CN101091890A - 一种复合型乳化剂及用其制备的乳剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一种复合型乳化剂及用其制备的能够抵抗高温和低温破坏的乳剂及其制备方法。该复合乳化剂可以由两种或者三种以上的乳化剂进行组合，在进行组合时，可以是其中任意两种或者三种以上的成分，复合型乳化剂中还含有适量的药用辅料和油及水。乳剂由药物、油相、复合型乳化剂和水等组成。乳剂经过制备油相和水相后合形成初乳，过均质仪制成。本发明有如下优点：1.所制备乳剂能够抵抗热、冻融的破坏作用；2.较易生产平均体积粒度小于150nm的乳剂；3.无需采用高温即可获得无菌制剂；4.可以实现在低pH值下制备乳剂的目的，从而扩大了乳剂的应用范围；5.能够提高药物的化学稳定性；6.可以降低药物的刺激性。

Description

一种复合型乳化剂及用其制备的乳剂及其制备方法

技术领域：

本发明涉及医药技术领域，涉及一种复合型乳化剂及用其制备的能够抵抗高温和低温破坏的乳剂及其制备方法。

背景技术：

一般而言，乳剂的组成包括“油相”、“水相”和“乳化剂”，由于常规(经典或传统)的乳剂是一个不稳定体系，极易受到外界条件的影响，如冷冻、振摇、高温灭菌等操作均会造成粒度变化，甚至破乳、析油，致使产品质量发生显著改变，影响疗效，产生意外的不良反应，甚至报废，造成极大的损失。目前，制备乳剂的油相大多数都是采用长链脂肪酸酯，如大豆油。长链脂肪酸酯类物质均存在如下问题，如豆油的碳链长，粘度大，对脂溶性药物溶解量低，含有大量不饱和双键，易氧化，更为严重的是不能经受冻融，在高温灭菌时会导致粒度明显增大，即使采用中链甘油三酯(MCT)或者长链甘油三酯与MCT的混合物，也会产生类似问题。产生这些问题的主要原因是现有乳剂处方中仅只采用单一乳化剂或者两种乳化剂，而这样的两种乳化剂联合应用时并未将既可经受高温灭菌又可经受冻融的性质考虑在内，仅只以高温灭菌不破乳，灭菌后粒度未极大增加为指标。早在1678年人类便开始研究乳剂，自从1961年Intralipid成功上市以来，乳剂得到广泛重视，也取得了极大的成功，为人类生命健康做出了重要贡献。但令人遗憾的是，虽然乳剂生产技术、设备融入了时代发展的先进成果，而所采用的处方仍然是几十年前，即1961年所采用的经典处方，主要为10％(或者20％或者30％)大豆油、1.2％注射用卵磷脂、2.2％甘油，pH值约为8，即使有变化，其变化也是不大。在上述处方组成中，常常要加入适量的油酸，同时要调pH值至9左右，使得灭菌后的pH值约为8，目的是获得高负电荷，使乳剂稳定。这些处方、工艺所存在的问题，一是所制备的乳剂不能经受冻融；其二是所加入的油酸具有一定的溶血性；其三是平均粒度较大，不能过滤除菌，需要旋转灭菌，增加工艺复杂性和成本；其四是pH值较高，不适于在高pH值下不稳定的药物(如：双异丙酚，前列地尔)；其五是所制备乳剂需要在冰箱低温下保存，不能在室温或者阴凉处保存。随着社会的发展，对乳剂这一相对古老而经典的剂型提出了新的要求，特别是在经历一些极端条件后，如零下30度，乳剂仍能够应用，具有极为重要的价值和意义。解决上述所存在的问题迫在眉睫。

在此我们以脂溶性药物辅酶Q₁₀为例介绍其相关背景。

辅酶Q₁₀是辅酶Q类重要成员之一，它是生物体内广泛存在的醌类化合物。辅酶Q₁₀广泛存在于线粒体的内膜中，在体内通过线粒体内膜酶系的作用由对羟基苯甲酸及异戊烯焦磷脂合成，是人体细胞中具有重要作用的辅酶。内源性辅酶Q₁₀在人体内的总含量为0.5-1.5mg，在心脏、肝及胰中的水平较高，有结合蛋白质的功能。人体合成部分自身所需的辅酶Q₁₀，剩余的从膳食中摄取。随着年龄的增长，体内产生的辅酶Q₁₀逐渐减少。

辅酶Q₁₀的药理作用包括：抗氧化作用、自由基清除作用、稳定生物膜作用、增强免疫机能作用等。由于这些作用，临床上使用辅酶Q₁₀治疗和/或预防以下疾病：

1、心血管类疾病，例如缺血性心脏病、风湿性心脏病、心肌炎、心绞痛、心律失常、冠心病、充血性心力衰竭及高血压；

2、急慢性肝炎、亚急性肝坏死，对其他肝疾病也有一定疗效；

3、癌症的综合治疗，能减轻放、化疗引起的某些副反应，临床上用于治疗晚期急性癌症患者也有一定疗效；

4、中枢神经***的变性性紊乱，例如阿耳茨海默氏症、帕金森氏症和抑郁症；

5、强化免疫***和增强体质。

另外，辅酶Q₁₀也可以预防或降低某些药物的副作用，例如他汀类药物的副作用，或者细胞抑制剂的副作用，例如降低阿霉素的心脏毒性。

近年来，在辅酶Q₁₀原料药的提取及制备方面开展了很多研究，日本最早开发了辅酶Q₁₀，并成为世界上最大的生产国家。据统计全球有90％的产品来自日本。目前，我国的一些企业已逐渐掌握了生物提取法、半化学合成法以及微生物发酵提取法等先进的技术，为国内的原料需求提供了保障。关于辅酶Q₁₀的制剂，国内外相关的研究也很多，主要上市产品有片剂、胶囊、软胶囊、注射剂等。生产厂家有：泰洲制药总厂、山东青岛生物化学制药厂、苏州第六制药厂、安徽丰原药业有限公司等。显然现有的剂型难以满足其治疗疾病的需求。辅酶Q₁₀是一种亲脂性物质，在水中的溶解度非常低(实际上不溶于水)。口服的片剂、胶囊剂等均存在生物利用度低、个体差异大等缺点。注射剂中为增加辅酶Q₁₀的溶解度，常采用吐温-80为增溶剂，由于吐温-80是聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯，该物质具有溶血作用，并且容易发生氧化，氧化产物会造成过敏。另外，该注射剂在储存过程中药物易析出，需要加热才能重新溶解，物理稳定性不好。因此，本研究将辅酶Q₁₀制成乳剂，可以增加药物的溶解度，提高生物利用度，使药物在体内具有靶向性，降低毒副作用，弥补辅酶Q₁₀现有制剂的不足。

与辅酶Q₁₀相关的制剂专利包括，ZL02808179.X含有辅酶Q₁₀的微乳剂预浓缩物和微乳剂。主要是用于口服；申请号200480017624.9，提高辅酶Q₁₀传送的化学组合物及方法。采用精油使得辅酶Q₁₀可有效地传送和吸收、提高生物利用率及克服现有局限的目的。200610046134.2辅酶Q₁₀注射乳剂及制备方法。参照专利200610046134.2中的实施例2制备辅酶Q₁₀乳剂，处方如下：蛋黄磷脂1.0％，辅酶Q₁₀ 0.5％，VE 0.05％，1，2-丙二醇10％，188 2％，加注射用水至100mL，调节pH值3-9制备成。按照该处方制备的乳剂，放置两小时，即有药物析出。另外，参照专利200610046134.2中的实施例3制备辅酶Q₁₀乳剂，处方如下：辅酶Q₁₀ 0.6％，VE 0.01％，1，2-丙二醇30％，泊洛沙姆188 3％，甘油1.5％，加注射用水至100mL，调节pH值3-9制备成。按照上述处方制备的乳剂，放置一小时，即有药物析出。对于其它的处方，经过试验发现仍然达不到较好效果。即使按照常规方法制备成乳剂，也不能拮抗冻融破坏作用。

发明内容：

本发明的目的是提供一种能够经受热和冻融破坏作用的乳剂处方及其制备工艺。

解决乳剂冻融等问题的主要手段是乳化剂和油相组成的合理选择。虽然采用吐温80或聚氧乙烯蓖麻油提供一定的保护作用，但其保护作用不理想，所制备的乳剂粒度较大，不能过滤除菌，而且更为严重的是，由于这两者均有强力的致组胺释放作用，使得患者过敏，甚至过敏而死亡。我们解决此类问题的思路是调整油相组成和毒性很低的乳化剂组成，我们的试验结果发现，对乳化剂和油相组成进行合理的选择，可以解决我们在“技术背景”中提到的现有乳剂存在的五大问题。

解决思路之一是采用低粘度的油相和适当的复合乳化剂。相对于长链脂肪酸酯类物质(如大豆油)而言，中链甘油三酯具有碳链短，粘度小，对脂溶性药物溶解量高，未含有双键，不易被氧化，在体内代谢简单等优点。将中链甘油三酯(MCT)与长链甘油三酯(LCT)联合使用，可以获得恰当的油相粘度，再以复合乳化剂进行乳化  (以卵磷脂与含PEG链的乳化剂，如HS15、TPGS、DSPE-PEG(分子量1000-10000)中一种或两种以上组合成为的复合乳化剂)，同时加入冻融保护剂，即可达到目的。

例如，我们曾经比较了单一乳化剂卵磷脂(浓度2％)或者Solutol HS15(浓度2％)作乳化剂时所制备乳剂的抗热与冻融稳定性。结果见附表。

附表采用单一乳化剂制备辅酶Q₁₀乳剂热与冻融稳定性

	卵磷脂			Solutol HS15
							平均粒度(nm)	99％粒度(nm)	CV	平均粒度(nm)	99％粒度(nm)	CV
	起始湿热灭菌冻融试验	115.8111.9265.7	251.6246.9448.1	0.3620.3700.337	67.168.8	163.7相分离167.6							0.4220.421

由上表可知，单独采用磷脂或HS₁₅的乳剂离心稳定性均良好，离心前后平均粒径和粒度分布基本没有变化；单独使用磷脂的乳剂灭菌稳定性良好，但冻融后粒径增长较大，单独使用HS₁₅的乳剂，耐冻融但不耐灭菌。因此需要采用复合乳化剂。

解决思路之二是采用三种或者三种以上的复合乳化剂。我们发现如果采用此种思路，无论是单纯以中链甘油三酯(MCT)为油相(单一卵磷脂或者卵磷脂联合其它辅助乳化剂所制备得到的乳剂不能经受冻融或者经受热灭菌)，还是其它长链甘油三酯(LCT)(单一卵磷脂或者卵磷脂联合其它辅助乳化剂所制备的乳剂不能经受冻融或者经受热灭菌)，或者MCT与LCT混合作为油相，或者中药油脂性物质，如鸦胆子油、鱼油(深海鱼油，富含DHA等多不饱和脂肪酸及其酯)、薏米仁油、莪术油、柴胡油、沙棘油、大蒜油、大蒜素、川芎油、当归油、辣椒精油、生姜油、芹菜籽油、鱼腥草油、月见草油、紫苏籽油、五福心脑康(曾用名：五福心脑清，或者心脑清/心脑康，主要成份：精制红花油、维生素B₆、维生素E、冰片等)，或者以各种油溶解脂溶性化合物，如辅酶Q₁₀、葫芦素、葫芦素B、葫芦素E、葫芦素I、葫芦素Q、前列地尔、双异丙酚、维生素K₁、***棕榈酸酯、丹参酮IIA、丁苯酞、藁本内酯、马蔺子素、恩替卡韦、胆维他(茴三硫)、马洛替酯、高三尖酯碱、去甲斑蝥酸、姜黄素、环扁桃酯、β-榄香烯、鲨肝醇、他汀类降脂药，如“洛伐他订”，“辛伐他汀”等，所制备乳剂均可以达到抗冻融目的，解决了单纯采用中链甘油三酯(MCT)或者长链甘油三酯(LCT)为油相时，以单一乳化剂磷脂或者磷脂与含PEG链的乳化剂，如HS₁₅、TPGS、DSPE-PEG(PEG分子量1000-10000)等联合应用不能拮抗冻融的问题。我们的试验结果表明，具有拮抗热与冻融破坏作用的乳剂，其复合型乳化剂中必须加入泊洛沙姆类物质，如泊洛沙姆188。

该乳剂的主要技术方案是：主要成分为药物和药用辅料，其余为水。药用辅料包括油、复合型乳化剂、助乳化剂或不含有助乳化剂、稳定剂或不含有稳定剂、冻融保护剂或不含有冻融保护剂、pH调节剂或不含有pH调节剂；药∶油＝1∶0-1∶10000(w/w)。复合型乳化剂由两种或者三种或者三种以上的乳化剂进行组合，并用此复合乳化剂对油相进行乳化。

其中最为主要的是乳化剂组成，即复合型乳化剂的搭配。所选乳化剂包括卵磷脂(蛋黄磷脂或大豆磷脂)(0％～5％)(w/v)、泊洛沙姆(0％～5％)(w/v)、Solutol HS₁₅(简写为HS₁₅，聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯、polyethylene glycol 660 hydroxystearate)(0％～5％)(w/v)、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(简写为TPGS)(0％～5％)(w/v)，DSPE-PEG(0％～5％)(w/v)，由这些乳化剂进行组合成为两大类乳化剂，一类是由卵磷脂与PEG类乳化剂(HS₁₅、TPGS、DSPE-PEG)中的一种构成，为了达到抗冻融目的，需要在处方中加入冻融保护剂(详见实施例4和表4)；另一类是由卵磷脂与PEG类乳化剂(HS₁₅、TPGS、DSPE-PEG2000)中的一种或者两种再加入泊洛沙姆类(Poloxamer188或者Pluronic F68，简称F68)乳化剂所构成的三种或者三种以上成分复合乳化剂，该复合乳化剂中无需刻意考虑冻融保护剂，其适用面更广，适用于不同油相组成，包括C₆-C₂₈的油类，如经过结构改造和水解后的植物油、甘油三酸酯，椰子油、橄榄油、大豆油、红花油、辛癸酸甘油酯(称为中链油，MCT，Delios)、油酸乙酯等中的一种或几种混合物，用量为1％-20％(w/v)，包括以此类油来溶解或者分散脂溶性化合物(对于特殊的药物，可以采用复合溶媒来溶解，然后除去溶媒)，如辅酶Q₁₀、葫芦素、葫芦素B、葫芦素E、葫芦素I、葫芦素Q、前列地尔、双异丙酚、维生素K1、***棕榈酸酯、丹参酮IIA、丁苯酞、藁本内酯、马蔺子素、恩替卡韦、胆维他(茴三硫)、马洛替酯、高三尖酯碱、去甲斑蝥酸、姜黄素、环扁桃酯、β-榄香烯、鲨肝醇、他汀类降脂药，如“洛伐他订”，“辛伐他汀”等、维生素E烟酸酯、棉子酚、冬凌草甲素、非诺贝特、伊曲康唑、坎地沙坦、羟基喜树碱、喜树碱衍生物、非那雄胺、依托伯苷、人参皂甙、20(S)-原人参二醇、人参皂甙Re、人参皂甙Rb₁、人参皂甙Rg₂、20(R)-人参皂甙Rg3、20(S)-人参皂甙Rg₃。该复合乳化剂也能够用于治疗用油，如鸦胆子油、鱼油(深海鱼油，富含DHA等多不饱和脂肪酸及其酯)、薏米仁油、莪术油、大蒜油、大蒜素、川芎油、当归油、辣椒精油、生姜油、芹菜籽油、鱼腥草油、月见草油、柴胡油、沙棘油、紫苏籽油、五福心脑康(曾用名：五福心脑清，或者心脑清/心脑康，主要成份：精制红花油、维生素B₆、维生素E、冰片等)，或者以治疗用油溶解脂溶性化合物成为复方制剂。

例如辅酶Q₁₀乳剂可以采用两种方案来制备。其基本组方如下：

每1mL药液中含有：

辅酶Q₁₀       1-50mg

注射用油      10-200mg

乳化剂        适量

稳定剂        适量

冻融保护剂    适量

pH调节剂      适量

按照第一种方案，即采用低粘度的油相，以卵磷脂与含PEG链的乳化剂，如HS₁₅、TPGS、DSPE-PEG(分子量1000-10000)，中一种组合成为的两种成分复合乳化剂制备乳剂，同时加入冻融保护剂，其研究结果见“实施例1-实施例13”，可以制备出所需辅酶Q₁₀乳剂。

另外一种方案是采用三种或者三种以上的复合乳化剂，其中必须加入的成分是泊洛沙姆类物质，如泊洛沙姆188，即三种或者三种以上的复合乳化剂由泊洛沙姆与另外的两种或者三种乳化剂组成。如此也可以得到能够拮抗热、冻融破坏作用的乳剂。

可根据需要加入或不加入的助乳化剂为：甘油、聚乙二醇、1，2-丙二醇、聚甘油酯、油酸、亚油酸、亚麻油酸、硬脂酸、二十二碳六烯酸(DHA)、胆酸(包括猪、鹅、熊去氧胆酸)；稳定剂为：氮气、EDTA及其盐类、无水亚硫酸(氢)钠、焦亚硫酸钠、维生素C及其衍生物、二丁基羟基甲苯、α-生育酚、α-醋酸生育酚、氢醌等中的一种或几种混合物；等渗调节剂为：甘油、1，2-丙二醇、葡萄糖、甘露醇、木糖醇等中的一种或几种混合物；冻融保护剂为醇类中丙二醇为优选，糖类保护剂中单独麦芽糖、甘露醇6％葡萄糖1.5％联用、甘露醇6％葡萄糖3％联用、甘露醇6％麦芽糖1.5％联用、甘露醇2％葡萄糖4％麦芽糖8％联用，特别是甘露醇2％葡萄糖4％麦芽糖8％联用；pH调节剂为：盐酸、氢氧化钠、醋酸、醋酸钠、磷酸、磷酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠等中的一种或几种混合物，pH范围是3-9。

乳剂的制备工艺为：

1)配制罐中制备油相(药物相)：在配制罐中，将油(包括注射级或者口服级)加热至30-90℃，然后加入乳化剂，30-60℃度时搅拌至溶解；接着在搅拌中加入药物；

2)在配制罐中制备水相：将水和甘油或者水相中乳化剂在30-90℃下搅拌5min，使之完全混溶；

3)在30-60℃，将水相加入油相中，搅拌5-30min，形成初乳；

4)将初乳过G₃漏斗抽滤，调节pH值到3-9；

5)过均质第一步调节匀化压力至4000-8000psi，第二步再调节至10000-30000psi，形成乳剂，过微孔滤膜，分装，灭菌(湿热灭菌或者过滤除菌)，即得乳剂。

所制乳剂的平均体积粒径小于150nm。所得乳剂可以注射、口服、外用给药。

辅酶Q₁₀的含量测定用HPLC分析：

HPLC的色谱条件为：色谱柱    十八烷基硅烷键合硅胶

                  流动相    甲醇-乙醇(50/50，v/v)

                  检测波长  275nm

辅酶Q₁₀溶解度的测定

精密量取无水乙醇、丙二醇、水、精制大豆油、中链油4mL，分别置于10mL具塞刻度试管中，将过量的药物加入上述各溶剂中，涡旋5min，37℃恒温震荡48h。于不同时间分别取样，冷却至室温，0.45μm微孔滤膜过滤，续滤液用适量无水乙醇稀释后进行HPLC分析，当连续两次测得的辅酶Q₁₀含量变化小于5％时，表明溶解达到平衡。外标法求出辅酶Q₁₀浓度，计算室温下药物在不同介质中的平衡溶解度。结果见表1。

表1辅酶Q₁₀在不同溶剂中的溶解度

溶剂	饱和溶液的浓度(mg/mL)	溶解度分类
			无水乙醇丙二醇水大豆油大豆油/中链油(1∶1，w/w)中链油	1.3260.0035＜0.000173.91105.12139.83	微溶不溶不溶溶解易溶易溶

由表可知，中链油(MCT)对辅酶Q10的溶解能力约是大豆油的2倍，因此在权利要求中对辅酶Q10乳剂提出所需要保护的油相应该是MCT，或者以MCT为基础组成的复合油相。

粒度测定：本实验中应用PSS.NICOMP^TM380作为测定粒径的仪器。

与现有的乳剂生产技术和方法相比，采用本发明所提供的复合型乳化剂具有如下优点：1、所制备乳剂能够抵抗热、冻融的破坏作用；2、较易生产平均体积粒度小于100nm的乳剂，对设备的要求不高；3、可以实现过滤除菌目的，无需采用高温即可获得无菌制剂；4、乳剂受pH值、处方中其它添加剂的影响很小，可以实现在低pH值下制备乳剂的目的，从而扩大了乳剂的应用范围；5、能够提高药物的化学稳定性；6、由于表面存在复合乳化层，可以大大降低药物的刺激性。

附图说明：

图1为实施例16中大鼠经ADM处理前的心电图

图2为实施例16中大鼠经ADM处理后的心电图

图3为实施例16中大鼠给予辅酶Q₁₀乳剂后的心电图

具体实施方式：

下面以实施例加以说明，但不局限于所列的实施例：

实施例1：考察以HS₁₅与SPC为复合乳化剂时，不同比例大豆油/中链油作为油相对乳剂冻融前后粒径的影响。

处方组成：辅酶Q₁₀ 0.25g、大豆磷脂1.2g、HS₁₅ 0.9g、注射用油10g、甘油2.2g，其余为注射用水，共100mL。

注射用油为大豆油/中链油比例为100∶0～0∶100(w/w)

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将甘油加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解。

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，第一步调节匀化压力至4000psi，第二步在调节至16000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀乳剂。

将制备的乳剂，进行冻融试验。结果见表2。

表2不同比例大豆油/中链油对乳剂冻融前后粒径的影响

大豆油/中链油质量比	原乳剂平均粒径(nm)	冻融后平均粒径(nm)	粒径增长百分率
				100/090/1075/2550/5040/6025/7520/8015/8510/900/100	136.5121.376.674.180.176.677.575.479.273.1	386.2238.6103.9181.1112.7103.9100.690.699.4219.6	有破乳现象有破乳现象有破乳现象144.4％40.7％35.6％29.6％20.2％25.5％200.4％

由上表可知，在以HS15、SPC为复合乳化剂时，大豆油/中链油比例在25∶75～10∶90(w/w)范围内，制备的乳剂冻融粒径增长较小，为优选的组合比例。

实施例2：考察以TPGS与SPC为复合乳化剂时，不同比例大豆油/中链油作为油相对乳剂冻融前后粒径的影响。

处方组成：辅酶Q₁₀ 0.25g、大豆磷脂1.2g、TPGS 1g、注射用油10g、甘油2.2g，其余为注射用水，共100mL。

注射用油为大豆油/中链油比例为100∶0～0∶100(w/w)

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、TPGS加热至50℃，搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将甘油加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解。

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，第一步调节匀化压力至4000psi，第二步在调节至16000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀乳剂。

将制备的乳剂，进行冻融试验。结果见表3。

表3不同比例大豆油/中链油对乳剂冻融前后粒径的影响

大豆油/中链油质量比	原乳剂平均粒径(nm)	冻融后平均粒径(nm)	粒径增长百分率
				100/090/1075/2550/5040/6025/7510/900/100	112102787166696563	1861381068682838180	66％35％36％21％24％20％25％27％

由上表可知，在以TPGS、SPC为复合乳化剂时，大豆油/中链油比例在100∶0～0∶100(w/w)范围的抗冻融能力要好于HS₁₅；50∶50～10∶90(w/w)范围内，制备的乳剂冻融粒径增长最小。

实施例3：考察不同磷脂对乳剂冻融前后粒径的影响。

处方组成：辅酶Q₁₀ 1.0g、磷脂1.2g、HS₁₅ 3.0g、注射用油10g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、丙二醇5.0g、EDTA-2Na 0.05g，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至80℃，搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将丙二醇、EDTA-2Na加入注射用水中，在80℃下搅拌5min，使之完全溶解；

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，第一步调节匀化压力至5000psi，第二步在调节至14000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀乳剂。

将制备的乳剂，进行冻融试验。结果见表3。

表3不同磷脂对辅酶Q₁₀乳剂冻融稳定性的影响

磷脂种类	原乳剂	冻融后
			Mean diameter(nm)	Mean diameter(nm)
	国产大豆磷脂(PC80％)Epikuron SPC 170Epikuron SPC 200Lipoid EPCLipoid S100	82.871.373.570.263.5			79.873.699.872.790.1

由上表可知，磷脂种类影响不大。

实施例4：考察不同的冻融保护剂(同时可作为渗透压调节剂，起调节渗透压作用)对乳剂冻融前后粒径的影响。

处方组成：辅酶Q₁₀ 1.0g、大豆磷脂1.2g、HS₁₅ 3.0g、注射用油10g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、EDTA-2Na 0.05g、冻融保护剂适量，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，强烈搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将冻融保护剂、EDTA-2Na加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解；

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，第一步调节匀化压力至5000psi，第二步在调节至14000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂。加入适量不同种类的保护剂，搅拌使溶解混匀，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀注射用乳剂。

将制备的乳剂，进行冻融试验。结果见表4。

表4不同保护剂对辅酶Q₁₀乳剂冻融稳定性的影响

不同种类的保护剂	原乳剂平均粒径(nm)	冻融后平均粒径(nm)	粒径增长百分率
				不加保护剂丙二醇5％丙二醇10％PEG400 2.4％甘油2.4％海藻糖5％海藻糖10％乳糖10％麦芽糖5％麦芽糖10％甘露醇6％葡萄糖1.5％甘露醇6％葡萄糖3％	60.861.562.663.357.556.754.557.658.854.556.855.9	255.974.779.9265.1236.5321.4286.7325157.8156.1114.4139.6	320％21％27.6％319％311％467％426％464％168％186％101％150％

甘露醇5％蔗糖10％甘露醇6％麦芽糖1.5％甘露醇2％葡萄糖4％乳糖8％甘露醇2％葡萄糖4％麦芽糖8％

62.452.763.259.3

237.6146263.978.6

281％177％318％32.5％

由上表可知，醇类保护剂中丙二醇为优选，糖类保护剂中单独麦芽糖、甘露醇6％葡萄糖1.5％联用、甘露醇6％葡萄糖3％联用、甘露醇6％麦芽糖1.5％联用、甘露醇2％葡萄糖4％麦芽糖8％联用粒度增长率小于200％，特别是甘露醇2％葡萄糖4％麦芽糖8％联用，其粒度增长率小于50％。

实施例5：

处方组成：辅酶Q₁₀ 0.1g、大豆磷脂0.6g、HS₁₅ 1.8g、注射用油5g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、葡萄糖1.5g、甘露醇6g，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，强烈搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将葡萄糖、甘露醇加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解；

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，第一步调节匀化压力至5000psi，第二步在调节至14000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀注射用乳剂。平均粒径为46.8nm。冻融后平均粒径为50.4nm。

如果将处方中的HS₁₅ 1.8g换成TPGS 1.8g，其它成分不变，工艺过程不变，则制得的辅酶Q₁₀乳剂其体积平均粒径约为36nm。冻融后的平均粒径约为37nm。

实施例6：

处方组成：辅酶Q₁₀ 0.25g、大豆磷脂0.3g、HS₁₅ 1.8g、注射用油5g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、葡萄糖1.5g、甘露醇6g，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，强烈搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将葡萄糖、甘露醇加入注射用水中，在30℃下搅拌5min，使之完全溶解；

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，第一步调节匀化压力至5000psi，第二步在调节至14000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀注射用乳剂。平均粒径为51.0nm。冻融后平均粒径为53.8nm。

如果将处方中的HS₁₅ 1.8g换成TPGS 1.8g，其它成分不变，工艺过程不变，则制得的辅酶Q₁₀乳剂其体积平均粒径约为43nm。冻融后的平均粒径约为49nm。

实施例7：

处方组成：辅酶Q₁₀ 0.25g、大豆磷脂0.3g、HS₁₅ 1.8g、注射用油5g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、甘油2.4％，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，强烈搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将甘油加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解；

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，第一步调节匀化压力至5000psi，第二步在调节至14000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀注射用乳剂。平均粒径为63.1nm。冻融后平均粒径为62.8nm。

如果将处方中的HS₁₅ 1.8g换成TPGS 1.8g，其它成分不变，工艺过程不变，则制得的辅酶Q₁₀乳剂其体积平均粒径约为38nm。冻融后的平均粒径约为40nm。

实施例8：

处方组成：辅酶Q₁₀ 0.5g、大豆磷脂1.2g、HS₁₅ 3.0g、注射用油10g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、丙二醇5.0g、EDTA-2Na 0.05g，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，强烈搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将丙二醇、EDTA-2Na加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解。

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，第一步调节匀化压力至5000psi，第二步在调节至14000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀注射用乳剂。平均粒径为58.9nm。冻融后平均粒径为61.5nm。

如果将处方中的HS₁₅ 3.0g换成TPGS 3.0g，其它成分不变，工艺过程不变，则制得的辅酶Q₁₀乳剂其体积平均粒径约为53nm。冻融后的平均粒径约为57nm。

实施例9：

采用三种乳化剂组成的复合乳化剂。

处方组成：辅酶Q₁₀ 1.0g、卵磷脂1.0g、HS₁₅ 2.0g、泊洛沙姆188 1.0g、注射用油10g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、丙二醇5.0g、EDTA-2Na 0.05g，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将泊洛沙姆188、丙二醇、EDTA-2Na加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解；

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，第一步调节匀化压力至5000psi，第二步在调节至14000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜(过滤除菌)，分装，充氮气，封口，灭菌(湿热灭菌或者过滤除菌)，即得辅酶Q₁₀注射用乳剂。平均粒径为62.6nm。冻融后平均粒径为63.9nm。

如果将处方中的注射用油10g换成15g，其它成分不变，工艺过程不变，则制得的辅酶Q₁₀乳剂其体积平均粒径约为68nm。冻融后的平均粒径约为71nm。同样，将处方中的注射用油10g换成20g，其它成分不变，工艺过程不变，则制得的辅酶Q₁₀乳剂其体积平均粒径约为73nm。冻融后的平均粒径约为78nm。

实施例10：

采用两种乳化剂组成的复合乳化剂。

处方组成：辅酶Q₁₀ 1.0g、大豆磷脂1.2g、HS₁₅ 3.0g、注射用油10g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、丙二醇5.0g、EDTA-2Na 0.05g，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，强烈搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将丙二醇、EDTA-2Na加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解。

3.将2置于微射流仪中，第一步调节匀化压力至5000psi，在匀化的过程中将1加入，反复匀化后，第二步在调节至14000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀注射用乳剂。平均粒径为66.9nm。冻融后平均粒径为64.2nm。

如果将处方中的HS₁₅ 3.0g换成TPGS 3.0g，其它成分不变，工艺过程不变，则制得的辅酶Q₁₀乳剂其体积平均粒径约为72nm。冻融后的平均粒径约为76nm。

实施例11：

处方组成：辅酶Q₁₀ 1.0g、卵磷脂1.0g、HS₁₅ 2.0g、泊洛沙姆188 1.0g、注射用油10g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、丙二醇5.0g、EDTA-2Na 0.05g，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，强烈搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将泊洛沙姆188、丙二醇、EDTA-2Na加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解；

将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，调节匀化压力至10000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀注射用乳剂。平均粒径为91.6nm。冻融后平均粒径为93.9nm。

实施例12：

处方组成：辅酶Q₁₀ 1.0g、卵磷脂1.0g、HS₁₅ 2.0g、泊洛沙姆188 1.0g、注射用油10g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、丙二醇5.0g、EDTA-2Na 0.05g，其余为注射用水，共100mL。

1.在配制罐中，将注射用油、磷脂、HS₁₅加热至50℃，强烈搅拌至溶解，加入药物，搅拌使之溶解；

2.在配制罐中，将泊洛沙姆188、丙二醇、EDTA-2Na加入注射用水中，在50℃下搅拌5min，使之完全溶解；

3.将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后得初乳，所得液体过微射流仪，调节匀化压力至5000psi，将溶液反复匀化，得到均匀的乳剂，过膜，分装，充氮气，封口，灭菌，即得辅酶Q₁₀注射用乳剂。平均粒径为128.2nm。冻融后平均粒径为132.9nm。

实施例13：辅酶Q₁₀乳剂冻融试验

参照SFDA《化学药物稳定性研究技术指导原则》对辅酶Q₁₀乳剂进行冻融试验，即于-10～-20℃条件下冷冻2天，之后于40℃加速条件下考察2天，反复循环三次。结果见表5。

表5辅酶Q₁₀乳剂冻融试验结果

循环次数	实施例5	实施例6	实施例7	实施例9
					平均粒径(nm)	平均粒径(nm)	平均粒径(nm)	平均粒径(nm)
	0123	46.848.950.152.1	51.051.954.555.6	63.163.859.364.9					62.661.763.365.7

由上表可知，在我们的大量基础研究后，以相对合理的处方工艺时，无论采用两种乳化剂组成的复合乳化剂还是三种乳化剂组成的复合乳化剂来制备辅酶Q₁₀乳剂，其冻融稳定性均良好。

实施例14：辅酶Q₁₀乳剂稀释试验

临床上用于静脉注射用乳剂的稀释剂主要有生理盐水和5％葡萄糖注射液，因此本文以二者为对象，考察本品稀释后的物理稳定性。

方法：精密量取本专利“实施例9”辅酶Q₁₀乳剂2份各2mL，置于10mL量瓶中，分别加入生理盐水和5％葡萄糖注射液定容至刻度，混匀，转移至具塞磨口试管中；再精密量取2份辅酶Q₁₀乳剂各1mL，置于10mL量瓶中，其它操作同前。将4份样品放置于30℃恒温水浴中，在0、2、4、6、8、10和12hr取样。测定粒度均值及分布状况，从而确定样品与稀释剂混合后放置期间内的粒度变化，结果见表6。

表6辅酶Q₁₀乳剂稀释试验结果

时间(h)

5％葡萄糖注射液稀释

0.9％氯化钠注射液稀释

	平均粒径(nm)	平均粒径(nm)
			024681012	73.265.565.867.263.168.870.4	77.471.475.169.166.966.468.5
平均(nm)RSD(％)	67.74.99％	70.75.92％

由粒度测定的结果可以看出，本品分别与葡萄糖注射液和生理盐水混合，放置12h的过程中，平均粒径基本无变化，因此配伍稳定性良好。

实施例15：不同制剂光照试验。

自制浓度为0.1mg/mL、0.5mg/mL、mg/mL的辅酶Q₁₀乙醇溶液，以及浓度为0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、10mg/mL的辅酶Q₁₀纳米乳剂，分装于若干个西林瓶中，密封。然后将西林瓶置于人工气候箱中，温度设定为25℃，在2000Lux、3000Lux、4000Lux、5000Lux、6000lux下进行强制光解实验。结果见表7～11。

表7辅酶Q₁₀制剂在2000lux下的光解动力学参数

浓度(mg/mL)	制剂	回归方程	r	t1/2(h)	乳剂/溶液t1/2比
						0.1	溶液	LnC＝4.64170.0259t	0.9963	26.8	1.07
0.1	乳剂	LnC＝3.78220.0242t	0.9983	28.6
					0.5	溶液	LnC＝4.64 390.0240t	0.9967	28.9	1.59
0.5	乳剂	LnC＝4.48240.0151t	0.9915	45.9
					1	溶液	LnC＝4.63220.0234t	0.9940	29.6		3.21
1	乳剂	Ln C＝4.47810.0073t	0.9974	94.9
					10	实施例9	LnC＝4.47810.0 023t	0.9924	301.3

表8辅酶Q₁₀制剂在3000lux下的光解动力学参数

浓度

制剂

回归方程

r

t1/2(h)

乳剂

(mg/mL)					/溶液t1/2比
						0.1	溶液	LnC＝4.6301-0.0388t	0.9966	17.9	0.94
0.1	乳剂	LnC＝3.8022-0.0382t	0.9991	18.1
					0.5	溶液	LnC＝4.6631-0.0339t	0.9972	20.4	1.11
0.5	乳剂	LnC＝4.5489-0.0306t	0.9944	22.6
					1	溶液	LnC＝4.6528-0.0278t	0.9946	24.9		2.93
1	乳剂	LnC＝4.4885-0.0095t	0.9983	72.9
					10	实施例9	LnC＝4.4885-0.0036t	0.9953	192.5

表9辅酶Q₁₀制剂在4000lux下的光解动力学参数

浓度(mg/mL)	制剂	回归方程	r	t1/2(h)	乳剂/溶液t1/2比
						0.1	溶液	LnC＝4.6176-0.0493t	0.9967	14.1	0.98
0.1	乳剂	LnC＝3.8297-0.0502t	0.9933	13.8
					0.5	溶液	LnC＝4.6373-0.0443t	0.9964	15.6	1.08
0.5	乳剂	LnC＝4.5196-0.0423t	0.9964	16.8
					1	溶液	LnC＝4.6377-0.0357t	0.9938	19.4		2.86
1	乳剂	LnC＝4.4557-0.0125t	0.9963	55.4
					10	实施例9	LnC＝4.5099-0.0052t	0.9970	133.3

表10辅酶Q₁₀制剂在5000lux下的光解动力学参数

浓度

制剂

回归方程

r

t1/2(h)

乳剂

(mg/mL)					与溶液t1/2比
						0.1	溶液	LnC＝4.6488-0.0599t	0.9924	11.6	0.94
0.1	乳剂	LnC＝3.7547-0.0634t	0.9988	10.9
					0.5	溶液	LnC＝4.6715-0.0535t	0.9947	13.0	1.05
0.5	乳剂	LnC＝4.5365-0.0505t	0.9978	13.7
					1	溶液	LnC＝4.6505-0.0495t	0.9986	14.0		3.34
1	乳剂	LnC＝4.4801-0.0148t	0.9959	46.8
					10	实施例9	LnC＝4.5112-0.0071t	0.9987	97.6

表11辅酶Q₁₀制剂在6000lux下的光解动力学参数

浓度(mg/mL)	制剂	回归方程	r	t1/2(h)	乳剂/溶液t1/2比
						0.1	溶液	LnC＝4.6242-0.0771t	0.9949	9.0	0.94
0.1	乳剂	LnC＝3.8006-0.0811t	0.9982	8.5
					0.5	溶液	LnC＝4.6359-0.0667t	0.9975	10.4	1.05
0.5	乳剂	LnC＝4.5590-0.0635t	0.9967	10.9
					1	溶液	LnC＝4.6345-0.0596t	0.9965	11.6		3.58
1	乳剂	LnC＝4.4803-0.0167t	0.9960	41.5
					10	实施例9	LnC＝4.5162-0.0091t	0.9953	76.2

由上表可知，辅酶Q₁₀的光解具有浓度依赖性，随着初浓度的增加，光解速率减小。将辅酶Q₁₀制备成乳剂后，与溶液剂相比，随着浓度的增加，药物光稳定性有较大提高。该结果未见报道，因此我们要求的权利保护浓度大于或等于1mg/mL。

实施例16：辅酶Q₁₀乳剂对阿霉素(ADM)心脏毒性的保护作用

辅酶Q₁₀可以降低阿霉素(ADM)的心脏毒性，本研究建立了阿霉素诱导大鼠心肌损伤模型，考察了辅酶Q₁₀乳剂对阿霉素所致大鼠心肌损伤的保护效果。Wistar大鼠40只，体重250±15g，雌雄各半。随机分成5组：阴性对照组、ADM组、ADM+辅酶Q₁₀-低剂量组、ADM+辅酶Q₁₀-中剂量组、ADM+辅酶Q₁₀-高剂量组，每组8只。对照组：腹腔注射生理盐水10mL/kg/d，连续9天；ADM组：腹腔注射ADM 3mg/kg，隔日给药，共5次(9天)；ADM+辅酶Q₁₀-低剂量组、中剂量组、高剂量组：分别尾静脉注射辅酶Q₁₀-1.5，3.0，6.0mg/kg/d，连续9天，ADM采取隔日给药，共5次(9天)，于静脉注射辅酶Q₁₀10分钟后，腹腔注射ADM 3mg/kg。第10天处死大鼠并取心脏，进行组织病理学检查及丙二醛、SOD的含量测定。其中组织病理学检查：取左心室心肌组织，10％甲醛固定，常规切片，HE染色，参照文献按照Rona等的标准将损伤分为4级。结果见表12、13。

表12铺酶Q₁₀乳剂对阿霉素心肌损伤保护作用的病理学结果(n＝8)

组别	心肌损伤的病理学分类
						0	I	II	III	IV
	对照组阿霉素组阿霉素+低剂量Q10阿霉素+中剂量Q10阿霉素+高剂量Q10	8----	--345	-3543	-5---						-----

由表中数据可见，尾静脉注射辅酶Q₁₀乳剂后可减轻阿霉素诱导产生的心脏损伤。

表13心肌MDA和SOD含量的变化(n＝8)

组别	心肌MDA(hmol/mg prot)	心肌SOD(U/mg prot)
			对照组阿霉素组阿霉素+低剂量Q10阿霉素+中剂量Q10阿霉素+高剂量Q10	4.76±0.658.99±1.17a5.20±1.07b5.09±1.03b4.91±0.78b	426.26±11.29330.02±15.39a378.93±6.50411.56±13.28b415.00±6.50b

a：P＜0.05，与对照组相比；b：P＜0.05，与阿霉素组相比

由上表可知，腹腔注射阿霉素后，大鼠心肌组织中MDA的含量较对照组显著升高(P＜0.05)，SOD的含量较对照组显著降低(P＜0.05)。尾静脉注射不同剂量的辅酶Q₁₀乳剂后，大鼠心肌组织中的MDA含量较对照组略有增加，但均无显著性差异；各剂量组与阿霉素组相比均存在显著性差异(P＜0.05)；大鼠心肌组织中的SOD含量较对照组略有降低，但均无显著性差异；中、高剂量组与阿霉素组相比存在显著性差异(P＜0.05)。辅酶Q₁₀乳剂可以有效地降低阿霉素的心脏毒性，保护心脏损伤大鼠的SOD活性，从而增加内源性活性氧自由基清除***的功能，减少MDA的生成。

大鼠心电图变化情况见附图1。由图可见与正常状态下心电图相对照，ADM给药组心电图中P波消失、T波低平、ST-T段明显降低、QRS波群降低，辅酶Q10治疗组大鼠心电图得到明显修复。

心肌组织切片(HE染色)结果表明，未经ADM处理的对照组心肌组织无改变，腹腔注射ADM组心肌损伤严重，表现为心内膜侧心肌细胞灶状坏死，横纹消失，细胞核消失，心室壁各层可见心肌纤维排列紊乱，呈大片灶状坏死，尾静脉注射辅酶Q₁₀乳剂后可减轻ADM诱导产生的心脏损伤。

实施例17：辅酶Q₁₀乳剂初步靶向性评价

给药方案：取禁食12h的小鼠随机分成四组，分别尾静脉注射辅酶Q₁₀溶液剂和不同粒度的辅酶Q₁₀

乳剂，使每组每个时间点都有3只小鼠，给药剂量为4.0mg·kg^-1，给药后于不同时间点10min、30min、1h、2h、6h、12h眼眶取血于肝素抗凝管中，离心分离血浆，并迅速取出心、肝、脑，用冰生理盐水冲洗干净，滤纸蘸干，-20℃冷冻保存。

通过HPLC定量测定组织中辅酶Q₁₀的含量。

色谱条件：

高效液相色谱仪(大连依利特)；UV2000II紫外可变波长检测器(大连依利特)；HW2000色谱数据处理工作站(大连依利特)。

色谱柱：Hypersil BDS C₁₈(200mm×4.6mm，5μm，大连依利特)；流动相：甲醇-无水乙醇(20∶80，v/v)；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；检测波长：275nm；进样量：20μL。

采用3p87药动学程序对数据进行处理，得出各组织中的AUC。结果见表14。

表14辅酶Q₁₀在各组织中的AUC及靶向效率

组织	心		肝		脑
							(μg·h·g-1)	AUC	相对摄取率	AUC	相对摄取率	AUC	相对摄取率
溶液剂实施例9实施例11实施例12	6.60228.03125.32827.340	-4.2463.8364.141	74.809100.09889.785104.636	-1.3381.2011.399	54.35465.05159.38955.689	-1.1971.0931.025

由上表可知：乳剂的粒度小于150nm时，即使乳剂的粒度有较大的差异(实施例9、11、12的粒度分别为62.6nm、91.6nm、128.2nm)，其心、肝和脑的相对摄取率(r_e)均大于1，表明乳剂在这些组织具有靶向性，其靶向效果心＞＞肝＞脑，而且没有显著性区别，这为将来的工业化大生产，以及产品的储存变化的控制提供依据。该结果未见报道，因此我们要求的权利保护体积平均粒度小于150nm。

实施例19：三种复合乳化剂联合应用制备乳剂

由于在前面的试验中采用两种乳化剂复合使用时存在适用面窄(如不适用于纯MCT油相)的问题，因此我们采用三种乳化剂复合使用。

以葫芦素(市售葫芦素原料，在乳剂中的含量以总葫芦素计为0.1mg/ml，葫芦素B含量大于0.06mg/0.1mg总葫芦素，为0.064mg葫芦素B/0.1mg总葫芦素)为模型药进行处方筛选。制备工艺如前(油相为MCT，10％，W/V)，与两种乳化剂复合使用情况的比较结果见表15(制备工艺参考”实施例9”，所测粒度均为高斯体积径)。

表15.不同复合乳化剂试验结果

处方	1	2	3	4	5	6
							组成(％W/V)：	SPC   1HS15  2VE    1F68   0	SPC   1HS15  2VE    1F68   1	SPC   1HS15  3VE    1F68   1	SPC   0.2TPGS  3.5VE    1F68   0.2	SPC   2TPGS  1VE    1F68   0.2	SPC   1TPGS  0.3VE    1F68   2
灭菌前粒度(nm)	①74.7②74.8③64.5	①54.3②52.5③57.9	①45.8②46.3	48.646.2	68.366.5	67.772.6
							灭菌后(灭菌30min)	①77.1②72.2③63.6	①54.0②54.9③62.0	①80.3②81.6	51.655.3	76.678.2	70.375.6
冻融粒度(nm)	均检测不出	53.255.158.6	76.875.1	56.252.7	71.878.3	72.880.1

(注：处方组成中维生素E，即VE是抗氧剂，如果去掉VE，则所制乳剂中葫芦素不稳定，灭菌前后会下降约6％，而加入VE，灭菌前后葫芦素没有变化。)

将处方6中的TPGS去掉，则制备的乳剂不能拮抗冻融试验。我们以处方2为基础分别考察了日本产NANOMIZER\美国产MICROFLUIDIZER(高压微射流纳米分散仪)\国产机器纳米微乳化系列设备DSS系列\德国产的EKATONANOMIX\意大利产实验型高压均质机-Niro Soavi NS1001L型高压均质机等不同设备制备乳剂的抗热和冻融破坏情况，结果没有显著性差别，表明本发明的处方组成适合于不同设备、不同分散原理(注：如果采用经典处方组成，即采用卵磷脂作为乳化剂，则设备对乳剂的粒度、分布有影响，所制备乳剂达不到抗热和冻融破坏目的)。另外，将处方6中的TPGS换成DSPE-PEG2000，其它不变，结果灭菌前后的粒度分别为55.3nm和60.6nm，冻融试验后的粒度为62.3nm，说明DSPE-PEG2000亦有良好的拮抗冻融作用。另外，我们还考察了pH范围3～9，结果pH对乳剂粒度没有显著性影响，这是以前的经典乳剂处方所不具备的特点，特别适合于对pH敏感的药物。我们将油相换成不同比例的混合油，如LCT/MCT 10∶90；20∶80；30∶70；40∶60；50∶50；60∶40；70∶30；80∶20；90∶10；100∶0，所制备的乳剂也均能够拮抗热和冻融破坏试验。在进行油相浓度用量考察时发现，油相的浓度不能超过20％，如果超过20％，则所制备乳剂不能拮抗热与冻融的破坏作用，因此权利要求中对于油相的浓度要求是小于或者等于20％。

实施例20：

将“实施例19”中的SPC换成EPC，其它相同，结果相同，没有显著性变化。

实施例21：

将“实施例19”中的葫芦素换成葫芦素B(HPLC面积归一化纯度大于99％)，其它相同，结果相同，没有显著性变化。

实施例22：辅酶Q₁₀乳剂

采用“实施例19”的研究方法，将药物葫芦素换成辅酶Q₁₀(乳剂中药物浓度为1％，即制剂中药物浓度为10mg/ml)，并进行简单调整，结果见表16。

  表16.不同复合乳化剂试验结果

处方	1	2	3	4	5	6
							组成(％W/V)：	SPC   1HS15  2F68   0	SPC  1HS15 1.5F68  1	SPC  1HS15 3F68  1	SPC  0.2TPGS 3.5F68  0.2	SPC  2TPGS 1F68  0.2	SPC  1TPGS 0.3F68  2
灭菌前(nm)	89.2	72.1	68.3	67.2	80.2	78.5
							灭菌后	--	73.5	89.2	73.1	89.6	82.1
冻融粒度(nm)	检测不出	78.1	92.5	72.6	87.2	91.3

采用HS15用量为0，SPC与F68均为1％的复合乳化剂处方所制备乳剂亦经受不起冻融破坏试验；如果去掉SPC，仅由HS₁₅与F68或者TPGS与F68组成，由此制备的乳剂对热和冻融的耐受力也不强。

实施例23：辅酶Q₁₀乳剂

见“实施例9”。另外采用“实施例20”的研究方法，将辅酶Q₁₀的浓度变为0.1％、0.5％，SPC换成EPC，结果相同，没有显著性变化。

实施例24：维生素K₁乳剂

将“实施例22”中的辅酶Q10换成维生素K₁(制剂浓度10mg/ml)，其它不变，结果乳剂的粒度小于100nm，能够经受热和冻融破坏作用。

实施例25：维生素K1乳剂

将“实施例24”中的维生素K₁变为0.1％(制剂浓度1mg/ml)、0.5％(制剂浓度5mg/ml)，SPC换成EPC，结果相同，没有显著性变化。

实施例26：双异丙酚乳剂

采用“实施例19”的表15中处方2、4的乳化剂组成，油相为10％的复合油(LCT/MCT，15/85，w/w，实施例9的油相)制备本发明的双异丙酚(浓度1％)乳剂，同时按照市售产品的处方组成，即“双异丙酚1％、LCT10％、SPC 1.2％、甘油2.2％”制备乳剂。所得乳剂的粒度分别约为76nm(本发明处方)、68nm(本发明处方)、187nm(市售处方)。将此三种制剂分别置于40℃考察10天，结果本发明处方的制剂外观仍然为乳白色，而按照市售处方制备以及市售产品的乳剂均变为淡黄色，冻融破坏试验结果表明，市售双异丙酚乳剂(阿斯利康，AstraZeneca)不能拮抗冻融破坏作用，而本发明制备的乳剂在冻融后的外观与粒度基本没有变化，说明本发明制剂的稳定性远优于市售产品。

实施例27：鸦胆子油乳剂

采用“实施例19”的表15中处方2、4的乳化剂组成，油相为10％鸦胆子油制备本发明的鸦胆子油乳剂，其粒度分别约为81nm和73nm，同时测定市售鸦胆子油乳剂(沈阳药大药业有限责任公司)，266nm。将上述三种制剂进行冻融破坏试验，结果本发明乳剂的粒度分别为83nm和71nm，而市售鸦胆子油乳剂检测不到，体系已经被严重破坏。说明本发明制剂远优于市售产品。

实施例28：前列地尔乳剂

采用“实施例19”的表15中处方2、4的乳化剂组成，油相为10％的复合油(LCT/MCT，15/85，w/w，实施例9的油相)制备本发明的前列地尔(***素E1)乳剂(过滤除菌)，其粒度分别约为66nm和62nm，同时测定市售前列地尔乳剂(商品名：凯时，北京泰德)的粒度约为233nm。将上述三种制剂进行冻融破坏试验，结果本发明乳剂的粒度分别为69nm和63nm，而市售前列地尔乳剂检测不到，体系已经被严重破坏。说明本发明制剂远优于市售产品。本制剂的刺激性大大降低。

实施例29：五福心脑康乳剂

五福心脑康软胶囊是由神威药业生产，曾用名：五福心脑清，或者心脑清/心脑康，主要成份为：精制红花油、维生素B₆、维生素E、冰片等，我们采用“实施例19”的表15中处方2、4的乳化剂组成，分别制备10％、5％或1％精制红花油相应的五福心脑康处方组成乳剂，结果其粒度分别约为91nm、73nm或56nm。将上述三种制剂进行冻融破坏试验，结果五福心脑康乳剂的粒度没有显著性变化。

实施例30：丁苯酞乳剂

采用“实施例19”的表15中处方2的乳化剂组成，油相为10％的复合油(LCT/MCT，50/50，w/w)，丁苯酞浓度为1％，制备本发明的丁苯酞乳剂，其粒度约为70nm，冻融破坏试验后乳剂的粒度为73nm，没有显著性变化。

实施例31：榄香烯乳剂

榄香烯是莪术油中的主要成分β-、γ-和δ-榄香烯的组合物，现有的乳剂是由榄香烯、大豆磷脂和胆固醇制成，批文号为WS-258(X-218)-93(1)，其规格为20ml:0.1g，即0.5％。由于现有制剂组方存在一定问题，临床应用过程中产生较为严重的刺激性，因此有专利制备了其乳剂，专利号为ZL02155072.7，其权利要求为该制剂包括含量％的榄香烯0.05～0.25％、注射用大豆油10～30％、注射用蛋黄卵磷脂1.0～1.5％或注射用大豆磷脂0.8～1.5％、注射用甘油2.0～2.5％、注射用水加至100ml。按照该专利的处方制备乳剂，冻融试验结果表明，该专利的乳剂不能经受冻融试验。采用“实施例19”的表15中处方2的乳化剂组成，油相组成见表17。

表17.油相组成

处方	1	2	3
				榄香烯(％)	0.05	0.5	1
LCT(％)	5	8	2
				MCT(％)	5	2	8

采用实施例9的工艺制备乳剂，结果处方1、2、3的粒度分别约为63nm、58nm、67nm，冻融破坏试验后乳剂的粒度仍然小于70nm，没有显著性变化。小鼠扭体刺激性试验结果表明，本制剂的刺激性远远低于市售制剂。

实施例32：***棕榈酸酯乳剂

***棕榈酸酯的现有制剂为乳剂，其商品名为利美达松，每安瓿1ml含有效成分4.0mg***棕榈酸酯，同样我们发现，该乳剂经受不了冻融破坏试验，采用“实施例19”的表15中处方2的乳化剂组成，油相为LCT/MCT(15/85，W/W)制备的乳剂(药物浓度为每1ml含有效成分4.0mg)，其粒度小于100nm，约为57nm，冻融破坏试验后乳剂的粒度为61nm，没有显著性变化。

实施例33：脂溶性维生素乳剂

脂溶性维生素是人体必需的营养素，临床危重病人常常需要补充，以维持生命，但脂溶性维生素不溶于水，口服给药的生物利用度又比较低，因而更适合于静脉注射。目前，已有两类市售产品脂溶性维生素注射液I和II(部颁标准二部，第五册，85页～90页)，其处方组成如下。

处方I：

维生素A         69mg(23万单位)

维生素D₂        1.0mg(4万单位)

维生素E         0.64g(7万单位)

维生素K₁        20mg

注射用大豆油    100g

注射用卵磷脂    12g

甘油            22.0g

注射用水        适量

全量            1000ml

处方II：

维生素A         99mg(33万单位)

维生素D₂        0.5mg(2万单位)

维生素E         0.91g(1000单位)

维生素K₁        15mg

注射用大豆油    100g

注射用卵磷脂    12g

甘油            22.0g

注射用水        适量

全量            1000ml

此处方的乳剂由华瑞制药有限公司生产，我们将其进行冻融试验发现该乳剂不能拮抗冻融破坏作用。采用“实施例19”的方法制备该乳剂，将处方中的乳化剂注射用卵磷脂换成“实施例19”的表15处方2的乳化剂(不额外加入VE)，结果所制备乳剂的平均体积粒度小于100nm，分别约为66nm、62nm，冻融破坏试验后乳剂的粒度分别约为70nm和68nm，没有显著性变化。将处方中的注射用大豆油换成LCT/MCT(15/85，W/W)组成的混合油，乳化剂为“实施例19”的表15处方2的乳化剂(不额外加入VE)，结果所制备乳剂的平均体积粒度小于100nm，分别约为58nm、60nm，冻融破坏试验后乳剂的粒度分别约为63nm和66nm，没有显著性变化。

实施例34：马蔺子素乳剂

马蔺子素包括甲素与乙素，其结构如下：

马蔺子甲素

马蔺子乙素

与辅酶Q₁₀的结构相似。

辅酶Q₁₀化学结构式

因此，我们参考“实施例9”制备可拮抗热与冻融破坏的马蔺子素乳剂(最终制剂中马蔺子素浓度为10mg/ml)，结果所制备乳剂的体积平均粒度约为66nm，灭菌与冻融后的体积平均粒度分别约为68nm与69nm。将处方中的HS15换成TPGS，其体积平均粒度约为53nm，灭菌与冻融后的体积平均粒度分别约为51nm与56nm。如果在处方中加入0.2％的DSPE-PEG2000，即处方组成：马蔺子素1.0g、卵磷脂1.0g、HS₁₅ 2.0g、泊洛沙姆188 1.0g、DSPE-PEG₂₀₀₀ 0.2g、注射用油10g(大豆油/中链油，15/85，w/w)、丙三醇2.4g、EDTA-2Na 0.05g，其余为注射用水，共100mL；则所制备乳剂的体积平均粒度约为56nm，灭菌与冻融后的体积平均粒度分别约为52nm与56nm。均具有良好的拮抗热与冻融破坏作用。同理，可以采用此处方工艺制备各自单体化合物的乳剂。

实施例35其它各种成分乳剂

采用“实施例19”的方法制备“鱼油(深海鱼油，富含DHA等多不饱和脂肪酸及其酯)”、“薏米仁油”、“莪术油”、“柴胡油”、“沙棘油”、“大蒜油”、“大蒜素”、“川芎油”、“当归油”、“辣椒精油”、“生姜油”、“芹菜籽油”、“鱼腥草油”、“月见草油”、“紫苏籽油”、“鲨肝醇”、“丹参酮II A”、“藁本内酯”、“恩替卡韦”、“胆维他(茴三硫)”、“马洛替酯”、“高三尖酯碱”、“去甲斑蝥酸”、“姜黄素”、“环扁桃酯”、“β-榄香烯”、“骨化三醇”、他汀类降脂药，如“洛伐他订”，“辛伐他汀”等、维生素E烟酸酯、棉子酚、冬凌草甲素、“非诺贝特”、“伊曲康唑”、“坎地沙坦”、“羟基喜树碱”、“喜树碱衍生物”、“非那雄胺”、“依托伯苷”、“人参皂甙”、“20(S)-原人参二醇”、“人参皂甙Re”、“人参皂甙Rb₁”、“人参皂甙Rg₂”、“20(R)-人参皂甙Rg3”、“20(S)-人参皂甙Rg₃”乳剂，其平均体积粒度均小于150nm，冻融破坏试验后乳剂的粒度没有显著性变化。

实施例36添加剂种类

在上述所有的处方中，我们尚可以加入油酸、亚油酸、亚麻油酸、硬脂酸、二十二碳六烯酸(DHA)、胆酸、去氧胆酸、生育酚、硫辛酸、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、填充氮气(N₂)、柠檬酸等辅助乳化剂、抗氧化剂、pH调节剂等各种添加剂，它们均不影响乳剂的抗热、冻融性能，也不影响乳剂粒度大小。

实施例37稳定性试验

(一)影响因素试验

参照《中国药典》2005年版二部附录药物稳定性指导原则设计，进行高温和光照因素的考察。将辅酶Q₁₀纳米乳剂，分别在40℃和光照(4500±500lux)条件下放置10天，于第5、10天取样，测定辅酶Q₁₀含量和乳剂粒径分布，结果见表18。

表18影响因素试验结果

条件	t(d)	外观	平均粒度(nm)	CV	含量(％)
						40℃光照	05105	黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂	71.366.664.968.5	0.3990.4070.4370.411	102.2101.2101.654.8

由以上数据可知，本品在40℃条件下保存，其含量和平均粒径无明显变化；在光照条件下，第5天含量已明显下降，故未进行10天光照试验，平均粒径没有明显变化，说明在光照条件下，乳剂表现出不稳定的趋势，提示本品应严格避光保存。

(二)加速试验及长期稳定性试验

1.加速试验

根据药典中药物稳定性指导原则，加速试验在25±2℃下进行，时间为6个月。

将辅酶Q₁₀乳剂分装于西林瓶中，充氮、密封，在25±2℃下避光放置6个月，与第1、2、3、6月取样，考察乳剂外观、粒度、含量变化，结果见表19。

表19加速试验结果

批次	时间(月)	外观	平均粒度(nm)	CV	含量(％)
						1	01236	黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂	69.068.767.969.570.5	0.3900.3880.3960.3980.415	100.099.8101.399.599.2
2	0	黄色乳剂	66.8	0.401	100.0

	1236	黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂	68.969.671.870.6	0.3890.4000.4130.421	99.5100.899.04100.1
						3	0123	黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂	71.368.967.070.8	0.3880.3810.3960.404	100.099.2101.5100.6
6	黄色乳剂	73.9	0.413	98.8

2.长期稳定性试验

根据药典中药物稳定性试验指导原则，长期试验在6±2℃下进行。

将辅酶Q₁₀乳剂分装于西林瓶中，充氮、密封，在6±2℃条件下，避光放置6个月，于第3、6月取样，考察乳剂外观、粒度、含量变化，结果见表20。

表20长期试验结果

批次	时间(月)	外观	粒度(nm)	CV	含量(％)
						1	036	黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂	69.070.267.5	0.3900.3960.405	100.0101.599.2
2	036	黄色乳剂黄色乳剂黄色乳剂	66.869.770.2	0.4010.3930.405	100.099.798.6
						3	03	黄色乳剂黄色乳剂	71.369.7	0.3880.392	100.099.2
6	黄色乳剂	66.6	0.399	99.8

结果表明，本品在25±2℃加速试验条件下和6±2℃长期稳定条件下避光放置6个月，制剂的外观、粒度与含量均没有明显变化。

综上所述，本发明具有如下6项优点：1、所制备乳剂能够抵抗热、冻融的破坏作用；2、较易生产平均体积粒度小于100nm的乳剂，对设备的要求不高；3、可以实现过滤除菌目的，无需采用高温即可获得无菌制剂；4、乳剂受pH值、处方中其它添加剂的影响很小，可以实现在低pH值下制备乳剂的目的，从而扩大了乳剂的应用范围；5、能够提高药物的化学稳定性；6、由于表面存在复合乳化层，可以大大降低药物的刺激性。所制备的乳剂可以注射、口服、外用给药。

Claims (12)

1、一种复合型乳化剂，其特征在于：该复合乳化剂可以由两种或者三种或者三种以上的乳化剂进行组合，组成复合型乳化剂的成分如下，其各成分在乳化剂中的浓度分别：0％～5％卵磷脂w/v、0％～5％泊洛沙姆w/v，0％～5％Solutol HS₁₅ w/v，0％～5％维生素E聚乙二醇琥珀酸酯w/v，0％～5％的DSPE-PEG w/v，其中PEG分子量为1000～10000，在进行组合时，可以是其中任意两种或者三种及三种以上的成分。

2、根据权利要求1所述的一种复合型乳化剂，其特征在于：所述的卵磷脂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂，Solutol HS₁₅为聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯，简称为HS₁₅、polyethylene glycol 660hydroxystearate，维生素E聚乙二醇琥珀酸酯为TPGS。

3、根据权利要求1所述的一种复合型乳化剂，其特征在于：  任意两种乳化剂组成的复合乳化剂应该以卵磷脂与含PEG链的乳化剂中一种进行组合，同时加入醇类或糖类冻融保护剂。

4、根据权利要求3所述的一种复合型乳化剂，其特征在于：含有PEG链的乳化剂为HS₁₅、TPGS、PEG分子量为1000～10000的DSPE-PEG；所说的冻融保护剂中醇类物质包括丙二醇、丙三醇、聚乙二醇，糖类物质包括麦芽糖、甘露醇6％与葡萄糖1.5％联用、甘露醇6％与葡萄糖3％联用、甘露醇6％与麦芽糖1.5％联用、甘露醇2％与葡萄糖4％和麦芽糖8％联用。

5、根据权利要求1所述的一种复合型乳化剂，其特征在于：任意三种或者三种以上乳化剂组成的复合乳化剂的组方按照100ml乳剂中的克数表示如下：卵磷脂1.0g、HS₁₅ 2.0g、泊洛沙姆188 1.0g或者卵磷脂1.0g、HS₁₅ 1.0g、泊洛沙姆188 1.0g、TPGS1.0g；或者HS₁₅ 1.0g、泊洛沙姆188 1.0g、TPGS1.0g或者卵磷脂1.0g、HS₁₅ 2.0g、泊洛沙姆188 1.0g、DSPE-PEG₂₀₀₀ 0.2g。

6、一种用权利要求1所述的复合型乳化剂制备的能抵抗热和冻融破坏的乳剂，其特征在于：组方包括复合型乳化剂与油相，，还含有适量的药用辅料和水，所述的油相为：C₆～C₂₈的植物油或动物油，包括有治疗活性的油脂性物质，及能溶解或者分散在油相中的药物，油用量按照w/v表示为1％～20％。

7、根据权利要求6所述的用复合型乳化剂制备的能抵抗热和冻融破坏的乳剂，其特征在于：油相包括经过结构改造和水解后的植物油、甘油三酸酯，椰子油、橄榄油、大豆油、红花油、辛癸酸甘油酯、油酸乙酯、亚油酸甘油酯、亚油酸乙酯、油酸甘油酯、椰子油C₈/C₁₀甘油单酯或双酯、椰子油C₈/C₁₀丙二醇双酯、椰子油C₈/C₁₀甘油三酯，还包括以此类油来溶解或者分散脂溶性化合物，辅酶Q10、葫芦素、葫芦素B、葫芦素E、葫芦素I、葫芦素Q、前列地尔、双异丙酚、维生素K1、***棕榈酸酯、丹参酮II A、丁苯酞、藁本内酯、马蔺子素、恩替卡韦、胆维他、马洛替酯、高三尖酯碱、去甲斑蝥酸、姜黄素、环扁桃酯、β-榄香烯、鲨肝醇、他汀类降脂药，“洛伐他订”，“辛伐他汀”；鸦胆子油、沙棘油、鱼油、薏米仁油、莪术油、大蒜油、大蒜素、川芎油、当归油、辣椒精油、生姜油、芹菜籽油、鱼腥草油、月见草油、紫苏籽油、五福心脑康、维生素E烟酸酯、棉子酚、冬凌草甲素、非诺贝特、伊曲康唑、坎地沙坦、羟基喜树碱、喜树碱衍生物、非那雄胺、依托伯苷、人参皂甙、20(S)-原人参二醇、人参皂甙Re、人参皂甙Rb₁、人参皂甙Rg₂、20(R)-人参皂甙Rg3、20(S)-人参皂甙Rg₃，或者以治疗用油溶解脂溶性化合物成为复方制剂。

8、根据权利要求7所述的用复合型乳化剂制备的能抵抗热和冻融破坏的乳剂，其特征在于：除了复合型乳化剂、油相外，可加入助乳化剂，油酸、亚油酸、亚麻油酸、硬脂酸、二十二碳六烯酸(DHA)、胆酸中的一种或几种混合物；等渗调节剂，甘油、1，2-丙二醇、葡萄糖、甘露醇中的一种或几种混合物；稳定剂，冻融保护剂，pH调节剂，pH范围是3～9，所得乳剂的体积平均粒度小于150nm。

9、根据权利要求7所述的用复合型乳化剂制备的能抵抗热和冻融破坏的乳剂，其特征在于：制备辅酶Q10乳剂的处方组成如下：辅酶Q₁₀1.0g、卵磷脂1.2g、TPGS 3.0g、油10g、丙二醇5.0g、EDTA-2Na0.05g，其余为水，共100mL。

10、根据权利要求7所述的用复合型乳化剂制备的能抵抗热和冻融破坏的乳剂，其特征在于：辅酶Q₁₀1.0g、大豆磷脂1.0g、HS₁₅ 2.0g、泊洛沙姆188 1.0g、油10g、丙二醇5.0g、EDTA-2Na 0.05g，其余为水，共100mL；或者葫芦素0.01 g、MCT 10g、维生素E 1.0g、大豆磷脂1.0g、HS₁₅ 2.0g、泊洛沙姆188 1.0g、丙三醇2.4g、EDTA-2Na0.05g，其余为水，共100mL。

11、根据权利要求8所述的用复合型乳化剂制备的能抵抗热和冻融破坏的乳剂，其特征在于：稳定剂为氮气、EDTA及其盐类、无水亚硫酸(氢)钠、焦亚硫酸钠、维生素C及其衍生物、二丁基羟基甲苯、α-生育酚、α-醋酸生育酚、氢醌中的一种或几种混合物；冻融保护剂为甘油、1，2-丙二醇、PEG-400、葡萄糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖中的一种或几种混合物；pH调节剂为盐酸、氢氧化钠、醋酸、醋酸钠、磷酸、磷酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠等中的一种或几种混合物。

12、一种如权利要求7所述的用复合型乳化剂制备的能抵抗热和冻融破坏的乳剂的制备方法：其特征在于：

1)配制罐中制备油相：

在配制罐中，氮气环境中将油及油溶性成分加热至30-90℃，然后加入乳化剂，30-90℃时搅拌至溶解；接着在搅拌中加入药物，溶解，成为油相，根据需要，可以加入适量的活性炭；

2)配制罐中制备水相：

将水和甘油或者水相中乳化剂在30-90℃下搅拌5min，使之完全混溶，根据需要，可以加入适量的活性炭；

3)氮气环境中，30-80℃，将水相加入油相中，搅拌5～30min，形成初乳；

4)调节pH值到3～9；

5)过均质仪，第一步调节匀化压力至4000～8000psi，第二步再调节至10000～30000psi，形成乳剂，过微孔滤膜，分装，灭菌，即得乳剂，其体积平均粒度小于150nm，所制备乳剂可以注射或者口服或者外用。