g泛酸钙，8.4gm/g叶酸62mg/g盐酸氯化硫胺，48.4gm/g核黄素，59.6mg/g盐酸维生素B6，165mcg/g维生素B12和7305mcg/g生物素维生素DEK预混合物(每g预混合物)：8130IU/g维生素D₃，838IU/g维生素E，1.42mg/g维生素K₁

UTM/TM预混合物(每g预混合物)：45.6mg/g锌，54mg/g铁，15.7锰，6.39mg/g铜222mcg/g硒，301mcg/g铬和480mcg/g钼

通过制备三种彼此掺合、加热处理、标准化、包装和灭菌的淤浆制备本发明的液体膳食替代品。

通过首先在搅拌的同时将所需量的水加热至约65℃-约71℃的温度下制备碳水化合物/矿物淤浆。加入所需量的HMB钙并且最少搅拌5分钟。在搅拌的同时加入所需量的柠檬酸钾和超痕量的矿物/痕量矿物(UTM/TM)预混合物(Fortitech，Schnectady，New York发布)。该淤浆的颜色为单黄绿色。将搅拌维持至矿物完全分散。然后在搅拌的同时加入所需量的下列矿物：氯化镁、氯化钾、氯化钠、柠檬酸钠、碘化钾、磷酸镁和磷酸三钙。接下来在高速搅拌下向淤浆中加入GrainProcessing Corporation，Muscataine，lowa，U.S.A.发布的麦芽糖糊精、蔗糖和玉米糖浆并且使其溶解。将完整的碳水化合物/矿物淤浆保持在约65℃-71℃的温度和搅拌下不超过8小时，直到将其与其它淤浆掺合为止。

通过合并所需量的高油酸红花油和芸苔油并且在搅拌的同时将其加热至约40.5℃-约49℃制备在脂肪淤浆中的蛋白质(PIF)。在搅拌的同时，加入所需量的来自Kemin Foods of Des Moines，lowa的游离叶黄素。最少搅拌15分钟。向加热的油中加入下列组分：卵磷脂(Central Soya Company，Fort Wayne，Indiana发布)、维生素A和维生素D、E、K预混合物(Vitamins Inc.Chicago，Illinois发布)。将所需量的角叉菜聚糖与所需量的乳清蛋白干燥掺合并且加入到搅拌的脂质混合物中且最少搅拌10分钟。将所需量的大豆蛋白缓慢加入到掺合物中以确保适当混合。将完整的油/蛋白质淤浆保持在约40℃-约43℃和中速搅拌下不超过2小时期限，直到将其与其它淤浆掺合为止。

通过首先在搅拌的同时将约所需量的水加热至约40℃的℃下制备在水淤浆中的蛋白质。加入酪蛋白酸盐并且充分搅拌钙淤浆，直到酪蛋白酸盐完全分散。通过持续搅拌将该淤浆缓慢温至60℃-65℃。将该淤浆保持不超过12小时，直到将其与其它淤浆掺合为止。

通过将所需量的蛋白质淤浆所需量的碳水化合物/矿物淤浆掺合组成批量并且将其搅拌10分钟。在搅拌的同时，加入37kg油/纤维淤浆。在放置至少1分钟后，在搅拌的同时加入所需量的油/蛋白质淤浆并且至少搅拌10分钟。用1N氢氧化钾将掺合批量的pH调整至pH为6.66-6.75。

实施例IX

饮料组合物

为了生产1000kg批量的即饮饮料，将987.31kg水放入安装了搅拌器的容器中。在环境温度下，加入所需量的苯甲酸钾并且使其完全溶解。加入所需量的HMB钙并且使其完全溶解。然后按照所列的顺序加入下列组分。使每种组分完全溶解，此后加入下一个种组分。

表5：即饮饮料

苯甲酸钾 0.30kg

HMB钙一水合物 5.7kg

柠檬酸钾 0.15kg

柠檬酸 2.89kg

乳酸 1.41kg

阿司帕坦 0.55kg

甘油磷酸钙 6.06kg

着色剂 0.0019kg

天然和人造香料 1.00kg

抗坏血酸 0.33kg

加入抗坏血酸，此后立即填充入12-盎司铝罐中。给饮料充二氧化碳，此后填充入铝罐。给该溶液脱气且然后转入冷却并且充约2.5体积二氧化碳的″碳-冷却器″中。

实施例X

电解质替代品组合物

如下的实施例中解释了如何制备即饮的再水化溶液。ORS具有表6中概括的组成。

表6：即饮的再水化溶液

组分	量/454kg
组分	量/454kg	水	437kg
葡萄糖一水合物	10kg	水	437kg
葡萄糖一水合物	10kg	果糖	2.4kg
柠檬酸	1.2kg	果糖	2.4kg
柠檬酸	1.2kg	氯化钠	0.937kg
柠檬酸钾	1kg	氯化钠	0.937kg
柠檬酸钾	1kg	柠檬酸钠	492.0g
HMB钙一水合物	5.7kg	柠檬酸钠	492.0g
HMB钙一水合物	5.7kg	果香香料	226.8kg
葡糖酸锌	80.62kg	果香香料	226.8kg
葡糖酸锌	80.62kg	三氯半乳蔗糖	179.2g
乙酰舒泛钾	38.1g	三氯半乳蔗糖	179.2g
乙酰舒泛钾	38.1g	黄#6	7.2g

称量出所需量的过滤水并且加入到掺合罐中。将水加热至43-54℃，同时中速搅拌。在维持中速搅拌时，加入HMB钙并且将混合物最少混合5分钟。在持续中速搅拌下加入所需量的葡萄糖。搅拌至溶解。加入所需量的果糖。搅拌至溶解。按照所列的顺序将所需量的下列组分加入到葡萄糖/果糖掺合物中并且搅拌至溶解：葡糖酸锌、柠檬酸钠、氯化钠、柠檬酸钾和柠檬酸。加入所需量的三氯半乳蔗糖(McNeil Speciality Products Company of New Brunswick，New Jersey发布)和乙酰舒泛钾(作为Sunsett

由Hoechst Food Ingredients ofSomerset，New Jersey发布)并且搅拌至溶解。向该批量中加入黄#6和果香果汁饮料香料至溶解。将该掺合物冷却至1.1-7.2℃并且保持在低速搅拌下。填充所需数量的一升塑料瓶，对瓶口加箔加热密封并且拧转至食品级无菌标准。

或者，将冷却的掺合物包囊在可密封冷冻包装材料中并且诸如通过加热密封进行密封。将单剂量的在水化溶液包装在密封可冷冻的药袋中。可以用于实施本发明的，诸如用于传统的冷藏充气饮料瓶的各种类型的包装材料对本领域技术人员而言显而易见。包装材料优选为能够标记，诸如产品鉴别、组分等的类型以便置于其外表面上。在这种条件下将在水化制品装船并且贮存，优选在其多个单元装置中。关注为商业化目的将多个单元装置或冷藏充气饮料瓶共同包装。

在给予前，冷冻液体在水化溶液的包装。冷冻后，打开包装并且摄取其内含物。由于一般在环境温度下给予冷冻的再水化制品，所以每个包装中包含的再水化液体的量优选为可以仍然在冷冻状态下完全消耗的量。优选20-35盎司，更优选2.0-2.5盎司/包装。在特别优选的实施方案中，将2.1盎司无菌再水化溶液包囊在矩形，例如1″×8″可冷冻的包装材料中。优选透明的塑料包装材料。

Claims

1.通过下调选自蛋白激酶C、核因子κ-B、泛蛋白缀合酶和26S蛋白酶体的成分的成分的表达和/或活性来预防或治疗患者疾病情况的方法，包括给予HMB、其盐、其代谢物或衍生物。

2.权利要求1所述方法，其中给予HMB、其盐、其代谢物或衍生物下调蛋白激酶C的表达和/或活性。

3.权利要求1所述方法，其中给予HMB、其盐、其代谢物或衍生物下调核因子κ-B的表达和/或活性。

4.权利要求1所述方法，其中给予HMB、其盐、其代谢物或衍生物下调泛蛋白缀合酶的表达和/或活性。

5.权利要求1所述方法，其中给予HMB、其盐、其代谢物或衍生物下调26S蛋白酶体的表达和/或活性。

6.权利要求1所述方法，其中联合给予选自L-肉碱、富含大的中性氨基酸的基本上不含游离氨基酸的氨基-氮源、ω-3脂肪酸和不消化的寡糖的成分中的至少一种与HMB或其盐。

7.权利要求1所述方法，其中所述疾病情况选自癌症、恶病质、与年龄相关的消瘦、与长期住院治疗相关的消瘦、HIV/AIDS、关节炎、创伤、肝病、克罗恩病、IBD、肾机能不全和COPD。

8.权利要求7所述方法，其中所述疾病为恶病质。

9.组合物，其包含：

a.HMB、其盐、其代谢物或衍生物；

b.肉碱；

c.富含大的中性氨基酸的氨基氮源；且

其中所述组合物基本上不含游离氨基酸。

10.权利要求9所述组合物，其中所述HMB选自HMB钠、HMB钾、HMB镁、HMB铬、HMB钙、碱金属HMB、碱土金属HMB和HMB内酯。

11.权利要求9所述组合物，所述组合物还包含ω-3脂肪酸。

12.权利要求11所述组合物，其中所述ω-3脂肪酸选自二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。

13.权利要求9所述组合物，其中所述大的中性氨基酸占氨基氮源的至少10％。

14.权利要求9所述组合物，其中所述游离氨基酸占小于0.4gm/份的组合物。

15.权利要求9所述组合物，其还包含小于2克/份的肉碱。

16.权利要求9所述组合物，其还包含至少1克/份的FOS。

17.权利要求9所述组合物，其还包含选自维生素、矿物和微量矿物的营养物。

18.组合物，其包含：

a.约2-10gm/升HMB钙；

b.至少1克/升的ω-3脂肪酸；

c.约1-约8gm/升的肉碱；

d.约1-约25gm/升的FOS；

富含大的中性氨基酸的氨基氮源，其中所述氨基氮源包含约10-60wt/wt％的大的中性氨基酸；且其中所述组合物基本上不含游离氨基酸。

19.权利要求9所述组合物，其中对人或动物给予所述组合物。

20.权利要求9所述组合物，其中所述组合物选自食品添加剂、膳食替代物、方条状营养食品、咀嚼物或一口食品和饮料。

21.治疗患者与疾病相关的消瘦的方法，包括对所述患者给予权利要求9所述组合物。