CA2382000A1 - Positive identification of samples analysed by electrophoresis on a porous support - Google Patents
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Abstract
Description
IDENTIFICATION POSITIVE D'ECHANTILLONS ANALYSES PAR
ELECTROPHORESE SUR SUPPORT POREUX
L'invention a pour objet la définition et la mise en oeuvre de moyens d'identification positive d'échantillons analysés par électrophorèse. Plus précisément, l'invention concerne des moyens d'identification d'applicateurs d'échantillons sur un support d'électrophorèse, qui permettent d'associer au profil électrophorétique d'une ou plusieurs séries d'échantillons analysés, le ou les applicateurs d'échantillons utilisés et donc, d'identifier de façon fiable le résultat de l'analyse par rapport aux échantillons primaires.
Dans le cadre des analyses d'échanfiillons après séparation par électrophorèse, notamment à des fins cliniques, et en particulier lors d'analyses de routine pour la détermination de pathologies, il est nécessaire pour la sécurité des résultats produits d'être en mesure de suivre de façon fiable le devenir de chaque échantillon au cours de l'analyse. En particulier, il est nécessaire de s'assurer que le résultat obtenu à l'issue de la séparation par éiectrophorèse peut sans aucun doute ëtre attribué à l'échantillon auquel il correspond en théorie (échantillon primaire).
L'incertitude quant à l'attribution d'un résultat au bon échantillon primaire, peut résulter par exemple des opérations exécutées manuellement et dont la bonne exécution dépend de ce fait essentiellement de l'attention de l'opérateur.
Dans la pratique actuelle de ce type d'analyse, une erreur peut ne pas être d étectée.
L'invention propose ainsi des moyens d'identification qui permettent de repérer un échantillon ou une série d'échantillons et de l'identifier sur le support d'électrophorèse, à l'issue de la séparation électrophorétique. Ces moyens peuvent être mis en oeuvre dans le cadre de toute séparation électrophorétique, employant toute technique appropriée pour réaliser une électrophorèse de zone sur un support. POSITIVE IDENTIFICATION OF SAMPLES ANALYZED BY
ELECTROPHORESIS ON POROUS SUPPORT
The subject of the invention is the definition and the implementation of means positive identification of samples analyzed by electrophoresis. More specifically, the invention relates to means for identifying applicators samples on an electrophoresis support, which allow to associate with electrophoretic profile of one or more series of analyzed samples, the or the sample applicators used and therefore, to identify reliably the result of the analysis compared to the primary samples.
As part of sample analyzes after separation by electrophoresis, in particular for clinical purposes, and in particular during analyzes routine for the determination of pathologies, it is necessary for the security of product results to be able to reliably track the fate of each sample during analysis. In particular, it is necessary to ensure that the result obtained after separation by electrophoresis can undoubtedly be attributed to the sample to which it corresponds in theory (primary sample).
Uncertainty as to the attribution of a result to the good primary sample, may result, for example, from operations performed manually and the good execution therefore depends essentially on the attention of the operator.
In the current practice of this type of analysis, an error may not be detected.
The invention thus proposes means of identification which make it possible to locate a sample or series of samples and identify it on the support electrophoresis, after electrophoretic separation. These means can be used as part of any separation electrophoretic, employing any suitable technique for performing zone electrophoresis on a support.
2 L'invention concerne également des applicateurs d'échantillons, utilisables pour déposer les échantillons à analyser sur le support d'électrophorèse, et pourvus des moyens d'identification (appelés "marqueurs d'identification") selon l'invention.
L'invention propose également des kits comprenant lesdits moyens d'identification.
Les moyens définis dans le cadre de l'invention peuvent être intégrés dans un système de repérage global des échantillons analysés à tous les stades de l'analyse, depuis le prélèvement de l'échantillon, jusqu'à la transmission du résultat.
On rappellera, sans en limiter la définition aux modalités décrites ci-après, que les techniques d'électrophorèse de zone réalisées notamment en gel d'agarose, permettent la séparation des constituants protéiques contenus dans des échantillons biologiques tels que sérum, sang, urine, liquide céphalo-rachidien, larmes etc.,. Dans un milieu d'électrophorèse contenant une solution tampon, les échantillons contenant les protéines sont déposés au moyen d'un applicateur d'échantillons à la surface du gel, où elles s'ionisent et, sous l'effet d'un champ électrique, migrent à des vitesses différentes en fonction de leur charge respective. Après l'étape de migration qui permet la séparation des constituants protéiques des échantillons, ces protéines sont révélées, par exemple par coloration au moyen d'un colorant spécifique et quantifiées par exemple par une lecture densitométrique.
Comme la majorité des techniques modernes d'analyse, l'électrophorèse a été portée à un degré important d'automatisation afin d'une part, de faciliter sa mise en oeuvre et d'autre part de fa fiabifiser. Ainsi les étapes de chargement des échantillons sur les applicateurs, dépôt des applicateurs sur le gel, migration et séchage du gel, coloration et décoloration du gel, lecture du gel peuvent maintenant être réalisées de façon automatique. En revanche, l'étape de transfert du ou des applicateurs d'échantillons, depuis l'appareil de 2 The invention also relates to sample applicators, usable for depositing the samples to be analyzed on the support electrophoresis, and provided with identification means (called "markers identification ") according to the invention.
The invention also provides kits comprising said means identification.
The means defined in the context of the invention can be integrated in a global tracking system for the samples analyzed every stages of analysis, from sample collection to transmission of the result.
We will recall, without limiting its definition to the methods described above afterwards, that the zone electrophoresis techniques carried out in particular in agarose gel, allow the separation of the protein constituents contained in biological samples such as serum, blood, urine, cephalo- liquid spinal, tears etc.,. In an electrophoresis medium containing a solution buffer, the samples containing the proteins are deposited using a sample applicator on the surface of the gel, where they ionize and, under the effect of an electric field, migrate at different speeds depending on their respective load. After the migration step which allows the separation of protein components of the samples, these proteins are revealed, by example by coloring using a specific dye and quantified by example by densitometric reading.
Like the majority of modern analytical techniques, electrophoresis has been brought to a significant degree of automation in order on the one hand to facilitate its implementation and secondly to make it more reliable. So the steps of loading samples on the applicators, deposition of the applicators on the gel, gel migration and drying, gel coloring and discoloration, gel reading can now be performed automatically. However, the stage transfer of the sample applicator (s) from the
3 chargement des échantillons, vers l'instrument d'électrophorèse reste encore une étape manuelle et donc sujette aux erreurs de manipulations. Ainsi, par exemple, dans le cas où 2 instruments d'électrophorèse sont utilisés simultanément, l'applicateur destiné au premier peut être chargé sur le second et réciproquement. Un autre exemple, plus fréquent, est le cas où plusieurs applicateurs doivent étre déposés sur un méme gel. II peut arriver qu'ils ne soient pas déposés au niveau qui leur était destiné (inversion de 2 rangées ou plus). Dans ce cas, i1 devient impossible de déterminer, par l'examen de l'image finale du gel coloré, à quel applicateur correspond une rangée de dépôts donnée.
L'invention fournit des moyens permettant d'attribuer une série d'échantillons déposée sur le support d'électrophorèse sous forme d'une rangée d'échantillons, à un applicateur d'échantillons donné, par le simple examen de l'image électrophorétique de cette rangée.
L'invention permet d'identifier sans erreur un applicateur et en conséquence une série d'échantillons à analyser associés à cet applicateur, par l'examen de l'image électrophorétique de l'applicateur obtenue, après les opérations de dépôt, migration, coloration et séchage, des moyens d'identification de l'applicateur et simultanément, des échantillons analysés.
L'utilisation de la présente invention, en association avec les méthodes classiques d'identification (par exemple les codes à barres ou les codes bidimensionnels tels que les codes à matrice) des différentes composantes du système d'analyse notamment les tubes échantillons, l'applicateur et le gel, permet l'identification et la traçabilité des échantillons depuis le tube primaire contenant le prélèvement, jusqu'au résultat final.
Un applicateur d'échantillons utilisable dans le cadre de la présente invention peut être constitué par tout type de dispositif permettant de charger des échantillons à analyser, notamment par prélèvement de ces échantillons à
partir de tubes dans lesquels ils sont contenus et permettant en outre de 3 loading of samples, to the electrophoresis instrument still remains a manual step and therefore subject to handling errors. So by example, in the case where 2 electrophoresis instruments are used simultaneously, the applicator intended for the first can be loaded onto the second and reciprocally. Another more frequent example is the case where several applicators must be placed on the same gel. They may not are not placed at the level intended for them (inversion of 2 rows or more). In this case, i1 becomes impossible to determine, by examining the image end of the colored gel, to which applicator corresponds a row of deposits given.
The invention provides means for assigning a series of samples deposited on the electrophoresis support in the form of a row samples, to a given sample applicator, by simply examining the electrophoretic image of this row.
The invention makes it possible to identify an applicator without error and consequence a series of samples to be analyzed associated with this applicator, through examination of the electrophoretic image of the applicator obtained, after the deposition, migration, coloring and drying operations, means identification of the applicator and simultaneously of the analyzed samples.
The use of the present invention in association with the methods conventional identification (for example bar codes or codes two-dimensional (such as matrix codes) of the different components of the analysis system including sample tubes, applicator and gel, allows identification and traceability of samples from the tube primary containing the sample, until the final result.
A sample applicator usable in the context of this invention can be constituted by any type of device making it possible to load samples to be analyzed, in particular by taking these samples from from the tubes in which they are contained and also making it possible to
4 charger, en une zone déterminée, un marqueur d'identification de l'applicateur selon l'invention. Un applicateur d'échantillons peut être chargé manuellement ou de préférence automatiquement, avec les échantillons.
Des applicateurs utilisables ont été décrits dans l'état antérieur de la technique et sont par exemple les peignes à "membrane" (ou à dents) décrits par exemple dans les demandes de brevets et brevets EP 0 493 996, US 4 load, in a determined area, an applicator identification marker according to the invention. A sample applicator can be loaded manually or preferably automatically, with the samples.
Applicators that can be used have been described in the prior state of the art.
technical and are for example the "membrane" (or toothed) combs described for example in patent applications and patents EP 0 493 996, US
5.464.515, US 5.405.516, les peignes à "gorge" les peignes à "lamelles", ou de façon générale, tout dispositif utilisable pour charger et ensuite déposer sur un support d'électrophorèse des échantillons à analyser.
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les marqueurs d'identification de l'applicateur qui font l'objet de l'invention, peuvent être constitués par toute espèce chimique susceptible d'être révélée sur le support d'électrophorèse, à l'issue des étapes de dépôt, de migration, de coloration et de séchage du support d'électrophorèse.
Les marqueurs de l'invention doivent pouvoir être détectés directement par examen du support d'électrophorèse après électrophorèse ou au moyen des téchniques de détection des constituants des échantillons séparés par électrophorèse.
L'expression "espèce chimique" s'applique dans le cadre de l'invention, à
toute entité, chimique ou biologique, capable d'être détectée, directement ou indirectement, y compris des composés, molécules, complexes, ions, associations (par exemple de type Anticorps-Antigènes) fonctionnels chimiquement ou biologiquement, ou non fonctionnels. Des exemples particuliers de ces espèces chimiques sont les espèces chimiques colorées ou susceptibles d'être colorées, notamment les protéines, ou des espèces fonctionnelles telles que les anticorps. .
Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, les espèces chimiques utilisées sont capables de migrer dans un champ électrique.
WO 01/92865,464,515, US 5,405,516, "throat" combs "lamella" combs, or generally speaking, any device that can be used to load and then drop onto a electrophoresis support for samples to be analyzed.
According to a preferred embodiment of the invention, the markers of identification of the applicator which are the subject of the invention, can to be made up of any chemical species liable to be revealed on the support electrophoresis, at the end of the deposition, migration and coloring steps and drying of the electrophoresis support.
The markers of the invention must be able to be detected directly by examination of the electrophoresis support after electrophoresis or by means techniques for detecting the constituents of the samples separated by electrophoresis.
The expression "chemical species" applies within the framework of the invention, to any entity, chemical or biological, capable of being detected, directly or indirectly, including compounds, molecules, complexes, ions, functional associations (for example of the Antibody-Antigens type) chemically or biologically, or not functional. Examples particular of these chemical species are the colored chemical species or likely to be colored, including proteins, or species such as antibodies. .
In a preferred embodiment of the invention, the species chemicals used are capable of migrating in an electric field.
WO 01/9286
6 PCT/FRO1/01233 Le marqueur peut être constitué de mélanges des susdites espèces que ces espèces appartiennent ou non au même groupe chimique ou biologique, et possèdent ou non des propriétés fonctionnelles de même nature. A titre d'exemple le marqueur peut être composé d'un mélange d'espèces chimiques capables de migrer dans un champ électrique et d'espèces ne migrant pas mais précipitant au niveau de leur zone de dépôt.
Naturellement, ces compositions ne doivent pas pouvoir être confondues, par l'image électrophorétique à laquelle elles donnent lieu, avec les échantillons analysés, séparés par l'électrophorèse. Ainsi, et à titre d'exemple, on propose d'utiliser comme moyens d'identification de chaque applicateur d'échantillons, des espèces chimiques colorées ou des mélanges de ces espèces, mélanges dans lesquels plusieurs espèces chimiques sont présentes et chacune ou certaines d'entre elles possédant une mobilité
électrophorétique différente par rapport à celle des autres espèces, ou de certaines des autres.
Pour être efficace dans le cadre de l'identification recherchée, sur un même support d'électrophorèse, ou sûr plusieurs supports d'électrophorèse, chacun des applicateurs utilisés, portant des séries différentes d'échantillons distincts, ,doit être associé à un marqueur déterminé qui lui est spécifique dans la mesure où il le distingue des autres applicateurs ou en variante doit être associé à un marqueur commun à différents applicateurs mais cependant localisé différemment au niveau de l'applicateur et en conséquence, au niveau du support d'électrophorèse après réaction, par la localisation des pistes du support d'électrophorèse marquées. Un marqueur commun peut être constitué
par l'une quelconque des espèces chimiques définies ci-dessus, par un mélange des ces espèces, y compris par de~ l'eau physiologique:
Selon une autre variante de réalisation de l'invention, le marquage d'une série d'échantillons résulte de l'absence de chargement d'une zone (puits) des applicateurs d'échantillons, cette zone normalement destinée à charger les échantillons, étant localisée différemment pour chaque applicateur, de façôn à
donner une image électrophorétique différente (par absence de bandes séparées et révélées) sur le support d'électrophorèse. En d'autres termes, la spécificité du marqueur est due soit à la nature et/ou à la concentration des espèces chimiques qui le constitue, soit à la localisation en une zone spécifique de l'applicateur, de cette composition, voire à une combinaison des paramètres précédentes, la spécificité du marqueur devant se traduire par une image électrophorétique différente pour chaque applicateur liée par exemple, à la couleur, au positionnement, au nombre ou à l'intensité des bandes obtenues pour chaque marqueur sur sa piste d'électrophorèse, à l'issue de l'analyse électrophorétique. Un marqueur peut aussi être identifié par la piste qu'il occupe sur le support d'électrophorèse, par rapport aux pistes occupées par les autres marqueurs sur le même ou sur un autre support.
A titre d'exemple, les marqueurs d'identification suivants peuvent être mis en oeuvre - un colorant ou un mélange de colorants, ou toute autre espèce colorée, par exemple une protéine colorée de façon covalente, migrant ou non, chaque applicateur étant repéré par une couleur particulière, ou un mélange de bandes colorées, - une protéine, une association de protéines, sous forme de monomères ou de polymères (ou toute autre espèce chimique, susceptible de migrer ou non, et de se colorer, par exemple lors de la coloration du gel par les colorants protéiques classiques : amidoschwarz, violet acide, etc..,) possédant une mobilité électrophorétique particulière, chaque applicateur étant repéré par une bande protéique (ou de l'espèce chimique) située à
une position donnée sur le profil, position différente en fonction de l'identifrant ; on citera également des associations Anticorps-Antigènes utilisés à la limite de la solubilité, une protéine polymérisée telle que la y-globuline bovine ; 6 PCT / FRO1 / 01233 The marker may consist of mixtures of the above species that these species may or may not belong to the same chemical or biological group, and whether or not they have similar functional properties. As example the marker can be composed of a mixture of chemical species able to migrate in an electric field and species not migrating but rushing to their drop zone.
Naturally, these compositions must not be able to be confused, by the electrophoretic image to which they give rise, with the samples analyzed, separated by electrophoresis. So, and as example, it is proposed to use as means of identification of each applicator of samples, colored chemical species or mixtures of these species, mixtures in which several chemical species are present and each or some of them with mobility electrophoretic different from that of other species, or some of the others.
To be effective in the context of the identification sought, on a same electrophoresis support, or on several electrophoresis supports, each of the applicators used, carrying different series samples distinct,, must be associated with a specific marker specific to it in the extent to which it distinguishes it from other applicators or as a variant must be associated with a common marker for different applicators but however located differently at the applicator level and therefore at the of the electrophoresis support after reaction, by locating the tracks of the marked electrophoresis support. A common marker can be formed by any of the chemical species defined above, by a mixture of these species, including by physiological water:
According to another alternative embodiment of the invention, the marking of a series of samples results from the absence of loading of an area (well) of sample applicators, this area normally intended for loading samples, being localized differently for each applicator, so give a different electrophoretic image (by absence of bands separated and revealed) on the electrophoresis support. In other words, the specificity of the marker is due either to the nature and / or to the concentration of chemical species which constitutes it, or to the localization in an area specific the applicator, this composition, or even a combination of the parameters previous, the specificity of the marker must translate into an image different electrophoretic for each applicator linked for example to the color, positioning, number or intensity of the bands obtained for each marker on its electrophoresis track, after the analysis electrophoretic. A marker can also be identified by the track it busy on the electrophoresis support, compared to the tracks occupied by the other markers on the same or another medium.
By way of example, the following identification markers can be implemented - a dye or a mixture of dyes, or any other colored species, by example a covalently colored protein, migrant or not, each applicator being identified by a particular color, or a mixture of colored bands, - a protein, a combination of proteins, in the form of monomers or polymers (or any other chemical species capable of migrating or no, and to be colored, for example during the coloring of the gel by classic protein dyes: amidoschwarz, acid violet, etc.) having a specific electrophoretic mobility, each applicator being identified by a protein band (or chemical species) located at a given position on the profile, different position depending on the identifier; we will also cite Antibody-Antigen associations used at the limit of solubility, a polymerized protein such as y-bovine globulin;
7 - un mélange de protéines (ou toute autre espèce chimique susceptible de migrer et de se colorer, par exemple lors de la coloration du gel par les colorants protéiques classiques : amidoschwarz, violet acide, etc...) possédant des mobilités électrophorétiques différentes, chaque applicateur étant repéré par un nombre de bandes correspondant au nombre de protéines (ou d'espèces chimiques) contenues dans l'identifiant, - une protéine (ou toute autre espèce chimique susceptible de migrer et de se colorer, par exemple lors de la coloration du gel par les colorants protéiques classiques : amidoswchwarz, violet acide, etc...) ou un mélange de protéines ou d'espèces chimiques) présentes à des concentrations variables dans chacun des marqueurs. Chaque applicateur sera repéré par l'intensité
de la ou des fractions correspondant à la concentration de la ou des protéines (ou espèces chimiques), - des combinaisons des marqueurs précédemment identifiés dès lors que le marqueur constitué est identifiable par son image électrophorétique - alternativement, un même marqueur d'identification choisi parmi les précédents, peut être utilisé pour l'ensemble des applicateurs d'échantillons mis en oeuvre, dès lors que ce marqueur est placé sur chaque applicateur, dans un puits prédéterminé, distinct pour chaque applicateur, ce qui permet à l'issue de la séparation des échantillons par éfectrophorèse, de repérer l'image d'un même marqueur en une zone différente pour chaque applicateur. Le marquage peut en variante résulter dans ce cas de l'absence de profil électrophorétique pour une piste spécifique pour chaque rangée d'échantillons, correspondant aux puits de l'applicateur laissés libres.
L'invention a aussi pour objet un procédé d'analyse par électrophorèse, dans lequel plusieurs applicateurs sont utilisés pour déposer des séries d'échantillons sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, ces applicateurs ayant au préalable été chargés d'une part avec les échantillons à analyser, d'autre part avec un marqueur spécifique pour chacun des applicateurs ou un 7 - a mixture of proteins (or any other chemical species capable of migrate and color, for example when the gel stains with classic protein dyes: amidoschwarz, acid violet, etc.) with different electrophoretic mobilities, each applicator being identified by a number of bands corresponding to the number of proteins (or chemical species) contained in the identifier, - a protein (or any other chemical species capable of migrating and color, for example when coloring the gel with protein dyes classics: amidoswchwarz, acid violet, etc.) or a mixture of proteins or chemical species) present in varying concentrations in each of the markers. Each applicator will be identified by the intensity of the fraction or fractions corresponding to the concentration of the one or more proteins (or chemical species), - combinations of the markers previously identified when the constituted marker is identifiable by its electrophoretic image - alternatively, the same identification marker chosen from among the can be used for all sample applicators implemented, as soon as this marker is placed on each applicator, in a predetermined well, separate for each applicator, which allows after separation of the samples by efectrophoresis, identify the image of the same marker in a different zone for each applicator. Marking may alternatively result in this case from the absence electrophoretic profile for a specific track for each row of samples, corresponding to the wells of the applicator left free.
The subject of the invention is also a method of analysis by electrophoresis, in which several applicators are used to deposit series samples on one or more electrophoresis supports, these applicators having previously been loaded on the one hand with the samples to be analyzed, on the other hand with a specific marker for each of the applicators or a
8 marqueur commun chargé en une zone spécifique différente pour chaque applicateur.
Un procédé d'analyse par électrophorèse, des constituants d'échantillons, notamment d'échantillons biologiques prélevés chez des patients comprend les étapes suivantes - le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant des moyens pour l'identifiier (marqueur d'identification), identifiables par (examen du support d'électrophorèse à l'issue de l'électrophorèse ;
- l'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ;
- la détection des constituants des échantillons, séparés par électrophorèse ~et du marqueur d'identification de chaque applicateur.
Le procédé ainsi défini pour l'analyse par électrophorèse des constituants d'échantillons à analyser, peut être intégré dans un système dans lequel les moyens d'identification de l'applicateur sont associés à un système de repérage complet de l'ensemble des composantes du système d'analyse dans le processus d'identifiication des échantillons à analyser par rapport au résultat obtenu à l'issue de l'électrophorèse.
Chaque marqueur d'identification, déposé sur le support d'électrophorèse, en même temps que les échantillons, et soumis à
l'électrophorèse, donne une image électrophorétique particulière qui devra être repérable, notamment visible, sur le support d'électrophorèse, après les difFérentes étapes de l'analyse : migration, coloration et séchage. Ce repérage peut se faire de manière manuelle par un opérateur ou de façon automatique, par exemple lors de l'analyse du support d'électrophorèse par un densitomètre.
Le repérage du marqueur peut s'inscrire dans un système d'identification des différentes composantes du système d'analyse tel que le code à barres, 8 common marker loaded in a different specific area for each applicator.
A method of electrophoresis analysis of the constituents samples, including biological samples taken from patients includes the following steps - the deposit of biological samples, by means of several sample applicators, on one or more supports electrophoresis, each applicator comprising means for the identifier (identification marker), identifiable by (examination of the electrophoresis support after electrophoresis;
- the application of an electric field to allow the migration of components of samples;
- the detection of the components of the samples, separated by electrophoresis ~ and the identification marker of each applicator.
The process thus defined for the electrophoresis analysis of constituents of samples to be analyzed, can be integrated into a system in which the means of identification of the applicator are associated with a system of complete identification of all the components of the analysis system in the process of identifying the samples to be analyzed in relation to the result obtained after electrophoresis.
Each identification marker, deposited on the support electrophoresis, together with the samples, and subjected to electrophoresis, gives a particular electrophoretic image which should to be identifiable, notably visible, on the electrophoresis support, after the difFerent stages of the analysis: migration, coloring and drying. This location can be done manually by an operator or automatically, for example during the analysis of the electrophoresis support by a densitometer.
The marking of the marker can be registered in an identification system different components of the analysis system such as the barcode,
9 code bidimensionnel (ou tout autre système d'identification). Les différentes composantes du système comprenant les tubes échantillons, les tubes des marqueurs pour applicateur, les applicateurs, le support d'analyse sont alors repérées par un code.
Durant l'étape du chargement des applicateurs notamment par un automate, on lit le code des différents tubes primaires des échantillons, du ou des tubes de marqueurs et du ou des applicateurs. On charge ensuite, de préférence au moyen d'un automate, le marqueur et les échantillons sur des positions repérées du ou des applicateurs correspondants. Après cette étape, chaque applicateur et les échantillons correspondants qu'il porte sont donc totalement identifiés. L'applicateur ou les applicateurs ainsi chargés et le support d'électrophorèse sont introduits dans l'instrument d'électrophorèse après lecture de leur code respectif. A ce niveau, chaque support d'électrophorèse est associé à un ou plusieurs applicateurs. Après les étapes de migration, coloration et séchage, le support est introduit dans le densitomètre après lecture de son code. Le densitomètre, ou l'opérateur, repère sur chaque rangée le marqueur, ce qui permet au système d'identifier sans erreur les échantillons de cette rangée et donc de leur attribuer un résultat.
Ce système permet donc d'assurer la traçabilité totale des échantillons depuis le tube primaire jusqu'au résultat final.
Selon le premier mode de réalisation préféré de l'invention, le procédé
d'analyse par électrophorèse comprend, pour la détection des constituants séparés et/ou des marqueurs d'identification d'applicateurs, une étape de révélation des constituants séparés à l'issue de l'électrophorèse.
Selon un mode particulier de l'invention, on met en oeuvre différents applicateurs d'échantillons pour déposer plusieurs rangées d'échantillons différents sur un même support d'électrophorèse.
Selon un autre mode de réalisation de l'invention ci-dessus décrite, on met en oeuvre différents applicateurs d'échantillons pour déposer plusieurs rangées d'échantillons différents sur différents supports d'électrophorèse.
Dans ce cas, on peut réaliser en parallèle, plusieurs électrophorèses sur différents instruments, en parallèle.
Dans un procédé d'analyse défini selon les modalités précédentes y compris les combinaisons des modes de réalisation particuliers proposés ci-dessus, le marqueur d'identification de chaque applicateur est constitué par une composition spécifique pour chaque applicateur, déposée sur une piste déterminée sur le support d'électrophorèse, simultanément aux échantillons.
Alternativement, le marqueur d'identification de chaque applicateur est constitué par une composition commune à tous les applicateurs, ladite composition étant déposée sur le support d'électrophorèse au niveau d'une piste difFérente pour chaque applicateur et donc pour le support d'électrophorèse, simultanément aux échantillons.
Dans le cadre de la réalisation du procédé de l'invention, le marqueur d'identification d'applicateurs d'échantillons est constitué par toute composition telle que définie précédemment.
Les différents marqueurs précédemment décrits peuvent étre mis en oeuvre dans un procédé comprenant les étapes suivantes - le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant des moyens pour l'identifier (marqueur d'identification), identifiables par l'examen du support d'électrophorèse à l'issue de l'électrophorèse ;
- l'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ;
- le séchage du ou des supports d'électrophorèse, - la coloration du ou des supports d'éiéctrophorèse, - la décoloration du ou des supports d'électrophorèse, - le séchage du ou des supports d'électrophorèse.
Dans le cadre de ce procédé, le marqueur d'identification peut être identifié avant l'étape de coloration du support d'électrophorèse, ou s'il ne s'agit pas d'un marqueur coloré, par coloration lors de l'étape de détection des constituants des échantillons qui comprend la coloration du support d'électrophorèse.
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, les espèces chimiques colorées sont des anticorps, de préférence monoclonaux de façon à obtenir une bande distincte, et dans l'hypothèse de l'utilisation d'un mélange d'anticorps monoclonaux, chaque anticorps a une mobilité telle qu'il conduit à l'obtention d'une bande distincte de celles obtenues avec les autres anticorps du mélange.
Ces anticorps peuvent être détectés par toute méthode connue en soi, applicable dans le cadre d'une analyse comportant unie séparation électrophorétique.
De même, on peut ajouter au procédé ainsi défini, une étape de détection par analyse quantitative des différents constituants séparés.
La séparation électrophorétique est réalisée sur tout type de support d'électrophorèse et en particulier sur des supports tels que des gels, notamment des gels d'agarose, des gels de polyacrylamide, ou sur des membranes d'acétate de cellulose. De façon générale, on aura recours à tout support poreux permettant la diffusion des échantillons et leur migration dans le support pour permettre la séparation des constituants contenus dans ces échantillons.
Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le procédé est un procédé d'immunofixation dans lequel les constituants séparés des échantillons sont révélés de toute façon en soi connue, au moyen d'anticorps, ledit procédé
incorporant, dans l'étape de dépôt des échantillons à analyser, le dépôt d'un marqueur d'identification de l'applicateur d'échantillons.
L'invention concerne aussi un procédé d'identification positive d'échantillons, pour permettre d'associer l'image électrophorétique d'un échantillon analysé, à un échantillon prélevé, comprenant une étape de marquage de l'applicateur d'échantillons au moyen d'un marqueur d'identification, identifiable par son image électrophorétique et l'utilisation de l'applicateur d'échantillons ainsi marqué pour le dépôt des échantillons à
analyser sur un support d'électrophorèse.
Pour la mise en oeuvre de ce procédé, tous les marqueurs décrits précédemment, utilisables dans le cadre du procédé d'analyse par électrophorèse de l'invention, peuvent être mis en aeuvre.
L'invention a également pour objet un kit (trousse) pour la réalisation de l'analyse des constituants d'échantillons par électrophorèse, comprenant ~ un support d'électrophorèse comprenant un matériau poreux approprié pour recevoir les échantillons à analyser et le marqueur d'identification de l'applicateur d'échantillon et permettre leur migration électrophorétique, ~ une ou plusieurs compositions constituées) par des espèces chimiques, utilisables lors d'une analyse électrophorétique pour l'identification d'applicateur(s) d'échantillons, cette (ces) compositions) étant identifiables) par son(leur) image électrophorétique.
Le marqueur d'applicateur d'échantillons utilisé dans ce kit répond aux définitions données précédemment, prises isolément ou en combinaison.
En outre, le kit peut comprendre tout réactif habituellement utilisé pour des analyses par électrophorèse, en particulier tout ou partie des réactifs suivants - un ou plusieurs réactifs pour la révélation des constituants séparés des échantillons ;
- un ou plusieurs réactifs pour la révélation des marqueurs d'identification des applicateurs.
D'autres propriétés et avantages particuliers de l'invention apparaissent encore dans les exemples qui suivent et les figures qui les accompagnent.
Figures 1 à 7: Profils d'analyse électrophorétique de plusieurs séries d'échantillons, associés à différents marqueurs d'applicateurs d'échantillons tels que décrits dans les exemples 1 à 7.
Exemples Exemple n° 1 Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes - marqueur n° 1 : solution de rouge soudan dans la dimethylformamide 5mg/ml - marqueur n° 2 : solution de noir soudan dans la dimethylformamide 5mg/ml.
On dépose 10 NI de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 2 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans fes brevets EP 0493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 NI de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.
Après migration, 1e gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Aprés coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 1, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant - rangée inférieure, dépôt n° 1 : bande rouge, marqueur n° 1 - rangée supérieure, dépôt n° 16 : bande noire, marqueur n° 2.
Exemple n° 2 Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes - marqueur n° 1 : anticorps monoclonal anti apo B clone 1, 3 mg/ml dans l'eau physiologique - marqueur n° 2 : hémoglobine 3 mg/ml dans l'eau physiologique, - marqueur n° 3 : albumine bovine 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique.
On dépose 10 p1 de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996 , US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 p1 de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.
Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 2, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant - rangée inférieure, dépôt n°1 : 1 bande, marqueur n° 1 - rangée intermédiaire, dépôt n°19 : 1 bande, marqueur n° 2 .
- rangée supérieure, dépôt n° 37 : 1 bande, marqueur n° 3.
Les marqueurs se différencient dans ce cas par la position différente de leur bande respective.
Exemple n°3 Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes - marqueur n° 1 : hémoglobine 2 mg/ml dans l'eau physiologique, - marqueur n° 2 : hémoglobine 2 mg/ml et ovalbumine 10 mg/ml dans l'eau physiologique, - marqueur n°3: hémoglobine 2 mg/ml, ovalbumine 10 mg/ml et albumine bovine 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique.
On dépose 10 ~I de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 NI de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.
Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 3, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant - rangée inférieure, dépôt n° 1 : 1 bande, marqueur n° 1 - rangée intermédiaire, dépôt n° 19 : 2 bandes , marqueur n° 2 - rangée supérieure, dépôt n° 37 : 3 bandes, marqueur n° 3.
Les marqueurs se différencient dans ce cas par le nombre de bandes présentes.
Exemple n° 4 Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes - marqueur n° 1 : anticorps monoclonal anti apo B clone 1 à 3 mg/ml dans l'eau physiologique, - marqueur n° 2 : anticorps monoclonaux anti apo B clone 1 et clone 2 à3 mg/ml chacun dans l'eau physiologique, - marqueur n° 3 : anticorps monoclonaux anti apo B clone 1, clone 2 et clone 3 à3 mg/ml chacun dans l'eau physiologique.
On dépose 10 p1 de chaque marqueur dans le puis de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 NI de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.
Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 4, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée, le marqueur correspondant - rangée inférieure, dépôt n°1 : 1 bande, marqueur n°1 - rangée intermédiaire, dépôt n° 19 : 2 bandes, marqueur n° 2 rangée supérieure, dépôt n° 37 : 3 bandes, marqueur n° 3.
Les marqueurs se différencient dans ce cas par le nombre de bandes présentes.
Exemple n° 5 Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes - marqueur n°1 : albumine bovine 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique - marqueur n° 2 : albumine bovine 13,5 mg/ml dans l'eau physiologique - marqueur n° 3 : albumine bovine 80 mg/ml dans l'eau physiologique.
On dépose 10 NI de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 NI de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler'la température à 20°C.
Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 5, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant - rangée inférieure, dépôt n° 1 :1 bande, concentration faible - rangée intermédiaire, dépôt n° 19: 1 bande, concentration intermédiaire - rangée supérieure, dépôt n° 37 : 1 bande, concentration forte Les marqueurs se différencient dans ce cas par l'intensité de la bande correspondante.
Exemple n° 6 L'identification est réalisée de la façon suivante - peigne n° 1 : aucun échantillon ou de l'eau physiologique sur la dent 1, - peigne n ° 2 : aucun échantillon ou de l'eau physiologique sur la dent 2, - peigne n° 3 : aucun échantillon ou de l'eau physiologique sur la dent 3.
On dépose 10N1 d'eau physiologique (ou rien) respectivement dans le puits de la dent 1, du 1e~ applicateur, de la dent 2 du 2'é"'e applicateur et de la dent 3 du 3ième applicateur de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.
Dans les autres puits, on dépose 10 NI de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.
Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 6, on reconnaît sur chaque rangée le marqueur correspondant - rangée inférieure, dépôt n° 1 : absence de profil - rangée intermédiaire, dépôt n° 20 : absence de profil - rangée supérieure, dépôt n° 39 : absence de profil Exemple n° 7 Le marqueur est une solution à 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique, de gamma globuline bovine partiellement polymérisée (avec du glutaraldéhyde), l'identification est réalisée de la façon suivante : , - peigne n° 1 : dépôt du marqueur par la dent 1 (piste de gauche) - peigne n° 2 : dépôt du marqueur par la dent 8 (piste du milieu) - peigne n° 3 : aucun échantillon sur la dent 15 (piste de droite) On dépose 10ü1 de solution de marqueur respectivement dans le puits de la dent 1 du 1e~ applicateur, de la dent 2 du 2'ème applicateur et de la dent 3 du 3ième applicateur de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.
Les échantillons à analyser sont dilués au tiers pour les pistes IgA, IgM, IgK, Ig~,, et au sixième pour la piste IgG, et on dépose 10 p1 de chaque dilutiorr dans les puits correspondants. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 1 minute, à une distance définie les uns dés autres, à ~ la surface d'un gel permettant de réaliser une immunofixation. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 8 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.
Après migration, le typage des paraprotéines a été réalisé en incubant chaque piste de migration avec un antisérum spëcifique (anti IgG, anti IgA, anti IgM, anti IgK, anti Ig~,) et la piste correspondant au profil électrophorétique avec une solution de fixation des protëines. La piste du marqueur ne subit aucun traitement particulier. L'excès de réactifs a été éliminé, le gel a été séché
et coloré au violet acide. Chaque peigne est repéré par la position de la bande colorée correspondant au marqueur - rangée inférieure, dépôt de gauche : présence d'une bande colorée - rangée intermédiaire, dépôt central : présence d'une bande colorée - rangée supérieure, dépôt de droite : présence d'une bande colorée. 9 two-dimensional code (or any other identification system). The different system components including sample tubes, sample tubes markers for applicator, the applicators, the analysis support are then identified by a code.
During the step of loading the applicators, in particular by a PLC, we read the code of the different primary tubes of the samples, or marker tubes and applicator (s). Then we load preferably by means of an automated system, the marker and the samples on positions identified by the corresponding applicator (s). After this step, each applicator and the corresponding samples it carries are therefore totally identified. The applicator or applicators thus loaded and the electrophoresis support are introduced into the electrophoresis instrument after reading their respective code. At this level, each support electrophoresis is associated with one or more applicators. After the steps of migration, coloring and drying, the support is introduced into the densitometer after reading its code. The densitometer, or the operator, landmark on each row the marker, which allows the system to identify without error the samples in this row and therefore assign them a result.
This system therefore ensures full traceability of samples from the primary tube until the final result.
According to the first preferred embodiment of the invention, the method analysis by electrophoresis includes, for the detection of constituents separate and / or applicator identification markers, a step of revelation of the separate constituents at the end of the electrophoresis.
According to a particular embodiment of the invention, different implements are used sample applicators for depositing multiple rows of samples different on the same electrophoresis support.
According to another embodiment of the invention described above, implements different sample applicators to deposit several rows of different samples on different electrophoresis supports.
In this case, we can perform in parallel, several electrophoresis on different instruments, in parallel.
In an analysis process defined according to the previous methods y including the combinations of the particular embodiments proposed below above, the identification marker of each applicator is constituted by a specific composition for each applicator, deposited on a track determined on the electrophoresis support, simultaneously with the samples.
Alternatively, the identification marker for each applicator is consisting of a composition common to all the applicators, said composition being deposited on the electrophoresis support at a Different track for each applicator and therefore for the support electrophoresis, simultaneously with the samples.
In the context of carrying out the method of the invention, the marker identification of sample applicators is made up of any composition as defined above.
The different markers previously described can be used work in a process comprising the following steps - the deposit of biological samples, by means of several sample applicators, on one or more supports electrophoresis, each applicator comprising means for identify it (identification marker), identifiable by examining the electrophoresis support after electrophoresis;
- the application of an electric field to allow the migration of components of samples;
- drying of the electrophoresis support (s), - the coloring of the electrophoresis support (s), - discoloration of the electrophoresis support (s), - drying of the electrophoresis support (s).
In the context of this method, the identification marker can be identified before the staining step of the electrophoresis support, or if it does not is no colored marker, by coloring during the step of detecting constituents of the samples which includes the coloring of the support electrophoresis.
In another embodiment of the invention, the chemical species stained are antibodies, preferably monoclonal so as to obtain a separate band, and assuming the use of a mixture of antibodies monoclonal, each antibody has a mobility such that it leads to obtaining a band distinct from those obtained with the other antibodies in the mixture.
These antibodies can be detected by any method known per se, applicable within the framework of an analysis comprising a united separation electrophoretic.
Similarly, one can add to the process thus defined, a step of detection by quantitative analysis of the different separate constituents.
Electrophoretic separation is carried out on any type of support electrophoresis and in particular on supports such as gels, in particular agarose gels, polyacrylamide gels, or on cellulose acetate membranes. In general, we will use everything porous support allowing the diffusion of the samples and their migration in the support to allow the separation of the constituents contained in these samples.
According to another embodiment of the invention, the method is a immunofixation method in which the constituents separated from the samples are revealed in any way known per se, by means of antibodies, said method incorporating, in the step of depositing the samples to be analyzed, the deposit of a identification marker of the sample applicator.
The invention also relates to a positive identification method samples, to allow to associate the electrophoretic image of a sample analyzed, to a sample taken, comprising a step of marking the sample applicator with a marker identification, identifiable by its electrophoretic image and the use of the sample applicator thus marked for depositing samples at analyze on an electrophoresis support.
For the implementation of this method, all the markers described previously, usable within the framework of the method of analysis by electrophoresis of the invention, can be implemented.
The invention also relates to a kit (kit) for the realization of analysis of sample components by electrophoresis, including ~ an electrophoresis support comprising a porous material suitable for receiving the samples to be analyzed and the marker of the sample applicator and allow their electrophoretic migration, ~ one or more compositions made up) of species chemical, usable during an electrophoretic analysis for identification of sample applicator (s), this (these) compositions) being identifiable) by its (their) image electrophoretic.
The sample applicator marker used in this kit meets the definitions given above, taken individually or in combination.
In addition, the kit may include any reagent usually used for electrophoresis analyzes, in particular all or part of the reagents following - one or more reagents for revealing the separate constituents some samples ;
- one or more reagents for the development of markers identification of applicators.
Other specific properties and advantages of the invention appear again in the examples which follow and the figures which accompany them.
Figures 1 to 7: Electrophoretic analysis profiles of several series of samples, associated with different markers of sample applicators such as described in examples 1 to 7.
Examples Example 1 The markers consist of the following solutions - marker n ° 1: sudan red solution in dimethylformamide 5mg / ml - marker n ° 2: solution of black sudan in dimethylformamide 5mg / ml.
10 NI of each marker are placed in the well of the first tooth 2 deposition applicators of the type described in the patents EP 0493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 NI of each serum to be analyzed. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, on the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. Separation of samples East obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument allowing the temperature to be regulated at 20 ° C.
After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloration, the gel is discolored and dried again. In Figure 1, we recognize on the first line of each row the corresponding marker - lower row, depot n ° 1: red strip, marker n ° 1 - upper row, deposit n ° 16: black band, marker n ° 2.
Example 2 The markers consist of the following solutions - marker No. 1: monoclonal anti apo B clone 1 antibody, 3 mg / ml in physiological water - marker No. 2: hemoglobin 3 mg / ml in physiological water, - marker No. 3: bovine albumin 2.5 mg / ml in physiological water.
10 p1 of each marker is placed in the well of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 p1 of each is deposited serum to be analyzed. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, on the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. Separation of samples East obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument allowing the temperature to be regulated at 20 ° C.
After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloration, the gel is discolored and dried again. In Figure 2, we recognize on the first line of each row the corresponding marker - lower row, deposit n ° 1: 1 strip, marker n ° 1 - intermediate row, depot n ° 19: 1 strip, marker n ° 2.
- upper row, deposit no.37: 1 strip, marker no.3.
The markers are different in this case by the different position of their respective band.
Example 3 The markers consist of the following solutions - marker No. 1: hemoglobin 2 mg / ml in physiological water, - marker 2: hemoglobin 2 mg / ml and ovalbumin 10 mg / ml in physiological water, - marker No. 3: hemoglobin 2 mg / ml, ovalbumin 10 mg / ml and bovine albumin 2.5 mg / ml in physiological water.
10 ~ I of each marker is deposited in the well of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 NI of each are deposited serum to be analyzed. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, on the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. Separation of samples East obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of W, on an instrument allowing the temperature to be regulated at 20 ° C.
After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloration, the gel is discolored and dried again. In Figure 3, we recognize on the first line of each row the corresponding marker - lower row, deposit n ° 1: 1 strip, marker n ° 1 - intermediate row, deposit n ° 19: 2 bands, marker n ° 2 - upper row, deposit n ° 37: 3 bands, marker n ° 3.
The markers differ in this case by the number of bands present.
Example 4 The markers consist of the following solutions - marker n ° 1: monoclonal anti apo B antibody clone 1 to 3 mg / ml in physiological water, - marker No. 2: monoclonal anti-apo B antibodies clone 1 and clone 2 at 3 mg / ml each in physiological water, - marker No. 3: anti apo B monoclonal antibodies clone 1, clone 2 and clone 3 to 3 mg / ml each in physiological water.
We deposit 10 p1 of each marker in the then of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 NI of each are deposited serum to be analyzed. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance, on the surface of a gel allowing analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on a instrument for regulating the temperature to 20 ° C.
After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloration, the gel is discolored and dried again. In Figure 4, we recognize on the first line of each row, the corresponding marker - lower row, deposit n ° 1: 1 strip, marker n ° 1 - intermediate row, deposit n ° 19: 2 bands, marker n ° 2 upper row, deposit n ° 37: 3 bands, marker n ° 3.
The markers differ in this case by the number of bands present.
Example 5 The markers consist of the following solutions - marker n ° 1: bovine albumin 2,5 mg / ml in physiological water - marker No. 2: bovine albumin 13.5 mg / ml in physiological water - marker No. 3: bovine albumin 80 mg / ml in physiological water.
10 NI of each marker are placed in the well of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 NI of each are deposited serum to be analyzed. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, on the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. Separation of samples East obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument allowing the temperature to be regulated at 20 ° C.
After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloration, the gel is discolored and dried again. In Figure 5, we recognize on the first line of each row the corresponding marker - lower row, deposit n ° 1: 1 strip, low concentration - intermediate row, deposit n ° 19: 1 strip, concentration intermediate - upper row, deposit n ° 37: 1 strip, high concentration The markers are differentiated in this case by the intensity of the band corresponding.
Example 6 Identification is carried out as follows - comb n ° 1: no sample or physiological water on the tooth 1, - comb n ° 2: no sample or physiological water on the tooth 2, - comb n ° 3: no sample or physiological water on the tooth 3.
10N1 of physiological water (or nothing) is deposited respectively in the well of tooth 1, of the 1st applicator, tooth 2 of the 2nd applicator and the tooth 3 of 3rd deposition applicator of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.
In the other wells, 10 NI of each serum to be analyzed are deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a distance defined from each other, on the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on a instrument for regulating the temperature to 20 ° C.
After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloration, the gel is discolored and dried again. In Figure 6, we recognize on each row the corresponding marker - lower row, deposit n ° 1: no profile - middle row, depot n ° 20: no profile - upper row, deposit no.39: no profile Example 7 The marker is a 2.5 mg / ml solution in physiological water, of gamma partially polymerized bovine globulin (with glutaraldehyde), identification is carried out as follows:, - comb n ° 1: deposition of the marker by tooth 1 (left track) - comb n ° 2: deposition of the marker by tooth 8 (middle track) - comb n ° 3: no sample on tooth 15 (right track) 10 μl of marker solution are deposited respectively in the well of the tooth 1 of the 1st applicator, tooth 2 of the 2nd applicator and tooth 3 of 3rd deposition applicator of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.
The samples to be analyzed are diluted by a third for the IgA, IgM, IgK, Ig ~ ,, and on the sixth for the IgG track, and deposit 10 p1 of each dilutiorr in the corresponding wells. These applicators are then applied for 1 minute, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing to carry out an immunofixation. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for about 8 minutes and at a power of 20 W, on an instrument allowing the temperature to be regulated at 20 ° C.
After migration, the typing of the paraproteins was carried out by incubating each migration path with a specific antiserum (anti IgG, anti IgA, anti IgM, anti IgK, anti Ig ~,) and the track corresponding to the electrophoretic profile with a protein fixation solution. The marker track is not subject to any special treatment. Excess reagents were removed, the gel was dried and colored with acid violet. Each comb is identified by the position of the strip colored corresponding to the marker - lower row, left depot: presence of a colored band - intermediate row, central depot: presence of a colored band - upper row, right deposit: presence of a colored band.
Claims (32)
- le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant un marqueur d'identification, identifiable par l'examen de son image électrophorétique;
- l'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ;
- la détection des constituants des échantillons, séparés par électrophorèse et du marqueur d'identification de chaque applicateur. 1. Method of analysis by electrophoresis, of the constituents of samples biological, comprising the following steps:
- the deposit of biological samples, by means of several sample applicators, on one or more supports electrophoresis, each applicator comprising a marker identification, identifiable by examining its image electrophoretic;
- the application of an electric field to allow the migration of sample constituents;
- the detection of the constituents of the samples, separated by electrophoresis and the identification marker of each applicator.
- le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant un marqueur d'identification, identifiable par l'examen de son image électrophorétique;
- l'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ;
- le séchage du ou des supports d'électrophorèse, - la coloration du ou des supports d'électrophorèse, - la décoloration du ou des supports d'électrophorèse, - le séchage du ou des supports d'électrophorèse, - l'identification des constituants séparés sur le ou les supports d'électrophorèse et des marqueurs d'applicateurs d'échantillons. 14. Method of analysis by electrophoresis according to any one of claims 1 to 13, comprising the following steps:
- the deposit of biological samples, by means of several sample applicators, on one or more supports electrophoresis, each applicator comprising a marker identification, identifiable by examining its image electrophoretic;
- the application of an electric field to allow the migration of sample constituents;
- the drying of the electrophoresis support(s), - the coloring of the electrophoresis support(s), - discoloration of the electrophoresis support(s), - the drying of the electrophoresis support(s), - the identification of the separate constituents on the support(s) electrophoresis and sample applicator markers.
comprenant une étape de marquage de l'applicateur d'échantillons au moyen d'un marqueur d'identification, identifiable par son image électrophorétique, ledit marqueur d'identification étant tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 17. 19. Positive sample identification process, to allow association the electrophoretic image of an analyzed sample, to a sample taken comprising a step of marking the sample applicator with the means of an identification marker, identifiable by its image electrophoretic, said identification marker being as defined according to any of claims 1 to 17.
en ce que les espèces chimiques sont des espèces colorées ou susceptibles d'être colorées ou un mélange d'espèces chimiques colorées ou susceptibles d'être colorées. 22. Marker according to any one of claims 20 or 21 characterized in that the chemical species are colored species or likely to be colored or a mixture of colored chemical species or likely to be colored.
.cndot. Au moins un support d'électrophorèse comprenant un matériau poreux approprié pour recevoir les échantillons à analyser et le ou les marqueurs d'identification d'applicateurs d'échantillons et permettre leur migration électrophorétique, .cndot. une ou plusieurs compositions constituée(s) par des espèces chimiques utilisables lors d'une séparation électrophorétique pour l'identification d'applicateur(s) d'échantillons, cette (ces) composition(s) étant identifiable(s) par son(leur) image électrophorétique. 24. Kit for carrying out the analysis of the constituents of samples, for example electrophoresis, including:
.cndot. At least one electrophoresis support comprising a material porous material suitable for receiving the samples to be analyzed and the sample applicator identification markers and allow their electrophoretic migration, .cndot. one or more compositions consisting of species chemicals that can be used in electrophoretic separation for the identification of sample applicator(s), this (these) composition(s) being identifiable by its(their) image electrophoretic.
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