CH677795A5

CH677795A5 -

Info

Publication number: CH677795A5
Application number: CH1301/89A
Authority: CH
Inventors: Rainer Dr Albert; Wilfried Bauer; Francois Dr Cardinaux; Janos Dr Pless
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1988-04-11
Filing date: 1989-04-07
Publication date: 1991-06-28
Also published as: GB2224280B; NL8900882A; GB8907902D0; IT1231943B; IT8947833A0; FR2629824A1; AU3263989A; DE3910667A1; SE8901278D0; JPH01305098A; SE8901278L; DK171489D0; GB2224280A; DK171489A; BE1003200A4; ES2013431A6; FR2629824B1; LU87496A1; IL89897A0

Description

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CH 677 795 A5

Beschreibung

Die vorliegende Erfindung betrifft Peptidderivate, ihre Hersteilung und pharmazeutische Präparate, welche sie enthalten.

Gegenstand der Erfindung sind Somatostatinpeptide, die mindestens einen Rest der Formel (a), (b) oder(c) enthalten

Yi

I

HOH2C-(CHOH)f-(C)g-CH2- H0H2 C-(CHOH)f-CH-CH2OH Ya '

Ca) (b) (c)

worin

Yi für Wasserstoff

Y? für Wasserstoff oder Hydroxy steht,

f und g unabhängig voneinander 0 oder 1 sind Xi Wasserstoff

Xs Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe, und X3 C2-6-Alkyien bedeuten,

wobei die freie Valenz im Rest (a), (b).oder (c) an der N-terminale Aminogruppe des Peptids gebunden ist, und die physiologisch annehmbare Äther und physiologisch hydroiisierbare und annehmbare Ester davon wenn das Peptid mindestens einen Rest der Formel (a) oder (b) enthält,

in freier Form oder in Form eines Säureadditionssalzes oder Komplexes.

Der Ausdruck Somatostatinpeptide beinhaltet auch Analogon und Derivate des natürlichen Somato-statintetradecapeptids. Unter Änalogon und Derivate werden geradkettige oder zyklische, von dem natürlichen Somatostatin abgeleitete Polypeptide verstanden, bei denen eine oder mehrere Aminosäureeinheiten fehlen und/oder durch einen oder mehrere Aminosäurereste ersetzt sind und/oder eine oder mehrere funktionelle Gruppen durch eine oder mehrere andere funktionelle Gruppen ersetzt sind und/oder mehrere Gruppen durch eine oder mehrere andere isosterische Gruppen ersetzt sind. Im allgemeinen werden hiervon alle modifizierten Derivate biologisch aktiver Peptide umfasst, die über eine qualitativ ähnliche Wirksamkeit wie das nicht modifizierte Somatostatinpeptid verfügen. Bevorzugte Somatostatinpeptide sind solche die beispielsweise von 4 bis 9 Aminosäure enthalten. Solche Verbindungen und ihre Herstellung sind bekannt und beispielsweise in den Europäischen Patentanmeldungen EP-A3 1295; EP-A2 215 171; 203 031 ; 214 872; 277 419 und 298 732 beschrieben.

Im folgenden werden diese Somatostatinpeptide als erfindungsgemässe Verbindungen bezeichnet.

Die erfindungsgemässen Verbindungen umfassen auch Verbindungen worin die N-terminale Aminogruppe durch Reste der Formel (a) und/oder (b) und/oder (c) disubstituiert ist, vorzugsweise der Formel (a) und/oder (b).

In dem Rest der Formel (a) steht g vorzugsweise für 0 oder g und f stehen beide für 0.

In dem Rest der Formel (b) ist f vorzugsweise 0.

In dem Rest (c) kann das Alkylen als X3 geradkettig oder verzweigt sein. X3 ist vorzugsweise C2-4-Alkylen, besonders geradkettiges C2-4-A!kylen.

Als Beispiele von Aminoschutzgruppen für X2 können solche genannt werden wie üblicherweise in der Peptidchemie verwendet, z.B. Benzyl, Acyl wie beispielsweise Formyl, Acetyl, Benzoyl, p-ToluoIsuI-fonyl oder Benzolsulfonyl, Benzyloxycarbonyl wie beispielsweise substituiertes Benzyloxycarbonyl, z.B. im aromatischen Ring durch Halogen, Nitro und/oder niederen Alkyl oder Alkoxy substituiert, cycio-aliphatisches Oxycarbonyi oder aliphatisches Oxycarbonyl wie tert-Butoxycarbonyi oder 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl.

In dem Rest der Formel (c) stehen Xi und X2 vorzugsweise für Wasserstoff.

Der Rest der Formel (à) ist ganz bevorzugt.

Unter dem Ausdruck «physiologisch annehmbare Äther» wie für die erfindungsgemässen Verbindungen angewandt, die mindestens einen Rest der Formel (a) oder (b) enthalten, werden Äther verstanden, worin die Hydroxygruppen des Rests (a) oder (b) veräthert sind und die zu keinen Nebeneffekten bei einer gewünschten Dosishöhe führen. Solche umfassen geradkettige, verzweigte oder zyklische Äther wie beispielsweise Ci-4-Âlkylâther, z.B. Verbindungen, worin die im Rest (a) oder (b) anwesenden OH-Gruppen methyliert, oder zyklische Äther worin 2 benachbarte OH-Gruppen durch z.B.

\

/ X,

N-X3-

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\ /CHS

/ NCH3

substituiert sind.

Unter dem Ausdruck «physiologisch-hydrolysierbar und annehmbar Ester» wie für die erfindungsgemässen Verbindungen angewandt, die mindestens einen Rest der Formel (a) oder (b) enthalten, werden Ester verstanden, worin die Hydroxygruppen des Rests (a) oder (b) veresfert sind und die unter physiologischen Bedingungen hydrolysierbar sind, wobei eine Säure erhalten wird, welche zu keinen ungewünschten Nebeneffekten bei einer gewünschten Dosishöhe führt. Diese Ester können z.B. durch Acy-lierung von freien Hydroxygruppen in dem Rest (a) oder (b) abgeleitet sein. Geeignete Ester umfassen z.B. Ester mit Carbonsäuren, die 2 bis 8 C-Atome enthalten.

Die erfindungsgemässen Verbindungen umfassen auch solche, worin irgendeine der freien Hydroxygruppen im Rest der Formel (a) oder (b) glykosilisch an ein reduzierendes Monosaccharid, Disaccharid oder Oligosaccharid oder einem Aminozucker gebunden sein können.

Je nach Substitution, können die Reste der Formel (a) oder (b) ein oder zwei asymetrische Kohlenstoffatome enthalten und somit können die erfindungsgemässen Verbindungen entsprechend optische Isomerie aufweisen. Es ist zu verstehen, dass die vorliegende Erfindung sowohl die einzelnen isomeren Formen als auch die Mischungen, z.B. razemische und diastereoisomere Verbindungen, umfasst.

Die erfindungsgemässen Verbindungen können in freier Form oder in einer pharmazeutisch akzeptablen Salz- bzw. Komplexform vorliegen. Als Säureadditionssalze kommen solche mit organischen Säuren, polymeren Säuren oder anorganischen Säuren in Frage. Als Beispiele für Säureadditionssalze seien die Hydrochloride und Acetate genannt. Unter Komplexen sind solche an sich bekannten Verbindungen zu verstehen, die beim Zusatz anorganischer Substanzen, wie Salze oder Hydroxide (z.B. Ca-, Zn-Salze) und/oder beim Zusatz polymerer organischer Stoffe entstehen.

Eine Klasse von Verbindungen gemäss Erfindung betrifft diejenigen die mindestens einen Rest der Formel (a) oder (b) enthalten.

Bevorzugte erfindungsgemässe Verbindungen sind solche der Formel (I)

Zi Ar CHz-S-Yi' Y2'-S-CH2

Ri—N—CH—CO—N-~——CH—CO B C-——D—E NH——-CH-—

r2

worin

Rt für einen Rest der Formel (a), (b) oder (c) wie oben definiert,

R2 für Wasserstoff, Ci_i2-Alkyl, Ci_*-Alkanoyl, C7-io-PhenyIalky! oder einen Rest der Formel (a), (b) oder (c) wie oben definiert,

>N-CH(Zi)-CO für i) einen gegebenenfalls durch Halogen, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen und/oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituierten (L)- oder (D)-Phenylalaninrest oder ii) den Rest einer anderen als unter i) angegebenen natürlichen lipophilen a-Aminosäure, einer entsprechenden (D)-Aminosäure oder einer synthetischen Aminosäure steht,

wobei

Zi in >N-CH(Zi)-CO- den Rest eines unter i) oder ii) definierten Aminosäurerests vorstellt,

A' für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen

Y'i und Y'2 unabhängig voneinander für Wasserstoff oder für

Ra

I

1) -C0-C-(CH2)m-H

I

Rb worin m eine ganze Zahl von 1 bis 4

Ra CH3 oder C2HS und

Rb H, CH3 oder C2H5 bedeutet, oder

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CH2

2) -C0-CH

(CH2)n worin n eine ganze Zahl von 1 bis 5 bedeutet, oder

3) -CO-NHRc worin Rç einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 C-Atomen bedeutet, oder •

4) -C0-NH-CH-C00Re worin Rd den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen oder synthetischen a-Aminosäure (inkl. Wasserstoff) und

Re einen Alkylrest mit 1 bis 5 C-Atomen bedeutet,

worin R a und R'b unabhänging voneinander Wasserstoff, CH3 oder C2H5

Rb und R9 unabhänging voneinander Wasserstoff, Halogen, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1

bis 3 C-Atomen pOoderl,

q 0 oder 1 und rO, 1 oder 2 bedeuten,

oder Y'i und Y'2 zusammen für eine Bindung stehen,

B für Phe oder im Phenylrest durch Halogen, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes Phe, oder 3-(2-Naphthyl)-alanin

C für gegebenenfalls im Benzolring durch Halogen, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder At-koxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes L- oder D-Trp, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl substituiert sein kann

D für Lys, Lys worin die Seitenkette ein O oder S in ß-Stellung enthält, -yF-Lys, 5F-Lys oder Orn, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl substituiert sein kann, oder 4-AminocyclohexylAIa oder 4-Aminocy-clohexyiGIy

EfürThr, Ser, Val, Phe, Ile, Aminobuttersäure- oder Aminoisobuttersäurerest FfürCOOR7, CH2ORÌ0, CO-NR11R12 oder

Rzfür Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen

Rio für Wasserstoff oder den Rest eines physiologisch annehmbaren, physiologisch hydrolysierbaren Esters

R11 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen, jedoch falls R12 für -CH(Ri3)-X4 steht, nur für Wasserstoff oder Methyl R12 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder

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Ri 3

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-ch-x4

Ri3 für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen oder synthetischen Aminosäure (inklusive Wasserstoff) oder für einen CH2OH, HO-CH2-CH2, HO(CH2)3 oder -CH(CH3)OH Rest,

X4 für COOR7, CH2OR10 oder

CON^

Ri 5

R14 für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen

Ris für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen, und Riß für Wasserstoff oder Hydroxy stehen,

wobei die Reste B, D und E in L-Form und die Reste in den Stellungen 2 und 7 sowie die Reste Y'i4) und Y'24) in D- oder L-Form vorliegen können,

und die physiologisch annehmbare Äther und die physiologisch-hydrolysierbare und -annehmbare Ester davon wenn die Verbindungen der Formel I mindestens einen Rest der Formel (a) oder (b) enthalten,

sowie die Salze und Komplexe dieser Polypeptidderivate.

In der vorliegenden Beschreibung und den Patentansprüchen steht «Halogen» vorzugsweise für Fluor, Chlor oder Brom.

A' bedeutet vorzugsweise Wasserstoff oder Methyl, besonders Wasserstoff.

Falls >N-CH(Zi)-CO- die Bedeutung a) hat, steht dieser Rest vorzugsweise für einen (L)- oder (D)-Phenylalanin-, Pentafluorophenylalanin- oder einen (L)- oder (D)- Tyrosinrest (wobei Zt Benzyl oder p-OH-Benzyl bedeutet), besonders für den (D)-Phenylalaninrest.

Falls >N-CH(Zt)-CO- die Bedeutung b) hat, ist dieser Rest vorzugsweise lipophil. Folglich sind solche Reste bevorzugt, worin Zt für Alkyl mit 3, vorzugsweise 4, oder mehr C-Atomen oder für einen Rest -CH2-A2 steht, worin A2 Naphtyl, Pyridyl oder 3-lndolyl bedeutet.

Der >N-CH(Zi)CO-Rest steht besonders bevorzugt für die unterà) definierten Reste.

Y't und Y'2 stehen vorzugsweise zusammen für eine Bindung oder bedeuten vorzugsweise, unabhängig voneinander, Wasserstoff oder einen Rest der Formel (1) oder (3). Ganz bevorzugt stehen Y'i und Y'2 für eine Bindung.

Wenn B im Ring durch Halogen substituiertes Phe bedeutet, wird auch darunter Pentafluoroalanin verstanden.

Die folgenden Bedeutungen sind bevorzugt, entweder einzeln, zusammen oder in jeder Kombination oder Unter-Kombination:

B ist vorzugsweise Phe oderTyr.

C ist vorzugsweise (D)-Trp, oder 5-Halo-(D)Trp, besonders D-Trp.

D ist vorzugsweise Lys oder 4-Aminocyclohexylalanin, besonders Lys.

E ist vorzugsweise Thr, Ser oder Vai, besonders Thr oder Val.

F ist vorzugsweise ein

/R11

-CO-ÎI -Rest

^Rl2

besonders eine Gruppe der Formel

✓Ru

-CON

NVCH(RX3)X4

worin R11 für Wasserstoff, R12 wie oben definiert ist, R13 -CH2OH, -CH(CH3)OH, CH2CH2OH, (CH2)3ÜH oder als einen in a gebundenen Rest einer a-Aminosäure für i-Propyl, i-Butyl oder einen Rest abgeleitet von Trp, 5-FluoroTrp, 3-(2-naphthyl)-AIanin, Ala, MeAla oder Gly, besonders CH2OH oder CH(CH3)OH, ganz besonders CH(CH3)OH, und X^für

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JZ-ii

-CON

^Rl 5

oderChfeORio, und

Rio für Wasserstoff oder, als Rest eines physiologisch annehmbaren, physiologisch hydrolysierbaren Esters, vorzugsweise für HCO, Alkyicarbonyl mit 2 bis 12 C-Atomen, Phenylalkylcarbonyl mit 8 bis 12 C-Atomen oder Benzoyl steht, wobei die Gruppe -GH(Ri3)-X4 vorzugsweise die L-Konfiguration hat. Die Reste in den Stellungen 2 und 7 haben vorzugsweise die (L)-Konfiguration.

Ri,

a. ^(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol r2/

Ri i 1

b. (D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 *2T

c. /(D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-TrpNH2 R2

Ri r —i d« ^T(D)Trp-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 R2

Rt i ——|

e • ^(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 R2

Ri. , ,

f. ^,3-C2-(Naphthyl)-(D)Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 R2

R, r- ,

g- ^(D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ß-Nal-NH2 Ra rk , -,

^3-(2-naphthyl)-Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ß-Nal-NH2 R2

Ri. r ,

i. J^(D)Phe-Cys-ß-Nal-(D)Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2 Rz

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Weiter bevorzugte Verbindungen sind solche der Formel (!) worin Ri und /oder R2 einen Rest der For-mei(a) bedeuten.

Ganz bevorzugte erfindungsgemässe Verbindungen sind solche die zwei Reste der Formel (a) und/oder (b) an der N-terminalen Aminogruppe besitzen, beispielsweise Verbindungen der Formel II

Zi A' CHz-S-Yi' Y2'-S-CH2

I II I

r17—N—CH—CO—N CH—CO—fi—C—D—E—NH—CH F (II)

R18

worin

Zt, A', Y'i, Y'2, B, C, D, E und F die oben angegebenen Bedeutungen haben und R17 und Ria unabhängig voneinander einen Rest der Formel (a) oder (b) bedeuten, vorzugsweise einen Rest der Formel (a), und ihre physiologisch annehmbare Äther oder physiologisch-hydrolysierbare und -annehmbare Ester.

Die vorliegende Erfindung umfasst Verfahren zur Herstellung von erfindungsgemässen Verbindungen. Beispielsweise können die Verbindungen hergestellt werden, indem man a) mindestens eine Schutzgruppe, die in einem geschützten mit mindestens einem Rest der Formel (a), (b) oder (c) substituierten Polypeptid vorhanden Ist, entfernt oder b) eine Verbindung der Formel III

Yi

H0H2C-(CH0H)£-(C)g-Z2 (III)

I

Ï2

worin entweder g 0 oder 1 ist,

Yi und Y2 eine der oben angegebenen Bedeutungen haben, und Z2 für-CHO steht, oder g für 1,

Z2für GH2OH und -CY1Y2 zusammen für Carbonyl stehen,

wobei die freien Hydroxygruppen veräthert oder verestert sein können,

oder eine Verbindung der Formel IV

X'i-NH-X'3-CHO (IV)

worin

X'i eine Aminoschutzgruppe, und

X'3 C-t-5-Alkylen bedeutet,

mit einer Verbindung der Formel V reduktiv aminiert,

P-NHa (V)

worin P ein Somatostatinpeptidrest in geschützter Form ist, z.B. eine Verbindung der Forme! V'

Zi A'

I !

H2N—CH—CO—N CH—CO—B—C—D—E—NH—CH—F fV' Ì

I I

CHa-S-Yj/ Y2'-S-CH2

worin Zi, Y'i, Y'2, A', B, C, D, E und F die oben angegebenen Bedeutungen haben, wobei der Rest

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CH2-S-Yi '

Y2'-S-CH2

Zi A'

in geschützter Form vorliegt,

und anschliessend gegebenenfalls die Verfahrensstufe a) ausgeführt wird;

c) zwei Peptideinheiten, von denen jede mindestens eine Aminosäure oder einen Aminoalkohol in geschützter oder ungeschützter Form und eine Einheit einen Rest der Formel (a), (b) oder (c) enthält, durch eine Amidbindung miteinander verknüpft, wobei die Peptidbindung in der Weise erfolgen soll, dass die erfindungsgemässe Aminosäuresequenz hergestellt wird und anschliessend gegebenenfalls die Verfahrensstufe a) ausgeführt wird, oder d) eine funktionelle Gruppe eines ungeschützten oder geschützten Polypeptides in eine andere funktionelle Gruppe überführt, wobei ein ungeschütztes oder geschütztes Somatostatinpeptid erhalten wird und im letzteren Fall der Verfahrensschritt a) ausgeführt wird,

e) mindestens eine gegebenenfalls geschützte Gruppe in ein ungeschütztes oder geschütztes Polypeptid einführt, wobei anschliessend gegebenenfalls die Verfahrensstufe a) ausgeführt wird,

f) optisch aktive Isomere, ausgehend von Mischungen von solchen Isomeren, welche gemäss Verfahrensstufe a), bis e) erhalten sind, trennt wobei die Verbindungen in freier Form, Salzform oder als Komplexe erhalten werden können.

Es handelt sich hierbei um in der Peptidchemie an sich bekannte Methoden; sie können analog zu den in den nachstehenden Beispielen beschriebenen Verfahren ausgeführt werden.

Gewünschtenfails können in diesen Umsetzungen Schutzgruppen wie üblich in der Peptidchemie zum Schutz von funktionellen Gruppen, die in der Umsetzung nicht teilnehmen, eingesetzt werden. Solche Schutzgruppen beinhalten auch poiymere Harze mit funktionellen Gruppen.

Die reduktive Aminierungsstufe b) kann in üblicher Weise wie für eine Aldose oder Ketose durchgeführt werden. Die reduktive Aminierung iässt sich beispielsweise mit NaBHaCN bewerkstelligen. Hierbei ist ein saurer pH-Wert, beispielsweise von 5-7 bevorzugt. Die Temperatur kann zwischen Raumtemperatur bis 100°C betragen. Die Umsetzung kann auch vorteilhaft in Gegenwart eines inerten Lösungsmitteis, beispielsweise wie Wasser, ein Alkohol, Dioxan oder Dimethylformamid durchgeführt werden.

Das Endprodukt kann in üblicher Weise gereinigt werden.

Die unmodifizierten Polypeptide, die als Ausgangsprodukte in Stufe b) oder c) eingesetzt werden, können nach an sich bekannten Methoden hergestellt werden, beispielsweise in Lösung oder durch Solid Phase, z.B. wie im US Patent 4 395 403 beschrieben auch die Oxydationsstufe eines geradkettigen Polypeptids in ein verbrückten Peptid. Die Peptideinheiten, die mindestens einen Rest der Formel (a), (b) oder (c) enthalten und als Ausgangsprodukt in Stufe (c) eingesetzt werden, können analog zu der Herstellungsstufe b) hergestellt werden.

Insofern die Herstellung der Ausgangsprodukte nicht besonders beschrieben wird, sind die Verbindungen bekannt oder können nach an sich bekannten Methoden, z.B. analog zu den in den nachstehenden Beispielen beschriebenen Verfahren hergestellt und gereinigt werden.

in den nachfolgenden Beispielen erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden und sind die ja]p-Werte unkorrigieit Die folgenden Abkürzungen werden verwendet:

BOC = tert. Butyloxycarbonyl DMF = Dimethylformamid AcOH = Essigsäure MeOH = Methanol

Thr-ol = Threoninoirest = CH3-CH0H-CH(CH20H)-NH-TFA = Trifluoressigsäure

Alle Peptide werden als Polyacetate-polyhydrate erhalten mit einem Peptidgehait von 70 bis 90%.

Die HPLC-Analyse ergibt, dass die Polypeptide weniger als 5% an anderen Peptiden enthalten.

Der in den nachfolgenden Beispielen angeführte Faktor «F» gibt den Peptidgehait in den erhaltenen Produkten an (F= 1 kommt mit einem 100%-igen Peptidgehait überein). Die Differenz zu 100% [(1-F)d0û] besteht aus Essigsäure und Wasser.

BEISPIEL 1

2,3-Dihydroxypropyl-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThT--ol

3 ml Trifluoressigsäure (100%) werden 300 g 2,3-dihydroxy

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I —'— 1

l-propyl-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys(BOC)-Thr-Cys-Thr-ol zugegeben und die Mischung wird bei Raumtemperatur behalten bis alle Ausgangsprodukte gelöst sind (ca. 5 Minuten). Nach der Zugabe von 20 ml Diisopropyläther, fällt die Titelverbindung aus. Es wird filtriert und mit Diisopropyläther gewaschen. Die Titelverbindung wird mittels Kieselgelchromatographie (CHCl3/MeOH/AcOH/H20 7/3/0,5/0,5) gereinigt und als weisses Lyophilisat erhalten.

[<x]|0 = 24,5° (c = 1 in AcOH 95%) F = 0,83

Die Ausgangsprodukte werden wie folgt erhalten:

I 1

a) H-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(BOC)-Thr-Cys-Thr-ol

2,25 g Di-tert.-Butylpyrocarbonat, gelöst in 30 ml DMF werden langsam, tropfenweise, bei Raumtemperatur einer Lösung von r -| <

10 g H-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol-Azetat in 100 ml DMF zugegeben. Nach zwei Stunden bei Raumtemperatur wird das Lösungsmittel unter Vacuo abgedampft, und 200 ml Diisopropyläther werden dem Rückstand zugegeben. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, mit Diisopropyläther gewaschen und getrocknet. Das rohe Produkt wird mittels Kieselgelchromatographie (CH2Gl2/MeOH 9/1) gereinigt und als weisses amorphes Puder erhalten. [<x]2° = 29,8° (c = 1,28 in DMF)

b) 2,3-Dihydroxy-l-propyl-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys(B0C)-Thr~Cys-Thr-ol

Methode A

0,5 g des in Stufe a) erhaltenen Produkts, in 30 ml Dioxan/HgO 3:7 werden mit 50 mg NaBHaCN und 130 mg Glyzeraldehyd behandelt. Der pH der Mischung wird auf 7 mit 0,1 ml HCl eingestellt und die Mischung auf 100°C während 6 Stunden behandelt. Nachträglich wird die Mischung gekühlt, gefroren und liophilisiert. Der Rückstand wird in 50 ml Äthylazetat aufgenommen und mit Wasser geschüttelt. Die organische Phase wird getrocknet und in Vacuo verdampft. Die Titelverbindung wird als amorphes Produkt erhalten.

[a]2° = 23,2° (c= 1,2 in DMF)

Methode B

Anstatt einer Mischung Dioxan/Wasser kann eine Mischung Methanol/Wasser (2/1 V/V) verwendet und die Reaktionsmischung auf pH 5 mit einem Phosphatpuffer eingestellt werden. Nach 4 bis 6 Stunden bei 50ÔC, anschliessend Zugabe von Wasser, Filtration und über P4Ot0 Trocknung, wird die Titelverbin-dung b) als ein amorphes Puder isoliert.

BEISPIEL 2

I 1

2,3-Dihydroxy- ( 2S )-propyl- (D) Phe-Cys-Phe- (D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von 130 mg (D)-Glyzeraldehyd, die Titelverbindung. [ce]20 = -25,1° (c = 1 in 95% AcOH), F = 0,86.

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BEISPIEL 3

2,3-Dihydroxy-(2R)-propyl-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von 130 mg (L)-Glyzeraldehyd, die Titelverbindung. [a]2° = —18,4® (c = 1 in 95% AcOH), F = 0,90,

BEISPIEL 4

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von Glycolaldehyd in entsprechender Menge folgende Verbindungen:

I —!

a) 2-Hydroxyaethyl-(D)Phe-Çys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Çys-Thr-ol

[a]20 a —28,8° (c = 1 in 95% AcOH), F = 0,90.

I —I

b) Bis-(2-hydroxyaethyl)-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol

[a]p° = —21,9° (c = 1 in 95% AcOH), F = 0,83.

BEISPIELS

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von 2-Methoxyacetaldehyd in entsprechender Menge folgende Verbindungen:

I 1

a) 2-Hethoxyaethyl-(D)Phe-Cys-Phe-ÇD)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol

Ia]|° = -8,5° (c = 0,25 in 95% AcOH), F = 0,76 und

1 - —-i b) Bis-(2-fflethoxyaethyl)-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr--Cys-1!hr-ol

[a]|° =—5° (c = 0,5 in 95% AcOH) F = 0,79.

In den nachfolgenden Beispielen, hat der Ausdruck SMS folgende Bedeutung:

l 1

-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol.

BEISPIELS

2.3-Di-propionvloxv-f2S)-proDVl-SMS

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von 2,3-Di-0-propionyl-(D)-Glyceraldehyd die Titelverbindung.

[alf =-21,7° (c = 0,9 in 95% AcOH), F = 0,88.

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BEISPIEL 7

2.3-Di-hexanovloxv-f2SÌ-propvl-SMS

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von 2,3-Di-0-hexanoyl(D)-GIyceraidehyd die Titelverbindung.

[<x]2° = -18,8° (c = 0,25 in 95% AcOH), F = 0,79.

BEISPIELS

2.3-Di-0-isopropvliden-2.3-dihvdroxv-(2SVproDvl-SMS

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von 2,3-Di-0-isopropyliden-(D)-Glyceraldehyd die Titelverbindung.

[a]2° —38° (c = 0,25 in 95% AcOH), F = 0,76.

BEISPIEL 9

2.3.4-Tri-hvdroxv-(2S.3Rl-butvl-SMS

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von D-(-)-Erythrose die Titelverbindung.

[a]|° = -29,2° (c = 0,25 in 95% AcOH), F = 0,81.

BEISPIEL 10

2-Aminoäthvi-SMS

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von N-Boc-2-Aminoacetaldehyd die Titelverbindung. [a]2° = -32° (c = 0,13 in 95% AcOH), F = 0,84.

BEISPIEL 11

3-AminoproPvl-SMS

Analog zum Beispiel 1 erhält man ausgehend von N-Boc-3-Aminopropionaldehyd die Titelverbindung. [a]2° = -21° (c = 0,29 in 95% AcOH), F = 0,76.

Die erfindungsgemässen Verbindungen weisen im Tierversuch wertvolle pharmakodynamische Eigenschaften auf und eignen sich daher als therapeutische Mittel. Insbesondere bewirken sie eine Hemmung der GH-Sekretion, die z.B. durch die Herabsetzung des GH-Gehalts im Serum der Ratte nachgewiesen werden kann.

Diese Hemmung der GH-Sekretion kann wie folgt bestimmt werden:

Männlichen Ratten wird eine Stunde nach s.c. Verabreichung der zu prüfenden Verbindung in mehreren logarithmisch gestaffelten Dosen Blut entnommen. Die Bestimmung des GH-Spiegels in Serum erfolgt mittels Radioimmunoversuch (RIA). Bei diesen Versuchen sind die erfindungsgemässen Verbindungen aktiv in Dosen von 0,02 bis 100 ng/kg s.c..

Weiter wurde die GH-senkende Wirkung der erfindungsgemässen Verbindung auch nach oraler Applikation an männlichen Ratten mit Östradiolimplantaten untersucht. Dieser Test wird wie folgt durchgeführt:

Männlichen OFA Ratten im Gewicht von ca. 300 g wird in Äthernarkose ein Schlauch (Länge 50 mm, 0 3 mm) aus Silastic mit 50 mg Östradiol unter die Rückenhaut implantiert. Zu verschiedenen Zeiten (1 bis 6 Monate später) werden diese Tiere wiederholt für Versuche verwendet. Die Verabreichung der Testsubstanz erfolgt oral, wobei die Tiere ca. 16 Stunden vor dem Versuch ohne Futter gehalten werden. Der GH-Spiegel im Blutserum wird 1 und 2 Stunden nach oraler Verabreichung durch RIA bestimmt. Bei diesen Versuchen sind die erfindungsgemässen Verbindungen aktiv in Dosen von 10 bis 5000 jig/kg peroral.

Die erfindungsgemässen Verbindungen finden deshalb Verwendung für alle Indikationen, bei welchen eine Hemmung der GH-Sekretion erwünscht ist. Im Vordergrund steht die Verwendung bei der Akrome-galie, sowie beim Diabetes mellitus, besonders die Komplikationen davon, z.B. Angiopathie, proliferative Retinopathie, Dämmerungsstörungen und Nierenleiden.

Die erfindungsgemässen Verbindungen hemmen auch die Magen- und Pankreassekretion und auch die Sekretion von verschiedenen Peptiden des Magen-Darmtrakts, wie aus Standardversuchen an Ratten mit Magen- und Pankreasfistel hervorgeht. Bei diesen Versuchen sind die erfindungsgemässen Verbindungen aktiv in Dosen von 0,1 bis 10 mg/kg peroral.

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Die erfindungsgemässen Verbindungen eignen sich daher auch zur Behandlung gastrointestinaler Störungen, wie zur Behandlung von Magengeschwüren, Pankreasfisteln, Darmentzündung, Dumping-Syndrom, akuter Pankreatitis und von gastro-intestinale Hormone abscheidenden Tumoren (z.B. Vipo-mas, Glucagonomas, Insujinomas usw.) sowie von gastro-intestinalen Blutungen.

Die erfindungsgemässen Verbindungen hemmen auch die Proliferation und/oder Keratinisierung epidermaler Zellen und eignen sich daher auch zur Behandlung dermatologischer Krankheiten, die mit einer krankhaften Prolifération und/oder Keratinisierung epidermaler Zellen zusammenhängen, und zwar insbesondere zur Behandlung von Psoriasis.

Ferner können die erfindungsgemässen Verbindungen auch zur Behandlung einer degenerativen senilen Demenz unter Einschluss der senilen Demenz des Alzheimer-Typs (SDAT) angewandt werden.

Die erfindungsgemässen Verbindungen sind auch nützlich bei der Behandlung von verschiedenen Tumoren, besonders Tumoren mit Somatostatinrezeptoren, wie aus Proliferationsversuchen mit verschiedenen Krebszellinien und in Tumorwachstumversuchen in der nackte Maus mit hormonabhängigen Tumoren (z.B. Magen-abhängiger Dickdarmkrebs) hervorgeht. Die erfindungsgemässen Verbindungen finden deshalb Verwendung bei der Behandlung von z.B. Brust-, Prostata-, Dickdarm-, Pankreas-, und Hirnkrebs,

Bei all diesen Indikationen sollen die erfindungsgemässen Verbindungen in einer Tagesdosis von etwa 2 ng bis 20 mg, vorzugsweise von ca. 0,01 bis 20 mg, z.B. von etwa 10 bis 5000 ng s.c. und von etwa 300 ng bis 20 mg p.o., verwendet werden. Gewünschtenfalls können die Verbindungen auch in unterteilten Dosen bis 4-mal täglich in Einheitsdosierungsform oder auch in Retardform verabreicht werden. Solche Einheitsdosen können etwa 0,5 ng bis 10 mg, z.B. von ca. 2 ng bis 10 mg, des jeweiligen Wirkstoffs enthalten.

Die Verbindungen der Beispiele 1, 4b und 10 sind bevorzugt.

Die Erfindung betrifft auch die erfindungsgemässen Polypeptide in freier Form oder als pharmazeutisch geeignete Salze oder Komplexe als Pharmazeutikum.

Die Erfindung umfasst auch pharmazeutische Präparate, welche die erfindungsgemässen Verbindungen enthalten. Diese enthalten die genannten Verbindungen oder ihre pharmakologisch akzeptablen Salze oder Komplexe z.B. in Mischung mit einem flüssigen oder festen Trägermaterial. Sie können z.B. in einer Kapsel zusammen mit den üblichen Trägerstoffen verabreicht werden. Diese Präparate können auf übliche Weise hergestellt werden und sollen z.B. für Injektion, Suppositorien oder nasale, besonders jedoch für orale Verabreichung, z.B. wie Tabletten oder Kapsel, geeignet sein. Es können auch Depotpräparate verwendet werden.

Claims

Patentansprüche

1. Ein Somatostatinpeptid, dadurch gekennzeichnet, dass es mindestens einen Rest der Formel (a), (b) oder (c) enthält f

H0H2 C-(CH0H)f-(C)g-CH2- H0H2 C-(CH0H)t-CH-CH2OH

/

X2

N-X3-

(a) (b) (c)

worin

Yi für Wasserstoff

Yz für Wasserstoff oder Hydroxy steht,

f und g unabhängig voneinander 0 oder 1 sind Xi Wasserstoff

Xz Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe, und X3 Cz-eAlkylen bedeuten,

wobei die freie Valenz im Rest (a), (b) oder (c) an der N-terminale Aminogruppe des Peptids gebunden ist, und die physiologisch annehmbare Äther und physiologisch hydrolisierbare und annehmbare Ester davon, wenn das Peptid mindestens einen Rest der Formel (a) oder (b) enthält,

in freier Form oder in Form eines Säureadditionssalzes oder Komplexes.

2. Eine Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie mindestens einen Rest der Formet (a) oder (b) wie in Anspruch 1 definiert enthält

3. Eine Verbindung nach Anspruch 1, der Formel I

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Zx A' CHj-S-V Ya'-S-CHa

I I ! I

Ri—N—CH—GO—N CH— CO—B—C—&—E—NH—CH—F

f

R2

CD

worin

Ri für einen Rest der Formel (a), (b) oder (c) wie oben definiert,

Ra für Wasserstoff, Ci-i2Alkyl, Ci_4Alkanoyl, C7-ioPhenylalkyl oder einen Rest der Formel (a), (b) oder (c) wie oben definiert,

>N-CH(Zi)-CO für i) einen gegebenenfalls durch Halogen, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen und/oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituierten (L)- oder (D)-Phenylalaninrest oder ii) den Rest einer anderen als unter i) angegebenen natürlichen lipophilen a-Aminosäure, einer entsprechenden (D)-Aminosäure oder einer synthetischen Aminosäure steht,

wobei

Zt in >N-CH(Zi)-CO- den Rest eines unter i) oder ii) definierten Aminosäurerests vorstellt,

A' für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen

Y'i und Y'2 unabhängig voneinander für Wasserstoff oder für

Ra

I

a) -CO-C-(CH2)m-H

I

Rb worin m eine ganze Zahl von 1 bis 4

Ra CH3 oder C2H5 und

Rb H, CH3 oder C2H5 bedeutet, oder b) -CO-CH

>(CH2)n worin n eine ganze Zahl von 1 bis 5 bedeutet, oder c) -CO-NHRc worin Rc einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 C-Atomen bedeutet, oder d) -CO-NH-CH-COOR.

I

Rd worin Rd den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen oder synthetischen a-Aminosäure (inkl. Wasserstoff) und

Re einen Alkylrest mit 1 bis 5 C-Atomen bedeutet, oder e) -C0-(NH)p-

l Rb'J

worin R a und R'b unabhängig voneinander Wasserstoff, CH3 oder C2H5

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Ra und Rg unabhängig voneinander Wasserstoff, Halogen, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1

bis 3 C-Atomen p 0 oder 1,

q 0 oder 1 und rO, 1 oderà bedeuten,

oder Vt und Y'2 zusammen für eine Bindung stehen,

B für Phe oder im Phenylrest durch Halogen, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes Phe, oder 3-(2-Naphthyl)-alanin

C für gegebenenfalls im Benzolring durch Halogen, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes L- oder D-Trp, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl substituiert sein kann

D für Lys, Lys worin die Seitenkette ein 0 oder S in ß-Stellung enthält, -yF-Lys, 8F-Lys oder Orn, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl substituiert sein kann, oder 4-AminocycIohexylAla oder 4-Aminocy-clohexylGly

E für Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Aminobuttersäure- oder Aminoisobuttersäurerest F für COOR7, CH2OR10, CO-NR11R12 oder

-CO-»

R7 für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen

Rio für Wasserstoff oder den Rest eines physiologisch annehmbaren, physiologisch hydrolysierbaren Esters

Ru für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen, jedoch falls R12 für -CH(Ri3)-X4 steht, nur für Wasserstoff oder Methyl R12 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder

Rj.3

I

-CH-X4

R13 für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen oder synthetischen Aminosäure (inklusive Wasserstoff) oder für einen CH2OH, HO-CH2-CH2, HO(CH2)s oder-CH(CH3)OH Rest,

X4 für COOR7, CH2OR10 oder

CON

Rt4 für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen

Ris für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen, und R16 für Wasserstoff oder Hydroxy stehen,

wobei die Reste B, D und E in L-Form und die Reste in den Stellungen 2 und 7 sowie die Reste Y'id) und Y'2d) in D- oder L-Form vorliegen können,

und die physiologisch annehmbare Äther und die physiologisch-hydrolysierbare und -annehmbare Ester davon wenn die Verbindungen der Formel I mindestens einen Rest der Formel (a) oder (b) enthalten,

sowie die Salze und Komplexe dieser Polypeptidderivate.

4. Verfahren zur Herstellung eines Somatostatinpeptids gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man mindestens eine Schutzgruppe, die in einem geschützten mit mindestens einem Rest der Formel (a), (b) oder (c) substituierten Polypeptid vorhanden ist, entfernt, wobei die Verbindungen in freier Form, Salzform oder als Komplexe erhalten werden können.

5. Verfahren zur Herstellung eines Somatostatinpeptids gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel III

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H0H2C-(CH0H)f-(C)g-Z2 (III)

worin entweder g 0 oder 1 ist,

Yi und Y2 eine der oben angegebenen Bedeutungen haben, und Z2 für -CHO steht, oder g für 1,

Zz für CH2OH und -CY1Y2 zusammen für Carbonyl stehen, wobei die freien Hydroxygruppen ver-äthert oder verestert sein können, oder eine Verbindung der Formel IV

X'i-NH-X'3-CHO (IV)

worin

X'i eine Aminoschutzgruppe, und

X'3 Ci-5-Alkylen bedeutet, mit einer Verbindung der Formel V reduktiv aminiert,

P-NH2 (V)

worin P ein Somatostatinpeptidrest in geschützter Form ist, und falls mindestens eine Schutzgruppe im erhaltenen Peptid vorhanden ist, diese entfernt wird, wobei die Verbindungen in freier Form, Salzform oder als Komplexe erhalten werden können.

6. Verfahren zur Herstellung eines Somatostatinpeptids gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man zwei Peptideinheiten, von denen jede mindestens eine Aminosäure oder einen Aminoalko-hol in geschützter oder ungeschützter Form und eine Einheit einen Rest der Formel (a), (b) oder (c) enthält, durch eine Amidbindung miteinander verknüpft, wobei die Peptidbindung in der Weise erfolgt, dass die erforderliche Aminosäuresequenz hergestellt wird, und falls mindestens eine Schutzgruppe im erhaltenen Peptid vorhanden ist, diese entfernt wird, wobei die Verbindungen in freier Form, Salzform oder als Komplexe erhalten werden können.

7. Verfahren zur Herstellung eines Somatostatinpeptids gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine funktionelle Gruppe eines ungeschützten oder geschützten Polypeptides in eine andere funktionelle Gruppe überführt, und falls mindestens eine Schutzgruppe im erhaltenen Peptid vorhanden ist, diese entfernt wird, wobei die Verbindungen in freier Form, Salzform oder als Komplexe erhalten werden können.

8. Verfahren zur Herstellung eines Somatostatinpeptids gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass mindestens eine ungeschützte oder geschützte Gruppe in ein ungeschütztes oder geschütztes Polypeptid eingeführt wird, und falls mindestens eine Schutzgruppe im erhaltenen Peptid vorhanden ist, diese entfernt wird, wobei die Verbindungen in freier Form, Salzform oder als Komplexe erhalten werden können.

9. Eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Komplex davon, als Pharmazeutikum.

10. Eine pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Komplex davon, zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünner oder Träger dafür.

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