BRPI0714912A2 - composiÇÕes estÁveis e biodispoÍveis de isâmeros de licopeno para pele e cabelo - Google Patents

Abstract

COMPOSIÇÕES ESTÁVEIS E BIODISPONÍVEIS DE ISâMEROS DE LICOPENO PARA PELE E CABELO. A presente invenção refere-se a um método de manufaturamente de uma composição estável enriquecida de cis-liscopeno (isômeros z) por aquecimento prolongado em solventes de tomates, partes de tomates, derivados dos mesmos, ou extratos de tomates em solventes.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSI- ÇÕES ESTÁVEIS E BIODISPONÍVEIS DE ISÔMEROS DE LICOPENO PARA PELE E CABELO".

A presente invenção refere-se a uma composição primária que inclui pelo menos um material contendo Iicopeno enriquecido em Isômeros-Z do composto de Iicopeno tendo uma estabilidade e biodisponibilidade au- mentadas, e processo de formação da mesma. Ela também refere-se a uma composição oral que contém a composição primária em um produto alimen- tício, em um suplemento alimentar, em uma preparação cosmética, ou em uma preparação farmacêutica. Antecedentes Tecnológicos

A absorção de carotenóides é um processo complexo envolven- do liberação a partir da matriz de microestrutura de alimento, dissolução em micelas misturadas, levantamento intestinal, incorporação em chilomícrons, distribuição aos tecidos, levantamento pelo fígado e ressecreção em VLDL, que são progressivamente transformados em LDL.

A absorção de Iicopeno de fontes de alimento é amplamente documentada. A biodisponibilidade de Iicopeno é muito baixa de alimentos, tais como tomates e suco de tomate. Até agora, a pasta de tomate é a me- Ihor fonte de alimento biodisponível conhecida de Iicopeno biodisponível. O tomate contém cerca de > 90% de Iicopeno em sua configuração E.

Extratos de tomate contendo uma alta quantidade de Iicopeno são comercialmente disponíveis na forma de oleorresina, mas a biodisponibi- lidade do Iicopeno em seres humanos é preferivelmente limitada destas fon- tes. Em extratos de tomate concentrados, o Iicopeno está principalmente presente na forma cristalina, que foi sugerido para ser um dos fatores primá- rios que reduzem sua biodisponibilidade.

Até aqui, as fontes de Iicopeno comercialmente disponíveis des- crevem um perfil isomérico muito similar aos tomates de partida, ou mostram somente um leve aumento nos isômeros-Z, se eles são derivados (tais como temperos) ou extratos. Um número de tratamentos, como, por exemplo, pro- cessamento térmico, são conhecidos por promoverem isomerização. Shi et al., Journal of Food Processo Engineering 2003, 25, 485-498, mostrou que um aumento nos isômeros Z pode ser obtido por aquecimento de temperos de tomate. Contudo, certos isômeros de Iicopeno não são estáveis e pro- pensos à retroisomerização. De acordo com a literatura, 5-Z é o mais estável entre os isômeros de Iicopeno predominantes seguidos por todos Ε, o 9-Z e o 13-Z. Consequentemente, a estabilidade de produtos baseados em Iicope- no isomerizado depende de seu perfil de isômero de Iicopeno e, desse mo- do, pode ser modulada por processamentos tecnológicos que afetam este perfil.

A isomerização térmica de Iicopeno é conhecida por aperfeiçoar

sua biodisponibilidade destas matrizes de alimento. Contudo, a biodisponibi- Iidade de isômeros de Iicopeno individuais não foi investigada ainda. Como estabilidade, pode ser assumido que a biodisponibilidade de produtos base- ados em Iicopeno é dependente de seu perfil de isômero de Iieopeno e, des- se modo, pode ser modulada por meios tecnológicos.

Existem várias patentes que propõem meios tecnológicos e for- mulações para biodisponibilidade aperfeiçoada de licopeno. Por exemplo, WO 2005/075575 proporciona uma composição primária enriquecida em isômeros-Z, eficaz para aumentar a biodisponibilidade de licopeno. EP 1 103 579 descreve um processo para extração de licopeno

por refluxo de etanol: o processo é efetuado por curto tempo (30') de modo que nenhuma isomerização significante ocorre. Atualmente, todo licopeno Z natural é desejado como o produto final.

WO 96/13178 descreve um processo para a preparação de con- centrados estáveis de licopeno: o efeito de isomerização na estabilidade não é, contudo, apreciado e, ao contrário, o processo descrito tenta evitar isome- rização pelo uso de temperaturas mais baixas do que 50°C por uns poucos minutos, por exemplo, 10 minutos.

EP 1 201 762 refere-se a um produto contendo licopeno no qual licopeno está em sua forma natural todo-trans. Nenhuma isomerização signi- ficante ocorre, visto que qualquer tratamento de calor (dissolução e concen- tração) é efetuado para o tempo mais curto possível (menos do que 1 hora). KR 2005 006592 descreve a preparação de um complexo de Ii- copeno-zinco tendo atividade antioxidante aumentada. Aquecimento é apli- cado na ausência de solventes para quebrar as paredes de célula do materi- al de planta. Nenhum aquecimento prolongado e nenhuma isomerização ocorrem.

WO 03/079816 descreve um processo para a preparação de ex- tratos de tomate com alto teor em Iicopeno no qual a extração é efetuada à temperatura ambiente.

US 5.837.311 e WO 97/48287 descrevem um processo para a preparação de uma oleorresina tendo alto teor de Iicopeno e estabilidade satisfatória. A última característica é obtida por meio de fosfolipídios e glice- rídeos presentes na própria oleorresina. Nenhuma menção é feita sobre composição isomérica de Iicopeno e de sua influência na estabilidade. Uma extração quente é efetuada de modo a maximizar o rendimento no licopeno, mas para tempos não mais longos do que 1,2 horas. Um pré-tratamento de calor é efetuado nos tomates na ausência de qualquer solvente somente de modo a aperfeiçoar a separação de polpa-soro.

WO 2005/075575 trata do problema de aumentar o teor de cis- isômeros em oleorresinas de tomate: isomerização é obtida, entre outros, por tratamento térmico para período de tempo curto. Além disso, o produto obtido contém uma alta quantidade do 13-cis isômero instável.

EP 0 937 412 descreve um processo para a preparação de pre- parações de carotenóide pulverulentas finamente divididas incluindo uma etapa de aquecimento na presença de solventes por tempos muito curtos (5 segundos).

US 5.858.700 refere-se a um processo para o isolamento e puri- ficação de cristais de licopeno caracterizados pela hidrólise de impurezas, tais como glicerídeos e fosfanatos. A hidrólise é efetuada em alta temperatu- ra, mas por tempos mais curtos do que 2 horas, opcionalmente precedida por uma etapa de extração com refluxo de solventes, mas sempre por tempo curto de modo a prevenir a degradação de licopeno.

US 6.235.315 descreve formulações de licopeno pulverulentas caracterizadas em que o Iicopeno tenha um certo grau de cristalinidade e o grau mais baixo possível de isomerização.

WO 03/090554 descreve derivados de tomate concentrados tendo alto teor de Iicopeno e viscosidade predeterminada e teor de açúcar. O processo é físico e nenhum solvente é usado. Aquecimento por 1-6 minutos é efetuado em tomates redondos de modo a tornar a separação de polpa mais fácil.

Mayer-Miebach et al., "Thermal processing of carrots: estabili- dade de Iicopeno e isomerização com relação ao potencial antioxidante" Fo- od Research International, Elsevier Applied Science, Barking, GB, vol. 38, nos 8-9, Outubro de 2005, páginas 1103-1108, estudo de isomerização de Iicopeno em cenouras congeladas-secadas em função da temperatura. Os Autores concluíram que o isômero todo-trans é estável a aquecimento pro- longado, resultando em uma diminuição de cis-isômeros.

Por enquanto, portanto, a técnica anterior não proporcionou pro- cessos de isomerização de Iicopeno compreendendo um aquecimento pro- longado em solventes orgânicos para obter um produto tendo alta biodispo- nibilidade e composição isomérica estável. Sumário

Verificou-se que a estabilidade de isômeros de Z-Iicopeno indi- viduais varia de um isômero para outro; em particular o 13-Z Iicopeno foi muito menos estável do que ou o 5-Z, ou o 9-Z, ou todos os isômeros E. Consequentemente, uma composição primária de acordo com a presente invenção deve ter um nível de 13-Z isômero mais baixo possível para exibir estabilidade ótima. Foi também mostrado que alguns isômeros Z (tais como 5-Z e 9-Z, por exemplo) de Iicopeno aumentam a biodisponibilidade da com- posição contendo licopeno. A composição primária deve, portanto, conter principalmente o 5-Z isômero, ou uma combinação de 9-Z e 5-isômeros Z para proporcionar uma biodisponibilidade e bioeficácia aperfeiçoadas.

Consequentemente, é um primeiro objetivo da presente inven- ção proporcionar composições primárias com pelo menos um material con- tendo licopeno enriquecido em uma mistura específica de isômeros Z de Ii- copeno, o material contendo Iicopeno contendo em peso uma maior percen- tagem de um isômero selecionado a partir do grupo consistindo em 5-Z, 9-Z, e combinações dos mesmos do que de 13-Z isômero.

Em uma concretização, a presente invenção proporciona uma composição oral que contém a composição primária em um produto alimen- tício, em um suplemento alimentar, em uma preparação cosmética, ou em uma preparação farmacêutica.

Em uma concretização, a presente invenção proporciona a composição primária como um aditivo em um produto alimentício para admi- nistração oral, tais como em uma composição nutricional, um suplemento alimentar, um produto de alimento de animal doméstico, uma preparação cosmética, ou uma preparação farmacêutica.

Em uma concretização, a presente invenção proporciona um método de manufaturamento de composições primárias ou suplementos ali- mentares, preparações cosméticas, ou preparações farmacêuticas contendo as mesmas.

Em outra concretização, a presente invenção proporciona o uso da composição primária conforme descrita acima, para a preparação de uma composição oral, cosmética ou farmacêutica, pretendida para aperfeiçoar a saúde da pele, em particular para fotoproteção da pele, ou para proteção do tecido da pele contra envelhecimento.

Em uma concretização alternativa, a presente invenção propor- ciona o uso das composições primárias para a preparação de uma composi- ção oral, cosmética ou farmacêutica, para prevenir ou tratar doenças cardio- vasculares ou cânceres.

Uma vantagem da presente invenção é proporcionar composi- ções de isômeros Z de Iicopeno que exibem uma estabilidade, biodisponibili- dade e bioeficácia mais altas.

Características adicionais e vantagens são descritas aqui, e tor- nar-se-ão aparentes a partir da seguinte Descrição Detalhada e Figura. Breve Descrição da Figura

Figura 1 - Área sob a curva (AUC) de Iicopeno de pias- ma/triglicerídeos de TRL seguindo o consumo de uma refeição contendo 25 mg de Iicopeno total de, ou pasta de tomate (todo E-licopeno), ou oleorresina de tomate rica em 5-Z Iicopeno (5-Z oleorresina), ou oleorresina de tomate rica em 13-Z Iicopeno (13-Z oleorresina), ou oleorresina de tomate rica em 9 e 13-Z Iicopeno (9- & 13-Z oleorresina). Descrição Detalhada da Invenção

A presente invenção refere-se, de modo geral, a composições que proporcionam benefícios de saúde. Mais especificamente, a presente invenção refere-se a composições nutricionais benéficas que podem ser u- sadas para aperfeiçoar a pele e cabelo, e métodos relacionados às mesmas.

A presente invenção agora torna disponível ao consumidor uma composição aperfeiçoada obtida de produtos naturais. A composição primá- ria proporciona Iicopeno em uma forma particularmente altamente biodispo- nível e/ou bioeficaz.

Em uma concretização preferida, a invenção proporciona extra- tos de tomate ou derivados dos mesmos com uma razão de isômero diferen- te da razão que ocorre naturalmente em produtos até aqui disponíveis. Em particular, a invenção refere-se a extratos ou derivados com um teor de E isômero não mais alto do que 60% no teor de Iicopeno total, preferivelmente com um teor de E isômero não mais alto do que 40% no teor total de Iicope- no (por HPLC).

Em uma concretização, a presente invenção proporciona uma composição primária contendo uma combinação específica de isômeros Z. Preferivelmente, a razão de isômeros Z/E nas composições primárias da presente invenção deve ser acima de 1.

Além disso, a combinação é preferivelmente rica em 5-Z e 9-Z, e pobre em 13-Z. Em uma concretização preferida, a quantidade de 5-Z e 9-Z é maior do que 30% com teor total de licopeno, preferivelmente maior do que 40%, mais preferivelmente maior do que 50%. Também, a quantidade de 13- Z é menor do que 10% no licopeno total, preferivelmente menor do que 5%, mais preferivelmente menor do que 3% no teor de licopeno total. Pelo au- mento dos 5-Z e 9-isômeros Z específicos e/ou diminuição dos 13-isômeros Ζ, por exemplo, uma forma estável da composição primária que é mais bio- disponível e mais bioeficaz pode ser obtida. Além disso, os extratos ou deri- vados da invenção são estáveis sob as condições de armazenamento usu- ais, e não suportam retroisomerização. Sob condições protetoras ordinárias (ausência de luz e oxigênio), o teor total de Iicopeno e teor de E isômero permanecem constantes. Os últimos não aumentam mesmo quando mantêm os extratos à temperatura ambiente.

Tal perfil (isto é, baixa quantidade de 13-Z isômero do licopeno) pode ser, por exemplo, obtido por isomerização de licopeno usando-se cata- lisadores em uma matriz sólida, tais como argilas, ou por aquecimento pro- longado.

Em uma concretização, o material contendo licopeno pode ser, por exemplo, na forma de um extrato, um concentrado, ou uma oleorresina. No presente relatório, o termo "oleorresina" deve ser compreendido para sig- nificar um extrato de lipídeo de um material contendo licopeno, que inclui possivelmente outros carotenóides, triglicerídeos, fosfolipídios, tocoferóis, tocotrienóis, fitosteróis, e outros compostos menos significantes. Tem sido surpreendentemente verificado que retroisomerização de licopeno em oleor- resina de tomate isomerizado pode ser minimizada pela redução de seu teor em 13-Z isômero.

Em uma concretização, o material contendo licopeno pode ser um extrato, um concentrado, ou uma oleorresina, que é obtido, extraído, en- riquecido ou purificado de uma planta ou material de vegetal, um microorga- nismo, uma levedura, ou um produto de origem animal. Ele é adicionalmente submetido a um tratamento para aumentar o teor de Z isômero de licopeno, conforme descrito abaixo.

Se a fonte de licopeno é de origem de planta, ela pode ser vege- tais, folhas, flores, frutos, e outras partes da planta. Em uma concretização preferida, a fonte de licopeno é de tomates (isto é, tomate inteiro, extrato de tomate, polpa de tomate, purê de tomate, casca de tomate, com ou sem as sementes). Concentrados de planta ou vegetal adequados são obtidos, por exemplo, por secagem ou congelamento-secagem das plantas cortadas frescas ou vegetais, ou as respectivas raízes, frutos ou sementes dos mes- mos e, em seguida, opcionalmente moendo ou granulando o material seco. Métodos adequados de obtenção de extratos das plantas ou vegetais acima mencionados são conhecidos na técnica. Os extratos de planta ou vegetal podem ser obtidos, por exemplo, pela extração das plantas ou vegetais cor- tados frescos ou processados, ou as respectivas raízes, frutos ou sementes dos mesmos com água ou com um ou mais solventes de grau de alimento, ou com uma mistura de água e um ou mais solventes de grau de alimento. Preferivelmente, os extratos e concentrados de acordo com a presente in- venção podem ser lipídicos ou aquosos. Devido aos carotenóides serem Ii- possolúveis, a extração com água removerá constituintes indesejados que são solúveis em água, tais como, por exemplo, açúcares, aminoácidos, pro- teínas solúveis e/ou ácidos orgânicos.

Se o material contendo Iicopeno é obtido de microorganismo, qualquer microorganismo que produz Iicopeno pode ser usado, em particular microorganismo probiótico, tais como, por exemplo, bactéria de ácido láctico. Também, o produto de origem animal pode ser de, por exemplo, salmão, camarões, "krill", ou um extrato de fígado ou uma fração de leite. No presen- te relatório, o termo "fração de leite" deve ser compreendido para significar qualquer parte do leite.

Em uma concretização alternativa, o material contendo Iicopeno pode ser uma oleorresina. Métodos adequados para obtenção de oleorresi- nas a partir das plantas ou vegetais acima mencionados são bem conheci- dos na técnica. Por exemplo, oleorresinas podem ser obtidas por extração lipídica usando-se um solvente compatível com os negócios de alimento, cosméticos ou farmacêuticos. Oleorresinas preparadas por métodos con- vencionais têm um teor em Iicopeno de cerca de 0,05% a 50% em peso. Seu teor de todo-E isômero de Iicopeno é usualmente mais alto do que de Z isô- meros-Z, por exemplo, a razão de Z/E isômeros de Iicopeno em uma oleor- resina de tomate selecionada é cerca de 7:93.

Oleorresinas são materiais de partida preferidos para obtenção da composição primária de acordo com a presente invenção porque elas contêm outros carotenóides ou antioxidantes, tal como Vitamina E1 que tam- bém estabilizam a composição. A bioatividade e estabilidade do composto de Iicopeno na oleorresina podem ser aperfeiçoadas, em particular, durante o processo de isomerização, e o rendimento do Z Iicopeno na composição primária pode ser também aumentado.

O material contendo Iicopeno preferivelmente inclui carotenos e xantofilis tais como, por exemplo, zeaxantina, astaxantina,

beta-criptoxantin, capsantina, cantaxantina, luteína, e derivados dos mesmos, tais como ésteres, por exemplo. Os compostos de Iicopeno foram submetidos a um tratamento para aumentar a fração de Z isômero na composição primária.

De modo a obter tal perfil de isômero, o material contendo Iico- peno que está na forma de um extrato, um concentrado, ou uma oleorresina, é submetido a uma isomerização pelo uso de catalisadores sólidos ácidos ou básicos (por exemplo, argilas, zeólitos, peneiras moleculares, trocadores de íon), para produzir misturas com alta razão Z/E. O uso de catalisadores sóli- dos para enriquecer o Iicopeno em isômeros-Z não é poluente e danoso ao alimento, visto que os catalisadores podem ser convenientemente removidos por filtração ou centrifugação simples. Também, combinações de catalisado- res sólidos com outros meios comuns (por exemplo, calor, luz e iniciadores de radical) podem, adicionalmente, aumentar a isomerização geométrica.

Em outra concretização, os extratos ou derivados de acordo com a invenção podem ser preparados partindo-se de tomates, partes de tomates (tal como a pele), derivados (tais como temperos e concentrados), ou extratos. A isomerização é efetuada pelo aquecimento prolongado em um solvente. Esta descoberta é surpreendente em vista de ensinamentos con- trários que podem ser derivados a partir da técnica anterior discutida na se- ção "Antecedentes da Invenção".

Em particular, quando tomates ou derivados dos mesmos são usados como materiais de partida, eles podem ser tratados com um solvente capaz de extrair licopeno. O extrato resultante é, em seguida, aquecido, o solvente é removido, recuperando, desse modo, o extrato isomerizado. Por outro lado, quando um extrato ou derivado é usado como material de partida, este é retirado em um solvente, a mistura é aquecida por um tempo adequado, em seguida o solvente é removido, recuperando, des- se modo, o extrato isomerizado. Solventes que podem ser usados para a etapa de isomerização são hidrocarbonetos, hidrocarbonetos clorinados, ésteres, cetonas, álcoois; particularmente hidrocarbonetos alifáticos C3-C10, solventes clorinados C1-C3, ésteres C3-C6, cetonas C3-C8 e álcoois C1-C8; mais particularmente hexano, tetracloreto de carbono, acetato de etila, ace- tona e butanol. A isomerização em solventes é efetuada em temperaturas variando de 50 a 150°C, preferivelmente em temperaturas variando de 60 a 130°C. O tempo de isomerização varia de 4 a 240 h, preferivelmente de 10 a 180 h.

A razão de Z/E (Z/E)isômero na composição primária pode em seguida ser aumentada até pelo menos 20:80, preferivelmente entre 20:80 e 95:5, mais preferivelmente de 30:70 a 90:10. Em uma concretização preferi- da, a razão de (5Z+9Z)/E é acima de 1, e o 13Z é parcialmente removido.

Em uma concretização, a presente invenção proporciona uma composição primária, na forma de um pó, líquido ou gel, compreendendo um composto de Iicopeno que tem uma melhor biodisponibilidade e/ou bioeficá- cia do que o composto sozinho. Também, a composição primária pode estar na forma de uma composição altamente dispersível em água, se a forma de pó é escolhida. Neste exemplo, o pó é dispersível em água à temperatura ambiente. A composição primária também proporciona carotenóides em uma forma particularmente altamente solúvel, e solventes orgânicos, menos pro- pensos a cristalização, e tendo uma tendência mais baixa de se agregar.

Em outra concretização da presente invenção, a composição primária pode ser usada ou sozinha ou em associação com outros compos- tos ativos, tais como vitamina C, vitamina E (tocoferóis e tocotrienóis), caro- tenóides (carotenos, luteína, zeaxantina, beta-criptoxantina, etc.) ubiquino- nas (por exemplo, CoQ10), catechins (por exemplo, epigalocatechin gaiato), extratos de café contendo polifenóis e/ou diterpenos (por exemplo, kawheol e cafestol), extratos de chicória, extratos de Ginkgo biloba, uva e extratos de semente de uva ricos em proantocianidins, extratos de tempero (por exem- plo, alecrim), extratos de soja contendo isoflavonas e fitoestrogênios relacio- nados e outras fontes de flavonóides com atividade antioxidante, ácidos gra- xos (por exemplo, n-3 ácidos graxos), fitosteróis, fibras prebióticas, microor- ganismos probióticos, taurina, resveratrol, aminoácidos, selênio e precurso- res de glutationa, ou proteínas tais como, por exemplo, proteínas de soro de leite.

A composição primária pode adicionalmente compreender um ou mais dos emulsificantes, estabilizadores e outros aditivos. Emulsificado- res compatíveis no campo de alimento são, por exemplo, fosfolipídeos, Ieci- tina, polioxietileno sorbitano mono- ou tristearato, monolaurato, monopalmi- tato, mono- ou trioleato; a mono- ou diglicerida. Qualquer tipo de estabiliza- dor que é conhecido no negócio de alimento, em cosméticos ou em farma- cêuticos, pode ser adicionado. Também, aromatizantes, colorantes e quais- quer outros aditivos conhecidos no negócio de alimento, em cosméticos ou em farmacêuticos, podem ser adicionados. Estes emulsificantes, estabiliza- dores e aditivos podem ser adicionados de acordo com os usos finais das composições primárias.

Em uma concretização alternativa, a presente invenção propor- ciona uma composição oral compreendendo a composição primária acima descrita em um produto alimentício, em um suplemento alimentar, em um produto de alimento de animal doméstico, em uma preparação cosmética, ou em uma preparação farmacêutica.

Em uma concretização preferida, uma composição de alimento para consumo humano pode ser suplementada pela composição primária. Esta composição de alimento pode ser, por exemplo, uma fórmula completa nutricional, um produto de leiteria, uma bebida estável resfriada ou de prate- leira, uma água mineral, uma bebida líquida, uma sopa, um suplemento die- tético, uma reposição de refeição, uma barra nutricional, artigos de confeita- ria, um leite ou um produto de leite fermentado, um iogurte, um pó baseado em leite, um produto de nutrição enteral, uma fórmula para criança, um pro- duto nutricional para criança, um produto de cereal ou um produto baseado em cereal fermentado, um sorvete, um chocolate, café, um produto de culi- nária tal como maionese, purê de tomate, ou temperos de salada ou um ali- mento de animal doméstico.

Para uso em composições de alimento, a composição primária pode ser adicionada aos alimentos ou bebidas acima mencionados de modo a ter uma admissão diária entre cerca de 0,001 e 50 mg de Iicopeno contido na composição primária. Uma admissão diária na ordem de cerca de 5 a 20 mg por dia é preferivelmente considerada.

O suplemento nutricional para administração oral pode ser em cápsulas, cápsulas de gelatina, cápsulas macias, comprimidos, tabletes re- vestidos com açúcar, pílulas, pastas ou pastilhas, gomas, ou soluções bebí- veis ou emulsões, xaropes ou géis, com uma dose de cerca de 0,001% a 100% da composição primária, que pode em seguida ser tomada diretamen- te com água ou por quaisquer outros meios conhecidos. Este suplemento pode também incluir adoçante, um estabilizador, um aditivo, um aromatizan- te ou um colorante. Um suplemento para proposta cosmética pode adicio- nalmente compreender um composto ativo com relação à pele. Deve ser apreciado que os suplementos podem ser produzidos por quaisquer méto- dos conhecidos por aqueles versados na técnica. Em outra concretização, composições farmacêuticas contendo

as composições primárias podem ser administradas para tratamentos profilá- ticos e/ou terapêuticos, em uma quantidade suficiente para curar, ou pelo menos parcialmente parar os sintomas da doença e suas complicações. No presente relatório, uma quantidade adequada para efetuar isto é definida como "uma dose terapeuticamente eficaz". Quantidades eficazs para isto dependerão da severidade da doença e do peso e estado geral do paciente.

Nas aplicações terapêuticas, as composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem ser administradas a um paciente susceptível a, ou, de outro modo, em risco de uma doença particular. Tal quantidade é definida para ser "uma dose profilática eficaz". Neste uso, as quantidades precisas novamente dependem do estado de saúde e do peso do paciente.

Em uma concretização alternativa, as composições primárias da invenção podem ser administradas com um veículo farmacêutico aceitável, a natureza do veículo diferindo com o modo de administração, por exemplo, vias parenteral, intravenosa, oral e tópica (incluindo oftálmica). A formulação desejada pode ser produzida usando-se uma variedade de excipientes inclu- indo, por exemplo, graus farmacêuticos de manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sódio sacarina celulose, carbonato de magnésio. As composi- ções farmacêuticas podem ser um comprimido, uma cápsula, uma pílula, uma solução, uma suspensão, um xarope, um suplemento oral seco, um suplemento oral úmido. Preferivelmente, para seres humanos, as composições farma-

cêuticas de acordo com a presente invenção podem compreender uma quantidade da composição primária conforme descrito acima, para uma ad- ministração diária, de modo que a quantidade de Iicopeno varia de cerca de 0,01 mg a 100 mg. Quando administrada diariamente a animais domésticos, a quantidade de Iicopeno pode variar de cerca de 0,01 mg a 100 mg.

Será apreciado que o técnico versado, baseado em seu próprio conhecimento, selecionará os componentes apropriados e forma galênica para aplicar o composto ativo ao tecido de interesse, por exemplo, a pele, cólon, estômago, rim ou fígado, levando-se em conta a via de administração que pode ser por meio de injeção, aplicação tópica, administração intranasal, administração por sistemas de liberação implantado ou transdermal susten- tado, e similares.

Em outra concretização, a presente invenção proporciona uma composição cosmética compreendendo a composição primária descrita aci- ma. Ela pode ser formulada em loções, xampus, cremes, filtros solares, cre- mes pós-sol, cremes antienvelhecimento e/ou unguentos, por exemplo. Pre- ferivelmente, o teor de composição primária pode ser entre 10-10% e 10% em peso das composições cosméticas. Mais preferivelmente, as composi- ções cosméticas compreendem entre 10-8% e 5% em peso de licopeno. As composições cosméticas que podem ser usadas topicamente podem adicio- nalmente compreender uma gordura ou um óleo que pode ser usado em cosméticos tais como, por exemplo, aqueles mencionados no CTFA work, Cosmetic Ingredients Handbook, Washington.

As composições cosméticas da presente invenção podem tam- bém incluir quaisquer outros ingredientes cosmeticamente ativos adequados. A composição adicionalmente compreende um agente de estruturação e um emulsificante. Outros excipientes, colorantes, fragrâncias ou opacificadores podem também serem adicionados às composições cosméticas. Será apre- ciado que os presentes produtos cosméticos conterão uma mistura de ingre- dientes diferentes conhecida ao técnico especialista, assegurando uma pe- netração rápida da substância objetivo na pele, e impedindo degradação desta durante armazenagem.

Deve também ser compreendido que os conceitos da presente invenção podem, do mesmo modo, serem aplicados como uma terapia adju- vante auxiliando nas medicações atualmente usadas. Devido aos compostos primários da presente invenção poderem ser facilmente administrados juntos com o material de alimento, alimento clínico especial pode ser aplicado con- tendo uma alta quantidade das composições primárias. Deve ser claro que na leitura do presente relatório junto com as reivindicações em anexo o téc- nico especialista considerará uma variedade de alternativas diferentes às concretizações alternativas aqui mencionadas.

A presente invenção adicionalmente refere-se ao uso da com- posição primária, ou a composição oral, ou a composição cosmética descri- tas acima para a preparação de um produto pretendido para proteger os te- cidos da pele contra envelhecimento, em particular para inibir dano à pele e/ou membranas de mucosa pela inibição de colagenases, e aumento da síntese de colágeno. De fato, o uso da composição primária conforme des- crito acima, por exemplo, torna possível aumentar a biodisponibilidade do composto de Iicopeno no corpo para retardar o envelhecimento da pele. As composições primárias podem também serem úteis na prevenção ou trata- mento de peles sensíveis, secas ou reativas, ou para aperfeiçoar a densida- de e firmeza da pele, para melhorar a fotoproteção da pele, para prevenir ou tratar doenças ou enfermidades cardiovasculares e cânceres. Elas têm tam- bém benefícios particulares no cabelo e pelo de animais domésticos, tal co- mo uma densidade aperfeiçoada de cabelo e pelo, diâmetro de fibra, cor, oleosidade, brilho, e uma ajuda para prevenir queda de cabelo ou pelo.

Os efeitos positivos da composição primária da presente inven- ção na pele de seres humanos ou animais domésticos podem ser medidos pelo uso de métodos convencionais, tais como, por exemplo, dose eritemal mínima (MED), colorimetria, perda de água transepidermal, reparo de DNA, medição de produção de interleukins e proteoglicans, ou atividade de cola- genase, função de barreira, ou renovação de célula, ou ecografia ultrassôni- ca.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Estudo da estabilidade de isômeros de Iicopeno

A estabilidade de isômeros de Iicopeno foi avaliada ambos em um solvente orgânico e em um extrato de tomate. Materiais

Oleorresina de tomate rica em Iicopeno foi obtida de Indena

s.p.a (Milan, Itália). Seu teor de Iicopeno total monta em 9,1%, do qual os isômeros todo-E e 5-Z representam 93,5% e 6,5%, respectivamente. Duas oleorresinas isomerizadas foram preparadas por aquecimento de uma sus- pensão de oleorresina de tomate em acetato de etila (1:10 p/p), ou por 1 ho- ra, ou por 48 horas. Após resfriamento à temperatura ambiente, as suspen- sões foram centrifugadas, e acetato de etila nos sobrenadantes recuperados foi removido por destilação sob pressão reduzida.

Di-t-butil-hidróxi-tolueno (BHT) e N-etildiisopropilamina foram de Fluka AG. Todos os solventes eram grau de HPLC e foram usados sem puri- ficação.

Isolamento de Isômeros de Licopeno Puros

Licopenos 5-Z, 9-Z, 13-Z e todo-E puros foram isolados de ole- orresina de tomate isomerizada (submetida a 1 hora de aquecimento), pela coleta de frações contendo os picos correspondentes após separação por HPLC (ver abaixo as condições experimentais). Os picos foram coletados durante dois cursos consecutivos de HPLC e as frações correspondentes foram reunidas. Análise de Licopeno

A quantidade de Iicopeno total foi determinada por HPLC de fa- se reversa em uma pré-coluna C18 (ODS Hypersil, 5 μιη, 20 χ 4 mm; Hewlett Packard, Geneva, Suíça), e uma coluna C18 (Nova pak, 3,9 pm, diâmetro interno χ 300 mm de comprimento, Millipore, Volketswil, Suíça). A separação foi efetuada à temperatura ambiente sob condições isocráticas com uma fa- se móvel consistindo em acetonitrila/tetra-hidrofurano/metanol/ace-tato de amônia 1% (533.5:193.6:53.7:28, pp/pp/pp/pp). A taxa de fluxo de fase mó- vel foi 1,5 mUmin.

Perfis de isômero de Iicopeno foram determinados por HPLC de

fase reversa de acordo com o método descrito por Schierle et al. (Schierle, J., Bretzel, W., Buhler, I., Faccin, N., Hess, D., Steiner, K., Schuep, W. (1997). Food. Chem. 59: 459). Amostras de oleorresinas isomerizadas foram dissolvidas em n-hexano contendo 50 ppm de BHT, e giradas em velocidade máxima em uma centrífuga Eppendorf Lab. Os sobrenadantes resultantes foram imediatamente analisados por HPLC. O sistema de HPLC usado foi um modelo 1100 série Hewlett-Packard, equipado com um detector de série de fotodiodo visível por ultravioleta. Os dados foram simultaneamente adqui- ridos a 470 nm, 464 nm, 346 nm e 294 nm. As amostras (10 pL) foram sepa- radas usando-se uma combinação de três colunas Nucleosil 300-5 (4 mm de diâmetro interno χ 250 mm de comprimento, Macherey-Nagel). A separação foi efetuada à temperatura ambiente sob condição isocrática com uma fase móvel consistindo em n-hexano com 0,15% de N-etildiisopropilamina. A taxa de fluxo foi 0,8 mL/minuto. Isômeros-Z de Iicopeno foram identificados de acordo com os dados da literatura.

Quantidades de isômeros de Iicopeno foram calculadas baseado nas áreas superficiais nos picos de HPLC usando-se o mesmo coeficiente de extração como o todo-E licopeno. Portanto, a concentração de Iicopeno em produtos contendo isômeros-Z é levemente subestimada, visto que é reconhecido que os coeficientes de extinção de isômeros-Z são mais baixos do que aqueles do todo-E isômero. Condições para Testes de Estabilidade A estabilidade dos isômeros de Iicopeno foi investigada ambos em n-hexano e em uma oleorresina de tomate isomerizada por 4 horas de aquecimento em acetato de etila. Para esta proposta, isômeros de Iicopeno puros foram armazenados por 33 dias em n-hexano à temperatura ambiente e na ausência de luz, e a oleorresina de tomate isomerizada foi mantida por 55 dias à temperatura ambiente na ausência de luz. A concentração de Iico- peno total e perfis de isômero de Iicopeno foram medidos em vários interva- los de tempo durante o armazenamento. Resultados

Estabilidade de Isômeros de Licopeno em n-hexano

Os resultados do teste de estabilidade de isômeros de Iicopeno puros durante armazenamento em n-hexano à temperatura ambiente na au- sência de luz são reportados na Tabela 1. Todos os isômeros, isto é, incluí- do o isômero todo-E, suportam uma isomerização geométrica durante arma- zenamento. O 13-Z foi o isômero menos estável: pelo que menos do que 50% de 5-Z, 9-Z e todo-E Iicopeno foram transformados após 33 dias de ar- mazenamento, mais do que 80% de 13-Z Iicopeno foi convertido em outros isômeros durante este período de tempo. Também, a trajetória de transfor- mação foi diferente para o 13-Z Iieopeno comparado aos outros isômeros-Z: enquanto o 13-Z isômero foi principalmente convertido no todo-E isômero, os isômeros 5-Z e 9-Z foram principalmente transformados em outros isômeros- Z durante armazenamento em n-hexano.

Tabela 1 : Estabilidade de isômeros de Iicopeno puros em n-hexano durante armazenamento à temperatura ambiente.

Tempo (dias) Concentração (% de isômeros tol al) Todo E 13-Z 9-Z 5-Z x-Z Todo E Iicopeno O 97,6 1,4 0,5 0,5 0,1 1 86,0 10,1 1,2 1,2 1,5 2 78,4 15,0 1,1 2,6 3,0 5 69,3 19,6 2,2 3,8 5,1 12 67,8 18,2 2,0 6,4 5,6 33 58,7 15,7 3,8 13,4 8,4 5-Z Iicopeno O 1,1 n.d. n.d. 95,5 3,4 1 2,2 n.d. n.d. 84,3 13,5 2 2,4 n.d. n.d. 76,9 20,6 5 3,9 n.d. n.d. 68,4 27,7 12 5,6 1,7 0,7 65,3 26,7 Tempo (dias) Concentração (% de isômeros tol al) Todo E 13-Z 9-Z 5-Z x-Z 33 10,7 2,8 2,3 53,5 30,7 9-Z licopeno O 4,4 0,6 93,3 1,8 0 1 5,8 2,3 87,1 2,1 2,8 2 6,0 3,1 83,5 11,6 5,9 5 5,6 5,2 79,2 1,5 8,6 12 7,0 8,2 66,5 2,3 15,9 33 9,8 10,5 56,0 4,1 19,7 13-Z licopeno O 2,4 96,6 0 0 1,0 1 42,6 57,0 0,4 0 0 2 59,8 38,7 0 0 1,5 5 68,9 23,4 1,5 1,9 4,3 12 65,5 20,8 2,6 5,3 5,8 33 57,0 16,9 4,2 11,7 10,2

Estabilidade de isômeros de Iicopeno em oleorresina de tomate

Os resultados do teste de estabilidade de isômeros de Iicopeno em uma oleorresina de tomate aquecida por 48 horas em acetato de etila são reportadas na Tabela 2. Tabela 2 : Estabilidade de isômeros de Iicopeno em oleorresina de tomate

isomerizada durante armazenamento à temperatura ambiente (n = 2).

Tempo de armazenamento (dias) Licopeno total (mg/g) 13-Z% 9-Z% Todo-E% 5-Z % 0 055,6±3,0 17,4±0,4 32,7±0,7 18,7±0,6 12,0±0,4 3 56,6±0,8 12,4+0,1 31,4±0,3 25,6+0,5 13,0±0,1 58,7±0,4 9,5±0,0 30,6±0,5 30,6±0,6 14,0±0,4 7 59,2±0,1 7,3±0,2 30,9+0,7 32,9±0,3 14,4±0,2 11 59,3±0,8 5,2±0,1 29,4+0,0 36,5±0,1 15,0±0,1 17 60,1 ±0,9 3,3±0,4 29,0±0,4 38,9±0,4 15,4±0,4 58,8±0,9 2,9±0,3 29,2±0,4 39,9±1,3 15,2±0,6 34 51,3±7,7 2,2±0,1 30,0±0,1 40,1 ±0,7 14,1±1,0 47 53,9±1,2 1,9+0,6 30,0±0,3 41,4±0,7 14,6±1,3

O teor de Iicopeno total era estável durante armazenamento à

temperatura ambiente. Contudo, o perfil de isômero de Iicopeno mudou mar- cadamente com uma diminuição de teor de 13-cis Z licopeno, e um aumento do todo-trans E licopeno. O teor de 9-cis Z e 5-cis Z licopeno permaneceu estável durante o período de armazenamento. Conclusão

Ambos os testes de estabilidade têm mostrado que o 13-Z lico- peno era muito menos estável do que ou o 5-Z, ou o 9-Z, ou o todo-E isôme- ros. Consequentemente, uma oleorresina de tomate isomerizada com um baixo nível de 13-Z Iicopeno deve exibir uma boa estabilidade de seu perfil de isômero de licopeno.

Exemplo 2: Oleorresina de tomate isomerizada com biodisponibilidade au- mentada Objetivo:

O objetivo da presente operação foi investigar a biodisponibili- dade de vários isômeros eis Z-Iicopeno em seres humanos. Para elucidar a biodisponibilidade de isômero específico eis Z-Iicopeno em humano, oleorre- sinas de tomate foram enriquecidas em isômeros eis Z-Iicopeno diferentes, alcançando cerca de 60% do teor de licopeno total, isto é, um rico em 5-cis Z licopeno, outro rico em 13-cis Z licopeno, e o último rico em uma mistura de 9-cis Z licopeno e 13-cis Z licopeno. Material e Método Objetivo

Trinta homens saudáveis foram introduzidos no estudo. Os crité-

rios de inclusão foram que os indivíduos devem ser não-vegetarianos e não- fumantes, e que eles não tenham enfermidades metabólicas, tais como dia- betes; hipertensão; doença renal, hepática, ou pancreática; ou úlceras. Os indivíduos eram normolipidêmicos, isto é, eles tinham uma proporção de co- Iesterol de plasma para colesterol HDL < 5,0, e concentrações de triacilglice- rol de plasma (TAG) < 1,5 mmol/L. Devido a grande quantidade de sangue que foi retirada durante o estudo, os indivíduos foram requeridos a terem uma concentração de hemoglobina no sangue > 13 g/dL. Os indivíduos eram excluídos do estudo se eles usassem medicação de alteração de colesterol, ou tratamento hipolidêmico, ou vitamina e suplementos minerais de três me- ses antes do início do estudo até completação do estudo, ou tinham tido ci- rurgia gastrointestinal maior; intensivamente exercitados, tais como corrido em maratonas; e consumido diariamente > 2 copos de vinho (3 dL), > 2 cer- vejas (3 dL), ou > 1 copo de licor. Vinte e sete dos 30 voluntários completa- ram 4 testes pós-jantar. Três voluntários abandonaram o ensaio antes do final pelas seguintes razões: não-disponibilidade, tratamento médico relacio- nado a um dano no olho, náusea relacionada ao consumo de refeições gor- durosas. Os indivíduos eram de 24 ± 1 anos de idade, com um peso corpó- reo de 70 ± 1 kg, e índice de massa corpórea (BMI) de 22,5 ± 0,3 kg/cm2.

O protocolo foi aprovado pelo comitê ético de Marseille (Marseil- le, França). Os indivíduos receberam informação na experiência e esquema do estudo, e deram consentimento informado escrito antes da participação. Eles estavam livres para se retirarem do estudo a qualquer hora. Esquema de Estudo

Este foi um ensaio clínico de passagem de anteparo duplo, ran- domizado, de 4 períodos, 4 tratamentos com um período de solapamento de 3 semanas mínimo. Após uma noite, os indivíduos chegaram no Centro de Ensaio de Farmacologia Clínica e Terapêutica da Universidade de Marseille, e consumiram uma refeição padrão consistindo em 25 mg de Iicopeno incor- porado em 40 g de óleo de amendoim que foi misturado com 70 g de semo- Iina de trigo (cozida com 200 mL de água da torneira). Em adição, eles con- sumiram 40 g de pão, 60 g de ovos brancos cozidos, 125 g de iogurte con- tendo 5 g de açúcar branco, e beberam 330 mL de água (Aquarel, Nestlé). Esta refeição padrão proporcionou 842 kcal (3520 kJ) com a seguinte com- posição nutriente: proteína (11,7%), carboidratos (39,3%) e lipídeos (49,0%). Esta refeição foi consumida dentro de 15 minutos. Nenhum outro alimento foi permitido durante as subsequentes 6 horas, mas os indivíduos foram permi- tidos beber até uma garrafa de água (330 ml) durante as últimas 3 horas de pós-absorção (Aquarel, Nestlé). Suplementos de Licopeno

Quatro produtos de tomate diferentes foram testados proporcio- nando cada um 25 mg de Iicopeno total. Eles consistiam em:

• Pasta de tomate (Thomy, Suiça) contendo Iicopeno a maioria na configuração todo-E,

• Oleorresina de tomate enriquecida com 5-Z licopeno,

• Oleorresina de tomate enriquecida com 13-Z licopeno,

· Oleorresina de tomate enriquecida com uma mistura de 9-Z e

13-Z licopeno. CO

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CO Coleta de Amostras de Sangue

Sangue em jejum foi retirado de uma veia anticubital por punção em veia em um tubo evacuado contendo potássio EDTA/K3 que foi imedia- tamente colocado em um banho de gelo-água e coberto com uma folha de alumínio para evitar exposição à luz. Amostras de sangue em jejum foram colocadas antes, isto é, 20 minutos e 5 minutos antes do consumo da refei- ção padrão, bem como 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas pós- absorção. O tubo contendo sangue foi protegido da luz, armazenado a 4°C e, em seguida, centrifugado dentro de 2 horas (10 minutos, 4°C, 2.800 rpm) para separar o plasma. Um coquetel de inibidores (10 pL/mL) foi adicionado (Cardin et al., Degradação de apoliproteína B-100 de lipoproteínas de baixa densidade de plasma de seres humanos por tecido e kallikreínas de plasma, Biol. Chem 1984; 259:8522-8).

Isolamento de Lipoproteínas Ricas em Triglicerídeo de Plasma (TRL) Após consumo de uma refeição gordurosa, moléculas Iipofílicas

de dieta são incorporadas em chilomícrons, que são secretadas no sangue. As lipoproteínas são separadas por metodologia de ultracentrifugação base- ada em sua densidade. Devido a densidade muito similar de chilomícrons (0,95 g/ml) e VLDL (1,006 g/ml), não é possível separar um do outro e eles são coletados juntas em uma fração denominada lipoproteínas ricas em tri- glicerídeo (TRL). Contudo, no estado pós-jantar, esta fração de TRL de plasma contém principalmente chilomícrons secretados a partir do intestino, que é uma boa avaliação da biodisponibilidade intestinal.

Lipoproteínas ricas em triglicerídeo (TRL) contendo principal- mente chilomícrons com pouca quantidade de VLDL foram imediatamente isoladas por ultracentrifugação conforme segue: 6 mL de plasma foram so- brepostos com uma solução de NaCI A 0,9% e ultracentrifugados por 28 mi- nutos a 32.000 rpm, a 10°C em um rotor SW41TI (Beckman), em uma ultra- centrífuga L7 (Beckman). Imediatamente após centrifugação, as TRL foram aliquotadas e armazenadas a -80°C antes de determinações analíticas. Aná- lises de Iicopeno foram realizadas dentro de 10 dias, e análises de triacilgli- cerol dentro de 30 dias. Determinação Analítica

Triglicerídeos foram ensaiados por um método enzimático e co- lorimétrico usando-se um kit comercial (Kit Bio-Mérieux).

Licopeno total e perfis de isômero de Iicopeno foram determina- dos por método de fase normal e fase reversa, respectivamente (M. Richelle, K. Bortlik, S. Liaedet, C. Hager, P. Lambelet, L.A. Applegate, E.A. Offord, J. Nutr. (2002) 132, 404-408. O teor de Iicopeno total foi calculado como a so- ma dos isômeros de Iicopeno 5-Z, 9-Z, 13-Z, x-Z e todo-trans Ε. O isômero de Iicopeno foi quantificado usando-se o coeficiente de extração de Iicopeno todo-trans E, visto que o valor exato para todo Iicopeno Z individual é ainda desconhecido. O perfil de isômeros de Iicopeno é determinado pela propor- ção de isômero de Iicopeno individual para Iicopeno total expresso na per- centagem. Análise Estatística

A biodisponibilidade do Iicopeno foi avaliada pela medição da

área sob a concentração de Iicopeno em TRL- curva de tempo (AUC). Esta área foi calculada sobre o período de 0-6 horas usando-se o método trape- zoidal (AUC(0-6 horas)). Os dados são apresentados como média ± SEM. A concentração de linha base foi a média das concentrações medidas nas du- as amostras de plasma coletadas antes do consumo da refeição padrão con- tendo 25 mg de Iicopeno a partir da matriz de tomate. Para cada indivíduo e cada tratamento de licopeno, cálculo do AUC(0-6 horas) foi realizado pela subtração da concentração de linha base a partir do valor de concentração medido em cada ponto de tempo pós-absorção. Se este valor foi negativo, ele foi considerado zero.

Para cada tratamento, se a distribuição do AUC(0-6h) foi normal (testes de Skewness e Kurtosis) com ou sem transformação logarítmica, comparação foi realizada pelo uso de um modelo de misturador linear com tratamento como efeito fixo e objeto como efeito aleatório. Todas as análises estatísticas foram feitas com software SAS

(versão 8.2; SAS lnstitute, Cary, NC). O nível de rejeição nos testes estatís- ticos foi igual a 5%. Resultados

Biodisponibilidade de Licopeno

Devido aos quatro tratamentos de tomate induzidos, uma varia- ção da extensão na secreção de triglicerídeo, a biodisponibilidade de Iicope- no foi normalizada usando-se absorção de triglicerídeo (AUC(0-6h)).

A biodisponibilidade de Iicopeno normalizada foi marcadamente diferente entre os quatro tratamentos de tomate (Figura).

Surpreendentemente, o Iicopeno foi melhor biodisponível, por cerca de duas vezes, de oleorresina de tomate rica em 5-Z Iicopeno do que dos outros três tratamentos, isto é, pasta de tomate, oleorresina de tomate rica em 13-Z licopeno, bem como oleorresina de tomate rica em uma mistura de 13-Z e 9-Z licopeno (p<0,0001) (Figura).

Portanto, o licopeno estava similarmente biodisponível da pasta de tomate, como a partir da mistura de oleorresina de tomate 13-Z e 9-Z. O licopeno presente na oleorresina de tomate 13-Z exibiu uma

biodisponibilidade leve, mas significantemente inferior (p<0,03) comparada à pasta de tomate. Conclusão

Estes resultados indicam que a configuração da molécula de Ii- copeno afeta marcadamente o tráfego de licopeno dentro do trato gastroin- testinal e, em conseqüência, a quantidade de licopeno que é absorvida. A biodisponibilidade do licopeno do extrato de tomate rico em 5-Z licopeno é cerca de o dobro daquela da pasta de tomate. Em contraste, o licopeno pre- sente no extrato de tomate rico em uma mistura de 9-Z e 13-Z licopeno é similarmente biodisponível para aquela presente na pasta de tomate, en- quanto a oleorresina de tomate rica em 13-Z licopeno apresenta um licopeno levemente menos biodisponível. Vários autores têm apontado que a presen- ça de Z-Iicopeno em um produto de tomate está associada com um aumento de biodisponibilidade de licopeno. Este é o primeiro estudo demonstrando que o aumento de biodisponibilidade de licopeno está especificamente rela- cionada à configuração do licopeno, isto é, 5-Z licopeno > 9-Z licopeno >13- Z licopeno. Exemplo 3: Extração e isomerização em acetato de etila

52 kg de tomates frescos contendo 100 ppm de Iicopeno são cortados e homogeneizados. Parte da água é destilada sob pressão reduzi- da para obter 18 kg de concentrado de tomate. Este é extraído com 36 I de água saturada acetato de etila; durante extração, a mistura é mantida à tem- peratura ambiente, blindada de luz, e sob agitação por 2 horas. O extrato é, em seguida, separado do concentrado de tomate. O procedimento acima descrito é repetido duas vezes em tal concentrado de tomate, totalmente usando-se 108 I de solvente. Os extratos combinados são lavados em um funil separador com 27 I de água. A fase aquosa é, em seguida, descartada, enquanto a fase orgânica é concentrada sob pressão reduzida para obter uma suspensão com 10% p/v de resíduo seco; o resíduo seco tem um teor total de Iicopeno de 9,1% p/p e um teor de isômero Z de 0,46% p/p. Esta mistura é re-escoada (76°C) sob agitação por 7 dias antes de ser concentra- da para secagem sob pressão reduzida.

46,8 de extrato final com um teor total de Iicopeno de 9% p/p e um teor de isômero Z de 5,59% p/p são obtidos; em particular, o teor de i- sômero E é 3,41% p/p e o teor de isômero 13-Z é 0,16% p/p. O perfil de H- PLC do extrato é reportado na Figura. Exemplo 4 - Extração e isomerização em hexano

kg de tomates frescos contendo 140 ppm de Iicopeno são cortados e homogeneizados. Parte da água é destilada sob pressão reduzi- da para obter 2,5 kg de concentrado de tomate, que é extraído com 12,5 I de hexano. Durante extração, a mistura é mantida à temperatura ambiente, blindada de luz, e sob agitação por 2 horas. O extrato é, em seguida, sepa- rado do concentrado de tomate. O procedimento acima descrito é repetido uma vez em tal concentrado de tomate, totalmente usando-se 25 I de solven- te. Os extratos são combinados e lavados sob pressão reduzida para obter uma solução com 10% p/p de resíduo seco; o resíduo seco tem um teor total de Iicopeno de 9,1% p/p e um teor de isômero Z de 0,46% p/p. Esta mistura é re-escoada (69°C) sob agitação por 6 dias antes de ser concentrada para secagem sob pressão reduzida. 16,5 de extrato final com um teor total de Iicopeno de 9% p/p e um teor de isômero Z de 5,62% p/p são obtidos; em particular, o teor de isômero E é 3,38% p/p e o teor de isômero 13-Z é 0,18% p/p.

Exemplo 5: Isomerizacão em butanol 10 kg de tomates frescos contendo 90 ppm de Iicopeno são cor-

tados e homogeneizados. Parte da água é destilada sob pressão reduzida para obter 3,4 kg de concentrado de tomate, que é extraído com 71 água etil acetato-saturada. Durante extração, a mistura é mantida à temperatura am- biente, blindada de luz, e sob agitação por 2 horas. O extrato é, em seguida, separado do concentrado de tomate. O procedimento acima descrito é repe- tido duas vezes em tal concentrado de tomate, totalmente usando-se 211 de solvente. Os extratos combinados são lavados em um funil separador com 5,3 I de água. A fase aquosa é, então, descartada, enquanto a fase orgânica é concentrada para secagem sob pressão reduzida. O resíduo seco (9,8 g), que tem um teor total de Iicopeno de 7,8% p/p e um teor de isômero Z de 0,40% p/p, é suspenso em 98 ml de n-butanol. A mistura é mantida a 130°C sob agitação por 4 horas antes de ser concentrada para secagem sob pres- são reduzida. 9,8 g de extrato final com um teor total de Iicopeno de 6,35% p/p e um teor de isômero Z de 4,50% p/p são obtidos; em particular, o teor de isômero E é 1,85% p/p e o teor de isômero 13-Z é 0,47% p/p. Exemplo 6: Isomerizacão de Catalisadores Sólidos Materiais

Oleorresina de tomate rica em Iicopeno foi obtida de s.p.a. (Mi- lan, Itália). Seu teor de Iicopeno total importa em 9,1% do qual os isômeros todo-E e 5-Z representam 93,5% e 6,5%, respectivamente. Métodos

Uma suspensão de oleorresina de tomate em acacetato de etila (1:100 p/p) foi filtrada e incubada com 5% de catalisador sólido sob agitação constante à temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi centrifugada e uma alíquota de sobrenadante evapora sob N2 e ressuspensa em n- hexano/BHT. Análise de Licopeno Quantidade de perfis de Iicopeno e isômero de Iicopeno foi de- terminada por HPLC de fase reversa e de fase normal, respectivamente, sob as condições analíticas descritas no exemplo 1. Resultados

Os perfis de isômero de Iicopeno medidos na oleorresina de to-

mate isomerizada por 2 horas à temperatura ambiente usando-se catalisado- res sólidos são reportados na Tabela 4.

Tabela 4. Perfis de isômero de Iicopeno em oleorresinas de tomate isomeri- zadas usando-se catalisadores sólidos.

Catalisador Concentração de Isômero (% de isômeros total) Todo-E 13-Z 9-Z 5-Z x-Z Controle 83,3 3,0 0,9 8,6 4,1 Tonsil Otimo 31,3 7,0 13,4 23,8 24,5 Amberlyst 34,5 4,8 11,2 19,4 30,1

* isômeros de Iicopeno desconhecidos

O Iicopeno foi eficazmente isomerizado durante 2 horas de rea- ção em acetato de etila à temperatura ambiente na presença de, ou Tonsil Ótimo ou Amberlyst 15. Com ambos catalisadores, uma fração grande de isômero de Iicopeno todo-E foi convertida em isômeros Z. Entre os isômeros de Iicopeno identificados, o 5-Z foi majoritariamente formado, seguido pelo 9- Zeo 13-Z, respectivamente; desse modo, a concentração do isômero 13-Z foi, estava, desse modo, abaixo de 10% nas oleorresinas de tomate isomeri- zadas.

Claims (6)

1. Método de manufaturamento de uma composição estável en- riquecida em cis-licopeno (Isômeros Z) por aquecimento prolongado em sol- vente de materiais contendo licopeno.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o material contendo licopeno consiste em tomates, partes de tomates, derivados dos mesmos, ou extratos de tomate em solventes.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o solvente é hidrocarboneto alifático C3-C10, um solvente clorinado C1-C3, um éster C3-C6, uma cetona C3-C8, ou um álcool C1-C8.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que o solvente é selecionado de hexano, tetracloreto de carbono, acetato de etila, acetona, butanol.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, no qual a tempera- tura de aquecimento varia de 50 a 150°C.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, no qual o tempo de aquecimento varia de 4 a 240 horas.