WO2015085666A1 - 一种伊立替康纳米脂束制剂及其制备方法 - Google Patents

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WO2015085666A1
WO2015085666A1 PCT/CN2014/070813 CN2014070813W WO2015085666A1 WO 2015085666 A1 WO2015085666 A1 WO 2015085666A1 CN 2014070813 W CN2014070813 W CN 2014070813W WO 2015085666 A1 WO2015085666 A1 WO 2015085666A1
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irinotecan
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lipid
weight
parts
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梁兴杰
赵元元
柳娟
李盛亮
薛向东
陈飞
金叔宾
张吉梅
李鸿基
甘雅玲
姜永刚
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国家纳米科学中心
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    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the invention relates to the technical field of pharmaceutical nano-lipid preparations, in particular to an irinotecan nano-lipid preparation and a preparation method thereof.
  • Irinotecan (CPT-11), approved by the FDA in 1998 for standard chemotherapy regimens, for the recurrence and exacerbation of metastatic colorectal cancer, was reapproved by the US FDA following pentafluorouracil (5-FU) for more than 40 years.
  • Chemotherapy for first-line treatment of metastatic colorectal cancer It is a derivative of camptothecin that selectively binds to the topoisomerase I and covalently binds to the Topo-DNA complex to form a stable Topo-drug-DNA complex, thereby inhibiting the DNA re-ligation step, resulting in a DNA strand. The break, the appearance of apoptosis.
  • CPT-11 has obvious toxicity, and it also affects normal cells while inhibiting cancer cells.
  • the dosage form currently available on the market is irinotecan hydrochloride intravenous infusion concentrate, the drug name is Campto. It is mainly used for the treatment of patients with advanced colorectal cancer. As a single drug, it is treated in patients who have failed treatment with 5-fluorouracil chemotherapy. At the same time, irinotecan is being used in a variety of clinical trials for gastric cancer and esophageal cancer.
  • the first method from the beginning to the application of the clinical cycle, consumes a lot of manpower and material resources; the second method greatly shortens the cycle of entering the clinic, saving manpower and material resources. Therefore, it is very important to use an appropriate drug carrier to achieve high efficiency, low toxicity, and reduce toxicity.
  • Nano-sized drugs can increase the targeting of chemotherapeutic drugs to a certain extent and greatly reduce the toxic side effects of chemotherapeutic drugs.
  • nano-drugs have unique advantages. Animal experiments have shown that nano-sized drugs, after intravenous injection, have higher concentrations of drugs in certain tumors than adjacent normal tissues. This provides a good way to expand the application of anti-tumor drugs.
  • the nano-lipid bundle has a particle size of about 100 nm, and the drug can be encapsulated inside the lipid bundle to form an ultra-micro spherical carrier.
  • Nanolipids have the following advantages: 1 Targeting: After intravenous administration, it is concentrated in the reticuloendothelial system, 80%-90% is concentrated in the liver and spleen; 2 sustained release: reducing renal excretion and metabolism in the body, prolonging the drug The action time; 3 reduce the toxicity of the drug: Because the nano drug is mainly concentrated in the rich organs of the endothelial reticuloendothelial cells such as the liver, and the concentration of the drug in the heart, kidney and bone marrow is low, thereby reducing the toxicity of the drug to other organs. Side effects; 4 improve the stability of the drug: the molecular layer of the lipid bundle protects the drug and improves stability.
  • irinotecan in a nano-sized lipid bundle is one of the important options for reducing its toxic side effects.
  • irinotecan nano-lipids there is no report or product application of irinotecan nano-lipids on the market, and its research and development is of great significance.
  • the stability of the lipid tract in the blood circulation is the key to the action of the drug carrier.
  • Liposomes composed of common phospholipids have a half-life of only ten minutes in vivo. There are many reasons for this: High-density lipoprotein in the blood is the main component that destroys liposomes; liposomes are easily penetrated and lysed by activation of the complement system; phospholipases can degrade phospholipids; serum albumin can combine with phospholipids to form complexes, thereby Reduce the stability of phospholipid composition nanoassemblies. It has been found that surface polyethylene glycol (PEG) can prolong the in vivo cycle time of nanoassemblies.
  • PEG surface polyethylene glycol
  • PEGylation can achieve steric hindrance and increase the hydrophilicity of the membrane surface.
  • PEG-surfaced nanolipids can combine long-circulating, invisible, and steric stabilization to reduce macrophage swallowing It plays an important role in phagocytosis, improving drug targeting, and hindering the binding of blood protein components to phospholipids. Therefore, the traditional phospholipid and FDA-approved new polyethylene glycol-dodecyl stearate (Solutol HS15) can achieve the encapsulation and nanocrystallization of irinotecan, which is beneficial to meet the various needs of clinical applications. Cancer patients are of great significance.
  • the object of the present invention is to provide an irinotecan nano-lipid preparation and a preparation method thereof, wherein the irinotecan nano-fat bundle preparation has a uniform particle size, and the lipid bundle preparation can reduce the toxicity of irinotecan and has a long circulation effect. It can enhance tumor targeted enrichment and increase patient compliance; the preparation method is simple in process, highly reproducible and industrially productive.
  • the present invention provides an irinotecan nanolipid preparation comprising phospholipid, polyethylene glycol-dodecahydroxystearate, glycerin, ethanol and irinotecan, and an aqueous solution for injection.
  • the aqueous solution for injection is a solvent which can be used for injection, which is a solute or a solute containing water, and is not particularly limited.
  • the aqueous injection solution is selected from one or more of physiological saline, glucose injection, and water for injection.
  • the preparation comprises 4 to 8 parts by weight of phospholipid, 10 to 20 parts by weight of polyethylene glycol-dodecyl stearate, 5 to 15 parts by weight of glycerin, 10 to 20 parts by weight of ethanol and 1 ⁇ 4 parts by weight of irinotecan.
  • the content of the phospholipid in the preparation may be 5 parts by weight, 6 parts by weight or 7 parts by weight; the content of the polyethylene glycol-dodecyl stearate may be 12 parts by weight, 14 parts by weight, 16 Parts by weight or 18 parts by weight; glycerin may be 7 parts by weight, 9 parts by weight, 11 parts by weight or 13 parts by weight; the content of ethanol may be 12 parts by weight, 14 parts by weight, 16 parts by weight or 18 parts by weight; Lit The content may be 1.5 parts by weight, 2 parts by weight, 3 parts by weight or 3.5 parts by weight.
  • the volume of the aqueous solution for injection is 5-100 times, for example, 6 times the total volume of the phospholipid, polyethylene glycol-dodecyl stearate, glycerin, ethanol, and irinotecan. 8, 8, 10, 15, 20, 80 or 90, preferably 5 to 80, more preferably 10 to 20.
  • active targeting materials can be added to the formulation.
  • the active targeting material is capable of enhancing the enrichment of the formulation in a tumor.
  • the active targeting material is X-polyethylene glycol-distearoylphosphatidylethanolamine (X-PEG-DSPE), wherein X may be folic acid, pentapeptide CRGDK (wherein C represents cysteine, R represents arginine, G represents glycine, D represents aspartic acid, K represents lysine, or one or more of cholic acid, PEG represents polyethylene glycol, and DSPE represents distearoylphosphatidylethanolamine .
  • X-PEG-DSPE X-polyethylene glycol-distearoylphosphatidylethanolamine
  • the active targeting material X-PEG-DSPE is contained in the preparation in an amount of 0.01 to 2 parts by weight, for example, 0.02 parts by weight, 0.05 parts by weight, 0.1 parts by weight, 0.4 parts by weight, 0.5 parts by weight, 0.8 parts by weight, 1.2 parts by weight, 1.5 parts by weight or 1.8 parts by weight, more preferably 0.1 to 1 part by weight, most preferably 0.1 to 0.4 parts by weight.
  • the present invention shows a typical formulation containing an active targeting material as follows: 4 to 8 parts by weight of phospholipid, 10 to 20 parts by weight of polyethylene glycol-dodecyl stearate, 5 to 15 parts by weight of glycerol, 10 to 20 parts by weight of ethanol, 1 to 4 parts by weight of irinotecan and 0.1 to 0.4 parts by weight of active targeting material X-PEG-DSPE, wherein X represents folic acid, pentapeptide CRGDK or cholic acid; and equivalent to the total volume of the above raw materials 10-20 times the aqueous solvent for injection.
  • an antifreeze and/or a pH adjuster may be added to the formulation, wherein
  • the antifreeze agent is selected from the group consisting of propylene glycol and sorbitol, etc.
  • the pH adjuster is selected from the group consisting of citric acid, lactic acid, Na 2 CO 3 , NaOH, N C1, NaHC 0 3 and Ca(OH) 2 , and the like.
  • the irinotecan nanolipid preparation can be administered by a conventional administration such as intravenous injection, intramuscular injection or subcutaneous injection.
  • the present invention provides a method of preparing the irinotecan nanolipid preparation of the first aspect, comprising:
  • the present invention utilizes the micelle function of polyethylene glycol-dodecyl stearate and the solubilizing function of irinotecan, and the size adjustment of phospholipids to polyethylene glycol-dodecyl stearate micelles. Function, after the self-emulsification process, the preparation of irinotecan nanolipids is achieved.
  • the method for preparing the clear transparent solution in the step (1) can be various, and the phospholipid, the polyethylene glycol-dodecyl stearate, the glycerin, the ethanol and the y Liticon is mixed together and a clear, clear solution is obtained by external force such as magnetic stirring, mechanical agitation, ultrasonication, heating, homogenizer homogenization or a combination thereof.
  • the ingredients in the above formula may be added to the container at one time for mixing treatment, or a part of the ingredients in the formula may be added first, and after stirring, another portion is added and mixed to obtain a clear transparent solution.
  • the preferred two methods of formulating a clear, transparent solution of the invention are as follows:
  • the first method is specifically:
  • the second method is specifically:
  • the clear transparent solution is a general concept, that is, the presence of invisible particles or precipitates in the naked eye, under the laser irradiation, there is no occurrence of Tyndall phenomenon, and the ultraviolet absorption spectrum is not caused by scattering of particles. extinction.
  • the clear transparent solution prepared by the present invention i.e., the irinotecan nanolipid preparation precursor, can be sealed and stored under nitrogen protection conditions. If the formulated clear transparent solution is self-emulsified immediately, it can be stored unsealed.
  • the self-emulsification process of the step (2) can be performed by an external force such as gentle or vigorous shock as needed.
  • the aqueous solvent for injection is a solvent which can be used for injection, which is a solute containing or containing no solute, and is not particularly limited.
  • the aqueous injection solution is selected from one or more of physiological saline, glucose injection, and water for injection.
  • the clear transparent solution contains 4 to 8 parts by weight of phospholipid, 10 to 20 parts by weight of polyethylene glycol-dodecyl stearate, 5 to 15 parts by weight of glycerin, and 10 to 20 parts by weight of ethanol. And 1 to 4 parts by weight of irinotecan.
  • the content of the phospholipid in the clear transparent solution may be 5 parts by weight, 6 parts by weight or 7 parts by weight; the content of polyethylene glycol-dodecyl stearate may be 12 parts by weight, 14 parts by weight, 16 parts by weight or 18 parts by weight; the content of glycerin may be 7 parts by weight, 9 parts by weight, 11 Parts by weight or 13 parts by weight; the content of ethanol may be 12 parts by weight, 14 parts by weight, 16 parts by weight or 18 parts by weight; the content of irinotecan may be 1.5 parts by weight, 2 parts by weight, 3 parts by weight or 3.5 parts by weight. .
  • the clear transparent solution further contains 0.01 to 2 parts by weight of the active targeting material X-PEG-DSPE, wherein X represents one or more of folic acid, pentapeptide CRGDK or cholic acid.
  • the clear transparent solution contains 4 to 8 parts by weight of phospholipid, 10 to 20 parts by weight of polyethylene glycol-dodecyl stearate, 5 to 15 parts by weight of glycerin, and 10 to 20 parts by weight of ethanol. 1 to 4 parts by weight of irinotecan and 0.1 to 0.4 parts by weight of the active targeting material X-PEG-DSPE, wherein X represents folic acid, pentapeptide CRGDK or cholic acid.
  • the content of the phospholipid in the clear transparent solution may be 5 parts by weight, 6 parts by weight or 7 parts by weight; the content of the polyethylene glycol-dodecyl stearate may be 12 parts by weight and 14 parts by weight. , 16 parts by weight or 18 parts by weight; the content of glycerin may be 7 parts by weight, 9 parts by weight, 11 parts by weight or 13 parts by weight; the content of ethanol may be 12 parts by weight, 14 parts by weight, 16 parts by weight or 18 parts by weight.
  • the content of irinotecan may be 1.5 parts by weight, 2 parts by weight, 3 parts by weight or 3.5 parts by weight; the active targeting material X-PEG-DSPE may be 0.02 parts by weight, 0.05 parts by weight, 0.1 parts by weight, 0.4. Parts by weight, 0.5 parts by weight, 0.8 parts by weight, 1.2 parts by weight, 1.5 parts by weight or 1.8 parts by weight.
  • the "parts by weight” of the present invention generally means the weight ratio of other raw materials other than the aqueous solvent for injection.
  • optional means “with or without” the object to which it refers, such as “optional active targeting material” means “with or without active targeting material”, “anything”
  • optional active targeting material means “with or without active targeting material”
  • optional active targeting material means "with or without active targeting material”
  • anything The selected antifreeze and/or pH adjusting agent “includes” with or without antifreeze and/or pH adjusting agent.
  • the volume of the aqueous solution for injection is the clear transparent solution. 5-100 times, for example, 6 times, 8 times, 10 times, 15 times, 20 times, 30 times, 50 times, 70 times, 80 times or 90 times, preferably 5-80 times, more preferably 10-20 times.
  • the temperature of the aqueous solvent for injection can be determined empirically by those skilled in the art, and is generally room temperature.
  • the temperature of the aqueous solution for injection used in the present invention may be any temperature in the range of 0-80 ° C, preferably 0-40. Any temperature in the °C range.
  • the present invention provides a irinotecan nanolipid preparation prepared according to the method of the second aspect, which is administered by intravenous injection, intramuscular injection or subcutaneous injection.
  • the irinotecan nano-lipid preparation prepared by the invention can be further processed by lyophilization and other reprocessing processes, and does not affect the redispersion and use of the nano-lipid drug, and the process involved can be industrialized. And directly applied to the development of large-scale drug production.
  • the beneficial effects of the present invention are as follows:
  • the present invention utilizes the micelle function of polyethylene glycol-dodecyl stearate and the solubilizing function for irinotecan, and the phospholipid to polyethylene glycol-dodecyl stearate
  • the size adjustment of the acid ester micelles combined with a simple preparation process of the lipid bundle precursor, prepares the irinotecan nano-lipid preparation precursor (ie, a clear transparent solution); after the self-emulsification process, the irinotecan nano-lipid is realized.
  • the preparation of the irinotecan nanolipid bundle prepared by the invention has uniform particle size distribution, and the lipid bundle preparation can reduce the toxicity of irinotecan, has a long circulation effect, can enhance tumor targeted enrichment and increase patient compliance;
  • the invention fills the blank of irinotecan nano-lipid drug, and the developed formula has simple process and high repeatability, and can be directly applied to the industrial production of irinotecan nano drug.
  • the addition of a primary targeting material to the formulation of the present invention can significantly enhance its enrichment in tumors.
  • Fig. 1 is a schematic view showing the preparation of the irinotecan nanolipid precursor of the present invention and the process of obtaining the irinotecan nanolipid preparation after the self-emulsification process.
  • Example 2 is an optical photograph showing the precursor of the irinotecan nanolipid preparation obtained in Example 1 of the present invention, showing It is a clear transparent solution.
  • Fig. 3 is an optical photograph of the irinotecan nanolipid preparation obtained after self-emulsification of physiological saline, water for injection and glucose injection from left to right, showing that it is an emulsion.
  • Fig. 4 is a dynamic light scattering result of the irinotecan nanolipid preparation obtained by the self-emulsification process of physiological saline in Example 1 of the present invention, showing that the particle diameter is uniform.
  • Fig. 5 is a transmission electron micrograph of the irinotecan nanolipid preparation obtained after the self-emulsification of physiological saline in Example 1 of the present invention.
  • Fig. 6 is a dynamic light scattering result of the irinotecan nanolipid preparation obtained by self-emulsification of water for injection in Example 9 of the present invention, showing that the particle diameter is uniform.
  • Fig. 7 is a transmission electron micrograph of the irinotecan nanolipid preparation obtained by freeze-drying and then diluting the water after the self-emulsification process of Example 9 of the present invention.
  • Fig. 8 is a dynamic light scattering result of the irinotecan nano-lipid preparation obtained by the self-emulsification process of the glucose injection solution according to the embodiment 10 of the present invention, showing that the particle diameter is uniform.
  • Fig. 9 is a transmission electron micrograph of an irinotecan nanolipid preparation obtained by self-emulsification of a glucose injection solution according to Example 10 of the present invention.
  • Figure 10 shows the aggregation of surface CRGDK-targeted lipid tract drugs at the tumor site.
  • Small animal imaging shows that the lipid tract drug (prepared in Example 1) has obvious aggregation at the tumor site compared with the free drug (fluorescence molecular simulation (top)). (Intermediate), the comparison shows that the CRGDK-targeted lipid tract drug (prepared in Example 17) has a more pronounced tumor enrichment effect (bottom).
  • Figure 11 is a tumor pharmacodynamic study of a surface folate-targeted lipid tract drug, and optical photographs show that the folic acid-targeted liposome drug (right) treated group of the tumor of Example 18 after 30 days of treatment and the Example 1
  • the prepared lipid tract drug group (middle) was the smallest compared with the free drug group (left), indicating that folic acid targeting can enhance the therapeutic effect of lipid tract drugs because folate-targeted lipid tract drugs have more enhanced tumor enrichment. Effect.
  • the process of preparing the irinotecan nano-lipid preparation of the present invention is shown in Figure 1.
  • the irinotecan is mixed with phospholipid, polyethylene glycol-dodecyl stearate, glycerin and ethanol (auxiliary).
  • the irinotecan nano-lipid drug precursor is prepared by self-emulsification by adding an aqueous solvent for injection to obtain a irinotecan nano-lipid preparation.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step is diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain Irinotecan nano preparations.
  • the left tube in Figure 3 shows that the irinotecan lipid bundle formulation is in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle preparation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, England.
  • the irinotecan lipid bundle preparation has an average particle diameter of 103.3 nm.
  • Figure 4 shows that the irinotecan lipid bundle formulation has a uniform particle size distribution.
  • a transmission electron micrograph of the irinotecan lipid bundle preparation prepared in this example is shown in Fig. 5, and shows that the prepared irinotecan lipid bundle preparation is a nanoparticle having a uniform particle diameter.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle preparation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, England. The result is similar to Figure 4.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle formulation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, UK. The result is similar to Figure 4.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle formulation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, UK. The result is similar to Figure 4.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan nanoformulation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, UK. The result is similar to Figure 4.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step is diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain Irinotecan lipid bundle preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle preparation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, England. The result is similar to Figure 4.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle formulation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, UK. The result is similar to Figure 4.
  • irinotecan lipid bundle preparation The irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan lipid bundle preparation. The results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan nanoformulation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, UK.
  • the average particle size of the irinotecan nanoformulation was 105.9 nm. The result is similar to Figure 4.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of water for injection to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the middle tube in Figure 3 shows that the irinotecan lipid bundle formulation is in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle preparation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, England.
  • the irinotecan lipid bundle preparation had an average particle diameter of 107.0 nm.
  • Figure 6 shows that the irinotecan lipid bundle formulation has a uniform particle size distribution.
  • a transmission electron micrograph of the irinotecan lipid bundle preparation prepared in this example is shown in Fig. 7, and shows that the prepared irinotecan lipid bundle preparation is a nanoparticle having a uniform particle diameter.
  • Example 10 I Preparation of irinotecan lipid bundle preparation precursor
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of glucose injection to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the right tube in Figure 3 shows that the irinotecan lipid bundle formulation is in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan nanoformulation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, UK.
  • Figure 8 shows: The irinotecan lipid bundle formulation has a uniform particle size distribution.
  • a transmission electron micrograph of the irinotecan lipid bundle preparation prepared in this example is shown in Fig. 9, and shows that the prepared irinotecan lipid bundle preparation is a nanoparticle having a uniform particle diameter.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 10 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle preparation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, England. The result is similar to Figure 4.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 80 volumes of water for injection to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the results were similar to the middle tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle preparation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle preparation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, England. The result is similar to Figure 6.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 5 volumes of glucose injection to obtain a irinotecan lipid bundle preparation.
  • the results were similar to the right tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle preparation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, England. The result is similar to Figure 8.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan nano preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle preparation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, England.
  • the irinotecan lipid bundle preparation had an average particle diameter of 108 nm.
  • the irinotecan lipid bundle preparation has a uniform particle size distribution.
  • the results of transmission electron micrographs of the irinotecan lipid bundle preparation prepared in this example are similar to those of FIG.
  • the prepared irinotecan drug lipid bundle preparation has a uniform particle size.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan nano preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the particle size of the irinotecan lipid bundle preparation was measured using a ZS90 instrument from Malven Instruments, England.
  • the transmission electron micrograph of the irinotecan lipid bundle preparation prepared in this example is similar to that shown in Fig. 5, and the prepared irinotecan lipid bundle preparation is a drug particle having a uniform particle diameter.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan nano preparation.
  • the results were similar to the left tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the TEM results of the irinotecan lipid bundle preparation prepared in this example are similar to those of Fig. 5, and are all nanoparticles having a uniform particle size.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step was diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain a irinotecan nano preparation.
  • the results were similar to the right tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • the irinotecan nanolipid bundle without the CRGDK-PEG-DSPE targeting group was prepared according to the method of Example 1 (the formula does not contain CRGDK-PEG-DSPE), and the DiR dye ethanol solution was added to the formulation, and the volume was 20 times.
  • the physiological saline was diluted to obtain irinotecan nanolipid injection B.
  • the irinotecan nanolipid bundle with CRGDK-PEG-DSPE targeting group prepared according to the method of Example 17 was added with DiR dye ethanol solution and diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain irinotecan nanolipid. Bundle injection C.
  • the irinotecan physiological saline solution is Injection A, to which an ethanol solution of DiR dye is added.
  • concentrations of the DiR dyes in the above injections A, B and C were controlled to be the same.
  • FIG. 10 shows the aggregation of the surface CRGDK-PEG-DSPE targeting lipid tract drug at the tumor site.
  • Small animal imaging showed that the lipid tract drug (injection B) had significant aggregation at the tumor site compared with the free drug (injection A).
  • the comparison shows that the CRGDK-PEG-DSPE targeting lipid tract drug (injection C) has a more pronounced tumor enrichment effect (bottom).
  • Figure 10 illustrates: CRGDK-PEG-DSPE-targeted irinotecan liposome drug has a more pronounced aggregation at the tumor site, which can provide better therapeutic results.
  • the irinotecan lipid bundle preparation precursor prepared in the first step is diluted with 20 volumes of physiological saline to obtain Irinotecan nano preparations.
  • the results were similar to the right tube in Figure 3, and the irinotecan lipid bundle formulation was in the form of an emulsion.
  • FIG. 11 shows a tumor pharmacodynamic study of a surface folate-PEG-DSPE targeting lipid tract drug, and an optical photograph showing the folate-PEG-DSPE targeted lipid tract drug prepared in Example 18 after 30 days of treatment ( Right) The tumor in the treatment group was the smallest compared with the liposome drug group (middle) and the free drug group (left) prepared in Example 1, indicating that folic acid-PEG-DSPE targeting can enhance the therapeutic effect of the lipid tract drug because Folic acid-PEG-DSPE targeting lipid tract drugs have a more enhanced tumor enrichment effect.
  • Figure 11 shows that irinotecan liposome with folate-PEG-DSPE targeting function can better inhibit tumor growth after the same treatment, which has better therapeutic effect.
  • the present invention provides an irinotecan nanolipid preparation prepared by the above examples, which, as a lipid bundle preparation, can reduce the toxicity of irinotecan, has a long circulation effect, can enhance tumor targeted enrichment and increase patient compliance.

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Abstract

一种伊立替康纳米脂束制剂及其制备方法，所述伊立替康纳米脂束制剂包含磷脂、聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、甘油、乙醇和伊立替康，及注射用水性溶剂，所述制备方法包括将磷脂、聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、甘油、乙醇和伊立替康混合，配成澄清透明溶液，再用注射用水性溶剂稀释所述澄清透明溶液，自乳化得到所述伊立替康纳米脂束制剂。

Description

说 明 书 一种伊立替康纳米脂束制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及药物纳米脂束制剂技术领域， 尤其涉及一种伊立替康纳米脂束 制剂及其制备方法。
背景技术
伊立替康 （Irinotecan, CPT-11 ), 1998年获 FDA批准用于标准化疗方案， 治疗转移性结肠直肠癌的复发和恶化， 是 40 多年来美国 FDA继五氟尿嘧啶 (5-FU) 以后再次批准用于转移性结直肠癌一线治疗的化疗药。 它是喜树碱的 衍生物， 选择性地结合抑制拓扑异构酶 I， 与 Topo-DNA复合物共价结合形成稳 定 Topo-药物 -DNA复合物，从而抑制 DNA重连步骤，以致导致 DNA链的断裂， 出现细胞凋亡。对拓扑异构酶 I高表达的小细胞肺癌、百小细胞肺癌、子***、 卵巢癌、 结直肠癌等具有更高的疗效。 同其它有效抗肿瘤药物一样， CPT-11 具 有明显的毒性， 在抑制癌细胞的同时， 对正常细胞亦有影响。 目前市场上提供 的剂型为盐酸伊立替康静脉滴注射浓缩液， 药物名称为开普拓（Campto)。 主要 用于晚期大肠癌患者的治疗， 作为单一用药， 治疗经含 5-氟尿嘧啶化疗方案治 疗失败的患者。 同时， 伊立替康应用于胃癌和食管癌的多种临床试验正在进行 中， 就已得出的阶段性观察结果来看， 有很好的临床应用前景， 值得密切关注。 但其静脉滴注浓缩液给药存在着严重的毒副作用， 如： 迟发性腹泻、 恶心与呕 吐、 中性粒细胞减少症合并发热、 外周血小板减少症、 结膜炎、 鼻炎、 低血压、 血管舒张、 出汗、 寒战、 全身不适、 头晕、 视力障碍、 瞳孔缩小、 流泪、 呼吸 困难、 肌肉收缩、 痉挛及感觉异常等。 为了降低药物骨髓抑制、 胃肠道反应（严 重腹宵） 以及肝肾毒性等毒副作用， 研究人员从两方面入手： 一是合成药物的 衍生物； 二是建立新的给药途径。 第一种方法从开始到应用于临床周期长， 耗 费大量的人力、 物力； 第二种方法则大大缩短了进入临床的周期， 节省了人力、 物力。 因此选用适当的药物载体来达到高效低毒即降低毒性的目的就显得十分 重要。
纳米尺寸的药物可在一定程度上提高化疗药物的靶向性并大幅度地降低化 疗药物的毒副作用， 与目前的其它抗肿瘤药物剂型相比， 纳米药物具有独特的 优点。 动物实验表明， 纳米尺寸的药物， 经静脉注射后在某些肿瘤中的药物浓 度高于邻近正常组织。 这为扩大抗肿瘤药物的应用提供了一条良好的途径。 纳 米脂束， 粒径在 lOOmn左右， 可以将药物包封于脂束内部形成超微型球状载体。 纳米脂束具有以下优点： ①靶向性： 静脉注射给药后集中于网状内皮***， 80%-90%集中于肝、 脾； ②缓释性： 减少肾***和体内的代谢， 延长药物的作 用时间； ③降低药物的毒性： 由于纳米药物主要集中于内皮网状内皮细胞丰富 的器官如肝脏中， 而在心脏、 肾、 骨髓的药物的浓度低， 因此减少了药物对其 它器官的毒副作用； ④提高药物的稳定性： 脂束的分子层保护药物， 提高稳定 性。 将伊立替康包载于纳米尺寸的脂束是降低其毒副作用重要选择之一。 目前 市场上没有伊立替康纳米脂束的报道和产品应用， 其研究开发具有重要意义。
脂束在血液循环中的稳定性是发挥药物载体作用的关键。 普通磷脂组成的 脂质体在体内的半衰期仅为十几分钟。 原因很多： 血液中高密度脂蛋白是破坏 脂质体的主要成分； 由于能激活补体***， 脂质体易于被渗透和裂解； 磷脂酶 能够降解磷脂； 血清白蛋白能够与磷脂结合形成复合物， 从而降低磷脂组成纳 米组装体的稳定性。研究发现表面聚乙二醇（PEG)化能延长纳米组装体的体内 循环时间。 原因在于 PEG化能够实现立体阻碍和提高膜表面的亲水性。 PEG表 面化的纳米脂束能够兼具长循环、 隐形和立体稳定的特点， 对减少巨唾细胞吞 噬、 提高药物靶向性、 阻碍血液蛋白成分与磷脂的结合等具有重要的作用。 因 此， 借助传统的磷脂和 FDA批准的新型聚乙二醇 -十二羟基硬脂酸酯 （Solutol HS15 ) 实现伊立替康的包载和纳米化， 对于满足临床应用的各种需求， 造福于 广大的癌症患者具有重大意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种伊立替康纳米脂束制剂及其制备方法， 所述伊 立替康纳米脂束制剂粒径均匀， 作为脂束制剂能降低伊立替康的毒性、 具有长 循环效果、 能增强肿瘤靶向富集作用和增加病人顺应性； 所述制备方法工艺简 单、 具高重复性且可工业化生产。
为实现本发明的目的， 采用以下技术方案：
在第一方面， 本发明提供一种伊立替康纳米脂束制剂， 包含磷脂、 聚乙二 醇-十二羟基硬脂酸酯、 甘油、 乙醇和伊立替康， 及注射用水性溶剂。
本发明的伊立替康纳米脂束制剂中， 注射用水性溶剂是主要基质为水的含 溶质或不含溶质的能够用于注射的溶剂， 不作特别地限定。
作为本发明的优选， 所述注射用水性溶剂选自生理盐水、 葡萄糖注射液和 注射用水中的一种或多种。
作为本发明的优选， 所述制剂包含 4〜8重量份磷脂、 10〜20重量份聚乙二 醇-十二羟基硬脂酸酯、 5〜15重量份甘油、 10〜20重量份乙醇和 1〜4重量份伊立 替康。
具体实施中， 所述制剂中磷脂的含量可以是 5重量份、 6重量份或 7重量 份； 聚乙二醇 -十二羟基硬脂酸酯的含量可以是 12重量份、 14重量份、 16重量 份或 18重量份； 甘油的含量可以是 7重量份、 9重量份、 11重量份或 13重量 份; 乙醇的含量可以是 12重量份、 14重量份、 16重量份或 18重量份； 伊立替 康的含量可以是 1.5重量份、 2重量份、 3重量份或 3.5重量份。
作为本发明的优选， 所述注射用水性溶剂的体积是所述磷脂、 聚乙二醇-十 二羟基硬脂酸酯、 甘油、 乙醇和伊立替康总体积的 5-100倍， 例如 6倍、 8倍、 10倍、 15倍、 20倍、 30倍、 50倍、 70倍、 80倍或 90倍， 优选 5-80倍， 更优 选 10-20倍。
作为本发明的优选， 所述制剂配方中可增加主动靶向材料。 所述主动靶向 材料能够增强所述制剂在肿瘤中的富集作用。 优选地， 所述主动靶向材料为 X- 聚乙二醇 -二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（X-PEG-DSPE) , 其中 X可以是叶酸、 五肽 CRGDK (其中 C表示半胱氨酸、 R表示精氨酸、 G表示甘氨酸、 D表示天冬氨 酸、 K表示赖氨酸）或胆酸中的一种或多种， PEG表示聚乙二醇， DSPE表示二 硬脂酰基磷脂酰乙醇胺。 需要说明的是： 所述主动靶向材料并不局限于上述几 种， 任何能够增强所述制剂在肿瘤中的富集作用并且药学上可以接受的主动靶 向材料均可用于本发明。
优选地， 所述制剂中主动靶向材料 X-PEG-DSPE的含量为 0.01-2重量份， 例如 0.02重量份、 0.05重量份、 0.1重量份、 0.4重量份、 0.5重量份、 0.8重量 份、 1.2重量份、 1.5重量份或 1.8重量份， 更优选 0.1-1重量份， 最优选 0.1-0.4 重量份。
本发明示出一个典型的含有主动靶向材料的制剂例子如下： 含 4〜8重量份 磷脂、 10〜20重量份聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 5〜15重量份甘油、 10〜20重 量份乙醇、 1〜4重量份伊立替康和 0.1-0.4重量份主动靶向材料 X-PEG-DSPE, 其中 X表示叶酸、 五肽 CRGDK或胆酸； 以及相当于上述原料总体积的 10-20 倍的注射用水性溶剂。
作为本发明的优选， 所述制剂配方中可增加防冻剂和 /或 pH调节剂， 其中 所述防冻剂选自丙二醇和山梨糖醇等； 所述 pH 调节剂选自柠檬酸、 乳酸、 Na2C03、 NaOH、 N C1、 NaHC03和 Ca(OH)2等。
作为本发明的优选， 所述伊利替康纳米脂束制剂可通过静脉注射、 肌肉注 射或皮下注射等常规给药方式给药。
在第二方面， 本发明提供一种制备如第一方面所述的伊立替康纳米脂束制 剂的方法， 包括：
( 1 )将磷脂、 聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 甘油、 乙醇和伊立替康以及任 选的主动靶向材料、 任选的防冻剂和 /或 pH调节剂混合， 配成澄清透明溶液；
(2)用注射用水性溶剂稀释所述澄清透明溶液， 自乳化得到所述伊立替康 纳米脂束制剂。
本发明利用聚乙二醇 -十二羟基硬脂酸酯的成胶束功能和对伊立替康的增溶 功能， 以及磷脂对聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯胶束的尺寸调节作用， 经自乳化 过程后， 实现伊立替康纳米脂束的制备。
本发明制备伊立替康纳米脂束制剂的方法中， 步骤 （1 )配制澄清透明溶液 的方法有多种， 可以将磷脂、 聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 甘油、 乙醇和伊立 替康混合在一起， 借助磁力搅拌、 机械搅拌、 超声、 加热、 匀浆器匀浆或其组 合等外力作用得到澄清透明溶液。 具体实施中， 可以将上述配方中的成分一次 性全部加入容器中进行混合处理， 也可以先加一部分配方中的物质， 搅拌均匀 后， 再加另一部分并混合处理得到澄清透明溶液。 本发明优选的两种配制澄清 透明溶液的方法如下：
第一种方法具体为：
( la) 将磷脂与乙醇混合溶解， 配成第一溶液；
( lb) 将聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 甘油、 乙醇和伊立替康以及任选的 主动靶向材料、 任选的防冻剂和 /或 pH调节剂混合溶解， 配成第二溶液；
( l c ) 将所述第一溶液与所述第二溶液混合， 搅拌混匀得到所述澄清透明 溶液。
第二种方法具体为：
将磷脂、 聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 甘油、 乙醇和伊立替康以及任选的 主动靶向材料、 任选的防冻剂和 /或 pH调节剂混合， 搅拌混匀配成澄清透明溶 液。
本发明中， 澄清透明溶液是一般意义上的概念， 即肉眼不可见颗粒物或析 出物的存在， 激光照射下， 没有丁达尔现象的发生， 紫外吸收光谱中不会有源 于颗粒散射所导致的消光。
本发明配制的澄清透明溶液即伊立替康纳米脂束制剂前体， 可以在氮气保 护条件下密封保存。 如果配制的澄清透明溶液马上进行自乳化也可以不密封保 存。
本发明中， 步骤 （2) 的自乳化过程， 根据需要可借助外力， 比如轻柔或剧 烈震荡均可。
本发明制备伊立替康纳米脂束制剂的方法中， 注射用水性溶剂是主要基质 为水的含溶质或不含溶质的能够用于注射的溶剂， 不作特别地限定。
作为本发明的优选， 所述注射用水性溶剂选自生理盐水、 葡萄糖注射液和 注射用水中的一种或多种。
作为本发明的优选， 所述澄清透明溶液含 4〜8重量份磷脂、 10〜20重量份 聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 5〜15重量份甘油、 10〜20重量份乙醇和 1〜4重量 份伊立替康。
具体实施中， 所述澄清透明溶液中磷脂的含量可以是 5重量份、 6重量份或 7重量份； 聚乙二醇 -十二羟基硬脂酸酯的含量可以是 12重量份、 14重量份、 16 重量份或 18重量份； 甘油的含量可以是 7重量份、 9重量份、 11重量份或 13 重量份； 乙醇的含量可以是 12重量份、 14重量份、 16重量份或 18重量份； 伊 立替康的含量可以是 1.5重量份、 2重量份、 3重量份或 3.5重量份。
作为本发明的优选， 所述澄清透明溶液还含 0.01-2 重量份主动靶向材料 X-PEG-DSPE, 其中 X表示叶酸、 五肽 CRGDK或胆酸中的一种或多种。
作为本发明的优选， 所述澄清透明溶液含 4〜8重量份磷脂、 10〜20重量份 聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 5〜15重量份甘油、 10〜20重量份乙醇、 1〜4重量 份伊立替康和 0.1-0.4重量份主动靶向材料 X-PEG-DSPE, 其中 X表示叶酸、 五 肽 CRGDK或胆酸。
具体实施中， 所述澄清透明溶液中磷脂的含量可以是 5重量份、 6重量份或 7重量份； 聚乙二醇 -十二羟基硬脂酸酯的含量可以是 12重量份、 14重量份、 16 重量份或 18重量份； 甘油的含量可以是 7重量份、 9重量份、 11重量份或 13 重量份； 乙醇的含量可以是 12重量份、 14重量份、 16重量份或 18重量份； 伊 立替康的含量可以是 1.5重量份、 2重量份、 3重量份或 3.5重量份； 主动靶向 材料 X-PEG-DSPE的含量可以是 0.02重量份、 0.05重量份、 0.1重量份、 0.4重 量份、 0.5重量份、 0.8重量份、 1.2重量份、 1.5重量份或 1.8重量份。
需要说明，本发明述及"重量份 "的地方一般是指除注射用水性溶剂以外的其 它原料的重量比例关系。
本发明中， "任选的"的含义是指"包含或不包含 "其所指的对象， 例如"任选 的主动靶向材料"意指"包含或不包含主动靶向材料"， "任选的防冻剂和 /或 pH调 节剂"意指"包含或不包含防冻剂和 /或 pH调节剂"。
作为本发明的优选， 所述注射用水性溶剂的体积是所述澄清透明溶液的 5-100倍， 例如 6倍、 8倍、 10倍、 15倍、 20倍、 30倍、 50倍、 70倍、 80倍 或 90倍， 优选 5-80倍， 更优选 10-20倍。
注射用水性溶剂的温度是本领域的技术人员可以根据经验确定的， 一般室 温即可， 本发明所用的注射用水性溶剂的温度可以是 0-80°C范围内的任意温 度， 优选 0-40°C范围内的任意温度。
在第三方面， 本发明提供一种根据第二方面所述的方法制备得到的伊立替 康纳米脂束制剂， 所述制剂通过静脉注射、 肌肉注射或皮下注射给药。
为储存的方便， 本发明制备得到的伊立替康纳米脂束制剂， 可以选择冻干 等再加工工艺进行后续处理， 并不影响纳米脂束药物的再分散和使用， 所涉及 工艺可产业化生产， 并直接应用于大批量药物生产开发。
本发明的有益效果为： 本发明利用聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯的成胶束功 能和对伊立替康的增溶功能， 以及磷脂对聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯胶束的尺 寸调节作用， 结合简单的脂束前体制备工艺， 配制出伊立替康纳米脂束制剂前 体 （即澄清透明溶液） ； 经自乳化过程后， 实现伊立替康纳米脂束的制备； 本 发明制备的伊立替康纳米脂束的粒径分布均匀， 作为脂束制剂能降低伊立替康 的毒性、 具有长循环效果、 能增强肿瘤靶向富集作用和增加病人顺应性； 本发 明填补了伊立替康纳米脂束药物的空白， 所发展的配方工艺简单、 具高重复性 可直接应用于伊立替康纳米药物的产业化生产。 此外， 在本发明的制剂加入主 动靶向材料能够显著增强其在肿瘤中的富集效果。
附图说明
图 1 为本发明伊立替康纳米脂束前体的制备及经自乳化过程后得到伊立替 康纳米脂束制剂的过程示意图。
图 2为本发明实施例 1所得伊立替康纳米脂束制剂前体的光学照片， 显示 其为澄清透明溶液。
图 3 从左到右依次为经生理盐水、 注射用水、 葡萄糖注射液自乳化过程后 得到的伊立替康纳米脂束制剂的光学照片， 显示其为乳状液。
图 4为本发明实施例 1经生理盐水自乳化过程后得到的伊立替康纳米脂束 制剂的动态光散射结果， 显示其粒径均匀。
图 5为本发明实施例 1经生理盐水自乳化过程后得到的伊立替康纳米脂束 制剂的透射电镜照片。
图 6为本发明实施例 9经注射用水自乳化过程后得到的伊立替康纳米脂束 制剂的动态光散射结果， 显示其粒径均匀。
图 7为本发明实施例 9经注射用水自乳化过程后冻干， 再稀释后得到的伊 立替康纳米脂束制剂的透射电镜照片。
图 8为本发明实施例 10经葡萄糖注射液自乳化过程后得到的伊立替康纳米 脂束制剂的动态光散射结果， 显示其粒径均匀。
图 9为本发明实施例 10经葡萄糖注射液自乳化过程后得到的伊立替康纳米 脂束制剂的透射电镜照片。
图 10为表面 CRGDK靶向脂束药物在肿瘤部位的聚集情况， 小动物成像显 示与游离药物 （荧光分子模拟 （上）） 比较， 脂束药物 （实施例 1制备） 在肿瘤 部位有明显的聚集（中间）， 比较显示， CRGDK靶向脂束药物（实施例 17制备） 具有更加明显的肿瘤富集作用 （下）。
图 11为表面叶酸靶向脂束药物在的肿瘤药效学研究， 光学照片显示， 经 30 天治疗后， 实施例 18制备的叶酸靶向的脂束药物 （右） 治疗组的肿瘤与实施例 1制备的脂束药物组（中）和游离药物组 （左）相比最小， 这表明叶酸靶向能增 强脂束药物的治疗效果， 原因在于叶酸靶向脂束药物具有更加增强的肿瘤富集 效果。
具体实 J ^r式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。 本领域技术人员将 会理解， 以下实施例仅为本发明的优选实施例， 以便于更好地理解本发明， 因 而不应视为限定本发明的范围。 对于本领域的技术人员来说， 本发明可以有各 种更改和变化， 凡在本发明的精神和原则之内， 所作的任何修改、 等同替换或 改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 下述实施例中的实验方法， 如无 特殊说明， 均为常规方法； 所用的实验材料， 如无特殊说明， 均为自常规生化 试剂厂商购买得到的。
本发明制备伊立替康纳米脂束制剂的工艺过程示意图如图 1 所示， 将伊立 替康与磷脂、 聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 甘油和乙醇 （助剂） 混合均匀配制 成伊立替康纳米脂束药物前体， 然后加入注射用水性溶剂进行自乳化得到伊立 替康纳米脂束制剂。
实施例 1
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.5g伊立替康、 2.5g乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）、
1.8g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 图 2显示： 伊立替康脂束制剂前体为澄清透 明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康纳米制剂。 图 3中左侧试管显示伊立替康脂束制剂呈乳状液。 三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 伊立 替康脂束制剂的平均粒径为 103.3nm。 图 4显示： 伊立替康脂束制剂粒径分布均 匀。
本实施例制备的伊立替康脂束制剂的透射电镜照片如图 5所示， 显示制备 的伊立替康脂束制剂为粒径均匀的纳米颗粒。
实施例 2
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.2g伊立替康、 2.5g乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）、
1.8g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 结果 与图 4类似。
实施例 3
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备 1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.8g伊立替康、 2.5g乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）、
1.8g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康纳米制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90 仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 结果 与图 4类似。
实施例 4
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.5g伊立替康、 1.7g乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）、
3.0g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。 三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90 仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 结果 与图 4类似。
实施例 5
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 、 0.5g伊立替康、 2.8g无水乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）和 1.8g甘油， 搅拌溶解， 得到溶液澄清透明的 伊立替康脂束制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束 制剂前体为澄清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康纳米制剂的粒径。 结果 与图 4类似。
实施例 6
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 、 0.2g伊立替康、 2.8g无水乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）和 1.8g甘油， 搅拌溶解， 得到溶液澄清透明的 伊立替康脂束制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束 制剂前体为澄清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。 三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 结果 与图 4类似。
实施例 7
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 、 0.8g伊立替康、 2.8g无水乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）和 1.8g甘油， 搅拌溶解， 得到溶液澄清透明的 伊立替康脂束制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束 制剂前体为澄清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90 仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 结果 与图 4类似。
实施例 8
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 、 0.5g伊立替康、 1.7g无水乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）和 3.0g甘油， 搅拌溶解， 得到溶液澄清透明的 伊立替康脂束制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束 制剂前体为澄清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备 将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康纳米制剂的粒径。 伊立 替康纳米制剂的平均粒径为 105.9nm。 结果与图 4类似。
实施例 9
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂（德国 Lipoid公司）和 0.3g乙醇， 溶解， 加入 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司） ， 得到溶液八。
2、 称取 0.5g伊立替康、 2.5g乙醇、 1.8g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的注射用水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 图 3中中间试管显示伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 伊立 替康脂束制剂的平均粒径为 107.0nm。 图 6显示： 伊立替康脂束制剂粒径分布均 匀。
本实施例制备的伊立替康脂束制剂的透射电镜照片如图 7所示， 显示制备 的伊立替康脂束制剂为粒径均匀的纳米颗粒。
实施例 10 一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.5g伊立替康、 2.5g乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）、
3.0g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的葡萄糖注射液稀释， 得到伊立替康脂束制剂。 图 3中右侧试管显示伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康纳米制剂的粒径。 图 8 显示： 伊立替康脂束制剂粒径分布均匀。
本实施例制备的伊立替康脂束制剂的透射电镜照片如图 9所示， 显示制备 的伊立替康脂束制剂为粒径均匀的纳米颗粒。
实施例 11
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 lg磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.5g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.25g伊立替康、 2g乙醇、 2.5g Solutol HS15 (德国 BASF公司 )、 1.25g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。 二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 10倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 结果 与图 4类似。
实施例 12
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
称取 2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 、 lg伊立替康、 5g无水乙醇、 5g Solutol HS15 (德国 BASF公司） 和 3.75g甘油， 搅拌溶解， 得到溶液澄清透明的伊立 替康脂束制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂 前体为澄清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 80倍体积的注射用水稀释， 得到 伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3中中间试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 结果 与图 6类似。
实施例 13
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
称取 1.5g磷脂 （德国 Lipoid公司） 、 0.6g伊立替康、 3.5g无水乙醇、 3.5g Solutol HS15 (德国 BASF公司）和 2.8g甘油， 搅拌溶解， 得到溶液澄清透明的 伊立替康脂束制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束 制剂前体为澄清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 5倍体积的葡萄糖注射液稀释， 得到伊立替康脂束制剂。 结果类似图 3 中右侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状 液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 结果 与图 8类似。
实施例 14
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.5g 伊立替康、 2.5g 乙醇、 丙二醇 1.8g， 柠檬酸 0.01g， 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司） 、 1.8g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康纳米制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。 伊立 替康脂束制剂的平均粒径为 108nm。 伊立替康脂束制剂粒径分布均匀。
本实施例制备的伊立替康脂束制剂的透射电镜照片结果与图 5类似， 所制 备的伊立替康药物脂束制剂粒径均匀。
实施例 15
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.5g 伊立替康、 2.5g 乙醇、 丙二醇 1.8g， Na2C03 0.01g， 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司） 、 1.8g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康纳米制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的粒径测定
用英国 Malven仪器公司的 ZS90仪器检测伊立替康脂束制剂的粒径。
本实施例制备的伊立替康脂束制剂的透射电镜照片类似图 5所示， 制备的 伊立替康脂束制剂为粒径均匀的药物颗粒。
实施例 16
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.5g 伊立替康、 2.5g 乙醇、 丙二醇 1.8g， 乙二胺 0.01g， 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司） 、 1.8g甘油， 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康纳米制剂。 结果类似图 3中左侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
本实施例制备的伊立替康脂束制剂的透射电镜结果与图 5类似， 均为粒径 均匀的纳米颗粒。
实施例 17
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.5g伊立替康、 2.5g乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）、 1.8g甘油， 0.05g CRGDK-PEG-DSPE, 常温溶解， 得到溶液8。
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康纳米制剂。 结果类似图 3中右侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。
三、 伊立替康脂束制剂的肿瘤靶向效果验证
小动物活体成像技术被用于研究表面 CRGDK-PEG-DSPE靶向的伊立替康 脂束药物在肿瘤部位的靶向聚集效果。 具体实验方法如下所示：
按照实施例 1 的方法制备不带有 CRGDK-PEG-DSPE靶向基团的伊立替康 纳米脂束（配方中不含有 CRGDK-PEG-DSPE)，配方中加入 DiR染料乙醇溶液， 用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到伊立替康纳米脂束注射剂 B。 按照实施例 17的方法制备的带有 CRGDK-PEG-DSPE靶向基团的伊立替康 纳米脂束， 配方中加入 DiR染料乙醇溶液， 用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康纳米脂束注射剂 C。
伊立替康生理盐水溶液为注射剂 A， 其中加入了 DiR染料的乙醇溶液。 上述注射剂 A、 B和 C中 DiR染料的浓度控制相同。
取三只皮下荷瘤小鼠， 分别注射等体积的注射剂 A、 B和 C， 24小时后取 出实体瘤， 用多光谱小动物活体成像*** （CRI Maestro 2) 观察肿瘤处药物富 集效果。 图 10显示了表面 CRGDK-PEG-DSPE靶向脂束药物在肿瘤部位的聚集 情况， 小动物成像显示与游离药物（注射剂 A) 比较， 脂束药物（注射剂 B)在 肿瘤部位有明显的聚集 （中间）， 比较显示， CRGDK-PEG-DSPE靶向脂束药物 (注射剂 C)具有更加明显的肿瘤富集作用（下）。图 10说明： CRGDK-PEG-DSPE 靶向功能的伊立替康脂束药物在肿瘤部位有更加明显的聚集， 从而能够起到更 好的治疗效果。
实施例 18
一、 伊立替康脂束制剂前体的制备
1、 称取 1.2g磷脂 （德国 Lipoid公司） 和 0.3g乙醇， 溶解， 得到溶液八。
2、 称取 0.5g伊立替康、 2.5g乙醇、 3.0g Solutol HS15 (德国 BASF公司）、 1.8g甘油， 0.05g叶酸 -PEG-DSPE, 常温溶解， 得到溶液^
3、 将溶液 A和溶液 B混合， 室温搅拌、 混匀， 得到澄清透明伊立替康脂束 制剂前体， 氮气保护， 密封保存。 结果类似图 2， 伊立替康脂束制剂前体为澄 清透明液体。
二、 伊立替康脂束制剂的制备
将步骤一制备的伊立替康脂束制剂前体用 20倍体积的生理盐水稀释， 得到 伊立替康纳米制剂。 结果类似图 3中右侧试管， 伊立替康脂束制剂呈乳状液。 三、 伊立替康脂束制剂的肿瘤靶向效果验证
药效学研究显示， 叶酸 -PEG-DSPE靶向的伊立替康脂束药物具有更好地肿 瘤抑制效果。图 11显示了表面叶酸 -PEG-DSPE靶向脂束药物在的肿瘤药效学研 究， 光学照片显示， 经 30天治疗后， 实施例 18制备的叶酸 -PEG-DSPE靶向的 脂束药物 （右） 治疗组的肿瘤与实施例 1 制备的脂束药物组 （中） 和游离药物 组 （左） 相比最小， 这表明叶酸 -PEG-DSPE靶向能增强脂束药物的治疗效果， 原因在于叶酸 -PEG-DSPE靶向脂束药物具有更加增强的肿瘤富集效果。 图 11说 明： 同样的时间治疗后， 具有叶酸 -PEG-DSPE靶向功能的伊立替康脂束药物能 更好的的抑制肿瘤生长， 即具有更好的治疗效果。
本发明通过上述实施例制备得到伊立替康纳米脂束制剂， 作为脂束制剂它 能降低伊立替康的毒性、 具有长循环效果、 能增强肿瘤靶向富集作用和增加病 人顺应性。
以上详细描述了本发明的实施方式， 但是， 本发明并不限于上述实施方式 中的具体细节， 在本发明的技术构思范围内， 可以对本发明的技术方案进行多 种简单变型， 这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是， 在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征， 在不矛盾的情况下， 可以通过任何合适的方式进行组合， 为了避免不必要的重 复， 本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外， 本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合， 只要其不 违背本发明的思想， 其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims

权 利 要 求 书
1、 一种伊立替康纳米脂束制剂， 包含磷脂、 聚乙二醇-十二羟基硬脂酸 酯、 甘油、 乙醇和伊立替康， 及注射用水性溶剂。
2、 根据权利要求 1 所述的伊立替康纳米脂束制剂， 其特征在于， 所述注 射用水性溶剂选自生理盐水、 葡萄糖注射液和注射用水中的一种或多种。
3、 根据权利要求 1或 2所述的伊立替康纳米脂束制剂， 其特征在于， 所述 制剂包含 4〜8重量份磷脂、 10〜20重量份聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 5〜15重 量份甘油、 10〜20重量份乙醇和 1〜4重量份伊立替康； 优选地， 所述注射用水性溶剂的体积是所述磷脂、 聚乙二醇-十二羟基硬脂 酸酯、 甘油、 乙醇和伊立替康总体积的 5-100倍， 进一步优选 5-80倍， 更进一 步优选 10-20倍。
4、 根据权利要求 1-3任一项所述的伊立替康纳米脂束制剂， 其特征在于， 所述制剂还包含主动靶向材料； 优选地，所述主动靶向材料为 X-PEG-DSPE，其中 X表示叶酸、五肽 CRGDK 或胆酸中的一种或多种， PEG表示聚乙二醇， DSPE表示二硬脂酰基磷脂酰乙 醇胺；
优选地， 所述制剂中主动靶向材料 X-PEG-DSPE的含量为 0.01-2重量份， 更优选 0.1-1重量份， 最优选 0.1-0.4重量份； 优选地， 所述制剂还包含防冻剂和 /或 pH调节剂； 其中所述防冻剂选自丙 二醇和山梨糖醇； 所述 pH 调节剂选自柠檬酸、 乳酸、 Na2C03、 NaOH、 N C1、 NaHC03和 Ca(OH)2。
5、 一种制备权利要求 1-4任一项所述的伊立替康纳米脂束制剂的方法， 包 括：
( 1 ) 将磷脂、 聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 甘油、 乙醇和伊立替康以及 任选的主动靶向材料、 任选的防冻剂和 /或 pH 调节剂混合， 配成澄清透明溶 液；
(2)用注射用水性溶剂稀释所述澄清透明溶液， 自乳化得到所述伊立替康 纳米脂束制剂。
6、 根据权利要求 5所述的方法， 其特征在于， 所述步骤 （1 ) 具体为： ( la) 将磷脂与乙醇混合溶解， 配成第一溶液；
( lb)将聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 甘油、 乙醇和伊立替康以及任选的 主动靶向材料、 任选的防冻剂和 /或 pH调节剂混合溶解， 配成第二溶液；
( lc) 将所述第一溶液与所述第二溶液混合， 搅拌混匀得到所述澄清透明 溶液。
7、 根据权利要求 5所述的方法， 其特征在于， 所述步骤 （1 ) 具体为： 将磷脂、 聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 甘油、 乙醇和伊立替康以及任选 的主动靶向材料、 任选的防冻剂和 /或 pH调节剂混合， 搅拌混匀配成澄清透明 溶液。
8、 根据权利要求 5-7任一项所述的方法， 其特征在于， 所述注射用水性溶 剂选自生理盐水、 葡萄糖注射液和注射用水中的一种或多种。
9、 根据权利要求 5-8任一项所述的方法， 其特征在于， 所述澄清透明溶液 含 4〜8重量份磷脂、 10〜20重量份聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯、 5〜15重量份甘 油、 10〜20重量份乙醇和 1〜4重量份伊立替康；
优选地，所述澄清透明溶液还含 0.01-2重量份主动靶向材料 X-PEG-DSPE, 其中 X表示叶酸、 五肽 CRGDK或胆酸中的一种或多种；
优选地， 所述注射用水性溶剂的体积是所述澄清透明溶液的 5-100倍， 优 选 5-80倍， 更优选 10-20倍；
10、 一种根据权利要求 5-9任一项所述的方法制备得到的伊立替康纳米脂 束制剂， 其特征在于， 所述制剂通过静脉注射、 肌肉注射或皮下注射给药。
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