CN100388930C - 一种逍遥制剂的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种逍遥制剂的质量控制方法，具体涉及逍遥颗粒、片剂和胶囊的质量控制方法。该方法采用薄层色谱法含有一种或几种药材进行鉴别；另外，该方法还提供了高效液相色谱法测定药物中芍药苷成分的含量。提高后的质量标准能更好地控制药品的质量，真正体现药品安全有效、质量可控。
Description
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，具体涉逍遥制剂质量控制方法，特别涉及逍遥颗粒、逍遥片剂、逍遥胶囊的质量控制方法。
背景技术：
妇科疾病是现代妇女常见病和多发病。据资料记载，现代妇女约70％或轻或重患有妇科疾病，成为影响女性生活质量的一大危害因素，严重威胁广大妇女的身体健康。目前，以中药材柴胡、当归、白芍、白术、茯苓、甘草和薄荷等七味组成的“逍遥”系列有大蜜丸、水丸、浓缩丸、逍遥丸、颗粒剂等，专门用于肝气不舒，胸胁胀痛，头晕目眩，食欲减退，***等症。但由于相应的成药的质量标准不完备，给生产过程和质量控制带来了困难，《中国药典《1995年版一部收载的逍遥丸和《中国药典》1995一部收载的逍遥丸(大蜜丸)只对成品药物做显微鉴别和以当归对照药材的定性鉴别；《中国药典》2000年版一部同时收载的逍遥丸(大蜜丸)和逍遥丸(水丸)在上述两版的基础上除了增加以甘草对照药材作定性鉴别，不过均因阴性有干扰，分离度不好差等因素，不能作为专属的薄层色谱鉴别方法。尽管增加了芍药苷的含量测定，但缺乏测定的方法学研究，局限性较大；而中药部颁标准第十一册(WS3-B-2220-96)收载的逍遥丸(浓缩丸)和中药部颁标准第十五册(WS3-B-2968-98)收载的逍遥颗粒则以芍药甙对照品鉴别方中白芍药材，按其中使用的方法和展开剂多次试验，均发现阴性样品在与对照品色谱相应的位置上，有其它成分干扰，重现性差。另外还缺少含量的检测方法，尤其作为固体制剂的逍遥颗粒，其制剂质量更加不能控制。
中药制剂长期以来，质量难以有效控制，有效控制中药产品的质量是一个重大的课题，现有技术中采用的方法不完整，少数针对性不强，使用这些方法难以达到真正控制质量的目的。以上逍遥制剂由于缺少好的质量控制方法，难以控制剂的质量；给正常的生产经营带来了困难，利用已知的一些技术难以对该制剂产品提供好的质量控制方法，本发明针对现有技术的不足，采用新的手段对逍遥制剂的质量进行控制，特别是采用用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量，解决了该制剂质量控制的难题。本发明针对逍遥制剂的特点以及本发明配方，提供了一种实用的质量控制方法。
本发明对逍遥系列制剂如颗粒、片剂和胶囊等提出了质量控制方法。提高后的质量标准能更好地控制药品的质量，真正体现药品安全有效、质量可控。
发明内容：
本发明的目的在于提供逍遥制剂的质量控制方法。本发明的目的还在于提供逍遥颗粒、片剂及胶囊剂的质量控制方法。
本发明所述逍遥制剂是一种治疗妇科疾病的中药制剂，特别是口服固体制剂，具体包括颗粒、片剂及胶囊剂。
本发明所述的逍遥制剂是由如下重量配比的中药原料制成的：
柴胡143g、当归143g、白芍143g、白术(炒)143g、茯苓143g、甘草(蜜炙)114.4g、薄荷28.6g。
本发明的逍遥制剂的可以采用以下方法制备：
通过将上述配方的中药原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成胶囊、颗粒剂、片剂。所述活性物质可以通过选自以下方式的方法得到，如：通过粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到、这些活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。
本发明的制剂，在制成制剂时根据需要可以加入药物可接受的载体，这些载体可以是任何适合制成本发明制剂的载体。
本发明的逍遥制剂优选的制备方法采用以下方法：
以上原料，薄荷提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；另取生姜143g，与上述药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入薄荷挥发油，混匀，然后，按制剂学常规方法可分别制成颗粒剂，片剂，胶囊剂。
本发明的质量控制方法可用于以上方法制成的中药制剂，其步骤包括鉴别和含量测定。
其中所述鉴别是利用中药制剂的有效成分的特殊性对制剂的成分进行定性检测，本发明的鉴别是针对本发明的中药的进行的，其鉴别方法包括以下方法中的一种或几种：
a.取逍遥制剂1g，加水5ml，剧烈振摇2-5分钟，即产生蜂窝状泡沫，10分钟内应无显著减少；
b.取逍遥制剂10g，置具塞锥形瓶中，加***50ml，时时振摇，提取约1-3小时，分取上清液。取溶液10ml，挥去***，残渣加醋酐1ml使溶解，加入醋酐-浓硫酸(5-11∶0.8-1.3)溶液1ml，溶液颜色由黄转紫红。另取溶液10ml，挥去***，残渣加1％香草醛浓硫酸试液1-3滴，溶液渐显***；
c.取逍遥制剂15g，研细，加无水乙醇50ml，加热回流20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用***提取2-3次，每次20ml，合并***提取液，用2％碳酸钠溶液洗涤3次，每次20ml，收集洗涤液，加氯仿30ml提取，弃氯仿层，碳酸钠溶液滴加盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯提取2-3次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(14-19∶3-7∶0.3-0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d.取逍遥制剂15g，研细，加乙醇50ml，超声处理15-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取1-3次，每次20ml，合并提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，弃去水液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-氨水(3-7∶1-4∶2.3-2.7∶0.3-0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；
e.取逍遥制剂10g，研细，加氯仿30ml，盐酸5ml，加热回流25-40分钟，放冷，滤过，滤液加水洗涤3次，每次20ml，弃水层，氯仿液加适量无水硫酸钠，搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(8-13∶16-28∶4-11∶0.3-1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
f.取逍遥制剂15g，研细，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理5-15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品，加石油醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(3-10∶0.5-1.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述含量测定的步骤包括：
照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定；
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸-异丙醇(54-81∶138-205∶2-8∶2-8)为流动相；检测波长为237±3nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥24-48小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，研细，精密称取约2.5g，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇20ml，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过(0.45μm)，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
优选的鉴别方法选自以下方法中的一种或几种：
a.取逍遥制剂1g，加水5ml，剧烈振摇3分钟，即产生蜂窝状泡沫，10分钟内应无显著减少；
b.取逍遥制剂10g，置具塞锥形瓶中，加***50ml，时时振摇，提取约2小时，分取上清液。取溶液10ml，挥去***，残渣加醋酐1ml使溶解，加入醋酐-浓硫酸(9∶1)溶液1ml，溶液颜色由黄转紫红。另取溶液10ml，挥去***，残渣加1％香草醛浓硫酸试液1滴，溶液渐显***；
c.取逍遥制剂15g，研细，加无水乙醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用***提取3次，每次20ml，合并***提取液，用2％碳酸钠溶液洗涤3次，每次20ml，收集洗涤液，加氯仿30ml提取，弃氯仿层，碳酸钠溶液滴加盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(17∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d.取逍遥制剂15g，研细，加乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，弃去水液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-氨水(5∶3∶2.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；
e.取逍遥制剂10g，研细，加氯仿30ml，盐酸5ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液加水洗涤3次，每次20ml，弃水层，氯仿液加适量无水硫酸钠，搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
f.取逍遥制剂15g，研细，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品，加石油醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
优选的含量测定的步骤包括：
照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定；
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸-异丙醇(67∶173∶4∶4)为流动相；检测波长为237nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥36小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，研细，精密称取约2.5g，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过(0.45μm)，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
以上所述制剂选自颗粒剂、片剂或胶囊剂。所述颗粒剂，每1g含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.46mg，所述片剂每片含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.46mg，所述胶囊剂含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.46mg。
以上所述本品为颗粒剂、片剂或胶囊剂，测定时需要将其溶解于溶剂中，作为供试液，常规的方法是，取颗粒或膏滋1-10g加10-100ml溶剂溶解。
以下通过实验例说明本发明的效果。
本发明各实验例供试品所用制剂均可采用实施例1所述的逍遥胶囊制剂，也可用与实施例1所述的逍遥胶囊剂具有相同原料组成的其他制剂。
实验例1逍遥制剂中药物色谱鉴别的研究
(1)取本品10g，置具塞锥形瓶中，加***50ml，时时振摇，提取约2小时，分取上清液。取溶液10ml，挥去***，残渣加醋酐1ml使溶解，加入醋酐-浓硫酸(9∶1)溶液1ml，溶液颜色由黄转紫红(此为方中白芍药材的特征鉴别反应)。另取溶液10ml，挥去***，残渣加1％香草醛浓硫酸试液1滴，溶液渐显***(此为方中白术药材的特征鉴别反应)。
(2)以阿魏酸对照品鉴别方中当归药材。方法一：取本品，研细，加醋酸乙酯50ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。方法二：取本品，研细，加乙醇50ml回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。方法三：取本品，研细，加无水乙醇加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水微热溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用***提取，合并***提取液，用2％碳酸钠溶液洗涤，收集洗涤液，加氯仿提取，弃氯仿层，碳酸钠溶液滴加盐酸调节pH值至1～2，加醋酸乙酯提取，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺当归药材的阴性供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。分别以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-冰醋酸(5∶3∶0.5∶0.5)、环己烷-醋酸乙酯-丙酮-冰醋酸(9∶3∶1∶0.5)及石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(17∶5∶0.5)为展开剂，展开，喷以10％磷钼酸乙醇溶液。结果表明，选用方法三，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(17∶5∶0.5)为展开剂展开的分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。同时，购买市售“逍遥颗粒”(生产厂家：北京九龙制药厂；批号：020521，020603，020722)，用第三法进行试验，亦能较好地鉴别方中当归药材，故列入本发明质量标准正文。
(3))方中白芍的薄层色谱研究：
以芍药苷对照品鉴别方中白芍药材。取本品15g，加乙醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇提取，合并提取液，用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺白芍药材的阴性供试品溶液。另取芍药苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以“逍遥颗粒”原质量标准鉴别(2)项下的展开剂氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。结果可见，阴性供试品色谱中，在与供试品色谱和对照品色谱相应的位置上，有黄色斑点出现，显示阴性干扰，故不沿用“逍遥颗粒”原质量标准鉴别(2)项下的展开剂。经多次试验，分别以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸的不同比例，以及选用氯仿-丙酮-甲醇-氨水(5∶3∶2.5∶1)、氯仿-丙酮-甲醇-氨水(5∶3∶2.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。结果表明，以氯仿-丙酮-甲醇-氨水(5∶3∶2.5∶0.5)为展开剂，各斑点的分离度好，显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。同时，购买市售“逍遥颗粒”(生产厂家：北京九龙制药厂；批号：020521，020603，020722)，用修订的展开剂氯仿-丙酮-甲醇-氨水(5∶3∶2.5∶0.5)进行试验，亦能较好地鉴别方中白芍药材，故将修订后的鉴别方法列入本发明质量标准正文。
(4)以甘草次酸对照品鉴别方中甘草药材。方法一：取本品，加50％乙醇40ml，盐酸2ml加热回流2小时，放冷，滤过，将滤液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。方法二：取本品，加氯仿20ml，盐酸1ml加热回流1小时，放冷，滤过，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。方法三：取本品，加氯仿30ml，盐酸5ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液加水洗涤，弃水层，氯仿液加适量无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺甘草药材的阴性供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。分别以石油醚(60～90℃)-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(5∶3∶2∶0.5)及石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。结果可见，选用方法三，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂展开的分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。同时，购买市售“逍遥颗粒”(生产厂家：北京九龙制药厂；批号：020521，020603，020722)，用第三法进行试验，亦能较好地鉴别方中甘草药材，故列入本发明质量标准正文。
(5)以薄荷脑对照品鉴别方中薄荷药材。方法一：取本品，研细，加石油醚50ml加热回流1小时，放冷，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。方法二：取本品，加醋酸乙酯超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。方法三：取本品，加石油醚超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。同法制备缺薄荷药材的阴性供试品溶液。另取薄荷，加石油醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。分别以环己烷-醋酸乙酯(9∶1)、正己烷-醋酸乙酯(6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。结果可见，选用方法三，以正己烷-醋酸乙酯(6∶1)为展开剂展开的分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。同时，购买市售“逍遥颗粒”(生产厂家：北京九龙制药厂；批号：020521，020603，020722)，用第三法进行试验，亦能较好地鉴别方中甘草药材，故列入本发明质量标准正文。
(6)方中柴胡的薄层色谱研究：
取本品10g，研细，加无水乙醇50ml加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液用醋酸乙酯提取3次，每次15ml，合并醋酸乙酯提取液，用0.5％氢氧化钠溶液10ml洗涤，再加水少量将提取液洗至中性，取醋酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制成缺柴胡药材的阴性供试品溶液。另取柴胡对照药材1g，加无水乙醇30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-乙醇-水(12∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。阴性供试品和供试品色谱中，在与对照药材色谱主斑点相应的位置上，均有相同颜色的斑点，显示阴性干扰。因此，未建立柴胡专属的薄层色谱鉴别方法。
(7)方中白术的薄层色谱研究：
取本品10g，研细，加无水乙醇50ml加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制成缺白术药材的阴性供试品溶液。另取白术对照药材0.5g，加无水乙醇30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-环己烷(1∶9)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。阴性供试品和供试品色谱中，在与对照药材色谱主斑点相应的位置上，均有相同颜色的斑点，显示阴性干扰。因此，未建立白术专属的薄层色谱鉴别方法。
(8)方中茯苓的薄层色谱研究：
取本品10g，研细，加***60ml加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制成缺茯苓药材的阴性供试品溶液。另取茯苓对照药材1g，加***30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，分别以石油醚-***(2∶1)、环己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。阴性供试品和供试品色谱中，在与对照药材色谱主斑点相应的位置上，均有相同颜色的斑点，显示阴性干扰。因此，未建立茯苓专属的薄层色谱鉴别方法。
实验例2芍药苷的含量测定方法研究
(1)仪器、试剂及对照品试剂：岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，LC-10Atvp输液泵；SPD-M10Avp二级阵列检测器；SCL-10Avp***控制器；CT0-10Asvp恒温柱箱；CLASS-VP6.1工作站数据处理***；微量进样器(25μl)，HAMILTON公司。甲醇(色谱纯)、磷酸二氢钾(分析纯)、冰醋酸(分析纯)、异丙醇(分析纯)、注射用水、芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0736-200219)。
7.3色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2(5.0×200mm)大连伊利特；流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸-异丙醇(67∶173∶4∶4)为；检测波长：237nm(图13)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：5μl。
7.4***适用性试验
分别取芍药苷对照品溶液、供试品溶液和缺白芍的阴性供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱。从图中可见，芍药苷的保留时间(tR)约为6.5分钟，阴性样品色谱图在芍药苷峰位置处无假阳性峰，芍药苷和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，即本试验条件下芍药苷与其他组分分离完全。理论塔板数以芍药苷峰计算大于1500。
7.5线性关系考察
7.5.1标准溶液的制备
精密称取在五氧化二磷减压干燥36小时的芍药苷对照品20.4mg，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含芍药苷0.0816mg)。
一、标准曲线的绘制
精密吸取芍药苷对照品溶液2、4、6、8、10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱(表1)，以峰面积A(μV·s)对质量数x(μg)进行线性回归计算，得线性回归方程为：A＝1194685.662×X-759.30，r＝0.9999，精密量取对照品溶液5μl注入液相色谱仪，所得峰面积为486568，将一供试品溶液进样分析所得峰面积分别用回归方程和一点法计算含量，结果的相对偏差为0.01725％，故正文采用一点法计算含量。芍药苷线性范围：0.1632μg～0.8160μg。
表1 芍药苷线性关系考察
7.6提取溶剂的选择选择不同浓度甲醇为提取液，分别以50％甲醇、60％甲醇、70％甲醇、80％甲醇、甲醇提取后测定含量，测定结果见表2。
表2 不同提取溶剂对逍遥颗粒中芍药苷含量测定的影响(n＝2)
试验结果表明，用70％甲醇为提取剂能将制剂中芍药苷提取完全，因此质量标准正文含量测定项下选用70％甲醇为提取剂。
7.7提取时间的选择 提取方法：超声提取，测定结果见表3。
表3 不同超声时间的考察(n＝2)
从表3可见，超声提取30分钟即可将制剂中的芍药苷提取完全，故选择超声处理30分钟。
二、精密度试验
取本品内容物，按质量标准正文中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，注入液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积，结果见表4。
表4 制剂供试品中芍药苷的精密度试验
结果可见，该法精密度良好。
三、重现性试验
取本品，按质量标准正文中含量测定项下供试液的制备方法制备5份供试液，进样，测定峰面积，计算结果列入表5，芍药苷平均含量为0.6439mg/g，RSD为2.135％。结果可见，该法重现性良好。
表5 制剂供试品中芍药苷的重现性试验
四、供试品溶液中芍药苷的稳定性试验
取本品，按质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，分别于0、2、4、6、8小时测定芍药苷峰面积(见表6)，结果表明，供试品溶液中芍药苷在8小时内稳定。
表6 制剂供试品中芍药苷的稳定性试验
五、回收率试验
采用加样回收法，精密称取已测定含量的制剂(平均含量0.6439mg/g)适量，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入芍药苷对照品溶液(以70％甲醇为溶剂，0.042mg/ml)20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过(0.45μm)，制成供试品溶液。分别制备5份，测定(结果见表7)，平均回收率为99.47％，RSD为2.19％。
表7 供试品溶液中芍药苷测定回收率试验
六、供试品含量测定
按质量标准制备供试品溶液和对照品溶液，分别进样5μl，记录色谱，测定峰面积，按下式计算含量：
式中：Ai：供试品溶液峰面积
As：对照品溶液峰面积
Cs：对照品(芍药苷)溶液浓度(mg/ml)
W：取样量(g)
严格按照生产工艺制备3批样品，测定样品中芍药苷含量，测定结果见表9。
表9 3批样品中芍药苷含量测定结果
根据样品测定结果可见，三批样品中芍药苷的煎煮收率均在60％以上，最小收率为63.3％，故制剂中芍药苷含量限度计算如下：
芍药苷含量限度(mg/g)＝制剂含白芍药材(g/g)×药材含芍药苷限度(药典规定)×芍药苷收率(％)×103＝(143/1500)×0.8％×60％×103＝0.4576mg/g。故暂定本品每粒含白芍以芍药苷计不得少于0.46mg。根据样品测定结果，3批样品中的芍药苷含量均在该限度范围内。
本发明质量控制方法，其鉴别步骤中选用的展开剂展开的分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好；其含量测定步骤中，含量检测方法对产品的质量控制更为有效，方法精密度、灵敏度、稳定性均较高。能较好地控制产品质量，确保产品质量的“均一、稳定、有效、可控”。
具体实施方式：
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制，下述实施例均能达到上述实验例的效果。
实施例1逍遥颗粒
柴胡143g、当归143g、白芍143g、白术(炒)143g、茯苓143g、甘草(蜜炙)114.4g、薄荷28.6g。以上七味，薄荷提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；另取生姜143g，与上述药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入薄荷挥发油，混匀，制成1500g，即得。
【鉴别】(1)取本品1g，加水5ml，剧烈振摇3分钟，即产生蜂窝状泡沫，10分钟内应无显著减少。
(2)取本品10g，置具塞锥形瓶中，加***50ml，时时振摇，提取约2小时，分取上清液。取溶液10ml，挥去***，残渣加醋酐1ml使溶解，加入醋酐-浓硫酸(9∶1)溶液1ml，溶液颜色由黄转紫红。另取溶液10ml，挥去***，残渣加1％香草醛浓硫酸试液1滴，溶液渐显***。
(3)取本品15g，研细，加无水乙醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用***提取3次，每次20ml，合并***提取液，用2％碳酸钠溶液洗涤3次，每次20ml，收集洗涤液，加氯仿30ml提取，弃氯仿层，碳酸钠溶液滴加盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(17∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品15g，研细，加乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，弃去水液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-氨水(5∶3∶2.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。
(5)取本品10g，研细，加氯仿30ml，盐酸5ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液加水洗涤3次，每次20ml，弃水层，氯仿液加适量无水硫酸钠，搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)取本品15g，研细，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品，加石油醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】本发明颗粒剂中芍药苷的含量测定方法是：
照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸-异丙醇(67∶173∶4∶4)为流动相；检测波长为237nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥36小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，研细，精密称取约2.5g，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过(0.45μm)，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.46mg。
实施例2逍遥片
[处方1柴胡143g、当归143g、白芍143g、白术(炒)143g、茯苓143g、甘草(蜜炙)114.4g、薄荷28.6g。【制法】以上原料，薄荷提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；另取生姜143g，与上述药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入薄荷挥发油，混匀，经常规制成片剂，其中每片含芍药苷(C23H28O11)计，不少于0.46mg)。
【质量控制方法】鉴别、含量测定方法同实施例1。
实施例3逍遥胶囊
[处方1【处方】柴胡143g、当归143g、白芍143g、白术(炒)143g、茯苓143g、甘草(蜜炙)114.4g、薄荷28.6g。以上原料，薄荷提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；另取生姜143g，与上述药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入薄荷挥发油，混匀，经常规制成制成胶囊剂，其中每粒含芍药苷(C23H28O11)计，不少于0.46mg)。
【质量控制方法】鉴别、含量测定方法同实施例1，
实施例4逍遥颗粒
[处方1柴胡143g、当归143g、白芍143g、白术(炒)143g、茯苓143g、甘草(蜜炙)114.4g、薄荷28.6g。【制法】以上七味，薄荷提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；另取生姜143g，与上述药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入薄荷挥发油，混匀，制成1500g，即得。
【质量控制方法】鉴别(1)取本品1g，加水5ml，剧烈振摇2分钟，即产生蜂窝状泡沫，10分钟内应无显著减少。
(2)取本品10g，置具塞锥形瓶中，加***50ml，时时振摇，提取约1小时，分取上清液。取溶液10ml，挥去***，残渣加醋酐1ml使溶解，加入醋酐-浓硫酸(5∶0.8)溶液1ml，溶液颜色由黄转紫红。另取溶液10ml，挥去***，残渣加1％香草醛浓硫酸试液1滴，溶液渐显***。
(3)取本品15g，研细，加无水乙醇50ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用***提取2次，每次20ml，合并***提取液，用2％碳酸钠溶液洗涤3次，每次20ml，收集洗涤液，加氯仿30ml提取，弃氯仿层，碳酸钠溶液滴加盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(14∶3∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品15g，研细，加乙醇50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用20ml水饱和的正丁醇提取1次，取提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，弃去水液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-氨水(3∶1∶2.3∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。
(5)取本品10g，研细，加氯仿30ml，盐酸5ml，加热回流25分钟，放冷，滤过，滤液加水洗涤3次，每次20ml，弃水层，氯仿液加适量无水硫酸钠，搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(8∶16∶4∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)取本品15g，研细，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理5分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品，加石油醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
芍药苷的含量测定方法为：
照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸-异丙醇(54∶138∶2∶2)为流动相；检测波长为234nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥24-48小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，研细，精密称取约2.5g，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇20ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过(0.45μm)，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。其中含量每g含芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.46mg。)。
实施例5逍遥颗粒
[处方1柴胡143g、当归143g、白芍143g、白术(炒)143g、茯苓143g、甘草(蜜炙)114.4g、薄荷28.6g。【制法】以上七味，薄荷提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；另取生姜143g，与上述药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入薄荷挥发油，混匀，制成1500g，即得。
【质量控制方法】鉴别(1)取本品1g，加水5ml，剧烈振摇5分钟，即产生蜂窝状泡沫，10分钟内应无显著减少。
(2)取本品10g，置具塞锥形瓶中，加***50ml，时时振摇，提取约3小时，分取上清液。取溶液10ml，挥去***，残渣加醋酐1ml使溶解，加入醋酐-浓硫酸(11∶1.3)溶液1ml，溶液颜色由黄转紫红。另取溶液10ml，挥去***，残渣加1％香草醛浓硫酸试液3滴，溶液渐显***。
(3)取本品15g，研细，加无水乙醇50ml，加热回流40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用***提取3次，每次20ml，合并***提取液，用2％碳酸钠溶液洗涤3次，每次20ml，收集洗涤液，加氯仿30ml提取，弃氯仿层，碳酸钠溶液滴加盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯提取2-3次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(19∶7∶0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品15g，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，弃去水液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-氨水(7∶4∶2.7∶0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。
(5)取本品10g，研细，加氯仿30ml，盐酸5ml，加热回流40分钟，放冷，滤过，滤液加水洗涤3次，每次20ml，弃水层，氯仿液加适量无水硫酸钠，搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(13∶28∶11∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)取本品15g，研细，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品，加石油醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(10∶1.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
芍药苷的含量测定方法为：
照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸-异丙醇(81∶205∶8∶8)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥48小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，研细，精密称取约2.5g，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇20ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过(0.45μm)，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。其中含量每g含芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.46mg。
Claims (5)
1.一种逍遥制剂的质量控制方法，包括鉴别和含量测定的步骤，其特征在于，所述鉴别方法为：
a.取逍遥制剂1g，加水5ml，剧烈振摇2-5分钟，即产生蜂窝状泡沫，10分钟内应无显著减少；
b.取逍遥制剂10g，置具塞锥形瓶中，加***50ml，时时振摇，提取约1-3小时，分取上清液，取溶液10ml，挥去***，残渣加醋酐1ml使溶解，加入醋酐-浓硫酸5-11∶0.8-1.3溶液1ml，溶液颜色由黄转紫红，另取溶液10ml，挥去***，残渣加1％香草醛浓硫酸试液1-3滴，溶液渐显***；
c.取逍遥制剂15g，研细，加无水乙醇50ml，加热回流20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用***提取2-3次，每次20ml，合并***提取液，用2％碳酸钠溶液洗涤3次，每次20ml，收集洗涤液，加氯仿30ml提取，弃氯仿层，碳酸钠溶液滴加盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯提取2-3次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取阿魏酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-醋酸乙酯-冰醋酸14-19∶3-7∶0.3-0.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d.取逍遥制剂15g，研细，加乙醇50ml，超声处理15-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取1-3次，每次20ml，合并提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，弃去水液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取芍药苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-氨水3-7∶1-4∶2.3-2.7∶0.3-0.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；
e.取逍遥制剂10g，研细，加氯仿30ml，盐酸5ml，加热回流25-40分钟，放冷，滤过，滤液加水洗涤3次，每次20ml，弃水层，氯仿液加适量无水硫酸钠，搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-苯-醋酸乙酯-冰醋酸8-13∶16-28∶4-11∶0.3-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
f.取逍遥制剂15g，研细，加60～90℃石油醚30ml，超声处理5-15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液，另取薄荷脑对照品，加石油醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯3-10∶0.5-1.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述含量测定的步骤包括：
照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法测定；
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸-异丙醇54-81∶138-205∶2-8∶2-8为流动相；检测波长为237±3nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷减压干燥24-48小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，精密称取约2.5g，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇20ml，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过0.45μm，即得，测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述鉴别方法为：
a.取逍遥制剂1g，加水5ml，剧烈振摇3分钟，即产生蜂窝状泡沫，10分钟内应无显著减少；
b.取逍遥制剂10g，置具塞锥形瓶中，加***50ml，时时振摇，提取约2小时，分取上清液，取溶液10ml，挥去***，残渣加醋酐1ml使溶解，加入醋酐-浓硫酸9∶1溶液1ml，溶液颜色由黄转紫红，另取溶液10ml，挥去***，残渣加1％香草醛浓硫酸试液1滴，溶液渐显***；
c.取逍遥制剂15g，研细，加无水乙醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液滴加盐酸调节pH值至1～2，用***提取3次，每次20ml，合并***提取液，用2％碳酸钠溶液洗涤3次，每次20ml，收集洗涤液，加氯仿30ml提取，弃氯仿层，碳酸钠溶液滴加盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取阿魏酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-醋酸乙酯-冰醋酸17∶5∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d.取逍遥制剂15g，研细，加乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，弃去水液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取芍药苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-氨水5∶3∶2.5∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；
e.取逍遥制剂10g，研细，加氯仿30ml，盐酸5ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液加水洗涤3次，每次20ml，弃水层，氯仿液加适量无水硫酸钠，搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-苯-醋酸乙酯-冰醋酸10∶20∶7∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
f.取逍遥制剂15g，研细，加60～90℃石油醚30ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液，另取薄荷脑对照品，加石油醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯6∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含量测定的步骤包括：
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸-异丙醇67∶173∶4∶4为流动相；检测波长为237nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥36小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，研细，精密称取约2.5g，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过0.45μm，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，所述颗粒剂，每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.46mg，所述片剂每片含白芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.46mg，所述胶囊剂含白芍以药苷C23H28O11计，不得少于0.46mg，所述的逍遥制剂是由如下重量配比的中药原料制成的：
柴胡143g、当归143g、白芍143g、炒白术143g、茯苓143g、蜜炙甘草114.4g、薄荷28.6g。
4.权利要求1-3任何一项的方法，其特征在于，所述逍遥制剂是口服固体制剂。
5.权利要求4的方法，其特征在于，所述口服固体制剂是颗粒剂、片剂或胶囊剂。
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| 中药部颁标准15册. 165，药典委员会. 1998 * |
| 逍遥合剂的质量标准研究. 胡军等.江西中医学院学报，第13卷第4期. 2001 |
| 逍遥合剂的质量标准研究. 胡军等.江西中医学院学报，第13卷第4期. 2001 * |
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