CN100519553C - 作为抗癌剂的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 - Google Patents
作为抗癌剂的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100519553C CN100519553C CNB028075536A CN02807553A CN100519553C CN 100519553 C CN100519553 C CN 100519553C CN B028075536 A CNB028075536 A CN B028075536A CN 02807553 A CN02807553 A CN 02807553A CN 100519553 C CN100519553 C CN 100519553C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dimethyl
- pyrroles
- pyrimidine
- phenyl
- base
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
- C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
- A61P33/06—Antimalarials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Abstract
本发明涉及2-取代的4-杂芳基-嘧啶类化合物、其制备、含有它们的药物组合物和它们作为细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)抑制剂的用途、以及其在增殖性疾病,例如癌症、白血病、牛皮癣等治疗中的用途。
Description
本发明涉及2-取代的4-杂芳基-嘧啶类化合物、其制备、含有它们的药物组合物和它们在增殖性疾病,例如癌症、白血病、牛皮癣等治疗中的用途。
现有技术的介绍与概述
EP-A-233,461公开了某些具有平喘性质的4,5,6-取代的-N-(取代的苯基)-2-嘧啶胺类化合物。WO95/09847已经公开了某些具有抗增殖性质和抑制蛋白激酶C、表皮生长因子受体相关酪氨酸蛋白激酶(EGF-R-TPK)以及CDK1/细胞周期蛋白B的4-杂芳基-N-(3-取代的苯基)-2-嘧啶胺类化合物,其中杂芳基例举了吡啶基和吲哚基。
J.Med.Chem.(1993)Vol.36,p.2716-2725,Paul,R.等公开了另一类具有消炎活性的苯基氨基嘧啶类化合物。这些化合物在嘧啶环4-位包括未取代的吡咯基、单取代的2-噻吩基和二甲基-3-呋喃基。
本发明的目的是提供另一类N-苯基-2-嘧啶类抗增殖化合物。已经惊人地发现本发明的化合物不是蛋白激酶C的抑制剂。正如下面所讨论的,对细胞系中细胞增殖的抑制作用和/或对细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制作用可以证明它们的活性。
发明概述
本发明的第一方面涉及通式I化合物,
其中,
X1和X2之一是NR10,X1和X2的另一个是CR9;
Z是NH、NHCO、NHSO2、NHCH2、CH2、CH2CH2或CH=CH;
R1、R2、R3、R9和R10独立地是H、烷基、芳基、芳烷基、杂环、卤代、NO2、CN、OH、烷氧基、芳氧基、(R″′)nNH2、(R″′)nNH-R′、(R″′)nN-(R′)(R")、NH-芳基、N-(芳基)2、COOH、COO-R′、COO-芳基、CONH2、CONH-R′、CON-(R′)(R")、CONH-芳基、CON-(芳基)2、SO3H、SO2NH2、CF3、CO-R′或CO-芳基,其中烷基、芳基、芳烷基和杂环基可以进一步被一个或多个选自卤代(halogeno)、NO2、CN、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基团取代;
R4、R5、R6、R7和R8彼此独立地是H、取代或未取代的低级烷基、卤代、NO2、CN、OH、取代或未取代的烷氧基、NH2、NH-R′、N-(R′)(R")、COOH、COO-R′、CONH2、CONH-R′、CON(R′)(R")、SO3H、SO2NH2或CF3;
其中R′、R"和R′′′各自独立地是可以相同或不同的烷基,且n是0或1;
其条件是当R1和R2是H,X1是NH,X2是CH,R3是H,则苯基不是
未取代的,
4-乙基,
3-甲基,
3-(1,1,2,2-四氟乙氧基),
3,4,5-三甲氧基,
其他基团R4-R8是H;
及其药学上可接受的盐。
优选实施方式的说明
本文所用的术语“烷基”包括具有1至8个碳原子的直链和支链烷基,例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等,术语“低级烷基”类似地用于表示具有1至4个碳原子的基团。
术语“芳基”用于包括具有6至10个碳原子的基团,例如苯基、萘基等。
术语“芳烷基”用作上述术语烷基与芳基的连接。
优选的式I化合物是这样的,它们携带单-、二-或三-取代的吡咯基,通过环碳原子之一与嘧啶环连接。优选地,吡咯基是吡咯-3-基(即X1是CR9,且X2是NR10,优选地为NH),并且是二-或三-取代的。
吡咯基可以被R1、R2、R9和R10取代。优选地,R1、R2在适当时的R9和R10独立地是H、烷基、芳基、芳烷基、杂环、卤代、NO2、CN、OH、烷氧基、芳氧基、(R″′)nNH2、(R″′)nNH-R′、(R″′)nN-(R′)(R")、NH-芳基、N-(芳基)2、COOH、COO-R′、COO-芳基、CONH2、CONH-R′、CON-(R′)(R")、CONH-芳基、CON-(芳基)2、SO3H、SO2NH2、CF3、CO-R′或CO-芳基,其中烷基、芳基、芳烷基和杂环基可以进一步被一个或多个选自卤代、NO2、CN、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基团取代。最优选地,R10是H。
更优选地,R1、R2和R9各自独立地选自H、卤代、NO2、CN、(R″′)nN-(R′)(R")、CONH2、C1-4烷基和杂环基。优选地,R1、R2和R9中至少一个、更优选至少两个或三个不是氢。
优选地,R1是H、CN、卤代、硝基、烷基氨基或杂环基。当R1是卤代,则它优选地选自氯或溴。当R1是烷基氨基,则它优选地是二乙氨基甲基或二甲氨基甲基。当R1是杂环基,则它优选地是吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基。最优选地,R1是H或CN。
进而更优选地,当R1是所述优选含义,则R2和R9都是低级烷基,优选甲基。
基团Z优选地是NH、NHSO2或NHCH2,最优选NH。
苯基取代基R4~R8各自独立地选自H、卤代、硝基、氨基、氨基烷基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、氨磺酰基、CN、N(R′)(R")、C1-4烷基和取代的C1-4烷基。
更优选地,R4、R5、R6、R7和R8彼此独立地是H、未取代的低级烷基、卤代、NO2、CN、OH、N-(R′)(R")或CF3;其中R′、R"和R″′各自独立地是可以相同或不同的烷基,n是0或1。
进而更优选地,R4至R8独立地选自H、F、NH2、NO2、OH、Cl、Br、I、CN、CH2OH、CF3和二甲氨基。在优选的R4至R8中,R4和R8最优选地是氢。
因而,特别优选的实施方式包括2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基吡咯-3-基)嘧啶胺类,其中该苯基是被H、F、NH2、NO2、OH、Cl、Br、I、CN、CH2OH、CF3或OMe中至少一个所2-、3-或4-取代。
在这种特定的实施方式中,苯基优选地被F、NH2、NO2、OH、Cl、Br、I、CH2OH、CN、CF3或OMe在2-、3-或4-位中的任一位置所单取代,或者被2,4-二氟、3,5-二氟、3,4-二氟、2,4-二氯、3,5-二氯、3,4-二氯或4-氯-3-三氟甲基所二取代的。
进一步特别优选的实施方式包括2-[N-(苯基)]-4-(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈)嘧啶胺类,其中该苯基被F、NH(CH3)2、NO2、OH、Cl、Br、I或CF3中至少一个所2-、3-或4-取代。
在这种特定的实施方式中,苯基优选地是被F、NH(CH3)2、NO2、OH、I或CF3在3-或4-位中的任一位置所单取代,或者被4-甲基-3-硝基、3-碘-4-甲基、4-氯-3-甲基、3-羟基-4-甲基、4-氟-3-甲基或4-甲基-3-氟所二取代的。
进一步更加特别优选的实施方式包括:
-2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)嘧啶胺类,其中该苯基优选地是在4-位被F、NH(CH3)2、NO2、OH、I或CF3所单取代的,优选地被氟或NH(CH3)2基团取代。
-2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基-5-卤代-1H-吡咯-3-基)嘧啶胺类,其中该苯基优选地是在3-或4-位被F、NH(CH3)2、NO2、OH、I或CF3所单取代的,优选地被4-氟或3-硝基取代,该卤代基团优选地是氯或溴。
-2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基-5-二烷基氨基烷基-1H-吡咯-3-基)嘧啶胺类,其中该苯基在4-位优选地是被F、NH(CH3)2、NO2、OH、I或CF3所单取代的,优选地被氟单取代,该二烷基氨基烷基优选地是二乙氨基甲基或二甲氨基甲基。
-2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基-5-杂环-1H-吡咯-3-基)嘧啶胺类,其中该苯基优选地是在4-位被F、NH(CH3)2、NO2、OH、I或CF3所单取代,优选地被氟单取代,该杂环基优选地是5-吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基。
最优选地,本发明的化合物选自:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺
(3,4-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(4-氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(3,5-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
4-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚
3-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚
(2,4-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(2,4-二氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺
(3-氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
N-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺
(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-氟-4-碘-苯基)-胺
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-氟-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
[4-(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
(4-氟-苯基)-[4-(1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
N-[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺
[4-(5-氨基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(5-氯-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二乙氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-5-吗啉-4-基甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟苯基)-胺
{4-[2,4-二甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吡咯-3-基]-嘧啶-2-基}-(4-氟-苯基)-胺
上述化合物的结构如图1所示。
所观察到的特别优选的化合物是对cdk2/细胞周期蛋白E的IC50小于5μM(±0.05)的CDK抑制剂,包括:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺
(3,4-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(4-氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(3,5-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
4-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚
3-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺
(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-氟-4-碘-苯基)-胺
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-氟-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
(4-氟-苯基)-[4-(1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
N-[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(5-氯-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二乙氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟苯基)-胺
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-5-吗啉-4-基甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺,以及
{4-[2,4-二甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吡咯-3-基]-嘧啶-2-基}-(4-氟-苯基)-胺。
这些化合物中,更优选的是对cdk2/细胞周期蛋白E的IC50小于1μM(±0.05)的CDK抑制剂,包括:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-氟-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
N-[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(5-氯-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二乙氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺,以及
[4-(2,4-二甲基-5-吗啉-4-基甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺。
其中,进而更优选的是对cdk2/细胞周期蛋白E的IC50小于0.5μM(±0.05)的化合物,为:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺,以及
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟苯基)-胺。
观察到下列化合物是特别有效的抗增殖剂,这得到基于细胞测定法的证明:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺
(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-(2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-氟-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
(4-氟-苯基)-[4-(1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
N-[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(5-二乙氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
{4-[2,4-二甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吡咯-3-基]-嘧啶-2-基}-(4-氟-苯基)-胺。
已经发现,式I化合物具有抗增殖活性,因此据信可用于增殖性疾病的治疗,例如癌症、白血病和其他与失控细胞增殖有关的疾病,例如牛皮癣和再狭窄。在本发明的范围内所定义的抗增殖效果可以由在体外全细胞测定法中抑制细胞增殖的能力得到证明,例如使用A549、HT29、Saos-2、HeLa或MCF-7中的任何一种细胞系,或者由在适当的测定法中显示对CDK酶(例如CDK2或CDK4)的抑制作用而证实。实施例3更详细地描述了这些测定法,包括它们的实施方法。利用这些细胞系和酶测定法,可以确定一种化合物在本发明的意义上是否具有抗增殖性的特性。
不希望受理论限制的是,本发明的化合物据信以非蛋白激酶C(PKC)依赖性方式发挥它们的抗增殖效果。很多化合物抑制参与细胞周期控制的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)。这些CDKs包括CDK2和CDK4,确切而言它们分别与细胞周期蛋白E和细胞周期蛋白D1相互作用。本发明这些化合物进一步据信有利之处在于对涉及增殖性疾病的CDK酶是选择性的。术语“选择性”意味着尽管可能对另一种酶(例如PKC)具有一定的抑制效果,不过该化合物优先有效对抗涉及增殖性疾病的酶。
本发明的化合物可以抑制细胞周期中的任意步骤或阶段,例如核被膜的形成、从细胞周期的静止期(G0)退出、G1进展、染色体解聚浓缩、核被膜破裂、START、DNA复制的引发、DNA复制的进展、DNA复制的终止、中心体复制、G2进展、有丝***或减数***功能的激活、染色体聚集、中心体分离、微管成核、纺锤体生成与活动、与微管动力蛋白的相互作用、染色单体分开(separation)与分离(segregation)、有丝***功能的失活、收缩环的生成和胞质***活动。确切而言,本发明的化合物可以影响某些基因功能,例如染色质结合、复制复合体的生成、复制许可、磷酸化或其他二次修饰活性、蛋白水解性降解、微管结合、肌动蛋白结合、septin结合、微管组织中心成核活性和与细胞周期发信号通路组分的结合。
本发明的进一步实施方式因此涉及一种或多种式I化合物在治疗增殖性疾病中的用途。优选地,增殖性疾病是癌症或白血病。本文所用的术语增殖性疾病在广义上包括任何需要控制细胞周期的疾病,例如心血管疾病,例如再狭窄和心肌病;自体免疫性疾病,例如肾小球肾炎和类风湿性关节炎;皮肤病,例如牛皮癣;需要消炎、抗真菌、抗寄生虫性疾病,例如疟疾、肺气肿和脱发症。在这些疾病中,本发明的化合物可以根据需要在所需细胞内诱导细胞凋亡或者维持停滞。
在特别优选的实施方式中,本发明涉及一种或多种式I化合物在CDK依赖性或敏感性疾病治疗中的用途。CDK依赖性疾病与一种或多种CDK酶活性在正常水平以上有关。这类疾病优选地与CDK2和/或CDK4活性水平异常有关。CDK敏感性疾病是这样一种疾病,其中CDK水平的异常不是主要原因,而是在主要代谢异常的下游。在这类情形中,CDK2和/或CDK4可以说是敏感性代谢途径的一部分,CDK抑制剂因此可以在治疗这类疾病中能起作用。这类疾病优选地是癌症或白血病。
本发明的第二方面涉及下式化合物及其药学上可接受的盐在制造用于治疗增殖性疾病的药物中的用途,
其中,
X1和X2之一是NH,X1和X2的另一个是CR9;
Z是NH、NHCO、NHSO2、NHCH2、CH2、CH2CH2或CH=CH;
R1、R2、R3和R9独立地是H、烷基、芳基、芳烷基、杂环、卤代、NO2、CN、OH、烷氧基、芳氧基、NH2、NH-R′、N-(R′)(R")、NH-芳基、N-(芳基)2、COOH、COO-R′、COO-芳基、CONH2、CONH-R′、CON-(R′)(R")、CONH-芳基、CON-(芳基)2、SO3H、SO2NH2、CF3、CO-R′或CO-芳基,其中烷基、芳基、芳烷基和杂环基可以进一步被一个或多个选自卤代、NO2、CN、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基团取代;
R4、R5、R6、R7和R8彼此独立地是H、取代或未取代的低级烷基、卤代、NO2、CN、OH、取代或未取代的烷氧基、NH2、NH-R′、N-(R′)(R")、COOH、COO-R′、CONH2、CONH-R′、CON(R′)(R")、SO3H、SO2NH2或CF3;
其中R′和R"各自独立地是可以相同或不同的烷基;
其前提条件是当R1和R2是H,X1是NH,X2是CH,且R3是H,则苯基不是
3-(1,1,2,2-四氟乙氧基),或
3,4,5-三甲氧基,
其他基团R4-R8是H。
术语“增殖性疾病”在前面已经讨论过,相同的定义适用于本发明的第二方面。
本发明进一步涉及式II化合物在制造抗病毒感染药物中的用途。这类病毒感染包括VZV、HSV1型与2型和HIV。优选地,这些化合物可用于HIV和HIV相关性疾病的治疗。
本发明的这些进一步方面的优选实施方式与上述第一方面中描述的那些相同。
在特别优选的实施方式中,一种或多种本发明化合物与一种或多种其他抗癌药联合给药。在这类情况下,本发明的化合物可以与一种或多种其他抗癌药连续地、同时或先后给药。
本文所用的措辞“药物制造”包括式I化合物直接作为药物的用途,以及它在筛选其他抗增殖剂的项目中或者在这种药物制造的任何阶段中的用途。
本发明(第一和第二方面)的化合物可以作为盐或酯存在,确切为药学上可接受的盐或酯。
本发明(第一和第二方面)化合物的药学上可接受的盐包括其适合的酸加成盐或碱盐。适合的药物盐的评论可以参见Berge et al,J PharmSci,66,1-19(1977)。盐是这样生成的,例如与无机强酸,例如矿物酸,例如硫酸、磷酸或氢卤酸;与有机强羧酸,例如1至4个碳原子的链烷羧酸,它们是未取代的或取代的(例如被卤素取代),例如乙酸;与饱和或不饱和的二元羧酸,例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二酸或对苯二酸(tetraphthalic);与羟基羧酸,例如抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸;与氨基酸,例如天冬氨酸或谷氨酸;与苯甲酸;或者与有机磺酸,例如(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸,它们是未取代的或取代的(例如被卤素取代),例如甲磺酸或对甲苯磺酸。
酯是利用有机酸或醇/氢氧化物生成的,这取决于被酯化的官能团。有机酸包括羧酸,例如1至12个碳原子的链烷羧酸,它们是未取代的或取代的(例如被卤素取代),例如乙酸;饱和或不饱和的二元羧酸,例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二酸或对苯二酸;羟基羧酸,例如抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸;氨基酸,例如天冬氨酸或谷氨酸;苯甲酸;或者有机磺酸,例如(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸,它们是未取代的或取代的(例如被卤素取代),例如甲磺酸或对甲苯磺酸。适合的氢氧化物包括无机氢氧化物,例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝。醇包括1-12个碳原子的链烷醇,它们是未取代的或取代的(例如被卤素取代)。
在前面所讨论的本发明的所有方面中,本发明在适当时包括式I化合物的所有对映体和互变体。本领域技术人员将会确认具有旋光性(一个或多个手性碳原子)或互变异构特征的化合物。相应的对映体和/或互变体可以通过本领域已知的方法加以分离/制备。
本发明此外涉及本发明(第一和第二方面)各种结晶形式、多晶型和无水/水合形式的化合物或用途。在药学工业中众所周知的是,略微改变纯化和/或分离方法,可以从用于合成制备这类化合物的溶剂中分离化合物的任意这类形式。
本发明进一步包括本发明(第一和第二方面)前体药物形式的化合物或用途。这类前体药物一般是这样的式I化合物,其中一个或多个适当的基团已被修饰,以便在对人或哺乳动物受治疗者给药后可以逆转该修饰。这种逆转作用通常是由天然存在于受治疗者中的酶进行的,不过也有可能将第二种药物与这种前体药物一起给药,目的是进行体内逆转作用。这类修饰的实例包括酯(例如任何一种上述那些酯),其中逆转作用可以由酯酶等实施。其他这类***将是本领域技术人员所熟知的。
本发明还涵盖包含本发明(第一和第二方面)化合物的药物组合物。在这一点上,确切地用于人类疗法,即使本发明的化合物(包括它们的药学上可接受的盐、酯和药学上可接受的溶剂化物)能够被单独给药,一般地将它们与药物载体、赋形剂或稀释剂混合给药,后者的选择依据预期的给药途径和标准药学实践。
因而,本发明还涉及药物组合物,包含一种或多种式I或II化合物或其药学上可接受的盐或酯,以及至少一种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
举例而言,在本发明的药物组合物中,本发明的化合物可以与任何适合的粘合剂、润滑剂、助悬剂、包衣剂和/或增溶剂混合。这类适合于本文所述各种不同形式药物组合物的赋形剂实例可以参见"Handbook ofPharmaceutical Excipients,2nd Edition,(1994),Edited by A Wade and PJWeller。
本发明的药物组合物可以适合于口服、直肠、***、肠胃外、肌内、腹膜内、动脉内、鞘内、支气管内、皮下、真皮内、静脉内、鼻、含服或舌下途径给药。
关于口服给药,确切地使用压制片剂、丸剂、片剂、gellule、滴剂和胶囊剂。优选地,这些组合物含每剂有1至250mg、更优选10-100mg的活性成分。
其他给药形式包含溶液或乳剂,它们可以经静脉内、动脉内、鞘内、皮下、皮内、腹膜内或肌内注射,是从无菌的或可灭菌的溶液制备。本发明的药物组合物还可以是栓剂、***栓剂、混悬剂、乳剂、洗剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、喷雾剂、溶液或撒布粉剂(dusting powder)的形式。
透皮给药的替代手段是利用皮肤贴剂。例如,可以将活性成分掺入到由聚乙二醇含水乳剂或液体石蜡组成的乳膏中。还可以将活性成分掺入到由白蜡或白软石蜡基质组成的软膏剂中,浓度在1与10%的重量之间,还可根据需要一起掺入稳定剂和防腐剂。
可注射形式每剂可以含有10-1000mg、优选10-250mg活性成分。
组合物可以被配制成单元剂型,也就是含有单元剂量离散部分或单元剂量的多重或亚单位。
本领域普通技术人员在对受治疗者给药时,能够容易地确定本发明组合物之一的适当剂量,无需额外实验。通常,医师将确定最适合于个体患者的实际剂量,这将因特定患者的年龄、体重和反应而异。本文所公开的剂量是一般情况的例证。当然可以存在个别情况,其中更高或更低的剂量范围也是合理的,也属于本发明的范围。
在例证性的实施方式中,将对患者给以一剂或多剂10至150mg/天的剂量,用于治疗恶性肿瘤。
本发明的药物组合物可以进一步包含另外一种或多种抗癌剂,例如市场上供应的现有抗癌药。
抗癌药一般在联合使用时是更为有效。确切而言,需要避免主要毒性、作用机理和耐药性机理的重叠的时候,联合疗法是适当的。此外,最好以大多数药物的最大耐受剂量,两次给药之间的时间间隔最小进行给药。联合化疗药的主要优点是,它可以通过生化相互作用促进加和或者可能的协同效果,还可以减少早期肿瘤细胞耐药性的出现,后者用单一药物进行初始化疗时将响应出现。生化相互作用在选择药物组合中的用途实例由下列事实而得到证明,亚叶酸的给药将增加5-氟尿嘧啶的活性细胞内代谢产物与其靶胸苷酸合酶的结合,从而增加其细胞毒性效果。
在目前癌症和白血病的治疗中使用大量组合。更广泛的医疗实践评论可以参见"Oncologic Therapies"edited by E.E.Vokes and H.M.Golomb,published by Springer。
受试化合物与已知或怀疑可用于最初的特定癌症或源于该癌症的细胞系治疗的药物的生长抑制活性研究,可以提示有益的组合。这种方法还可以用来确定药物给药的顺序,即在投药之前、同时或之后。这类时序安排可以是所有在这里所鉴别的细胞周期作用药物的特征。
本发明的化合物(I)例如可以通过Traube合成法(A.R.Katritzky,I.Taher,Can.J.Chem.1986,64,2087和其中引用的参考文献)进行的改进加以合成,也就是1,3-二羰基化合物1或丙烯酸酯2或3与脒4之间的缩合,如流程1所示。
流程1
二羰基化合物1继而可以通过本领域很多已知的方法制备(J.March,In:Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanism,and Structure,4thEd.,John Wiley & Sons,Inc.,New York,1992,p.1283)。特别适合于本发明目的的丙烯酸酯2和3,是通过杂环甲基酮5与叔丁氧基双(二甲氨基)甲烷6的缩合作用而得到的(流程2)。
流程2
二氨基化合物4可为脒4a或胍4b,这取决于一般结构I中的Z的定义。脒(HN=CRNH2)可以从容易获得的胺前体与例如烯酮亚胺缩合,或者向适合的腈或亚酰胺化物(imidate)中加入氨。胍4b可以用本领域中大量的已知方法进行制备(流程3)。从本发明的目的讲,最有用的途径是氨腈8与苯胺9的胺化反应。
流程3
在其中5是吡咯的情况下,可以采用两种***(参照流程4),即,用于生成嘧啶前体2和3的乙酰基位于吡咯3-位(5:X1=CR9,X2=NH;即结构5b)或吡咯2-位(X1=NH,X2=CR9;即结构5c)。
流程4
在两种情况下,都可以利用本领域已知的方法组装吡咯环。特别相关的是Knorr合成法的改进(例如参见J.A.Joule,G.F.Smith,Heterocyclic Chemistry,2nd Ed.,Van Nostrand Reinhold(UK)Co.Ltd.,1978,pp.213-215)。关于吡咯-3-基***,首先将活化(也就是R1=COOEt、CN等)的羰基化合物10进行亚硝基化。在例如锌-乙酸或含水连二硫酸盐的存在下,使所得肟11与二羰基化合物12缩合,生成反应性α-氨基羰基中间体13。可以进一步处理所得3-乙酰基吡咯5b中的R1取代基(例如COOEt、CN),直接地或者在制备中间体2或3,或者在得到吡咯并嘧啶产物I的过程中。因而,脱羧基作用(R1=COOEt)将得到R1=H的产物,氧化作用(R1=CN)将得到R1=CONH2的产物等。
此外,R1=H的产物可以转化为各种衍生物,特别是通过亲电取代反应。因而,可以容易得到其中R1是例如卤素、硝基、氨基、烷基、烷基氨基等的衍生物。在吡咯-2-基***的情况下,情形是类似的,这里活化基团需要存在于羰基组分15中(例如R9=COOEt、CN等)。使其与肟16(衍生自二羰基化合物14)缩合,生成中间体17。可以按照与上述吡咯-3-基***中的R1基团相同的方式处理产物5c或衍生物中的R9取代基。
作为替代选择,一般结构I化合物可以从适合的嘧啶前体直接得到,例如从2,4-二取代的(卤素、胺等)嘧啶开始经过连续的取代反应。
现在将借助实施例并参照附图对本发明进行描述。
图1显示根据本发明的化合物的化学结构。
实施例
缩写
LC-MS,液相色谱-质谱;NMR,核磁共振光谱;r.t.,室温;PE石油醚(40-60℃沸程);DMSO,二甲亚砜。
一般说明
NMR光谱是利用Bruker DPX-300仪器记录的。化学位移基于四甲基硅烷,以ppm(δ)表示。使用EM Kieselgel 60(0.040-0.063mm)进行快速柱色谱。熔点是用LEICA testo-720电温度计测定的,并且未经校正。在适当时候,化合物编号如括号内所示。
实施例1
3-二甲氨基-1-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-丙烯酮
将1-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-乙酮(2g,15mmol)在5ml1,1-双-二甲氨基-3,3-二甲基-丁-2-酮中的混合物在100℃加热22小时。将反应混合物的沉淀悬浮在EtOAc/PE中,并冷却。将粗产物过滤,用EtOAc/PE洗涤,在真空中干燥,得到标题化合物,为紫色固体(2.6g)。
1H-NMR(CDCl3)δ:2.25(s,6H,CH3),2.45(s,6H,CH3),5.46(d,1H,J=12.6Hz,CH),6.35(s,1H,吡咯基-H),7.63(d,1H,J=12.6Hz,CH).
实施例2
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺[1]
向3-二甲氨基-1-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-丙烯酮(1mmol,0.19g)与硝酸4-氟苯基胍(2mmol,0.44g)在2-甲氧基乙醇(5ml)中的混合物加入NaOH(40mg)。将反应混合物在N2下100-120℃加热6小时。蒸发溶剂至干,残余物经过快速色谱纯化(1:2 EtOAc/PE)。从EtOAc/PE中重结晶,得到标题化合物(174mg,62%),为褐色晶体。
1H-NMR(CDCl3)δ:2.21(s,3H,CH3),2.43(s,3H,CH3),6.33(s,1H,吡咯基-H),6.73(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),7.00(m,2H,Ph-H),7.79(m,2H,Ph-H),8.28(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),9.16(s,1H,NH),10.59(s,1H,NH).
按照类似于上述的方式制备下列化合物:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺[2]
黄色固体。M.p.197-199℃.LC-MS:m/z=310(M+1).C16H15N5O2要求C,62.12;H,4.89;N,22.64;实测C,62.61;H,4.99;N,22.20.1H-NMR(CDC13)δ:2.71(d,6H,CH3),7.05(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),7.47(m,2H,Ph-H),7.78(m,1H,Ph-H),7.81(s,1H,Ar-H),8.07(m,1H,Ph-H),8.51(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),8.99(br.s,1H,NH),9.91(br.s,1H,NH).
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺[3]
1H-NMR(CDCl3)δ:2.26(s,3H,CH3),2.48(s,3H,CH3),6.80(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),7.47(m,2H,Ph-H),7.57(m,2H,Ph-H),7.23(s,1H,吡咯基-H),8.32(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H).
(3,4-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[4]
1H-NMR(CDCl3)δ:2.23(s,3H,CH3),2.46(s,3H,CH3),6.42(m,1H,吡咯基-H),6.77(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),7.11(m,1H,Ph-H),7.41(m,1H,Ph-H),8.05(m,1H,Ph-H),8.29(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),9.21(s,1H,Ph-H),10.46(br.s,1H,NH).
(4-氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[5]
M.p.219-223℃.MS:[M+H]+=299.4(C16H15ClN4要求298.8).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.19(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3),6.48(s,1H,吡咯基-H),6.82(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),7.31(d,2H,J=8.7Hz,Ph-H),7.84(d,2H,J=8.7Hz,Ph-H),8.34(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),9.45(s,1H,Ph-H),10.72(br.s,1H,NH).
(3,5-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[6]
M.p.153.3-156.8℃.MS:[M+H]+=303.6(C16H14F2N4要求300.3).1H-NMR(CD3OD)δ:2.25(s,3H,CH3),2.47(s,3H,CH3),6.42-6.48(m,2H,吡咯基-H和Ph-H),6.80(d,1H,J=5.5Hz,嘧啶基-H),7.44-7.48(m,2H,Ph-H),8.31(d,1H,J=5.5Hz,嘧啶基-H).
4-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚[7]
M.p.189.5-193.4℃.MS:[M+H]+=281.9(C16H16N4O要求280.3).1H-NMR(CD3OD)δ:2.23(s,3H,CH3),2.43(s,3H,CH3),6.44(s,1H,吡咯基-H),6.75-6.78(m,3H,嘧啶基-H和Ph-H),7.39(d,2H,J=8.8Hz,Ph-H),8.17(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H).
3-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚[8]
M.p.169.0-174.6℃.MS:[M+H]+=281.3(C16H16N4O要求280.3).1H-NMR(CD3OD)δ:2.26(s,3H,CH3),2.47(s,3H,CH3),6.44-6.48(m,2H,吡咯基-H,Ph-H),6.84(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),7.05-7.10(m,2H,Ph-H),7.32(m,1H,Ph-H),8.25(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H).
(2,4-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[9]
M.p.219-220℃.MS:[M+H]+=302.6(C16H14F2N2要求300.3).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.10(s,3H,CH3),2.36(s,3H,CH3),6.43(s,1H,吡咯基-H),6.77(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),7.06(m,1H,Ph-H),7.27(m,1H,Ph-H),7.66(m,1H,Ph-H),8.25(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),8.71(s,1H,Ph-H),10.70(br.s,1H,NH).
(2,4-二氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[10]
M.p.158.5-159.7℃.MS:[M+H]+=335.4(C16H14Cl2N4要求333.2).
1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.18(s,3H,CH3),2.38(s,3H,CH3),6.51(s,1H,吡咯基-H),6.90(d,1H,J=5.5Hz,嘧啶基-H),7.46(m,1H,Ph-H),7.71(m,1H,Ph-H),8.05(m,1H,Ph-H),8.36(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),8.49(s,1H,Ph-H),10.80(br.s,1H,NH).
(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[11]
M.p.187.7-190.7℃.MS:[M+H]+=368.6(C17H14ClF3N4要求366.8).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.19(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3),6.50(s,1H,吡咯基-H),6.89(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),7.61(m,1H,Ph-H),8.08(m,1H,Ph-H),8.39-8.42(m,2H,Ph-H和嘧啶基-H),9.79(s,1H),10.80(br.s,1H,NH).
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基苯基)-胺[12]
M.p.165.6-167.9℃.MS:[M+H]+=332.9(C17H15F3N3要求332.3).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.26(s,3H,CH3),2.49(s,3H,CH3),6.56(s,1H,吡咯基-H),6.94(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),7.67(d,2H,J=8.5Hz,Ph-H),8.09(d,2H,J=8.5Hz,Ph-H),8.45(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),9.82(s,1H,NH).
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺[13]
M.p.152.7-154.3℃.MS:[M+H]+=332.6(C17H15F3N4要求332.3).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.26(s,3H,CH3),2.48(s,3H,CH3),6.56(s,1H,吡咯基-H),6.92(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),7.29(m,1H,Ph-H),7.55(m,1H,Ph-H),8.03(m,1H,Ph-H),8.42-7.45(m,2H,嘧啶基-H和Ph-H),9.73(s,1H,NH),10.83(br.s,1H,NH).
(3-氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[14]
M.p.140.4-144.2℃.MS:[M+H]+=299.5(C16H15ClN4要求298.8).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.21(s,3H,CH3),2.44(s,3H,CH3),6.51(s,1H,吡咯基-H),6.85(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),6.94(d,1H,J=7.6Hz,Ph-H),7.28(t,1H,J=8.1Hz,Ph-H),7.61(d,1H,J=8.2Hz,Ph-H),8.19(s,1H,Ph-H),8.37(d,1H,J=5.3Hz,嘧啶基-H),9.55(s,1H,NH),10.78(br.s,1H,NH).
N-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺[15]
M.p.179.9-182.1℃.MS:[M+H]+=307.3(C18H21N5要求307.4).1H-NMR(CDCl3)δ:2.25(s,3H,CH3),2.46(s,3H,CH3),2.91(s,6H,CH3),6.46(s,1H,吡咯基-H),6.70(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),6.78(dd,2H,J=6.8,2.2Hz,Ph-H),6.79(br.s,1H;NH),7.45(dd,2H,J=6.8,2.2Hz,Ph-H),7.80(br.s,1H,NH),8.28(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H).
(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[16]
M.p.185.0-187.4℃.MS:[M+H]+=423.9(C16H14ClIN4要求424.7).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.18(s,3H,CH3),2.41(s,3H,CH3),6.48(s,1H,吡咯基-H),6.84(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),7.40(dd,1H,J=8.8,2.4Hz,Ph-H),7.75(d,1H,J=8.8Hz,Ph-H),8.34(m,1H,Ph-H),8.36(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),9.61(s,1H,NH),10.75(s,1H,NH).
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-氟-4-碘-苯基)-胺[17]
M.p.200-202℃.MS:[M+H]+=407.4(C16H14FIN4要求408.2).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.18(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),6.48(s,1H,吡咯基-H),6.84(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),7.35(m,1H,Ph-H),7.64(t,1H,J=8.0Hz,Ph-H),8.02(dd,1H,J=12.0,2.2Hz,Ph-H),8.36(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),9.65(s,1H,NH),10.75(s,1H,NH).
实施例3
4-(3-二甲氨基-丙烯酰基)-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
将氰基乙酸乙酯(10ml,94mmol)用AcOH(20ml)稀释,将溶液冷却至-10℃(冰-MeOH浴)。将NaNO2(6.5g,94mmol)溶于H2O(10ml),历经40分钟滴加溶液,保持内部温度<0℃。加入完成后,将反应混合物搅拌1小时,同时冷却。然后温热至室温,搅拌另外3小时。将混合物用乙酸(50ml)和H2O(50ml)稀释。加入戊烷-2,4-二酮(10.6ml,103mmol),将混合物加热至75℃。历经30分钟向该反应混合物分批加入锌粉(6.9g,105mmol),加入速率保持内部温度<90℃。然后将反应混合物另外加热30分钟,再倒入H2O(1ml)中。从反应混合物中过滤出3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈(3.67g),为灰白色固体。将滤液用EtOAc萃取(3 x 500ml)。合并有机萃取液,洗涤(盐水),干燥(MgSO4)。蒸发溶剂得到褐色的油,经过色谱纯化(100g SiO2;用4:1庚烷/EtOAc洗脱),得到另一批(4.41g)该产物,为淡黄色固体(总收率72%)。
将3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈(1.2g,10mmol)溶于无水1,2-二氯乙烷(15ml),逐批加入AlCl3(2.93g,22mmol)。在反应容器中充入N2,在冰水浴中冷却。滴加AcCl(0.71ml,10mmol),将混合物搅拌1小时,同时冷却,并在室温另外搅拌3小时。小心地加入2M HCl水溶液,终止反应混合物。加入NaHCO3调节混合物的酸度至大约pH6。分离有机相后,含水相用EtOAc萃取(3 x 100ml)。合并有机相,洗涤(先H2O后盐水),干燥(MgSO4),过滤。蒸发溶剂,得到4-乙酰基-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈(1.42g,88%),为淡黄褐色固体。1H-NMR(CDCl3)δ:2.44(s,3H,CH3),2.45(s,3H,CH3),2.54(s,3H,CH3),8.75(br.s,1H,NH).
将4-乙酰基-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈(1.38g,8.51mmol)悬浮在1,1-双-二甲氨基-3,3-二甲基-丁-2-酮(1.3ml)中,在75℃下加热42小时。蒸发反应混合物至干,残余物经过SiO2色谱纯化(庚烷/EtOAc),得到标题化合物(1.2g,65%),为淡黄褐色固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.21(s,3H,CH3),2.31(s,3H,CH3),3.32(s,6H,CH3),5.22(d,1H,J=12.4Hz,CH),7.47(d,1H,J=12.4Hz,CH),11.96(br.s,1H,NH).
实施例4
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈[31]
向4-(3-二甲氨基-丙烯酰基)-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈(1.0mmol,0.22g)与硝酸3-硝基苯基胍(1.5mmol,0.36g)在2-甲氧基乙醇(5ml)中的混合物加入K2CO3(138mg,1.0mmol)。将反应混合物在N2下120℃加热18小时。蒸发溶剂至干,残余物经过快速色谱纯化(1:2 EtOAc/庚烷),得到标题化合物,为浅黄色固体。M.p.258-259℃.MS:[M+H]+=336.1(C17H14N6O2要求334.3).1H-NMR(CD3OD)δ:2.39(s,3H,CH3),2.49(s,3H,CH3),6.94(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.50(t,1H,J=8.3Hz,Ph-H),7.81(m,1H,Ph-H),7.94(m,1H,Ph-H),8.45(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),8.94(t,1H,J=2.2Hz,Ph-H).
按照类似于上述的方式制备下列化合物:
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[32]
MS:[M+H]+=307.7(C17H14FN5要求307.3).
1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.30(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),6.84(d,1H,J=5.0Hz,嘧啶基-H),7.00(m,2H,Ph-H),7.73(m,2H,Ph-H),8.40(d,1H,J=5.5Hz,嘧啶基-H),9.46(s,1H,NH),12.19(br.s,1H,NH).
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[33]
M.p.272-276℃.MS:[M+H]+=305.8(C17H15N5O要求305.3).1H-NMR(CD3OD)δ:2.33(s,3H,CH3),2.41(s,3H,CH3),6.74-6.56(m,3H,嘧啶基-H/Ph-H),7.36(d,2H,J=8.5Hz,Ph-H),8.25(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H).
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈[34]
M.p.195.6-198.9℃.MS:[M+H]+=357.7(C18H14F3N5要求357.3).1H-NMR(CDCl3)δ:2.33(s,3H,CH3),2.44(s,3H,CH3),6.75(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.20(br.s,1H,NH),7.50(d,2H,J=8.8Hz,Ph-H),7.71(d,2H,J=8.8Hz,Ph-H),8.39(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基),8.40(br.s,1H,NH).
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[35]
M.p.178.3-181.2℃.MS:[M+H]+=416.6(C18H14IN5要求415.2).1H-NMR(CDCl3)δ:2.39(s,3H,CH3),2.49(s,3H,CH3),6.76(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.10(br.s,1H,NH),7.44(d,2H,J=8.8Hz,Ph-H),7.61(d,2H,J=8.8Hz,Ph-H),8.42(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),8.45(br.s,1H,NH).
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[36]
M.p.247-250℃.MS:[M+H]+=305.8(C17H15N5O要求305.3).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.31(s,3H,CH3),2.41(s,3H,CH3),6.33(m,1H,Ph-H),6.82(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.01(t,1H,J=8.1Hz,Ph-H),7.11(m,1H,Ph-H),7.33(t,1H,J=2.1Hz,Ph-H),8.40(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),9.18(s,1H),9.30(s,1H),12.20(br.s,1H,NH).
3,5-二甲基-4-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈[37]
M.p.233-237℃.MS:[M+H]+=350.0(C18H16N6O2要求348.6).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.31(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3),2.44(s,3H,CH3),6.92(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),7.39(d,1H,J=8.5Hz,Ph-H),7.87(dd,1H,J=8.1,1.7Hz,Ph-H),8.48(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),8.63(d,1H,J=1.7Hz,Ph-H),9.87(s,1H,NH),12.21(br.s,1H,NH).
4-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[38]
M.p.189.5-191.7℃.MS:[M+H]+=431.5(C18H16IN5要求429.6).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.29(s,3H,CH3),2.32(s,3H,CH3),2.43(s,3H,CH3),6.85(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.20(d,1H,J=8.1Hz,Ph-H),7.57(m,1H,Ph-H),8.41-8.43(m,2H,Ph-H,嘧啶基-H),9.48(s,1H,NH),12.20(br.s,1H,NH).
4-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[39]
M.p.194.2-197.9℃.MS:[M+H]+=338.0(C18H16ClN5要求337.8).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.27(s,3H,CH3),2.31(s,3H,CH3),2.41(s,3H,CH3),6.86(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),7.28(d,1H,J=8.5Hz,Ph-H),7.61(dd,1H,J=8.8,2.4Hz,Ph-H),7.73(d,1H,J=2.7Hz,Ph-H),8.43(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),9.51(s,1H,NH),12.21(br.s,1H,NH).
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[40]
M.p.221-225℃.MS:[M+H]+=320.9(C18H17N5O要求319.4).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.03(s,3H,CH3),2.29(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),6.78(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),689(d,1H,J=8.1Hz,Ph-H),7.02(dd,1H,J=8.3,1.7Hz,Ph-H),7.29(d,1H,J=0.7Hz,Ph-H),8.37(d,1H,J=4.9Hz,嘧啶基-H),9.08(s,1H),9.20(s,1H),12.17(br.s,1H,NH).
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[41]
M.p.161.3-164.1℃.MS:[M+H]+=321.6(C18H16FN5要求321.4).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.19(s,3H,CH3),2.30(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3),6.82(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.03(t,1H,J=9.3Hz,Ph-H),7.53(m,1H,Ph-H),7.61(dd,1H,J=7.1,2.4Hz,Ph-H),8.39(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),9.36(s,1H,NH),12.20(br.s,1H,NH).
4-[2-(3-氟-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[42]
M.p.177.7-179.9℃.MS:[M+H]+=322.5(C18H16FN5要求321.3).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.15(s,3H,CH3),2.30(s,3H,CH3),2.43(s,3H,CH3),6.86(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.13(t,1H,J=9.0Hz,Ph-H),7.36(dd,1H,J=8.1,1.7Hz,Ph-H),7.75(dd,1H,J=12.9,1.5Hz,Ph-H),8.43(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),9.56(s,1H,NH),12.21(br.s,1H,NH).
4-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈[43]
M.p.190.6-193.7℃.MS:[M+H]+=334.7(C19H20N6要求332.4).1H-NMR(CDCl3)δ:2.36(s,3H,CH3),2.46(s,3H,CH3),2.94(br.s,6H,CH3),6.66(d,1H,J=5.6Hz,嘧啶基-H),6.79-6.80(m,2H,Ph-H),7.05(br.s,1H,NH),7.40-7.43(m,2H,Ph-H),8.34(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),8.52(br.s,1H,NH).
实施例5
4-(3-二甲氨基-丙烯酰基)-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
将1-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-乙酮(1.1g,10mmol)部分溶于2M氨的MeOH溶液,历经40分钟滴加H2O2(10ml 27%w/w的H2O溶液),加入速率保持内部温度≤30℃。将混合物室温搅拌18小时。过滤所得悬浮的白色固体,从EtOAc中重结晶,得到4-乙酰基-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(1.06g)。在N2充气过的烧瓶内,将等分试样(720mg,4mmol)悬浮在1,1-双-二甲氨基-3,3-二甲基-丁-2-酮(2ml,9.6mmol)中,在75℃下加热48小时。将粗混合物冷却,经过SiO2色谱纯化(EtOAc/MeOH梯度洗脱)。得到标题化合物(449mg),为浅黄色固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.30(s,3H,CH3),2.46(s,3H,CH3),2.90(br.s,2H,NH).3.09(s,3H,CH3),3.13(s,3H,CH3),5.23(d,1H,J=12.4Hz,CH),7.38(d,1H,J=12.7Hz,CH),10.97(br.s,1H,NH).
实施例6
4-[2-(4-氟-苯基氨基)嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺[44]
将4-(3-二甲氨基-丙烯酰基)-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(100mg,0.43mmol)、硝酸4-氟苯基胍(139mg,0.65mmol)和K2CO3(94mg,0.68mmol)部分溶于2-甲氧基乙醇(5ml),在120℃加热18小时。在真空中浓缩混合物,经过SiO2色谱纯化(EtOAc/MeOH梯度洗脱)。在iPr2O中研磨粗产物,得到标题化合物(31mg),为浅黄色固体。M.p.93.5-96.8℃.MS:[M+H]+=326.9(C17H16FN5O要求325.3).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.36(s,3H,CH3),2.39(s,3H,CH3),6.79(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),6.92(br.s,2H,NH),7.07(t,2H,J=8.5Hz,Ph-H),7.76-7.78(m,2H,Ph-H),8.36(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),9.41(s,1H,NH),11.24(br.s,1H,NH).
实施例7
3-二甲氨基-1-(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)-丙烯酮
将戊烷-2,4-二酮(10.3ml,0.1mol)用AcOH稀释,冷却至0℃。将NaNO2(6.9g,0.1mol)溶于H2O(10ml)中并滴加,同时保持内部温度≤10℃。将混合物搅拌1小时,同时冷却,然后在室温搅拌3小时。将乙酰乙酸乙酯(14ml,0.11mol)溶于1:1 AcOH/H2O(100ml),加入锌粉(7.19g,0.11mol)。向其中加入肟溶液,将混合物在100℃加热30分钟,然后倒入H2O(0.8L)中。含水混合物用EtOAc萃取(3 x 500ml)。合并有机萃取液,洗涤(盐水),干燥(MgSO4),过滤,在真空中蒸发。残余物经过SiO2色谱纯化(庚烷/EtOAc梯度洗脱),得到5-乙酰基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(4.32g)。将等分试样(3.5g,16.7mmol)加入到KOH(4.22g,75.3mmol)的H2O(5ml)溶液中,将混合物在130℃加热18小时。然后冷却,用H2O(50ml)稀释,用2M HCl水溶液酸化。该混合物用EtOAc萃取(3 x 50ml)。合并有机萃取液,洗涤(盐水),干燥(MgSO4),过滤,在真空中蒸发。残余物经过SiO2色谱纯化(EtOAc),得到1-(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)-乙酮(1.05g)。在N2充气过的烧瓶内,将等分试样(536mg,3.9mmol)悬浮在N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(1.2ml,8.8mmol)中,在90℃下加热48小时。将混合物冷却,在冷EtOAc中研磨。过滤所得沉淀,用EtOAc洗涤,得到标题化合物(444mg),为浅黄色固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ:1.41(s,3H,CH3),2.23(s,3H,CH3),2.23(br.s,6H,CH3),4.77(d,1H,J=12.4Hz,CH),4.95(s,1H,吡咯基-H),6.85(d,1H,J=12.4Hz,CH).
实施例8
[4-(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺[45]
将3-二甲氨基-1-(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)-丙烯酮(125mg,0.65mmol)、硝酸4-氟苯基胍(211mg,0.98mmol)和K2CO3(149mg;1.08mmol)部分溶于2-甲氧基乙醇中,在120℃加热18小时。在真空中浓缩混合物,经过SiO2色谱纯化(5-g Isolute SITM柱体,用庚烷/EtOAc梯度洗脱)。在iPr2O中研磨粗产物,得到标题化合物(158mg),为浅黄色固体。M.p.168.4-171.5℃.MS:[M+H]+=283.9(C16H15FN4要求282.3).1H-NMR(CDCl3)δ:2.30(s,3H,CH3),2.35(s,3H,CH3),5.85(s,1H,吡咯基-H),6.83(d,1H,J=5.6Hz,嘧啶基-H),6.87(br.s,1H,NH),7.05(t,2H,J=8.5Hz,Ph-H),7.51-7.54(m,2H,Ph-H),8.26(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),9.08(br.s,1H,NH).
实施例9
3-二甲氨基-1-(1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-丙烯酮
将KOH(818mg,14.6mmol)部分溶于DMSO(15ml)中,搅拌5分钟。分小批量加入1-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-乙酮(1g,7.3mmol),将混合物搅拌45分钟。滴加碘甲烷(0.54ml,8.75mmol),加入速率保持内部温度≤30℃。将混合物另外搅拌45分钟,然后倒入H2O(50ml)中,用Et2O萃取(3 x 60ml)。合并有机萃取液,洗涤(盐水),干燥(MgSO4),过滤,在真空中蒸发,得到1-(1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-乙酮(1.06g),为粉红色固体。在N2充气过的烧瓶内,将其悬浮在1,1-双-二甲氨基-3,3-二甲基-丁-2-酮(3.6ml,17.5mmol)中,在70℃下加热36小时。在真空中蒸发混合物,在EtOAc中研磨残余物。得到标题化合物(973mg),为微红色固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ:1.30(s,3H,CH3),1.51(s,3H,CH3),2.20(br.s,6H,CH3),2.66(s,3H,CH3),4.57(d,1H,J=12.5Hz,CH),5.53(s,1H,吡咯基-H),6.72(d,1H,J=12.7Hz,CH).
实施例10
(4-氟-苯基)-[4-(1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[46]
将3-二甲氨基-1-(1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-丙烯酮(150mg,0.73mmol)、硝酸4-氟苯基胍(189mg,0.87mmol)和K2CO3(144mg,1.04mmol)部分溶于2-甲氧基乙醇(3ml),在110℃加热36小时。在真空中浓缩混合物,经过SiO2色谱纯化(庚烷/EtOAc梯度洗脱)。从iPr2O/庚烷中重结晶后,得到标题化合物(20mg),为微褐色固体。M.p.124.2-128.3℃.MS:[M+H]+=298.4(C17H17FN4要求296.3).1H-NMR(CDCl3)δ:2.21(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3),3.51(s,3H,CH3),6.40(s,1H,吡咯基-H),6.76(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),7.01(t,2H,J=8.8Hz,Ph-H),7.58-7.61(m,2H,Ph-H),7.70(br.s,1H,NH),8.28(d,1H,J=5.6Hz,嘧啶基-H).
实施例11
3-二甲氨基-1-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-丙烯酮
在室温下,向Ac2O(5ml)中滴加HNO3(0.28ml的69%w/v水溶液,4.37mmol),同时保持内部温度≤25℃。将硝化混合物在室温下搅拌15分钟,然后冷却至-40℃。将1-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-乙酮(500mg,3.64mmol)溶于Ac2O(6ml)中,滴加,同时保持内部温度≤-30℃。将混合物在-40℃搅拌30分钟,然后在-10℃下搅拌另外30分钟。将混合物倒入冰水(50ml)中,用Et2O萃取(3 x 60ml)。合并有机萃取液,洗涤(盐水),干燥(Na2SO4),过滤,在真空中蒸发,得到深褐色固体。从MeOH中重结晶,得到1-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-乙酮(158mg)。在N2充气过的烧瓶内,将等分试样(150mg,0.82mmol)悬浮在1,1-双-二甲氨基-3,3-二甲基-丁-2-酮(0.42ml,2.02mmol)中,在70℃下加热18小时。在EtOAc中研磨混合物,得到标题化合物(119mg),为褐色固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.30(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),2.80(br.s,3H,CH3),3.07(br.s,3H,CH3),5.19(d,1H,J=12.7Hz,CH),7.45(d,1H,J=12.4Hz,CH),12.76(br,1H,NH).
实施例12
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺[47]
将3-二甲氨基-1-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-丙烯酮(110mg,0.46mmol)、硝酸4-氟苯基胍(150mg,0.7mmol)和K2CO3(193mg,1.4mmol)部分溶于2-甲氧基乙醇中,在120℃下加热18小时。在真空中浓缩混合物,经过SiO2色谱纯化(庚烷/EtOAc梯度洗脱)。在iPr2O中研磨粗产物,得到标题化合物(22mg),为淡橙色固体。M.p.166.3-170.1℃.MS:[M+H]+=329.3(C16H14F7N5O2要求327.3).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.49(s,3H,CH3),2.59(s,3H,CH3),6.73(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.04(t,2H,J=8.8Hz,Ph-H),7.07(br.s,1H,NH),7.55-7.58(m,2H,Ph-H),8.44(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),9.40(br.s,1H,NH).
按照类似的方式制备下列化合物:
N-[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺[48]
M.p.265-268℃.MS:[M+H]+=353.0(C18H20N6O2要求352.4).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.39(s,3H,CH3),2.48(br.s,6H,CH3),2.82(s,3H,CH3),6.69(d,2H,J=9.0Hz,Ph-H),6.74(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.50(d,2H,J=9.0Hz,Ph-H),8.38(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),9.18(s,1H,NH),13.00(br.s,1H,NH).
实施例13
[4-(5-氨基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺[49]
将[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺(45mg,0.14mmol)溶于EtOH(3ml)中,加入10%Pd(C)催化剂(10mg),然后加入水合肼(48μl的55%w/w水溶液,0.84mmol)。将混合物加热回流18小时。使冷却后的混合物通过Celite过滤助器过滤,真空蒸发滤液。残余物经过SiO2色谱纯化(20:1 EtOAc/2M氨的MeOH溶液),得到标题化合物(14mg),为黄色固体。M.p.227-231℃.MS:[M+H]+=397.8(C16H16FN5要求297.3).1H-NMR(CDCl3)δ:1.98(s,3H,CH3),2.37(s,3H,CH3),4.86(br.s,2H,NH2),6.65(d,1H,J=4.9Hz,嘧啶基-H),7.03(t,2H,J=8.3Hz,Ph-H),7.49(br.s,2H,NH),7.58-7.61(m,2H,Ph-H),8.53(d,1H,J=4.9Hz,嘧啶基-H).
实施例14
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺[50]
将[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺(80mg,0.28mmol)溶于THF(4ml)中,冷却至-50℃。将N-溴代琥珀酰亚胺(55mg,0.31mmol)溶于THF(2ml)中,滴加,同时保持内部温度≤-40℃。将混合物搅拌1小时,同时冷却,然后在真空中蒸发。将残余物用H2O(10ml)处理,用EtOAc萃取(3 x 10ml)。合并有机萃取液,洗涤(盐水),干燥(MgSO4),过滤,在真空中蒸发。粗产物经过SiO2色谱纯化(庚烷/EtOAc梯度洗脱),从iPr2O中重结晶后得到标题化合物(19mg),为橙色固体。M.p.181.4-183.3℃.MS:[M+H]+=362.9(C16H14BrFN4要求361.2).1H-NMR(CDCl3)δ:2.10(s,3H,CH3),2.36(s,3H,CH3),6.56(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),6.97(t,2H,J=8.3Hz,Ph-H),7.00(br.s,1H,NH),7.79-7.52(m,2H,Ph-H),8.85(br.s,1H,NH),8.26(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H).
按照类似的方式制备下列化合物:
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺[51]
M.p.198.1-203℃.MS:[M+H]+=389.3(C16H14BrN5O4要求361.2).1H-NMR(CDCl3)δ:2.49(s,3H,CH3),2.59(s,3H,CH3)6.73(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),7.04(t,2H,J=8.8Hz,Ph-H),7.57(m,2H,Ph-H),7.90(br.s,1H,NH),8.44(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),9.40(br.s,1H,NH).
实施例15
[4-(5-氯-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺[52]
将[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺(80mg,0.28mmol)溶于THF(4ml)中,冷却至-60℃。将N-氯代琥珀酰亚胺(41mg,0.31mmol)溶于THF(2ml)中,滴加,同时保持内部温度≤-50℃。将混合物搅拌30分钟,同时冷却,然后在真空中蒸发。将残余物用H2O(10ml)处理,用EtOAc萃取(3 x 10ml)。合并有机萃取液,洗涤(盐水),干燥(MgSO4),过滤,在真空中蒸发。粗产物经过SiO2色谱纯化(庚烷/EtOAc梯度洗脱),从iPr2O中重结晶后得到标题化合物(37mg),为橙色固体。M.p.200-203℃.MS:[M+H]+=317.7(C16H14ClFN4要求316.8).1H-NMR(CDCl3)15.2.17(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3)6.77(d,1H,J=5.9Hz,嘧啶基-H),7.02-7.06(m,3H,Ph-H,NH),7.54-7.56(m,2H,Ph-H),7.95(br.s,1H,NH),8.25(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H).
实施例16
[4-(5-二乙氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺[53]
将二乙胺(40μl,0.31mmol)用甲醇(0.5ml)稀释,加入甲醛(30μl的37%w/w水溶液,0.37mmol)。分小批量加入[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺(87mg,0.31mmol),将混合物加热至回流。1.5小时后,将混合物用H2O(10ml)稀释。过滤所得沉淀,在2M HCl水溶液中研磨。过滤混合物,滤液用2M NaOH水溶液洗涤。滤液用EtOAc萃取(3 x 15ml)。合并有机萃取液,洗涤(盐水),干燥(MgSO4),过滤,在真空中蒸发。粗产物经过SiO2色谱纯化(庚烷/EtOAc梯度洗脱),从iPr2O中重结晶后得到标题化合物(36mg),为橙色固体。M.p.71.9-74.2℃.MS:[M+H]+=367.7(C21H26FN5要求367.5).1H-NMR(CD3OD)δ:1.10(t,6H,J=7.1Hz,CH3),2.19(s,3H,CH3),2.41(s,3H,CH3),2.58(t,4H,J=7.8Hz,CH2),3.56(s,2H,CH2),6.78(d,1H,J=5.6Hz,嘧啶基-H),7.00(t,2H,J=8.5Hz,Ph-H),7.61-7.63(m,2H,Ph-H),8.22(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H).
按照类似的方式制备下列化合物:
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟苯基)-胺[54]
M.p.88.4-91.6℃.
MS:[M+H]+=340.6(C19H22FN5要求339.4).
1H-NMR(CDCl3)δ:2.18(s,3H,CH3),2.56(s,6H,CH3),2.42(s,3H,CH3),3.38(s,2H,CH2),6.75(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),7.00(t,2H,J=8.6Hz,Ph-H),7.13(br.s,1H,NH),7.56-7.59(m,2H,Ph-H),8.31(d,1H,J=5.1Hz,嘧啶基-H),8.55(br.s,1H,NH).
[4-(2,4-二甲基-5-吗啉-4-基甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟苯基)-胺[55]
M.p.94.7-97.6℃.MS:[M+H]+=382.1(C21H24FN5O要求381.5).1H-NMR(DMSO-d6)δ:2.12(s,3H,CH3),2.33-2.35(m,7H,CH3,CH2),3.55(m,4H,CH2),4.03(s,2H,CH2),6.73(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),7.08(t,2H,J=9.0Hz,Ph-H),7.74-7.78(m,2H,Ph-H),8.28(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),9.27(s,1H,NH),10.76(s,1H,NH).
{4-[2,4-二甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吡咯-3-基]-嘧啶-2-基}-(4-氟-苯基)-胺[56]
M.p.120.4-123.1℃.MS:[M+H]+=396.4(C22H27FN5要求394.5).
1H-NMR(CDCl3)δ:1.62(br.s,4H,CH2),2.10(s,3H,CH3),2.34(s,3H,CH3),2.37(s,3H,CH3),2.43(br.s,4H,CH2),3.42(s,2H,CH2),6.67(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),6.91-6.96(m,3H,Ph-H,NH),7.50-7.52(m,2H,Ph-H),8.24(d,1H,J=5.4Hz,嘧啶基-H),8.30(br.s,1H,NH).
实施例17
所选择的化合物的激酶特异性
从上述实施例中选择一些化合物,研究了它们的激酶选择性。使用一组蛋白激酶,包括与本发明有关的CDKs,以及一定数量的代表性功能上无关的激酶。
关于CDK4/细胞周期蛋白D1、CDK2/细胞周期蛋白E、CDK1/细胞周期蛋白B激酶的测定法可以在适当的***中监测GST-Rb的磷酸化作用。因而,由CDK4/细胞周期蛋白D1、CDK2/细胞周期蛋白E或CDK1/细胞周期蛋白B诱导的GST-Rb磷酸化,在96孔形式的体外激酶分析中,利用放射性标记ATP,通过GST-Rb(772-928)中放射性标记的磷酸掺入而进行测定。磷酸化反应混合物(总体积40μl)由50mM HEPES pH7.4,20mM MgCl2,5mM EGTA,2mM DTT,20mM β-甘油磷酸酯,2mMNaF,1mM Na3VO4,蛋白酶抑制剂鸡尾酒试剂(Sigma,见上),BSA0.5mg/ml,1μg纯化酶复合体,10μl GST-Rb-琼脂糖珠粒,100μM ATP,0.2μCi32P-ATP组成。在持续摇动下,反应在30℃进行30分钟。反应结束时,向每孔加入100μl的50mM HEPES,pH7.4和1mM ATP,将总容量转移至GFC滤板上。将平板用200μl的50mM HEPES,pH7.4和1mM ATP洗涤5次。向每孔加入50μl闪烁液体,在闪烁计数器(Topcount,HP)上测量样本的放射性。利用GraFit软件计算不同肽的IC50值。
作为替代选择,CDK2/细胞周期蛋白A激酶测定法可以在96孔板中、使用重组CDK2/细胞周期蛋白A进行。测定缓冲液由25mM β-甘油磷酸酯,20mM MOPS,5mM EGTA,1mM DTT,1mM NaVO3,pH7.4组成,向其中加入2~4μg的CDK2/细胞周期蛋白A和底物pRb(773-928)。加入Mg/ATP混合物(15mM MgCl2,100μM ATP,每孔30-50k的Bq[γ-32P]-ATP)引发反应,将混合物在30℃孵育10~30分钟,视需要而定。在冰上终止反应,然后通过p81滤板(Whatman Polyfiltronics,Kent,UK)过滤。用75mM正磷酸洗涤3次后,将平板干燥,加入闪烁剂,在闪烁计数器(TopCount,Packard Instruments,Pangbourne,Berks,UK)中测量所掺入的放射性。
PKCα激酶活性可以测量组蛋白3中掺入的放射性标记的磷酸酯而进行测定,如下所述。反应混合物(总体积65μl),由50mM Tris-HCl,1mM乙酸钙,3mM DTT,0.03mg/ml磷脂酰丝氨酸,2.4μg/ml PMA,0.04% NP40,12mM MgCl2,纯化PKCα 100ng,组蛋白30.2mg/ml,100μM ATP,0.2μCi[γ-32P]-ATP组成。在微量平板摇动器中,在37℃下进行反应15分钟,加入10μl 75mM正磷酸终止反应,将平板置于冰上。将50μl反应混合物转移至P81滤板上,洗去游离放射性磷酸(每孔用200μl 75mM正磷酸洗涤3次)后,向每孔加入50μl闪烁液体(Microscint 40),在闪烁计数器(Topcount,HP)上测量放射性。
用在所述测量法中的CDK2和/或PKC可以从可得到的来源获得,或者可以利用重组方法制备,如下所述。在用适当杆状病毒构建体感染的Sf9昆虫细胞中,组氨酸标记的CDK2/细胞周期蛋白E和CDK1/细胞周期蛋白B可以被共同表达,PKCα被单一表达。感染后两天,低速离心收集细胞,利用金属螯合物色谱从昆虫细胞粒状沉淀中纯化蛋白质。简言之,利用超声波处理,使昆虫细胞粒状沉淀在缓冲液A(10mMTris-HCl,pH8.0,150mM NaCl,0.02% NP40,5mM β-巯基乙醇,1mM NaF,1mM Na3VO4,以及含AEBSF、胃酶抑制剂A、E 64、苯丁抑制素、亮肽素的蛋白酶抑制剂鸡尾酒试剂(Sigma),)中裂解。离心清楚显示可溶性部分,上样到Ni-NTA-琼脂糖(Quiagen)上。用含300mM NaCl、5~15mM咪唑的缓冲液A洗去未结合的蛋白质,用含250mM咪唑的缓冲液A洗脱已结合的蛋白质。将纯化后的蛋白质对贮存缓冲液(20mM HEPES pH7.4,50mM NaCl,2mM DTT,1mM EDTA,1mM EGTA,0.02% NP40,10%v/v甘油)进行大范围透析,后者分装并贮存在-70℃。PKCα-6xHis可以用相同方式纯化,但是使用不同的缓冲液:50mM NaH2PO4,pH8.0和0.05% Triton X-100分别代替Tris和NP40。
下表1结果显示考察的化合物对CDK的抑制作用表现出高度的选择性。
表1
化合物 | CDK2/细胞周期蛋白E(IC<sub>50</sub>,μM) | 化合物 | CDK2/细胞周期蛋白E(IC<sub>50</sub>,μM) |
1 | 1.0±0.7 | 38 | 0.86 |
2 | 0.04 | 39 | 1.02 |
3 | 0.5 | 40 | 0.15 |
4 | 1.3±0.4 | 41 | 0.05 |
5 | 1.7 | 42 | 0.76 |
6 | 1.3 | 43 | 0.54 |
7 | 2.9 | 44 | 0.22 |
8 | 1.4 | 46 | 1.79 |
12 | 0.90 | 47 | 0.06 |
16 | 1.52 | 48 | 0.96 |
17 | 1.73 | 50 | 0.55 |
31 | 0.03 | 51 | 0.37 |
32 | 0.09 | 52 | 0.73 |
33 | 0.09 | 53 | 0.87 |
34 | 0.18 | 54 | 0.14 |
35 | 0.55 | 55 | 0.87 |
36 | 0.04 | 56 | 1.51 |
37 | 0.39 |
实施例18
所选择的化合物的抗增殖效果
从上述实施例中选择的化合物,使用不同的人肿瘤细胞系进行标准细胞增殖测定。进行标准的72-小时MTT(噻唑基蓝;3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑鎓溴化物)测定(Haselsberger,K.;Peterson,D.C.;Thomas,D.G.;Darling,J.L.Anti Cancer Drugs 1996,7,331-8;Loveland,B.E.;Johns,T.G.;Mackay,I.R.;Vaillant,F.;Wang,Z.X.;Hertzog,P.J.Biochemistry International 1992,27,501-10)。人肿瘤细胞系是从ATCC(American Type Culture Collection,10801 University Boulevard,Manessas,VA 20110-2209,USA)获得的。
下表2结果阐明本申请所述化合物的抗增殖效果。
表2
Claims (31)
1、通式I化合物:
其中:
X1和X2之一是NR10,X1和X2的另一个是CR9;
Z是NH;
R1是H、烷基、吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基、卤代、NO2、CN、(R″′)nNH2、(R″′)nNH-R′、(R″′)nN-(R′)(R")、CONH2、CONH-R′、CON-(R′)(R")或CF3,其中烷基和吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基可以进一步被选自卤代、NO2、CN、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基团取代;其中烷基具有1~8个碳原子;
R2是具有1~8个碳原子的烷基;
R3是H;
R5、R6和R7彼此独立地是H、C1-4烷基、卤代、NO2、OH、NH2、NH-R′、N-(R′)(R")或CF3;
R4和R8彼此独立地是H或者卤代;
其中R′、R"和R″′各自独立地是可以相同或不同的烷基,其中所述的烷基具有1~8个碳原子,n是0或1;
R9和R10独立地是H或烷基,其中所述的烷基具有1~8个碳原子;
其条件是
(i)当R1和R2是H,X1是NH,X2是CH,R3是H;则苯基不被3-(1,1,2,2-四氟乙氧基),
3,4,5-三甲氧基取代,并且
(ii)当R1和R2是H,X1是NH或NMe,并且R3是H;则苯基不为未取代的形式,
4-乙基苯基,
3-甲基苯基,
其他基团R4-R8是H;
及其药学上可接受的盐。
2、根据权利要求1的化合物,其中:
X1和X2分别是CR9和NH;
R1选自H、烷基、吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基、卤代、NO2、CN、(R″′)nNH2、(R″′)nNH-R′、(R″′)nN-(R′)(R")、CONH2、CONH-R′、CON-(R′)(R")以及CF3,其中所述的烷基可以进一步被选自卤代、NO2、CN、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基团取代;
R5~R7各自独立地选自H、卤代、硝基、氨基、氨基烷基、羟基、N-(R′)(R")和C1-4烷基。
3、根据权利要求1的化合物,其中R1是H、卤代、CN、NO2、CONH2、(R″′)N(R′)(R")、C1-4烷基、吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基。
4、根据权利要求3的化合物,其中若R1是卤代,则它选自氯或溴;若R1是烷基氨基,则它是二乙氨基甲基或二甲氨基甲基;当R1是杂环基,则它是吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基。
5、根据权利要求1的化合物,其中R1是H或CN,R2和R9都是甲基。
6、根据权利要求5的化合物,其中R1是H。
7、根据权利要求5的化合物,其中R1是CN。
8、根据权利要求1的化合物,其中:
R5、R6和R7彼此独立地是H、未取代的C1-4烷基、卤代、NO2、OH、N-(R′)(R")或CF3;
其中R′、R"和R″′各自独立地是可以相同或不同的烷基,其中所述的烷基具有1~8个碳原子,n是0或1。
9、根据权利要求8的化合物,其中R5至R7独立地选自H、F、NH2、NO2、OH、Cl、Br、I、CF3和二甲氨基。
10、根据权利要求9的化合物,其中R4和R8都是氢。
11、根据权利要求1的化合物,选自2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基吡咯-3-基)嘧啶胺类,其中该苯基被F、NH2、NO2、OH、Cl、Br、I、CF3中至少一个所3-、4-或5-取代。
12、根据权利要求11的化合物,其中该苯基被F、NH2、NO2、OH、Cl、Br、I、CF3在3-、4-或5-位中任一位置进行单取代,或者被2,4-二氟、3,5-二氟、3,4-二氟、2,4-二氯、3,5-二氯、3,4-二氯或4-氯-3-三氟甲基进行二取代。
13、根据权利要求1的化合物,选自2-[N-(苯基)]-4-(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈)嘧啶胺类,其中该苯基被F、N(CH3)2、NO2、OH、Cl、Br、I或CF3中至少一个所3-或4-取代。
14、根据权利要求13的化合物,其中该苯基被F、N(CH3)2、NO2、OH、I或CF3在3-或4-位任一位置单取代,或者被4-甲基-3-硝基、3-碘-4-甲基、4-氯-3-甲基、3-羟基-4-甲基、4-氟-3-甲基或4-甲基-3-氟进行二取代。
15、根据权利要求1的化合物,选自2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)嘧啶胺类,其中该苯基被F、N(CH3)2、NO2、OH、I或CF3在4-位单取代。
16、根据权利要求15的化合物,其中该苯基被氟或NH(CH3)2基团取代。
17、根据权利要求1的化合物,选自2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基-5-卤代-1H-吡咯-3-基)嘧啶胺,其中该苯基被F、N(CH3)2、NO2、OH、I或CF3在3-或4-位单取代。
18、根据权利要求17的化合物,其中该苯基被4-氟或3-硝基取代,该卤代基团是氯或溴。
19、根据权利要求1的化合物,选自2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基-5-二烷基氨基烷基-1H-吡咯-3-基)嘧啶胺类,其中该苯基被F、N(CH3)2、NO2、OH、I或CF3在4-位单取代。
20、根据权利要求19的化合物,其中该苯基被氟取代,该二烷基氨基烷基为二乙氨基甲基或二甲氨基甲基。
21、根据权利要求1的化合物,选自2-[N-(苯基)]-4-(2,4-二甲基-5-杂环-1H-吡咯-3-基)嘧啶胺类,其中该苯基被F、N(CH3)2、NO2、OH、I或CF3在4-位单取代。
22、根据权利要求21的化合物,其中该苯基被氟取代,该杂环基为5-吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基。
23、根据权利要求1的化合物,选自:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺
(3,4-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(4-氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(3,5-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
4-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚
3-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚
(2,4-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(2,4-二氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺
(3-氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
N-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺
(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-氟-4-碘-苯基)-胺
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-氟-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
[4-(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
(4-氟-苯基)-[4-(1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
N-[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺
[4-(5-氨基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(5-氯-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二乙氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-5-吗啉-4-基甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟苯基)-胺
{4-[2,4-二甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吡咯-3-基]-嘧啶-2-基}-(4-氟-苯基)-胺。
24、根据权利要求1的化合物,选自:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺
(3,4-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(4-氯-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
(3,5-二氟-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
4-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚
3-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺
(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-氟-4-碘-苯基)-胺
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-氟-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
(4-氟-苯基)-[4-(1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-胺
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
N-[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(5-氯-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二乙氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-5-吗啉-4-基甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
{4-[2,4-二甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吡咯-3-基]-嘧啶-2-基}-(4-氟-苯基)-胺。
25、根据权利要求1的化合物,选自:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-碘-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氯-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-氟-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-二甲氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
N-[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-N′,N′-二甲基-苯-1,4-二胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(5-氯-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二乙氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-5-吗啉-4-基甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺。
26、根据权利要求1的化合物,选自:
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺
3,5-二甲基-4-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-碘-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
3,5-二甲基-4-[2-(4-甲基-3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(3-羟基-4-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-3-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-腈
4-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
[4-(2,4-二甲基-5-硝基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺
[4-(5-溴-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺
[4-(5-二甲氨基甲基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟苯基)-胺。
27、根据权利要求1的化合物,其中:
X1和X2分别是NH和CR9;
R1选自H、烷基、吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基、卤代、NO2、CN、(R″′)nNH2、(R″′)nNH-R′、(R″′)nN-(R′)(R")、CONH2、CONH-R′、CON-(R′)(R")和CF3,其中所述的烷基可以进一步被选自卤代、NO2、CN、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基团取代;其中烷基具有1~8个碳原子;
Z为NH;
R5选自H、卤代、硝基、氨基、氨基烷基、羟基、N-(R′)(R")和C1-4烷基;
R6选自H、卤代、硝基、氨基、氨基烷基、羟基、N-(R′)(R")、甲基、丙基和丁基;
R7选自H、卤代、硝基、氨基、氨基烷基、羟基、N-(R′)(R")和C2-4烷基。
28、药物组合物,包含如权利要求1至27中任意一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。
29、下式化合物及其药学上可接受的盐在制造用于治疗增殖性疾病的药物中的用途,
其中:
X1和X2之一是NR10,X1和X2的另一个是CR9;
Z是NH;
R1是H、烷基、吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基、卤代、NO2、CN、(R″′)nNH2、(R″′)nNH-R′、(R″′)nN-(R′)(R")、CONH2、CONH-R′、CON-(R′)(R")或CF3,其中所述的烷基和吗啉-4-基甲基或4-甲基-哌嗪-1-基甲基可以进一步被选自卤代、NO2、CN、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基团取代;其中烷基具有1~8个碳原子;
R2是具有1~8个碳原子的烷基;
R3是H;
R5、R6和R7彼此独立地是H、未取代的C1-4烷基、卤代、NO2、OH、NH2、NH-R′、N-(R′)(R")或CF3;
R4和R8彼此独立地是H或者卤代;
其中R′、R"和R″′各自独立地是可以相同或不同的烷基,其中所述的烷基具有1~8个碳原子;并且n是0或1;
R9和R10独立地是H或烷基,其中所述的烷基具有1~8个碳原子;
其前提条件是当R1和R2是H,X1是NH,X2是CH,并且R3是H,则苯基不被
3-(1,1,2,2-四氟乙氧基),或
3,4,5-三甲氧基取代,
其他基团R4-R8是H。
30、根据权利要求29的用途,其中该化合物是如权利要求2至13中任意一项所定义。
31、根据权利要求29的用途,其中该增殖性疾病是癌症或白血病。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0107901.1 | 2001-03-29 | ||
GBGB0107901.1A GB0107901D0 (en) | 2001-03-29 | 2001-03-29 | Anti-cancer compounds |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1503794A CN1503794A (zh) | 2004-06-09 |
CN100519553C true CN100519553C (zh) | 2009-07-29 |
Family
ID=9911848
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB028075536A Expired - Fee Related CN100519553C (zh) | 2001-03-29 | 2002-03-26 | 作为抗癌剂的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7262202B2 (zh) |
EP (1) | EP1373253B1 (zh) |
JP (1) | JP4294960B2 (zh) |
CN (1) | CN100519553C (zh) |
AT (1) | ATE365163T1 (zh) |
AU (1) | AU2002249389B2 (zh) |
BR (1) | BR0208447A (zh) |
CA (1) | CA2440228A1 (zh) |
CZ (1) | CZ20032637A3 (zh) |
DE (1) | DE60220771T2 (zh) |
ES (1) | ES2287263T3 (zh) |
GB (2) | GB0107901D0 (zh) |
IL (1) | IL158116A0 (zh) |
MX (1) | MXPA03008833A (zh) |
NZ (1) | NZ528347A (zh) |
WO (1) | WO2002079193A1 (zh) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0012528D0 (en) * | 2000-05-23 | 2000-07-12 | Univ Palackeho | Triterpenoid derivatives |
AU2003237121A1 (en) * | 2002-04-26 | 2003-11-10 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pyrrole derivatives as inhibitors of erk2 and uses thereof |
BR0313397A (pt) | 2002-08-14 | 2005-06-28 | Vertex Pharmaceuticals Incorpo | Inibidores de proteina cinase e usos destes |
GB0219052D0 (en) * | 2002-08-15 | 2002-09-25 | Cyclacel Ltd | New puring derivatives |
US8129330B2 (en) * | 2002-09-30 | 2012-03-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
ATE454378T1 (de) | 2002-11-01 | 2010-01-15 | Vertex Pharma | Verbindungen, die sich als inhibitoren vonjak und anderen proteinkinasen eignen |
AU2003286895A1 (en) * | 2002-11-05 | 2004-06-07 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Compounds useful as inhibitors of jak and other protein kinases |
GB0226582D0 (en) * | 2002-11-14 | 2002-12-18 | Cyclacel Ltd | Anti-viral compounds |
GB0226583D0 (en) * | 2002-11-14 | 2002-12-18 | Cyclacel Ltd | Compounds |
GB0229581D0 (en) * | 2002-12-19 | 2003-01-22 | Cyclacel Ltd | Use |
CA2522176A1 (en) * | 2003-03-13 | 2004-09-30 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Compositions useful as protein kinase inhibitors |
GB0311276D0 (en) * | 2003-05-16 | 2003-06-18 | Astrazeneca Ab | Chemical compounds |
CN102977016B (zh) | 2003-06-06 | 2015-01-14 | 菲布罗根有限公司 | 含氮杂芳基化合物及其在增加内源性***中的用途 |
TW200528101A (en) * | 2004-02-03 | 2005-09-01 | Astrazeneca Ab | Chemical compounds |
GB0402653D0 (en) * | 2004-02-06 | 2004-03-10 | Cyclacel Ltd | Compounds |
GB0411791D0 (en) * | 2004-05-26 | 2004-06-30 | Cyclacel Ltd | Compounds |
US7855205B2 (en) | 2004-10-29 | 2010-12-21 | Janssen Pharmaceutica Nv | Pyrimidinyl substituted fused-pyrrolyl compounds useful in treating kinase disorders |
FR2881426B1 (fr) | 2005-02-03 | 2007-03-30 | Aventis Pharma Sa | Pyrolles et imidazoles substitues, compositions les contenant, procede de frabrication et utilisation |
FR2881742B1 (fr) * | 2005-02-10 | 2007-09-07 | Aventis Pharma Sa | Pyrroles substitues, compositions les contenant, procede de fabrication et utilisation |
GB0520958D0 (en) * | 2005-10-14 | 2005-11-23 | Cyclacel Ltd | Compound |
GB0520955D0 (en) * | 2005-10-14 | 2005-11-23 | Cyclacel Ltd | Compound |
WO2009040399A1 (en) * | 2007-09-28 | 2009-04-02 | Nerviano Medical Sciences S.R.L. | Substituted pyrrolo-pyrimidine derivatives, process for their preparation and their use as kinase inhibitors |
CN101883764B (zh) * | 2007-12-07 | 2013-11-13 | 诺华股份有限公司 | 吡唑衍生物及其作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的用途 |
GB0805477D0 (en) * | 2008-03-26 | 2008-04-30 | Univ Nottingham | Pyrimidines triazines and their use as pharmaceutical agents |
PT2872487T (pt) * | 2012-07-16 | 2017-05-15 | Fibrogen Inc | Processo para a preparação de compostos isoquinolina |
CN112831542B (zh) * | 2020-12-30 | 2022-10-14 | 厦门大学 | 一种基于MALDI-TOF-MS体外筛选CDKs家族蛋白激酶抑制剂的方法 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0233461B2 (en) * | 1986-01-13 | 2002-05-29 | American Cyanamid Company | 4,5,6-Substituted-2-pyrimidinamines |
US5516775A (en) * | 1992-08-31 | 1996-05-14 | Ciba-Geigy Corporation | Further use of pyrimidine derivatives |
US5543520A (en) * | 1993-10-01 | 1996-08-06 | Ciba-Geigy Corporation | Pyrimidine derivatives |
GB9523675D0 (en) * | 1995-11-20 | 1996-01-24 | Celltech Therapeutics Ltd | Chemical compounds |
GB9828511D0 (en) * | 1998-12-24 | 1999-02-17 | Zeneca Ltd | Chemical compounds |
US7122544B2 (en) * | 2000-12-06 | 2006-10-17 | Signal Pharmaceuticals, Llc | Anilinopyrimidine derivatives as IKK inhibitors and compositions and methods related thereto |
MY130778A (en) * | 2001-02-09 | 2007-07-31 | Vertex Pharma | Heterocyclic inhibitiors of erk2 and uses thereof |
-
2001
- 2001-03-29 GB GBGB0107901.1A patent/GB0107901D0/en not_active Ceased
-
2002
- 2002-03-26 BR BR0208447-3A patent/BR0208447A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-03-26 AT AT02718319T patent/ATE365163T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-03-26 CN CNB028075536A patent/CN100519553C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-03-26 MX MXPA03008833A patent/MXPA03008833A/es active IP Right Grant
- 2002-03-26 NZ NZ528347A patent/NZ528347A/en unknown
- 2002-03-26 CZ CZ20032637A patent/CZ20032637A3/cs unknown
- 2002-03-26 AU AU2002249389A patent/AU2002249389B2/en not_active Ceased
- 2002-03-26 ES ES02718319T patent/ES2287263T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-26 IL IL15811602A patent/IL158116A0/xx unknown
- 2002-03-26 EP EP02718319A patent/EP1373253B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-26 WO PCT/GB2002/001445 patent/WO2002079193A1/en active IP Right Grant
- 2002-03-26 CA CA002440228A patent/CA2440228A1/en not_active Abandoned
- 2002-03-26 JP JP2002577818A patent/JP4294960B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-03-26 DE DE60220771T patent/DE60220771T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2002-03-27 GB GB0207229A patent/GB2375534B/en not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-09-24 US US10/671,747 patent/US7262202B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-08-21 US US11/507,929 patent/US20070185134A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1373253A1 (en) | 2004-01-02 |
GB0107901D0 (en) | 2001-05-23 |
GB2375534A (en) | 2002-11-20 |
GB2375534B (en) | 2003-09-24 |
WO2002079193A1 (en) | 2002-10-10 |
JP4294960B2 (ja) | 2009-07-15 |
CA2440228A1 (en) | 2002-10-10 |
ES2287263T3 (es) | 2007-12-16 |
CZ20032637A3 (cs) | 2004-02-18 |
US20040132746A1 (en) | 2004-07-08 |
ATE365163T1 (de) | 2007-07-15 |
EP1373253B1 (en) | 2007-06-20 |
GB0207229D0 (en) | 2002-05-08 |
US20070185134A1 (en) | 2007-08-09 |
JP2004538260A (ja) | 2004-12-24 |
AU2002249389B2 (en) | 2008-03-13 |
BR0208447A (pt) | 2004-03-02 |
DE60220771T2 (de) | 2008-03-06 |
WO2002079193A8 (en) | 2005-03-17 |
CN1503794A (zh) | 2004-06-09 |
IL158116A0 (en) | 2004-03-28 |
NZ528347A (en) | 2005-07-29 |
MXPA03008833A (es) | 2004-10-15 |
US7262202B2 (en) | 2007-08-28 |
DE60220771D1 (de) | 2007-08-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN100519553C (zh) | 作为抗癌剂的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 | |
CN100355751C (zh) | 2-取代的4-杂芳基-嘧啶、其组合物及其用途 | |
EP3630761B1 (en) | Kras g12c inhibitors and methods of using the same | |
CN100404540C (zh) | 可抑制蛋白激酶的噻唑并、噁唑并和咪唑并喹唑啉化合物 | |
JP6832430B2 (ja) | 細胞代謝過程の阻害剤 | |
CN100584832C (zh) | 可用于治疗增殖性病症的2,4-二(苯基氨基)嘧啶类 | |
US6939872B2 (en) | 2-anilino-pyrimidine derivatives as cyclin dependent kinase inhibitors | |
JP4667463B2 (ja) | チロシンキナーゼ阻害剤として適する環状ジアリールウレア | |
CN100500663C (zh) | 作为抗增殖化合物的n-(4-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-2-基)-n-苯胺 | |
US20090318446A1 (en) | 4-(1H-Indol-3-yl)-Pyrimidin-2-Ylamine Derivatives and Their Use in Therapy | |
CN1329393C (zh) | 新的嘌呤衍生物 | |
CN101326188B (zh) | 嘧啶-4-基-3,4-二氢-2h-吡咯并[1,2a]吡嗪-1-酮化合物 | |
TW201632530A (zh) | Erk抑制劑 | |
CN109328187A (zh) | 一种具有fgfr抑制活性的新型化合物及其制备和应用 | |
CN101325953A (zh) | 4-杂芳基-嘧啶衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途 | |
JP2004534779A (ja) | 疾病治療用プロテインキナーゼ阻害剤 | |
JP2004529140A (ja) | C−junn末端キナーゼ(jnk)および他のタンパク質キナーゼのインヒビター | |
CN102260248A (zh) | 作为zap-70和/或syk抑制剂的2,4-二(杂)芳基氨基嘧啶衍生物 | |
JP2004521916A (ja) | 細胞増殖を阻害するためのピリミジン誘導体 | |
AU2002249389A1 (en) | Inhibitors of cyclin dependent kinases as anti-cancer agent | |
AU2010267815B2 (en) | Novel 1,2,3,4-tetrahydro-pyrimido(1,2-a)pyrimidin-6-one derivatives, preparation thereof, and pharmaceutical use thereof | |
JP4865785B2 (ja) | Cdk阻害剤としての置換1,5−ナフチリジンアゾリジノン | |
Li et al. | Design, synthesis and biological evaluation of a new class of 7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine derivatives as Mps1 inhibitors for the treatment of breast cancer | |
CN104098551B (zh) | 作为欧若拉激酶抑制剂的取代喹唑啉类衍生物 | |
CN101291917A (zh) | 治疗蛋白激酶依赖性疾病的二芳基脲衍生物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C17 | Cessation of patent right | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20090729 Termination date: 20100326 |