JP2003535333A - Positive identification of samples analyzed by electrophoresis on porous supports - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、電気泳動による生物学的サンプルの成分の分析方法において、次の工程：−生物学的サンプルを、各アプリケータがその電気泳動画像を試験することにより同定可能な同定マーカーを具備する複数のサンプルアプリケータを用いて、１又は複数の電気泳動支持体上に沈着させ；−電場をかけてサンプルの成分を泳動させ；−電気泳動によって分離されたサンプルの成分及び各アプリケータの同定マーカーを検出することを含んでなる方法を提供する。また本発明は、電気泳動画像により同定可能な任意の化学種又は化学種の混合物からなる、この方法で使用するためのマーカーにも関する。   (57) [Summary] The present invention provides a method for analyzing the components of a biological sample by electrophoresis, comprising the following steps:-Identification of the biological sample by means of which each applicator can identify its electrophoretic image. Depositing on one or more electrophoretic supports using multiple sample applicators;-applying an electric field to migrate the components of the sample;-identifying the components of the sample separated by electrophoresis and each applicator. A method comprising detecting a marker is provided. The invention also relates to a marker for use in this method, consisting of any species or mixture of species that can be identified by electrophoretic images.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】 本発明は、電気泳動により分析されるサンプルをポジティブ同定のための手段
の特定に関する。より詳細には、本発明は、電気泳動支持体上のサンプルアプリ
ケータを同定するための手段に関し、それは、一又は複数の一連の分析サンプル
の電気泳動プロフィールを使用したサンプルアプリケータと関連づけることを可
能にし、よって分析結果を一次サンプルで確実に同定することを可能にする。The present invention relates to the identification of means for positive identification of samples analyzed by electrophoresis. More particularly, the present invention relates to means for identifying a sample applicator on an electrophoretic support, which is associated with a sample applicator using the electrophoretic profile of one or more series of analytical samples. It makes it possible to reliably identify the analysis result in the primary sample.

【０００２】 電気泳動により分離された後の分析サンプルの中には、特に臨床目的の場合は
、中でも疾患の検出のための日常的分析の間においては、安全性の理由のために
、得られた結果は、分析を通して各サンプルへ確実に帰結される必要がある。特
に、電気泳動的な分離に従って得られた結果は、理論上それに対応するサンプル
（一次サンプル）に疑いなく帰属されなければならない。[0002] Some of the analytical samples after electrophoretic separation have been obtained for safety reasons, especially during clinical analysis, especially during routine analysis for the detection of disease. The results obtained need to be reliably attributed to each sample throughout the analysis. In particular, the results obtained according to the electrophoretic separation must in theory be assigned to the corresponding sample (primary sample).

【０００３】 結果の正しい一次サンプルへの帰属に関する不確実性は、例えば、手動で行わ
れ、正しい実行が実質的に操作者によって払われる注意に依存する操作から生じ
得る。現在では、このタイプの分析を実施する際に誤差が検出されないかもしれ
ない。Uncertainty regarding the attribution of results to the correct primary sample may result, for example, from manipulations that are done manually and whose correct execution substantially depends on the attention paid by the operator. Currently, no error may be detected when performing this type of analysis.

【０００４】 よって本発明は、サンプル又は一連のサンプル群を、電気泳動分離に従う電気
泳動支持体上で同定し同定することを可能にする手段を特定することを目的とす
る。これらの手段は、支持体上で分域電気泳動を実施するために適した任意の支
持体を用いて、任意の電気泳動分離の中で使用できる。The present invention is therefore aimed at identifying a sample or a series of sample groups and identifying means allowing to identify on an electrophoretic support subject to electrophoretic separation. These means can be used in any electrophoretic separation, with any support suitable for performing domain electrophoresis on a support.

【０００５】 また本発明は、分析されるサンプルを電気泳動支持体に沈着する際に使用する
ためのサンプルアプリケータにも関し、本発明に従う同定手段（「同定マーカー
」と命名する）を具備している。 また本発明は、前記の同定手段を含んでなるキットも提供する。The invention also relates to a sample applicator for use in depositing a sample to be analyzed on an electrophoretic support, comprising an identification means according to the invention (named “identification marker”). ing. The present invention also provides a kit comprising the above-mentioned identification means.

【０００６】 本発明の内容において定義される手段は、サンプルの除去から結果の伝達まで
の、全ての分析段階における分析サンプルの同定のための全体的同定システムに
組み込むことができる。The means defined in the context of the present invention can be incorporated into a global identification system for the identification of analytical samples at all stages of analysis, from sample removal to result transfer.

【０００７】 下記の特徴の定義に何ら制限を加えるものではないが、通常はアガロースゲル
上で実施される分域電気泳動技術が、血清、血液、尿、脳脊髄液、涙、．．．等
の生物学的サンプルに含有されるタンパク質成分を分離できることを記憶してお
くべきである。バッファー溶液を含む電気泳動媒体において、タンパク質を含む
サンプルは、サンプルアプリケータを用いてゲル表面に負荷され、そこでそれら
はイオン化され、電場の影響下で、各々の電荷によって異なる速度で泳動する。
サンプルのタンパク質成分を分離する泳動段階の後、それらのタンパク質は、例
えば特異的染色を用いて染色することにより顕現化され、そして例えば濃度測定
の読みにより定量化される。While not limiting the definition of the features below, domain-electrophoresis techniques typically performed on agarose gels include serum, blood, urine, cerebrospinal fluid, tears ,. ． ． It should be remembered that the protein components contained in biological samples such as can be separated. In an electrophoretic medium containing a buffer solution, protein-containing samples are loaded onto the gel surface using a sample applicator, where they are ionized and, under the influence of an electric field, migrate at different rates with each charge.
After the electrophoretic step of separating the protein components of the sample, the proteins are revealed, eg by staining with a specific stain, and quantified, eg by densitometric reading.

【０００８】 近代的分析技術の大多数と同様に、第１にその実施を促進するために、そして
第２に信頼性を付与するために、電気泳動は実質的に自動化されている。サンプ
ルをアプリケータに負荷し、アプリケータをゲル上に沈着させ、泳動させてゲル
を乾燥し、ゲルを染色して脱色し、そしてゲルを読みとる工程は、現在では自動
的に実行できる。これに対して、サンプルアプリケータをサンプル負荷装置から
電気泳動装置に移動させる工程は手動工程を残しており、よって操作上の誤差を
受ける。従って、例えば、２つの電気泳動装置が同時に使用される場合、第１の
装置用のアプリケータが第２のものに適用され、或いはその逆が起こりうる。さ
らに、より頻繁に起こる例は、幾つかのアプリケータが同一のゲルに沈着される
場合である。それらは意図する位置に沈着されない（２又はそれ以上の列が逆転
する）かもしれない。その場合、染色されたゲルの最終的な画像を試験すること
により何れのアプリケータが与えられた沈着物の列に対応するのかを決定するの
が不可能になる。As with the majority of modern analytical techniques, electrophoresis is substantially automated, firstly to facilitate its implementation and secondly to provide reliability. The steps of loading the sample onto the applicator, depositing the applicator on the gel, running and drying the gel, staining and destaining the gel, and reading the gel can now be carried out automatically. On the other hand, the process of moving the sample applicator from the sample loading device to the electrophoresis device remains a manual process, and is subject to operational errors. Thus, for example, if two electrophoretic devices are used simultaneously, the applicator for the first device may be applied to the second, or vice versa. Moreover, a more frequent example is when several applicators are deposited on the same gel. They may not be deposited in the intended position (two or more rows reversed). In that case, it becomes impossible to determine which applicator corresponds to a given row of deposits by examining the final image of the stained gel.

【０００９】 本発明は電気泳動支持体上にサンプルの列の形状で沈着された一連のサンプル
を、その列の電気泳動画像を単に試験することにより、与えられたサンプルアプ
リケータに帰属させるための手段を提供する。The present invention provides for assigning a series of samples deposited in the form of rows of samples on an electrophoretic support to a given sample applicator by simply examining the electrophoretic image of that row. Provide the means.

【００１０】 本発明は、負荷、泳動、染色及び乾燥の後に得られたアプリケータの同定手段
の電気泳動画像、同時に分析されたサンプルを試験することにより、アプリケー
タ、その結果として、当該アプリケータと関連づけられた一連の分析サンプルの
結果の誤差の無い同定を提供する。The present invention provides an applicator, and consequently the applicator, by examining an electrophoretic image of the applicator's identification means obtained after loading, migration, staining and drying, a sample simultaneously analyzed. It provides error-free identification of the results of a series of analytical samples associated with.

【００１１】 本発明を、分析システムの異なる要素、特にサンプルチューブ、アプリケータ
及びゲルを特定するための従来の手段（例えばバーコード又はマトリクスコード
のような二次元コード）と関連させて使用することは、サンプルを同定し、サン
プルを含む一次チューブから最終的な結果へ帰結させることを可能にする。Using the present invention in connection with conventional means for identifying different elements of an analytical system, in particular sample tubes, applicators and gels (eg two-dimensional codes such as bar codes or matrix codes). Allows to identify the sample and result in the final result from the primary tube containing the sample.

【００１２】 本発明の文脈において使用されるサンプルアプリケータは、特にサンプルを収
容されたチューブから取り出し、本発明のアプリケータ同定マーカーも電気泳動
分域に負荷することにより、分析するサンプルを負荷することができる任意のタ
イプの装置から構成することができる。サンプルアプリケータは、手動又は、好
ましくは自動でサンプルを負荷できる。The sample applicator used in the context of the present invention loads the sample to be analyzed, in particular by removing the sample from the contained tube and also loading the applicator identification marker of the present invention in the electrophoretic domain. It can consist of any type of device that is capable. The sample applicator can load the sample manually or preferably automatically.

【００１３】 好ましいアプリケータは従来技術に記載され、例えば欧州特許出願EP-A-04939
96及び米国特許出願US-A-5464515及びUS-A-5405516に記載された、例えば「膜」
（又は鋸歯状の櫛形部材）、「溝状」の櫛形部材及び「刃状」の櫛形部材であり
、一般的に、分析すべきサンプルを負荷し電気泳動支持体上に沈着させのに使用
できる任意の装置である。Preferred applicators are described in the prior art, eg European patent application EP-A-04939.
96 and US patent applications US-A-5464515 and US-A-5405516, for example "membranes".
(Or sawtooth combs), "groove" combs and "blade" combs, which can generally be used to load and deposit the sample to be analyzed on the electrophoretic support. Any device.

【００１４】 本発明の好ましい実施形態では、本発明のアプリケータ同定マーカーは、電気
泳動支持体上での負荷、泳動、染色及び乾燥工程の後に、電気泳動支持体上で顕
現させることができる任意の化学種から構成することができる。In a preferred embodiment of the present invention, the applicator identification marker of the present invention is any that can be revealed on the electrophoretic support after the loading, migration, staining and drying steps on the electrophoretic support. Can be composed of the following chemical species:

【００１５】 本発明のマーカーは、電気泳動の後に電気泳動支持体を試験することにより、
又は電気泳動によって分離されたサンプルの成分を検出する方法を用いて直接に
検出可能でなければならない。The marker of the present invention can be tested by testing the electrophoretic support after electrophoresis,
Or it must be directly detectable using methods that detect the components of the sample separated by electrophoresis.

【００１６】 本発明で使用される「化学種」という表現は、直接的又は間接的に検出できる
化学的又は生物学的な任意の物質を意味し、それらは化学的又は生物学的に機能
的である又は機能的でない化合物、分子、複合体、イオン、結合（例えば、抗体
−抗原型）を含む。これらの化学種の特定の例は、着色した又は着色可能な化学
種、特にタンパク質、又は抗体などの機能性の種である。The expression “chemical species” as used in the present invention means any chemical or biological substance which can be detected directly or indirectly, and which is chemically or biologically functional. And non-functional compounds, molecules, complexes, ions, bonds (eg antibody-antigen type). Specific examples of these chemical species are colored or colorable chemical species, especially proteins, or functional species such as antibodies.

【００１７】 好ましい実施態様では、使用される化学種は、電場において泳動できる。[0017]   In a preferred embodiment, the chemical species used are capable of migrating in an electric field.

【００１８】 マーカーは、それらの種が同じ化学的又は生物学的群に属するか否かに関わら
ず前記の種の混合物から構成でき、それらは、同じ性質の機能的特性を有しても
有しなくてもよい。例として、マーカーは、電場において泳動できる化学種と、
泳動しないがそれらの負荷分域で沈降する種との混合物からなってもよい。Markers can be composed of a mixture of the aforementioned species, whether or not they belong to the same chemical or biological group, which may also have functional properties of the same nature. You don't have to. As an example, a marker is a chemical species that can migrate in an electric field,
It may consist of a mixture with species that do not migrate but settle in their loading domain.

【００１９】 当然のことながら、これらの組成物から得られる電気泳動画像と、電気泳動に
より分離された分析サンプルとを混同してはならない。よって、例として、各サ
ンプルアプリケータの同定手段は着色された化学種又はそれらの種の混合物であ
り、複数の化学種が存在して、それらの各々又はある種のものが、それらの他の
種又はある種のものとは異なる同定手段を提案する。Of course, the electrophoretic images obtained from these compositions should not be confused with the analytical samples separated by electrophoresis. Thus, by way of example, the identification means of each sample applicator is a colored species or a mixture of those species, and there are multiple species, each of which or some of which is the other of them. Propose an identification means that is different from the species or some.

【００２０】 同一の電気泳動支持体又は複数の電気泳動支持体上で有効である望ましい同定
のために、一連の同定可能なサンプルを担持して使用される各アプリケータは、
それに特異的な予め設定されたマーカーと関連づけられ、それが他のアプリケー
タから区別させるが、変形例では、異なるアプリケータに共通であるが、しかし
アプリケータの異なる位置に配置され、その結果として反応後の電気泳動支持体
においてマークされた電気泳動支持体のレーンのくぼみの異なる位置に配置され
るマーカーと関連づけられる。共通のマーカーは、上記の化学種の任意のもの、
又は生理的水を含むそれらの種の混合物から構成できる。For the desired identification to be effective on the same electrophoretic support or multiple electrophoretic supports, each applicator used to carry a series of identifiable samples comprises:
Associated with it is a preset marker specific to it that distinguishes it from other applicators, but in a variant it is common to different applicators, but located at different positions on the applicator, and as a result It is associated with markers that are placed at different positions in the depressions of the marked electrophoretic support lanes in the electrophoretic support after the reaction. A common marker is any of the above species,
Or it can consist of a mixture of those species with physiological water.

【００２１】 本発明の更なる変形例では、一連のサンプルのマーキングは、サンプルアプリ
ケータの負荷分域（ウェル）が無い結果であり、この分域は通常サンプルを負荷
することが意図され、各アプリケータと異なる位置であり、そのために電気泳動
支持体上に（分離及び顕現バンドの不存在により）異なる電気泳動画像を生ずる
。言い換えれば、マーカーの特異性は、それを構成する化学種の性質及び／又は
濃度、あるいはアプリケータの特定分域におけるこの組成物の位置、あるいは上
記のパラメータの組み合わせに依存し、各アプリケータについて異なる電気泳動
画像をもたらすマーカーの特異性は、例えば、電気泳動分析の後に電気泳動レー
ン上の各マーカーについて得られるバンドの色、位置又は強度に依存する。また
、マーカーは、同一又は異なる支持体上で他のマーカーが占めるレーンと比較し
た場合の、電気泳動支持体上でそれが占めるレーンによっても同定できる。In a further variant of the invention, the marking of the series of samples is the result of the absence of loading domains (wells) in the sample applicator, which domains are usually intended to load the sample, It is at a different location than the applicator, which results in different electrophoretic images on the electrophoretic support (due to the absence of separating and revealing bands). In other words, the specificity of the marker depends on the nature and / or concentration of the chemical species that make up it, or the position of this composition in a particular compartment of the applicator, or a combination of the above parameters, for each applicator. The specificity of the markers that give rise to different electrophoretic images depends, for example, on the color, position or intensity of the bands obtained for each marker on the electrophoretic lane after electrophoretic analysis. A marker can also be identified by the lane it occupies on the electrophoretic support, as compared to the lanes occupied by other markers on the same or different supports.

【００２２】 例として、以下の同定マーカーを使用することができる： −染料又は染料の混合物、又は他の着色種、例えば共有結合的に着色した、泳
動してもしなくてもよいタンパク質であり、アプリケータは特定の色、又は着色
バンドの混合物によって同定される。 −タンパク質又はタンパク質の結合、特定の電気泳動移動度を持つ単量体又は
重合体（又は、例えばゲルが従来のタンパク質染色：アミドブラック１０Ｂ、ア
シッドバイオレット、．．．等により染色される場合、泳動してもしなくてもよ
く、着色可能な任意の他の化学種）の形態、各アプリケータはプロフィールの与
えられた位置に位置するタンパク質バンド（又は化学種バンド）により同定され
る、位置は同定剤に応じて異なる；溶解性の限度で使用される抗体−抗原結合及
びウシγ-グロブリンなどの重合したタンパク質の挙げられる。By way of example, the following identification markers can be used: dyes or mixtures of dyes, or other colored species, for example covalently colored proteins, which may or may not be migrated, Applicators are identified by a particular color or mixture of colored bands. -Proteins or protein binding, monomers or polymers with specific electrophoretic mobilities (or, eg, if the gel is stained with conventional protein stains: Amido Black 10B, Acid Violet, ..., etc. A form of any other chemical species that may or may not be colourable, each applicator is identified by a protein band (or species band) located at a given location in the profile, the location being identified It depends on the agent; antibody-antigen binding used at the limit of solubility and polymerized proteins such as bovine γ-globulin.

【００２３】 −異なる電気泳動移動度を持つタンパク質（又は、例えば従来のタンパク質染
色：アミドブラック１０Ｂ、アシッドバイオレット、．．．等によるゲル染色の
間、泳動又は着色可能な任意の他の化学種）の混合物、各アプリケータは、識別
剤に含まれるタンパク質（又は化学種）の数に対応するバンドの数により同定さ
れる。 −タンパク質（又は、例えば従来のタンパク質染色：アミドブラック１０Ｂ、
アシッドバイオレット、．．．等によるゲル染色の間、泳動又は着色可能な任意
の他の化学種）あるいは各マーカーで変化する濃度のタンパク質又は化学種の混
合物。各アプリケータはタンパク質（又は化学種）の濃度に対応するフラクショ
ンの強度により同定される。Proteins with different electrophoretic mobilities (or any other chemical species that can be electrophoresed or colored during gel staining, eg by conventional protein staining: Amido Black 10B, Acid Violet, ...). Mixture, each applicator is identified by the number of bands corresponding to the number of proteins (or chemical species) contained in the discriminating agent. -Protein (or eg conventional protein stain: Amido Black 10B,
Acid Violet ,. ． ． Any other species capable of running or staining during gel staining with etc.) or a mixture of proteins or species with varying concentrations at each marker. Each applicator is identified by the intensity of the fraction that corresponds to the concentration of protein (or chemical species).

【００２４】 −上記のマーカーの組み合わせ、但し生成されるマーカーは、その電気泳動画
像により同定できる。 −あるいは、上記のものから選択されるのと同じマーカーが、使用されるサン
プルアプリケータの全てに使用できるが、このマーカーは各アプリケー上で各ア
プリケータについて同定できる予め設定されたウェルに配置され、電気泳動によ
るサンプルの分離の後に同じマーカーが異なる分域にマークされるようにする。
変形例では、マーキングは、空のままとされたアプリケータのウェルに対応する
サンプルの各列について特定のレーンの電気泳動プロフィールが無いことによる
。A combination of the above markers, but the markers produced can be identified by their electrophoretic images. -Alternatively, the same marker selected from the above can be used for all of the sample applicators used, but this marker is placed on each application in a preset well that can be identified for each applicator. Make sure that the same marker is marked in different domains after separation of the sample by electrophoresis.
In a variant, the marking is due to the absence of the electrophoretic profile of the particular lane for each row of sample corresponding to the wells of the applicator that were left empty.

【００２５】 また本発明は、電気泳動による分析のための方法にも関し、１又は複数の電気
泳動支持体上の一連のサンプルを沈着させるために複数のアプリケータが使用さ
れ、これらのアプリケータは最初に分析すべきサンプルを負荷され、各アプリケ
ータに特異的なマーカー又は各アプリケータに特異的な異なる分域に負荷される
共通のマーカーを具備する。The present invention also relates to a method for electrophoretic analysis, wherein a plurality of applicators are used to deposit a series of samples on one or more electrophoretic supports, the applicators being Comprises a common marker that is first loaded with the sample to be analyzed and that is loaded with different markers specific to each applicator or different domains specific to each applicator.

【００２６】 サンプル、特に患者から取り出した生物学的サンプルの成分の電気泳動による
分析方法は、以下の工程を含む： −生物学的サンプルを、複数のサンプルアプリケータを用いて１又は複数の電
気泳動支持体上に沈着させ、各アプリケータが電気泳動に続いて電気泳動支持体
を試験することにより同定可能な同定手段を具備し； −電場をかけてサンプルの成分を泳動させ； −電気泳動によって分離されたサンプルの成分及び各アプリケータの同定マー
カーを検出する。A method for the electrophoretic analysis of components of a sample, in particular a biological sample taken from a patient, comprises the steps of: -the biological sample being analyzed by means of a plurality of sample applicators with one or more electrical charges. An applicator is provided with identification means that can be identified by depositing on an electrophoretic support, each applicator being electrophoresed and then testing the electrophoretic support; -electrophoresis of the components of the sample; -electrophoresis The components of the sample separated by and the identification marker of each applicator are detected.

【００２７】 このように定義された電気泳動により分析されるサンプルの成分を分析する方
法は、分析システムの全ての要素の同定を完了するためにアプリケータの同定手
段がシステムに関連づけられたシステムに組み込まれ、電気泳動に従って得られ
た結果と比較することにより分析されるサンプルの同定方法に使用される。The method of analyzing the components of a sample to be analyzed by electrophoresis as thus defined comprises a system in which the applicator identification means are associated with the system in order to complete the identification of all elements of the analysis system. It is used in a method of identifying a sample which is incorporated and analyzed by comparison with the results obtained according to electrophoresis.

【００２８】 サンプルと同時に電気泳動支持体に負荷され、電気泳動を受ける各同定マーカ
ーは、特定の電気泳動画像を生じ、それは分析の異なる工程：泳動、染色及び乾
燥の後に電気泳動支持体上で同定可能、特に可視化される。この同定は、例えば
密度計による電気泳動支持体の分析の間に、操作者による手動又は自動的に実施
される。Each identifying marker that is loaded onto the electrophoretic support at the same time as the sample and undergoes electrophoresis produces a specific electrophoretic image, which is different on the electrophoretic support after different steps of analysis: migration, staining and drying. Identifiable, especially visible. This identification is performed manually or automatically by the operator, for example during analysis of the electrophoretic support by a densitometer.

【００２９】 マーカーの同定は、バーコード、二次元コード（又は任意の他の同定システム
）などの分析システムの異なる要素を同定するためのシステムに記録することが
できる。サンプルチューブ、アプリケータのマーカーのチューブ、アプリケータ
及び分析支持体を含むシステムの異なる要素は、次いでコードにより同定される
。The identification of the markers can be recorded in a system for identifying different elements of the analytical system, such as barcodes, two-dimensional codes (or any other identification system). The different elements of the system including the sample tube, the applicator marker tube, the applicator and the analytical support are then identified by the code.

【００３０】 特にロボットを使用したアプリケータの負荷工程の間に、サンプルの異なる一
次チューブ、マーカーチューブ又はアプリケータのためのコードが読みとられる
。次いで、マーカー及びサンプルが対応するアプリケータの同定された位置に、
好ましくはロボットを用いて負荷される。この工程の後、各アプリケータ及びそ
れに担持ざれる対応サンプルは、完全に同定される。負荷されたアプリケータ及
び電気泳動支持体は、それらの対応するコードを読みとった後に電気泳動装置に
導入される。この点において、各伝記泳動支持体は、１又は複数のアプリケータ
と関連づけられる。泳動、染色及び乾燥工程の後、支持体は、そのコードを読み
とった後に密度計に導入される。密度計、又は操作者は、各列のマーカーを識別
し、システムがこのレーンのサンプルを同定し、よって結果を誤差無く帰属する
のを可能にする。このシステムは、一次チューブから最終結果へのサンプルの全
体的帰属を確実にすることができる。Codes are read for different primary tubes, marker tubes or applicators of the sample, especially during the loading process of the applicator using a robot. Then, at the identified position of the applicator to which the marker and sample correspond,
It is preferably loaded using a robot. After this step, each applicator and the corresponding sample carried on it are completely identified. The loaded applicator and electrophoretic support are introduced into the electrophoretic device after reading their corresponding codes. In this regard, each biophoretic support is associated with one or more applicators. After the migration, staining and drying steps, the support is introduced into the densitometer after reading its code. The densitometer, or operator, identifies the markers in each row and allows the system to identify the samples in this lane and thus assign the results without error. This system can ensure the overall attribution of the sample from the primary tube to the final result.

【００３１】 本発明の第１の好ましい実施形態では、分離された成分及び／又はアプリケー
タ同定マーカーを検出するために、電気泳動分析法は、電気泳動に続いて分離さ
れた成分を顕現させる工程を含む。In a first preferred embodiment of the invention, the electrophoretic method comprises the step of revealing the separated components following electrophoresis in order to detect the separated components and / or the applicator identification marker. including.

【００３２】 本発明の特別な実施形態では、同一の電気泳動支持体上に複数の異なるサンプ
ルの列を沈着するために異なるサンプルアプリケータが使用される。In a particular embodiment of the invention, different sample applicators are used to deposit a plurality of different sample rows on the same electrophoretic support.

【００３３】 上記の本発明のさらなる実施形態では、異なる電気泳動支持体上に複数の異な
るサンプルの列を沈着するために異なるサンプルアプリケータが使用される。こ
の場合、複数の電気泳動工程が異なる電気泳動装置で平行して実施され得る。In a further embodiment of the invention described above, different sample applicators are used to deposit a plurality of different sample rows on different electrophoretic supports. In this case, multiple electrophoretic steps may be performed in parallel on different electrophoretic devices.

【００３４】 上に提案した特別な実施形態の組み合わせを含む前記の特徴を用いて定義され
る分析方法において、各アプリケータの同定マーカーは、電気泳動支持体の予め
設定されたレーンににサンプルと同時に沈着される、各アプリケータのための特
定の組成物により構成できる。In an analytical method defined using the above features, which comprises a combination of the special embodiments proposed above, the identification marker of each applicator is sampled in preset lanes of the electrophoretic support. It can consist of a specific composition for each applicator that is deposited at the same time.

【００３５】 あるいは、各アプリケータの同定マーカーは、全てのアプリケータに共通の組
成物から構成され、前記組成物が電気泳動支持体上の各アプリケータによって異
なる予め設定されたレーン、従って電気泳動支持体上にサンプルと同時に沈着さ
れる。Alternatively, the identification marker of each applicator is composed of a composition common to all applicators, said composition being pre-set by a different lane for each applicator on the electrophoretic support, and thus electrophoresis. The sample is deposited on the support at the same time as the sample.

【００３６】 本発明の方法の実施において、サンプルアプリケータ同定マーカーは、上記の
任意の組成物から構成され得る。In practicing the method of the present invention, the sample applicator identification marker can be composed of any composition described above.

【００３７】 上記の異なるマーカーは、以下の工程を含む方法において使用できる： −生物学的サンプルを、複数のサンプルアプリケータを用いて、１又は複数の
電気泳動支持体上に沈着させ、各アプリケータが電気泳動の後に電気泳動支持体
を試験することにより同定可能な同定手段（同定マーカー）を含み； −電場をかけてサンプルの成分を泳動させ； −電気泳動支持体を乾燥させ； −電気泳動支持体を染色し； −電気泳動支持体を脱色し； −電気泳動支持体を乾燥させる。The different markers mentioned above can be used in a method comprising the steps of: -depositing a biological sample on one or more electrophoretic supports using a plurality of sample applicators, each application. The device comprises an identification means (identification marker) identifiable by testing the electrophoretic support after electrophoresis; -electrophoresis of the components of the sample; -drying of the electrophoretic support; -electricity Stain the electrophoretic support; -decolor the electrophoretic support; -dry the electrophoretic support.

【００３８】 この方法の文脈では、同定マーカーは電気泳動支持体染色工程の前に識別され
、あるいは着色マーカーでない場合は、電気泳動支持体を染色することを含むサ
ンプルの成分の検出工程の間に染色することによる。In the context of this method, the identifying marker is identified prior to the electrophoretic support staining step, or if not a colored marker, during the detection step of the components of the sample comprising staining the electrophoretic support. By dyeing.

【００３９】 本発明のさらなる実施形態では、着色された化学種は抗体、好ましくは識別可
能なバンドが得られるモノクローナル抗体であり、モノクローナル抗体の混合物
を使用する文脈では、各抗体の移動度は、混合物中の他の抗体で得られるものと
は区別されるバンドを生ずるようにする。これらの抗体は、それ自体周知であり
、電気泳動分離を含む分析の文脈に適用可能な任意の方法により検出できる。In a further embodiment of the invention, the colored species is an antibody, preferably a monoclonal antibody which gives distinct bands, and in the context of using a mixture of monoclonal antibodies the mobility of each antibody is Try to give a band that is distinct from that obtained with the other antibodies in the mixture. These antibodies can be detected by any method known per se and applicable to the context of analysis, including electrophoretic separation.

【００４０】 同様に、定量的分析による異なる分離された成分の検出工程を、上記の方法に
付加することができる。Similarly, the step of detecting different separated components by quantitative analysis can be added to the above method.

【００４１】 電気泳動分離は、任意のタイプの電気泳動支持体、特にゲル、中でもアガロー
スゲル、ポリアクリルアミドゲル又は酢酸セルロース膜等の支持体上で実施され
る。一般的に、サンプルが支持体内を核酸及び泳動することができ、サンプルに
含まれる成分の分離が可能な任意の多孔質支持体が使用できる。The electrophoretic separation is carried out on any type of electrophoretic support, in particular a gel, in particular an agarose gel, a polyacrylamide gel or a cellulose acetate membrane. In general, any porous support that allows the sample to migrate to the nucleic acid and migrate within the support and to separate the components contained in the sample can be used.

【００４２】 本発明のさらなる実施形態では、方法は免疫固定法であり、分離されたサンプ
ルの成分は、それ自体周知である任意の方法において、抗体を用いて顕現化され
、前記方法は、サンプルアプリケータ同定マーカー負荷を分析サンプル沈着工程
へ導入する。In a further embodiment of the invention, the method is an immunofixation method and the components of the separated sample are revealed with an antibody in any method known per se, said method comprising: Introduce applicator identification marker load into analytical sample deposition process.

【００４３】 また本発明は、分析されたサンプルの電気泳動画像を取り出したサンプルと関
連づけることを可能にする、サンプルのポジティブ同定方法にも関し、電気泳動
画像によって同定可能な同定マーカーを用いたサンプルアプリケータのマーキン
グ工程及びマークされたサンプルアプリケータを分析されるサンプルの電気泳動
支持体への負荷に使用することを含む。The present invention also relates to a method for positive identification of a sample, which allows an electrophoretic image of the analyzed sample to be associated with the sample taken, the sample using an identification marker identifiable by the electrophoretic image. Including the applicator marking step and using the marked sample applicator to load the sample to be analyzed onto the electrophoretic support.

【００４４】 この方法を実施するために、本発明の電気泳動分析方法で使用できる上記の全
てのマーカーが使用可能である。To carry out this method, all the markers mentioned above which can be used in the electrophoretic analysis method of the present invention can be used.

【００４５】 また本発明は、以下を含む電気泳動によりサンプルの成分を分析するためのキ
ットに関する： −分析されるサンプル及びサンプルアプリケータ同定マーカーを受容し、それ
らを電気泳動的に移動させるのに適した多孔性材料を含んでなる電気泳動支持体
； −サンプルアプリケータを同定する電気泳動分析の間に使用するための化学種
から構成される１又は複数の組成物であって、その電気泳動画像により同定可能
な組成物。The invention also relates to a kit for analyzing the components of a sample by electrophoresis, which comprises: -to receive the sample to be analyzed and the sample applicator identification marker and to electrophoretically move them. An electrophoretic support comprising a suitable porous material; one or more compositions composed of a chemical species for use during electrophoretic analysis to identify a sample applicator, the electrophoresis of which comprises: Image-identifiable composition.

【００４６】 このキットで使用されるサンプルアプリケータ同定マーカーは、上記の定義を
、単独又は組み合わせとして満足する。The sample applicator identification markers used in this kit satisfy the above definitions alone or in combination.

【００４７】 さらに、キットは、電気泳動分析で通常使用される任意の試薬、特に以下の試
薬の幾つか又は全てを含むことができる： −分離されたサンプルの成分を顕現させるための１又は複数の試薬； −アプリケータの同定マーカーを顕現させるための１又は複数の試薬。In addition, the kit may comprise any reagent commonly used in electrophoretic analysis, in particular some or all of the following reagents: -one or more for revealing the components of the separated sample. Reagents; -one or more reagents for revealing an applicator identification marker.

【００４８】 本発明のさらに特別な特性及び利点は、以下の実施例及び添付の図面から明ら
かになるであろう。Further particular features and advantages of the invention will be apparent from the following examples and the accompanying figures.

【００４９】 （実施例） 実施例１ マーカーは次の溶液によって構成された： ・第１マーカー：スーダンレッド７Ｂのジメチルホルムアミド溶液、５ｍｇ／ｍ
ｌ； ・第２マーカー：スーダンブラックのジメチルホルムアミド溶液、５ｍｇ／ｍｌ
。Example 1 A marker was composed of the following solutions: First marker: Sudan Red 7B in dimethylformamide, 5 mg / m
l; Second marker: Sudan black dimethylformamide solution, 5 mg / ml
.

【００５０】 １０μｌの各マーカーを、特許文献である欧州特許出願公開第０４９３９９６
号、米国特許第５４６４５１５号及び米国特許第５４０５５１６号に記載された
タイプの二種の充填アプリケータの第一の歯部のウェル内に付着させた。分析さ
れる各血清の１０μｌを他のウェルの各々に付着させた。ついでこれらのアプリ
ケータを、血清タンパク質の分析を可能にするゲルの表面に前もって設定された
互いに離れた距離にて３０秒適用した。試料の分離は２０Ｗの出力にて約６分の
電気泳動により、温度を２０℃に調節することを可能にする機器を用いて得た。10 μl of each marker was added to the patent document EP 04939696.
No. 5,464,515 and U.S. Pat. No. 5,405,516. Two fill applicators of the type described in the first tooth well. 10 μl of each serum analyzed was attached to each of the other wells. These applicators were then applied for 30 seconds at a preset distance from each other on the surface of the gel allowing analysis of serum proteins. Separation of the samples was obtained by electrophoresis for about 6 minutes at a power of 20 W, using an instrument allowing the temperature to be adjusted to 20 ° C.

【００５１】 移動後に、ゲルを乾燥させアミドブラック１０Ｂで染色した。染色後、ゲルを
脱染し、再び乾燥させた。図１は対応するマーカーを各列の最初のレーンに示し
ている： ・下方列、レーン１：赤色バンド、第１マーカー； ・上部列、レーン１６：黒色バンド、第２マーカー。After transfer, the gel was dried and stained with Amido Black 10B. After staining, the gel was destained and dried again. Figure 1 shows the corresponding markers in the first lane of each row: -lower row, lane 1: red band, first marker; -upper row, lane 16: black band, second marker.

【００５２】 実施例２ マーカーは次の溶液によって構成された： ・第１マーカー：生理水中、３ｍｇ／ｍｌの抗ａｐｏＢクローン１モノクローナ
ル抗体； ・第２マーカー：生理水中、３ｍｇ／ｍｌのヘモグロビン； ・第３マーカー：生理水中、２．５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン。Example 2 A marker was constituted by the following solutions: • First marker: 3 mg / ml anti-apoB clone 1 monoclonal antibody in physiological water; • Second marker: 3 mg / ml hemoglobin in physiological water; Third marker: 2.5 mg / ml bovine serum albumin in physiological water.

【００５３】 １０μｌの各マーカーを、特許文献である欧州特許出願公開第０４９３９９６
号、米国特許第５４６４５１５号及び米国特許第５４０５５１６号に記載された
タイプの二種の充填アプリケータの第一の歯部のウェル内に付着させた。分析さ
れる各血清の１０μｌを他のウェルの各々に付着させた。ついでこれらのアプリ
ケータを、血清タンパク質の分析を可能にするゲルの表面に前もって設定された
互いに離れた距離にて３０秒適用した。試料の分離は２０Ｗの出力にて約６分の
電気泳動により、温度を２０℃に調節することを可能にする機器を用いて得た。10 μl of each marker was added to the patent document EP 04939696.
No. 5,464,515 and U.S. Pat. No. 5,405,516. Two fill applicators of the type described in the first tooth well. 10 μl of each serum analyzed was attached to each of the other wells. These applicators were then applied for 30 seconds at a preset distance from each other on the surface of the gel allowing analysis of serum proteins. Separation of the samples was obtained by electrophoresis for about 6 minutes at a power of 20 W, using an instrument allowing the temperature to be adjusted to 20 ° C.

【００５４】 移動後に、ゲルを乾燥させアミドブラック１０Ｂで染色した。染色後、ゲルを
脱染し、再び乾燥させた。図２は対応するマーカーを各列の最初のレーンに示し
ている： ・下方列、レーン１：１つのバンド、第１マーカー； ・中段列、レーン１９：１つのバンド、第２マーカー； ・上部列、レーン３７：１つのバンド、第３マーカー。 この場合、マーカーはその各バンド中の異なった位置によって区別される。After transfer, the gel was dried and stained with Amido Black 10B. After staining, the gel was destained and dried again. Figure 2 shows the corresponding markers in the first lane of each row: -Lower row, lane 1: 1 band, 1st marker; -Middle row, lane 19: 1 band, 2nd marker; Row, lane 37: 1 band, third marker. In this case, the markers are distinguished by different positions in their respective bands.

【００５５】 実施例３ マーカーは次の溶液によって構成された： ・第１マーカー：生理水中、２ｍｇ／ｍｌのヘモグロビン； ・第２マーカー：生理水中、２ｍｇ／ｍｌのヘモグロビンと１０ｍｇ／ｍｌの卵
白アルブミン； ・第３マーカー：生理水中、２ｍｇ／ｍｌのヘモグロビンと１０ｍｇ／ｍｌの卵
白アルブミンと２．５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン。Example 3 The marker was constituted by the following solutions: • First marker: 2 mg / ml hemoglobin in physiological water; • Second marker: 2 mg / ml hemoglobin and 10 mg / ml ovalbumin in physiological water. -Third marker: 2 mg / ml hemoglobin, 10 mg / ml ovalbumin, and 2.5 mg / ml bovine serum albumin in physiological water.

【００５６】 １０μｌの各マーカーを、特許文献である欧州特許出願公開第０４９３９９６
号、米国特許第５４６４５１５号及び米国特許第５４０５５１６号に記載された
タイプの二種の充填アプリケータの第一の歯部のウェル内に付着させた。分析さ
れる各血清の１０μｌを他のウェルの各々に付着させた。ついでこれらのアプリ
ケータを、血清タンパク質の分析を可能にするゲルの表面に前もって設定された
互いに離れた距離にて３０秒適用した。試料の分離は２０Ｗの出力にて約６分の
電気泳動により、温度を２０℃に調節することを可能にする機器を用いて得た。10 μl of each marker was added to the patent document EP 04939696.
No. 5,464,515 and U.S. Pat. No. 5,405,516. Two fill applicators of the type described in the first tooth well. 10 μl of each serum analyzed was attached to each of the other wells. These applicators were then applied for 30 seconds at a preset distance from each other on the surface of the gel allowing analysis of serum proteins. Separation of the samples was obtained by electrophoresis for about 6 minutes at a power of 20 W, using an instrument allowing the temperature to be adjusted to 20 ° C.

【００５７】 移動後に、ゲルを乾燥させアミドブラック１０Ｂで染色した。染色後、ゲルを
脱染し、再び乾燥させた。図３は対応するマーカーを各列の最初のレーンに示し
ている： ・下方列、レーン１：１つのバンド、第１マーカー； ・中段列、レーン１９：２つのバンド、第２マーカー； ・上部列、レーン３７：３つのバンド、第３マーカー。 この場合、マーカーは存在するバンドの数によって区別される。After migration, the gel was dried and stained with Amido Black 10B. After staining, the gel was destained and dried again. Figure 3 shows the corresponding markers in the first lane of each row: -Lower row, lane 1: 1 band, 1st marker; -Middle row, lane 19: 2 bands, 2nd marker; -Top. Row, lane 37: 3 bands, 3rd marker. In this case, the markers are distinguished by the number of bands present.

【００５８】 実施例４ マーカーは次の溶液によって構成された： ・第１マーカー：生理水中、３ｍｇ／ｍｌの抗ａｐｏＢクローン１モノクローナ
ル抗体； ・第２マーカー：生理水中、３ｍｇ／ｍｌの抗ａｐｏＢクローン１及びクローン
２モノクローナル抗体のそれぞれ； ・第３マーカー：生理水中、３ｍｇ／ｍｌの抗ａｐｏＢクローン１、クローン２
及びクローン３モノクローナル抗体のそれぞれ。Example 4 A marker was constituted by the following solutions: • First marker: 3 mg / ml anti-apoB clone 1 monoclonal antibody in physiological water; • Second marker: 3 mg / ml anti-apoB clone in physiological water. 1 and Clone 2 monoclonal antibodies respectively; 3rd marker: 3 mg / ml anti-apoB clone 1 and clone 2 in physiological water.
And each of the clone 3 monoclonal antibodies.

【００５９】 １０μｌの各マーカーを、特許文献である欧州特許出願公開第０４９３９９６
号、米国特許第５４６４５１５号及び米国特許第５４０５５１６号に記載された
タイプの二種の充填アプリケータの第一の歯部のウェル内に付着させた。分析さ
れる各血清の１０μｌを他のウェルの各々に付着させた。ついでこれらのアプリ
ケータを、血清タンパク質の分析を可能にするゲルの表面に前もって設定された
互いに離れた距離にて３０秒適用した。試料の分離は２０Ｗの出力にて約６分の
電気泳動により、温度を２０℃に調節することを可能にする機器を用いて得た。10 μl of each marker was added to the patent document EP 04939696.
No. 5,464,515 and U.S. Pat. No. 5,405,516. Two fill applicators of the type described in the first tooth well. 10 μl of each serum analyzed was attached to each of the other wells. These applicators were then applied for 30 seconds at a preset distance from each other on the surface of the gel allowing analysis of serum proteins. Separation of the samples was obtained by electrophoresis for about 6 minutes at a power of 20 W, using an instrument allowing the temperature to be adjusted to 20 ° C.

【００６０】 移動後に、ゲルを乾燥させアミドブラック１０Ｂで染色した。染色後、ゲルを
脱染し、再び乾燥させた。図４は対応するマーカーを各列の最初のレーンに示し
ている： ・下方列、レーン１：１つのバンド、第１マーカー； ・中段列、レーン１９：２つのバンド、第２マーカー； ・上部列、レーン３７：３つのバンド、第３マーカー。 この場合、マーカーは存在するバンドの数によって区別される。After migration, the gel was dried and stained with Amido Black 10B. After staining, the gel was destained and dried again. Figure 4 shows the corresponding markers in the first lane of each row: -Lower row, lane 1: 1 band, 1st marker; -Middle row, lane 19: 2 bands, 2nd marker; -Top. Row, lane 37: 3 bands, 3rd marker. In this case, the markers are distinguished by the number of bands present.

【００６１】 実施例５ マーカーは次の溶液によって構成された： ・第１マーカー：生理水中、２．５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン； ・第２マーカー：生理水中、１３．５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン； ・第３マーカー：生理水中、８０ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン。[0061] Example 5   The marker was composed of the following solutions: First marker: 2.5 mg / ml bovine serum albumin in physiological water; Second marker: 13.5 mg / ml bovine serum albumin in physiological water; Third marker: 80 mg / ml bovine serum albumin in physiological water.

【００６２】 １０μｌの各マーカーを、特許文献である欧州特許出願公開第０４９３９９６
号、米国特許第５４６４５１５号及び米国特許第５４０５５１６号に記載された
タイプの二種の充填アプリケータの第一の歯部のウェル内に付着させた。分析さ
れる各血清の１０μｌを他のウェルの各々に付着させた。ついでこれらのアプリ
ケータを、血清タンパク質の分析を可能にするゲルの表面に前もって設定された
互いに離れた距離にて３０秒適用した。試料の分離は２０Ｗの出力にて約６分の
電気泳動により、温度を２０℃に調節することを可能にする機器を用いて得た。10 μl of each marker was added to the patent document EP 04939696.
No. 5,464,515 and U.S. Pat. No. 5,405,516. Two fill applicators of the type described in the first tooth well. 10 μl of each serum analyzed was attached to each of the other wells. These applicators were then applied for 30 seconds at a preset distance from each other on the surface of the gel allowing analysis of serum proteins. Separation of the samples was obtained by electrophoresis for about 6 minutes at a power of 20 W, using an instrument allowing the temperature to be adjusted to 20 ° C.

【００６３】 移動後に、ゲルを乾燥させアミドブラック１０Ｂで染色した。染色後、ゲルを
脱染し、再び乾燥させた。図５は対応するマーカーを各列の最初のレーンに示し
ている： ・下方列、レーン１：１つのバンド、第１マーカー； ・中段列、レーン１９：１つのバンド、中間濃度； ・上部列、レーン３７：１つのバンド、高濃度。 この場合、マーカーは対応するバンドの強度によって区別される。After migration, the gel was dried and stained with Amido Black 10B. After staining, the gel was destained and dried again. Figure 5 shows the corresponding markers in the first lane of each row: -lower row, lane 1: 1 band, first marker; -middle row, lane 19: 1 band, intermediate concentration; -upper row. , Lane 37: 1 band, high concentration. In this case, the markers are distinguished by the intensity of the corresponding band.

【００６４】 実施例６ マーカーは次の溶液によって構成された： ・第１櫛形部材：歯部１に試料又は生理水なし； ・第２櫛形部材：歯部２に試料又は生理水なし； ・第３櫛形部材：歯部３に試料又は生理水なし。[0064] Example 6   The marker was composed of the following solutions: First comb-shaped member: No tooth or physiological water on tooth 1; -Second comb-shaped member: No tooth or physiological water on the tooth portion 2; -Third comb-shaped member: No tooth or physiological water on tooth 3.

【００６５】 １０μｌの生理水（又はなし）を、特許文献である欧州特許出願公開第０４９
３９９６号、米国特許第５４６４５１５号及び米国特許第５４０５５１６号に記
載されたタイプの第一のアプリケータの歯部１、第二のアプリケータの歯部２及
び第三のアプリケータの歯部３のウェル内に付着させた。 分析される各血清の１０μｌを他のウェルの各々に付着させた。ついでこれら
のアプリケータを、血清タンパク質の分析を可能にするゲルの表面に前もって設
定された互いに離れた距離にて３０秒適用した。試料の分離は２０Ｗの出力にて
約６分の電気泳動により、温度を２０℃に調節することを可能にする機器を用い
て得た。10 μl of physiological water (or none) was added to patent document EP 049
3996, U.S. Pat. No. 5,464,515 and U.S. Pat. No. 5,405,516, of a first applicator tooth 1, a second applicator tooth 2 and a third applicator tooth 3. It was attached in the well. 10 μl of each serum analyzed was attached to each of the other wells. These applicators were then applied for 30 seconds at a preset distance from each other on the surface of the gel allowing analysis of serum proteins. Separation of the samples was obtained by electrophoresis for about 6 minutes at a power of 20 W, using an instrument allowing the temperature to be adjusted to 20 ° C.

【００６６】 移動後に、ゲルを乾燥させアミドブラック１０Ｂで染色した。染色後、ゲルを
脱染し、再び乾燥させた。図６は対応するマーカーを各列の最初のレーンに示し
ている： ・下方列、レーン１：プロフィールなし； ・中段列、レーン２０：プロフィールなし； ・上部列、レーン３９：プロフィールなし。After migration, the gel was dried and stained with Amido Black 10B. After staining, the gel was destained and dried again. Figure 6 shows the corresponding markers in the first lane of each row: -lower row, lane 1: no profile; -middle row, lane 20: no profile; -top row, lane 39: no profile.

【００６７】 （実施例７） マーカーは部分的にポリマー化したウシγグロブリン（グルタルアルデヒド含
む）の生理水中２．５ｍｇ／ｍｌの溶液であり、同定はできるだけ実施された： ・第１櫛形部材：歯部１を介してのマーカーの付着（左手のレーン）； ・第２櫛形部材：歯部８を介してのマーカーの付着（中央レーン）； ・第３櫛形部材：歯部１５に試料なし（右手のレーン）。Example 7 The marker was a solution of partially polymerized bovine gamma globulin (including glutaraldehyde) in physiological saline at 2.5 mg / ml and the identification was performed as far as possible: First comb member: Attachment of marker via tooth 1 (left hand lane); Second comb member: attachment of marker via tooth 8 (center lane); Third comb member: no sample on tooth 15 ( Right hand lane).

【００６８】 １０μｌのマーカー溶液を、特許文献である欧州特許出願公開第０４９３９９
６号、米国特許第５４６４５１５号及び米国特許第５４０５５１６号に記載され
たタイプの第一のアプリケータの歯部１、第二のアプリケータの歯部２及び第三
のアプリケータの歯部３のウェル内にそれぞれ付着させた。10 μl of marker solution was added to the patent document EP-A-049399.
6, tooth 1 of a first applicator, tooth 2 of a second applicator and tooth 3 of a third applicator of the type described in US Pat. No. 5,464,515 and US Pat. No. 5,405,516. It was made to adhere to each well.

【００６９】 分析される試料を、レーンＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＫ、Ｉｇλに対しては３倍に
、レーンＩｇＧに対しては６倍に希釈し、各希釈物の１０μｌを対応するウェル
の各々に充填した。ついでこれらのアプリケータを、免疫固定を可能にするゲル
の表面に前もって設定された互いに離れた距離にて１分適用した。試料の分離は
２０Ｗの出力にて約８分の電気泳動により、温度を２０℃に調節することを可能
にする機器を用いて得た。The sample to be analyzed was diluted 3-fold for lanes IgA, IgM, IgK, Igλ and 6-fold for lane IgG and 10 μl of each dilution was loaded into each corresponding well. did. These applicators were then applied for 1 minute at a preset distance from each other on the surface of the gel allowing immunofixation. Separation of the samples was obtained by electrophoresis for about 8 minutes at a power of 20 W, using an instrument allowing the temperature to be adjusted to 20 ° C.

【００７０】 移動後に、特異的抗血清（抗ＩｇＧ、抗ＩｇＡ、抗ＩｇＭ、抗ＩｇＫ、抗Ｉｇ
λ）と共に各移動レーンを、電気泳動プロフィールに対応するレーンをタンパク
質固定液と共にインキュベートすることによって、パラプロテインをタイピング
した。マーカーレーンは特定の処理は何ら受けなかった。過剰の試薬を除き、ゲ
ルを乾燥させ、アシッドバイオレットで染色した。各櫛形部材をマーカーに対応
する着色バンドの一によって同定した： ・下方列、左手のレーン：着色バンドの存在； ・中段列、中央レーン：着色バンドの存在； ・上部列、右手のレーン：着色バンドの存在。After transfer, specific antisera (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-IgK, anti-Ig
Paraproteins were typed by incubating each migration lane with λ) and the lane corresponding to the electrophoretic profile with protein fixative. The marker lane received no specific treatment. Excess reagent was removed, the gel was dried and stained with acid violet. Each comb was identified by one of the colored bands corresponding to the markers: -Lower row, left lane: the presence of colored bands; -Middle row, middle lane: the presence of colored bands; -Upper row, right lane: colored. The existence of a band.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】 実施例１に記載したサンプルアプリケータマーカーに関連づけた
一連のサンプルの電気泳動分析のプロフィールを示す図である。1 shows the profile of electrophoretic analysis of a series of samples associated with the sample applicator marker described in Example 1. FIG.

【図２】 実施例２に記載したサンプルアプリケータマーカーに関連づけた
一連のサンプルの電気泳動分析のプロフィールを示す図である。FIG. 2 shows electrophoretic analysis profiles of a series of samples associated with the sample applicator marker described in Example 2.

【図３】 実施例３に記載したサンプルアプリケータマーカーに関連づけた
一連のサンプルの電気泳動分析のプロフィールを示す図である。FIG. 3 shows electrophoretic analysis profiles of a series of samples associated with the sample applicator marker described in Example 3.

【図４】 実施例４に記載したサンプルアプリケータマーカーに関連づけた
一連のサンプルの電気泳動分析のプロフィールを示す図である。FIG. 4 shows the electrophoretic analysis profile of a series of samples associated with the sample applicator marker described in Example 4.

【図５】 実施例５に記載したサンプルアプリケータマーカーに関連づけた
一連のサンプルの電気泳動分析のプロフィールを示す図である。FIG. 5 shows the electrophoretic analysis profile of a series of samples associated with the sample applicator marker described in Example 5.

【図６】 実施例６に記載したサンプルアプリケータマーカーに関連づけた
一連のサンプルの電気泳動分析のプロフィールを示す図である。FIG. 6 shows electrophoretic analysis profiles of a series of samples associated with the sample applicator marker described in Example 6.

【図７】 実施例７に記載したサンプルアプリケータマーカーに関連づけた
一連のサンプルの電気泳動分析のプロフィールを示す図である。FIG. 7 shows electrophoretic analysis profiles of a series of samples associated with the sample applicator marker described in Example 7.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 27/26 ３０１Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ， ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification code FI Theme code (reference) G01N 27/26 301A (81) Designated country EP (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI) , FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE, TR), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GW, ML, MR, NE) , SN, TD, TG), AP (GH, GM, KE, LS, MW, MZ, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR , KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZA, ZW

Claims (32)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 電気泳動による生物学的サンプル成分の分析方法において、
以下の工程： −生物学的サンプルを、各アプリケータがその電気泳動画像を試験することによ
り同定可能な同定マーカーを具備する複数のサンプルアプリケータを用いて、１
又は複数の電気泳動支持体上に沈着させ； −電場をかけてサンプルの成分を泳動させ； −電気泳動によって分離されたサンプルの成分及び各アプリケータの同定マーカ
ーを検出することを含んでなる方法。1. A method for analyzing a biological sample component by electrophoresis, comprising:
The following steps: 1) using a plurality of sample applicators, each applicator comprising an identification marker, each applicator being identifiable by examining its electrophoretic image,
Or by depositing on a plurality of electrophoretic supports; applying an electric field to cause the components of the sample to migrate; -detecting the components of the sample separated by electrophoresis and the identification markers of each applicator. . 【請求項２】 サンプルアプリケータ同定マーカーが電場内で泳動可能な化
学種の組成物によって構成される、請求項１に記載の電気泳動による分析方法。2. The electrophoretic analysis method according to claim 1, wherein the sample applicator identification marker is composed of a composition of chemical species that can migrate in an electric field. 【請求項３】 化学種が、着色された又は着色可能な分子である、請求項１
又は２に記載の電気泳動による分析方法。3. The chemical species is a colored or colorable molecule.
Or the analysis method by electrophoresis according to 2. 【請求項４】 全てアプリケータの同定マーカーが、異なる化学種又は化学
種の異なる混合物であり、使用された各サンプルアプリケータについて、同定マ
ーカーの電気泳動画像が他のサンプルアプリケータのものと異なるようにされた
、請求項２又は３に記載の電気泳動による分析方法。4. The applicator identification markers are all different chemical species or different mixtures of chemical species, and for each sample applicator used the electrophoretic image of the identification marker is different from that of the other sample applicators. The method for analysis by electrophoresis according to claim 2 or 3, wherein: 【請求項５】 全てのアプリケータの同定マーカーの電気泳動移動度が異な
る、請求項４に記載の電気泳動による分析方法。5. The electrophoresis analysis method according to claim 4, wherein the identification markers of all the applicators have different electrophoretic mobilities. 【請求項６】 着色された又は着色可能な化学種が、異なる電気泳動移動度
を有するタンパク質又はタンパク質混合物である、請求項３から５のいずれか一
項に記載の電気泳動による分析方法。6. The electrophoretic analysis method according to claim 3, wherein the colored or colorable chemical species are proteins or protein mixtures having different electrophoretic mobilities. 【請求項７】 全てのアプリケータのマーカーが同一の化学種からなり、各
サンプルアプリケータについて異なる予め設定された濃度で使用される、請求項
１から６のいずれか一項に記載の電気泳動による分析方法。7. Electrophoresis according to any one of claims 1 to 6, wherein the markers of all applicators consist of the same chemical species and are used at different preset concentrations for each sample applicator. Analysis method. 【請求項８】 化学種がモノクローナル抗体である、請求項１から７のいず
れか一項に記載の方法。8. The method of any one of claims 1-7, wherein the chemical species is a monoclonal antibody. 【請求項９】 サンプルの成分及びアプリケータ同定マーカーの同定が、サ
ンプルの成分及び／又は同定マーカーを顕現させる工程を含む、請求項１から８
のいずれか一項に記載の電気泳動による分析方法。9. The method of claim 1, wherein identifying the components of the sample and the applicator identifying marker comprises revealing the components of the sample and / or the identifying marker.
The method for analysis by electrophoresis according to any one of 1. 【請求項１０】 同じ電気泳動支持体上に異なる一連のサンプルを沈着させ
るために異なるサンプルアプリケータが使用される、請求項１から９のいずれか
一項に記載の電気泳動による分析方法。10. The method of electrophoretic analysis according to claim 1, wherein different sample applicators are used to deposit different series of samples on the same electrophoretic support. 【請求項１１】 異なる電気泳動支持体上に異なる一連のサンプルを沈着さ
せるために異なるサンプルアプリケータが使用される、請求項１から１０のいず
れか一項に記載の電気泳動による分析方法。11. The method of electrophoretic analysis according to claim 1, wherein different sample applicators are used to deposit different series of samples on different electrophoretic supports. 【請求項１２】 各アプリケータの同定マーカーが、各アプリケータに特異
的な組成物により構成され、電気泳動支持体上の予め設定されたレーンにサンプ
ルと同時に負荷される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の電気泳動によ
る分析方法。12. The applicator identification marker is comprised of a composition specific to each applicator and is loaded simultaneously with the sample into a preset lane on the electrophoretic support. The method for analysis by electrophoresis according to any one of 1. 【請求項１３】 各アプリケータの同定マーカーが全てのアプリケータに共
通の組成物から構成され、前記組成物が電気泳動支持体上の各アプリケータによ
って異なる予め設定されたレーンに沈着される、又は同定マーカーが負荷されず
各アプリケータによって異なるウェルであることを特徴とする、請求項１から１
２のいずれか一項に記載の電気泳動による分析方法。13. The applicator identification marker is composed of a composition common to all applicators, said composition being deposited in different preset lanes by each applicator on the electrophoretic support. Alternatively, the identification marker is not loaded, and the wells are different for each applicator.
The analysis method by electrophoresis according to any one of 2. 【請求項１４】 以下の工程： −生物学的サンプルを、各アプリケータがその電気泳動画像を試験することによ
り同定可能な同定マーカーを具備する複数のサンプルアプリケータを用いて、１
又は複数の電気泳動支持体上に沈着させ； −電場をかけてサンプルの成分を泳動させ； −電気泳動支持体を乾燥させ； −電気泳動支持体を染色し； −電気泳動支持体を脱色し； −電気泳動支持体を乾燥させ； −電気泳動支持体上の分離された成分及びサンプルアプリケータマーカーを同定
することを含んでなる請求項１から１３のいずれか一項に記載の電気泳動による
分析方法。14. The following steps: 1) using a plurality of sample applicators, each of which comprises an identification marker, each applicator being identifiable by examining its electrophoretic image.
Or deposited on a plurality of electrophoretic supports; -applying an electric field to migrate the components of the sample; -drying the electrophoretic supports; -staining the electrophoretic supports; -decoloring the electrophoretic supports. -Drying the electrophoretic support; -Identifying the separated components and sample applicator marker on the electrophoretic support by electrophoresis according to any one of claims 1 to 13. Analysis method. 【請求項１５】 サンプルアプリケータ同定マーカーが、サンプル成分の分
離工程後の電気泳動支持体の染色後に直接検出可能である非着色化学種である、
請求項１から１４のいずれか一項に記載の電気泳動による分析方法。15. The sample applicator identification marker is an uncolored species that is directly detectable after staining the electrophoretic support after the step of separating the sample components.
The analysis method by electrophoresis according to any one of claims 1 to 14. 【請求項１６】 サンプル成分の検出工程が、分離された異なる成分の定量
的分析工程を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の電気泳動による分
析方法。16. The method for analysis by electrophoresis according to claim 1, wherein the step of detecting the sample component includes a step of quantitatively analyzing the separated different components. 【請求項１７】 電気泳動支持体が、アガロースゲル、ポリアクリルアミド
ゲル又は酢酸セルロース膜である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の電
気泳動による分析方法。17. The electrophoresis analysis method according to claim 1, wherein the electrophoretic support is an agarose gel, a polyacrylamide gel, or a cellulose acetate membrane. 【請求項１８】 分析されたサンプルの電気泳動画像と取り出されたサンプ
ルとを関連づけることを可能にするための、ポジティブサンプル同定方法におい
て、 サンプルアプリケータを、電気泳動画像により同定可能な同定マーカーを用い
てマークし、そのようにマークされたサンプルアプリケータを電気泳動支持体上
の分析すべきサンプルの沈着に使用することを含んでなる方法。18. A positive sample identification method for enabling association of an electrophoretic image of an analyzed sample with a sample taken out, wherein a sample applicator is provided with an identification marker identifiable by the electrophoretic image. A method comprising: using a sample applicator that has been marked with and so marked to deposit a sample to be analyzed on an electrophoretic support. 【請求項１９】 分析されたサンプルの電気泳動画像と取り出されたサンプ
ルとを関連づけることを可能にするための、ポジティブサンプル同定方法におい
て、 サンプルアプリケータを、電気泳動画像により同定可能な同定マーカーを用い
てマークすることを含んでなり、前記同定マーカーが請求項１から１７のいずれ
か一項で定義されたものである方法。19. In a positive sample identification method for enabling association of an electrophoretic image of an analyzed sample with a sample taken out, a sample applicator is provided with an identification marker identifiable by the electrophoretic image. 18. A method comprising marking with, wherein the identifying marker is as defined in any one of claims 1-17. 【請求項２０】 電気泳動支持体上での電気泳動画像により同定可能な化学
種組成物を含むことを特徴とする、サンプルアプリケータの同定用マーカー。20. A marker for identifying a sample applicator, which comprises a chemical species composition identifiable by an electrophoretic image on an electrophoretic support. 【請求項２１】 化学種の全部又は一部が、電場の作用下で、電気泳動支持
体上で泳動可能であることを特徴とする、請求項２０に記載のマーカー。21. Marker according to claim 20, characterized in that all or part of the chemical species is able to migrate on an electrophoretic support under the action of an electric field. 【請求項２２】 化学種が、着色された又は着色可能な種、又は着色された
又は着色可能な化学種の混合物であることを特徴とする、請求項２０又は２１に
記載のマーカー。22. Marker according to claim 20 or 21, characterized in that the chemical species is a colored or colorable species or a mixture of colored or colorable chemical species. 【請求項２３】 化学種が、着色された又は着色可能なタンパク質、又はモ
ノクローナル抗体であることを特徴とする、請求項２０又は２１に記載のマーカ
ー。23. Marker according to claim 20 or 21, characterized in that the chemical species is a colored or colorable protein or a monoclonal antibody. 【請求項２４】 電気泳動によりサンプルの成分を分析するためのキットに
おいて、 −分析されるサンプル及びサンプルアプリケータ同定マーカーを受容し、それら
を電気泳動的に移動させるのに適した多孔性材料を含んでなる少なくとも１つの
電気泳動支持体； −サンプルアプリケータを同定する電気泳動分析の間に使用するための化学種か
ら構成される組成物であって、その電気泳動画像により同定可能な組成物を具備
してなるキット。24. A kit for analyzing components of a sample by electrophoresis, comprising: a porous material suitable for receiving the sample to be analyzed and the sample applicator identification marker and for transferring them electrophoretically. At least one electrophoretic support comprising; -a composition composed of a chemical species for use during electrophoretic analysis to identify a sample applicator, the composition being identifiable by its electrophoretic image. A kit comprising: 【請求項２５】 サンプルアプリケータ同定マーカーが、着色された又は着
色可能化学種、又はモノクローナル抗体の組成物から構成される、請求項２４に
記載のキット。25. The kit of claim 24, wherein the sample applicator identification marker is composed of a colored or colorable chemical species or composition of monoclonal antibodies. 【請求項２６】 サンプルアプリケータ同定マーカーが、少なくともその一
部が電場の作用下で泳動可能な化学種の組成物から構成される、請求項２４又は
２５に記載のキット。26. The kit according to claim 24 or 25, wherein the sample applicator identification marker is composed, at least in part, of a composition of chemical species capable of migrating under the action of an electric field. 【請求項２７】 各アプリケータの同定マーカーが、着色された又は着色可
能な化学種あるいは異なる電気泳動移動度を持つ前記種との混合物から選択され
る、請求項２４から２６のいずれか一項に記載のキット。27. The method according to any one of claims 24 to 26, wherein the identification marker of each applicator is selected from colored or colorable chemical species or mixtures with said species having different electrophoretic mobilities. The kit described in. 【請求項２８】 着色された化学種が、着色された又は着色可能なタンパク
質あるいは異なる電気泳動移動度を有する着色された又は着色可能なタンパク質
の混合物である、請求項２７に記載の電気泳動による分析方法。28. Electrophoresis according to claim 27, wherein the colored species is a colored or colorable protein or a mixture of colored or colorable proteins having different electrophoretic mobilities. Analysis method. 【請求項２９】 化学種が、各サンプルアプリケータについて異なる予め設
定された濃度で使用される、請求項２４から２８のいずれか一項に記載のキット
。29. The kit according to any one of claims 24 to 28, wherein the chemical species are used at different preset concentrations for each sample applicator. 【請求項３０】 化学種が、モノクローナル抗体である、請求項２４から２
９のいずれか一項に記載のキット。30. The method according to claim 24, wherein the chemical species is a monoclonal antibody.
9. The kit according to any one of 9. 【請求項３１】 分離されたサンプルの成分を顕現させるための１又は複数
の試薬を更に含む、請求項２４から２９のいずれか一項に記載のキット。31. The kit according to any one of claims 24 to 29, further comprising one or more reagents for revealing the components of the separated sample. 【請求項３２】 アプリケータの同定マーカーを顕現させるための１又は複
数の試薬を更に含む、請求項２４から３１のいずれか一項に記載のキット。32. The kit of any one of claims 24 to 31, further comprising one or more reagents for revealing an applicator identification marker.