EP1295112A1 - Positive identification of samples analysed by electrophoresis on a porous support - Google Patents

Positive identification of samples analysed by electrophoresis on a porous support

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Publication number
EP1295112A1
EP1295112A1 EP01928030A EP01928030A EP1295112A1 EP 1295112 A1 EP1295112 A1 EP 1295112A1 EP 01928030 A EP01928030 A EP 01928030A EP 01928030 A EP01928030 A EP 01928030A EP 1295112 A1 EP1295112 A1 EP 1295112A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
electrophoresis
applicator
sample
samples
marker
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP01928030A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Franck Bellon
Guy Barouh
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sebia SA
Original Assignee
Sebia SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sebia SA filed Critical Sebia SA
Publication of EP1295112A1 publication Critical patent/EP1295112A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44743—Introducing samples
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
    • G01N27/44721—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones by optical means
    • G01N27/44726—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones by optical means using specific dyes, markers or binding molecules

Definitions

  • the subject of the invention is the definition and implementation of means for positive identification of samples analyzed by electrophoresis. More specifically, the invention relates to means for identifying sample applicators on an electrophoresis support, which make it possible to associate with the electrophoretic profile of one or more series of analyzed samples, the applicator or samples used and therefore, reliably identify the result of the analysis compared to the primary samples.
  • Uncertainty as to the attribution of a result to the good primary sample can result for example from operations executed manually and whose good execution depends on this fact essentially from the attention of the operator. In the current practice of this type of analysis, an error may not be detected.
  • the invention thus proposes identification means which make it possible to locate a sample or a series of samples and to identify it on the electrophoresis support, at the end of the electrophoretic separation.
  • These means can be implemented in the context of any electrophoretic separation, using any suitable technique for performing zone electrophoresis on a support.
  • the invention also relates to sample applicators, usable for depositing the samples to be analyzed on the electrophoresis support, and provided with identification means (called "identification markers") according to the invention.
  • the invention also provides kits comprising said identification means.
  • the means defined in the context of the invention can be integrated into a global tracking system for the samples analyzed at all stages of the analysis, from the taking of the sample, to the transmission of the result.
  • the zone electrophoresis techniques carried out in particular in agarose gel allow the separation of the protein constituents contained in biological samples such as serum, blood, urine, cerebrospinal fluid, tears, etc.
  • biological samples such as serum, blood, urine, cerebrospinal fluid, tears, etc.
  • the samples containing the proteins are deposited by means of a sample applicator on the surface of the gel, where they ionize and, under the effect of an electric field, migrate at different speeds depending on their respective charge. After the migration step which allows the separation of the protein constituents of the samples, these proteins are revealed, for example by coloring using a specific dye and quantified for example by a densitometric reading.
  • electrophoresis has been brought to a significant degree of automation in order, on the one hand, to facilitate its implementation and, on the other hand, to make it more reliable.
  • steps of loading the samples on the applicators, depositing the applicators on the gel, migration and drying of the gel, coloring and discoloration of the gel, reading of the gel can now be carried out automatically.
  • the step of transferring the sample applicator (s) from the loading samples to the electrophoresis instrument is still a manual step and therefore subject to handling errors.
  • the applicator intended for the first can be loaded onto the second and vice versa.
  • the invention provides means for assigning a series of samples deposited on the electrophoresis support in the form of a row of samples, to a given sample applicator, by simply examining the electrophoretic image of this row.
  • the invention makes it possible to identify an applicator without error and consequently a series of samples to be analyzed associated with this applicator, by examining the electrophoretic image of the applicator obtained, after the deposition, migration and staining operations. and drying, means for identifying the applicator and simultaneously, the samples analyzed.
  • the use of the present invention in combination with conventional methods of identification (for example bar codes or two-dimensional codes such as matrix codes) of the various components of the analysis system, in particular the sample tubes, the applicator and gel, allows identification and traceability of samples from the primary tube containing the sample, to the final result.
  • conventional methods of identification for example bar codes or two-dimensional codes such as matrix codes
  • a sample applicator usable in the context of the present invention can be constituted by any type of device making it possible to load samples to be analyzed, in particular by taking these samples from the tubes in which they are contained and also making it possible to load, in a determined area, an identification marker of the applicator according to the invention.
  • a sample applicator can be loaded manually or preferably automatically, with the samples.
  • Applicators that can be used have been described in the prior art and are, for example, the "membrane” (or toothed) combs described, for example, in patent applications and patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5.405.516, the "throat” combs the “lamella” combs, or in general, any device which can be used to load and then deposit on an electrophoresis support samples to be analyzed.
  • the identification markers of the applicator which are the subject of the invention, can consist of any chemical species capable of being revealed on the electrophoresis support, the outcome of the steps of depositing, migrating, coloring and drying the electrophoresis support.
  • the markers of the invention must be able to be detected directly by examination of the electrophoresis support after electrophoresis or by means of the techniques for detecting the constituents of the samples separated by electrophoresis.
  • chemical species applies within the framework of the invention, to any entity, chemical or biological, capable of being detected, directly or indirectly, including compounds, molecules, complexes, ions, associations (by example of Antibody-Antigens type) chemically or biologically functional, or non-functional.
  • chemical species are the chemical species colored or capable of being colored, in particular proteins, or functional species such as antibodies.
  • the chemical species used are capable of migrating in an electric field.
  • the marker can consist of mixtures of the above species whether or not these species belong to the same chemical or biological group, and whether or not have functional properties of the same nature.
  • the marker can be composed of a mixture of chemical species capable of migrating in an electric field and of species which do not migrate but precipitate at their deposition zone.
  • compositions must not be able to be confused, by the electrophoretic image to which they give rise, with the samples analyzed, separated by electrophoresis.
  • it is proposed to use as means of identification of each sample applicator, colored chemical species or mixtures of these species, mixtures in which several chemical species are present and each or certain d 'between them having a different electrophoretic mobility compared to that of other species, or some of the others.
  • each of the applicators used carrying different series of distinct samples, must be associated with a determined marker which is specific to it insofar as it distinguishes it from other applicators or, in a variant, must be associated with a marker common to different applicators but nevertheless located differently at the level of the applicator and consequently, at the level of the electrophoresis support after reaction, by the location of the marked electrophoresis support tracks.
  • a common marker can be constituted by any of the chemical species defined above, by a mixture of these species, including by physiological water.
  • the marking of a series of samples results from the absence of loading of an area (well) of the sample applicators, this area normally intended for loading the samples, being localized differently for each applicator, so as to give a different electrophoretic image (by the absence of separate and revealed bands) on the electrophoresis support.
  • the specificity of the marker is due either to the nature and / or to the concentration of the chemical species which constitutes it, or to the localization in a specific zone of the applicator, of this composition, or even to a combination previous parameters, the specificity of the marker having to translate into a different electrophoretic image for each applicator linked for example to the color, the positioning, the number or the intensity of the bands obtained for each marker on its electrophoresis track, after the electrophoretic analysis.
  • a marker can also be identified by the track it occupies on the electrophoresis support, compared to the tracks occupied by the other markers on the same or on another support.
  • identification markers can be used:
  • a dye or a mixture of dyes, or any other colored species for example a covalently colored protein, migrating or not, each applicator being identified by a particular color, or a mixture of colored bands,
  • a protein or any other chemical species liable to migrate and become colored, for example when coloring the gel with conventional protein dyes: amidoswchwarz, acid violet, etc. or a mixture of proteins or chemical species ) present at varying concentrations in each of the markers.
  • Each applicator will be identified by the intensity of the fraction (s) corresponding to the concentration of the protein (s) (or chemical species),
  • the same identification marker chosen from the previous ones can be used for all of the sample applicators used, as soon as this marker is placed on each applicator, in a predetermined well, distinct for each applicator , which allows after the separation of the samples by electrophoresis, to locate the image of the same marker in a different zone for each applicator. Marking may alternatively result in this case from the absence of an electrophoretic profile for a specific track for each row of samples, corresponding to the wells of the applicator left free.
  • the subject of the invention is also a method of analysis by electrophoresis, in which several applicators are used to deposit series of samples on one or more electrophoresis supports, these applicators having first been loaded with the samples to be analyzed, on the other hand with a specific marker for each of the applicators or a common marker loaded in a different specific area for each applicator.
  • a method of electrophoresis analysis of components of samples, in particular biological samples taken from patients comprises the following steps:
  • each applicator comprising means for identifying it (identification marker), identifiable by examining the support for electrophoresis after electrophoresis;
  • the process thus defined for the analysis by electrophoresis of the constituents of samples to be analyzed can be integrated into a system in which the identification means of the applicator are associated with a complete tracking system of all the components of the analysis system in the process of identifying the samples to be analyzed in relation to the result obtained at the end of the electrophoresis.
  • Each identification marker deposited on the electrophoresis support, at the same time as the samples, and subjected to electrophoresis, gives a particular electrophoretic image which must be identifiable, in particular visible, on the electrophoresis support, after the different stages of the analysis: migration, coloring and drying.
  • This identification can be done manually by an operator or automatically, for example during the analysis of the electrophoresis support by a densitometer.
  • the marking of the marker can be part of an identification system of the different components of the analysis system such as the bar code, two-dimensional code (or any other identification system).
  • the various components of the system including the sample tubes, the tubes of markers for applicator, the applicators, the analysis support are then identified by a code.
  • the code of the different primary tubes of the samples, of the marker tube or tubes and of the applicator (s) is read.
  • the marker and the samples are then loaded, preferably by means of an automatic machine, at positions marked with the corresponding applicator (s).
  • each applicator and the corresponding samples it carries are therefore fully identified.
  • the applicator or applicators thus loaded and the electrophoresis support are introduced into the electrophoresis instrument after reading their respective code.
  • each electrophoresis support is associated with one or more applicators.
  • the support is introduced into the densitometer after reading its code.
  • the densitometer, or operator locates the marker on each row, which allows the system to identify the samples in that row without error and therefore assign a result to them. This system therefore ensures total traceability of the samples from the primary tube to the final result.
  • the electrophoresis analysis method comprises, for the detection of the separate constituents and / or of applicator identification markers, a step of revealing the separated constituents at the end electrophoresis.
  • different sample applicators are used to deposit several rows of different samples on the same electrophoresis support.
  • different sample applicators are used to deposit several rows of different samples on different electrophoresis supports.
  • several electrophoreses can be performed in parallel on different instruments, in parallel.
  • the identification marker of each applicator is constituted by a specific composition for each applicator, deposited on a track determined on the electrophoresis support, simultaneously with samples.
  • the identification marker for each applicator is constituted by a composition common to all the applicators, said composition being deposited on the electrophoresis support at a different track for each applicator and therefore for the electrophoresis support, simultaneously with the samples.
  • the identification marker for sample applicators consists of any composition as defined above.
  • each applicator comprising means for identifying it (identification marker), identifiable by examining the support for electrophoresis after electrophoresis;
  • the identification marker can be identified before the step of coloring the electrophoresis support, or if it is not a colored marker, by coloring during the step of detection of the constituents of the samples which includes the coloring of the electrophoresis support.
  • the colored chemical species are antibodies, preferably monoclonal so as to obtain a distinct band, and in the hypothesis of the use of a mixture of monoclonal antibodies, each antibody has a mobility such that it leads to the production of a band distinct from those obtained with the other antibodies in the mixture.
  • These antibodies can be detected by any method known per se, applicable within the framework of an analysis comprising an electrophoretic separation.
  • the electrophoretic separation is carried out on any type of electrophoresis support and in particular on supports such as gels, in particular agarose gels, polyacrylamide gels, or on cellulose acetate membranes.
  • supports such as gels, in particular agarose gels, polyacrylamide gels, or on cellulose acetate membranes.
  • any porous support will be used allowing the diffusion of the samples and their migration in the support to allow the separation of the constituents contained in these samples.
  • the method is an immunofixation method in which the constituents separated from the samples are revealed in any way known per se, by means of antibodies, said method incorporating, in the step of deposit of the samples to be analyzed, deposit of an identification marker for the sample applicator.
  • the invention also relates to a method for positive identification of samples, to enable the electrophoretic image of a analyzed sample, to a sample taken, comprising a step of marking the sample applicator by means of an identification marker, identifiable by its electrophoretic image and the use of the sample applicator thus marked for the deposit of the samples to be analyzed on an electrophoresis support.
  • kit for carrying out the analysis of the constituents of samples by electrophoresis, comprising:
  • An electrophoresis support comprising a porous material suitable for receiving the samples to be analyzed and the identification marker of the sample applicator and allowing their electrophoretic migration
  • compositions made up of chemical species usable during an electrophoretic analysis for the identification of sample applicator (s), this (these) composition (s) being identifiable by its (their) electrophoretic image.
  • sample applicator marker used in this kit meets the definitions given above, taken individually or in combination.
  • kit can include any reagent usually used for electrophoresis analyzes, in particular all or part of the following reagents:
  • Figures 1 to 7 Profiles of electrophoretic analysis of several series of samples, associated with different markers of sample applicators as described in examples 1 to 7.
  • the markers consist of the following solutions:
  • 10 ⁇ l of each marker are deposited in the well of the first tooth of 2 deposition applicators of the type described in patents EP 0493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 ⁇ l of each serum to be analyzed is deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C.
  • depot n ° 1 red strip, marker n ° 1
  • Example 2 The markers consist of the following solutions:
  • - marker No. 3 bovine albumin 2.5 mg / ml in physiological water. 10 ⁇ l of each marker are deposited in the well of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 ⁇ l of each serum to be analyzed is deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C.
  • the markers are differentiated by the different position of their respective bands.
  • the markers consist of the following solutions:
  • - marker No. 3 hemoglobin 2 mg / ml, ovalbumin 10 mg / ml and bovine albumin 2.5 mg / ml in physiological water.
  • 10 ⁇ l of each marker are deposited in the well of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 ⁇ l of each serum to be analyzed is deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins.
  • the separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C.
  • the gel After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloring, the gel is discolored and dried again.
  • the corresponding marker is recognized on the first line of each row:
  • the markers are differentiated in this case by the number of bands present.
  • the markers consist of the following solutions:
  • - marker No. 3 anti apo B monoclonal antibodies clone 1, clone 2 and clone 3 at 3 mg / ml each in physiological water.
  • 10 ⁇ l of each marker are deposited in the then of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 ⁇ l of each is deposited serum to be analyzed. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance, to the surface of a gel 'allowing the analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C. After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloring, the gel is discolored and dried again. In Figure 4, we recognize on the first line of each row, the corresponding marker:
  • the markers are differentiated in this case by the number of bands present.
  • the markers consist of the following solutions:
  • - marker No. 3 bovine albumin 80 mg / ml in physiological water. 10 ⁇ l of each marker are deposited in the well of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 ⁇ l of each serum to be analyzed is deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. Separation of the samples is obtained by electrophoresis for 6 minutes and at a power of 20 W, an instrument for regulating the temperature at 20 ° C. After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloring, the gel is discolored and dried again. In FIG. 5, the corresponding marker is recognized on the first line of each row:
  • the markers are differentiated in this case by the intensity of the corresponding band.
  • the identification is carried out as follows:
  • the marker is a 2.5 mg / ml solution in physiological water, of partially polymerized bovine gamma globulin (with glutaraldehyde), the identification is carried out as follows:
  • the samples to be analyzed are diluted to a third for the IgA, IgM, IgK, Ig ⁇ lanes, and to the sixth for the IgG lane, and 10 ⁇ l of each dilution are deposited in the corresponding wells. These applicators are then applied for 1 minute, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing immunofixation to be carried out.
  • the separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 8 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C.
  • the typing of the paraproteins was carried out by incubating each migration track with a specific antiserum (anti IgG, anti IgA, anti IgM, anti IgK, anti Ig ⁇ ) and the track corresponding to the electrophoretic profile with a protein fixing solution. .
  • the marker track is not subject to any special treatment. Excess reagents were removed, the gel was dried and stained with acid purple. Each comb is identified by the position of the colored band corresponding to the marker:
  • central depot presence of a colored band

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Abstract

The invention concerns a method for analysing by electrophoresis of constituents of biological samples, comprising the following steps: depositing the biological samples, using several sample applicators, on one or several electrophoresis supports, each applicator comprising an identifying marker, identifiable by examining its electrophoretic image; applying an electric field to enable the migration of the sample constituents; detecting the sample constituents, separated by electrophoresis and the identifying marker of each applicator. The invention also concerns the marker used in said method consisting of any species or mixture of species, capable of being located by its electrophoretic image.

Description

IDENTIFICATION POSITIVE D'ECHANTILLONS ANALYSES PAR ELECTROPHORESE SUR SUPPORT POREUX POSITIVE IDENTIFICATION OF SAMPLES ANALYZED BY ELECTROPHORESIS ON POROUS SUPPORT
L'invention a pour objet la définition et la mise en œuvre de moyens d'identification positive d'échantillons analysés par électrophorèse. Plus précisément, l'invention concerne des moyens d'identification d'applicateurs d'échantillons sur un support d'électrophorèse, qui permettent d'associer au profil électrophorétique d'une ou plusieurs séries d'échantillons analysés, le ou les applicateurs d'échantillons utilisés et donc, d'identifier de façon fiable le résultat de l'analyse par rapport aux échantillons primaires.The subject of the invention is the definition and implementation of means for positive identification of samples analyzed by electrophoresis. More specifically, the invention relates to means for identifying sample applicators on an electrophoresis support, which make it possible to associate with the electrophoretic profile of one or more series of analyzed samples, the applicator or samples used and therefore, reliably identify the result of the analysis compared to the primary samples.
Dans le cadre des analyses d'échantillons après séparation par électrophorèse, notamment à des fins cliniques, et en particulier lors d'analyses de routine pour la détermination de pathologies, il est nécessaire pour la sécurité des résultats produits d'être en mesure de suivre de façon fiable le devenir de chaque échantillon au cours de l'analyse. En particulier, il est nécessaire de s'assurer que le résultat obtenu à l'issue de la séparation par électrophorèse peut sans aucun doute être attribué à l'échantillon auquel il correspond en théorie (échantillon primaire).In the context of sample analyzes after separation by electrophoresis, in particular for clinical purposes, and in particular during routine analyzes for the determination of pathologies, it is necessary for the safety of the results produced to be able to follow reliably the fate of each sample during analysis. In particular, it is necessary to ensure that the result obtained at the end of the separation by electrophoresis can undoubtedly be attributed to the sample to which it corresponds in theory (primary sample).
L'incertitude quant à l'attribution d'un résultat au bon échantillon primaire, peut résulter par exemple des opérations exécutées manuellement et dont la bonne exécution dépend de ce fait essentiellement de l'attention de l'opérateur. Dans la pratique actuelle de ce type d'analyse, une erreur peut ne pas être détectée.Uncertainty as to the attribution of a result to the good primary sample, can result for example from operations executed manually and whose good execution depends on this fact essentially from the attention of the operator. In the current practice of this type of analysis, an error may not be detected.
L'invention propose ainsi des moyens d'identification qui permettent de repérer un échantillon ou une série d'échantillons et de l'identifier sur le support d'électrophorèse, à l'issue de la séparation électrophorétique. Ces moyens peuvent être mis en œuvre dans le cadre de toute séparation électrophorétique, employant toute technique appropriée pour réaliser une électrophorèse de zone sur un support. L'invention concerne également des applicateurs d'échantillons, utilisables pour déposer les échantillons à analyser sur le support d'électrophorèse, et pourvus des moyens d'identification (appelés "marqueurs d'identification") selon l'invention.The invention thus proposes identification means which make it possible to locate a sample or a series of samples and to identify it on the electrophoresis support, at the end of the electrophoretic separation. These means can be implemented in the context of any electrophoretic separation, using any suitable technique for performing zone electrophoresis on a support. The invention also relates to sample applicators, usable for depositing the samples to be analyzed on the electrophoresis support, and provided with identification means (called "identification markers") according to the invention.
L'invention propose également des kits comprenant lesdits moyens d'identification.The invention also provides kits comprising said identification means.
Les moyens définis dans le cadre de l'invention peuvent être intégrés dans un système de repérage global des échantillons analysés à tous les stades de l'analyse, depuis le prélèvement de l'échantillon, jusqu'à la transmission du résultat.The means defined in the context of the invention can be integrated into a global tracking system for the samples analyzed at all stages of the analysis, from the taking of the sample, to the transmission of the result.
On rappellera, sans en limiter la définition aux modalités décrites ci- après, que les techniques d'électrophorèse de zone réalisées notamment en gel d'agarose, permettent la séparation des constituants protéiques contenus dans des échantillons biologiques tels que sérum, sang, urine, liquide céphalo- rachidien, larmes etc.. Dans un milieu d'électrophorèse contenant une solution tampon, les échantillons contenant les protéines sont déposés au moyen d'un applicateur d'échantillons à la surface du gel, où elles s'ionisent et, sous l'effet d'un champ électrique, migrent à des vitesses différentes en fonction de leur charge respective. Après l'étape de migration qui permet la séparation des constituants protéiques des échantillons, ces protéines sont révélées, par exemple par coloration au moyen d'un colorant spécifique et quantifiées par exemple par une lecture densitométrique.It will be recalled, without limiting the definition to the methods described below, that the zone electrophoresis techniques carried out in particular in agarose gel, allow the separation of the protein constituents contained in biological samples such as serum, blood, urine, cerebrospinal fluid, tears, etc. In an electrophoresis medium containing a buffer solution, the samples containing the proteins are deposited by means of a sample applicator on the surface of the gel, where they ionize and, under the effect of an electric field, migrate at different speeds depending on their respective charge. After the migration step which allows the separation of the protein constituents of the samples, these proteins are revealed, for example by coloring using a specific dye and quantified for example by a densitometric reading.
Comme la majorité des techniques modernes d'analyse, Pélectrophorèse a été portée à un degré important d'automatisation afin d'une part, de faciliter sa mise en œuvre et d'autre part de la fiabiliser. Ainsi les étapes de chargement des échantillons sur les applicateurs, dépôt des applicateurs sur le gel, migration et séchage du gel, coloration et décoloration du gel, lecture du gel peuvent maintenant être réalisées de façon automatique. En revanche, l'étape de transfert du ou des applicateurs d'échantillons, depuis l'appareil de chargement des échantillons, vers l'instrument d'électrophorèse reste encore une étape manuelle et donc sujette aux erreurs de manipulations. Ainsi, par exemple, dans le cas où 2 instruments d'électrophorèse sont utilisés simultanément, l'applicateur destiné au premier peut être chargé sur le second et réciproquement. Un autre exemple, plus fréquent, est le cas où plusieurs applicateurs doivent être déposés sur un même gel. Il peut arriver qu'ils ne soient pas déposés au niveau qui leur était destiné (inversion de 2 rangées ou plus). Dans ce cas, il devient impossible de déterminer, par l'examen de l'image finale du gel coloré, à quel applicateur correspond une rangée de dépôts donnée.Like the majority of modern analysis techniques, electrophoresis has been brought to a significant degree of automation in order, on the one hand, to facilitate its implementation and, on the other hand, to make it more reliable. Thus the steps of loading the samples on the applicators, depositing the applicators on the gel, migration and drying of the gel, coloring and discoloration of the gel, reading of the gel can now be carried out automatically. However, the step of transferring the sample applicator (s) from the loading samples to the electrophoresis instrument is still a manual step and therefore subject to handling errors. Thus, for example, in the case where 2 electrophoresis instruments are used simultaneously, the applicator intended for the first can be loaded onto the second and vice versa. Another example, more frequent, is the case where several applicators must be applied to the same gel. It may happen that they are not placed at the level intended for them (inversion of 2 rows or more). In this case, it becomes impossible to determine, by examining the final image of the colored gel, which applicator corresponds to a given row of deposits.
L'invention fournit des moyens permettant d'attribuer une série d'échantillons déposée sur le support d'électrophorèse sous forme d'une rangée d'échantillons, à un applicateur d'échantillons donné, par le simple examen de l'image électrophorétique de cette rangée.The invention provides means for assigning a series of samples deposited on the electrophoresis support in the form of a row of samples, to a given sample applicator, by simply examining the electrophoretic image of this row.
L'invention permet d'identifier sans erreur un applicateur et en conséquence une série d'échantillons à analyser associés à cet applicateur, par l'examen de l'image électrophorétique de l'applicateur obtenue, après les opérations de dépôt, migration, coloration et séchage, des moyens d'identification de l'applicateur et simultanément, des échantillons analysés.The invention makes it possible to identify an applicator without error and consequently a series of samples to be analyzed associated with this applicator, by examining the electrophoretic image of the applicator obtained, after the deposition, migration and staining operations. and drying, means for identifying the applicator and simultaneously, the samples analyzed.
L'utilisation de la présente invention, en association avec les méthodes classiques d'identification (par exemple les codes à barres ou les codes bidimensionnels tels que les codes à matrice) des différentes composantes du système d'analyse notamment les tubes échantillons, l'applicateur et le gel, permet l'identification et la traçabilité des échantillons depuis le tube primaire contenant le prélèvement, jusqu'au résultat final.The use of the present invention, in combination with conventional methods of identification (for example bar codes or two-dimensional codes such as matrix codes) of the various components of the analysis system, in particular the sample tubes, the applicator and gel, allows identification and traceability of samples from the primary tube containing the sample, to the final result.
Un applicateur d'échantillons utilisable dans le cadre de la présente invention peut être constitué par tout type de dispositif permettant de charger des échantillons à analyser, notamment par prélèvement de ces échantillons à partir de tubes dans lesquels ils sont contenus et permettant en outre de charger, en une zone déterminée, un marqueur d'identification de l'applicateur selon l'invention. Un applicateur d'échantillons peut être chargé manuellement ou de préférence automatiquement, avec les échantillons.A sample applicator usable in the context of the present invention can be constituted by any type of device making it possible to load samples to be analyzed, in particular by taking these samples from the tubes in which they are contained and also making it possible to load, in a determined area, an identification marker of the applicator according to the invention. A sample applicator can be loaded manually or preferably automatically, with the samples.
Des applicateurs utilisables ont été décrits dans l'état antérieur de la technique et sont par exemple les peignes à "membrane" (ou à dents) décrits par exemple dans les demandes de brevets et brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516, les peignes à "gorge" les peignes à "lamelles", ou de façon générale, tout dispositif utilisable pour charger et ensuite déposer sur un support d'électrophorèse des échantillons à analyser.Applicators that can be used have been described in the prior art and are, for example, the "membrane" (or toothed) combs described, for example, in patent applications and patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5.405.516, the "throat" combs the "lamella" combs, or in general, any device which can be used to load and then deposit on an electrophoresis support samples to be analyzed.
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les marqueurs d'identification de l'applicateur qui font l'objet de l'invention, peuvent être constitués par toute espèce chimique susceptible d'être révélée sur le support d'électrophorèse, à l'issue des étapes de dépôt, de migration, de coloration et de séchage du support d'électrophorèse.According to a preferred embodiment of the invention, the identification markers of the applicator which are the subject of the invention, can consist of any chemical species capable of being revealed on the electrophoresis support, the outcome of the steps of depositing, migrating, coloring and drying the electrophoresis support.
Les marqueurs de l'invention doivent pouvoir être détectés directement par examen du support d'électrophorèse après électrophorèse ou au moyen des techniques de détection des constituants des échantillons séparés par électrophorèse.The markers of the invention must be able to be detected directly by examination of the electrophoresis support after electrophoresis or by means of the techniques for detecting the constituents of the samples separated by electrophoresis.
L'expression "espèce chimique" s'applique dans le cadre de l'invention, à toute entité, chimique ou biologique, capable d'être détectée, directement ou indirectement, y compris des composés, molécules, complexes, ions, associations (par exemple de type Anticorps-Antigènes) fonctionnels chimiquement ou biologiquement, ou non fonctionnels. Des exemples particuliers de ces espèces chimiques sont les espèces chimiques colorées ou susceptibles d'être colorées, notamment les protéines, ou des espèces fonctionnelles telles que les anticorps.The expression "chemical species" applies within the framework of the invention, to any entity, chemical or biological, capable of being detected, directly or indirectly, including compounds, molecules, complexes, ions, associations (by example of Antibody-Antigens type) chemically or biologically functional, or non-functional. Particular examples of these chemical species are the chemical species colored or capable of being colored, in particular proteins, or functional species such as antibodies.
Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, les espèces chimiques utilisées sont capables de migrer dans un champ électrique. Le marqueur peut être constitué de mélanges des susdites espèces que ces espèces appartiennent ou non au même groupe chimique ou biologique, et possèdent ou non des propriétés fonctionnelles de même nature. A titre d'exemple le marqueur peut être composé d'un mélange d'espèces chimiques capables de migrer dans un champ électrique et d'espèces ne migrant pas mais précipitant au niveau de leur zone de dépôt.In a preferred embodiment of the invention, the chemical species used are capable of migrating in an electric field. The marker can consist of mixtures of the above species whether or not these species belong to the same chemical or biological group, and whether or not have functional properties of the same nature. For example, the marker can be composed of a mixture of chemical species capable of migrating in an electric field and of species which do not migrate but precipitate at their deposition zone.
Naturellement, ces compositions ne doivent pas pouvoir être confondues, par l'image électrophorétique à laquelle elles donnent lieu, avec les échantillons analysés, séparés par l'électrophorèse. Ainsi, et à titre d'exemple, on propose d'utiliser comme moyens d'identification de chaque applicateur d'échantillons, des espèces chimiques colorées ou des mélanges de ces espèces, mélanges dans lesquels plusieurs espèces chimiques sont présentes et chacune ou certaines d'entre elles possédant une mobilité électrophorétique différente par rapport à celle des autres espèces, ou de certaines des autres.Naturally, these compositions must not be able to be confused, by the electrophoretic image to which they give rise, with the samples analyzed, separated by electrophoresis. Thus, and by way of example, it is proposed to use as means of identification of each sample applicator, colored chemical species or mixtures of these species, mixtures in which several chemical species are present and each or certain d 'between them having a different electrophoretic mobility compared to that of other species, or some of the others.
Pour être efficace dans le cadre de l'identification recherchée, sur un même support d'électrophorèse, ou sur plusieurs supports d'électrophorèse, chacun des applicateurs utilisés, portant des séries différentes d'échantillons distincts, doit être associé à un marqueur déterminé qui lui est spécifique dans la mesure où il le distingue des autres applicateurs ou en variante doit être associé à un marqueur commun à différents applicateurs mais cependant localisé différemment au niveau de l'applicateur et en conséquence, au niveau du support d'électrophorèse après réaction, par la localisation des pistes du support d'électrophorèse marquées. Un marqueur commun peut être constitué par l'une quelconque des espèces chimiques définies ci-dessus, par un mélange des ces espèces, y compris par de l'eau physiologique.To be effective in the context of the identification sought, on the same electrophoresis support, or on several electrophoresis supports, each of the applicators used, carrying different series of distinct samples, must be associated with a determined marker which is specific to it insofar as it distinguishes it from other applicators or, in a variant, must be associated with a marker common to different applicators but nevertheless located differently at the level of the applicator and consequently, at the level of the electrophoresis support after reaction, by the location of the marked electrophoresis support tracks. A common marker can be constituted by any of the chemical species defined above, by a mixture of these species, including by physiological water.
Selon une autre variante de réalisation de l'invention, le marquage d'une série d'échantillons résulte de l'absence de chargement d'une zone (puits) des applicateurs d'échantillons, cette zone normalement destinée à charger les échantillons, étant localisée différemment pour chaque applicateur, de façon à donner une image électrophorétique différente (par absence de bandes séparées et révélées) sur le support d'électrophorèse. En d'autres termes, la spécificité du marqueur est due soit à la nature et/ou à la concentration des espèces chimiques qui le constitue, soit à la localisation en une zone spécifique de l'applicateur, de cette composition, voire à une combinaison des paramètres précédentes, la spécificité du marqueur devant se traduire par une image électrophorétique différente pour chaque applicateur liée par exemple, à la couleur, au positionnement, au nombre ou à l'intensité des bandes obtenues pour chaque marqueur sur sa piste d'électrophorèse, à l'issue de l'analyse électrophorétique. Un marqueur peut aussi être identifié par la piste qu'il occupe sur le support d'électrophorèse, par rapport aux pistes occupées par les autres marqueurs sur le même ou sur un autre support.According to another alternative embodiment of the invention, the marking of a series of samples results from the absence of loading of an area (well) of the sample applicators, this area normally intended for loading the samples, being localized differently for each applicator, so as to give a different electrophoretic image (by the absence of separate and revealed bands) on the electrophoresis support. In other words, the specificity of the marker is due either to the nature and / or to the concentration of the chemical species which constitutes it, or to the localization in a specific zone of the applicator, of this composition, or even to a combination previous parameters, the specificity of the marker having to translate into a different electrophoretic image for each applicator linked for example to the color, the positioning, the number or the intensity of the bands obtained for each marker on its electrophoresis track, after the electrophoretic analysis. A marker can also be identified by the track it occupies on the electrophoresis support, compared to the tracks occupied by the other markers on the same or on another support.
A titre d'exemple, les marqueurs d'identification suivants peuvent être mis en œuvre :For example, the following identification markers can be used:
- un colorant ou un mélange de colorants, ou toute autre espèce colorée, par exemple une protéine colorée de façon covalente, migrant ou non, chaque applicateur étant repéré par une couleur particulière, ou un mélange de bandes colorées,a dye or a mixture of dyes, or any other colored species, for example a covalently colored protein, migrating or not, each applicator being identified by a particular color, or a mixture of colored bands,
- une protéine, une association de protéines, sous forme de monomères ou de polymères (ou toute autre espèce chimique, susceptible de migrer ou non, et de se colorer, par exemple lors de la coloration du gel par les colorants protéiques classiques : amidoschwarz, violet acide, etc..) possédant une mobilité électrophorétique particulière, chaque applicateur étant repéré par une bande protéique (ou de l'espèce chimique) située à une position donnée sur le profil, position différente en fonction de l'identifiant ; on citera également des associations Anticorps-Antigènes utilisés à la limite de la solubilité, une protéine polymérisée telle que la γ- globuline bovine ; - un mélange de protéines (ou toute autre espèce chimique susceptible de migrer et de se colorer, par exemple lors de la coloration du gel par les colorants protéiques classiques : amidoschwarz, violet acide, etc..) possédant des mobilités électrophorétiques différentes, chaque applicateur étant repéré par un nombre de bandes correspondant au nombre de protéines (ou d'espèces chimiques) contenues dans l'identifiant,a protein, a combination of proteins, in the form of monomers or polymers (or any other chemical species, capable of migrating or not, and of being colored, for example during the coloring of the gel by conventional protein dyes: amidoschwarz, acid violet, etc.) having a particular electrophoretic mobility, each applicator being identified by a protein band (or of the chemical species) located at a given position on the profile, different position depending on the identifier; there will also be cited Antibody-Antigen combinations used at the limit of solubility, a polymerized protein such as bovine γ-globulin; - a mixture of proteins (or any other chemical species capable of migrating and becoming colored, for example during the coloring of the gel with conventional protein dyes: amidoschwarz, acid violet, etc.) having different electrophoretic mobilities, each applicator being identified by a number of bands corresponding to the number of proteins (or chemical species) contained in the identifier,
- une protéine (ou toute autre espèce chimique susceptible de migrer et de se colorer, par exemple lors de la coloration du gel par les colorants protéiques classiques : amidoswchwarz, violet acide, etc..) ou un mélange de protéines ou d'espèces chimiques) présentes à des concentrations variables dans chacun des marqueurs. Chaque applicateur sera repéré par l'intensité de la ou des fractions correspondant à la concentration de la ou des protéines (ou espèces chimiques),- a protein (or any other chemical species liable to migrate and become colored, for example when coloring the gel with conventional protein dyes: amidoswchwarz, acid violet, etc.) or a mixture of proteins or chemical species ) present at varying concentrations in each of the markers. Each applicator will be identified by the intensity of the fraction (s) corresponding to the concentration of the protein (s) (or chemical species),
- des combinaisons des marqueurs précédemment identifiés dès lors que le marqueur constitué est identifiable par son image électrophorétique- combinations of the markers previously identified when the marker constituted is identifiable by its electrophoretic image
- alternativement, un même marqueur d'identification choisi parmi les précédents, peut être utilisé pour l'ensemble des applicateurs d'échantillons mis en œuvre, dès lors que ce marqueur est placé sur chaque applicateur, dans un puits prédéterminé, distinct pour chaque applicateur, ce qui permet à l'issue de la séparation des échantillons par électrophorèse, de repérer l'image d'un même marqueur en une zone différente pour chaque applicateur. Le marquage peut en variante résulter dans ce cas de l'absence de profil électrophorétique pour une piste spécifique pour chaque rangée d'échantillons, correspondant aux puits de l'applicateur laissés libres.- alternatively, the same identification marker chosen from the previous ones, can be used for all of the sample applicators used, as soon as this marker is placed on each applicator, in a predetermined well, distinct for each applicator , which allows after the separation of the samples by electrophoresis, to locate the image of the same marker in a different zone for each applicator. Marking may alternatively result in this case from the absence of an electrophoretic profile for a specific track for each row of samples, corresponding to the wells of the applicator left free.
L'invention a aussi pour objet un procédé d'analyse par électrophorèse, dans lequel plusieurs applicateurs sont utilisés pour déposer des séries d'échantillons sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, ces applicateurs ayant au préalable été chargés d'une part avec les échantillons à analyser, d'autre part avec un marqueur spécifique pour chacun des applicateurs ou un marqueur commun chargé en une zone spécifique différente pour chaque applicateur.The subject of the invention is also a method of analysis by electrophoresis, in which several applicators are used to deposit series of samples on one or more electrophoresis supports, these applicators having first been loaded with the samples to be analyzed, on the other hand with a specific marker for each of the applicators or a common marker loaded in a different specific area for each applicator.
Un procédé d'analyse par électrophorèse, des constituants d'échantillons, notamment d'échantillons biologiques prélevés chez des patients comprend les étapes suivantes :A method of electrophoresis analysis of components of samples, in particular biological samples taken from patients, comprises the following steps:
- le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant des moyens pour l'identifier (marqueur d'identification), identifiables par l'examen du support d'électrophorèse à l'issue de l'électrophorèse ;- depositing biological samples, by means of several sample applicators, on one or more electrophoresis supports, each applicator comprising means for identifying it (identification marker), identifiable by examining the support for electrophoresis after electrophoresis;
- l'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ;- the application of an electric field to allow the migration of the components of the samples;
- la détection des constituants des échantillons, séparés par électrophorèse et du marqueur d'identification de chaque applicateur.- the detection of the constituents of the samples, separated by electrophoresis and of the identification marker of each applicator.
Le procédé ainsi défini pour l'analyse par électrophorèse des constituants d'échantillons à analyser, peut être intégré dans un système dans lequel les moyens d'identification de l'applicateur sont associés à un système de repérage complet de l'ensemble des composantes du système d'analyse dans le processus d'identification des échantillons à analyser par rapport au résultat obtenu à l'issue de l'électrophorèse.The process thus defined for the analysis by electrophoresis of the constituents of samples to be analyzed, can be integrated into a system in which the identification means of the applicator are associated with a complete tracking system of all the components of the analysis system in the process of identifying the samples to be analyzed in relation to the result obtained at the end of the electrophoresis.
Chaque marqueur d'identification, déposé sur le support d'électrophorèse, en même temps que les échantillons, et soumis à l'électrophorèse, donne une image électrophorétique particulière qui devra être repérable, notamment visible, sur le support d'électrophorèse, après les différentes étapes de l'analyse : migration, coloration et séchage. Ce repérage peut se faire de manière manuelle par un opérateur ou de façon automatique, par exemple lors de l'analyse du support d'électrophorèse par un densitomètre.Each identification marker, deposited on the electrophoresis support, at the same time as the samples, and subjected to electrophoresis, gives a particular electrophoretic image which must be identifiable, in particular visible, on the electrophoresis support, after the different stages of the analysis: migration, coloring and drying. This identification can be done manually by an operator or automatically, for example during the analysis of the electrophoresis support by a densitometer.
Le repérage du marqueur peut s'inscrire dans un système d'identification des différentes composantes du système d'analyse tel que le code à barres, code bidimensionnel (ou tout autre système d'identification). Les différentes composantes du système comprenant les tubes échantillons, les tubes des marqueurs pour applicateur, les applicateurs, le support d'analyse sont alors repérées par un code.The marking of the marker can be part of an identification system of the different components of the analysis system such as the bar code, two-dimensional code (or any other identification system). The various components of the system including the sample tubes, the tubes of markers for applicator, the applicators, the analysis support are then identified by a code.
Durant l'étape du chargement des applicateurs notamment par un automate, on lit le code des différents tubes primaires des échantillons, du ou des tubes de marqueurs et du ou des applicateurs. On charge ensuite, de préférence au moyen d'un automate, le marqueur et les échantillons sur des positions repérées du ou des applicateurs correspondants. Après cette étape, chaque applicateur et les échantillons correspondants qu'il porte sont donc totalement identifiés. L'applicateur ou les applicateurs ainsi chargés et le support d'électrophorèse sont introduits dans l'instrument d'électrophorèse après lecture de leur code respectif. A ce niveau, chaque support d'électrophorèse est associé à un ou plusieurs applicateurs. Après les étapes de migration, coloration et séchage, le support est introduit dans le densitomètre après lecture de son code. Le densitomètre, ou l'opérateur, repère sur chaque rangée le marqueur, ce qui permet au système d'identifier sans erreur les échantillons de cette rangée et donc de leur attribuer un résultat. Ce système permet donc d'assurer la traçabilité totale des échantillons depuis le tube primaire jusqu'au résultat final.During the step of loading the applicators, in particular by an automaton, the code of the different primary tubes of the samples, of the marker tube or tubes and of the applicator (s) is read. The marker and the samples are then loaded, preferably by means of an automatic machine, at positions marked with the corresponding applicator (s). After this step, each applicator and the corresponding samples it carries are therefore fully identified. The applicator or applicators thus loaded and the electrophoresis support are introduced into the electrophoresis instrument after reading their respective code. At this level, each electrophoresis support is associated with one or more applicators. After the migration, coloring and drying steps, the support is introduced into the densitometer after reading its code. The densitometer, or operator, locates the marker on each row, which allows the system to identify the samples in that row without error and therefore assign a result to them. This system therefore ensures total traceability of the samples from the primary tube to the final result.
Selon le premier mode de réalisation préféré de l'invention, le procédé d'analyse par électrophorèse comprend, pour la détection des constituants séparés et/ou des marqueurs d'identification d'applicateurs, une étape de révélation des constituants séparés à l'issue de l'électrophorèse.According to the first preferred embodiment of the invention, the electrophoresis analysis method comprises, for the detection of the separate constituents and / or of applicator identification markers, a step of revealing the separated constituents at the end electrophoresis.
Selon un mode particulier de l'invention, on met en œuvre différents applicateurs d'échantillons pour déposer plusieurs rangées d'échantillons différents sur un même support d'électrophorèse.According to a particular embodiment of the invention, different sample applicators are used to deposit several rows of different samples on the same electrophoresis support.
Selon un autre mode de réalisation de l'invention ci-dessus décrite, on met en œuvre différents applicateurs d'échantillons pour déposer plusieurs rangées d'échantillons différents sur différents supports d'électrophorèse. Dans ce cas, on peut réaliser en parallèle, plusieurs électrophorèses sur différents instruments, en parallèle.According to another embodiment of the invention described above, different sample applicators are used to deposit several rows of different samples on different electrophoresis supports. In this case, several electrophoreses can be performed in parallel on different instruments, in parallel.
Dans un procédé d'analyse défini selon les modalités précédentes y compris les combinaisons des modes de réalisation particuliers proposés ci- dessus, le marqueur d'identification de chaque applicateur est constitué par une composition spécifique pour chaque applicateur, déposée sur une piste déterminée sur le support d'électrophorèse, simultanément aux échantillons.In an analysis method defined according to the preceding methods including the combinations of the particular embodiments proposed above, the identification marker of each applicator is constituted by a specific composition for each applicator, deposited on a track determined on the electrophoresis support, simultaneously with samples.
Alternativement, le marqueur d'identification de chaque applicateur est constitué par une composition commune à tous les applicateurs, ladite composition étant déposée sur le support d'électrophorèse au niveau d'une piste différente pour chaque applicateur et donc pour le support d'électrophorèse, simultanément aux échantillons.Alternatively, the identification marker for each applicator is constituted by a composition common to all the applicators, said composition being deposited on the electrophoresis support at a different track for each applicator and therefore for the electrophoresis support, simultaneously with the samples.
Dans le cadre de la réalisation du procédé de l'invention, le marqueur d'identification d'applicateurs d'échantillons est constitué par toute composition telle que définie précédemment.In the context of carrying out the method of the invention, the identification marker for sample applicators consists of any composition as defined above.
Les différents marqueurs précédemment décrits peuvent être mis en œuvre dans un procédé comprenant les étapes suivantes :The various markers previously described can be implemented in a process comprising the following steps:
- le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant des moyens pour l'identifier (marqueur d'identification), identifiables par l'examen du support d'électrophorèse à l'issue de l'électrophorèse ;- depositing biological samples, by means of several sample applicators, on one or more electrophoresis supports, each applicator comprising means for identifying it (identification marker), identifiable by examining the support for electrophoresis after electrophoresis;
- l'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ;- the application of an electric field to allow the migration of the components of the samples;
- le séchage du ou des supports d'électrophorèse,- drying of the electrophoresis support (s),
- la coloration du ou des supports d'électrophorèse,- the coloring of the electrophoresis support (s),
- la décoloration du ou des supports d'électrophorèse,- discoloration of the electrophoresis support (s),
- le séchage du ou des supports d'électrophorèse. Dans le cadre de ce procédé, le marqueur d'identification peut être identifié avant l'étape de coloration du support d'électrophorèse, ou s'il ne s'agit pas d'un marqueur coloré, par coloration lors de l'étape de détection des constituants des échantillons qui comprend la coloration du support d'électrophorèse.- drying of the electrophoresis support (s). In the context of this process, the identification marker can be identified before the step of coloring the electrophoresis support, or if it is not a colored marker, by coloring during the step of detection of the constituents of the samples which includes the coloring of the electrophoresis support.
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, les espèces chimiques colorées sont des anticorps, de préférence monoclonaux de façon à obtenir une bande distincte, et dans l'hypothèse de l'utilisation d'un mélange d'anticorps monoclonaux, chaque anticorps a une mobilité telle qu'il conduit à l'obtention d'une bande distincte de celles obtenues avec les autres anticorps du mélange. Ces anticorps peuvent être détectés par toute méthode connue en soi, applicable dans le cadre d'une analyse comportant une séparation électrophorétique.In another embodiment of the invention, the colored chemical species are antibodies, preferably monoclonal so as to obtain a distinct band, and in the hypothesis of the use of a mixture of monoclonal antibodies, each antibody has a mobility such that it leads to the production of a band distinct from those obtained with the other antibodies in the mixture. These antibodies can be detected by any method known per se, applicable within the framework of an analysis comprising an electrophoretic separation.
De même, on peut ajouter au procédé ainsi défini, une étape de détection par analyse quantitative des différents constituants séparés.Similarly, it is possible to add to the process thus defined, a detection step by quantitative analysis of the different separate constituents.
La séparation électrophorétique est réalisée sur tout type de support d'électrophorèse et en particulier sur des supports tels que des gels, notamment des gels d'agarose, des gels de polyacrylamide, ou sur des membranes d'acétate de cellulose. De façon générale, on aura recours à tout support poreux permettant la diffusion des échantillons et leur migration dans le support pour permettre la séparation des constituants contenus dans ces échantillons.The electrophoretic separation is carried out on any type of electrophoresis support and in particular on supports such as gels, in particular agarose gels, polyacrylamide gels, or on cellulose acetate membranes. In general, any porous support will be used allowing the diffusion of the samples and their migration in the support to allow the separation of the constituents contained in these samples.
Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le procédé est un procédé d'immunofixation dans lequel les constituants séparés des échantillons sont révélés de toute façon en soi connue, au moyen d'anticorps, ledit procédé incorporant, dans l'étape de dépôt des échantillons à analyser, le dépôt d'un marqueur d'identification de l'applicateur d'échantillons.According to another embodiment of the invention, the method is an immunofixation method in which the constituents separated from the samples are revealed in any way known per se, by means of antibodies, said method incorporating, in the step of deposit of the samples to be analyzed, deposit of an identification marker for the sample applicator.
L'invention concerne aussi un procédé d'identification positive d'échantillons, pour permettre d'associer l'image électrophorétique d'un échantillon analysé, à un échantillon prélevé, comprenant une étape de marquage de l'applicateur d'échantillons au moyen d'un marqueur d'identification, identifiable par son image électrophorétique et l'utilisation de l'applicateur d'échantillons ainsi marqué pour le dépôt des échantillons à analyser sur un support d'électrophorèse.The invention also relates to a method for positive identification of samples, to enable the electrophoretic image of a analyzed sample, to a sample taken, comprising a step of marking the sample applicator by means of an identification marker, identifiable by its electrophoretic image and the use of the sample applicator thus marked for the deposit of the samples to be analyzed on an electrophoresis support.
Pour la mise en œuvre de ce procédé, tous les marqueurs décrits précédemment, utilisables dans le cadre du procédé d'analyse par électrophorèse de l'invention, peuvent être mis en œuvre.For the implementation of this method, all of the markers described above, which can be used in the context of the electrophoresis analysis method of the invention, can be used.
L'invention a également pour objet un kit (trousse) pour la réalisation de l'analyse des constituants d'échantillons par électrophorèse, comprenant :The subject of the invention is also a kit (kit) for carrying out the analysis of the constituents of samples by electrophoresis, comprising:
• un support d'électrophorèse comprenant un matériau poreux approprié pour recevoir les échantillons à analyser et le marqueur d'identification de l'applicateur d'échantillon et permettre leur migration électrophorétique,An electrophoresis support comprising a porous material suitable for receiving the samples to be analyzed and the identification marker of the sample applicator and allowing their electrophoretic migration,
• une ou plusieurs compositions constituée(s) par des espèces chimiques, utilisables lors d'une analyse électrophorétique pour l'identification d'applicateur(s) d'échantillons, cette (ces) composition(s) étant identifiable(s) par son(leur) image électrophorétique.• one or more compositions made up of chemical species, usable during an electrophoretic analysis for the identification of sample applicator (s), this (these) composition (s) being identifiable by its (their) electrophoretic image.
Le marqueur d'applicateur d'échantillons utilisé dans ce kit répond aux définitions données précédemment, prises isolément ou en combinaison.The sample applicator marker used in this kit meets the definitions given above, taken individually or in combination.
En outre, le kit peut comprendre tout réactif habituellement utilisé pour des analyses par électrophorèse, en particulier tout ou partie des réactifs suivants :In addition, the kit can include any reagent usually used for electrophoresis analyzes, in particular all or part of the following reagents:
- un ou plusieurs réactifs pour la révélation des constituants séparés des échantillons ;one or more reagents for revealing the constituents separated from the samples;
- un ou plusieurs réactifs pour la révélation des marqueurs d'identification des applicateurs. D'autres propriétés et avantages particuliers de l'invention apparaissent encore dans les exemples qui suivent et les figures qui les accompagnent.- one or more reagents for revealing applicator identification markers. Other particular properties and advantages of the invention appear again in the examples which follow and the figures which accompany them.
Figures 1 à 7 : Profils d'analyse électrophorétique de plusieurs séries d'échantillons, associés à différents marqueurs d'applicateurs d'échantillons tels que décrits dans les exemples 1 à 7.Figures 1 to 7: Profiles of electrophoretic analysis of several series of samples, associated with different markers of sample applicators as described in examples 1 to 7.
ExemplesExamples
Exemple n° 1 :Example 1:
Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes :The markers consist of the following solutions:
- marqueur n° 1 : solution de rouge Soudan dans la dimethylformamide 5mg/ml- marker n ° 1: solution of Sudan red in dimethylformamide 5 mg / ml
- marqueur n° 2 : solution de noir Soudan dans la dimethylformamide 5mg/ml.- marker No. 2: solution of black Sudan in dimethylformamide 5 mg / ml.
On dépose 10 μl de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 2 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 μl de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.10 μl of each marker are deposited in the well of the first tooth of 2 deposition applicators of the type described in patents EP 0493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 μl of each serum to be analyzed is deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C.
Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 1 , on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant :After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloring, the gel is discolored and dried again. In FIG. 1, the corresponding marker is recognized on the first line of each row:
- rangée inférieure, dépôt n° 1 : bande rouge, marqueur n° 1- lower row, depot n ° 1: red strip, marker n ° 1
- rangée supérieure, dépôt n° 16 : bande noire, marqueur n° 2.- upper row, deposit n ° 16: black band, marker n ° 2.
Exemple n° 2 : Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes :Example 2: The markers consist of the following solutions:
- marqueur n° 1 : anticorps monoclonal anti apo B clone 1 , 3 mg/ml dans l'eau physiologique- marker No. 1: monoclonal anti apo B clone 1, 3 mg / ml in physiological water
- marqueur n° 2 : hémoglobine 3 mg/ml dans l'eau physiologique,- marker No. 2: hemoglobin 3 mg / ml in physiological water,
- marqueur n° 3 : albumine bovine 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique. On dépose 10 μl de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996 , US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 μl de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.- marker No. 3: bovine albumin 2.5 mg / ml in physiological water. 10 μl of each marker are deposited in the well of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 μl of each serum to be analyzed is deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C.
Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 2, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant :After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloring, the gel is discolored and dried again. In FIG. 2, the corresponding marker is recognized on the first line of each row:
- rangée inférieure, dépôt n°1 : 1 bande, marqueur n° 1- lower row, deposit n ° 1: 1 strip, marker n ° 1
- rangée intermédiaire, dépôt n°19 : 1 bande, marqueur n° 2- intermediate row, deposit n ° 19: 1 strip, marker n ° 2
- rangée supérieure, dépôt n° 37 : 1 bande, marqueur n° 3.- upper row, deposit no.37: 1 strip, marker no.3.
Les marqueurs se différencient dans ce cas par la position différente de leur bande respective.In this case, the markers are differentiated by the different position of their respective bands.
Exemple n°3 :Example 3:
Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes :The markers consist of the following solutions:
- marqueur n° 1 : hémoglobine 2 mg/ml dans l'eau physiologique,- marker No. 1: hemoglobin 2 mg / ml in physiological water,
- marqueur n° 2 : hémoglobine 2 mg/ml et ovalbumine 10 mg/ml dans l'eau physiologique,- marker 2: hemoglobin 2 mg / ml and ovalbumin 10 mg / ml in physiological water,
- marqueur n°3 : hémoglobine 2 mg/ml, ovalbumine 10 mg/ml et albumine bovine 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique. On dépose 10 μl de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 μl de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C. Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 3, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant :- marker No. 3: hemoglobin 2 mg / ml, ovalbumin 10 mg / ml and bovine albumin 2.5 mg / ml in physiological water. 10 μl of each marker are deposited in the well of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 μl of each serum to be analyzed is deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C. After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloring, the gel is discolored and dried again. In FIG. 3, the corresponding marker is recognized on the first line of each row:
- rangée inférieure, dépôt n° 1 : 1 bande, marqueur n° 1- lower row, deposit n ° 1: 1 strip, marker n ° 1
- rangée intermédiaire, dépôt n° 19 : 2 bandes , marqueur n° 2- intermediate row, deposit n ° 19: 2 bands, marker n ° 2
- rangée supérieure, dépôt n° 37 : 3 bandes, marqueur n° 3.- upper row, deposit n ° 37: 3 bands, marker n ° 3.
Les marqueurs se différencient dans ce cas par le nombre de bandes présentes.The markers are differentiated in this case by the number of bands present.
Exemple n° 4 :Example 4:
Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes :The markers consist of the following solutions:
- marqueur n° 1 : anticorps monoclonal anti apo B clone 1 à 3 mg/ml dans l'eau physiologique,- marker No. 1: monoclonal anti apo B antibody clone 1 to 3 mg / ml in physiological water,
- marqueur n° 2 : anticorps monoclonaux anti apo B clone 1 et clone 2 à3 mg/ml chacun dans l'eau physiologique,- marker No. 2: monoclonal anti apo B antibodies clone 1 and clone 2 at 3 mg / ml each in physiological water,
- marqueur n° 3 : anticorps monoclonaux anti apo B clone 1 , clone 2 et clone 3 à3 mg/ml chacun dans l'eau physiologique.- marker No. 3: anti apo B monoclonal antibodies clone 1, clone 2 and clone 3 at 3 mg / ml each in physiological water.
On dépose 10 μl de chaque marqueur dans le puis de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 μl de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie, à la surface d'un gel' permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C. Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 4, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée, le marqueur correspondant :10 μl of each marker are deposited in the then of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 μl of each is deposited serum to be analyzed. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance, to the surface of a gel 'allowing the analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C. After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloring, the gel is discolored and dried again. In Figure 4, we recognize on the first line of each row, the corresponding marker:
- rangée inférieure, dépôt n°1 : 1 bande, marqueur n°1- lower row, deposit n ° 1: 1 strip, marker n ° 1
- rangée intermédiaire, dépôt n° 19 : 2 bandes, marqueur n° 2- intermediate row, deposit n ° 19: 2 bands, marker n ° 2
- rangée supérieure, dépôt n° 37 : 3 bandes, marqueur n° 3.- upper row, deposit n ° 37: 3 bands, marker n ° 3.
Les marqueurs se différencient dans ce cas par le nombre de bandes présentes.The markers are differentiated in this case by the number of bands present.
Exemple n° 5 :Example 5:
Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes :The markers consist of the following solutions:
- marqueur n°1 : albumine bovine 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique- marker n ° 1: bovine albumin 2,5 mg / ml in physiological water
- marqueur n° 2 : albumine bovine 13,5 mg/ml dans l'eau physiologique- marker No. 2: bovine albumin 13.5 mg / ml in physiological water
- marqueur n° 3 : albumine bovine 80 mg/ml dans l'eau physiologique. On dépose 10 μl de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 μl de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler' la température à 20°C. Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 5, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant :- marker No. 3: bovine albumin 80 mg / ml in physiological water. 10 μl of each marker are deposited in the well of the first tooth of 3 deposition applicators of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516. In the other wells, 10 μl of each serum to be analyzed is deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. Separation of the samples is obtained by electrophoresis for 6 minutes and at a power of 20 W, an instrument for regulating the temperature at 20 ° C. After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloring, the gel is discolored and dried again. In FIG. 5, the corresponding marker is recognized on the first line of each row:
- rangée inférieure, dépôt n° 1 :1 bande, concentration faible- lower row, deposit n ° 1: 1 strip, low concentration
- rangée intermédiaire, dépôt n° 19 : 1 bande, concentration intermédiaire- intermediate row, deposit n ° 19: 1 strip, intermediate concentration
- rangée supérieure, dépôt n° 37 : 1 bande, concentration forte- upper row, deposit n ° 37: 1 strip, high concentration
Les marqueurs se différencient dans ce cas par l'intensité de la bande correspondante.The markers are differentiated in this case by the intensity of the corresponding band.
Exemple n° 6 :Example 6:
L'identification est réalisée de la façon suivante :The identification is carried out as follows:
- peigne n° 1 : aucun échantillon ou de l'eau physiologique sur la dent- comb n ° 1: no sample or physiological water on the tooth
1 ,1,
- peigne n ° 2 : aucun échantillon ou de l'eau physiologique sur la dent- comb n ° 2: no sample or physiological water on the tooth
2,2
- peigne n° 3 : aucun échantillon ou de l'eau physiologique sur la dent 3.- comb n ° 3: no sample or physiological water on tooth 3.
On dépose 10μl d'eau physiologique (ou rien) respectivement dans le puits de la dent 1. du 1er applicateur, de la dent 2 du 2lème applicateur et de la dent 3 du ième app|jcateur de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.10μl of physiological saline is deposited (or nothing) respectively in the wells of the tooth 1. 1 applicator, the tooth 2 from 2 -th applicator and the tooth 3 of the i m e e p | j ca tor of filing of the type described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.
Dans les autres puits, on dépose 10 μl de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C. Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 6, on reconnaît sur chaque rangée le marqueur correspondant :In the other wells, 10 μl of each serum to be analyzed is deposited. These applicators are then applied for 30 seconds, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing the analysis of serum proteins. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 6 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C. After migration, the gel is dried and then stained with amidoschwarz. After coloring, the gel is discolored and dried again. In FIG. 6, the corresponding marker is recognized on each row:
- rangée inférieure, dépôt n° 1 : absence de profil- lower row, deposit n ° 1: no profile
- rangée intermédiaire, dépôt n° 20 : absence de profil- middle row, depot n ° 20: no profile
- rangée supérieure, dépôt n° 39 : absence de profil- upper row, deposit no.39: no profile
Exemple n° 7Example 7
Le marqueur est une solution à 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique, de gamma globuline bovine partiellement polymérisée (avec du glutaraldéhyde), l'identification est réalisée de la façon suivante :The marker is a 2.5 mg / ml solution in physiological water, of partially polymerized bovine gamma globulin (with glutaraldehyde), the identification is carried out as follows:
- peigne n° 1 : dépôt du marqueur par la dent 1 (piste de gauche)- comb n ° 1: deposition of the marker by tooth 1 (left track)
- peigne n° 2 : dépôt du marqueur par la dent 8 (piste du milieu)- comb n ° 2: deposition of the marker by tooth 8 (middle track)
- peigne n° 3 : aucun échantillon sur la dent 15 (piste de droite)- comb n ° 3: no sample on tooth 15 (right track)
On dépose 10μl de solution de marqueur respectivement dans le puits de la dent 1 du 1er applicateur, de la dent 2 du 2ième applicateur et de la dent 3 du βieme app|jcateur de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.10 μl of marker solution are deposited respectively in the well of tooth 1 of the 1 st applicator, of tooth 2 of the 2 nd applicator and of tooth 3 of β ie m e a pp | j ca of deposit type of those described in patents EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.
Les échantillons à analyser sont dilués au tiers pour les pistes IgA, IgM, IgK, Igλ, et au sixième pour la piste IgG, et on dépose 10 μl de chaque dilution dans les puits correspondants. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 1 minute, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant de réaliser une immunofixation. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 8 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C. Après migration, le typage des paraprotéines a été réalisé en incubant chaque piste de migration avec un antisérum spécifique (anti IgG, anti IgA, anti IgM, anti IgK, anti Igλ) et la piste correspondant au profil électrophorétique avec une solution de fixation des protéines. La piste du marqueur ne subit aucun traitement particulier. L'excès de réactifs a été éliminé, le gel a été séché et coloré au violet acide. Chaque peigne est repéré par la position de la bande colorée correspondant au marqueur :The samples to be analyzed are diluted to a third for the IgA, IgM, IgK, Igλ lanes, and to the sixth for the IgG lane, and 10 μl of each dilution are deposited in the corresponding wells. These applicators are then applied for 1 minute, at a defined distance from each other, to the surface of a gel allowing immunofixation to be carried out. The separation of the samples is obtained by electrophoresis for approximately 8 minutes and at a power of 20 W, on an instrument making it possible to regulate the temperature to 20 ° C. After migration, the typing of the paraproteins was carried out by incubating each migration track with a specific antiserum (anti IgG, anti IgA, anti IgM, anti IgK, anti Igλ) and the track corresponding to the electrophoretic profile with a protein fixing solution. . The marker track is not subject to any special treatment. Excess reagents were removed, the gel was dried and stained with acid purple. Each comb is identified by the position of the colored band corresponding to the marker:
- rangée inférieure, dépôt de gauche : présence d'une bande colorée- lower row, left depot: presence of a colored band
- rangée intermédiaire, dépôt central : présence d'une bande colorée- intermediate row, central depot: presence of a colored band
- rangée supérieure, dépôt de droite : présence d'une bande colorée. - upper row, right deposit: presence of a colored band.

Claims

REVENDICATIONS
Procédé d'analyse par électrophorèse, des constituants d'échantillons biologiques, comprenant les étapes suivantes :Method for electrophoresis analysis of the components of biological samples, comprising the following steps:
- le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant un marqueur d'identification, identifiable par l'examen de son image électrophorétique;- depositing biological samples, using several sample applicators, on one or more electrophoresis supports, each applicator comprising an identification marker, identifiable by examining its electrophoretic image;
- l'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ;- the application of an electric field to allow the migration of the components of the samples;
- la détection des constituants des échantillons, séparés par électrophorèse et du marqueur d'identification de chaque applicateur. Procédé d'analyse par électrophorèse selon la revendication 1 , dans lequel le marqueur d'identification d'applicateur d'échantillons est constitué par une composition d'espèces chimiques capables de migrer dans un champ électrique. Procédé d'analyse par électrophorèse selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans lequel les espèces chimiques sont des molécules colorées ou capables d'être colorées. Procédé d'analyse par électrophorèse selon la revendication 2 ou la revendication 3, dans lequel les marqueurs d'identification de tous les applicateurs sont choisis parmi des espèces chimiques différentes ou des mélanges différents d'espèces chimiques de telle sorte que pour chaque applicateur d'échantillons mis en œuvre, l'image électrophorétique de marqueur d'identification est différente de celle des autres applicateurs d'échantillons. Procédé d'analyse par électrophorèse selon la revendication 4 dans lequel les marqueurs d'identification de tous les applicateurs ont des mobilités électrophorétiques différentes. Procédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, dans lequel les espèces chimiques colorées ou susceptibles d'être colorées sont des protéines ou des mélanges de protéines possédant des mobilités électrophorétiques différentes. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel les marqueurs de tous les applicateurs sont constitués par des espèces chimiques identiques, utilisées à des concentrations déterminées, différentes pour chaque applicateur d'échantillons. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel les espèces chimiques sont des anticorps monoclonaux. Procédé d'analyse par électrophorèse selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel la détection des constituants de l'échantillon et du marqueur d'identification d'applicateur, comprend une étape de révélation des constituants de l'échantillon et/ou du marqueur d'identification. Procédé d'analyse par électrophorèse selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel différents applicateurs d'échantillons sont utilisés pour déposer plusieurs séries d'échantillons différents sur un même support d'électrophorèse. Procédé d'analyse par électrophorèse selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel différents applicateurs d'échantillons sont utilisés pour déposer plusieurs séries d'échantillons différents sur différents supports d'électrophorèse. Procédé d'analyse par électrophorèse selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 , dans lequel le marqueur d'identification de chaque applicateur est constitué par une composition spécifique pour chaque applicateur, déposée sur une piste déterminée sur le support d'électrophorèse, simultanément aux échantillons. Procédé d'analyse par électrophorèse selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que le marqueur d'identification de chaque applicateur est constitué par une composition commune à tous les applicateurs, ladite composition étant déposée sur le support d'électrophorèse au niveau d'une piste déterminée, différente pour chaque applicateur, simultanément aux échantillons, ou en ce que le marqueur d'identification est un puits non chargé et distinct, sur chaque applicateur. Procédé d'analyse par électrophorèse selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, comprenant les étapes suivantes :- the detection of the constituents of the samples, separated by electrophoresis and of the identification marker of each applicator. The method of electrophoresis analysis according to claim 1, in which the sample applicator identification marker consists of a composition of chemical species capable of migrating in an electric field. A method of electrophoresis analysis according to claim 1 or claim 2, wherein the chemical species are colored molecules or capable of being colored. A method of electrophoresis analysis according to claim 2 or claim 3, in which the identification markers of all the applicators are chosen from different chemical species or different mixtures of chemical species so that for each applicator of samples used, the electrophoretic image of the identification marker is different from that of other sample applicators. Method of analysis by electrophoresis according to claim 4, in which the identification markers of all the applicators have different electrophoretic mobilities. Analysis method according to any one of Claims 3 to 5, in which the chemical species colored or capable of being colored are proteins or mixtures of proteins having different electrophoretic mobilities. Process according to any one of Claims 1 to 6, in which the markers of all the applicators consist of identical chemical species, used at determined concentrations, different for each sample applicator. The method according to any of claims 1 to 7, wherein the chemical species are monoclonal antibodies. Method of analysis by electrophoresis according to any one of Claims 1 to 8, in which the detection of the constituents of the sample and of the applicator identification marker, comprises a step of revealing the constituents of the sample and / or the identification marker. An electrophoresis analysis method according to any one of claims 1 to 9, in which different sample applicators are used to deposit several different series of samples on the same electrophoresis support. Method of analysis by electrophoresis according to any one of claims 1 to 10, in which different sample applicators are used to deposit several series of different samples on different electrophoresis supports. Method of analysis by electrophoresis according to any one of Claims 1 to 11, in which the identification marker of each applicator is constituted by a specific composition for each applicator, deposited on a specific track on the electrophoresis support, simultaneously with the samples. Method of analysis by electrophoresis according to any one of claims 1 to 12, characterized in that the identification marker of each applicator is constituted by a composition common to all the applicators, said composition being deposited on the electrophoresis support at a specific track, different for each applicator, simultaneously with the samples, or in that the identification marker is an unloaded and separate well, on each applicator. Method of analysis by electrophoresis according to any one of Claims 1 to 13, comprising the following steps:
- le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant un marqueur d'identification, identifiable par l'examen de son image électrophorétique;- depositing biological samples, using several sample applicators, on one or more electrophoresis supports, each applicator comprising an identification marker, identifiable by examining its electrophoretic image;
- l'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ;- the application of an electric field to allow the migration of the components of the samples;
- le séchage du ou des supports d'électrophorèse,- drying of the electrophoresis support (s),
- la coloration du ou des supports d'électrophorèse,- the coloring of the electrophoresis support (s),
- la décoloration du ou des supports d'électrophorèse,- discoloration of the electrophoresis support (s),
- le séchage du ou des supports d'électrophorèse,- drying of the electrophoresis support (s),
- l'identification des constituants séparés sur le ou les supports d'électrophorèse et des marqueurs d'applicateurs d'échantillons. Procédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, dans lequel le marqueur d'identification d'applicateur d'échantillon est une espèce chimique non colorée directement détectable après coloration du support d'électrophorèse après l'étape de séparation des constituants des échantillons. Procédé d'analyse par électrophorèse selon les revendications 1 à 15, dans lequel l'étape de détection des constituants des échantillons comprend une étape d'analyse quantitative des différents constituants séparés. Procédé d'analyse par électrophorèse selon les revendications 1 à 16, dans lequel le support d'électrophorèse est un gel d'agarose, un gel de polyacrylamide ou une membrane d'acétate de cellulose. Procédé d'identification positive d'échantillon, pour permettre d'associer l'image électrophorétique d'un échantillon analysé, à un échantillon prélevé, comprenant le marquage de l'applicateur d'échantillons au moyen d'un marqueur d'identification, identifiable par son image électrophorétique et l'utilisation de l'applicateur d'échantillons ainsi marqué pour le dépôt des échantillons à analyser sur un support d'électrophorèse. Procédé d'identification positive d'échantillon, pour permettre d'associer l'image électrophorétique d'un échantillon analysé, à un échantillon prélevé comprenant une étape de marquage de l'applicateur d'échantillons au moyen d'un marqueur d'identification, identifiable par son image électrophorétique, ledit marqueur d'identification étant tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 17. Marqueur pour l'identification d'un applicateur d'échantillons, caractérisé en ce qu'il comprend une composition d'espèces chimiques repérables par leur image électrophorétique sur ledit support d'électrophorèse. Marqueur selon la revendication 20, caractérisé en ce que tout ou partie desespèces chimiques est capable de migrer sur un support d'électrophorèse, sous l'action d'un champ électrique. Marqueur selon l'unes quelconque des revendications 20 ou 21 caractérisé en ce que les espèces chimiques sont des espèces colorées ou susceptibles d'être colorées ou un mélange d'espèces chimiques colorées ou susceptibles d'être colorées. Marqueur selon la revendication 20 ou 21 , caractérisé en ce que les espèces chimiques sont des protéines colorées ou susceptibles d'être colorées ou des anticorpsmonoclonaux. Kit pour la réalisation de l'analyse des constituants d'échantillons, par électrophorèse, comprenant :- the identification of the separate constituents on the electrophoresis support (s) and of the markers for sample applicators. Analysis method according to any one of claims 1 to 14, in which the sample applicator identification marker is an uncolored chemical species directly detectable after coloring of the electrophoresis support after the step of separating the constituents of samples. Method of analysis by electrophoresis according to Claims 1 to 15, in which the step of detecting the constituents of the samples comprises a step of quantitative analysis of the different separated constituents. An electrophoresis analysis method according to claims 1 to 16, wherein the electrophoresis support is an agarose gel, a polyacrylamide gel or a cellulose acetate membrane. Method for positive sample identification, to allow the electrophoretic image of an analyzed sample to be associated with a sample taken, comprising marking the sample applicator with an identifiable identification marker by its electrophoretic image and the use of the sample applicator thus marked for depositing the samples to be analyzed on an electrophoresis support. Method for positive sample identification, to allow the electrophoretic image of an analyzed sample to be associated with a sample taken, comprising a step of marking the sample applicator by means of an identification marker, identifiable by its electrophoretic image, said identification marker being as defined according to any one of claims 1 to 17. Marker for the identification of a sample applicator, characterized in that it comprises a composition of chemical species identifiable by their electrophoretic image on said electrophoresis support. Marker according to claim 20, characterized in that all or part of the chemical species is capable of migrating on an electrophoresis support, under the action of an electric field. Marker according to either of Claims 20 and 21, characterized in that the chemical species are colored species or capable of being colored or a mixture of colored chemical species or capable of being colored. Marker according to claim 20 or 21, characterized in that the chemical species are colored or capable of being colored proteins or monoclonal antibodies. Kit for carrying out the analysis of the constituents of samples, by electrophoresis, comprising:
• Au moins un support d'électrophorèse comprenant un matériau poreux approprié pour recevoir les échantillons à analyser et le ou les marqueurs d'identification d'applicateurs d'échantillons et permettre leur migration électrophorétique,At least one electrophoresis support comprising a porous material suitable for receiving the samples to be analyzed and the identification marker or markers for sample applicators and allowing their electrophoretic migration,
• une ou plusieurs compositions constituée(s) par des espèces chimiques utilisables lors d'une séparation électrophorétique pour l'identification d'applicateur(s) d'échantillons, cette (ces) composition(s) étant identifiable(s) par son(leur) image électrophorétique. Kit selon la revendication 24, dans lequel le marqueur d'identification d'applicateur d'échantillons est constitué par une composition d'espèces chimiques colorées ou susceptible d'être colorée, ou par des anticorps monoclonaux. Kit selon la revendication 24 ou la revendication 25, dans lequel le marqueur d'identification d'applicateur d'échantillons est constitué par une composition d'espèces chimiques dont certaines au moins sont capables de migrer dans un champ électrique. Kit selon l'une quelconque des revendications 24 à 26, caractérisé en ce que le marqueur d'identification de chaque applicateur est choisi parmi des espèces chimiques colorées ou susceptible d'être colorées ou des mélanges de ces espèces possédant des mobilités électrophorétiques différentes. Kit selon la revendication 27, caractérisé en ce que les espèces chimiques colorées sont des protéines colorées ou susceptibles d'être colorées ou des mélanges de protéines colorées ou susceptibles d'être colorées possédant des mobilités électrophorétiques différentes. Kit selon l'une quelconque des revendications 24 à 28, caractérisé en ce que les espèces chimiques sont utilisées à des concentrations déterminées, différentes pour chaque applicateur d'échantillons. Kit selon l'une quelconque des revendications 24 à 29, dans lequel les espèces chimiques sont des anticorps monoclonaux. Kit selon l'une quelconque des revendications 24 à 29, comprenant en outre un ou plusieurs réactifs pour la révélation des constituants séparés des échantillons. Kit selon l'une quelconque des revendications 24 à 31 , comprenant en outre un ou plusieurs réactifs pour la révélation des marqueurs d'identification des applicateurs. • one or more compositions made up of chemical species usable during an electrophoretic separation for the identification of sample applicator (s), this (these) composition (s) being identifiable (s) by its ( their) electrophoretic image. Kit according to claim 24, in which the sample applicator identification marker is constituted by a composition of colored or capable of being colored chemical species, or by monoclonal antibodies. Kit according to claim 24 or claim 25, in which the sample applicator identification marker consists of a composition of chemical species, at least some of which are capable of migrating in an electric field. Kit according to any one of claims 24 to 26, characterized in that the identification marker of each applicator is chosen from colored chemical species or capable of being colored or mixtures of these species having different electrophoretic mobilities. Kit according to claim 27, characterized in that the colored chemical species are colored proteins or capable of being colored or mixtures of proteins colored or capable of being colored having different electrophoretic mobilities. Kit according to any one of claims 24 to 28, characterized in that the chemical species are used at determined concentrations, different for each sample applicator. A kit according to any of claims 24 to 29, wherein the chemical species are monoclonal antibodies. A kit according to any of claims 24 to 29, further comprising one or more reagents for revealing the separate components of the samples. Kit according to any one of claims 24 to 31, further comprising one or more reagents for revealing applicator identification markers.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4507233A (en) * 1981-04-22 1985-03-26 Oriental Yeast Co., Ltd. Colored molecular weight marker
US5275710A (en) * 1990-05-14 1994-01-04 Labintelligence, Inc. Gel electrophoresis system including optical stage, sample applicator and sample retriever
FR2671290B1 (en) * 1991-01-04 1993-04-16 Sebia Sa DEVICE FOR APPLYING BIOLOGICAL SAMPLES TO AN ELECTROPHORESIS PLATE.
FR2684998B1 (en) * 1991-12-11 1994-10-28 Sebia Sa METHOD FOR SEPARATING LP (A) BY ELECTROPHORESIS, GELS FOR IMPLEMENTING THIS METHOD, AND APPLICATION TO THE IN VITRO DETERMINATION OF THE ATHEROGENIC RISK LINKED TO THE PRESENCE OF LP (A).
FR2715229B1 (en) * 1994-01-14 1996-05-10 Sebia Sa Device for immunofixation on a single (plated) support, of different samples.
WO1997042496A1 (en) * 1996-05-06 1997-11-13 Helena Laboratories Corporation A system for the application of samples on a substrate__________
FR2760844B1 (en) * 1997-03-17 1999-05-21 Genethon Ii DEVICE AND METHOD FOR AUTOMATIC ANALYSIS OF SAMPLES ON GELS
US6110683A (en) * 1999-01-08 2000-08-29 Commonwealth Biotechnologies, Inc. Automated DNA Sequencer loading dye which contains a lane tracking aid
US6168701B1 (en) * 1999-04-30 2001-01-02 The Perkins-Elmer Corporation Methods and compositions for improving the loading of analytical instruments

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
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