BRPI0712531A2

BRPI0712531A2 - composto de triazolopirazina éteis para o tratamento de doenÇas degenarativas e inflamatàrias

Info

Publication number: BRPI0712531A2
Application number: BRPI0712531-3A
Authority: BR
Inventors: Martins James Inglis Andrews; Paul John Edwards; Mark Stuart Chambers; Wolfgang Schmidt; Juha Andrew Clase; Angus Macleod; Gregory Bar; Kim Louise Hirst
Original assignee: Galapagos Nv
Priority date: 2006-05-31
Filing date: 2007-05-30
Publication date: 2012-12-25
Also published as: NI200800299A; DK2029602T3; CA2653506A1; US20110178067A1; EA200870592A1; US20080090818A1; DE602007006010D1; JP2009538877A; NO20084703L; HRP20100378T1; US7915256B2; WO2007138072A3; MX2008015057A; PT2029602E; AU2007267121A1; US20100298300A1; WO2007138072A2; ATE465164T1; US7501411B2; KR20090026288A

Abstract

COMPOSTOS DE TRIAZOLOPIRAZINA éTEIS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS DEGENERATIVAS E INFLAMATàRIAS. São revelados novos compostos de [1 .2.4]triazoío[1 ,5-a]pirazifla que possuem uma fórmula representada por: Os compostos podem ser preparados como composições farmacêuticas, e podem ser usados para a prevenção e o tratamento de diversas condições em mamíferos, incluindo seres humanos, que incluem, apenas como exemplos não limitantes, dor, inflamação e outros.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS- TOS DE TRIAZOLOPIRAZINA ÚTEIS PARA O TRATAMENTO DE DOEN- ÇAS DEGENERATIVAS E INFLAMATÓRIAS".

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a uma classe de compostos de

triazolopirazina capazes de se ligar ao sítio ativo de uma serina/treonina qui- nase, cuja expressão está envolvida na via que resulta na degradação da matriz extracelular (ECM), degeneração articular e doenças que envolvem essa degradação e/ou inflamação. Doenças que envolvem a degradação da matriz extracelular in-

cluem, sem limitação, artrite psoriática, artrite juvenil, artrite inicial, artrite reativa, osteoartrite, espondilite anquilosante, osteoporose, doenças múscu- lo-esqueléticas como, por exemplo, tendinite e doença periodontal, metásta- ses de câncer, doenças das vias aéreas (COPD, asma), fibrose renal e he- pática, doenças cardiovasculares como, por exemplo, aterosclerose e insufi- ciência cardíaca, e doenças neurológicas como, por exemplo, neuroinflama- ção e esclerose múltipla. Doenças que envolvem primariamente degenera- ção articular incluem, sem limitação, artrite psoriática, artrite juvenil, artrite inicial, artrite reativa, osteoartrite e espondilite anquilosante. A artrite reumatóide (AR) é uma doença articular degenerativa

crônica caracterizada por inflamação e destruição das estruturas articulares. Quando a doença não é tratada, ela leva a uma incapacidade e dor substan- ciais em conseqüência da perda da funcionalidade articular e até mesmo morte prematura. O objetivo do tratamento da AR é, portanto, não apenas tornar mais lenta a evolução da doença, mas conseguir sua remissão a fim de interromper a destruição articular. Além da gravidade do resultado final da doença, a alta prevalência da AR (aproximadamente 0,8% dos adultos é afe- tado em todo o mundo) representa um grande impacto socioeconômico (pa- ra revisões sobre a AR, veja Smolen e Steiner (2003); Lee e Weinblatt (2001); Choy e Panayi (2001); 0'Dell (2004) e Firestein (2003)).

Embora seja amplamente aceito que a AR seja uma doença au- toimune, não há consenso em relação aos mecanismos precisos que levam ao "estágio de iniciação" da doença. Sabe-se que o(s) fator(es) desencade- ante(s) inicial(is) medeia(m), em um hospedeiro predisposto, uma cascata de eventos que leva à ativação de vários tipos de células (células B, células T, macrófagos, fibroblastos, células endoteliais, células dendríticas e outras).

Concomitantemente, é observada uma produção aumentada de várias cito- cinas nas articulações e tecidos que circundam a articulação (por exemplo, TNF-α, IL-6, IL-1, IL-15, IL-18 e outras). Quando a doença progride, a casca- ta de ativação celular e a produção de citocina se tornam autoperpetuantes. Nesse estágio inicial, a destruição de estruturas articulares já é bastante ní- tida. Trinta por cento dos pacientes possuem evidências radiográficas de erosão óssea no momento do diagnóstico, e essa proporção aumenta para 60 por cento após dois anos.

A análise histológica das articulações de pacientes com AR evi- dencia claramente os mecanismos envolvidos nos processos de degradação associados à AR. Essa análise mostra que o principal efetor responsável pela degradação articular associada à AR é o pannus, em que o fibroblasto sinovial, por produção de diversas enzimas proteolíticas, é o mecanismo primário da erosão cartilaginosa e óssea. Uma articulação classicamente contém dois ossos adjacentes que se articulam em uma camada de cartila- gem circundada pela membrana sinovial e pela cápsula articular. No pacien- te com AR avançada, a sinóvia da articulação aumenta de tamanho para formar o pannus, em conseqüência de proliferação dos fibroblastos sinoviais e da infiltração de células mononucleares como, por exemplo, células T, cé- lulas B, monócitos, macrófagos e neutrófilos. O pannus medeia a degrada- ção da cartilagem adjacente, levando ao estreitamento do espaço articular, e possui o potencial para invadir o osso e a cartilagem adjacentes. Na medida em que os tecidos ósseos e cartilaginosos são compostos principalmente por colágeno do tipo I ou II, respectivamente, as propriedades destrutivas e invasivas do pannus são mediadas pela secreção de proteases colagenolíti- cas, principalmente as metaloproteinases da matriz (MMPs). A erosão do osso sob e adjacente à cartilagem também é parte do processo de AR, e resulta principalmente da presença de osteoclastos na interface entre o osso e o pannus. Os osteoclastos são células multinucleadas que, mediante a adesão ao tecido ósseo, formam um compartimento fechado, dentro do qual os osteoclastos secretam proteases (Catepsina Κ, MMP9) que degradam o tecido ósseo. A população de osteoclastos na articulação é anormalmente aumentada pela formação de osteoblastos por células precursoras induzida pela secreção do ativador do receptor de Iigante de NFkB (RANKL) por SFs e células T ativadas.

Vários tipos de colágeno possuem uma participação crucial na definição da estabilidade da matriz extracelular (ECM). O colágeno do tipo I e colágeno do tipo II, por exemplo, são os componentes principais do osso e da cartilagem, respectivamente. As proteínas do colágeno tipicamente se organizam em estruturas multiméricas denominadas fibrilas de colágeno. As fibrilas de colágeno nativas são muito resistentes à clivagem proteolítica. Foram relatados poucos tipos de proteínas de degradação de ECM que pos- suem a capacidade para degradar o colágeno nativo: MMPs e Catepsinas. Dentre as Catepsinas, a catepsina K, que é ativa principalmente em osteo- clastos, é a mais bem caracterizada. Dentre as MMPs, MMP1, MMP2, MMP8, MMP13 e MMP14 sabidamente possuem propriedades colagenolíti- cas. A correlação entre uma expressão aumentada de MMP1 por fibroblas- tos sinoviais (SFs) e a progressão da doença artrítica está bem estabelecida e é um fator preditivo de processos erosivos articulares (Cunnane e outros, 2001). No contexto da AR, portanto, MMP1 representa uma proteína de de- gradação de colágeno altamente relevante. In vitro, o tratamento de SFs cul- tivados com citocinas relevantes na patologia da AR (por exemplo, TNF-α e IL1B) irá aumentar a expressão de MMP1 por essas células (Andreakos e outros, 2003). O monitoramento dos níveis de MMP1 expressos pelos SFs, portanto, é uma informação relevante no campo da AR, na medida em que é indicativo da ativação de SFs em direção a um fenótipo erosivo que, in vivo, é responsável pela degradação da cartilagem. A inibição da expressão de MMP1 por SFs representa uma abordagem terapêutica valiosa em relação ao tratamento da AR.

A atividade das proteínas de degradação de ECM também pode ser um fator etiológico ou correlacionado com a progressão de várias doen- ças diferentes da AR, por exemplo, outras doenças que envolvem a degra- dação das articulações. Essas doenças incluem, sem limitação, artrite psori- ática, artrite juvenil, artrite inicial, artrite reativa, osteoartrite e espondilite an- quilosante. Outras doenças que podem ser tratáveis com compostos identifi- cados de acordo com a presente invenção e com o uso dos alvos envolvidos na expressão de MMPs1 como aqui descritos, são osteoporose, doenças músculo-esqueléticas como, por exemplo, tendinite e doença periodontal (Gapski e outros, 2004), metástases de câncer (Coussens e outros, 2002), doenças das vias aéreas (COPD, asma) (Suzuki e outros, 2004), fibrose pulmonar e renal (Schanstra e outros, 2002), fibrose hepática associada à hepatite C crônica (Reiff e outros, 2005), doenças cardiovasculares como, por exemplo, aterosclerose e insuficiência cardíaca (Creemers e outros, 2001) e doenças neurológicas como, por exemplo, neuroinflamação e escle- rose múltipla (Rosenberg, 2002). Pacientes que sofrem dessas doenças po- dem se beneficiar da estabilização da ECM (por sua proteção contra degra- dação).

A serina/treonina quinase de 471 aminoácidos identificada como Proteína Quinase 5 Ativada por Proteína Quinase Ativada por Mitógeno (MAPKAPK5 ou PRAK) é expressa em um amplo painel de tecidos. A prote- ína contém seu domínio catalítico na extremidade do terminal N e tanto em um sinal de localização nuclear (NLS) quanto em um sinal de exportação nuclear (NES) em sua extremidade do terminal C. A MAPKAPK5 endógena está presente predominantemente no citoplasma, mas o estresse ou a ativa- ção de citocina das células medeia seu deslocamento para o núcleo (New e outros, 2003). Esse evento depende da fosforilação da MAPKAPK5. Thrl 82 é o sítio de fosforilação regulador de MAPKAPK5. Embora a p38a quinase seja capaz de fosforilar MAPKAPK5 em uma situação de superexpressão, experimentos com MAPKAPK5 endógena não apoiam essa hipótese (Shi e outros, 2003). Foram gerados camundongos knockout para MAPKAPK5 que são viáveis e férteis. O fenótipo desses camundongos é bem diferente da- quele de camundongos deficientes em MAPKAPK2, uma quinase relaciona- da à MAPKAPK5 que é regulada por p38a (Shi e outros, 2003). Isso indica que a função de cada proteína é distinta, e que nenhuma quinase pode compensar a atividade da outra. Tomadas em conjunto, MAPKAPK5 e MAPKAPK2 representam alvos distintos com um papel não redundante.

MAPK6 (também denominada ERK3) foi identificada recentemente como um substrato fisiologicamente relevante para MAPKAPK5, definindo uma nova via de transdução de sinal (Seternes e outros, 2004). FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

NSAIDS (fármacos anti-inflamatórios não esteróides) são usados para reduzir a dor associada à AR e melhorar a qualidade de vida dos paci- entes. Esses fármacos, no entanto, não irão interromper a destruição articu- lar associada à AR.

Verificou-se que os corticosteróides diminuem a progressão de AR, detectada radiograficamente, e são usados em doses baixas para tratar parte dos pacientes com AR (30 a 60%). Efeitos colaterais sérios, no entan- to, estão associados ao uso de corticosteróide por longo prazo (escureci- mento da pele, osteoporose, catarata, hipertensão, hiperlipidemia).

DMARDs sintéticos (fármacos anti-reumáticos modificadores da doença) (por exemplo, metotrexato, leflunomida, sulfasalazina) atacam prin- cipalmente o componente imunoinflamatório da AR. Como desvantagem principal, esses fármacos possuem apenas uma eficácia limitada (a destrui- ção articular é mais lenta, mas não bloqueada por DMARDs, de modo que a progressão da doença no longo prazo continua). A ausência de eficácia é indicada pelo fato de que, na média, somente 30% dos pacientes obtêm uma classificação ACR40 após tratamento por 24 meses com metotrexato. Isso significa que, de acordo com o "American College of Rheumatology", somen- te 30% dos pacientes obtêm uma melhora de 50% de seus sintomas (0'Dell e outros, 1996). Além disso, o mecanismo de ação preciso de DMARDs fre- qüentemente não está claro. DMARDs biológicos (Infliximab, Etanercept, Adalimumab, Ritu-

ximab, CTLA4-lg) são proteínas terapêuticas que inativam citocinas (por e- xemplo, TNF-α) ou células (por exemplo, células T ou células B) que possu- em um papel importante na fisiopatologia da AR (Kremer e outros, 2003; Edwards e outros, 2004). Embora a terapia combinada de bloqueadores de TNF-α (Infliximab, Etanercept, Adalimumab) e metotrexato seja o tratamento de AR mais eficaz disponível atualmente, é surpreendente que mesmo essa terapia obtenha uma melhora de somente 50% (ACR40) nos sintomas da doença em 50-60% dos pacientes após tratamento por 12 meses (St. Clair e outros, 2004). Existem alguns avisos de eventos adversos para os fármacos anti-TNF-α, que evidenciam os efeitos colaterais associados a esse tipo de fármaco. O risco aumentado de infecções (tuberculose), eventos hematoló- gicos e distúrbios de desmielinização foram descritos para os bloqueadores de TNF-α (veja também Gomez-Reino e outros, 2003). Além dos efeitos co- laterais sérios, os bloqueadores de TNF-α também compartilham as desvan- tagens gerais da classe biológica das substâncias terapêuticas, que são a forma de administração desagradável (injeções freqüentes acompanhadas por reações no local de infusão) e o alto custo de produção. Agentes mais novos em fase de desenvolvimento avançada têm como alvo moléculas co- estimulantes de células T e células B. Espera-se que a eficácia desses a- gentes seja similar àquela dos bloqueadores de TNF-α. O fato de que várias terapias dirigidas possuem eficácias similares, mas limitadas, sugere que há uma multiplicidade de fatores patogênicos para a AR. Isso também é indica- tivo das deficiências na nossa compreensão sobre os eventos patogênicos relevantes para a AR.

As terapias atuais para a AR não são satisfatórias em função de uma eficácia limitada (não há terapia adequada para 30% dos pacientes). Isso demanda estratégias adicionais para se obter remissão. A remissão é necessária, na medida em que a doença abriga o risco de dano articular progressivo e, dessa forma, incapacidade progressiva. A inibição do compo- nente imunoinflamatório da doença AR, que representa o alvo principal dos fármacos usados atualmente para o tratamento de AR, não resulta em um bloqueio da degradação articular, a característica principal da doença.

U.S. 2005/0009832 descreve imidazolo[1,2-a]pirazina-8-il- aminas substituídas como moduladores de proteína quinases, incluindo ΜΑΡΚΑΡΚ5. W002/056888 descreve inibidores de MAPKAPK5 como modu- Iadores de TNF capazes de regular a expressão de certas citocinas. Ne- nhuma dessas referências da arte estabelecida revela qualquer composto dentro do escopo da classe de compostos aqui descritos abaixo.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção se baseia na descoberta de que MAP- KAPK5 funciona na via que resulta na expressão de MMP1, e que inibidores da atividade de MAPKAPK5 como, por exemplo, os compostos da presente invenção, são úteis para o tratamento de doenças que envolvem a expres- são anormalmente elevada da atividade de MMP.

Os compostos da presente invenção podem ser descritos de forma geral como [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina-8-il-aminas substituídas na posição 5 por um grupo arila e heteroarila, e na posição 8 por um grupo ari- Iamino ou heteroarilaamino. Mais particularmente, a presente invenção está relacionada a

compostos que possuem propriedades inibidoras de metaloproteinase da matriz em uma célula de mamífero, de acordo com a fórmula (I):

\

γ |Χ)χ

(I)

em que:

AeB são independentemente CR2R", NR", oxigênio ou enxofre;

AA é CR2 ou N; D é C=O, CR2R" ou NR";

E é NH ou CR"R6, quando k for zero, e é NH ou CR"R6a, quando k for um;

F é enxofre, oxigênio ou NH; T é oxigênio ou NR;

U, V, W e X são independentemente CRnR7 ou NR"; Y é CR" ou N;

Z é hidrogênio, amino, hidroxila, alcóxi inferior, carbamoíla, car-

boxil, SO2Rz, SO2NRRz, -NR(CO)(CH2)d-Rz, -NRRz, -(CO)-ORz, -(CO)- NR(CH2)d-Rz, ou

R é independentemente hidrogênio ou alquila inferior;

R" é H ou forma uma ligação dupla com um átomo adjacente;

R1 é H; R2; ou alquila inferior, cicloalquila inferior e alquila inferi-

or-cicloalquila inferior, opcionalmente substituído com um ou mais R2;

R3 é H ou forma uma ligação dupla com um R" adjacente;

R2 é H, F, Cl; CN; COOR4; OR4; C(O)N(R4Rs); S(O)2N(R4Rs); alquila inferior; O-alquila inferior; NH-alquila inferior; S-alquila inferior; COO- alquila inferior; 0C(0)-alquila inferior; C(0)N(R4)-alquila inferior; S(0)2N(R4)- alquila inferior; S(0)N(R4)-alquila inferior; S(0)2-alquila inferior; S(0)-alquila inferior; N(R4)S(0)2-alquila inferior; e N(R4)S(0)-alquila inferior; em que cada alquila inferior é opcionalmente substituído com um ou mais de F e Cl;

R4 e R5 são independentemente H; F, Cl; ou alquila inferior, ci-

cloalquila inferior ou alquila inferior-cicloalquila inferior, opcionalmente substi- tuído com um ou mais de F e Cl;

R6 é hidrogênio, amino, hidroxila, carbamoíla, carboxil, SO2R, NRR', -(CO)-OR, ou -(CO)-NRR';

R6a é R6, Cl, F, alcóxi inferior, ciano, trifluormetóxi; ou juntos com o adjacente podem ser -(CHR")n-NR-(CHR")p- e formam um anel heterocícli- co de cinco ou seis membros fundido ao anel ao qual estão ligados;

R7 é independentemente hidrogênio, halogênio, alquila inferior ou alcóxi inferior;

Rz Rz é hidrogênio, alquila inferior, alcanoíla inferior, fenila, 1- alquila inferior pirrolidin-3-ila, pirazola-4-ila, pirazola-2-ila, ou alquila inferior, alcanoíla inferior, fenila, 1-alquila inferior pirrolidin-3-ila, pirazola-4-ila, pirazo- la-2-ila ou pirid-3-ila substituída por um ou mais de hidroxila, amino, mono- ou dialquilamino inferior, acetamidil, alcanoíla inferior, alquila inferior, 4- hidróxi-fenila, 3-aminometilfenil, alquila inferior sulfonila, 4-dialquilaminofenila inferior, pirid-3-ila, 1H-indol-3-ila, morfolin-4-ila;

R e Rz juntos podem ser -(CHR)q-T-(CHR)r- e formam um anel heterocíclico de cinco ou seis membros com o nitrogênio ao qual estão Iiga- dos;

Rz e R7 juntos podem ser -(CHR")n-NR-(CHR")p-, e formam um anel heterocíclico de cinco ou seis membros fundido ao anel ao qual estão ligados;

b e d são independentemente 0 ou 1; desde que pelo menos um de b ou d seja 1;

k é 0 ou 1;

m é 0 ou 1;

η e ρ são independentemente 0, 1 ou 2;

q e r são 1 ou 2; χ é 0 ou 1;

desde que pelo menos um de R7 ou Rz seja diferente de hidro- gênio;

ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, solvato ou pró- fármaco deste.

Outro aspecto da presente invenção consiste em compostos de

acordo com a fórmula III:

R9 (III)

em que,

R1 é H, ou alquila substituída ou não-substituída; e cada um de R8 e R9 é selecionado independentemente de cicloalquila substituída ou não- substituída, heterocicloalquila substituída ou não-substituída, arila substituí- da ou não-substituída, heteroarilaa substituída ou não-substituída; ou um sal, solvato ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste; e estereoisôme- ros, variantes isotópicas e tautômeros destes. Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III,

R8 é selecionado de ciclopentila substituída ou não-substituída, ciclohexila, fenila substituída ou não-substituído, piridila substituída ou não-substituída, pirimidina substituída ou não-substituída e pirazina substituída ou não- substituída, pirrol substituído ou não-substituído, pirazol substituído ou não- substituído e imidazol substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R1 é H, Me, Et, i-Pr ou CF3.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III,

R1 é H.

Outro aspecto da presente invenção está relacionada a compos-

tos de acordo com a fórmula IVa, IVb, IVc ou IVd:

25

(Ras)n

N

J

,-L'

,-N

N

.- N P

(Rae)n

N^

T

R9 IVa

RS IVb

(Rlte)n

N

I

RQ

IVc OU

N

JL

N L

. -·ί· N

-N,.

R9 IVd

e em que L é uma ligação, -CO-, -0(CH2)mr, -CON(H)(CH2)mI- ou - NHCO-; o subscrito m1 é selecionado de 1-4; o anel P é heterocicloalquila substituída ou não-substituída; o subscrito η é selecionado de 1-4; cada R8a é selecio- nado independentemente de hidrogênio, alquila substituída ou não- substituída, alcóxi, ciano, carbamoíla, CHO e halo; e R9 é selecionado inde- pendentemente de arila substituída ou não-substituída e heteroarilaa; ou um sal, solvato ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste; e estereoi- sômeros, variantes isotópicas e tautômeros destes.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas Ml-IVd, R9 é arila substituída ou não-substituída. Em outra modalidade, R9 é fenila substituída ou não-substituído.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas lll-IVd, R9 é heteroarilaa substituída ou não-substituída. Em outra modalida- de, R9 é piridila substituída ou não-substituída. Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas

lll-IVd, R9 é selecionado de fenila substituída ou não-substituído, indolil, isoi- nolil, pirrolil, furanil, tienil, pirazolil, oxazolila e tiazolil.

Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece composi- ções farmacêuticas que compreendem um composto de triazolopirazina da invenção, e um veículo, excipiente ou diluente farmacêutico. Nesse aspecto da invenção, a composição farmacêutica pode compreender um ou mais dos compostos aqui descritos. Além disso, os compostos da presente invenção úteis nas composições farmacêuticas e nos métodos de tratamento aqui descritos são todos farmaceuticamente aceitáveis da forma preparada e u- sada.

Outro aspecto desta invenção está relacionado ao uso do pre- sente composto em um método terapêutico, uma composição farmacêutica, e a fabricação desta composição, útil para o tratamento de doenças que en- volvem inflamação, degradação de colágeno e, em particular, doenças ca- racterísticas de atividade anormal da metaloprotease da matriz (MMP1) e/ou de Proteína Quinase 5 Ativada por Proteína Quinase Ativada por Mitógeno (MAPKAPK5), das quais artrite reumatóide (AR) é uma dessas doença em particular. Esta invenção também está relacionada aos processos para a preparação dos presentes compostos. Outros objetivos e vantagens ficarão evidentes para aqueles

versados na técnica considerando-se a descrição detalhada a seguir, que é feita com referência aos desenhos ilustrativos que a acompanham. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Figura 1. Esse diagrama mostra as acentuadas diferenças histo- lógicas entre uma articulação saudável e a de um paciente com AR.

Figura 2. Esse gráfico mostra a expressão aumentada de MMP1 em fibroblastos sinoviais desencadeada com citocinas envolvidas na patolo- gia da artrite reumatóide.

Figura 3. Esse gráfico mostra a inibição dose-dependente da expressão de MMP1 induzida por "desencadeamento por TNF-α" por SFs por um composto anti-inflamatório conhecido. Figura 4. Esse gel mostra a redução, no nível protéico, da ex-

pressão de MAPKAPK5 em SFs por infecção das células com MAPKAPK5 direcionada a vírus de Ad-siRNA.

Figura 5. Esse gráfico mostra a redução de níveis de expressão de MMP1 induzida por "desencadeador complexo" por SFs por uma MAP- KAPK5 direcionada a vírus de Ad-siRNA. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Definições

Na descrição dos compostos, das composições farmacêuticas que contêm esses compostos e dos métodos de utilização desses compos- tos e composições, os seguintes termos possuem os seguintes significados, a menos que indicado de forma diferente. Deve-se entender também que qualquer uma das porções definidas abaixo podem ser substituídas com di- versos substituintes, e que as respectivas definições visam incluir essas por- ções substituídas dentro de seu escopo. Apenas como exemplo não Iimitan- te, esses substituintes podem incluir, por exemplo, halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo), -CN, -CF3, -OH, -OCF3, C2-C6 alquenila, C3-C6 alquinil, Ci-C6 alcóxi, arila e di-CrC6 alquilamino. Deve-se entender ainda que os termos "grupos" e "radicais", quando aqui usados, podem ser considerados de forma intercambiável.

"Alcóxi" significa alquila-O-. Alcóxi exemplar inclui metóxi, etóxi,

n-propóxi, i-propóxi, n-butóxi e heptóxi. Grupos alcóxi preferidos são alcóxi inferior. "Alquila" significa hidrocarboneto alifático linear ou ramificado que possui 1 a cerca de 20 átomos de carbono. Alquila preferida possui 1 a cerca de 12 átomos de carbono. É ainda mais preferido alquila inferior. Ra- mificado significa que um ou mais grupos alquila inferior como, por exemplo, metila, etila ou propil, estão anexados a uma cadeia alquila linear.

"Alquilamino" significa alquila-NH-. Alquilamino preferido é (Cr C6)-alquilamino. Alquilamino exemplar inclui metilamino e etilamino.

"Amino alcanoíla inferior" significa NH2-R-CO-, em que R é alqui- Ieno inferior. Grupos preferidos incluem aminoatanoíla e aminoacetila. "Carbamoíla alquila inferior" significa o radical NH2COaIquiIa

inferior-. Grupos preferidos incluem carbamoiletila e carbamoilmetil.

"Éster de carbóxi alquila inferior" significa um éster de alquila inferior de um carbóxi radical, grupo -C00-.

"Compostos da presente invenção", e expressões equivalentes, visam englobar compostos de Fórmula (I, Il ou III), como descritos anterior- mente, cuja expressão inclui os pró-fármacos, os sais farmaceuticamente aceitáveis e os solvatos, por exemplo, hidratos, quando o contexto assim o permitir. Da mesma forma, referências a intermediários, sejam eles próprios reivindicados ou não, visa englobar seus sais e solvatos, quando o contexto assim o permitir.

"Expressão" significa expressão endógena.

"Halo" ou "halogênio" significa flúor, cloro, bromo ou iodo.

"Hidrogênio" significa, no contexto de um substituinte, que -H está presente na posição do composto, e também inclui seu isótopo, deuté- rio.

"Alcanoíla amino inferior" significa um grupo amino com um gru- po funcional orgânico R-CO-, em que R representa um grupo alquila inferior.

"Alquila inferior" significa 1 a cerca de 6 átomos de carbono em uma cadeia alquila linear que pode ser linear ou ramificada. "Alcóxi inferior" significa 1 a cerca de 6 átomos de carbono em

uma cadeia alquila linear que pode ser linear ou ramificada, e que está liga- da por um átomo de oxigênio. "Alquila inferior sulfonamida" refere-se a uma alquila inferior a- mida de sulfonamida da fórmula -SO2NR4R*, em que R* é hidrogênio ou al- quila inferior, e pelo menos um R* é alquila inferior.

"Profilaxia" significa uma medida tomada para a prevenção de uma doença.

"Solvato" significa a associação física de um composto útil nesta invenção com uma ou mais moléculas solventes. Essa associação física in- clui ligação de hidrogênio. Em certos casos, o solvato será capaz de isola- mento, por exemplo, quando uma ou mais moléculas solventes são incorpo- radas na rede cristal do sólido cristalino. "Solvato" engloba tanto solvatos de fase em solução quanto isoláveis. Os compostos da invenção podem ser preparados, por exemplo, em forma cristalina, e podem ser solvatados ou hidratados. Solvatos adequados incluem solvatos farmaceuticamente aceitá- veis, por exemplo, hidratos, e ainda incluem tanto solvatos estequiométricos quanto solvatos não estequiométricos. Solventes convencionais incluem á- gua, etanol, ácido acético, e semelhantes; portanto, solvatos representativos incluem hidratos, etanolatos e metanolatos.

"Substituído" significa que um átomo ou grupo de átomos em uma molécula é trocado por outro átomo ou grupo. "Sulfonamida" refere-se a um grupo de compostos que contêm o

grupo químico -SO2NH2.

Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" significa aquela quan- tidade de um fármaco ou agente farmacêutico que irá despertar a resposta biológica ou médica de um indivíduo que está sendo buscada por um médico ou outro profissional. A "quantidade terapeuticamente eficaz" poderá variar, dependendo do composto, da doença e de sua gravidade, e da idade, do peso etc., do indivíduo a ser tratado. Em particular, com relação ao trata- mento de uma condição de doença caracterizada pela degradação da matriz extracelular, o termo "quantidade inibidora eficaz de metaloprotease da ma- triz" significa aquela quantidade eficaz de um composto da presente inven- ção que irá produzir uma diminuição biologicamente significativa na produ- ção de MMP-1 nos tecidos do indivíduo afetados pela doença, de tal forma que a degradação da matriz extracelular seja significativamente reduzida. Um composto que possui propriedades inibidoras da metaloprotease da ma- triz ou um "composto inibidor de metaloprotease da matriz" significa um composto da presente invenção que, quando fornecido a uma célula em quantidades eficazes, é capaz de causar uma diminuição biologicamente significativa na produção de MMP-I nessas células.

"Arila" refere-se a um grupo hidrocarboneto aromático monova- Iente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um sistema de anel aromático parente. Grupos arila típicos incluem, sem limitação, grupos derivados de aceantrileno, acenaftileno, ace- fenantrileno, antraceno, azuleno, benzeno, criseno, coroneno, fluorantreno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexaleno, as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentalenp, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno, e semelhan- tes. Particularmente, um grupo arila compreende de 6 a 14 átomos de car- bono.

"Arila substituída" inclui aqueles grupos citados na definição de "substituído" apresentada anteriormente e, particularmente, refere-se a um grupo arila que pode opcionalmente ser substituído por 1 ou mais substituin- tes, por exemplo, de 1 a 5 substituintes, particularmente 1 a 3 substituintes, selecionados do grupo que consiste em acila, acilamino, acilóxi, alquenila, alquenila substituída, alcóxi, alcóxi substituído, alcoxicarbonila, alquila, aqui- Ia substituída, alquinil, alquinila substituída, amino, amino substituído, ami- nocarbonil, aminocarbonilamino, aminocarbonilóxi, arila, arilóxi, azido, car- boxil, ciano, cicloalquila, cicloalquila substituída, halogênio, hidroxila, nitro, tioalcóxi, tioalcóxi substituído, tioarilóxi, tiol, alquila-S(O)-, arila-S(O)-, alqui- Ia-S(O)2- e arila-S(0)2-.

"Bicicloarila" refere-se a um grupo hidrocarboneto aromático mo- novalente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um sistema de anel bicicloaromático parente. Grupos bicicloarila típicos incluem, sem limitação, grupos derivados de indano, inde- no, naftaleno, tetrahidronaftaleno, e semelhantes. Particularmente, um grupo arila compreende de 8 a 11 átomos de carbono.

"Biciclo-heteroarilaaa" refere-se a um grupo biciclo- heteroaromático monovalente derivado pela remoção de um átomo de hidro- gênio de um único átomo de um sistema de anel biciclo-heteroaromático pa- rente. Grupos biciclo-heteroarilaa típicos incluem, sem limitação, grupos de- rivados de benzofurano, benzimidazol, benzindazol, benzodioxano, cromeno, cromano, cinolina, ftalazina, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, iso- cromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, benzotiazol, benzoxazol, naftiri- dina, benzoxadiazol, pteridina, purina, benzopirano, benzopirazina, piridopi- rimidina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, benzomorfano, te- trahidroisoquinolina, tetrahidroquinolina, e semelhantes. De preferência, o grupo biciclo-heteroarilaa é biciclo-heteroarilaa entre 9-11 membros, com heteroarila de 5-10 membros sendo particularmente preferido. Grupos bici- clo-heteroarilaa específicos são aqueles derivados de benzotiofeno, benzo- furano, benzotiazol, indol, quinolina, isoquinolina, benzimidazol, benzoxazol e benzodioxano.

"Carbamoíla" refere-se ao radical -C(O)N(R42)2, em que cada grupo R42 é independentemente hidrogênio, alquila, cicloalquila ou arila, co- mo aqui definidos, que podem ser opcionalmente substituídos, como aqui definidos. Em uma modalidade específica, o termo "carbamoíla" refere-se a -C(O)-NH2.

"Cicloalquila" refere-se aos grupos hidrocarbila cíclicos que pos- suem de 3 a cerca de 10 átomos de carbono, e que possuem um único anel cíclico ou múltiplos anéis condensados, incluindo sistemas de anel fundidos e em ponte, que podem opcionalmente ser substituídos com de 1 a 3 grupos alquila. Tais grupos cicloalquila incluem, apenas como exemplo, estruturas em anel único como, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo- octila, 1-metilciclopropila, 2-metilciclopentila, 2-metilciclooctila, e semelhan- tes, e estruturas em anéis múltiplos como, por exemplo, adamantanil, e se- melhantes.

"Cicloalquila substituída" inclui aqueles grupos citados na defini- ção de "substituído" apresentada anteriormente e, particularmente, refere-se a um grupo cicloalquila que possui 1 ou mais substituintes, por exemplo, de 1 a 5 substituintes e, particularmente, de 1 a 3 substituintes, selecionados do grupo que consiste em acila, acilamino, acilóxi, alcóxi, alcóxi substituído, al- coxicarbonila, alcoxicarbonilaamino, amino, amino substituído, aminocarbo- nil, aminocarbonilamino, aminocarbonilóxi, arila, arilóxi, azido, carboxil, cia- no, cicloalquila, cicloalquila substituída, halogênio, hidroxila, ceto, nitro, tioal- cóxi, tioalcóxi substituído, tioarilóxi, tioceto, tiol, alquila-S(O)-, arila-S(O)-, alquila-S(0)2- e arila-S(0)2-. "Substituído" refere-se a um grupo no qual um ou mais átomos

de hidrogênio são, cada um independentemente, substituídos com o mesmo substituinte ou com substituinte(s) diferente(s). Substituintes típicos incluem, sem limitação, -X, -R46, -O , =0, -OR46, -SR46, -S , =S, NR46R47, =NR46, -CX3, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, -N3, -S(O)2O , S(O)2OH, -S(O)2R461 -OS(O2)O-, -OS(O)2R46, -P(0)(0-)2, -P(0)(0R46)(0-), OP(O)(OR46)(OR47)1 - C(O)R46, -C(S)R46, -C(O)OR46, -C(O)NR46R47, -C(O)O , C(S)OR46, - NR48C(O)NR46R47, -NR48C(S)NR46R47, -NR49C(NR48)NR46R47 e C(NR48)NR46R47, em que cada X é independentemente um halogênio; cada R46, R47, R48 e R49 é, independentemente, hidrogênio, alquila, aquila substi- tuída, arila, aquila substituída, arilalquila, aquila substituída, cicloalquila, a- quila substituída, ciclo-heteroalquila, ciclo-heteroalquila substituído, hetero- alquil, heteroalquil substituído, heteroarila, heteroarila substituído, heteroari- laalquila, heteroarilaalquila substituído, -NR50R51, -C(O)R50 ou S(O)2R50 ou, opcionalmente, R50 e R51 juntos com o átomo aos quais estão, ambos, ane- xados, formam um anel ciclo-heteroalquila ou ciclo-heteroalquila substituído; e R50 e R51 são independentemente hidrogênio, alquila, aquila substituída, arila, aquila substituída, arilalquila, aquila substituída, cicloalquila, aquila substituída, ciclo-heteroalquila, ciclo-heteroalquila substituído, heteroalquil, heteroalquil substituído, heteroarila, heteroarila substituído, heteroarilaalquila ou heteroarilaalquila substituído.

Exemplos de arilas substituídas representativas incluem os se- guintes:

-Rsa

R53 ' -RS3 ~ - .R53

Nessas fórmulas, um de R52 e R53 pode ser hidrogênio, e pelo menos um de R52 e R53 é, cada independentemente, selecionado de alquila alquenila, alquinil, ciclo-heteroalquila, alcanoíla, alcóxi, arilóxi, heteroarilaóxi alquilamino, arilamino, heteroarilaamino, NR54COR551 NR54SOR55 NR54SO2R57, COO-alquila, COO-arila, CONR54R55, CONR54OR55, NR54R55 SO2NR54R551 S-alquila, S-alquila, SOalquil, S02alquil, S-arila, SO-arila S02arila; ou R52 e R53 podem ser unidos para formar um anel cíclico (satura- do ou insaturado) de 5 a 8 átomos, contendo opcionalmente um ou mais he- teroátomos selecionados do grupo que consiste em Ν, O ou S. R54, R55 e R56 são, independentemente, hidrogênio, alquila, alquenila, alquinil, perfluoral- quil, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila, arila substituída, heteroarila, aquila substituída ou heteroalquil, ou semelhantes.

"Hetero", quando usado para descrever um composto ou um grupo presente em um composto, significa que um ou mais átomos de car- bono no composto ou grupo foi substituído por um heteroátomo de nitrogê- nio, oxigênio ou enxofre. O termo "hetero" pode ser aplicado a qualquer um dos grupos hidrocarbila descritos acima como, por exemplo, alquila, por e- xemplo, heteroalquil, cicloalquila, por exemplo, ciclo-heteroalquila, arila, por exemplo, heteroarila, cicloalquenil, ciclo-heteroalquenil, e semelhantes, que possuem de 1 a 5, e, especialmente, de 1 a 3 heteroátomos.

"Heteroarila" refere-se a um grupo heteroaromático monovalente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de um sistema de anel heteroaromático parente. Grupos heteroarila típicos in- cluem, sem limitação, grupos derivados de acridina, arsindol, carbazol, β- carbolina, cromano, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazol, indol, indo- lina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinoli- na, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, pirimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quino- lizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno, e seme- lhantes. De preferência, o grupo heteroarila é heteroarila de 5-15 membros, com heteroarila de 5-10 membros sendo particularmente preferido. Grupos heteroarila preferidos são aqueles derivados de tiofeno, pirrol, benzotiofeno, benzofurano, indol, piridina, quinolina, imidazol, oxazol e pirazina.

Exemplos de heteroaris representativos incluem os seguintes:

GC- CC- CO

em que cada Y é selecionado de carbonila, N, NR58, O e S; e R58 é inde- pendentemente hidrogênio, alquila, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila, he- teroarila, heteroalquil, ou semelhantes. Como aqui usado, o termo "ciclo-heteroalquila" refere-se a um

anel heterocíclico não aromático estável e anéis fundidos que contêm um ou mais heteroátomos selecionados independentemente de N, O e S. Um sis- tema de anel heterocíclico fundido pode incluir anéis carbocíclicos e só pre- cisa incluir um anel heterocíclico. Exemplos de anéis heterocíclicos incluem, sem limitação, piperazinil, homopiperazinil, piperidinil e morfolinil, e são mos- trados nos seguintes exemplos ilustrativos: em que cada X é selecionado de CR582, NR581 O e S; e cada Y é selecionado de NR58, O e S; e R58 é independentemente hidrogênio, alquila, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila, heteroarila, heteroalquil, ou semelhantes. Esses anéis ciclo-heteroalquila podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em acila, acilamino, acilóxi, alcóxi, alcóxi substituído, alcoxicarbonila, alcoxicarbonilaamino, amino, ami- no substituído, aminocarbonil, aminocarbonilamino, aminocarbonilóxi, arila, arilóxi, azido, carboxil, ciano, cicloalquila, cicloalquila substituída, halogênio, hidroxila, ceto, nitro, tioalcóxi, tioalcóxi substituído, tioarilóxi, tioceto, tiol, al- quila-S(O)-, arila-S(O)-, alquila-S(0)2- e arila-S(0)2-. Grupos substituintes incluem carbonila ou tiocarbonil, os quais fornecem, por exemplo, derivados de Iactam e uréia.

Exemplos de ciclo-heteroalquenilas representativos incluem os seguintes:

o o o

Y N Y

em que cada X é selecionado de CR582, NR58, O e S; e cada Y é selecionado de carbonila, N, NR581 O e S; e R58 é independentemente hidrogênio, alquila, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila, heteroarila, heteroalquil, ou semelhan- tes. Exemplos de aris representativos que possuem substituição que contém he- teroátomos incluem os seguintes:

Y

em que cada X é selecionado de C-R582, NR581 O e S; e cada Y é seleciona- do de carbonila, NR581 O e S; e R58 é independentemente hidrogênio, alquila, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila, heteroarila, heteroalquil, ou semelhan- tes.

Aqueles versados na técnica de síntese orgânica irão reconhe- cer que o número máximo de heteroátomos em um anel heterocíclico está- vel, quimicamente factível, seja ele aromático ou não aromático, é determi- nado pelo tamanho do anel, pelo grau de insaturação e pela valência dos heteroátomos. Em geral, um anel heterocíclico pode ter de um a quatro hete- roátomos, desde que o anel heteroaromático seja quimicamente factível e estável.

O termo "farmaceuticamente aceitável" significa aprovado por uma agência reguladora do governo federal ou estadual, ou listado na "U.S. Pharmacopoeia" ou em outra farmacopéia geralmente reconhecida para uso em animais e, mais particularmente, em seres humanos.

O termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aos sais de adição de ácidos inorgânicos e orgânicos atóxicos, e sais de adição de base, de compostos da presente invenção; em particular, eles são farmaceutica- mente aceitáveis e possuem a atividade farmacológica desejada do compos- to parente. Esses sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação finais de compostos úteis na presente invenção. Tais sais inclu- em: (1) sais de adição de ácido, formados com ácidos inorgânicos como, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, á- cido fosfórico, e semelhantes; ou formados com ácidos orgânicos como, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido hexanóico, ácido ciclopenta- nopropiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido lático, ácido malônico, ácido succínico, ácido málico, ácido maléico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil) benzóico, ácido ci- nâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido 1,2-etano-dissulfônico, ácido 2-hidroxietanossulfônico, ácido benze- nossulfônico , ácido 4-clorobenzenossulfônico, ácido 2-naftalenossulfônico, ácido 4-toluenossulfônico, ácido canforsulfônico, ácido 4-metilbiciclo[2.2.2]- oct-2-eno-1-carboxílico, ácido glucoheptônico, ácido 3-fenilpropiônico, ácido trimetilacético, ácido butilacético terciário, ácido Iauril sulfúrico, ácido glucô- nico, ácido glutâmico, ácido hidroxinaftóico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucônico, e semelhantes; ou (2) sais formados quando um próton aci- dífero presente no composto parente é substituído por um íon metálico, por exemplo, um íon de metal alcalino, um íon de metal alcalino terroso, ou um íon de alumínio; ou se coordena com uma base orgânica como, por exem- plo, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, N-metilglucamina, e seme- lhantes. Sais ainda incluem, apenas como exemplo, sais de sódio, potássio, cálcio, magnésio, amônio, tetraalquilamônio, e semelhantes; e, quando o composto contém uma funcionalidade básica, sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos atóxicos como, por exemplo, cloridrato, hidrobrometo, tartarato, mesilato, acetato, maleato, oxalato, e semelhantes. O termo "cátion farma- ceuticamente aceitável" refere-se a um contra-íon catiônico atóxico aceitável de um grupo funcional acidífero. Esses cátions são exemplificados por cá- tions de sódio, potássio, cálcio, magnésio, amônio, tetraalquilamônio, e se- melhantes.

O termo "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um diluente, adjuvante, excipiente ou veículo com o qual um composto da in- venção é administrado.

O temo "que evita" ou "prevenção" refere-se a uma redução no risco de adquirir uma doença ou um distúrbio (ou seja, que faz com que pelo menos um dos sintomas clínicos da doença não se desenvolva em um indi- víduo que pode ser exposto ou predisposto à doença, mas que ainda não apresenta ou exibe os sintomas da doença).

O termo "Pró-fármacos" refere-se aos compostos, incluindo deri- vados dos compostos da invenção, que possuem grupos cliváveis e que se transformam, por solvólise ou sob condições fisiológicas, nos compostos da invenção que são farmaceuticamente ativos in vivo. Exemplos destes inclu- em, sem limitação, derivados de éster de colina, e semelhantes, ésteres de N-alquilmorfolino, e semelhantes.

O termo "indivíduo" inclui seres humanos. Os termos "ser huma-

no", "paciente" e "indivíduo" são aqui utilizados de forma intercambiável.

O termo "que trata" ou "tratamento" de qualquer doença ou dis- túrbio refere-se, em uma modalidade, à melhora da doença ou do distúrbio (ou seja, interrupção ou redução do desenvolvimento da doença, ou de pelo menos um dos sintomas clínicos desta). Em outra modalidade, "que trata" ou "tratamento" refere-se à melhora de pelo menos um parâmetro físico, que pode não ser perceptível pelo indivíduo. Ainda em outra modalidade, "que trata" ou "tratamento" refere-se à modulação da doença ou do distúrbio, seja fisicamente (por exemplo, estabilização de um sintoma discernível), fisiologi- camente, (por exemplo, estabilização de um parâmetro físico), ou ambos. Ainda em outra modalidade, "que trata" ou "tratamento" refere-se ao retardo do surgimento da doença ou do distúrbio.

Outros derivados dos compostos desta invenção possuem ativi- dade tanto em suas formas ácidas quanto nas formas de derivados ácidos, mas a forma sensível ao ácido freqüentemente oferece vantagens em ter- mos de solubilidade, compatibilidade de tecido ou liberação retardada no organismo dos mamíferos (veja, Bundgard, H., "Design of Prodrugs", pp. 7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdã 1985). Pró-fármacos incluem derivados de ácidos bem-conhecidos por aqueles versados na técnica como, por exemplo, éste- res preparados por reação do ácido parente com um álcool adequado, ou amidas preparadas por reação do composto ácido parente com uma amina substituída ou não-substituída, ou anidridos ácidos, ou anidridos mistos. És- teres, amidas e anidridos alifáticos ou aromáticos simples, derivados de gru- pos acidíferos pendentes nos compostos desta invenção são pró-fármacos preferidos. Em alguns casos, é desejável preparar pró-fármacos do tipo éster duplo como, por exemplo, (acilóxi)alquila ésteres ou ((alcoxicarboni- la)óxi)alquila ésteres. Preferem-se os Ci a C8 alquila, C2-C8 alquenila, arila, C7-C12 arila substituída e C7-Ci2 arilalquiia ésteres dos compostos da inven- ção.

Como aqui usado, o termo "variante isotópica" refere-se a um composto que contém proporções não-naturais de isótopos em um ou mais dos átomos que constituem esse composto. Por exemplo, uma "variante iso- tópica" de um composto pode conter um ou mais isótopos não radioativos como, por exemplo, deutério (2H ou D), carbono 13 (13C), nitrogênio-15 (15N), ou semelhantes. Será subentendido que, em um composto em que é feita essa substituição isotópica, os átomos seguintes, quando presentes, podem variar, de tal forma que, por exemplo, qualquer hidrogênio pode ser 2H/D, qualquer carbono pode ser 13C ou qualquer nitrogênio pode ser 15N1 e que a presença e a colocação desses átomos podem ser determinadas tendo co- mo base os conhecimentos existentes na técnica. Da mesma forma, a in- venção pode incluir a preparação de variantes isotópicas com radioisótopos, quando, por exemplo, os compostos resultantes forem ser usados para es- tudos sobre a distribuição de fármaco e/ou substrato nos tecidos. Os isóto- pos radioativos trítio, ou seja, 3H, e carbono-14, ou seja, 14C, são particular- mente úteis para essa finalidade em função de sua facilidade de incorpora- ção e meios rápidos de detecção. Além disso, podem ser preparados com- postos que são substituídos com isótopos emissores de pósitrons como, por exemplo, 11C, 18F, 15O e 13N, e seriam úteis em estudos de Topografia por Emissão de Pósitrons (PET) para o exame de ocupação de receptor de substrato.

Todas as variantes isotópicas dos compostos aqui apresenta- dos, sejam elas radioativas ou não, visam ser englobadas dentro do escopo da invenção.

Deve-se entender também que compostos que possuem a mesma fórmula molecular, mas que diferem na natureza ou seqüência de ligação de seus átomos ou no arranjo de seus átomos no espaço, são de- nominados "isômeros". Isômeros que diferem no arranjo de seus átomos no espaço são denominados "estereoisômeros".

Estereoisômeros que não são imagens especulares entre eles são denominados "diastereoisômeros", e aqueles que não são imagens es- peculares superponíveis entre eles são denominados "enantiômeros". Quan- do um composto possui um centro assimétrico, por exemplo, ele está ligado a quatro grupos diferentes, é possível um par de enantiômeros. Um enanti- ômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta de seu centro as- simétrico, e é descrito pelas regras de sequenciamento R- e S- de Cahn e Prelog, ou pela forma na qual a molécula gira o plano da luz polarizada e designado como destro-rotatório ou levorrotatório (ou seja, como isômeros (+) ou (-), respectivamente). Um composto quiral pode existir como enantiô- mero individual ou como uma mistura deste. Uma mistura que contém pro- porções iguais dos enantiômeros é denominada uma "mistura racêmica".

"Tautômeros" referem-se aos compostos que são formas inter- cambiáveis de uma estrutura do composto em particular, e que variam no deslocamento de átomos de hidrogênio e elétrons. Dessa forma, duas estru- turas podem estar em equilíbrio por meio do movimento de π elétrons e um átomo (normalmente H). Por exemplo, enóis e cetonas são tautômeros, na medida em que eles são rapidamente inter-convertidos por tratamento com ácido ou base. Outro exemplo de tautomerismo são as formas aci- e nitro- de fenilnitrometano, que são formadas, do mesmo modo, por tratamento com ácido ou base.

Formas tautoméricas podem ser relevantes para a obtenção da reatividade química e atividade biológica ótimas de um composto de interes- se.

Os compostos desta invenção podem possuir um ou mais cen- tros assimétricos; esses compostos podem, portanto, ser produzidos como estereoisômeros (R)- ou (S)- individuais, ou como misturas destes. A menos que indicado de forma diferente, a descrição ou denominação de um com- posto em particular no relatório descritivo e nas reivindicações visa incluir enantiômeros individuais e misturas, racêmicas ou de outro tipo, destes. Os métodos para a determinação de estereoquímica e para a separação de es- tereoisômeros são bem-conhecidos na técnica. OS COMPOSTOS A presente invenção se baseia na descoberta de que MAP- KAPK5 funciona na via que resulta na expressão de MMP1, e que inibidores da atividade de MAPKAPK5 como, por exemplo, os compostos da presente invenção, são úteis para o tratamento de doenças que envolvem a expres- são anormalmente elevada da atividade de MMP.

Os compostos da presente invenção podem ser descritos de forma geral como [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina-8-il-aminas substituídas na posição 5 por um grupo arila e heteroarila, e uma substituição na posição 8 por um grupo arilamino ou heteroarilaamino.

Mais particularmente, a presente invenção está relacionada a

compostos que possuem propriedades inibidoras de metaloproteinase da

matriz em uma célula de mamífero, de acordo com a fórmula (I):

ζ

I

V |X)x ΰχ^νν

em que:

k for um;

AeB são independentemente CR2R", NR", oxigênio ou enxofre; AA é CR2 ou N; D é C=O, CR2R" ou NR";

E é NH ou CR"R6, quando k for zero, e é NH ou CR"R6a, quando

F é enxofre, oxigênio ou NH; T é oxigênio ou NR; U, V, W e X são independentemente CFTR7 ou NR";

Y é CR" ou N;

Z é hidrogênio, amino, hidroxila, alcóxi inferior, carbamoíla, car- boxil, SO2Rz, SO2NRRz, -NR(CO)(CH2)d-Rz, -NRRz, -(CO)-ORz, -(CO)- NR(CH2)d-Rz, ou;

R é independentemente hidrogênio ou alquila inferior;

R" é H ou forma uma ligação dupla com um átomo adjacente;

R1 é H; R2; ou alquila inferior, cicloalquila inferior e alquila inferi- or-cicloalquila inferior, opcionalmente substituído com um ou mais R2; R3 é H ou forma uma ligação dupla com um R" adjacente;

R4 e R5 são independentemente H; F, Cl; ou alquila inferior, ci- cloalquila inferior ou alquila inferior-cicloalquila inferior opcionalmente substi- tuído com um ou mais de F e Cl; R6 é hidrogênio, amino, hidroxila, carbamoíla, carboxil, SO2R,

NRR', -(CO)-OR, ou -(CO)-NRR';

R6a é R6, Cl, F, alcóxi inferior, ciano, trifluormetóxi; ou junto com o adjacente pode ser -(CHR")n-NR-(CHR")p-, e forma um anel heterocíclico de cinco ou seis membros fundido ao anel ao qual está ligado; R7 é independentemente hidrogênio, halogênio, alquila inferior

ou alcóxi inferior;

Rz é hidrogênio, alquila inferior, alcanoíla inferior, fenila, 1- alquila inferior pirrolidin-3-ila, pirazola-4-ila, pirazola-2-ila, ou alquila inferior, alcanoíla inferior, fenila, 1-alquila inferior pirrolidin-3-ila, pirazola-4-ila, pirazo- la-2-ila ou pirid-3-ila substituída por um ou mais de hidroxila, amino, mono- ou dialquilamino inferior, acetamidil, alcanoíla inferior, alquila inferior, 4- hidróxi-fenila, 3-aminometilfenil, alquila inferior sulfonila, 4-dialquilaminofenila inferior, pirid-3-ila, 1 H-indol-3-ila, morfolin-4-ila;

R e Rz juntos podem ser -(CHR)q-T-(CHR)r- e formam um anel heterocíclico de cinco ou seis membros com o nitrogênio ao qual estão liga- dos;

Rz e R7 juntos podem ser -(CHR")n-NR-(CHR")p-, e formam um

anel heterocíclico de cinco ou seis membros fundido ao anel ao qual estão ligados;

b e d são independentemente 0 ou 1; desde que pelo menos um de b ou d seja 1;

k é 0 ou 1;

m é 0 ou 1;

η e ρ são independentemente 0, 1 ou 2;

q e r são 1 ou 2;

χ é 0 ou 1;

desde que pelo menos um de R7 ou Rz seja diferente de hidro-

gênio;

Um aspecto preferido da presente invenção é uma subclasse de

compostos de acordo com a fórmula II,

NHR8

í 1 J,

•AA

(B)tKE/(D)d

(II)

em que,

AeB são independentemente CR2R", NR", oxigênio ou enxofre; AA é CR2 ou N; D é C=O1 CR2R" ou NR";

E é NH ou CR"R6, quando k for zero, e é NH ou CRnR6a1 quando

k for um;

F é enxofre, oxigênio ou NH;

Té oxigênio ou NR;

R" é H ou forma uma ligação dupla com um átomo adjacente;

R é independentemente hidrogênio ou alquila inferior;

R1 é H; R2; ou alquila inferior, cicloalquila inferior e alquila inferi- or-cicloalquila inferior, opcionalmente substituído com um ou mais R2; R2 é H, F, Cl; CN; COOR4; OR4; C(O)N(R4Rs); S(O)2N(R4Rs);

alquila inferior; O-alquila inferior; NH-alquila inferior; S-alquila inferior; COO- alquila inferior; 0C(0)-alquila inferior; C(0)N(R4)-alquila inferior; S(0)2N(R4)- alquila inferior; S(0)N(R4)-alquila inferior; S(0)2-alquila inferior; S(0)-alquila inferior; N(R4)S(0)2-alquila inferior; e N(R4)S(0)-alquila inferior; em que cada alquila inferior é opcionalmente substituído com um ou mais de F e Cl;

R4 e R5 são independentemente H; F, Cl; ou alquila inferior, ci- cloalquila inferior ou alquila inferior-cicloalquila inferior opcionalmente substi- tuído com um ou mais de F e Cl;

R6 é hidrogênio, amino, hidroxila, carbamoíla, carboxil, SO2R, NRR', -(CO)-OR ou -(CO)-NRR';

R6a é R6, Cl, F, alcóxi inferior, ciano, trifluormetóxi; ou junto com o adjacente pode ser -(CHR")n-NR-(CHR")p-, e forma um anel heterocíclico de cinco ou seis membros fundido ao anel ao qual está ligado;

R8 é fenila independentemente substituída por Ra na posição orto-, por Rb na posição meta-, e por Rc na posição para-; pirid-3-ila; pirid-3- ila substituída por Rc na posição 5; ou ciclohexila independentemente substi- tuído por Ra na posição 2, e por Rd na posição 4;

- Ra é hidrogênio, halogênio, alquila inferior, trifluormetila ou al- cóxi inferior;

- Rb é hidrogênio, trifluormetila, alcóxi inferior, alquila inferior sul-

fonamida, carboxil, -NReRf, -(CO)-OR ou -(CO)-NReRt;

- Rc é hidrogênio, amino, hidroxila, alcóxi inferior, carbamoíla, carboxil, SO2R1 SO2NReRf, NReRfl -(CO)-OR ou -(CO)-NReRf; ou

- Rb e Rc podem formar, juntos, um benzodiazol, ou indol substi- tuído na posição 3 por R';

- Rd é hidroxila, halogênio, amino, alcóxi inferior ou NReRf;

- Re e Rf são independentemente hidrogênio, 1-alquila inferior

pirrolidin-3-ila, 1-R-pirazola-4-ila, alcanoíla inferior, fenila, ou alquila inferior opcionalmente substituído por um ou mais de 4-hidróxi-fenila, 3- aminometilfenil, alquila inferior sulfonila, 4-dialquilaminofenila inferior, pirid-3- ila, 1 H-indol-3-ila, morfolin-4-ila, hidroxila, amino, mono- ou dialquilamino inferior, ou por alcanoíla inferior; ou R' e R" juntos são -(CHR)n-T-(CHR)n- e formam um anel heterocíclico de cinco ou seis membros com o nitrogênio ao qual estão ligados;

m é O, 1 ou 2;

η é 1 ou 2;

desde que pelo menos um de Ra, Rb e Rc seja diferente de hi-

drogênio;

Uma modalidade particularmente preferida da presente invenção está relacionada a compostos de acordo com a fórmula III:

NHR8

Ν,

<χ

*R1 R9

(III)

em que R1 é H ou alquila substituída ou não-substituída; e cada um de R8 e R9 é selecionado independentemente de cicloalquila substituída ou não- substituída, heterocicloalquila substituída ou não-substituída, arila substituí- da ou não-substituída, heteroarilaa substituída ou não-substituída; ou um sal, solvato ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste; e estereoisôme- ros, variantes isotópicas e tautômeros destes. Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é selecionado de ciclopentila substituída ou não-substituída, ciclohexila, fenila substituída ou não-substituído, piridila substituída ou não-substituída, pirimidina substituída ou não-substituída e pirazina substituída ou não- substituída, pirrol substituído ou não-substituído, pirazol substituído ou não- substituído e imidazol substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R1 é H1 Me, Et, i-Pr ou CF3.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III,

R1 éH.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é selecionado de cicloalquila substituída ou não-substituída.

Em outra modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é selecionado de ciclohexila ou ciclopentila substituída ou não- substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é selecionado de heterocicloalquila substituída ou não-substituída.

Em outra modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é selecionado de piperidinil, morfolinil ou pirrolidinila substituída ou não- substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é selecionado de fenila, piridil ou pirimidina substituído ou não- substituído.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é selecionado de fenila substituída, piridila substituída e pirimidina substi- tuída; e a substituição é -L-R8d; e em que:

L é selecionado de uma ligação, alquileno, heteroalquileno, -O-, - N(R8e)-, -CO-, -CO2-, -SO-, -SO2-, -CON(R8e)-, -SO2N(R8e)-, -N(R8e)CO-, - N(R8e)SO2-, -N(R8e)CO N(R8e)-, -N(R8e)SO2 N(R8e)-; e R8d é selecionado de alquila substituída ou não-substituída, ci-

cloalquila substituída ou não-substituída, arila substituída ou não-substituída, heterocicloalquila substituída ou não-substituída, heteroarilaa substituída ou não-substituída, amino substituído ou não-substituído, aralquila substituída ou não-substituída, heteroarilaalquila substituída ou não-substituída e ami- noalquila substituída ou não-substituída; e

R8e é selecionado de H, alquila substituída ou não-substituída e cicloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III,

R8 é:

(Rn ,RW (Rte)il Rid (Rn R6a (r^. Rao

W. Λ" VNx ,X'' Λ' >NwL

fv:T

N

em que L e R8d são como descritos no parágrafo precedente; o subscrito η é selecionado de 1-4; e cada R8a é selecionado independente- mente de hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída, alcóxi, ciano e halo.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima, e o subscrito η é 1 e R8a é Me, Et, Pr, iso-Pr, Cl, F, CN, OMe ou CF3. Em outra modalidade, R8a está na posição 2-(orto para - L). Ainda em outra modalidade, R8a é 2-CI, 2-F, 2-Me ou 2-CF3.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e:

L é uma ligação, -O-, -CO-, -CON(R8e)- ou -N(R8e)CO-; R8d é selecionado de alquila substituída ou não-substituída, ci- cloalquila substituída ou não-substituída, arila substituída ou não-substituída, heterocicloalquila substituída ou não-substituída, heteroarilaa substituída ou não-substituída, aralquila substituída ou não-substituída, heteroarilaalquila substituída ou não-substituída e aminoalquila substituída ou não-substituída; e

R8e é selecionado de H, alquila substituída ou não-substituída.

L é uma ligação, -O-, -CO-, -CON(R8e)- ou -N(R8e)CO-; e

R8d é selecionado de H, alquilaminoetila, dialquilaminoetila, ci- cloalquila, heterocicloalquila, arilalquila e heteroarilaalquila.

L é uma ligação, -O-, -CO-, -CON(R8e)- ou -N(R8e)CO-; e R8d é selecionado de metilaminoetila, etilaminoetila, dimetilami-

noetila, dietilaminoetila, pirrolidinila substituída ou não-substituída, benzila e piridilmetila.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e: L é uma ligação, -CO-, SO2, -(CH2)m1-, -0(CH2)mi-, -NH(CH2)mi-,

-CON(H)(CH2)m1- ou - SO2NH(CH2)m1-; o subscrito m1 é selecionado de 1-4; e R8d é

—0

e em que o anel P é heterocicloalquila substituída ou não-substituída. Em outra modalidade, L é uma ligação, -CO-, -O(CH2)m1-, -CON(H)(CH2)m1- ou - NHCO-;

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima; L é uma ligação; e o anel P é heterocicloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima; L é uma ligação; e o anel P é piperidina substituí- da ou não-substituída, piperazina substituída ou não-substituída, e piperidina substituída ou não-substituída, morfolina.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima; L é CO; e o anel P é heterocicloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima; L é CO; e o anel P é piperidina substituída ou não-substituída, piperazina substituída ou não-substituída, e piperidina subs- tituída ou não-substituída, morfolina. Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, 10

15

R8 é como descrito acima; L é -(CH2)m1-, -O(CH2)mI- ou -NH(CH2)mI-; o subscrito m1 é selecionado de 1-4; e o anel P é heterocicloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima; L é -(CH2)mI-, -O(CH2)mI- ou -NH(CH2)mI-; o subscrito m1 é 2 ou 3; e o anel P é piperidina substituída ou não-substituída, piperazina substituída ou não-substituída, e piperidina substituída ou não- substituída, morfolina.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima; L é -CON(H)(CH2)mr ou -NHCO(CH2)m1-; o subs- crito m1 é selecionado de 1-4; e o anel P é heterocicloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima; L é -CON(H)(CH2)m1-; o subscrito m1 é 2 ou 3; e o anel P é piperidina substituída ou não-substituída, piperazina substituída ou não-substituída, e piperidina substituída ou não-substituída, morfolina.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto está de acordo com a fórmula IVa, IVb, IVc ou IVd:

H,. ,λ N

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R9 IVa

R9 IVb

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N

R9 IVd

20

25

e em que Leo anel P são como descritos acima; o subscrito η é selecionado de 1-4; cada R8a é selecionado independentemente de hidrogê- nio, alquila substituída ou não-substituída, alcóxi, ciano e halo; e R9 é sele- cionado independentemente de arila substituída ou não-substituída e hete- roarilaa; ou um sal, solvato ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável des- te; e estereoisômeros, variantes isotópicas e tautômeros destes.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas IVa-IVd, L é uma ligação. Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas IVa-IVd, L é metileno, etileno, propileno e butileno.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas IVa-IVd, L é -CO-.

Composto de acordo com a reivindicação 9, em que L é -CO-.

Composto de acordo com a reivindicação 9, em que L é -NHCO-

ou -CONH-.

Composto de acordo com a reivindicação 9, em que L é - CON(H)-CH2-CH2- ou -N(H)-CO-CH2-CH2-.

Composto de acordo com a reivindicação 9, em que L é -OCH2-

CH2- ou -NHCH2-CH2-.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas IVa-IVd, L é -SO2-.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas

IVa-IVd, L é -CON(H)-CH2-CH2- ou - SO2NH-CH2-CH2-.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas IVa-IVd, L é -OCH2-CH2- ou -NHCH2-CH2-.

Em uma modalidade preferida, L é uma ligação.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas

IVa-IVd, o anel P é piperidina, morfolina ou piperazina substituída ou não- substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas IVa-IVd, Leo anel P são como descritos acima; o subscrito η é 4 e cada R8a é H.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas

IVa-IVd, Leo anel P são como descritos acima; o subscrito η é 1 e R8a é Me, Et, Pr, iso-Pr, Cl, F, CN, OMe ou CF3. Em outra modalidade, R8a está na posição 2-(orto para -L). Ainda em outra modalidade, R8a é 2-CI, 2-F, 2-Me ou 2-CF3.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de

fórmula III, R8 é (ReaL

<Rn> <7^

10

15

e em que o anel P é heterocicloalquila substituída ou não- substituída; o subscrito η é selecionado de 1-4 e cada R8a é selecionado in- dependentemente de hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída, al- cóxi, ciano e halo.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e o anel P é piperidina, morfolina ou piperazina substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e o subscrito η é 4 e cada R8a é H.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e o subscrito η é 1 e R8a é Me, Et, Pr, iso-Pr, Cl, F, CN, OMe ou CF3. Em outra modalidade, R8a está na posição 2-(orto para N- anel P). Ainda em outra modalidade, R8a é 2-CI, 2-F, 2-Me ou 2-CF3.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é

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e em que o subscrito η é selecionado de 1 -4; cada R8a é selecionado inde- pendentemente de hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída, alcóxi, ciano e halo; R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou ci- cloalquila substituída ou não-substituída; R8c é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída e o subscrito χ é selecionado de 1-8.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é η, f 0

ι χ :Í

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Γ N

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VN, Ν. γ", χ -τ "τ

RBS

e em que ο subscrito η é selecionado de 1-4; cada R8a é selecionado inde- pendentemente de hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída, alcóxi, ciano e halo; R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou ci- cloalquila substituída ou não-substituída; R8c é hidrogênio ou Me.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é

(Re-X, f Τ

Wv „.,N, .W

(R88)n f T

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(Res)n nA

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N . N

A. . N

10

e em que o subscrito η é selecionado de 1 -4; cada R8a é selecio- nado independentemente de hidrogênio, alquila substituída ou não- substituída, alcóxi, ciano e halo.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é

(Rie)n

,-N-

(RtoJr Γ

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e em que o subscrito η é selecionado de 1 -4; cada R8a é selecionado inde pendentemente de hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída, alcóxi, ciano e halo; e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e o subscrito η é 1 e R8a é Me, Et, Pr, iso-Pr, Cl, F, CN, OMe ou CF3. Em outra modalidade, R8a está na posição 2-(orto para N- anel P). Ainda em outra modalidade, R8a é 2-CI, 2-F, 2-Me ou 2-CF3. Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III,

R8 é como descrito acima e R8b é H.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e R8b é alquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e R8b é cicloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e R8b é Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CH2CF3, CF3, CH2CONH2, ciclopropila ou ciclopropilmetila.

Em uma modalidade em particular, com relação aos compostos de fórmula III, R8 é como descrito acima e R8b é i-Pr.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas IVa-IVd, R8a é selecionado independentemente de hidrogênio, al- quila substituída ou não-substituída, alcóxi, ciano, carbamoíla, CHO e halo. Em uma modalidade, R8a é H, Me, F ou Cl. Em uma modalidade preferida, R8a é H.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas IVa-IVd, o composto está de acordo com a fórmula Va, Vb, Vc, Vd, Ve ou Vf: N

N Χ.

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f» Va

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R9 R9

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Vd , Ve ou Vf

Λ ^/^m/-. ηηκη η (ArmiiU Iii ^ D8b λ

e em que R é como descrito para a fórmula Ill e R é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas Va-Vf, R8b é H.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas Va-Vf, R8b é alquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas Va-Vf, R8b é cicloalquila substituída ou não-substituída. Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas

Va-Vf, R8b é Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CH2CF3, CF3, CH2CONH2, ciclopropi- Ia ou ciclopropilmetila.

Em uma modalidade em particular, com relação aos compostos de fórmulas Va-Vf, R8b é i-Pr. Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas

111-Vf, R9 é arila substituída ou não-substituída. Em outra modalidade, R9 é fenila substituída ou não-substituído.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas lll-Vf, R9 é heteroarilaa substituída ou não-substituída. Em outra modalidade, R9 é piridila substituída ou não-substituída. Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas IIl-Vf, R9 é selecionado de fenila substituída ou não-substituído, indolil, isoi- nolil, pirrolil, furanil, tienil, pirazolil, oxazolila e tiazolil.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas

lll-Vf, R9 é

A3 xA1 ^a2

R9b

R3b

10

e cada um de A11 A2 e A3 é selecionado independentemente de S, O, N, NR9a e CR9a; cada um de R9a é independentemente H ou alquila substituída ou não-substituída; e R9b é CONH2, CONHMe ou CN.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas lll-Vf, R9 é

HsN

O v^?

O

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H

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O ou

HiN

H2KTvO

e em que o subscrito m é selecionado de 1-4 e cada R9d é independente- mente H, alquila substituída ou não-substituída ou halo.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Ill-Vf1 R9 é

(R9d)w

e em que o subscrito m é selecionado de 1 -4 e cada R9d é inde- pendentemente H1 alquila substituída ou não-substituída ou halo.

e em que o subscrito m é selecionado de 1-3 e cada R9d é independente- mente H1 alquila substituída ou não-substituída ou halo.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas lll-Vf, R9 é como descrito acima; e cada R9d é H.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas lll-Vf, R9 é como descrito acima; m é 1 ou 2 e cada R9d é indepen- dentemente Me, Cl ou F.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto está de acordo com a fórmula Via, Vlb, Vlc, Vld, Vle ou Vlf: H.. J N

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e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vla-Vlf, R8b é H.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de

fórmulas Vla-Vlf, R8b é cicloalquila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vla-Vlf, R8b é ciclopropila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vla-Vlf, R8b é alquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vla-Vlf, R8b é Me1 Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF3, CH2CF3, CH2CONH2 ou ciclopropilmetila.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto está de acordo com a fórmula Vila, Vllb, Vllc, Vllc, Vlld, Vlle ou Vllf: ο

Ν. J

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-Ν, J

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e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicioalquiia substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas VlIa-Vlld, R8b é H.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vlla-Vllf, R8b é cicioalquiia.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vlla-Vllf, R8b é ciclopropila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vlla-Vllf, R8b é alquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vlla-Vllf, R8b é Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF3, CH2CF3, CH2CONH2 ou ciclopropilmetila.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto está de acordo com a fórmula Vllla, VllIb, Vlllc, Vllld, Vllle ou NXII If: 10

15

-Ν-, ..Ν.

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e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou ci- cloalquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vllla-Vlllf, R8b é H.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vllla-Vlllf, R8b é cicloalquila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vllla-Vlllf, R8b é ciclopropila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vllla-Vlllf, R8b é alquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Vllla-Vlllf, R8b é Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF3, CH2CF3, CH2CONH2 ou ciclopropilmetila.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto está de acordo com a fórmula IXa, IXb, IXc, IXd, IXe ou IXf: "ο

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Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas IXa-IXf, R8b é H.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de

fórmulas IXa-IXf, R8b é cicloalquila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas IXa-IXf, R8b é ciclopropila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas IXa-IXf, R8b é alquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas IXa-IXf, R8b é Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF3, CH2CF3, CH2CONH2 ou ciclopropilmetila.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto está de acordo com a fórmula Xa, Xb1 Xe, Xd, Xe ou Xf: ^ Ν.

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Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Xa-Xf1 R8b é H.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Xa-Xf1 R8b é cicloalquila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Xa-Xf, R8b é ciclopropila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de

fórmulas Xa-Xf, R8b é alquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Xa-Xf, R8b é Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF3, CH2CF3, CH2CONH2 ou ciclopropilmetila.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III,

o composto está de acordo com a fórmula Xla, Xlb, Xlc, Xld, Xle ou Xlf: r" ο

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e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída; e R9e é hidrogênio, Me ou CN.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas Xla-Xlf, R9e é H.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas

Xla-Xlf1 R9e é Me.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmulas Xla-Xlf, R9e é CN.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Xla-Xlf, R8b é H.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Xla-Xlf, R8b é cicloalquila.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Xla-Xlf, R8b é ciclopropila. Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de

fórmulas Xla-Xlf, R8b é alquila substituída ou não-substituída.

Em uma modalidade adicional, com relação aos compostos de fórmulas Xla-Xlf, R8b é Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF3, CH2CF3, CH2CONH2 ou ciclopropilmetila.

Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto está de acordo com a fórmula Xlla, Xllb, Xllc ou Xlld:

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Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto está de acordo com a fórmula Xllla, Xlllb, Xlllc ou Xllld:

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o composto está de acordo com a fórmula XIVa, XIVb, XIVc ou XIVd:

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Em uma modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto está de acordo com a fórmula XVa1 XVb, ou XIVc:

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e R8b é H1 Me, i-Pr, t-Bu, CH2CONH2, ciclopropilmetila ou CH2CF3.

Em uma modalidade em particular, com relação aos compostos de fórmulas XVa-XVc, L é uma ligação. Em outra modalidade em particular, L é -O-CH2-CH2-.

Em uma modalidade em particular, com relação aos compostos de fórmulas XVa-XVc, o anel P é

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Em uma modalidade mais particular, com relação aos compos- tos de fórmulas XVa-XVc, o anel P é

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Em outra modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto é selecionado de Tabela 1.

Em outra modalidade, com relação aos compostos de fórmula III, o composto é selecionado de Tabela 2.

Em certos aspectos, a presente invenção fornece pró-fármacos e derivados dos compostos de acordo com as fórmulas acima. Pró-fármacos são derivados dos compostos da invenção, que possuem grupos metaboli- camente cliváveis e se transformam, por solvólise ou sob condições fisiológi- cas, nos compostos da invenção, que são farmaceuticamente ativos in vivo. Um pró-fármaco pode ser inativo quando administrado a um indivíduo, mas é convertido in vivo em um composto ativo da invenção. O termo "pró- fármacos farmaceuticamente aceitáveis", como aqui usado, refere-se àque- les pró-fármacos dos compostos úteis na presente invenção que são, dentro do escopo da avaliação médica, adequados para uso em contato com os tecidos de pacientes com excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica proporcional com uma proporção risco-benefício razoável, e eficaz no dese- jado dos compostos da invenção. O termo "pró-fármaco" significa um com- posto que é transformado in vivo para gerar um composto eficaz útil na pre- sente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou solvato deste. A transformação pode ocorrer por vários mecanismos como, por e- xemplo, por meio de hidrólise no sangue. Os compostos que abrigam grupos metabolicamente cliváveis possuem a vantagem de que podem exibir maior biodisponibilidade em conseqüência do aumento da solubilidade e/ou da ta- xa de absorção conferida pelo composto parente em virtude da presença do grupo metabolicamente clivável; dessa forma, tais compostos atuam como pró-fármacos. Uma discussão detalhada é fornecida em "Design of Pro- drugs", H. Bundgaard, ed., Elsevier (1985); "Methods in Enzymology"; K. Widder e outros, Ed., Academic Press, 42, 309-396 (1985); "A Textbook of Drug Design and Development", Krogsgaard-Larsen e H. Bandaged, ed., Capítulo 5; "Design and Applications of Prodrugs" 113-191 (1991); "Advan- ced Drug Delivery Reviews", H. Bundgard, 8 , 1-38, (1992); J. Pharm. Sci., 77,285 (1988); Chem. Pharm. Buil., N. Nakeya e outros, 32, 692 (1984); "Prodrugs as Novel Delivery Systems", T. Higuchi e V. Stella1 14 A.C.S. "Symposium Series, and Bioreversible Carriers in Drug Design", E.B. Roche, ed., "American Pharmaceutical Association" e Pergamon Press, 1987, que são aqui incorporados por referência. Esses exemplos incluem, sem limita- ção, derivados de éster de colina, e semelhantes, ésteres de N- alquilmorfolino, e semelhantes. Outros derivados dos compostos desta invenção possuem ativi- dade tanto em suas formas ácidas quanto nas formas de derivados ácidos, mas a forma sensível a ácido freqüentemente oferece vantagens de solubili- dade, compatibilidade de tecido ou liberação retardada no organismo dos mamíferos (veja, Bundgard, H., "Design of Prodrugs", pp. 7-9, 21-24, Elsevi- er, Amsterdã 1985). Pró-fármacos incluem derivados ácidos bem-conhecidos por aqueles versados na técnica como, por exemplo, ésteres preparados por reação do ácido parente com um álcool adequado, ou amidas preparadas por reação do composto ácido parente com uma amina substituída ou não- substituída, ou anidridos ácidos, ou anidridos mistos. Ésteres, amidas e ani- dridos alifáticos ou aromáticos simples, derivados de grupos acidíferos pen- dentes nos compostos desta invenção são pró-fármacos preferidos. Em al- guns casos, é desejável preparar pró-fármacos do tipo éster duplo como, por exemplo, (acilóxi)alquila ésteres ou ((alcoxicarbonila)óxi)alquila ésteres. Pre- ferem-se os Ci a C8 alquila, C2-C8 alquenil, aril, C7-Ci2 aril substituída e C7- C12 arilalquila ésteres dos compostos da invenção. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

Quando empregados como substâncias farmacêuticas, os com- postos desta invenção são administrados tipicamente na forma de uma composição farmacêutica. Essas composições podem ser preparadas de uma forma bem conhecida na técnica farmacêutica, e compreendem pelo menos um composto ativo.

Geralmente, os compostos desta invenção são administrados em uma quantidade farmaceuticamente eficaz. A quantidade do composto realmente administrada será tipicamente determinada por um médico, à luz das circunstâncias relevantes, que incluem a condição a ser tratada, a via de administração escolhida, o composto específico administrado, a idade, o pe- so e a resposta do paciente individual, a gravidade dos sintomas do pacien- te, e semelhantes.

As composições farmacêuticas desta invenção podem ser admi-

nistradas por diversas vias, incluindo a via oral, retal, transdérmica, subcutâ- nea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Dependendo da via de libera- ção desejada, os compostos desta invenção são formulados preferivelmente como composições injetáveis ou orais, ou como pomadas, como loções ou como emplastros, todos para administração transdérmica.

As composições para administração oral podem assumir a forma de soluções ou suspensões líquidas ou pós. Mais comumente, no entanto, as composições são apresentadas em formas de dosagem unitária para faci- litar a dosagem precisa. O termo "formas de dosagem unitária" refere-se às unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias para indivíduos humanos e outros mamíferos, cada unidade contendo uma quan- tidade predeterminada de material ativo calculada para produzir o efeito te- rapêutico desejado, em associação com um excipiente farmacêutico ade- quado. Formas de dosagem unitária típicas incluem ampolas ou seringas pré-preenchidas, pré-medidas das composições líquidas ou pílulas, compri- midos, cápsulas, ou semelhantes, no caso de composições sólidas. Nessas composições, o composto de ácido furanossulfônico é normalmente um componente menor (de cerca de 0,1 a cerca de 50% por peso ou, preferi- velmente, de cerca de 1 a cerca de 40% por peso) com o restante sendo vários veículos ou transportadores e auxílios para o processamento para a formação da forma de dosagem desejada. Formas líquidas adequadas à administração oral podem incluir

um veículo aquoso ou não aquoso adequado com tampões, agentes de sus- pensão e de liberação, corantes, flavorizantes, e semelhantes. Formas sóli- das podem incluir, por exemplo, qualquer um dos seguintes ingredientes, ou compostos de natureza similar: um aglutinante como, por exemplo, celulose microcristalina, goma tragacanto ou gelatina; um excipiente como, por e- xemplo, amido ou lactose, um agente desintegrante como, por exemplo, áci- do algínico, Primogel ou amido de milho; um lubrificante como, por exemplo, estearato de magnésio; um agente de deslizamento, por exemplo, dióxido de silício coloidal; um agente adoçante como, por exemplo, sacarose ou sacari- na; ou um agente flavorizante como, por exemplo, menta, salicilato de metila ou flavorizante de laranja.

As composições injetáveis se baseiam tipicamente em solução salina injetável estéril ou solução salina tamponada com fosfato ou outros veículos injetáveis conhecidos na técnica. Como anteriormente, o composto ativo nessas composições é tipicamente um componente menor, freqüente- mente sendo de cerca de 0,05 a 10% por peso, com o restante sendo um veículo injetável, e semelhantes.

As composições transdérmicas são formuladas tipicamente co- mo uma pomada ou creme tópicos que contêm o(s) ingrediente(s) ativo(s), geralmente em uma quantidade que varia de cerca de 0,01 a cerca de 20% por peso, preferivelmente de cerca de 0,1 a cerca de 20% por peso, preferi- velmente de cerca de 0,1 a cerca de 10% por peso e, mais preferivelmente, de cerca de 0,5 a cerca de 15% por peso. Quando formulados como uma pomada, os ingredientes ativos serão tipicamente combinados com uma ba- se de pomada parafínica ou miscível em água. Alternativamente, os ingredi- entes ativos podem ser formulados em um creme com, por exemplo, uma base de creme óleo-em-água. Essas formulações transdérmicas são bem conhecidas na técnica, e geralmente incluem ingredientes adicionais para aumentar a penetração dérmica e a estabilidade dos ingredientes ativos ou da formulação. Todas essas formulações transdérmicas e ingredientes co- nhecidos estão incluídos dentro do escopo desta invenção. Os compostos desta invenção também podem ser administrados

por um dispositivo transdérmico. Consequentemente, a administração trans- dérmica pode ser obtida com a utilização de um emplastro, tanto do tipo re- servatório quanto de membrana porosa, ou de diversas matrizes sólidas.

Os componentes descritos acima para composições administrá- veis por via oral, injetáveis ou administráveis topicamente são meramente representativos. Outros materiais, além de técnicas de processamento, e semelhantes, são apresentados na Parte 8 de "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17ã edição, 1985, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylva- nia, que é aqui incorporado por referência. Os compostos desta invenção também podem ser administrados

em formas de liberação sustentada ou a partir de um sistema de liberação sustentada de fármacos. Uma descrição de materiais de liberação sustenta- da representativos pode ser encontrada em "Remington's Pharmaceutical Sciences".

Os exemplos de formulação a seguir ilustram composições far- macêuticas representativas desta invenção. A presente invenção, no entan- to, não se limita às composições farmacêuticas que serão apresentadas a seguir.

Formulação 1 - Comprimidos

Um composto da invenção é misturado como um pó seco com um aglutinante de gelatina seca em uma proporção de peso aproximada de 1:2. Uma quantidade menor de estearato de magnésio é adicionada como lubrificante. A mistura é formada em comprimidos de 240-270 mg (80-90 mg de composto ativo de amida por comprimido) em uma prensa de comprimi- dos.

Formulação 2 - Cápsulas Um composto da invenção é misturado como um pó seco com

um diluente de amido em uma proporção de peso aproximada de 1:1. A mis- tura é preenchida em cápsulas de 250 mg (125 mg de composto ativo de amida por cápsula). Formulação 3 - Líquido Um composto da invenção (125 mg), sacarose (1,75 g) e goma

xantana (4 mg) são misturados, passados através de uma peneira U.S. de trama N- 10, e depois misturados com uma solução de celulose microcrista- Iina e carboximetil celulose de sódio feita previamente (11:89, 50 mg) em água. Benzoato de sódio (10 mg), sabor e cor são diluídos com água e adi- cionados com agitação. É então adicionada água suficiente para produzir um volume total de 5 ml. Formulação 4 - Comprimidos

Um composto da invenção é misturado como um pó seco com um aglutinante de gelatina seca em uma proporção de peso aproximada de 1:2. Uma quantidade menor de estearato de magnésio é adicionada como lubrificante. A mistura é formada em comprimidos de 450-900 mg (150-300 mg de composto ativo de amida) em uma prensa de comprimidos. Formulação 5 - Injeção

Um composto da invenção é dissolvido ou suspenso em um meio aquoso injetável de solução salina tamponada estéril até uma concen- tração de aproximadamente 5 mg/ml.

Formulação 6 - Tópica

Álcool estearílico (250 g) e uma vaselina branca (250 g) são der- retidos em torno de 759C, e depois é adicionada uma mistura de um com- posto da invenção (50 g), metilparabeno (0,25 g), propilparabeno (0,15 g), Iauril sulfato de sódio (10 g) e propileno glicol (120 g) dissolvido em água (cerca de 370 g), e a mistura resultante é agitada até que se solidifique. MÉTODOS DE TRATAMENTO

Os presentes compostos são usados como agentes terapêuticos para o tratamento de condições em mamíferos que estão etiologicamente relacionadas ou atribuíveis à atividade aberrante de MMP1 e/ou MAP- KAPK5. Consequentemente, os compostos e as composições farmacêuticas desta invenção encontram utilidade como substâncias terapêuticas para a prevenção e/ou o tratamento de doenças inflamatórias em mamíferos, inclu- indo seres humanos.

Em um aspecto do método de tratamento, esta invenção fornece um método de tratamento de um mamífero suscetível ou que sofre de uma condição associada à degradação da matriz extracelular (ECM), em particu- lar artrite e, mais particularmente, artrite reumatóide, cujo método compre- ende a administração de uma quantidade eficaz de um ou mais dos compos- tos da invenção ou de uma composição farmacêutica descrita. Em outro aspecto do método de tratamento, a invenção fornece

um método de tratamento de um mamífero suscetível ou que sofre de uma condição associada a uma expressão celular anormal de MMP1, que com- preende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, ou de uma composição farmacêutica deste. Em outro aspecto do método de tratamento, a presente invenção

fornece um método de tratamento ou profilaxia de uma condição caracteri- zada por atividade anormal da metaloproteinase da matriz, que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de inibição da metaloproteinase da matriz de um ou mais dos compostos da invenção, ou de uma composição farmacêutica destes.

Ainda em outro aspecto do método de tratamento, esta invenção fornece métodos de tratamento de um mamífero suscetível ou que sofre de doenças e distúrbios que são mediados ou causam inflamação como, por exemplo, artrite reumatóide e osteoartrite, infarto do miocárdio, várias doen- ças e distúrbios autoimunes, uveíte e aterosclerose; coceira/ prurido como, por exemplo, psoríase, e distúrbios renais; o método compreende a adminis- tração de uma quantidade eficaz para o tratamento da condição ou que evita a condição de uma ou mais das composições farmacêuticas descritas ante- riormente.

Esta invenção também está relacionada ao uso dos presentes compostos na fabricação de um medicamento para o tratamento ou a profi- Iaxia de uma condição evitada, atenuada ou eliminada pela administração de um inibidor de Proteína Quinase 5 Ativada por Proteína Quinase Ativada por Mitógeno, ou uma de condição caracterizada por atividade anormal de cola- genase, ou uma condição associada à degradação de ECM, ou uma condi- ção selecionada de doenças que envolvem inflamação, mais preferivelmente para o tratamento de artrite reumatóide.

Como um aspecto adicional da invenção, os presentes compos- tos são fornecidos para uso como substâncias farmacêuticas, especialmente no tratamento ou prevenção das condições e doenças mencionadas anteri- ormente. Também é aqui fornecido o uso dos presentes compostos na fabri- cação de um medicamento para o tratamento ou a prevenção de uma das condições e doenças mencionadas anteriormente.

Um regime preferido do presente método compreende a admi- nistração a um indivíduo que sofre de uma condição de doença caracteriza- da por inflamação de uma quantidade inibidora eficaz de metaloprotease da matriz de um composto da presente invenção por um período de tempo sufi- ciente para reduzir os níveis anormais de degradação da matriz extracelular no paciente e, de preferência, terminar os processos autoperpetuantes res- ponsáveis pela referida degradação. Uma modalidade especial do método compreende a administração de uma quantidade inibidora eficaz de metalo- protease da matriz de um composto da presente invenção a um paciente individual que sofre ou suscetível ao desenvolvimento de artrite reumatóide, por um período de tempo suficiente para reduzir ou evitar, respectivamente, a degradação de colágeno e óssea nas articulações do referido paciente e, de preferência, terminar processos autoperpetuantes responsáveis pela refe- rida degradação.

Os níveis de dose da injeção variam de cerca de 0,1 mg/kg/hora a pelo menos 10 mg/kg/hora, todos por cerca de 1 a cerca de 120 horas e, especialmente, 24 a 96 horas. Um bolo de pré-carga de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg ou mais também pode ser administrado para se obter níveis estáveis adequados. Espera-se que a dose total máxima não exceda cerca de 2 g/dia para um paciente humano com 40 a 80 kg. Para a prevenção e/ou tratamento de condições de longo prazo

como, por exemplo, condições inflamatórias e autoimunes, o regime para o tratamento normalmente dura mais de meses ou anos e, consequentemente, prefere-se a dosagem oral em termos de conveniência e tolerância do paci- ente. Com a dosagem oral, são regimes representativos uma a cinco e, es- pecialmente, duas a quatro e, tipicamente, três doses orais por dia. Utilizan- do-se esses padrões de dosagem, cada dose fornece de cerca de 0,01 a cerca de 20 mg/kg do composto da invenção, com cada uma das doses pre- feridas fornecendo de cerca de 0,1 a cerca de 10 mg/kg e, especialmente, cerca de 1 a cerca de 5 mg/kg. As doses transdérmicas são geralmente selecionadas para for-

necerem níveis sangüíneos similares ou inferiores àqueles obtidos com a utilização de doses de injeção.

Quando usados para evitar o surgimento de uma condição in- flamatória, os compostos desta invenção serão administrados a um paciente em risco para o desenvolvimento da condição, tipicamente sob orientação e sob a supervisão de um médico, nos níveis de dosagem descritos acima. Os pacientes em risco para o desenvolvimento de uma condição em particular geralmente incluem aqueles que possuem uma história familiar da condição, ou aqueles que foram identificados por testes genéticos ou por rastreamen- tos como sendo particularmente suscetíveis ao desenvolvimento da condi- ção.

Os compostos desta invenção podem ser administrados como o

único agente ativo, ou podem ser administrados em combinação com outros agentes, incluindo outros compostos que demonstram a mesma atividade terapêutica ou uma atividade terapêutica similar, e que são determinados como sendo seguros e eficazes para essa administração combinada. PROCEDIMENTOS SINTÉTICOS GERAIS

Os compostos de triazolo[1,5-a]piridila desta invenção podem ser preparados a partir de materiais de partida facilmente disponíveis com a utilização dos seguintes métodos e procedimentos gerais. Será observado que, quando forem apresentadas condições de processo típicas ou preferi- das (ou seja, temperaturas de reação, tempos, proporções molares de rea- gentes, solventes, pressões etc.), outras condições de processo poderiam ser usadas, a menos que estabelecido de forma diferente. As condições de reação ótimas podem variar com os reagentes ou solvente usados especifi- camente, mas essas condições podem ser determinadas por aqueles versa- dos na técnica por procedimentos de otimização de rotina.

Adicionalmente, como ficará evidentes para aqueles versados na técnica, grupos de proteção convencionais podem ser necessários para evi- tar que certos grupos funcionais sejam submetidos a reações indesejadas. A escolha de um grupo de proteção adequado para um grupo funcional em particular, bem como as condições para a proteção e desproteção, são co- nhecidas na técnica. Por exemplo, vários grupos de proteção, e sua introdu- ção e remoção, são descritos em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protecting Groups in Organic Synthesis", Segunda Edição, Wiley, Nova York, 1991, e referências nele citadas. Os métodos a seguir são apresentados com detalhes quanto à

preparação de biciclo-heteroaris representativos que foram aqui descritos anteriormente. Os compostos da invenção podem ser preparados a partir de materiais de partida e reagentes conhecidos ou disponíveis comercialmente por aqueles versados na técnica de síntese orgânica. Via sintética geral

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Geral

Todos os reagentes eram de grau comercial e foram usados como recebidos, sem purificação adicional, a menos que estabelecido de forma diferente. Foram usados solventes anidros disponíveis comercialmen- te para as reações realizadas sob atmosfera inertes. Foram utilizados sol- ventes de grau reagente em todos os outros casos, a menos que especifica- do de forma diferente. Cromatografia em coluna foi realizada em sílica-gel 60 (35-70 μιτι). A cromatografia de camada delgada foi realizada com o uso de placas pré-revestidas de sílica-gel F-254 (espessura de 0,25 mm), espectros de 1H RMN foram registrados em um espectrômetro de RMN Bruker DPX 400 (400 MHz). As mudanças químicas (ε) para os espectros de 1H RMN são registradas em partes por milhão (ppm) em relação a tetrametilsilano (δ 0,00) ou ao pico de solvente residual apropriado, ou seja, CHCI3 (δ 7,27), como referência interna. As multiplicidades são dadas como singleto (s), du- pleto (d), tripleto (t), quarteto (q), multipleto (m) e ampla (br). As constantes de acoplamento (J) são dadas em Hz. Os espectros MS de eletropulveriza- ção são obtidos em um espectrômetro LC/MS de plataforma Micromass. A coluna usada para todas as análises por LCMS foi "Waters Acquity UPLC BEH C18" 1,7 μηι, 2,1 mm ID χ 50 mm L (Peça numerada 186002350). H- PLC preparativa: "Waters XBridge Prep C18" 5 pm ODB 19 mm ID χ 100 mm L (Peça numerada 186002978). Todos os métodos usam gradientes de MeCN/H20. H2O contém TFA 0,1% ou NH3 0,1%.

Síntese representativa de compostos da invenção

Composto 1: (4-Morfolin-4-ilfenil)-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-8-il]amina

Etapa 1: N'-(3,6-Dibromo-pirazin-2-il)-N,N-dimetilformamidina

^N Br

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1V

I

Uma mistura de 3,6-dibromo-pirazin-2-ilamina (15,37 g, 60,80 mmols) e /V,/\/-dimetilformamida dimetil acetal (10,1 ml, 76,00 mmols), sus- pensa em etanol (150 ml), é refluída por 2 horas. A mistura de reação é eva- porada in vácuo gerando o composto do título (186 g). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 3,20 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 7,93 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), LCMS: Tr = 3,81 min (99,1%), m/z (APCI) 307 (M+H)+. Etapa 2: N-(3,6-Dibromo-pirazin-2-il)-N'-hidroxiformamidina

^Nv JBt

IX

Br^N NH

S

OH

A uma solução de N'-(3,6-dibromo-pirazin-2-il)-/S/,/\/- dimetilformamidina (186 g, 60,80 mmols) em metanol (200 ml) é adicionado cloridrato de hidroxilamina (5,91 g, 85,12 mmols) em uma porção. A reação é agitada em temperatura ambiente por 16 horas. O solvente é evaporado e o resíduo sólido é tratado com água gelada (resfriamento no gelo) e coletado por filtração. O precipitado é lavado duas vezes com água e éter de petróleo e seco in vácuo, gerando o composto do título (17,45 g) como um sólido branco.

1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 7,82 (1H, br s), 8,21 (1H, s), 8,34 (1H, m), 11,17 (1H, br s), LCMS: Tr = 3,17 min (98,7 %), m/z (APCI) 295 (Μ+Η)+.

Etapa 3:5,8-Dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina

Br

N-(3,6-dibromo-pirazin-2-il)-/\/-hidroxiformamidina (174 mg,

58,80 mmol) é tratada com ácido polifosfórico (150 g) por uma hora a 50°C, e depois por 1,75 hora a 70°C. Após resfriamento até a temperatura ambien- te, é adicionada água à mistura de reação. A suspensão resultante é levada até o pH 8 por adição cuidadosa de NaHCO3 sólido em pequenas porções. O precipitado formado é coletado por filtração, lavado uma vez com NaOH 1 N, três vezes com água e seco in vácuo. O resíduo é dividido entre acetato de etila e NaOH 1 N, e a fase orgânica é lavada mais uma vez com NaOH 1 N e uma vez com salmoura. A fase orgânica é seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada para gerar o composto do título (10,15 g) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 8,43 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), LCMS: Tr = 2,73 min (94,2 %), m/z (APCI) 277 (M+H)+. Etapa 4: (5-Bromo-[1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina

mg, 443 μιτιοΙ), 4-(4-morfolina)anilina (118 mg, 0,664 mmol) e N- etildiisopropilamina (116 ml, 0,664 mmol) é aquecida no refluxo em 2- propanol (3 ml) por 4,5 horas. A mistura de reação é evaporada até seca, e o resíduo dividido entre diclorometano e ácido cítrico (10%). A fase orgânica é lavada uma vez com água e salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e evapo- rada para fornecer o composto do título (156 mg, 94%) como um sólido ama- relo. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3,11 (m, 4H), 3,78 (m, 4H), 6,97

r?

Br

Uma mistura de 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (123 (d, 2H), 7,82 (d, 2H), 7,87 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,93 (br s, 1H), LCMS, Tr = 3,32 min (96,8%) m/z (APCI) 375 (M+H)+.

Etapa 5: (4-Morfolin-4-ilfenil)-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-aJpirazin- 8-il]amina

morfolin-4-ilfenil)amina (220 mg, 0,586 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (171 mg, 0,879 mmol), Pd(PPh3)4 (68 mg, 59 μιηοΙ) e NaOtBu (225 mg, 2,34 mmols) em 4 ml de DMF/água (3:1) é desga- seificada por 5 min em um tubo lacrado. A mistura de reação é aquecida no tubo lacrado a 90°C de um dia para o outro. Após evaporação dos solventes, o resíduo é coletado por filtração, lavado com água (3 x) e éter (2 x) e seco in vácuo. O produto bruto é purificado por cromatografia em coluna (sílica- gel, 96:4 DCM/MeOH), gerando o composto do título (76 mg, 36%) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3,11 (4H, m), 3,79 (4H, m), 6,98 (2H, d), 7,90 (2H, d), 8,17 (1H, s), 8,35 (1H, br s), 8,64 (1H, br s), 8,75 (1H, s), 9,73 (1H, br s), LCMS: Tr = 2,68 min (97,7 %) m/z (APCI) 363 (M+H)+.

Composto 4: 4-(8-(4-(4-metilpiperazin-1-il)fenilamino)-

[1,2,4]triazolo[1,5a]pirazin-5-il)piridin-2(1 H)-ona Etapa 1: [5-(2-Metóxi-piridin-4-il)-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-il]-[4-(4-metil- piperazin-1 -il)-fenil]-amina

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N-N H

5

Uma suspensão de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4- Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (80 mg, 0,206 mmol), ácido 2-metoxipiridina-4-borônico (63 mg, 0,412 mmol), Pd(PPh3)4 (0,052 mmol) e Na2CO3 1,5 N (1,1 ml, 1,65 mmol) em DMF/dioxano 2:1 (2,2 ml). O produto bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel com o uso de DCM:NH3 96:4 (7 M em MeOH), e as frações que contêm o produto desejado são combinadas e evaporadas para gerar o composto do título (40 mg, 47%). HPLC (254 nm): Tr = 2,26 min (65%).

Etapa 2: 4-(8-(4-(4-Metilpiperazin-1-il)fenilamino)-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5a] pirazin- 5-il)piridin-2( 1 H)-ona

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H

Uma solução de [5-(2-metóxi-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il]-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (40 mg, 0,096 mmol) e cloridrato de piridina (55 mg, 0,48 mmol) em água (1 ml) é agitada em tem- peratura ambiente por 1 hora. O solvente é removido in vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM:NH3 96:4 (7 M em MeOH). O composto do título é isolado (23 mg, 60%).

Onze mg (0,0273 mmol) do composto de base livre são dissolvi- dos na quantidade mínima de MeOH/DCM, (refluída até dissolver), e ácido metanossulfônico 0,1 M (0,273 ml) em MeOH é adicionado. Após evapora- ção do solvente, o resíduo é triturado várias vezes com uma mistura de 1:1 acetato de etila-éter dietílico e DCM-éter dietílico, filtrado e seco in vácuo, para gerar o composto-alvo como um sal de mesilato (13 mg, 99%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,21 (3H, s), 2,91 (3H, s, MsOH), 3,00 (2H, t), 3,18-3,26 (2H, m), 3,58 (2H, d), 3,90 (2H, d), 6,83 (1H, s), 7,07 (2H, d), 7,25 (1H, s), 7,53 (1H, d), 7,93 (2H, d), 8,14 (1H, s), 8,76 (1H, s), 9,69 (1H, br s), 10,21 (1H, s), 13,3 (1H, br s), LCMS: Tr= 1,71 min (97,5%), m/z (APCI) 403 (M+H)+.

Composto 6: Amida de ácido 4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico

Etapa 1: (5-Bromo-[ 1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1 -H)- fenilj-amina

7,20 mmols), 4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamina (1,65 g, 8,64 mmols) e N- etildiisopropil-amina (1,5 ml, 8,64 mmols) é aquecida a 80°C em 2-propanol (50 ml) por 8 horas. A mistura de reação é evaporada até seca, e o resíduo dividido entre diclorometano e água. A fase aquosa é extraída duas vezes com diclorometano. As camadas orgânicas são lavadas com salmoura, se- cas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas, para fornecer o composto do título (1,41 g) como um sólido cinza. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,27 (3H, s), 2,54 (4H, m), 3,14 (4H, m), 6,97 (2H, d), 7,80 (2H, d), 7,87 (1H, s), 8,72 (1H, s), 9,92 (1H, br s), LCMS: Tr = 2,07 min (77,4%), m/z (APCI) 388 (M+H)+.

Etapa 2: Amida de ácido 4-Bromo-tiofeno-2-carboxílico

Br

Uma mistura de 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (2 g, NH2

Uma solução de ácido 4 bromo-tiofeno-2-carboxílico (2,0 g, 9,66 mmols), cloridrato de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (2,04 g, 10,63 mmols) e hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (1,44 g, 10,63 mmols) em DMF (20 ml) é agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura de reação é então resfriada até 0°C, e NH3 aquoso (1 ml, 17,3 mmols) é adicio- nado. A mistura é agitada em temperatura ambiente por mais 5 horas, e de- pois é adicionada água à mistura de reação e o precipitado resultante é cole- tado por filtração e lavado com NaOH 1 M, H2O e éter de petróleo. O com- posto do título é isolado como um sólido branco (1,56 g, 78%).

Etapa 3: Amida de ácido 4-(4,4,5,5-Tetrametil-[1,3,2]dioxaboroian-2-il)- tiofeno-2-carboxílico

V=O HsN

Amida de ácido 4-Bromo-tiofeno-2-carboxílico (1,3 g, 6,34 mmols), bis(pinacolato)diboro (3,22 g, 12,7 mmols), PdCI2 dppf (0,26 g, 0,318 mol) e KOAc (1,87 g, 19,10 mmol) são suspensos em dioxano (20 ml), purificados com nitrogênio por 5 minutos e, depois aquecidos a 90°C de um dia para o outro. O solvente é removido in vácuo, e o resíduo dividido entre acetato de etila e água. A camada aquosa é extraída três vezes com acetato de etila, e as fases orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, filtra- das através de MgSO4 e evaporadas. O produto do título é cristalizado por EtOAc-éter de petróleo (2,135 g, 77% puro por LCMS). Etapa 4: Amida de ácido 4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxíiico JTY

HN S

NH1

Uma suspensão de 5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4- (4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (100 mg, 258 mmol), amida de ácido 4- (4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxa-borolan-2-il)-tiofeno-2-carboxílico (130 mg, 516 mmol) e Pd(PPh3)4 (74 mg, 64,5 mmol) em Na2CO3 aquoso (1,37 ml, 1,5 M, 2,06 mmol) e DMF/dioxano 2/1 (2,75 ml) é desgaseificada por 5 min em um tubo de reação. O tubo é lacrado e a mistura de reação é aquecida a 90°C de um dia para o outro. Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura de reação é dividida entre acetato de etila e água. O precipitado é coletado por filtração e lavado com água (1 x)e éter (2 x) e seco in vácuo. O produto bruto é purificado por cromatografia em coluna (sílica-gel, DCM/MeOH/NH3 96:4), gerando o composto do título (43 mg) como um sóli- do amarelo. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,26 (3H, s), 2,50 (4H, m), 3,15 (4H, m,), 6,99 (2H, d), 7,60 (1H, br s), 7,88 (2H, d), 8,10 (2H, m), 8,48 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,79 (1H, s), 9,97 (1H, br s), LCMS: Tr = 1,99 min (97,6%), m/z (APCI) 435 (M+H)+.

Composto 9: Amida de ácido 5-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico Etapa 1: amida de ácido 5-Bromo-tiofeno-2-carboxílico

o b

T V......Br

H2N

Uma solução de ácido 5-bromo-tiofeno-2-carboxílico (4,51 g, 21,78 mmols), hidrato de 3-hidroxibenzotriazol (3,24 g, 23,96 mmols), 1-etil- 3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (4,6 g, 23,96 mmol) em DMF (70 ml) é agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura de reação é então resfriada até 0°C e NH3 aquoso 35% (2,2 ml) é adicionado. A mistura é agi-

XT tada em temperatura ambiente de um dia para o outro. O solvente é removi- do in vácuo e o resíduo dissolvido em EtOAc, lavado com NaHCO3 1 N, e salmoura. As camadas orgânicas são combinadas, secas sobre MgSCX fil- tradas e concentradas, para gerar o composto do título (3,78 g, 84%). HPLC (254 nm): Tr = 2,46 min (96,5%).

Etapa 2: Amida de ácido 5-(4,4,5,5-Tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)- tiofeno-2-carboxílico

mmols), bis(pinacolato)diboro (678 mg, 2,669 mmols), PdCI2 dppf (59 mg, 0,072 mmol) e KOAc (0,714 g, 7,28 mmols) são suspensos em dioxano (5 ml), purificados com nitrogênio por 5 minutos, e depois aquecidos a 85°C de um dia para o outro. O solvente é removido in vácuo e o resíduo dividido en- tre acetato de etila e água. A camada aquosa é extraída novamente com acetato de etila, e as fases orgânicas combinadas são lavadas com salmou- ra, filtradas através de MgSO4 e evaporadas in vácuo para gerar o composto do título (417 mg, 68%).

Etapa 3: Amida de ácido 5-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando 5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1 -il)-fenil]-amina (100

Amida de ácido 5-bromo-tiofeno-2-carboxílico (0,5 g, 2,426 mg, 0,258 mmol), amida de ácido 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxa-borolan-2- il)-tiofeno-2-carboxílico (130 mg, 0,516 mmol) e Pd(PPh3)4 (74 mg, 0,0645 mmol) em Na2CO3 aquoso 1,5 M (1,37 ml, 2,06 mmol) e dioxano (2,75 ml). Após evaporação do solvente, o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 96:6 DCM:NH3 (7 M em MeOH) para gerar o composto do título (23 mg, 21%). LCMS: Tr = 1,94 min (97,9%). 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) δ (ppm) 2,26 (3H, s), 2,49 (4H, m), 3,14 (4H, m), 6,98 (2H, d), 7,51 (1H, br s), 7,85-7,89 (2H, m), 8,03 (2H, d), 8,10 (1H, br s), 8,38 (1H, s), 8,82 (1H, s), 10,10 (1H, s), LCMS: Tr= 1,94 min, (97,9%), m/z (AP- Cl) 435 (M+H)+.

Composto 12: 5-(5-Metil-1H-pirazola-4-il)-N-(4-morfolinofenil)-

[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (0,2 g, 0,53 mmol), 5-metil-4- (4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol (222 mg, 1,06 mmol) e Pd(PPh3)4 (0,154 mg, 0,134 mmol) em Na2CO3 1,5 M (aquoso) (2,84 ml, 4,26 mmols) e dioxano (8,5 ml). A mistura de reação é purificada por croma- tografia em coluna de sílica-gel com o uso de 98:2 e 97:3 DCM:NH3 (7 M em MeOH) para gerar o composto do título (15 mg, 7,5%). A conversão no sal de mesilato com a utilização de ácido metanossulfônico 0,1 M em MeOH (0,398 ml) gera o composto do título (15 mg) como um sólido verde-pálido. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,41 (3H, s, MsOH), 2,46 (3H, s), 3,20 (4H, m), 3,71 (4H, m), 7,11 (2H, d), 7,74 (1H, s), 7,97 (2H, d), 8,15 (1H, s), 8,69 (1H, s), 9,88 (1H, s), LCMS: Tr = 2,41 min (98.3%), m/z (APCI) 377

o

N

N—NH

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- (Μ+Η)+.

Composto 15: Amida de ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico

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NH?

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando (5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (0,2 g, 0,53 mmol), amida de ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofeno- 2-carboxílico (0,27 mg, 1,06 mmol) e Pd(PPh3)4 (0,15 mg, 0,133 mmol) em Na2CO3 1,5 M (aquoso) (2,84 ml, 4,26 mmols) e dioxano (10 ml). A mistura de reação é dividida entre água e acetato de etila. Um precipitado é formado, coletado por filtração e purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel com o uso de DCM:MeOH 95:5, para gerar o composto do título (84,1 mg, 37,4%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3,13 (4H, m), 3,79 (4H, m), 7,01 (2H, d), 7,60 (1H, br s), 7,91 (2H, d), 8,10 (2H, s), 8,48 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,79 (1H, s), 9,96 (1H, s), LCMS: Tr = 2,61 min (97,1%), m/z (APCI) 422 (M+H)+.

Composto 16: 5-(5-Metil-1 H-pirazola-4-il)-N-(4-(4-metilpiperazin-1 -il)fenil)- [1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-amina

Etapa 1:5-Metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol

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Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 86, etapa 2, com o uso de 4-bromo-5-metil- 1 H-pirazol (3 g, 18,6 mmols), bis(pinacolato)diboro (8,52 g, 33,5 mmols), PdCI2 dppf (913 mg, 1,118 mmol) e KOAc (5,49 mg, 55,9 mmols) em sulfóxi- do de dimetila (30 ml). A mistura de reação é purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 7:3, seguida por éter de petró- leo:acetato de etila 1:1, para gerar 5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol (3,87 g, 100%).

Etapa 2: 5-(5-Metil-1H-pirazola-4-il)-N-(4-(4-metilpiperazin-1 -il)fenil)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina

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Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (132 mg, 0,340 mmol), 5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol (141 mg, 0,68 mmol), Pd(PPh3)4 (98 mg, 0,085 mmol) e Na2CO3 1,5 N (1,81 ml, 2,72 mmol) em dioxano (5.4 ml). O produto bruto é purificado por cromato- grafia em coluna de sílica-gel, eluindo com 95:5 DCM:NH3 (7 M em MeOH), seguida por trituração com éter dietílico e éter de petróleo, para gerar o composto do título (9 mg, 7%) como um sólido verde-pálido. 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) δ (ppm) 2,27 (3H, s), 2,38-2,49 (7H, m), 3,14 (4H, m), 6,97 (2H, d), 7,70 (1H, s), 7,88 (2H, d), 7,99 e 8,43 (1H, br s), 8,68 (1H, s), 9,71 (1H, s), 12,92 e 12,98 (1H, br s).

A conversão no sal de mesilato com o uso de ácido metanossul- fônico 0,1 M (0,231 ml) gera o composto-alvo (11 mg). LCMS: Tr = 1,78 min (86%), m/z (APCI) 390 (M+H)+. Composto 17: -(3-Flúor-4-morfolinofenil)-5-(1H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina

Etapa 1: (5-Bromo-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-aJpirazin-8-il)-(3-flúor-4-morfolin-4-il- fenil)-amina

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Bf

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 1, com o uso de 5,8-dibromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,5 g, 1,799 mmol), 3-flúor-4-morfolin-4-il- fenilamina (0,53 g, 2,70 mmol) e DIPEA (0,470 ml, 2,70 mmol) em 2- propanol (6 ml). A mistura de reação é dividida entre solução aquosa de áci- do cítrico 10% e DCM. A fase orgânica é separada e lavada com água e salmoura, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada sob vácuo, para gerar o composto do título (697 mg, 98%) que é usado na etapa seguinte, sem puri- ficação adicional. LCMS: Tr = 3,52 min (98,2%).

Etapa 2: N-(3-Flúor-4-morfolinofenil)-5-(1H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[ 1,5- a]pirazin-8-amina

HN"

i i

-γ" N ,A. \

N—N H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com uso de (5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(3-flúor-4-morfolin-4-il-fenil)-amina (100 mg, 0,254 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (99 mg, 0,51 mmol) e Pd(PPh3)4 (73 mg, 0,063 mmol) em Na2CO3 1,5 M (1,36 ml, 2,03 mmols) e dioxano (4 ml). O material bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 98:2 DCM:NH3 (7 M em MeOH) e por trituração com éter dietílico e éter de petróleo, para gerar o composto-alvo (43 mg, 44%).

1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3,01 (4H, m), 3,79 (4H, m), 7,08 (1H, t), 7,79 (1H, d), 8,06 (1H, d), 8,26 (1H, s), 8,38 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,79 (1H, s), 10,03 (1H, s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Tr = 2,83 min (99%), m/z (APCI) 381 (M+H)+.

Composto 19: 5-(5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2- morfolinobenzamida

Etapa 1: 5-(5-Bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il- benzamida

Br

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 1, com o uso de 5,8-dibromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (250 mg, 0,90 mmol) 5-amino-2-morfolin-4-ila benzamida (299 mg, 1,35 mmol) e A/,A/-diisopropiletilamina (0,24 ml, 1,35 mmol) em 2-propanol (7 ml). A trituração com iPrOH e Et2O gera o composto do título (273 mg, 73%).

Etapa 2: 5-(5-(1H-Pirazola-4-il)-[ 1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2- morfolinobenzamida

O

N.........NH

20

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando 5-(5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il-benzamida (140 mg, 0,33 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (130 mg, 0,67 mmol) e Pd(PPh3)4 (96 mg, 0,083 mmol) em K2CO3 1,5 M (aquoso) (1,93 ml) e dioxano (3,44 ml). O material bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM, seguido por DCMiNH3 99:1, e depois 97:3, e depois 95:5 (7 M em MeOH) para gerar o composto do título como um sólido branco (40,5 mg, 30%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,96 (4H, m), 3,79 (4H, m), 7,28 (2H, d), 7,45 (1H, m), 7,54 (1H, br s), 8,01-8,09 (1H1 dd), 8,25 (1H, s), 8,50 (1H, d), 8,69 (1H, br s), 8,78 (1H, s), 9,98 (1H, s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Tr = 2,23 min (96,9%), m/z (APCI) 406 (M+H)+.

Composto 21: 4-(8-(4-(2-Morfolinoetóxi)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il)tiofeno-2-carboxamida

M Tl

,A-,. J k ,o

HN'

i- -N

Μ* 'γ=*' \

f4

NHi

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com uso de (5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-fenil]-amina (113 mg, 0,27 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofeno-2- carboxamida (136 mg, 0,537 mmol) e Pd(PPh3)4 (78 mg, 0,067 mmol) em Na2CO3 1,5 M (1,44 ml, 2,16 mmols) e dioxano (4,3 ml). A mistura de reação é purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 97:3 DCM:NH3 (7 M em MeOH), para gerar o composto do título (65 mg, 52%). LCMS: Tr = 1,98 min (98,9%). A conversão no sal de mesilato com a utiliza- ção de ácido metanossulfônico 0,1 M em MeOH (1,1385 ml) gera o compos- to do título (50 mg, 95%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,37 (3H, s, MsOH), 3,21-3,64 (6Η, m), 3,76 (2Η, t), 4,05 (2Η, d), 4,40 (2H, m), 7,09 (2H, d), 7,61 (1H, br s), 8,02 (2H, d), 8,11 (2H, s), 8,48 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,82 (1H, s), 9,91 (1H, br s), 10,09 (1H, s). LCMS: Tr = 1,98 min (97,7%), m/z (APCI) 466 (M+H)+.

Composto 22: 5-(8-(4-(2-Morfolinoetóxi)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il)tiofeno-2-carboxamida

f >

-O

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com uso de (5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-fenil]-amina (118 mg, 0,28 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofeno-2- carboxamida (142 mg, 0,56 mmol) e Pd(PPh3)4 (81 mg, 0,07 mmol) em Na2CO3 1,5 M (1,5 ml, 2,24 mmols) e dioxano (4,5 ml). A mistura de reação é purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 97:3 DCM:NH3 (7 M em MeOH), para gerar o composto do título (33 mg, 25%). LCMS: Tr = 2,66 min (99%). A conversão no sal de mesilato com a utilização de ácido metanossulfônico 0,1 M em MeOH (0,569 ml) gera o composto do título (24 mg, 86%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,37 (3H, s, MsOH), 3,25 (2H, m), 3,50-3,64 (4H, m), 3,76 (2H, t), 4,05 (2H, d), 4,40 (2H, m), 7,09 (2H, d), 7,51 (1H, brs), 7,87 (1H, d), 7,99-8,05 (3H, m), 8,11 (1H, br s), 8,37 (1H, s), 8,84 (1H, s), 9,92 (1H, br s), 10,21 (1H, s). LCMS: Tr = 1,95 min (98,8%), m/z (APCI) 466 (M+H)+.

Composto 23: (4-Morfolin-4-il-fenil)-[5-(2H-pirazola-3-il)-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-8-il]-amina

Etapa 1: 1 -(Tetrahidro-piran-2-il)-1 H-pirazol . N K

X

""'vO

7/7-Pirazol (14,3 g, 0,21 mol) é dissolvido em 3,4-diidro-2H-piran

(26,74 g, 0,32mol) na presença de uma quantidade catalítica de TFA (0,1 ml, 1,3 mmol). A mistura de reação é agitada a 95°C por 5 horas, resfriada e depois extinta usando NaH (0,2 g, 5 mmols). O solvente é removido para gerar o composto do título como um óleo marrom (33,3 g, 99%), que é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. Etapa 2: Ácido 1 H-pirazola-2-borônico

pirazol (7,6 g, 52 mmols) em THF (50 ml), nBuLi (33 ml, 2,5 M em hexano, 82,5 mmols) e triisopropil borano (12,7 ml, 55 mmols) são adicionados gota a gota, mantendo a temperatura a -70°C. A mistura de reação é agitada a - 70°C por uma hora, e depois permite-se que atinja a temperatura ambiente ao longo de 4 horas. Após extinção da reação com HCI 2 Μ, o solvente é removido in vácuo e o pH é ajustado em pH 6 com o uso de NaOH 1 M. Um precipitado é formado, coletado por filtração e lavado com tolueno e éter de petróleo. A trituração com acetato de etila gera o composto-alvo como um sólido branco (2,7 g, 48%), que é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional.

Etapa 3: f4-Morfo//n-4w7-fen//;-/5-f2H-p/razo/a-3-//>/"í,2,47ínazo/o [1,5- a]pirazin-8-il]-amina

HO

A uma solução resfriada (-78°C) de 1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com o uso de 5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(morfolin-4-il)-fenil]-amina (100 mg, 0,267 mmol), ácido 1 H-pirazola-2-borônico (60 mg, 0,535 mmol), Pd(PPh3)4 (93 mg, 0,08 mmol) e Na2CO3 (88 mg, 0,80 mmol) em DMF (2 ml). A mistura de reação é colocada em um tubo-tronco e agitada a 100°C por 18 horas. Após resfriamento, a mistura é diluída com solução de NaHCO3 e extraída com EtOAc (4 χ). A camada orgânica é lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada para gerar um produto bruto que é purificado por croma- tografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM, seguido por DCMiNH3 96:4 (7 M em MeOH). O composto do título é isolado após trituração com éter dietílico (12,4 mg, 13%). A conversão no sal de mesilato com a utiliza- ção de ácido metanossulfônico 0,1 M (0,342 ml, 0,0342 mmol) gera o com- posto-alvo (10 mg, 81%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,34 (3H, s, MsOH), 3,14 (4H, m), 3,81 (4H, m), 7,04 (2H, d), 7,27 (1H, m), 7,92 (3H, m), 8,24 (1H, s), 8,76 (1H, s), 9,92 (1H, s). LCMS: Tr = 2,45 min (97,6%), m/z (APCI) 363 (M+H)+.

Composto 28: 4-(8-(4-(4-lsopropilpiperazin-1 -il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il)tiofeno-2-carboxamida

f N

J.......

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N

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O--W

\

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com o uso de 5-bromo-N-(6-(4- isopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (100 mg, 0,24 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofeno-2- carboxamida (121 mg, 0,48 mmol) e Pd(PPh3)4 (69 mg, 0,059 mmol) em Na2CO3 1,5 M (1,28 ml, 1,92 mmol) e dioxano (3,84 ml). O produto bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM e 97:3 DCMiNH3 (7 M em MeOH), para gerar o composto do título (68 mg, 61%) como um sólido verde-pálido. A conversão no sal de mesilato com a utilização de ácido metanossulfônico 0,1 M em MeOH (1,47 ml, 0,147 mmol), seguida por trituração com DCM e éter dietílico, gera o composto do título (67 mg, 98,5%). 1H RMN (400 MHz1 d6-DMSO) δ (ppm) 1,35 (6H, d), 2,34 (3H, s, MsOH), 3,00 (2H, t), 3,22-3,25 (2H, m), 3,56-3,61 (3H, m), 3,89 (2H, d), 7,09 (2H, d), 7,60 (1H, br s), 7,97 (2H, d), 8,10 (2H, s), 8,48 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,81 (1H, s), 9,23 (1H, br s), 10,03 (1H, s). LCMS: Tr = 2,13 min (98,4%), m/z (APCI) 463 (M+H)+.

Composto 29: 5-(8-(4-Morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5- il)furan-3-carboxamida

Etapa 1: Terc-butil éster de ácido [5-(4-Carbamoíla-furan-2-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fe

N., J

Λ

f 9

o=('

NH2

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 35, etapa 3, com o uso de terc-buXW éster de ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestananil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- il)-carbâmico (137 mg, 0,199 mmol), 5-bromo-furan-3-carboxamida (76 mg, 0,4 mmol) e Pd(PPh3)4 (23 mg, 0,020 mmol) em DMF (1 ml). A purificação da mistura de reação eluindo com DCM:MeOH 98:2 e DCM:NH3 96:4 (7 M em MeOH) gera o composto do título (33 mg, 33%).

Etapa 2: 5-(8-(4-Morfolinofenilamino)-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-5-il)furan-3- carboxamida ο

N

C

ΜΗ,

Uma solução de terc-butil éster de ácido [5-(4-carbamoíla-furan-

2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbâmico (33 mg, 0,065 mmol) em uma mistura 1:1 DCM:TFA (2 ml) (2 gotas de água) é agita- da em temperatura ambiente por 2 horas. Após adição de Na2C03 saturado, um precipitado é formado, coletado por filtração e lavado com água, éter die- tílico e éter de petróleo. Após secagem sob vácuo, o composto do título é isolado (20 mg, 76%). A conversão no sal de mesilato com a utilização de ácido metanossulfônico 0,1 M em MeOH (0,444 ml) gera o composto do títu- lo (19 mg, 100%).

1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,36 (3H, s, MsOH), 3,22

(4H, m), 3,82-3,89 (4H, m), 7,13 (2H, d), 7,36 (1H, br s), 7,86 (1H, s), 7,95 (3H, m), 8,17 (1H, s), 8,40 (1H, s), 8,84 (1H, s), 10,17 (1H, s). LCMS: Tr = 2,60 min (96,9%), m/z (APCI) 406 (M+H)+.

Composto 33: 5-(8-(4-Morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5- il)isoindolin-1-ona

r ι

'NH

N

NH

O

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (1,0 g, 2,67 mmol), 5-(4,4,5,5- tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-diidro-isoindol-1-ona (veja a descrição para o Composto 79) (1,03 g, 4,01 mmol) e Pd(PPh3)4 (0,77 g, 0,67 mmol) em Na2CO3 1,5 M (14,3 ml) e dioxano (40 ml). A purificação por cromatogra- fia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM, seguido por DCMiNH3 96:4 (7 M em MeOH) gera o composto do título (0,895 g, 79%). 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) δ (ppm) 3,12 (4H, m), 3,79 (4H, m), 4,51 (2H, s), 7,01 (2H, d), 7,84 (1H, d), 7,92 (2H, d), 8,01 (1H, s), 8,09 (1H, d), 8,23 (1H, s), 8,72 (1H, s), 8,73 (1H, s), 10,02 (1H, s). LCMS: Tr = 2,51 min (97,8%), m/z (APCI) 428 (M+H)+.

Composto 34: 4-(8-(4-Morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5- il)furan-2-carboxamida

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com uso de (5-bromo- [1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (78 mg, 0,16 mmol), amida de ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-furan-2- carboxílico (100 mg, 0,34 mmol) e Pd(PPh3)4 (60 mg, 0,052 mmol) em Na2CO3 1,5 M (aquoso) (1,1 ml, 1,68 mmol) e dioxano (3 ml). A mistura de reação é dividida entre água e acetato de etila, o composto do título se pre- cipita e é coletado por filtração. A purificação do sólido por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM e 95:5 DCM:NH3 (7 M em MeOH), gera o composto do título (42 mg, 65%). A conversão no sal de mesilato com a utilização de ácido metanossulfônico 0,1 M (0,82 ml) gera um sólido que é triturado com éter dietílico, para gerar o composto do título (30,5 mg). 1H

N,

\ β

S O

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- RMN (400 MHz, Cl6-DMSO) δ (ppm) 2,19 (3Η, s, MsOH), 3,03-3,07 (4Η, m), 3,67 (4Η, m), 6,99 (2Η, br s), 7,43 (IH1 d), 7,74-7,82 (4H, m), 8,06 (1H, br s), 8,59 (1H, br s), 8,64 (1H, s), 9,91 (1H, br s). LCMS: Tr = 2,64 min (98,1%), m/z (APCI) 406 (M+H)+.

Composto 35: 6-(8-(4-Morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)- 3,4-diidroisoquinolin-1 (2H)-ona

Etapa 1: Terc-butil éster de ácido (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)- (4-morfolin-4-il-fenil)-carbâmico

^ „N. J

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Ts-sT-1V

Br

Uma solução de 5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4- (morfolin-4-il)-fenil]-amina (300 mg, 0,800 mmol), dimetilaminopiridina (10 mg, 0,08 mmol) e dicarbonato de di-terc-butila (523 mg, 2,4 mmol) em diclo- rometano (5 ml) é agitada a 50°C de um dia para o outro. A mistura de rea- ção é dividida entre DCM e água, e a camada orgânica é lavada com NaOH 1 N e salmoura. A camada orgânica é seca sobre MgS04, filtrada e concen- trada in vácuo, para gerar um composto bruto purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel. A eluição com DCMiMeOH 98:2 gera o composto do título (352 mg, 93%). LCMS: Tr = 3,45 min (97,8%).

Etapa 2: Terc-butil éster de ácido (4-Morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestananil- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-H)-carbâmico

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A uma solução resfriada (-78°C) de terc-butil éster de ácido (5-

bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbâmico (370 mg, 0,78 mmol) em THF (12 ml), são adicionados cloreto de isopropil- magnésio 2 M em THF (0,78 ml, 1,56 mmol), e após agitação por 5 minutos, cloreto de tributil-estanho (0,42, 1,56 mmol) é adicionado. A mistura de rea- ção é agitada a -78°C por 15 minutos e em temperatura ambiente por mais 15 minutos. Após remoção do solvente, o resíduo é purificado por cromato- grafia em coluna de sílica-gel, eluindo com 5:1 éter de petróleo:acetato de etila, seguido por éter de petróleo:acetato de etila 1:1.0 composto do título é isolado (105 mg, 20%).

Etapa 3: Terc-butil éster de ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1-oxo-1,2,3,4-

tetrahidro-isoquinolin-6-il)-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-il]-carbâmico

r

bac^^J

N^VwS

'■'V^M

A uma solução desgaseificada de terc-butil éster de ácido (4- morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestananil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)- carbâmico (100 mg, 0,15 mmol) e 6-bromo-3,4-diidro-2H-isoquinolin-1-ona em DMF (1 ml) é adicionado tetrakis(tritenilfosfina)paládio(0) (17 mg, 0,015 mmol), e a mistura de reação é agitada a 90°C de um dia para o outro. Após remoção do solvente in vácuo, o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel. A eluição com éter de petróleo:acetato de etila 1:1 e acetato de etila gera o composto-alvo como um sólido amarelo (30 mg, 37%).

Etapa 4: 6-[8-(4-Moiiolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1 ,õ-aJpirazin-õ-ilJ-SA- diidro^H-isoquinolin- 1 -ona Uma solução de terc-butil éster de ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-[5- (1-OXO-1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-6-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]- carbâmico (30 mg, 0,055 mmol) em uma mistura 1:1 de TFA:DCM (1 gota de H2O), é agitada em temperatura ambiente por 2 horas. O solvente é removi- do in vácuo, e o resíduo dividido entre acetato de etila e NaHCO3 saturado (aquoso). A camada aquosa é extraída com acetato de etila (2 x). As cama- das orgânicas são combinadas e evaporadas para gerar um resíduo purifi- cado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com acetato de etila. O composto do título é isolado (18 mg, 75%) e convertido no sal de mesilato (16,6 mg, 97%) com o uso de ácido metanossulfônico 0,1 M (0,317 ml) em MeOH.

1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,36 (3H, s MsOH), 3,04 (2H, t), 3,21 (4H, m), 3,47 (2H, t), 3,83 (4H, m), 7,11 (2H, d), 7,95-8,02 (6H, m), 8,05 (1H, s), 8,74 (1H, s), 10,09 (1H, br s). LCMS: Tr = 2,81 min (97,9%), m/z (APCI) 442 (M+H)+.

Composto 36: 5-(8-(4-(4-lsopropilpiperazin-1 -il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il)isoindolin-1 -ona

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Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando 5-bromo-N-(6-(4- isopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (0,6 g, 1,44 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-diidro-isoindol-

1-ona (0,56 g, 2,16 mmol) e Pd(PPh3)4 (0,416 g, 0,36 mmol) em Na2CO3 1,5 M (7,7 ml) e dioxano (23 ml). A purificação por cromatografia em coluna de

sílica-gel, eluindo com DCM, seguido por 98:2 DCMiNH3 (7 M em MeOH) gera o composto do título (0,36 g, 53%), que é convertido no sal de mesilato com o uso de ácido metanossulfônico 1 M em MeOH (0,77 ml). Após tritura- ção com éter dietílico e DCM, o composto do título é isolado como um sólido (0,410 g). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1,35 (6H, d), 2,35 (3H, s, MsOH), 3,04 (2H, t), 3,20-3,27 (2H, m), 3,56-3,63 (3H, m), 3,89 (2H, d), 4,52 (2H, s), 7,09 (2H, d), 7,85 (1H, d), 7,95-8,01 (3H, m), 8,10 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,72 (1H, s), 8,74 (1H, s), 9,27 (1H, br s), 10,07 (1H1 s). LCMS: Tr = 2,93 min (97,9%), m/z (ES+) 469 (M+H)+. Composto 37: {5-[5-(1H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-

2-morfolinofenil}metanol

Etapa 1: (2-Morfolin-4-il-5-nitro-fenil)-metanol

,OH

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A uma solução resfriada (O0C) de 2-morfolin-4-il-5-nitro- benzaldeído (0,8 g, 3,39 mmols) em MeOH (5 ml), é adicionado NaBH4 (0,125 g, 3,39 mmol), e a mistura de reação é agitada em temperatura ambi- ente por 3 horas. Após extinção da reação com água, o solvente é removido in vácuo e o resíduo dissolvido em acetato de etila e lavado com salmoura. A camada orgânica é seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada, para gerar o composto do título (870 mg), que é usado na etapa seguinte, sem purifica- ção adicional.

Etapa 2: (5-Amino-2-morfolin-4-il-fenil)-metanol

,OH ^

r r O

HjN A uma solução de (2-morfolin-4-il-5-nitro-fenil)-metanol (870 mg) em etanol (40 ml), é adicionado hidróxido de paládio (87 mg) e a mistura é agitada em um aparelho de Parr sob pressão de hidrogênio (10 bars) por 4 horas. A mistura de reação é filtrada sobre Celite 521, lavada com etanol e concentrada in vácuo, para gerar o composto do título (640 mg, 83%). Etapa 3:3-(terc-Butil-dimetil-silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenilamina

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Uma solução de (5-amino-2-morfolin-4-il-fenil)-metanol (640 mg, 3,07 mmols), cloreto de terc-butildimetilsilila (509 mg, 3,38 mmols) e imidazol (250 mg, 3,68 mmols) em dimetilformamida (20 ml) é agitada em temperatu- ra ambiente de um dia para o outro. O solvente é removido in vácuo, e o re- síduo dividido entre água e acetato de etila. A camada orgânica é lavada com salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada, para gerar um produto bruto. A purificação com a utilização de cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM, seguido por uma mistura 95:5 de DCM:MeOH, gera o composto do título como um sólido rosa (390 mg, 27%). Etapa 4: (5-Bromo-[1,2^]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[3-(terc-butil-dimetil- silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenil]-amina

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Uma mistura de 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,391 g, 1,41 mmol), 3-(íerc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenilamina (0,5 g, 1,55 mmol) e N-etildiisopropil-amina (0,27 ml, 1,55 mmol) é aquecida a 90°C em 2-propanol (10 ml) por 8 horas. A mistura de reação é evaporada até secar, e o resíduo dividido entre diclorometano e água. A fase aquosa é extraída duas vezes com diclorometano. As camadas orgânicas são combi- nadas, lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas in vácuo para gerar o composto do título (335 mg, 46%).

Etapa 5: [5-(5-Bromo-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il- fenil]-metanol

, OH

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Uma solução de 5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[3- (íerc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenil]-amina (285 mg, 0,549 mmol) em solução de fluoreto de tetrabutilamônio 1 M em THF (0,63 ml), é agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura de reação é dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica é lavada com solução de ácido cítrico 10% e salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada, pa- ra gerar o composto do título como um sólido creme (100 mg, 45%). Etapa 6: {5-[5-(1H-Pirazola-4-il)-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-ilamino]-2- morfolinofeniljmetanol

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando [5-(5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il-fenil]-metanol (85 mg, 0,21 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxa-borolan-2-il)-1 H-pirazol (81 mg, 0,42 mmol) e Pd(PPh3)4 (60 mg, 0,052 mmol) em Na2CO3 1,5 M (1,12 ml) e dioxano (2,0 ml). A mistura de reação é purificada por cromatografia em co- luna de sílica-gel, eluindo com 95:3 DCM:NH3 (7 M em MeOH), seguida por purificação por HPLC preparativa de fase reversa. O composto do título é obtido como um sólido marrom-pálido (10 mg, 12%). 1H RMN (400 MHz, d6- DMSO) δ (ppm) 2,87 (4H, m), 3,77 (4H, m), 4,63 (2H, d), 5,12 (1H, t), 7,11 (1H, d), 7,84 (1H, d), 8,12 (1H, s), 8,21 (1H, s), 8,39 (1H, s), 8,69 (1H, s), 8,77 (1H, s), 9,78 (1H, s), 13,29 (1H, br s). LCMS: Tr = 2,45 min (96.3%), m/z (APCI) 393 (M+H)+.

Composto 41: (6-[Morfolin-4-il]piridin-3-il)-[5-(1 H-pirazola-4-il)-

[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

dos descritos para o Composto 120, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-(6-morfolin-4-il-piridin-3-il)amina na Etapa 4. LCMS: Tr = 0,80 min (95%), m/z (ESI) 364 (M+H)+.

Composto 42: [6-(4-[Ciclopropilmetila]piperazin-1-il)piridin-3-il]-[5-(1H- pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

N-N H Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 120, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[6-(4-[ciclopropilmetila]piperazin-1 -il)piridin-3-il]amina na etapa 4. LCMS: Tr = 0,80 min (95%), m/z (ESI) 417 (M+H)+. Composto 43: [6-(4-lsopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-il]-[5-(1 H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

dos descritos para o Composto 120, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina na Etapa 4. LCMS: Tr = 0,77 min (95%), m/z (ESI) 405 (M+H)+.

Composto 44: [5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-{6-[4- (2,2,2-trifluoretil) piperazin-1 -il]piridin-3-il}amina

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 120, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-{6-[4-(2,2,2-trifluoretil)piperazin-1-il]-piridin-3-il}amina na etapa 4. LCMS: Tr = 0,95 min (95%), m/z (ESI) 445 (M+H)\

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

N N___J F

N-N

H Composto 46: {4-[4-(Ciclopropilmetila)piperazin-1 -il]fenil}-[5-(1 H-pirazola-4- il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

Γΐ^ν

HN N

N-N

H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 120, Etapa 4, com uso de (5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-{4-[4-ciclopropilmetila)piperazin-1-il]fenil} a- mina. LCMS: Tr = 1,02 (95%), m/z (ESI) = 444 (M+H)+. Composto 47: Amida de ácido 4-[8-(6-[Morfolin-4-il]piridin-3-ilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]tiofeno-2-carboxílico

r^O

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 167, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-(6-morfolin-4-il-piridin-3-il)amina na Etapa 4. LCMS: Tr = 0,85 min (95%), m/z (ESI) 423 (M+H)+.

Composto 48: (5-Benzo[b]tiofen-3-il-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4- morfolin-4-ilfenil)amina JO

Ό

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 120, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina e 4,4,5,5-tetrametil-2-benzo[b]tiofen- 3-il-[1,3,2]dioxaborolano na etapa 4. LCMS: Tr = 0,84 min (95%), m/z (ESI) 402 (M+H)+.

Composto 50: (4-Morfolin-4-ilfenil)-(5-tiofen-3-il-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- il)amina

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 120, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina e 4,4,5,5-tetrametil-2-tiofen-3-il- [1,3,2]dioxaborolano na etapa 4. LCMS: Tr = 1,19 min (95%), m/z (ESI) 379 (M+H)+.

Composto 51: [4-(4-lsopropilpiperazin-1-il)fenil]-(5-tiofen-3-il-

[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)amina Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 50, com uso de (5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina na etapa final. LCMS: Tr = 1,11 min (95%), m/z (ESI) 420 (M+H)+.

Composto 52: 5-(5-Etil-1 H-pirazola-4-il)-N-(4-morfolinofenil)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-amina Etapa 1: 3-Etil-1 H-pirazol

3,25 mmols) e sal de sulfato de hidrazina (0,56 g, 4,33 mmols) em etanol (15 ml), é adicionado Na2CO3 saturado (0,52 g, 4,87 mmols), e a mistura é reflu- ída a 90°C por 5 horas. A mistura de reação é diluída com água e salmoura, e extraída com o uso de éter dietílico (3 x). As camadas orgânicas são com- binadas, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas, para gerar um produ- to bruto, purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel. A eluição com éter de petróleo: acetato de etila 90:10 gera o composto do título (0,1196 g, 36%).

Etapa 2:4-Bromo-5-etil-1 H-pirazol

A uma solução agitada de 1-trimetilsilanil-pent-1-in-3-ona (0,5 g,

Br

Ν-

Α uma solução agitada de 3-etil-1 H-pirazol (0,114 g, 1,186 mmol) em ácido acético (2 ml), é adicionado bromo (0,061 ml, 1,186 mmol), e a mistura é agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura de reação é alcalinizada com NaHCO3 saturado, e extraída com o uso de aceta- to de etila (3 x). As camadas orgânicas são combinadas, secas sobre Mg- SO4, filtradas e concentradas, para gerar o composto do título (0,180 g, 87%). O composto é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. Etapa 3: 4-Bromo-5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1 H-pirazol e 4-Bromo-3-etil-1- (tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol

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4-Bromo-5-etil-1H-pirazol (0,179 g, 1,032 mmol) é dissolvido em 3,4-diidro-2H-piran (0,28 ml, 3,098 mmols) na presença de uma quantidade catalítica de TFA (0,001 ml, 0,00103 mmol). A mistura de reação é agitada a 90°C por 3 horas, resfriada e depois extinta usando NaH (1,5 mg, 0,0061 mmol). Após remoção do solvente, o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com uma mistura de 90:10 de éter de petró- leo-acetato de etila. As frações que contêm os compostos desejados são coletadas e concentradas in vácuo para gerar os compostos do título (175 mg, 66%).

Etapa 4: 5-Etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-

[ 1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol e 3-Etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5- tetrametil-[ 1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol

o

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N

í N 0

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 86, etapa 2, com o uso de 4-bromo-5-etil-1- (tetrahidro-piran-2-il)-1 H-pirazol e 4-bromo-3-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1 H- pirazol (168 mg, 0,65 mmol), bis(pinacolato)diboro (331 mg, 1,3 mmol), Pd- Cl2 dppf (53 mg, 65 μιτιοΙ) e KOAc (190 mg, 1,95 mmol) em sulfóxido de di- metila (2 ml). A mistura de reação é purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 90:10 éter de petróleo:acetato de etila, para gerar os compostos do título (61,1 mg, 31%).

Etapa 5: {5-[5-Etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1 H-pirazola-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina e {5-[3-Etil-1 -(tetrahidro-piran-2-il)- 1 H-pirazola-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (0,032 g, 0,085 mmol), 5-etil-1 - (tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol e 3-etil-1 -(tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)- 1 H-pirazol (0,52 mg, 0,17 mmol) e Pd(PPh3)4 (0,025 mg, 0,021 mmol) em Na2CO3 1,5 M (aquoso) (0,45 ml, 0,6 mmol) e dioxano (2 ml). A mistura de reação é purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com éter de petróleo:acetato de etila 1:1, seguido por 1:4 éter de petróleo:acetato de etila, para gerar o composto do título (45 mg).

Etapa 6: 5-(5-Etil-1H-pirazola-4-il)-N-(4-morfolinofenil)-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-8-amina

O

XX

O

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

9

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20

Uma solução de {5-[5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazola-4- il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina e {5-[3-etil-1 - (tetrahidro-piran-2-il)-1 H-pirazola-4-il]-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il}-(4- morfolin-4-il-fenil)-amina (40 mg, 0,077 mmol) e HCI concentrado (0,3 ml) em MeOH (10 ml) é agitada em temperatura ambiente por 5 horas. Após remo- ção do solvente, o resíduo sólido é dividido entre acetato de etila e NaHCOs saturado. O sólido não dissolvido é coletado por filtração, lavado com água, éter dietílico e éter de petróleo e seco, para gerar o composto do título (5 mg, 17%). A conversão no sal de mesilato com a utilização de ácido meta- nossulfônico 0,1 M (0,128 ml) gera o composto do título (5,6 mg, 89%) como um sólido.

1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1,13 (3H, m), 2,29 (3H, s, MsOH), 2,74 (2H, m), 3,29 (4H, m), 3,77 (4H, m), 7,06 (2H, m), 7,62 (1H, s), 7,89 (2H, d), 8,00 (1H, s), 8,61 (1H, s), 9,83 (1H, s). LCMS: Tr = 2,69 min (98,4%), m/z (APCI) 391 (M+H)+. Composto 53: 6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5- il]-1,1 -dioxo-1,2-diidro-1A6-benzo[d]isotiazol-3-ona

Etapa 1: 1,1-Dioxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-[ 1,3,2]dioxaborolan-2-il)- 1,2-diidro-1 Á6-benzo[d]isotiazol-3-ona

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Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 86, etapa 2, com o uso de 6-bromo-1,1- dioxo-1,2-diidro-1 Â6-benzo[d]isotiazol-3-ona (0,5, 1,9 mmol), bis(pinacolato) diboro (0,53 g, 2,1 mmols), PdCI2 dppf (0,047 g, 0,058 mmol) e KOAc (0,56 g, 5,7 mmols) em dioxano (10 ml). O solvente é removido in vácuo, e o resí- duo é dividido entre DCM e água. A camada orgânica é lavada com NaHCC>3 saturado e HCI 2 M, seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada, para gerar o composto do título (990 mg, 169%), que é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. Etapa 2: Terc-butil éster de ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1,1,3-trioxo-2,3- diidro-1H-1 A6-benzo[d]iso tiazol- 6-il) -[ 1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-

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Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando terc-butil éster de ácido (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbâmico (170 mg, 0,36 mmol), 1,1-dioxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)- 1,2-diidro-1 Â6-benzo[d]isotiazol-3-ona (374 mg, 0,72 mmol) e Pd(PPh3)4 (100 mg, 0,082 mmol) em Na2CO3 1,5 M (2 ml, 3 mmols) e dioxano (6 ml). A purificação da mistura de reação por cromatografia em coluna de sílica-gel com o uso de éter de petróleo:acetato de etila 1:1 gera um composto ainda impuro. Uma segunda cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM:MeOH 10:1 gera o composto do título (91 mg, 44%). Etapa 3: 6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-5-il]-1,1- dioxo- 1,2-diidro-1 Á6-benzo[d]isotiazol-3-ona

HKl - N " - - N

I ' '

í S=O

J-N 0 H

Uma suspensão de terc-butil éster de ácido (4-morfolin-4-il-fenil)- [5-(1,1,3-trioxo-2,3-diidro-1 H-1 Â6-benzo[d]isotiazol-6-il)-[1,2,4] triazolo[1,5- a]pirazin-8-il]-carbâmico (100 mg, 0,173 mmol) em HCI 4 M (2,5 ml) em dio- xano é agitada em temperatura ambiente por 2 horas. O solvente é removido sob vácuo e o resíduo é triturado com DCM, éter dietílico e éter de petróleo, para gerar o composto do título (84 mg, 100%). 1H RMN (400 MHz, d6- DMSO) δ (ppm) 3,25 (4H, m), 3,85 (4H, m), 7,20 (2H, d), 7,88 (2H, d), 8,16 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,58 (1H, d), 8,82 (2H, s), 8,96 (1H, s), 10,31 (1H, s). LCMS: Tr = 2,31 min (95,7%), m/z (APCI) 478 (M+H)+. Composto 54: Amida de ácido 4-{8-[6-(4-[ciclopropilmetila]piperazin-1-il)- piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-5-il}tiofeno-2-carboxílico

dos descritos para o Composto 120, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[6-(4-[ciclopropilmetila]piperazin-1 -il)piridin-3-il]amina na etapa 4. LCMS: Tr = 0,85 min (95%), m/z (ESI) 476 (M+H)+. Composto 55: amida de ácido 4-{8-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3- ilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}tiofeno-2-carboxílico

H2N

10

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

...λ

Esse composto pod

utilização dos méto- dos descritos para o Composto 167, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina na Etapa 4. LCMS: Tr = 0,82 min (95%), m/z (ESI) 464 (M+H)+.

Composto 56: Amida de ácido 4-(8-{6-[4-(2,2,2-trifluoretil)piperazin-1-il]- piridin-3-ilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofeno-2-carboxílico

dos descritos para o Composto 167, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-{6-[4-(2,2,2-trifluoretil)piperazin-1 -il]-piridin-3-il}amina na etapa 4. LCMS: Tr = 0,99 min (95%), m/z (ESI) 504 (M+H)+.

Composto 57: Amida de ácido 4-(8-{4-[4-(2,2,2-trifluoretil)piperazin-1-il]- fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofeno-2-carboxílico

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 58, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-{4-[4-(2,2,2-trifluoretil)piperazin-1-il]fenil}amina. LCMS: Tr = 1,07 min (95%), m/z (ESI) 503 (M+H)+.

hZn

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- Composto 58: Amida de ácido 4-{8-[4-(4-(ciclopropilmetila)piperazin-1-il)- fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}tiofeno-2-carboxílico

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 46, com a utilização de ácido 2- (aminocarbonil)tiofeno-4-borônico. LCMS: Tr = 0,93 (95%), m/z (ESI) 475 (M+H)+.

Composto 59: [4-(4-Ciclopropilpiperazin-1-il)fenil]-[5-(1 H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

Λ

rf

xx

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 46, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[4-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina. LCMS: Tr = 0,84 (95%), m/z (ESI) 402 (M+H)+.

Composto 60: [6-(4-Ciclopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-il]-[5-(1 H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il]amina r^N

O

N-M

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 120, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[6-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina na etapa 4. LCMS: Tr = 0,76 min (95%), m/z (ESI) 403 (M+H)+. Composto 61: Amida de ácido 4-[8-(4-morfolin-4-ilfenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]tiazol-2-carboxílico

dos descritos para o Composto 73, com a utilização de amônia (7 M em MeOH) na etapa 3. LCMS: Tr = 1,00 min (95%), m/z (ESI) 423 (M+H)+. Composto 62: Amida de ácido 4-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il) enilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}tiazol-2-carboxílico

r?

H2N

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

O

H2N

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 61, com uso de (5-bromo[1 (2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina na etapa final. LCMS: Tr = 0,96 min (95%), m/z (ESI) 464 (M+H)+.

Composto 63: Amida de ácido 4-(8-{4-[1-(2,2,2-trifluoretil)piperidin-4-

il]fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofeno-2-carboxílico

Etapa 1: 1-Trifluoracetil-4-(4-nitrofenil)piperídina

O2N

Trietilamina (1,0 ml, 7,3 mmols) e 4-(4-nitrofenil)piperidina (1,0 g, 4,8 mmols) são agitadas em DCM (25 ml) a O0C sob N2, e anidrido trifluora- cético (0,81 ml, 5,8 mmols) é adicionado. A mistura é agitada por três dias, permitindo que a temperatura aquecesse até a temperatura ambiente. A so- lução é então diluída com DCM (50 ml) e lavada com água (2x15 ml), NaH- CO3 (50% saturado aquoso, 2 χ 15 ml) e salmoura (15 ml). O solvente é se- co sobre MgSO4 e evaporado, para gerar o composto desejado (1,46 g, 4,66 mmols).

Etapa 2: 1 -(2,2,2-Trifluoretil)-4-(4-nitrofenil)piperidina

Ό Uma solução de 1-trifluoracetil-4-(4-nitrofenil)piperidina (1,42 g, 4,7 mmols) em THF (15 ml) é agitada em um frasco de 25 ml com 2 gargalos ajustado com um condensador e funil de adição de equalização de pressão. O sistema é aspergido com N2, NaBH4 (210 mg, 5,6 mmols) é adicionado e o frasco é resfriado até 0°C. Uma solução de iodo (600 mg, 2,3 mmols) em THF (5 ml) é então adicionada gota a gota por 20 minutos, depois dos quais o funil de adição é removido e a mistura aquecida em refluxo de um dia para o outro. A suspensão amarelo pálido resultante é resfriada até a temperatura ambiente e MeOH (1,5 ml) é adicionado cuidadosamente, gerando uma vigo- rosa evolução de um gás. Evaporação dos solventes gera o composto do título, que é usado sem purificação adicional. Etapa 3:4-[1-(2,2,2-Trifluoretil)piperidin-4-il]fenilamina

Formiato de amônio (1,38 g, 22 mmol) e 10% Pd/C (230 mg, 0,2 mmol) são adicionados a uma solução de 1-(2,2,2-trifluoretil)-4-(4- nitrofenil)piperidina (1,26 g, 4,4 mmols) em EtOH (10 ml) e EtOAc (10 ml). A suspensão é aquecida no refluxo por 24 horas, com adição de porções adi- cionais de formiato de amônio (2 g) após 4 h e 8 h. A mistura é filtrada atra- vés de celite e evaporada para gerar um sólido laranja. Esse é divido entre DCM (40 ml) e água (20 ml) e as camadas separadas. A fase aquosa é ex- traída com DCM (2 χ 20 ml) e as camadas orgânicas combinadas são secas sobre MgSO4 e evaporada sob pressão reduzida para gerar N-{4-[1-(2,2,2- trifluoretil)piperidin-4-il]fenil} formamida como um sólido laranja pálido (980 mg).

Uma solução da formamida em MeOH (20 ml) é agitada em temperatura ambiente e HCI (concentrado, 1 ml) é adicionado. A solução roxa profunda é aquecida no refluxo por 1 h, resfriada e o MeOH é evapora- do. O resíduo é agitado com água (20 ml) e NaHCO3 (aquoso saturado) é adicionado até que seja interrompido o borbulhamento. A mistura é extraída com DCM (20 ml, 2 χ 10 ml) e os extratos combinados são secos sobre Mg- SO4 e evaporados sob pressão reduzida para gerar o composto do título como um sólido laranja (870 mg).

Esse material é usado para preparar amida de ácido 4-(8-{4-[1 -(2,2,2- trifluoretil)piperidin-4-il]fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofeno-2- carboxílico com a utilização de métodos análogos àqueles usados para o Composto 89.

LCMS: Tr = 2,11 min (100%), m/z (ESI) 502 (M+H)+.

Composto 65: 5-(8-(4-(2-Morfolinoetóxi)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il)isoindolin-1 -ona

Etapa 1: (5-Bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin^ fenil]-amina

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H2N

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De acordo com o procedimento descrito para o Composto 6, e- tapa 1, 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,5 g, 1,799 mmol), 4-(2- morfolin-4-il-etóxi)-fenilamina (0,6 g, 4,5 mmols) e A/,/\/-diisopropiletilamina (0,47 ml, 2,7 mmols) em 2-propanol (6 ml) são agitadas a 95°C de um dia para o outro. Após evaporação do solvente, o resíduo é dissolvido em DCM e lavado com água (2x) e salmoura. A camada orgânica é seca sobre Mg- SO4, filtrada e concentrada in vácuo para gerar um óleo purificado por cro- matografia em coluna de sílica-gel. A eluição com uma mistura 97:3 DCM:MeOH gera o composto do título (650 mg 86%) como um sólido ama- relo-claro. LCMS: Tr = 2,06 min (97,7%).

Etapa 2: 5-(8-(4-(2-Morfolinoetoxi)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5- il)isoindolin-1 -ona

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O

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com uso de (5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-fenil]-amina (80 mg, 0,19 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-diidro-isoindol- 1-ona (74 mg, 0,29 mmol) e Pd(PPh3)4 (55 mg, 0,047 mmol) em Na2CO3 1,5 M (1,02 ml, 1,53 mmol) e dioxano (3 ml). A mistura de reação é purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM e a mistura a 97:3 de DCM:NH3 (7 M em MeOH). Após trituração com o uso de éter dietíli- co, o composto do título é isolado como um sólido (61,9 mg, 69%). A con- versão do material no sal de mesilato, com a utilização de 1 M ácido meta- nossulfônico (0,134 ml) em MeOH, gera o composto do título (57,1 mg). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,40 (3Η, s, MsOH), 3,25-3,38 (2H, m), 3,60-3,78 (4H, m), 3,84 (2H, t), 4,09 (2H, d), 4,45 (2H, m), 4,56 (2H, s), 7,14 (2H, d), 7,90 (1H, d), 8,05-8,19 (4H, m), 8,28 (1H, s), 8,76 (1H, br s), 8,79 (1H, s), 10,00 (1H, br s), 10,16 (1H, s). LCMS: Tr = 1,98 min (99,1%), m/z (APCI) 472 (M+H)+.

Composto 67: N-(2-Flúor-4-morfolinofenil)-5-(1H-pirazola-4-il)-

[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina

Etapa 1: (5-Bromo-[ 1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(2-flúor-4-morfolin-4-il- fenil)-amina

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HN

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Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 6, etapa 1, com o uso de 5,8-dibromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,105 g, 0,89 mmol), 2-flúor-4-morfolin-4-il- fenilamina (93 mg, 0,474 mmol), DIPEA (0,123 ml, 0,706 mmol) e 1,4- diazabiciclo[2.2.2]octano (53 mg, 0,472 mmol) em 2-propanol (2 ml). A mistu- ra de reação é dividida entre DCM e solução de ácido cítrico 10% (aquoso), a camada orgânica é separada e lavada com solução de ácido cítrico 10%, água e salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada in vácuo. O composto do título é isolado como um sólido vermelho pálido (77 mg, 42%) e usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. LCMS: Tr = 3,48 min (89%).

Etapa 2: N-(2-Flúor-4-morfolinofenil)-5-(1H-pirazola-4-il)-[ 1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-amina

o

N

Fj-H

HN' x N

n.m

N N H Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com uso de (5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(2-flúor-4-morfolin-4-il-fenil)-amina (80 mg, 0,203 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol (79 mg, 0,406 mmol) e Pd(PPh3)4 (59 mg, 0,051 mmol) em Na2CO3 1,5 N (1,09 ml,

1.62 mmol) e dioxano (3,25 ml). A mistura de reação é purificada por croma- tografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 97:3 DCM:NH3 (7 M em Me- OH). As frações que contêm o produto são combinadas e evaporadas in vá- cuo para gerar um sólido que é triturado com éter dietílico e éter de petróleo,

para gerar o composto do título (29 mg, 38%). LCMS: Tr = 2,90 min (96%).

A conversão no sal de mesilato com a utilização de ácido meta- nossulfônico 0,1 M solução em MeOH (0,762 ml, 0,076 mmol) gera o com- posto do título (35 mg). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2,36 (3H, s, MsOH), 3,19 (4H, m), 3,79 (4H, m), 6,84-6.94 (2H, m), 7,54 (1H, t), 8,08 (1H, s), 8,48 (2H, s), 8,76 (1H, s), 9,31 (1H, s). LCMS: Tr = 2,91 min (95,4%), m/z (APCI) 381 (M+H)+.

Composto 70: (4-(8-(4-Morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)- 1 H-pirazola-5-il)metanol

Etapa 1: 4-Bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1 H-pirazol

Uma solução de (4-bromo-2H-pirazola-3-il)-metanol (0,64 mg,

3.63 mmols), cloreto de terc-butildimetilsilila (0,82 g, 5,45 mmols) e imidazol (0,42 g, 6,18 mmols) em Λ/,/V-dimetilformamida (20 ml) é agitada em tempe- ratura ambiente de um dia para o outro. A mistura de reação é diluída com uma mistura a 50:50 de éter dietílico:acetato de etila e lavada com água (3

x). As camadas orgânicas são secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com 80:20 éter de petróleo:acetato de etila, para gerar o composto do título (1,035 g, 98%).

Etapa 2: 4-Bromo-3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)- 1 H-pirazol e 4-Bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2- il)- 1H-pirazol

I-N > W

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4-Bromo-5-(ferc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1H-pirazol (1 g, 3,45

10

15

mmols) é dissolvido em 3,4-diidro-2H-piran (0,944 ml, 10,34 mmols) na pre- sença de uma quantidade catalítica de TFA (0,0026 ml, 0,035 mmol). A mis- tura de reação é agitada a 90°C por 18 horas, resfriada e depois extinta u- sando NaH (4,69 mg, 0,206 mmol). Após remoção do solvente, o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com uma mistu- ra de 95:5 éter de petróleo-acetato de etila, seguido por 90:10 éter de petró- leo-acetato de etila. As frações que contêm os compostos desejados são coletadas e concentradas in vácuo para gerar 4-bromo-3-(terc-butil-dimetil- silaniloximetil)-1 -(tetrahidro-piran-2-il)-1 H-pirazol e 4-bromo-5-(terc-butil- dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol (724 mg, 56%). Etapa 3: Terc-butil éster de ácido {5-[5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetH)-1- (te trahidro-piran-2-il)-1 H-pirazola-4-il]-[ 1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4- morfolin-4-il-fenil)- carbâmico e terc-butil éster de ácido {5-[3-(terc-butil- dimetil-silaniloximetil)-1 -(tetrahidro-piran-2-il) -1 H-pirazola-4-il]-

[1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbâmico

dos descritos para o Composto 35, etapa 3, com o uso de terc-butil éster de ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestananil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- il)-carbâmico (210 mg, 0,30 mmol) 4-bromo-3-(terc-butil-dimetil- silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-l H-pirazol e 4-bromo-5-(terc-butil- dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1 H-pirazol (170 mg, 0,45 mmol)

O O.

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- e tetrakis(trifenilfosfina)paládio(0) (35 mg, 0,030 mmol) em DMF (4 ml). O composto bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluin- do com 7:3 então 3:7 éter de petróleo:acetato de etila, para gerar os com- postos do título (62,5 mg).

Etapa 4: (4-(8-(4-Morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-1H- pirazola-5-il)metanol

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Uma solução de {5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1- (tetrahidro-piran-3-il)-1 H-pirazola-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4- morfolin-4-il-fenil)-amina e {5-[5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1 - (tetrahidro-piran-3-il)-1 H-pirazola-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-

morfolin-4-il-fenil)-amina (53,6 mg, 0,077 mmol) e HCI concentrado (0,27 ml) em MeOH (5 ml) é agitada em temperatura ambiente por 2 horas. Após re- moção do solvente, o resíduo é dividido entre acetato de etila e água. A ca- mada aquosa é lavada com acetato de etila (3 x) e as camadas orgânicas combinadas são secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas. O resíduo é dissolvido em HCI 4 M em dioxano, concentrado in vácuo e então dividido entre acetato de etila e NaHCOa saturado. A camada orgânica é seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada in vácuo para gerar um composto bruto purifi- cado por cromatografia em coluna de sílica-gel. O composto do título é iso- lado eluindo com EtOAc e uma mistura 95:5 de DCM:MeOH (5,4 mg, 18%).

1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3,11 (4H, m), 3,79 (4H, m), 4,65 (2H, d), 5,25 e 5.53 (1H, br s), 6,99 (2H, m), 7,84 e 8.51 (1H, br s), 7,92 (2H, d), 8,12 (1H, d), 8,70 (1H, s), 9,74 (1H, s), 13,12 e 13.23 (1H, br s). LCMS: Tr = 2,26 min (96,2%), m/z (APCI) 393 (M+H)+. Composto 73: Metilamida de ácido 4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a] pirazin-5-il]-tiazol-2-carboxílico Etapa 1:2,4-Dibromotiazol

Br

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Tiazolidinona (3,43 g, 29,32 mmols) e POBr3 (25 g, 87,96 mmols, 3 equivalentes) são misturados sob nitrogênio como sólidos. A mistu- ra de reação é então aquecida a 110°C sob agitação por 3 h gerando a for- mação de um xarope preto. A mistura de reação é deixada para resfriar até a temperatura ambiente e uma mistura de água/gelo (200 ml) é adicionada cuidadosamente. A suspensão cinza resultante é extraída com éter dietílico (3 χ 50 ml), as camadas orgânicas são combinadas, filtradas através de um bloco de sílica e evaporadas para gerar o composto do título como um óleo laranja (4 g, 57%) que é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. Etapa 2: Éster etflico de ácido 4-bromotiazol-2-carboxílico

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A uma solução de dibromotiazol (1 g, 4,15 mmol) em THF (15 ml) a 0°C, é adicionada gota a gota uma solução de iPrMgCI em THF (2 M, 2,3 ml, 4,57 mmol, 1,10 equivalente). A reação é agitada a O0C por 0,25 h. À solução laranja resultante é adicionado carbonato de dietila (3 ml) via uma cânula em THF (5 ml). A solução verde resultante é também agitada em temperatura ambiente por 0,5 h, quando então a reação é extinta pela adi- ção de NH4CI saturado. O composto do título é purificado por LC com o uso de 6/4 ciclohexano/DCM como o eluente para gerar 514,2 mg (52%) do composto do título como um sólido em pó amarelo pálido. Etapa 3:4-Bromotiazol-2-carboxílico ácido metilamida Éster etílico de ácido 4-bromotiazol-2-carboxílico (500 mg, 2,13

mmols) é dissolvido em metanol (1 ml) e metil amina em metanol (10 ml) é adicionada. A mistura é agitada de um dia para o outro em temperatura am- biente. Evaporação do solvente sob pressão reduzida gera o composto do título como um sólido amarelo. LCMS: Tr = 0,92 min (100%) m/z (ESI) 219/221 (M+H)+.

Etapa 4: Metilamida de ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiazol-2-carboxílico

boronato em uma maneira análoga àquela descrita para o Composto 6, Eta- pa 3. O composto do título é então preparado com a utilização dos métodos descritos para o Composto 120, etapa 4. LCMS: Tr = 1,06 min (95%), m/z (ESI) 437 (M+H)+.

r?

HN

\

Metilamida de ácido 4-bromotiazol-2-carboxílico é convertida ao

Composto 79: 5-(8-(6-(4-lsopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-ilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)isoindolin-1 -ona

Etapa 1: Éster metílico de ácido 4-bromo-2-bromometil-benzóico

Br

Acido 4-bromo-2-metil-benzóico (46 g, 21,39 mmols) é dissolvido em HCI 2 M em MeOH e refluído por 3 horas. 0 solvente é evaporado para gerar o éster metílico de ácido 4-bromo-2-metil-benzóico (4,24 g, 86%). Esse intermediário (18,51 mmols) é dissolvido em tetracloreto de carbono (100 ml) e N-bromossuccinimida (NBS) (5,57 g, 24,06 mmols) é adicionada. AIBN (122 mg, 740 μιηοΙ) é então adicionada, e a mistura é purificada com nitro- gênio por 5 min. A mistura de reação é então refluída por 4 horas. Após res- friamento até a temperatura ambiente, a mistura de reação é filtrada e o fil- trado é evaporado. O resíduo é purificado por cromatografia instantânea (sí- lica-gel, éter de petróleo/acetato de etila 2:1) para gerar o composto do título (3,42 g, 60%).

Etapa 2:5-Bromo-2,3-diidro-isoindol-1-ona

16,2 mmols) é tratado com amônia metanólica (10 ml, NH3 7 N em MeOH) por 5 minutos a 90°C. Após resfriamento até a temperatura ambiente um

precipitado é formado, coletado por filtração e lavado com uma pequena quantidade de metanol para gerar o composto do título como um sólido inco- Ior (224 mg, 65%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 4,41 (2H, s), 7,64 (1H, d), 7,70 (1H, d), 7,87 (1H, s), 8,67 (1H, br s). LCMS: Tr = 2,49 min, (99,6%), m/z (APCI) 212 (M+H)+.

Etapa 3: 5-(4,4,5,5-Tetrametil-[ 1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-diidro-isoindol-1 - ona

5-Bromo-2,3-diidro-isoindol-1-ona (230 mg, 1,08 mmol), bis(pinacolato)diboro (300 mg, 1,18 mmol), PdCI2 dppf (25 mg, 31 μιτιοΙ) e KOAc (320 mg, 3,26 mmols) são suspensos em dioxano (4 ml), purificados

Éster metílico de ácido 4-bromo-2-bromometil-benzóico (0,5 g,

Vc com nitrogênio por 5 minutos, e depois aquecidos a 85°C de um dia para o outro. O solvente é removido in vácuo e o resíduo dividido entre acetato de etila e água. A camada aquosa é extraída com acetato de etila (3 x) e as fa- ses orgânicas combinadas são lavadas uma vez com salmoura, filtradas a- través de MgSO4 e evaporadas. O resíduo sólido é triturado com hexano e seco in vácuo, para gerar o composto do título (185 mg, 66%) como um sóli- do cinza. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 1,37 (12H, s), 4,45 (2H, s), 6,38 (1H, br s), 7,87 (1H, d), 7,93 (2H, m). Etapa 4: 1 -lsopropil-4-(5-nitro-piridin-2-il)-piperazina

Ύ 1

NO,

A uma solução de 2-cloro-5-nitropiridina (2,5 g, 15,7 mmols) em

THF (25 ml), são adicionados 1-isopropilpiperazina (2,01 g, 15,7 mmols) e K2CO3 (3,25 g, 23,6 mmols). A mistura de reação é agitada a 50°C por 4 ho- ras e então a 70°C de um dia para o outro. O solvente é removido in vácuo, e o sólido laranja resultante é triturado com o uso de éter de petróleo-éter dietílico 10:1. O composto isolado (3,7 g, 94%) é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional.

Etapa 5: 6-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-piridin-3-il-amina

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k. .-N,. .,N..

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1-lsopropil-4-(5-nitro-piridin-2-il)-piperazina (0,9 g, 3,6 mmols) é dissolvida em MeOH (20 ml) e diidrato de dicloreto de estanho (II) (4 g, 18 mmol) é adicionado. A mistura é resfriada com o uso de um banho de água e HCI concentrado é adicionado (4 ml). A reação é agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. Após remoção do metanol, a solução ama- relo-clara resultante é alcalinizada com o uso de NaOH concentrado (pH 11) e forma-se um precipitado branco. O sólido é coletado por filtração e a água é extraída com éter dietílico (5 x). As camadas orgânicas são combinadas, secas sobre MgSO4, filtradas, concentradas sob vácuo, para gerar um óleo laranja que cristaliza em repouso para gerar um sólido laranja (0,68 g, 86%). Etapa 6: 5-Bromo-8-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-

[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-amina

MH

Kr

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 6, etapa 1, com o uso de 5,8-dibromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,188 g, 0,68 mmol), 6-(4-isopropil-piperazin-1- il)-piridin-3-ilamina (0,180 g, 0,816 mmol) e N-etildiisopropil-amina (0,20 ml, 1,02 mmol) em 2-propanol (2 ml). A purificação do material bruto por croma- tografia em coluna de sílica-gel, com o uso de DCM, seguido por DCM:MeOH 95:5, gera o composto do título como um sólido marrom-pálido (260 mg, 92%).

Etapa 5: 5-(8-(6-(4-lsopropilpiperazin-1-il)piridin-3-ilam 1,2,4]triazolo[ 1,5- a]pirazin-5-il)isoindolin-1 -ona

í Ύ

,.Nk ,N„ J

HM

i

N *

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com o uso de 5-bromo-N-(6-(4- isopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (50 mg, 0,12 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-diidro-isoindol- 1-ona (56 mg, 0,216 mmol) e Pd(PPh3)4 (35 mg, 0,03 mmol) em Na2CO3 1,5 M (0,64 ml) e dioxano (2 ml). O produto bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM:MeOH 95:5, seguido por 90:10 DCM:MeOH. O composto do título é obtido após trituração com uma mistura a 10:1 de n-hexano:DCM (19 mg, 34%). A conversão no sal de mesilato, com a utilização de ácido metanossulfônico 0,1 M (0,35 ml), gera o compos- to do título como um sólido amarelo (20 mg, 69%).

2 χ MsOH), 3,16-3,21 (5H, m), 3,57 (2H, m), 4,45 (2H, d), 4,52 (2H, s), 7,11 (1H, d), 7,86 (1H, d), 8,01 (1H, s), 8,10 (1H, d), 8,24-8,29 (2H, m), 8,72 (1H, s), 8,76 (1H1 s), 8,82 (1H1 d), 9,39 (1H, br s), 10,21 (1H, s). LCMS: Tr = 1,92 min (98,5%), m/z (APCI) 470 (M+H)+.

Composto 80: Amida de ácido 3-[8-(4-Morfolin-4-ilfenilamino)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il]-benzo[b] tiofeno-7-carboxílico Etapa 1: 1-Bromo-2-(2-etoxivinilsulfanil)benzeno

A uma solução de 2-bromotiofenol (10,50 g, 55,87 mmol) em DMF seco (50 ml) sob nitrogênio é adicionado carbonato de potássio cuida- dosamente (9,2 ml, 61,46 mmol, 1,10 equivalente). Um vez diminuído o bor- bulhamento, 2-bromo-1,1-dietoxietano (8,46 g, 61,46 mmol, 1,10 equivalen- te) é adicionado à mistura e ela é agitada por 2 horas em temperatura ambi- ente. A suspensão resultante é despejada em 200 ml de água gelada e ex- traída com éter dietílico (3 χ 50 ml). As camadas orgânicas são lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4 para gerar após remoção do solvente o com- posto do título como um óleo laranja viscoso, usado sem purificação adicio- nal.

Etapa 2: 7-bromobenzo[b]tiofeno

5

H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1,34 (6H, d), 2,36 (6H, s,

O

Λ

Br

1-Bromo-2-(2-etoxivinilsulfanil)benzeno é dissolvido em cloro- benzeno (50 ml) e a solução é aquecida a 70°C. PPA (10,5 ml) é então adi- cionada cuidadosamente e a mistura bifásica é aquecida a 150°C de um dia para o outro. O xarope escuro resultante é deixado para resfriar e o solvente do sobrenadante removido por pipeta. Clorobenzeno (15 ml) é adicionado ao resíduo e aquecido a 150°C por 30 min. O solvente é removido novamente e o resíduo lavado com pequenas quantidades de diclorometano até que as lavagens estejam limpas. As frações orgânicas são combinadas e filtradas através de celite para gerar uma solução amarela clara. Concentração sob vácuo, seguida por LC com o uso de ciclohexano como o eluente gerou o composto do título como um óleo incolor viscoso (1,21 g, 35%). Etapa 3: Éster etílico de ácido benzo[b]tiofeno-7-carboxflico

7-Bromobenzo[b]tiofeno (500 mg, 2,36 mmols) é dissolvido em THF seco (5,0 ml) sob nitrogênio. Raspas de magnésio (530 mg, 2,83 mmol, 1,20 equi- valente) são adicionados e a mistura resultante é aquecida no refluxo até que tenha ocorrido a dissolução do magnésio. A solução amarela-turva re- sultante é deixada para resfriar até a temperatura ambiente e carbonato de dietila (2 ml, excesso) é adicionado e a agitação é continuada por uma hora, quando cloreto de amônio (10% aquoso) é adicionado. A mistura resultante é dividida entre DCM e água e a camada aquosa é extraída com DCM. As frações orgânicas são combinadas, lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 e adsorvidas em sílica. A purificação por LC com o uso de 8/2 ciclo- hexano/diclorometano como o eluente gerou o composto do título como um óleo laranja-pálido (346,2 mg, 71%). Etapa 4: Ácido Benzo[b]tiofeno-7-carboxílico

O υ A uma solução de éster etílico de ácido benzo[b]tiofeno-7- carboxílico (1,0 g, 48 mmols) em metanol (10 ml) e água (10 ml) é adiciona- do hidróxido de sódio (5 g, excesso). A solução é agitada em temperatura ambiente por 30 min, quando então todo o éster foi consumido. A mistura de reação é ajustada ao pH 1 por adição de 6 M de solução de HCI, e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas são filtradas através de um bloco de sílica para gerar o composto do título como um sólido amarelo (505,2 mg, 59%).

Etapa 5: Amida de ácido Benzo[b]tiofeno-7-carboxílico

Uma solução de ácido benzo[b]tiofeno-7-carboxílico (505 mg,

2,84 mmols) em diclorometano (10 ml) é agitada em temperatura ambiente e cloreto de tionila (669 mg, 5,68 mmol, 2,0 equivalentes) é adicionado, segui- do por DMF (0,06 ml), gerando evolução de gás. A solução resultante é agi- tada em temperatura ambiente por 1 hora. Amônia aquosa (10 ml) é então adicionada cuidadosamente à mistura geando vigorosa evolução de gás. A mistura resultante é então diluída com água (50 ml), e pH é neutralizado por adição de NaHC03 saturado (aquoso). A camada aquosa é extraída com DCM, e as camadas orgânicas são combinadas e secas sobre Na2S04. E- vaporação do solvente sob pressão reduzida gera o composto do título (81% puro) como um sólido amarelo (500 mg, 98%) que é usado sem purificação adicional.

Etapa 6: Amida de ácido 3-Bromobenzo[b]tiofeno-7-carboxíHco Br

O INl-I

2

Uma solução de amida de ácido benzo[b]tiofeno-7-carboxílico

(500 mg, 2,82 mmols) em diclorometano (5 ml) é agitada em temperatura ambiente e ácido acético (5 ml) é adicionado, seguido por NBS (750 mg, 4,23 mmols, 1,5 equivalente). A reação é agitada em temperatura ambiente por 1 hora quando então a análise de LC-MS mostra total conversão do ma- terial de iniciação ao composto desejado (79%) e material dibrominado (21%). A reação é diluída com água (50 ml), neutralizada com dissulfito de potássio aquoso, seguido por bicarbonato de sódio. A camada aquosa é en- tão extraída com diclorometano e as camadas orgânicas resultantes são combinadas, lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 e evaporadas. O material bruto é purificado por LC com o uso de DCM como o eluente para gerar o composto do título como um sólido branco (300 mg, 41%). Etapa 7: Amida de ácido 3-(4,4,5,5-tetrametil[1,3,2]dioxaborolan-2-il)benzo[b] tiofeno-7-carboxílico

O Nhl2

Uma solução de amida de ácido 3-bromobenzo[b]tiofeno-7-

carboxílico (300 mg, 1,18 mmol) em dioxano (5 ml) é agitada sob nitrogênio. Pd(dppf)CI2 (29 mg, 3 % em mol), acetato de potássio (230 mg, 2,35 mmols, 2,0 equivalentes) e bispinacolatodiboro (450 mg, 1,77 mmol, 1,5 equivalente) são adicionados, e a reação é aquecida a 80°C e agitada de um dia para o outro. A suspensão laranja resultante é diluída com DCM, filtrada através de celite e concentrada sob vácuo, para gerar um óleo que é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional.

Etapa 8: Amida de ácido 3-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il]-benzo[b]tiofeno-7-carboxílico

dos descritos para o Composto 120, Etapa 4. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) õ(ppm) 3,19 (4H, br s), 3,76 (4H, br s), 5,70 (1H, d), 7,12 (2H, m), 7,43 (1H, t), 7,63 (1H, br s), 7,76-7,80 (2H, m), 7,92 (1H, d), 8,03 (1H, d), 8,21 (1H, s), 8,28 (1H, s), 8,6 (1H, s), 10,09 (1H, s). LCMS: Tr = 1,01 min (95%), m/z (E- Sl) 472 (M+H)+.

Composto 81: Amida de ácido 3-{8-[4-(4-lsopropilpiperazin-1-il) fenila- mino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}benzo[b]tiofeno-7-carboxílico

^-NH O

2

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 80, com uso de (5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina na etapa final. LCMS: Tr = 0,94 min (95%), m/z (ESI) 513 (M+H)+.

Composto 83: (4-{8-[4-(4-lsopropilpiperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4] tria- zolo [1,5-a]pirazin-5-il}piridin-2-il)metanol

Etapa 1:4-Bromo-2-metilpiridina-1-óxido

Br

Uma solução de 4-bromo-2-metilpiridina (5 g, 29 mmols) em DCM (20 ml) é resfriada a 0°C e m-CPBA (7,55 g, 43,87 mmols, 1,5 equiva- lente) é adicionado em porções por 30 min. O banho de gelo é então remo- vido e a mistura é deixada em agitação em temperatura ambiente por 3 ho- ras. A solução resultante é diluída com bicarbonato de sódio (aquoso satu- rado) e extraída com DCM. As camadas orgânicas são combinadas, lavadas com bicarbonato de sódio (aquoso saturado), secas sobre Na2SO4, e con- centradas sob vácuo, para gerar o composto do título como um óleo Iaranja- pálido que é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional.

Etapa 2:4-Bromopiridin-2-ilmetH éster de ácido acético

mmols) em DCM (20 ml) é adicionado anidrido acético (6 ml). A mistura é agitada em temperatura ambiente por 1 hora, e depois aquecida em refluxo de um dia para o outro. O solvente é removido sob vácuo e o produto bruto é filtrado através de um bloco de sílica, eluindo com DCM para gerar o com- posto do título como um óleo laranja (815 mg).

Etapa 3: 4-(4,4,5,5-Tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)piridin-2-HmetiI éster de ácido acético

Br

O

A uma solução de 4-bromo-2-metilpiridina-1-óxido (4,00 g, 21,40

O

Uma solução de 4-bromopiridin-2-ilmetil éster de ácido acético (800 mg, 3,49 mmols) em dioxano (5 ml) é agitada sob nitrogênio. Pd(dppf)CI2 (85 mg, 3 % em mol), acetato de potássio (1,03 g, 10,5 mmols, 3,0 equivalentes) e bispinacolatodiboro (1,33 g, 5,24 mmols, 1,5 equivalente) são adicionados, e a reação é aquecida a 80°C de um dia para o outro. A suspensão laranja resultante é diluída com DCM, filtrada através de celite e concentrada sob vácuo, para gerar um óleo que é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional.

Etapa 4: 4-{8-[4-(4-lsopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il}-piridin-2-ilmetil éster de ácido acético

Uma suspensão de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4- (4-isopropil-piperazin-1-il)fenil]amina (300 mg, 0,723 mmol) e Pd(dppf)CI2 (59 mg, 10 % em mol) em 4/1 dioxano/água (5 ml) é agitada em temperatura ambiente e carbonato de potássio (200 mg, 1,45 mmol, 2,0 equivalentes) e

4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)piridin-2-ilmetil éster de ácido

acético (300 mg, 1,08 mmol, 1,5 equivalente) são adicionados. A mistura resultante é aquecida a 85°C de um dia para o outro. A solução resultante é dividida entre diclorometano e água, e a camada orgânica é concentrada em sílica e purificada por cromatografia em coluna (98/2 DCM/MeOH) para gerar o composto do título como um sólido amarelo. LCMS: Tr = 0,78 min (100%), m/z 445 (M+H)+.

Etapa 5: (4-{8-[4-(4-lsopropilpiperazin-1-il)fenilaminoJ-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-5-il}pirídin-2-il)metanol

4-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1 -il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5- il}piridin-2-ilmetil éster de ácido acético é agitado em temperatura ambiente de um dia para o outro em 10 ml de 1,5 M de uma solução de carbonato de potássio em metanol. O pH é então neutralizado pela adição de 10% ácido cítrico aquoso e a mistura é extraída com DCM. A purificação por LC com o uso de 98/2 DCM/2M NH3 em MeOH como o eluente fornece o composto do título como um pó amarelo (40,3 mg, 12,5% em 2 etapas). 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) õ(ppm) 1,02 (6H, m), 2,33 (1H, m), 2,60 (4H, br m), 3,10 (4H, br m), 4,65 (2H, d), 5,51 (1H, t), 6,96 (2H, d), 7,84-7,89 (3H, m), 8,11 (1H, s), 8,17 (1H, m), 8,61 (1H, d), 8,73 (1H, m), 10,08 (1H, s). LCMS: Tr = 0,78 min (100%), m/z (ESI) 445 (M+H)+.

Composto 84: [4-(1-lsopropilpiperidin-4-il)fenil]-[5-(1 H-pirazola-4-il)-

OH [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 92, com a utilização de ácido pirazola-4- borônico na etapa 4. LCMS: Tr = 0,89 min (100%) m/z (ESI) 403 (M+H)+. Composto 86: 4-(8-(6-(4-lsopropilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)furan-2-carboxamida

O

A uma solução de ácido 4,5-dibromo-furan-2-carboxílico (7,79 g, 28,85 mmols) em NH40H (100 ml) é adicionado pó de zinco (2,29 g, 34,62 mmols) em pequenas porções. A mistura de reação é agitada em temperatu- ra ambiente por 7 minutos então filtrada sobre celite e lavada com água e HCI 2 Μ. O filtrado é acidificado ao pH 1 com o uso de HCI concentrado e extraído com acetato de etila (3 χ). A fase orgânica é lavada com salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada in vácuo para gerar um óleo

Etapa 1: Amida de ácido 4-bromo-furan-2-carboxílico (4,96g) que se solidifica em repouso para gerar um sólido branco, que é u- sado sem purificação adicional.

O sólido (4,93 g, 25,81 mmols) é dissolvido em cloreto de tionila (44,2 ml) e refluído por 1 hora. Após remoção do solvente in vácuo o resíduo é dissolvido em diclorometano (75 ml) e uma solução de 0,5 M NH3 em dio- xano (52 ml) é adicionado. A mistura de reação é agitada em temperatura ambiente por 1 hora, então 33% NH3 aquoso (5 ml) é adicionado e a reação agitada por mais 2 horas. O solvente é removido in vácuo e o resíduo capta- do com uma solução de NaHCO3 saturado. A solução básica é extraída com o uso de acetato de etila (3 x), as camadas orgânicas combinadas são secas sobre MgS04 e concentradas in vácuo. A purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com uma mistura de (50:49:1) acetato de eti- la:éter de petróleo:acético ácido, gera o composto do título (1,2 g, 22%). Etapa 2: Amida de ácido 4-(4,4,5,5-Tetrametii-[1,3,2]dioxaborolan-2-H)-furan- 2-carboxflico

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Amida de ácido 4-bromo-furan-2-carboxílico (1,2 g, 6,32 mmols), bis(pinacolato)diboro (1,76 g, 6,94 mmols), PdCI2 dppf (0,154 g, 189 mol) e KOAc (1,85 g, 18,94 mmols) são suspensos em dioxano (20 ml), purificados com nitrogênio por 5 minutos e então aquecidos a 90°C de um dia para o outro. O solvente é removido in vácuo e o resíduo dividido entre acetato de etila e água. A camada aquosa é extraída três vezes com acetato de etila e as fases orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, filtradas através de MgSO4 e evaporadas. O resíduo sólido é triturado com hexano e seco in vácuo para gerar o composto do título como um sólido (0,984 g, 66%). t 123

Etapa 3: 4-(8-(6-(4-lsopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-ilamino)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il)furan-2-carboxamida

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N

J

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando 5-bromo-8-(6-(4- isopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (60 mg, 0,144 mmol), amida de ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)- furan-2-carboxílico (59 mg, 0,26 mmol) e Pd(PPh3)4 (42 mg, 0,036 mmol) em Na2CO3 1,5 M (0,8 ml, 1,15 mmol) e dioxano (2 ml). Após evaporação do solvente o material bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica- gel com o uso de DCM1 seguido por 97.5:2.5 e 95:5 DCM:NH3 (7 M em Me- OH). O composto do título é obtido como um sólido amarelo (30 mg, 47%). 1H RMN (400 MHz1 d6-DMSO) δ (ppm) 1,05 (6H, d), 2,54-2,59 (4H, m), 2,70- 2,74 (1H, m), 3,47 (4H, m), 6,90 (1H, d), 7,60 (1H, br s), 7,91 (1H, s), 7,99 (1H, br s), 8,12 (1H, dd), 8,19 (1H, s), 8,68 (1H, s), 8,75 (1H, s), 8,81 (1H, s), 10,03 (1H, s). LCMS: Tr = 2,64 min (98,1%), m/z (APCI) 406 (M+H)+. LCMS: Tr = 2,74 min (93%), m/z (ES+) 448 (M+H)+.

Composto 88: 4-(8-(4-(4-lsopropilpiperazin-1-il)fenilamino)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il)furan-2-carboxamida

Etapa 1: 1-lsopropil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina NOi

A uma solução de 4-fluornitrobenzeno (5 g, 35,4 mmols) em THF (50 ml), 1-isopropilpiperazina (4,54 g, 35,4 mmols) e K2CO3 (7,35 g, 53,2 mmols) são adicionados. A mistura de reação é agitada em temperatura am- biente de um dia para o outro. O solvente é removido in vácuo e o resíduo é dividido entre EtOAc e água. A camada orgânica é lavada com salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. O composto bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel com o uso de DCMiNH3 99:1 e 98:2 (7 M em MeOH) para gerar o composto do título (8,2 g, 94%). Etapa 2:4-(4-lsopropil-piperazin-1-il)-fenilamina

NH2

1-lsopropil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina (8,3 g, 33,2 mmols) é dis-

solvida em MeOH (120 ml) e diidrato de dicloreto de estanho (II) (37,4 g, 0,165 mol) é adicionado. A mistura é resfriada com o uso de um banho de água e HCI concentrado é adicionado (36 ml). A reação é agitada em tempe- ratura ambiente de um dia para o outro. Após remoção do metanol, a solu- ção resultante é alcalinizada com o uso de NaOH concentrado (pH 11). A fase aquosa é extraída com éter dietílico (3 x) e as camadas orgânicas com- binadas, secas sobre MgSO4, filtradas, concentradas in vácuo para gerar o composto do título (6,4 g, 88%). Etapa 3 (5-Bromo-[1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropil-piperazin-1- il)-fenil]-amina

HN Br

L

"κι'

f N

JSL

10

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 1, com o uso de 5,8-dibromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (2 g, 7,20 mmols), 4-(4-isopropil-piperazin-1-il)- fenilamina (1,89 g, 8,62 mmols) e A/,A/-diisopropiletilamina (1,88 ml, 10,8 mmols) em 2-propanol (30 ml) são agitadas a 95°C de um dia para o outro. O composto do título é isolado após trituração com éter dietílico e éter de petróleo como um sólido cinza (2,59 g, 87%).

Etapa 4: 4-(8-(4-(4-lsopropilpiperazin-1-il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-5-il)furan-2-carboxamida

N

.,-Nk

N

HN ^

xV N

Q=Z=J

NH2

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com o uso de 5-bromo-N-(6-(4- isopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (80 mg, 0,21 mmol), amida de ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)- furan-2-carboxílico (101 mg, 0,42 mmol) e Pd(PPh3)4 (62 mg, 0,053 mmol) em Na2CO3 1,5 M (aquoso) (1,143 ml, 1,71 mmol), e dioxano (4 ml). O pro- duto bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM e 97:3 DCM:NH3 (7 M em MeOH). O composto do título é isolado após trituração com éter dietílico (35,4 mg, 42%). A conversão no sal de me- silato com o uso de 1 M ácido metanossulfônico em MeOH (0,0793 ml) gera o composto do título como um sólido (35 mg).

1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1,35 (6H, d), 2,35 (3H, s, MsOH), 3,01 (2H, t), 3,22-3,35 (2H, m), 3,58 (3H, m), 3,88 (2H, d), 7,09 (2H, d), 7,61 (1H, br s), 7,94 (2H, m), 8,00 (1H1 br s), 8,22 (1H, s), 8,76 (1H, s), 8,82 (1H, s), 9,27 (1H, br s), 10,02 (1H, s). LCMS: Tr = 2,02 min (98,9%), m/z (APCI) 447 (M+H)+.

Composto 89: Amida de ácido 4-{8-[4-(1-lsopropilpiperidin-4-il) fenila- mino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico

H2N

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 92, com a utilização de ácido 2- (aminocarbonil)tiofeno-4-borônico na etapa 4. LCMS: Tr = 0,94 min (100%) m/z (ESI) 462 (M+H)+.

Composto 90: (4-{8-[6-(4-lsopropilpiperazin-1 -il)piridin-3-ilamino]-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}piridin-2-il)metanol

dos descritos para o Composto 83, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina na Etapa 4. LCMS: Tr = 0,71 min (95%), m/z (ESI) 446 (M+H)+. Composto 92: 5-{8-[4-(1-lsopropilpiperidin-4-il)fenilamino]-[1,2,4] triazo- Io [1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidroisoindol-1 -ona Etapa 1: 1-lsopropil-4-(4-nitrofenil)piperidina

OH

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

O2N 4-(4-Nitrofenil)piperidina (250 mg, 1,21 mmol), K2CO3 (170 mg,

1,21 mmol) e 2-iodopropano (240 μΙ, 2,4 mmols) são agitados em acetonitrila (3 ml) em um tubo lacrado a 120°C por 45 min. A mistura é resfriada e o sol- vente removido sob pressão reduzida. O resíduo é dividido entre DCM (20 ml) e água (5 ml), as camadas são separadas e o DCM é lavado com água (5 ml) e salmoura (5 ml) e seco sobre MgS04. A evaporação do solvente ge- ra o composto do título (300 mg) que é usado sem purificação adicional. Etapa 2: 4-(1-lsopropilpiperidin-4-il)fenilamina

Pd/C (38 mg, 0,03 mmol) são adicionados a uma solução de 1-isopropil-4-(4- nitrofenil)piperidina (180 mg, 0,72 mmol) em EtOH (10 ml) e a mistura é a- quecida no refluxo por 3 h. Após resfriamento, a mistura é filtrada através de celite e o solvente evaporada. O resíduo é re-dissolvido em DCM (25 ml), seco sobre MgSO4 e o solvente evaporado para gerar o composto desejado como um sólido amarelo pálido (113 mg, 0,52 mmol) que foi usado sem puri- ficação adicional.

Etapa 3: (5-Bromo-[1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(1 -isopropilpiperidin-4- il) feniljamina

H2N

Hidrazina (35% por peso em água, 0,67 ml, 7,2 mmols) e 10% Ν,/V-Diisopropiletilamina (200 μΙ, 1,2 mmol) é adicionada a uma mistura de 4-(1-isopropilpiperidin-4-il)fenilamina (220 mg, 1,0 mmol) e 5,8- dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (280 mg, 1,0 mmol) em iPrOH (5 ml) e aquecida em refluxo por 48 horas. A mistura é resfriada e o solvente evapo- rado sob pressão reduzida para gerar um sólido marrom alaranjado. Este é dividido entre DCM (50 ml) e água (20 ml), e as camadas são separadas. A fase orgânica é lavada com ácido cítrico (10% aquoso, 3 χ 25 ml). As lava- gens combinadas são extraídas com DCM (25 ml), e depois tornadas alcali- nas por adição de NaHCO3 (s). A mistura é extraída com DCM (3 χ 25 ml), e os extratos combinados secos sobre MgSO4 e evaporados. O produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel, eluindo com MeOH 5% - 10% em DCM para gerar o composto desejado, contaminado com a anilina de partida. Esta foi recristalizada por MeOH, para gerar o composto do título puro (110 mg).

Esse material pode ser usado para preparar 5-{8-[4-(1-isopropilpipe-

ridin-4-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidroisoindol-1 -ona de uma forma análoga à etapa 4, como descrito para o Composto 79. 10

LCMS: Tr = 0,91 min (100%) m/z (ESI) 468 (M+H)+.

Composto 100: 1 -(4-(5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilamino)fenil)piperazin-2-ona

Etapa 1: Terc-butil éster de ácido 4-(4-amino-fenil)-3-oxo-piperazina-1- carboxílico

O-

N

boc

N.,

H2N

Uma suspensão de p-iodo-anilina (918 mg, 4,8 mmols), terc-butil éster de ácido 3-oxo-piperazina-1 -carboxílico (960 mg, 4,2 mmols) (1R,2R)- ciclohexano-1,2-diamina (0,05 ml, 0,42 mmol), iodeto de cobre (I) (14,9 mg,0,0042 mmol) e K2CO3 (1,19 g, 2,04 mmols) em dioxano (4 ml), é purifi- cada com nitrogênio por 5 minutos em um tubo de reação. O tubo é lacrado e a mistura de reação é aquecida a 119°C por 15 horas. Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura de reação é filtrada através de um cartucho de sílica, lavando com acetato de etila (40 ml). O filtrado é concen- trado in vácuo para gerar o composto do título como um líquido marrom (1,06 g, 87%). LCMS: Tr = 0,88 min (91%).

Etapa 2: 1-[4-(5-Bromo-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-piperazin- 2-ona

dos descritos para o Composto 6, etapa 1, com o uso de 5,8-dibromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,283 g, 1,00 mmol), terc-butil éster de ácido 4- (4-amino-fenil)-3-oxo-piperazina-1-carboxílico (0,300 g, 1,00 mmol) e N- etildiisopropil-amina (0,20 ml, 1,02 mmol) em 2-propanol (1 ml). A purificação do material bruto por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM, seguida por DCM:MeOH 98:2, gera íerc-butil éster de ácido 4-[4-(5- bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-3-oxo-piperazina-1 - carboxílico como um sólido branco (0,252 g, 51%).

[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-3-oxo-piperazina-1 -carboxílico (0,252 mg, 0,6 mmol) em DCM:TFA 2:1 (4,8 ml) é agitada por 1 hora em temperatura ambiente. A mistura é então diluída com DCM e alcalinizada com NaHCO3 saturado. A camada aquosa é extraída com DCM (3 x) e as camadas orgânicas são combinadas, secas sobre MgSO4, filtradas e con- centradas, para gerar o composto do título como um sólido (180 mg, 78%). Etapa 3: 1-(4-(5-(1H-Pirazola-4-il)-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-ilamino)fenil) piperazin-2-ona

Br

5

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

Uma solução de íerc-butil éster de ácido 4-[4-(5-bromo- NH

J

Γ >

\ Il

ΓΝ

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 1, etapa 5, com o uso de 1-[4-(5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-piperazin-2-ona (70 mg, 0,18 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol (64 mg, 0,33 mmol), Pd(PPh3)4 (21 mg, 18 Mmol) e NaOtBu (70 mg, 0,72 mmol) em 2 ml de DMF/água 3:1. A mistura de reação é concentrada sob vácuo, e o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com a gradi- ente de DCMiNH3 99:1 a 90:10 (7 M em MeOH). O composto do título é iso- lado como um sólido verde pálido (13 mg, 19%). 1H RMN (400 MHz, d6- DMSO) δ (ppm) 3,05 (2H, m), 3,42 (2H, s), 3,62 (2H, m), 7,32 (2H, d), 8,07 (2H, d), 8,26 (1H, s), 8,39 (1H, br s), 8,67 (1H, br s), 8,81 (1H, s), 10,05 (1H, s), 13,32 (1H, br s). LCMS: Tr = 6.98 min (92,4%), m/z (APCI) 376 (M+H)+. Composto 102: 5-{8-[4-(4-ferc-Butil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4] tri- azolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona Etapa 1: 1-terc-Butil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina

i

N

A uma solução de 1-flúor-4-nitro-benzeno (314 mg, 2,23 mmols) 10

15

20

e 4-terc-butil-piperazina (1 g, 3,34 mmols) em dioxano (15 ml) é adicionado K2CO3 (1,65 mg, 11 )9 mmols), e a reação é agitada a 130°C de um dia para o outro. O solvente é evaporado sob vácuo e o resíduo é dividido entre ace- tato de etila e água. A camada orgânica é lavada com salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada, para gerar um composto bruto. A purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM, seguido por

DCMiNH3 99:1 (7 M em MeOH) gera o composto do título (348 mg, 55,4%). LCMS: Tr = 3,87 min (99%).

Etapa 2:4-(4-terc-Butil^iperazin-1-il)-fenilamina

NH2

V

-Nk

C J

Nl'

1-/erc-Butil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina (348 mg, 1,32 mmol) é

dissolvido em MeOH (10 ml), e diidrato de dicloreto de estanho (II) (1 08 g

4,79 mmols) é adicionado. A mistura é resfriada com o uso de um banho de

agua, e HCI concentrado é adicionado (3 ml). A reação é agitada a 40°C de

um dia para o outro. Após remoção do metanol, a solução resultante é alca-

l.n.zada usando NaOH concentrado (pH 11). A fase aquosa é extraída com

eter d.et.lico (3 x), e a camadas orgânicas combinadas, secas sobre MgSO4

filtradas, concentradas in vácuo, para gerar o composto do título (308 mg,

99%) que é usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. LCMS- Tr = 2,16 min (87%)

Etapa 3: (5-Bromo-[l,2,4JtriaZolo[1:.S^JpImzln^MH^n^tll^lpemzin. 1-il)-fenil]-amina Ja

r τ

ií · jr

HN

Br

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 6, etapa 1, com o uso de 5,8-dibromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,308 g, 1,107 mmol), 4-(4-ferc-butil-piperazin- 1-il)-fenilamina (0,310 g, 1,33 mmol) e N-etildiisopropil-amina (0,289 ml, 1,66 mmol) em 2-propanol (5 ml). A mistura de reação é dividida entre DCM e NaOH 1 N, a camada orgânica é separada e lavada com água e salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. A trituração do resíduo com éter dietílico e éter de petróleo gera o composto do título (440 mg, 92%) como um sólido creme. LCMS: Tr = 2,25 min (96%).

Etapa 4: 5-{8-[4-(4-terc-Butil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[ 1,2,4] triazolo[1,5-a] pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona

HN

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-terc-butil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (100 mg, 0,232 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-diidro-isoindol-1 -ona (90 mg, 0,32 mmol) e Pd(PPh3)4 (67 mg, 0,058 mmol) em Na2CO3 1,5 M (a- quoso) (1,24 ml) e dioxano (3,7 ml). A mistura de reação é dividida entre a - cetato de etila e salmoura, a camada orgânica é separada, seca sobre Mg- SO4 filtrada e evaporada in vácuo. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM:NH3 98:2 (7 M em MeOH), segui- do por DCM:NH3 95:5 (7 M em MeOH) para gerar um sólido que é triturado com éter dietílico e éter de petróleo, gerando o composto do título (71 mg, 63%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1,43 (9H, s), 2,36 (3H, s, MsOH), 3,02 (2H, m), 3,19-3,26 (2H, m), 3,67 (2H, d), 3,90 (2H, d), 4,52 (2H, s), 7,10 (2H, d), 7,86 (1H, d), 7,96-8,01 (3H, m), 8,10 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,72 (1H, s), 8,75 (1H, s), 9,09 (1H, brs), 10,09 (1H, s). LCMS: Tr = 2,07 min (99%), m/z (APCI) 483 (M+H)+.

Composto 105: 5-{8-[4-(2-Oxo-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona

Etapa 1: Terobutil éster de ácido 3-oxo-4-{4-[5-(1 -oxo-2,3-diidro-1 H-isoindol- 5-il)-[1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-piperazina -1 -carboxílico

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com o uso de ferc-butil éster de ácido 4-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-3-oxo-pipe- razina-1-carboxílico (115 mg, 0,24 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioxa- borolan-2-il)-2,3-diidro-isoindol-1-ona (92 mg, 0,35 mmol) e Pd(PPh3)4 (83 mg, 0,072 mmol) em Na2CO3 1,5 M (aquoso) (1,3 ml, 1,92 mmol), e dioxano

HN""

O

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- (2,5 ml). A mistura de reação é diluída com salmoura, e depois é adicionado tolueno, e um precipitado é formado e coletado por filtração. O sólido resul- tante é dissolvido em DCM e filtrado através de um cartucho de sílica para gerar o composto do título como um sólido amarelo (60 mg, 47%).

Etapa 2: 5-{8-[4-(2-Oxo^iperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]trl·azolo[1,5-a] pira- zin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona

Uma solução de terc-butil éster de ácido 3-oxo-4-{4-[5-(1-oxo- 2,3-diidro-1 H-isoindol-5-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}- piperazina-1-carboxílico (59 mg, 0,1 mmol) em DCM:TFA 3:1 (1,2 ml) é agi- tada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura de reação é diluída com DCM e alcalinizada com NaHCO3 saturado. A camada aquosa é extraída com DCM (3 x), e as camadas orgânicas são combinadas, secas sobre Mg- SO4, filtradas e concentradas sob vácuo, para gerar o composto do título como um sólido amarelo (38 mg, 86%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3,07 (2H, m), 3,44 (2H, s), 3,64 (2H, m), 4,50 (2H, s), 7,32 (2H, d), 7,83 (1H, d), 8,04-8,10 (4H, m), 8,22 (1H, s), 8,70 (1H, br s), 8,74 (1H, s), 10,25 (1H, s). LCMS: Tr = 7,17 min (93,7%), m/z (APCI) 441 (M+H)+. Composto 108: 7-Flúor-5-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidroisoindol-1 -ona Etapa 1: Éster metílico de ácido 4-bromo-2,6-difluorbenzóico A uma suspensão de ácido 4-bromo-2,6-diflúor-benzóico (5 g, 21 mmols) em DCM (10 ml), são adicionados cloreto de tionila (15 ml) e DMF (0,5 ml). A mistura é agitada em temperatura ambiente por 2,5 hora. Ela é então resfriada até 0°C, e MeOH (20 ml) é adicionado cuidadosamente cau- sando uma evolução vigorosa de HCI. Após agitação por mais 0,5 h, a solu- ção transparente é dividida entre DCM (50 ml) e água (50 ml). A camada orgânica é lavada com NaHCO3 saturado, salmoura, seca sobre MgS04, e o solvente é removido sob vácuo, para gerar o composto do título como um óleo amarelo pálido que é usado sem purificação adicional.

Etapa 2: Éster metflico de ácido 4-bromo-2-flúor-6-(nitrometil)benzóico

Nitrometano (10 ml, 169 mmols, 8 equivalentes) é adicionado cuidadosamente a uma suspensão de hidreto de sódio (4,05 g, 169 mmols, 8 equivalentes) e MgSO4 (40 g) em DMSO (100 ml) em temperatura ambiente, e a lama resultante é agitada por 0,25 h. À lama amarela resultante é adicio- nado éster metílico de ácido 4-bromo-2,6-difluorbenzóico (5,3 g, 21 mmols), e a mistura é agitada em temperatura ambiente por 3 dias, quando então todo o material de partida havia sido consumido. São adicionados água (200 ml) e HCI 6 M (50 ml), seguidos por DCM (200 ml). Mais água (500 ml) é adicionada, para gerar um sistema bifásico transparente. A camada aquosa é extraída com DCM (3 χ 100 ml), as camadas de DCM são então combina- das, lavadas com NaHCO3 saturado e salmoura, e secas sobre MgSO4. A evaporação do solvente gera um sólido laranja que contém 64% do material desejado, usado sem purificação adicional. LCMS; Tr = 1,27 min (64%). Etapa 3: 5-Bromo-7-flúor-2,3-diidro-isoindol-1-ona

Br

Éster metílico de ácido 4-bromo-2-flúor-6-(nitrometil)benzóico bruto da etapa prévia é dissolvido em MeOH (100 ml). A essa solução Iaran- ja transparente é adicionado pó de zinco (3,35 g, 51,3 mmols, 3 equivalen- tes), seguido por formiato de amônio (3,23 g, 51,3 mmols, 3 equivalentes), o que resulta em uma reação exotérmica. Após 0.3 h, NH3 7 M em MeOH (50 ml) é adicionado, e a mistura é agitada de um dia para o outro em tempera- tura ambiente. A mistura resultante é filtrada através de celite, e o filtrado amarelo é adsorvido em sílica e limpo grosseiramente por LC usando DCM/MeOH 94/6 NH3 7 Μ. A remoção do solvente gera um sólido castanho que é re-dissolvido em DCM, lavado com NaOH 10% e concentrado sob pressão reduzida, deixando um sólido branco, que é ainda triturado com pe- quenas quantidades de DCM para gerar o composto do título. LCMS: Tr = 0,96 min (100%) m/z 230/232 (M+H)+.

Etapa 4: 7-Flúor-5-(4,4,5,5-tetrametil-[ 1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-diidroisoin- dol-1-ona OO

Uma solução de 5-bromo-7-flúor-2,3-diidroisoindol-1-ona (531 mg, 2,31 mmols) em dioxano (5 ml) é agitada sob nitrogênio. Pd(dppf)Cl2 (94 mg, 5 % em mol), acetato de potássio (453 mg, 4,62 mmols, 2,0 equivalen- tes) e bispinacolatodiboro (1,17 g, 4,62 mmols, 2 equivalentes) são adicio- nados, e a reação é aquecida a 80°C por 3 h. A suspensão laranja resultante é diluída com DCM, filtrada através de celite e concentrada sob vácuo, para gerar um óleo que é redissolvido em um mínimo de DCM. Éter dietílico é adicionado lentamente, para gerar o composto do título como um sólido cas- tanho. LCMS: Tr =1,18 min (100%) m/z277/279 (M+H)+.

Etapa 5: 7-Flúor-5-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1 -il)-fenilamino]-[ 1,2,4]triazolo [ 1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidroisoindol-1 -ona Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 91, com o uso do boronato acima. LCMS: Tr = 0,90 min (95%), m/z 487 (M+H)+.

Composto 112: 5-(8-(4-(4-lsopropil-2-oxopiperazin-1 -il)fenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)isoindolin-1 -ona

Etapa 1: 1-[4-(5-Bromo-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-4-isopro- pil-piperaziri-2-ona

o

HN

Br

N

X --N

\

N

A uma solução de 1-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilamino)-fenil]-piperazin-2-ona (exemplo 31, etapa 2) (180 mg, 0,47 mmol) em MeOH (4 ml) são adicionados ácido acético (0,03 ml, 0,47 mmol), NaOAc (38 mg, 0,47 mmol) e acetona (0,2 ml, 1,18 mmol). A mistura de reação é agitada em temperatura ambiente por 1 hora, e depois é adicionado NaCN- BH3 (60 mg, 0,94 mmol), e a mistura é agitada a 40°C de um dia para o ou- tro. Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura de reação é acidificada com HCI concentrado (pH 1) e concentrada in vácuo. O resíduo é dividido entre NaOH 6 N e DCM. A camada aquosa é extraída com DCM (3 x) e as camadas orgânicas combinadas são secas sobre MgSO4 e concen- tradas in vácuo, para gerar um composto bruto que é purificado por croma- tografia em coluna de sílica-gel. A eluição com DCM e DCMiMeOH 98:2 ge- ra o composto do título como um sólido amarelo (45 mg, 25%).

Etapa 2: 5-(8-(4-(4-lsopropil-2-oxopiperazin-1 -il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-5-il)isoindolin-1 -ona

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, com o uso de 1-[4-(5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-4-isopropil-piperazin-2-ona (40 mg, 0,09 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-diidro- isoindol-1-ona (37 mg, 0,14 mmol) e Pd(PPh3)4 (31 mg, 0,027 mmol) em Na2CO3 1,5 M (aquoso) (0,5 ml, 0,75 mmol), e dioxano (1,2 ml). A mistura de reação é diluída com salmoura, e depois é adicionado tolueno, e um precipi- tado é formado e coletado por filtração. O filtrado é lavado com éter dietílico, éter de petróleo e MeOH, e depois purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel. A eluição com DCM:NH3 99:1 (7 M em MeOH), seguido por

.1

/

,-J—N

O H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- DCMiNH3 98:2 e 95:5 (7 M em MeOH) gera o composto do título como um sólido amarelo (24 mg, 55%).

1H RMN (400 MHz1 d6-DMSO) δ (ppm) 1,08 (6H, d), 2,73-2,87 (3H, m), 3,27 (2H, s), 3,62-3,68 (2H, m), 4,52 (2H, s), 7,36 (2H, d), 7,84 (1H, d), 8,07-8,10 (4H, m), 8,25 (1H, s), 8,70 (1H, br s), 8,77 (1H, s), 10,28 (1H, s). LCMS: Tr = 1,94 min (95,2%), m/z (APCI) 483 (M+H)\

Composto 114: 5-{8-[4-(4-lsopropilpiperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a]pirazin-5-il}-3,3-dimetil-2,3-diidroisoindol-1 -ona

Etapa 1:5-Bromo-2-(4-metoxibenzil)-3,3-dimetil-2,3-diidroisoindol-1 -ona

Uma suspensão de hidreto de sódio (130 mg, 60% de dispersão

em óleo mineral, 3,2 mmols) e iodeto de tetra-n-butilamônio (243 mg, 0,68 mmol) em THF (20 ml) é agitada em temperatura ambiente, e uma solução de 5-bromo-2,3-diidroisoindol-1-ona (675 mg, 3,2 mmols) em THF (20 ml) e DMF (4 ml) é adicionada. Após 75 min, brometo de 4-metoxibenzila (460 μΙ, 3,2 mmols) é adicionado, e a agitação continua por 4 h. Hidreto de sódio (635 mg, 60% de dispersão em óleo mineral, 15,9 mmols) é então adiciona- da ,e a agitação continua por 30 min, antes de iodometano (1,19 ml, 19 mmols) ser adicionado e a mistura aquecida a 70°C por 30 min. Após resfri- amento, NH4CI (aquoso saturado) é adicionado, e a mistura é diluída com acetato de etila (120 ml). As camadas são separadas, a fase orgânica é seca sobre MgSO4 e os solventes removidos sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por cromatografia em sílica, eluindo com acetato de etila 5% a 10% em éter de petróleo, para gerar o composto do título como um óleo a- marelo (640 mg, 1,78 mmol). Etapa 2:5-Bromo-3,3-dimetil-2,3-diidroisoindol-1-ona Br

O H

Uma solução de 5-bromo-2-(4-metoxibenzil)-3,3-dimetil-2,3-

diidroisoindol-1-ona (640 mg, 1,78 mmol) e nitrato cérico de amônio (2,91 g, 5,33 mmols) em acetonitrila (11 ml) e água (5 ml) é agitada a 0°C por 45 min. A solução é diluída com acetato de etila (100 ml) e lavada com salmoura (40 ml). Os solventes orgânicos são secos sobre MgSO4 e evaporados sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por cromatografia em sílica, eluindo com acetato de etila 10% a 50% em éter de petróleo, para gerar o composto do título (367 mg, 1,53 mmol).

Etapa 3: 5-{8-[4-(4-lsopropilpiperazin-1 -il)-fenilamino]-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a] pirazin-5-il}-3,3-dimetil-2,3-diidroisoindol-1 -ona

5-Bromo-3,3-dimetil-2,3-diidroisoindol-1-ona é convertida no bo- ronato correspondente de uma forma análoga ao Intermediário 6, Etapa 3. Este é então usado para preparar o composto do título a partir de (5- bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1 -il)- fenil]amina com a utilização dos métodos descritos para o Composto 120, Etapa 4. LCMS: Tr = 0,92 (100%), m/z = 497 (M+H)+.

Composto 118: 4-(5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ila- mino)-N-(piridin-3-ilmetil)benzamida

Etapa 1: Éster metílico de ácido 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilamino)-benzóico

dos descritos para o Composto 6, etapa 1, com o uso de 5,8-dibromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (250 mg, 0,90 mmol), éster metílico de ácido 4- aminobenzóico (163 mg, 1,08 mmol) e N-etildiisopropil-amina (0,19 ml, 1,08 mmol) em 2-propanol (2,5 ml). O composto do título é obtido após trituração com 2-propanol como um sólido marrom (148 mg, 47%).

Etapa 2: Ácido 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-benzóico

o

10

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

O

11

OH

Br

Éster metílico de ácido 4-(5-Bromo-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin- 8-ilamino)-benzóico (460 mg, 1,32 mmol) é suspenso em THF (11 ml), e uma solução de monohidrato de hidróxido de lítio (554 mg, 13,2 mmols) em água (11 ml) é adicionada. A mistura de reação é agitada em temperatura ambien- te por 4 horas, e depois é adicionado metanol (11 ml) e a mistura é agitada a 50°C por 24 horas. A mistura é dividida entre água e DCM, a fase aquosa é acidificada com HCI 2 M (pH 2) e um precipitado amarelo é formado. O pre- cipitado é coletado por filtração, lavado com água e éter dietílico e seco, pa- ra gerar o composto do título (215 mg, 49%).

Etapa 3: 4-(5-Bromo-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-ilamino)^-piridin-3-ilmetil- benzamida

O

Br

Uma solução de ácido 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-

ilamino)-benzóico (0,230 g, 0,69 mmol), 3-hidroxibenzotriazol (0,103 g, 0,76 mmol), hidrato de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (0,146 g, 0,76 mmol) em DMF (5 ml) e 3-picolilamina (0,077 ml, 0,76 mmol) é agitada em temperatura ambiente por 21 horas. O solvente é removido in vácuo, e o re- síduo é triturado com éter dietílico, acetato de etila e diclorometano. Um sóli- do amarelo pálido é obtido, lavado com água e seco, para gerar o composto do título (241 mg, 82%).

Etapa 4: 4-(5-(1 H-Pirazola-4-il)-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N- (piridin-3-ilmetil)benzamida ζ ^

S\ i N-NH

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando 4-(5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-piridin-3-ilmetil-benzamida (100 mg, 0,24 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol (93 mg, 0,48 mmol) e Pd(PPh3)4 (70 mg, 0,06 mmol) em K2CO3 1,5 M (aquoso) (1,4 ml) e dioxano (2,5 ml). O material bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM, seguido por DCM:NH3 98:2, e depois 96:4 e depois 90:10 (7 M em MeOH) para gerar o composto do título como um sólido branco (19,6 mg, 20%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 4,52 (2H, d), 7,40 (1H, m), 7,78 (1H, d), 7,93 (2H, d), 8,18 (2H, d), 8,32 (1H, s), 8,48-8,62 (4H, m), 8,82 (1H, s), 9,01 (1H, t), 10,21 (1H, br s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Tr = 1,86 min (93%), m/z (ES+) 412 (M+H)+.

Composto 119: 4-(5-(2-Oxo-1,2-diidropiridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pirazin-8-ilamino)-N-(piridin-3-ilmetil)benzamida

Etapa 1: 4-[5-(2-Metóxi-piridin-4-il)-[ 1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N- piridin-3-ilmetil-benzamida N Ό

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 6, etapa 4, usando 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-piridin-3-ilmetil-benzamida (120 mg, 0,28 mmol), ácido 2-metoxipiridina-4-borônico (87 mg, 0,57 mmol) e Pd(PPh3)4 (81 mg, 0,07 mmol) em K2CO3 1,5 M (aquoso) (1,6 ml) e dioxano (2,9 ml). O material bruto é purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel, eluindo com DCM, seguido por DCMiNH3 99:1, e depois 97:3 e depois 95:5 (7 M em Me- OH) para gerar o composto do título como um sólido branco (92,6 mg, 73%). Etapa 2: 4-(5-(2-Oxo- 1,2-diidropiridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pi mino)-N-(piridin-3-ilmetil)benzamida

H

Uma mistura de 4-[5-(2-metóxi-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pirazin-8-ilamino]-N-piridin-3-ilmetil-benzamida (71,5 mg, 0,16 mmol) e clori- drato de piridínio (91 mg, 0,79 mmol) em água (0,5 ml) em um tubo lacrado é aquecida a 150°C por 25 minutos. Após esse tempo, o solvente é removido in vácuo. O resíduo é submetido à cromatografia em sílica-gel, eluindo com DCM, seguido por DCM:NH3 98:2 e 90:10 (7 M em MeOH), e as frações que contêm o produto desejado são combinadas e evaporadas. O composto do título é isolado como um sólido amarelo (34,5 mg, 49%).

1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 4,52 (2H, d), 6,82 (1H, m), 7,22 (1H, s), 7,38 (1H, m), 7,51 (1H, d), 7,78 (2H, d), 8,18-8,23 (3H, m), 8,51 (1H, d), 8,62 (1H, s), 8,82 (1H, s), 9,01 (1H, t), 10,58 (1H, br s), 11,8 (1H, br s). LCMS: Tr = 1,72 min (97%), m/z (ES+) 439 (M+H)+.

Composto 120: 2-Metóxi-N-(6-metilpiridin-3-il)metil-4-[5-(1H-pirazola-4- il)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida Etapa 1:2-Metóxi-N-(6-metilpiridin-3-H)metH-4-nitrobenzamida

O

Ácido 2-Metóxi-4-nitrobenzóico (293 mg, 1,49 mmol) é dissolvido em DMF (2 ml), e 4-metilmorfolino (220 μΙ, 3,0 mmols) e TBTU (1,79 g, 1,7 mmol) são adicionados. A mistura é agitada em temperatura ambiente por min e C-(6-metilpiridin-3-il)metilamina (400 mg, 3,27 mmols) é adicionada. A agitação continuou em temperatura ambiente por 12 h. DCM (10 ml) é adi- cionado, e a fase orgânica é lavada com Na2CO3 (5% aquoso), HCI (3% a- quoso) e água, e depois seca sobre Na2SO4. Após evaporação dos solven- tes, o resíduo é triturado com éter-hexano, para gerar o composto do título como um sólido branco.

Etapa 2: 4-Amino-2-metóxi-N-[(6-metilpiridin-3-il)metil]benzamida O

H2N

Uma solução de 2-metóxi-N-(6-metilpiridin-3-il)metil-4-nitroben-

zamida (448 mg, 1,49 mmol) em EtOH e EtOAc (8 ml de cada) é agitada, e formiato de amônio (375 mg, 6 mmols) e 10% Pd/C (100 mg) são adici- onados. A mistura é aquecida no refluxo por 20 min, resfriada, filtrada atra- vés de celite, o sólido é lavado com EtOH, e os solventes combinados são evaporados para gerar o composto do título.

Etapa 3: 4-(5-Bromo-[ 1,2,4]triazolo[ 1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-hidróxi-N-[(6- metil-piridin-3-il)metil]benzamida

4-amino-2-metóxi-N-[(6-metilpiridin-3-il)metil]benzamida (280 mg, 1,03 mmol) são agitadas em iPrOH (5 ml), e HBr (48% aquoso, 380 μΙ) é adicionado. A mistura é aquecida no refluxo por 24 horas. A suspensão resfriada é derra- mada em NaHCO3 (saturado aquoso, 25 ml) e água (25 ml), e extraída com CHCb (4 χ 30 ml). Os extratos são secos sobre MgSO4 e evaporados. O re- síduo é purificado por cromatografia em coluna, eluindo com CH2CI2 10%/MeOH. As frações que contêm produto são evaporadas, e o resíduo é triturado com MeOH para gerar o composto do título como um sólido mar-

O

Br

5,8-Dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (285 mg, 1,03 mmol) e rom.

Etapa 4: 2-Metóxi-N-(6-metHpiridin-3-il)metil-4-[5-(1H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazolof 1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida

Ácido Pirazola-4-borônico (19 mg, 0,17 mmol), 4-(5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-hidróxi-N-[(6-metil-piridin-3-

il)metil]benzamida (40 mg, 0,085 mmol), K2CO3 (24 mg, 0,17 mmol) e Pd(dppf)CI2.CH2CI2 (4 mg, 0,005 mmol) são pesados em um tubo que pode ser lacrado. O tubo é aspergido com nitrogênio, e dioxano-água (4:1, 4 ml) é adicionado. O tubo é lacrado, colocado em um banho ultra-sônico sob um fluxo de gás nitrogênio por 30 segundos, e depois colocado em um banho de óleo a 85°C. A reação é agitada por 28 horas, adicionando-se porções adi- cionais de ácido borônico (10 mg) e catalisador (2 mg) após 2 h e 18 h. A mistura bruta é absorvida em SiO2 e purificada por cromatografia em coluna, eluindo com MeOH/DCM 1% - 10%. O produto obtido é redissolvido em Me- OH/DCM (4:1, 10 ml), é adicionado e MsOH/MeOH 0,1 M (2 eq), os solven- tes evaporados e o resíduo recolhido em água e Iiofilizado para gerar o composto do título como seu sal de bis-mesilato (38 mg). LCMS: Tr = 0,92 min (93.9 %) m/z (ESI) 455 (M+H)+.

Composto 122: N-Benzil-2-metóxi-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida

O

N-N H N

/>

N

A

N-N H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 120, com o uso de benzilamina na etapa 1. LCMS: Tr = 1,62 min (100%) m/z (ESI) 440 (M+H)+.

Composto 124: N-Piridin-2-ilmetil 3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-ilamino]benzamida

H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 129, com o uso de 2-piridilmetilamina na e- tapa 5. LCMS: Tr = 0,84 min (100%), m/z (ESI) 412 (M+H)+. Composto 127: (4-lsopropilpiperazin-1-il)-{3-[5-(1 H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]fenil}metanona N-N H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 129, com o uso de 4-isopropilpiperazina na etapa 5. LCMS: Tr = 0,84 min (100%), m/z (ESI) 432 (M+H)+. Composto 129: N-Etil 3-[5-(1H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin- 8-ilamino]benzamida

Etapa 1: Éster etílico de ácido 3-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilamino)benzóico

etil 3-aminobenzoato (0,93 g, 5,60 mmols) são agitadas em iPrOH (10 ml), e HBr (48% aquoso, 1,14 ml, 10 mmols) é adicionado. A mistura é aquecida a 85°C por 4 h, e depois resfriada até a temperatura ambiente e extinta com NaHCOe (saturado aquoso, 25 ml). A suspensão resultante é resfriada até 0°C, e o sólido branco é coletado por filtração por sucção e lavado com água

Br

5,8-Dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (1,39 g, 5,00 mmols) e (10 ml). O produto bruto é recolhido em EtOH1 e o solvente evaporado para gerar o composto do título como um sólido esbranquiçado (1,79 g, 4,9 mmols) que é usado sem purificação adicional.

Etapa 2: Éster etílico de ácido 3-[(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)- terc-butoxicarbonil-amino]benzóico

lo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)benzóico (1,79 g, 4,93 mmols) em DCM (20 ml) é agitada sob N2 em temperatura ambiente, e BOC2O (1,34 g, 6,16 mmols) e DMAP (0,30 g, 2,46 mmols) são adicionados. A agitação continua por 2 h,

quando LCMS indica conversão completa do material de partida. A mistura é filtrada e o filtrado is lavado com ácido cítrico diluído (pH 6, 5 ml) e salmoura (5 ml), e seco sobre Na2SO4. A evaporação do solvente gera o composto do título como um óleo amarelo (1,87 g, 4,0 mmols) que é usado sem purifica- ção adicional.

Etapa 3: Éster etílico de ácido 3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1H-pirazola-4-il)- [ 1,2,4]tríazolo[ 1,5-a]pirazin-8-il]-amino}benzóico

Br

Uma solução éster etílico de ácido de 3-(5-bromo-[1,2,4] triazo-

Nitrogênio é borbulhado através de uma mistura de éster etílico de ácido 3-[(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-terc-butoxicarbonil- amino]benzóico (0,58 g, 1,25 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioxaboro- lan-2-il)-1 H-pirazol (0,49 g, 2,50 mmols), K2CO3 (0,35 g, 2,50 mmols) e Pd(dppf)CI2.DCM (102 mg, 0,125 mmol) em dioxano (37,5 ml) e água (9,6 ml). Um condensador é adaptado no frasco, o sistema é evacuado e purifi- cado com N2 (g), e depois aquecido a 115°C por 25 min. O banho de aque- cimento é removido e CO2 (s) é adicionado para resfriar e tamponar o siste- ma. O solvente é removido sob pressão reduzida e o resíduo é purificado por cromatografia em sílica, eluindo com acetato de etila 10% a 50% em DCM, para gerar o composto do título como um óleo laranja (0,61 g, > 100%) que é usado sem purificação adicional.

Etapa 4: Ácido 3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazolo[1,5- a]pirazin-8-il]-amino}benzóico N-N H

Éster etílico de ácido 3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amino}benzóico impuro (0,61 g, 1,25 mmol) é dissolvido em THF (2,5 ml), e KOH (2 M aquoso, 2,5 ml, 5 mmols) é adicio- nado; a mistura é aquecida a 60°C de um dia para o outro. A solução é res- friada e filtrada através de celite, enxaguando com água. O filtrado é derra- mado em ácido cítrico (2 M aquoso, 2,5 ml) e agitado a 0°C. O sólido resul- tante é coletado por filtração por sucção, lavado com água e seco por sus- pensão em EtOH e evaporação sob pressão reduzida, para gerar uma goma marrom (280 mg).

Mais produto é obtido por extração do filtrado com DCM, para

gerar um total combinado de 352 mg do composto do título. Este é usado sem purificação adicional.

Etapa 5: N-Etil 3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino] benzamida Ácido 3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il]-amino}benzóico (42 mg, 0,10 mmol), etilamina (12 M a - quoso, 42 μΙ, 0,50 mmol) e trietilamina (28 μΙ, 0,20 mmol) são agitados em DMF (0,30 ml), e PyBOP (57 mg, 0,11 mmol) é adicionado. A agitação conti- nua de um dia para o outro. A mistura de reação é dividida entre EtOAc (7 ml) e NaHCO3 (saturado aquoso, 7 ml), e as camadas são separadas. As camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura (2x5 ml) e se- cas sobre Na2SO^ A evaporação do solvente gera um óleo que é dissolvido em MeOH (0,3 ml) contendo HCI (12 M aquoso, 0,15 ml), e agitado de um dia para o outro. Trietilamina (0,25 ml) e EtOH (2 ml) são adicionados, e os solventes removidos sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por HPLC preparativa para gerar o composto do título como um sólido branco (7 mg). 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 13,29 ppm (s, 0,8 H); 10,01 (s, 0,9 H); 8,77 (s, 1,0 H); 8,65 (s, 1,0 H); 8,52 (s, 1,1 H); 8,41-8,37 (m, 2,1 H); 8,25 (s, 1,0 H); 8,08 (d, 1,0 H); 7,47 (d, 1,0 H); 7,41 (t, 1,1 H); 7,04-7,03 (m, 0,5 H); 3,32 (s, 29,2 H (água)); 1,14 (t, 3,5 H). LCMS: Tr = 0,95 min (100%), m/z(E- Sl) 349 (M+H)+.

Composto 131: /V-(4-Hidroxibenzil) 3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-ilamino]benzamida OH

N-N H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto-

dos descritos para o Composto 129, com o uso de 4-hidroxibenzilamina na etapa 5. LCMS: Tr = 0,98 min (100%), m/z (ESI) 427 (M+H)+. Composto 134: N-Benzil-N-metil 3-[5-(1H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-ilamino]benzamida

dos descritos para o Composto 129, com o uso de N-metilbenzilamina na etapa 5. LCMS: Tr= 1,15 min (100%), m/z (ESI) 425 (M+H)+. Composto 167: Amida de ácido 4-[8-(6-fenilacetilamino-piridin-3- ilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico

Etapa 1: N-(5-Nitropiridin-2-il)-2-fenilacetamida

N-N H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- Uma solução de 2-amino-5-nitropiridina (4,17 g, 30 mmols) em piridina (30 ml) é agitada em temperatura ambiente, e uma solução de clore- to de fenilacetila (4,64 g, 30 mmols) em THF (30 ml) é adicionada gota a go- ta. A mistura é agitada por 24 h, e depois derramada em gelo-água (250 ml) para gerar um sólido marrom, que é usado sem purificação adicional.

Esse material é usado para preparar N-[5-(5-bromo-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a ]pirazin-8-ilamino)-piridin-2-il]-2-fenilacetamida de uma forma aná- loga às etapas 2 e 3 dos métodos, como descrito para o Composto 120. Etapa 4: Amida de ácido 4-[8-(6-fenilacetilamino-piridin-3-ilamino)-[ 1,2,4] tri- azolo[ 1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxflico

H

H2N

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 120, etapa 4, com o uso de N-[5-(5-bromo- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-piridin-2-il]-2-fenilacetamida e ácido 2- (aminocarbonil)tiofeno-4-borônico. LCMS: Tr = 1,06 min (100%) m/z (ESI) 471 (M+H)+. Composto 169: 2-(4-{4-[5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilamino]fenil}-piperidin-1-il)acetamida

N-N H

Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 84, com o uso de 2-bromoacetamida na eta- pa 1. LCMS: Tr = 0,81 min (100%), m/z (ESI) 418 (M+H)+. Composto 170: 5-{8-[4-(4-lsopropilpiperazin-1 -il)-3-trifluormetilfenilami- no]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidroisoindol-1 -ona Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto GB15, com o uso de 5-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-diidroisoindol-1 -ona. LCMS: Tr = 0,99 min (95%), m/z (ESI) 537 (M+H)+.

Composto 171: [4-(4-lsopropilpiperazin-1 -il)-3-trifluormetilfenil]-[5-(1 H- pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina Esse composto pode ser preparado com a utilização dos méto- dos descritos para o Composto 46, com uso de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1 -il)-3-trifluormetilfenil] amina. LCMS: Tr = 0,99 (95%), m/z (ESI) 472 (M+H)+. Outros exemplos de compostos da invenção preparados pelos

procedimentos acima são descritos acima. Condições de purificação e caracterização

Rotineiramente, a pós-síntese de todos os compostos pode ser purificada com o uso de HPLC de fase reversa usando um sistema de HPLC preparativa Gilson (322 bomba, 155 UV/VIS detector, 215 manipulador de líquidos). O Gilson 215 atua tanto como um auto-sampler quanto como cole- tor de frações. Os compostos também podem ser purificados por cromato- grafia instantânea em sílica-gel.

Os compostos são caracterizados por espectrometria de massa usando instrumentação de quadripolo simples com uma fonte de eletropulve- rização.

Ensaios Biológicos que demonstram a utilidade dos compostos

Exemplo 1: Ensaio de MAPKAP-K5

As reações de MAPKAP-K5 são realizadas em um formiato "Fia- shPlate" usando 0,1 ou 0,2 pCi de 33P-ATP; 0,6 μΜ de ATP; 1 mU de MAP- KAP-K5; 3 μΜ de substrato de peptídeo MAPKAP-K5, incubados em tempe- ratura ambiente por 30 minutos. Ensaio "Flashplate":

A reação de MAPKAP-K5 quinase é realizada em uma placa de polipropileno de 384 cavidades (Matrix Technologies), e depois transferida para uma flashplate de 384 cavidades revestida com estreptavidina (Perkin- Elmer).

As cavidades que contêm 2 μΙ de composto de teste ou inibidor- padrão, 13 μΙ de mistura de enzimas ou diluente, são adicionados usando um "Hydra" (Robbins Scientific).

As reações são iniciadas por adição de 10 μΙ de [2,5 x] coquetel de substrato usando um "Multidrop "(Thermo-Labsystems), para gerar con- centrações finais no ensaio de:

- 1 mU de MAPKAP-K5

- 3 μΜ de substrato de peptídeo de MAPKAP-K5

- 0,6 μΜ de ATP

- 0,004 \jCí [33Ρ]-γ-ΑΤΡ/μΙ -1 χ tampão de reação

As placas são incubadas em temperatura ambiente por 30 minu- tos.

As reações são finalizadas pela adição de 25 μI de EDTA (50 mM) a cada cavidade com o uso de um "Micro-fill" (Biotek).

As reações são transferidas para uma flashplate revestida com estreptavidina com a utilização de um sistema robótico Zymark. As placas são incubadas por 60 minutos em temperatura ambiente.

Todas as cavidades são lavadas 3 vezes com 100 μΙ de solução salina tamponada com fosfato usando uma lavadora de placas "Tecan".

A radioatividade é determinada por contagem de cintilação da flashplate (cavidades vazios) em um "Packard TopCount". Mistura de enzimas: Enzima Tris Hcl 50 mM (pH 7,5) EGTA0,1 mM DTT 2 mM 1 mg/ml de BSA

Tampão de reação: Tris Hcl 50 mM (pH 7,5) EGTA 0,1 mM

Acetato de magnésio 10 mM DTT 2 mM

3 Os compostos a seguir foram ou podem ser preparados de a-

cordo com os métodos sintéticos descritos acima. Em relação à Tabela 1 e à Tabela 2 abaixo, a atividade de cada composto, que pode ser determinada com a utilização do método de ensaio de MAPKAPK5 descrito no Exemplo 1, é expressa da seguinte forma:

> ++++ o composto exibiu IC50 de MAPKAPK5 de 1 -100 nM +++ o composto exibiu IC50 de MAPKAPK5 de 101-500 nM ++ o composto exibiu IC50 de MAPKAPK5 de 501-1000 nM + o composto exibiu IC50 de MAPKAPK5 > 1.000 nM

TABELA 1_: Estrutura e atividade de compostos exemplares

Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 1 N-N 362,40 ++ 2 rf à> A N-N H 375,44 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de M AP KAP K5 (nM) 3 rY JTj § 428,50 + 4 lT JOf^ CX H 402,46 + O HMr 415,46 + 6 0 434,53 ++++ 7 M 446,49 + 8 í? 446,49 + 9 Ji 434,53 ++ Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de M APKAPK5 (nM) tí^-i. 433,45 + Xf0 to 11 O^NH, 433,45 + 12 X: N-N 376,42 ++ 13 421,48 + 14 A (T^m, 451,44 + Xf0 •η 421,48 +++ rf fV» 16 £ N-N M 389,47 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 17 N-N 380,39 + 18 ir5 N-N 396,84 + 19 JO iV» N-N 405,42 + jCTXi rV N-N H 406,45 + 21 Xr^O "ίχ> J3 NHj 465,54 +++ 22 Jy0^o ,Ac V-NHj 0 465,54 ++ 23 JO0 <p Anh 362,40 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 24 ÓL $ m, 449,54 ++ Jjj-O 'X0 N-N 430,40 + 26 rA À 492,54 + 27 r> 420,50 +++ 28 í 462,58 ++++ 29 sP J5" ή 405,42 + r-A ÒS -C 446,52 + Composto# ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de M APKAPK5 (nM) 31 rV JCrV £ N-N 403,49 +++ 32 ò' k. 0 462,58 +++ 33 °xx £ 0 H 427,47 +++ 34 0XX. £ 405,42 +++ 0Xl tf> à 441,50 + 36 Γ·λ· 6$ δ 468,57 ++++ 37 ? N-N 392,42 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 38 Ok N-N H 403,49 ++ 39 Π Sr 0 441,50 + 40 Cr Jfj 1Yn-N N-N H 361,41 ++ 41 Jp X* N-N 363,38 + 42 rpV fV» X' N-N H 416,49 + 43 JCr0 £ N-N 404,48 + 44 ry-tF rM Vn-N N-N 444,43 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de M APKAPK5 (nM) 45 rfV .xr"' £ N-N H 443,44 + 46 r N-N 415,50 + 47 Jp te t O 422,47 +++ 48 ^a0 te ào 428,52 + 49 te te ào 469,62 + 50 .XXo 378,46 + 51 ολ 419,56 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de M APKAPK5 (nM) 52 jP rM Α--Λ N-N H 390,45 + 53 T"/ O H 477,51 + 54 OaV JCr0 0 475,58 +++ 55 rA JOr0 05 V 463,57 +++ 56 0 503,51 ++ 57 ryV 0 502,52 +++ 58 r^Tv JO^ m s~\ V-NHj O 474,59 +++ Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 59 V 401,48 + 60 rr* Λ·} lY^N N-N 402,47 + 61 to H/t 422,47 + 62 0Λ Z •ψ 463,57 ++ 63 JXcrf- K V 501,54 + 64 Λ N-N H 442,45 + 65 Í 471,52 +++ Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 66 1Yn-N & 429,51 + 67 Or0 Χ- N-N 380,39 + 68 Xr0 fM χ· N-N 396,84 + 69 420,50 + 70 x> N-N 392,42 + 71 Xr0 468,52 + 72 JCr0 Vl1 N-O 414,43 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de M APKAPΚ5 (ηΜ) 73 Xr0 03 HN 436,50 + 74 0Λ 03 "Iv 477,60 + 75 Or0 O n 445,46 + 76 DOr0 ώ) cT» 461,91 + 77 & 0 H 503,01 +++ 78 Νγ.Ν NH, 389,42 + 79 ολ jy ·&> 469,55 ++++ Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de M APKAPK5 (nM) 80 ^a0 φ" 0 ' 471,54 + 81 rA 05 >-NH, 0 512,64 + 82 Xr0 k OH 403,45 + 83 ξ 444,54 + 84 r-Ní-^ ^r0 Xn N-N 402,51 ++ 85 à> W H1N 470,56 + 86 < 447,50 ++++ Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAP KAP K5 (nM) 87 O H 428,46 ++++ 88 Cjk- JT^ Ò> 446,52 ++++ 89 i MfN 461,59 ++++ 90 r-Λ ^Cr0 íM 445,53 + 91 rA 446,53 + 92 0 H 467,58 ++++ 93 Sjm 412,46 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 94 ^Or0 LO S 0 406,41 ++++ 95 r-A HrN 476,61 + 96 r-A > 477,60 + 97 r/ to O 468,57 + 98 Jycjk Cr} àq- 0 469,55 + 99 fVi 1Y^N O H 429,44 +++ 100 0Y-NH JTj νΛι> X" N-N H 375,40 + Compostof ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 101 rA & 470,54 +++ 102 r/ I 482,59 ++++ 103 r/ Xr ÓO χ· N-N 417,52 ++ 104 Ór} (♦-Ν 412,46 + 105 V> JOr0 íVí> S^w-N O H 440,47 ++++ 106 ι 453,55 + 107 r/ $ X.J" 470,58 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 108 «w 486,56 ++++ 109 r-A to 468,57 + 110 N-N H 405,47 + 111 o- H 417,43 +++ 112 α^Λ $ 482,55 +++ 113 JOr0 í" 433,50 ++ 114 rA & 496,62 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 115 CL rM lYsf O H 348,41 +++ 116 Ol & O H 350,38 + 117 rM iYn-IT O H 360,35 + 168 o-·* 332,33 + 169 J3Crr t 417,48 ++ 170 536,56 +++ 171 471,49 + 172 / 403,49 + Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 173 Or- f 469,55 + 174 Xr' 378,34 + 175 £ 484,57 +++ 176 £ t 372,39 +++ 177 ò f 375,40 + 178 f 449,52 ++ 179 "2P ÒO § 470,54 +++ 180 f' 503,01 ++++ Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de M AP KAP K5 (nM) 181 & ξ 334,38 +++ 182 320,36 +++ 183 -f 460,54 ++++ 184 ? to ξ 362,44 +++ 185 XJ 349,40 + 186 t 391,48 + 187 rvr JTj^ £ 417,52 + 188 ^ 9> 482,59 ++++ Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAPKAPK5 (nM) 189 483,58 ++++ 190 f 469,55 +++

Tabela 2: Estrutura e atividade de compostos de benzamida exemplares

Composto # ESTRUTURA PM (calculado) IC50 de MAP- KAPK5 (nM) 118 P γ/τ, ύ; ι :ι 1 ·. M „ r " ι S 1 Ii-H H 411,43 + 119 ^Jm HfO T I t J N- T4 · M n. S 0 438,45 + 120 l<j. ·- O - J >· 455,48 + 121 .-A— 1 ] S üj hV O 'N' " "^"τΛ ' S--^n' í* f >-D hIf" 514,57 + 122 Λ I - w α Vi""' Λ ( <j M-N (1 440,47 + 123 ,,, JD XjL ,L T " I ν. «ν À It-M * 410,44 + 124 O r ji f f ν rr* M 411,43 + 125 Xl X', HH - Jf f Y* 6 % 'i H-IU 376,42 + 126 Xl .D HM ' ¥ - M- r N o I tf ^ 374,41 + 127 A A ,k J m ι o 431,50 ++ 128 Xl „ hn γ ■< Λ^ ° i H 320,32 + 129 ι: «ι κ „ '=S-N-,,' ί H-K K 348,37 + 130 ,XX. χΌ T I " ι-, L T C !> ^iS 416,49 + 131 ,Cl 3L ΓΓ \>»-Η 426,44 + 132 Ϋ ητ η J- « 1 ί 1 U ►y> 499,56 + 133 „, B Cl Crγ ^rtS, (γ»·« Ci Vcr Hfi 456,49 + 134 „ i0 X1 £ ι; ί ^ Zt Υ* Γ; H 424,47 + 135 , κ η rrV*-· ''VriH '""1J-jSt f ?' H 397,40 + 136 »1 * Γ e J Ί I HhT »·, .· , X H ] <~ T ° α 445,49 ++ 137 .ν ^ H X ''rf^yf" (Ι ( M ^lOl 425,46 ++ 138 Λ* ... „ ! ϊ Ί r" ■-.Ά·: .-M., J 0 417,48 ++ 139 M ΓΙ „ .Γ VVi ΜΗ. „., - ί"-\ 431,50 ++ 140 H (•-Χ ϊ J «τ,Λ.. J ί HML „ O Γ%· γ*-·' O 372,39 ++ 141 H H-K ί ..' .,"-M-jS '.Α Λ ,!, w.^-v ,-. J Ur-fJ a 461,53 ++ 142 •Λ Vr^yw HN - I J H Λ η ' α 374,41 + 143 >! Mli Y CkT^i κι. ,,·,. íi Ί r\ . b 445,49 ++ 144 H T r V . N fjj J í I I » O 497,54 ++ 145 d ι J Ii Ί r f"···" o 465,52 ++ 146 C-K 0 S 418,46 + 147 ri ίφ. G 479,55 +++ 148 N-U f* ^l, vv· I HT -r, 1-«. ,· , J J U I Γ'"" T - O 466,51 ++ 149 M NM. 'ÍX.3..- . 406,45 + 150 H CjS "V"''- -v J ]i ] r >· ι 0 447,50 ++ 151 S1^ , ν f» HH . . UtA.,, 0 ι. υ OH 440,47 + 152 h r* Λ.Χ B ι Γ y- 445,53 ++ 153 M-W * ^"k,;· W ""Π κ U 494,56 ++ 154 «« η , X "V rJ -η ^ 0 496,53 + 155 rf 1 '«^f* Ots,. Ih xhi . I U ί τ " Τ - Ο 488,56 ++ 156 ,"-.A1 --ν 1U1.;,... tf 0 ό 392,42 + 157 H rv-* .-■■Λ ·· -1 * Hft λ. ϋ ι r I Ό" 406,45 + 158 H ϊ j ΛιΛ 1 1 « ^ g 404,43 ++ 159 ,►ί-Β ί _λ ΐ γ ! 'n=ay* η ^ r "ι -J V- I» 386,42 ++ 160 W-I i J, /J-4I i-r-y* 1UyB- - . γ - s o 394,46 ++ 161 N-B -i -Λ c J1 ! U J LX ■ ¥ '·■·' ό ■■ 0 434,46 ++ 162 mt F >■ r tfS i - - · 447,55 ++ 163 ihK t v· ^T1I T [1 ] h f\ 0 431,50 +++ 164 m-b H ,'i irjvti UvSLA 0 376,42 + 165 L J [i ] r τ -Y 471,57 + 166 V-U V υ, O 364,37 ++ 167 A, .E XJ í> u yv U fji 470,52 ++ 191 Ci Â J . L,? y - Η- J - ■«. « V 479,55 + 192 , í r^· m í r ^ 477,49 + 193 V-*' r ^i CK * 547,58 + 194 jCO. J1Y, ώ 482,51 + 195 Cx> J γ · A, W SA. 544,62 +++ 196 OrS „Aj Λ, ,"N-V Λ ^ V, 544,62 +++ 197 .Oi ^ yt Qk 542,56 + 198 ,L J χ J-^. P 'τ* ^ 476,50 +

Exemplo 2

Desenvolvimento de um ensaio para a identificação de reguladores da ex- pressão de MMP1 por fibroblastos sinoviais primários ativados.

Para identificar compostos que diminuem a atividade de degra- dação da ECM das células, a atividade de degradação da ECM de células pode ser induzida para permitir uma detecção adequada dessa atividade, e para se obter uma leitura mais nítida. No contexto da AR, as células de es- colha são fibroblastos sinoviais mamíferos e os desencadeadores que po- dem ser usados para induzir a atividade de degradação da ECM são citoci- nas relevantes no campo da artrite: por exemplo, TNF-α, IL1 β, IL6, OSM1 IL17 e MIF1-a. Essa lista não é completa em função da quantidade de cito- cinas potencialmente envolvidas na patogênese da AR (Smolen e Steiner, 2003). Para preparar um ensaio in vitro que seja o mais próximo possível da complexidade da patologia, o desencadeador aplicado deve ser uma mistura de fatores gerada pelo contato de células produtoras de citocina relevantes no campo de artrite como, por exemplo, monócitos, macrófagos, células T e células B, com um desencadeador. As células produtoras de citocina irão responder ao contato produzindo uma mistura complexa e aleatória de fato- res. Caso a célula produtora de citocina usada também seja encontrada em um pannus, e a citocina aplicada para produzir esse desencadeador seja encontrada no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide, a mistura de fatores produzida ao final irá conter parte dos fatores que estão presentes nas articulações de pacientes com artrite. Princípios do "ensaio de MMP" As metaloproteases da matriz (MMPs) possuem vários papéis fisiológicos como, por exemplo, a maturação de outras proteases, fatores do crescimento e a degradação de componentes da matriz extracelular. MMP1 é um dos membros da família de MMP que é capaz de degradar colágeno nativo, o componente principal dos ossos e cartilagens. Uma expressão au- mentada de MMP1 por fibroblastos sinoviais (SFs) é diagnostica para a pro- gressão da doença artrítica, e é preditiva para processos erosivos na articu- lação (Cunnane e outros, 2001). A expressão de MMP1 por SFs pode ser aumentada pela ativação de SFs com desencadeadores relevantes para ar- trite reumatóide, por exemplo, citocinas como TNF-α ou IL13 (Andreakos e outros, 2003). Considerada em conjunto, a medida dos níveis de MMP1 pro- duzidos por SFs ativados é um dado altamente relevante no contexto de AR, na medida em que esse evento reflete o nível de ativação de SFs em dire- ção a um fenótipo erosivo, como observado no pannus. Caso a expressão reduzida de um fármaco candidato que tenha como alvo SFs ativados leve à redução da expressão de MMP1 por essas células, ficará provado que o alvo do fármaco está envolvido na regulação da expressão de MMP1 e, dessa forma, será considerado relevante para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas para o tratamento da AR.

Nos exemplos a seguir, o desenvolvimento de um ensaio, tam- bém denominado "ensaio de MMP", monitora a produção de MMP1 por fi- broblastos sinoviais (SFs) em resposta a desencadeadores de ativação di- versos (Exemplo 2.1). O uso desse ensaio é então descrito para a validação de produtos gênicos que são considerados alvos de fármacos para o desen- volvimento de terapias para a AR (Exemplo 2.2). A validação de alvos de fármacos é efetuada com o uso de adenovírus recombinantes, denominados ainda vírus knock-down ou Ad-siRNAs, que medeiam a expressão em célu- las de shRNA's que reduzem os níveis de expressão de genes-alvo por um mecanismo baseado em RNAi (interferência de RNA) (veja WO 03/020931). A identificação de compostos que modulam a atividade dos alvos de fárma- cos validados é então descrita na Tabela 3. O uso do "ensaio de MMP" para o teste de compostos que modulam a atividade dos alvos de fármacos identi- ficados será descrito a seguir. Exemplos de ensaio Vírus de controle usados:

Os vírus de controle usados nesses estudos estão listados abai- xo. Adenovírus dE1/dE2A são gerados a partir desses plasmídeos adaptado- res por co-transfecção do plasmídeo auxiliar (ήβΙρβή pWEAdõAflIl- rlTR.dE2A em packaging cells PER.E2A, como descrito em WO 99/64582. Vírus de controle negativo:

Ad5-eGFP_KD: sequência-alvo: GCTGACCCTGAAGTTCATC (ID. DE SEQ. NQ: 1). Clonado com o uso de sítios Sapl em vetor e vírus ge- rados como descrito em WO 03/020931.

Ad5-Luc_v13_KD: sequência-alvo GGTTACCTAAGGGTGTGGC (ID. DE SEQ. Ns: 2). Clonado com o uso de sítios Sapl em vetor e vírus ge- rados como descrito em WO 03/020931.

Ad5-M6PR_v1 _KD: sequência-alvo CTCTGAGTGCAGTGAA- ATC (ID. DE SEQ. N9: 3). Clonado com o uso de sítios Sapl em vetor e ví- rus gerados como descrito em WO 03/020931. Vírus de controle positivo:

Ad5-MMP1_v10_KD: sequência-alvo ACAAGAGCAAGATGTG- GAC (ID. DE SEQ. NQ: 4). Clonado com o uso de sítios Sapl em vetor e ví- rus gerados como descrito em WO 03/020931. Vírus usados para validação do alvo:

Ad5-MAPKAPK5_v13_KD: sequência-alvo CGGCACTTTACA- GAGAAGC (ID. DE SEQ. Ns: 5). Clonado com o uso de sítios Sapl em vetor e vírus gerados como descrito em WO 03/020931.

Ad5-MAPKAPK5_v12_KD: sequência-alvo ATGATGTGTGCCA- CACACC (ID. DE SEQ. Ns: 6). Clonado com o uso de sítios Sapl em vetor e vírus gerados como descrito em WO 03/020931. Exemplo 2.1: Desenvolvimento do ensaio de MMP

É desenvolvido um ELISA com formato de 384 cavidades para a medida de MMP1. São testados vários anticorpos primários, além de vários protocolos de ELISA. O protocolo seguinte é desenvolvido e validado para medir os níveis de MMP1 em sobrenadante de SF em placas de 384 cavida- des: placas brancas de 384 cavidades Lumitrac 600 (Greiner) são revestidas com 2 pg/ml de anticorpo anti-MMP1 MAB1346 (Chemicon). O anticorpo é diluído em tampão 40 (1,21 g de base Tris (Sigma), 0,58 g de NaCI (Calbio- chem) e 5 ml de NaN3 10% (Sigma) em 1 litro de água milli Q, e ajustado até o pH de 8,5). Após incubação de um dia para o outro a 4°C, as placas são lavadas com PBS (80 g de NaCI1 2 g de KCI (Sigma), 11,5 g de Na2HP04.7H20 e 2 g de KH2PO4 em 10 litros de milli Q; pH 7,4) e bloquea- das com 100 μΙ/cavidade de tampão de caseína (caseína 2% (VWR Interna- tional) em PBS). No dia seguinte, o tampão de caseína é removido das pla- cas de ELISA e substituído por 50 μΙ/cavidade de tampão EC (4 g de caseí- na, 2,13 g de Na2HPO4 (Sigma), 2 g de albumina bovina (Sigma), 0,69 g de NaH2PO4-H2O (Sigma), 0,5 g de CHAPS (Roche), 23,3 g de NaCI, 4 ml de EDTA 0,5 M pH 8 (Invitrogen), 5 ml de NaN3 10% em 1 litro de milli Q e ajus- tado até o pH de 7,0). É adicionado DTT 0,25 mM (Sigma) às placas de a- mostras descongeladas. Após remoção do tampão EC, 20 μΙ de amostra são transferidos para as placas de ELISA. Após incubação de um dia para o ou- tro a 4°C, as placas são lavadas duas vezes com PBS e uma vez com PBST (PBS com Tween 20 0,05% (Sigma)), e incubadas com 35 μΙ/cavidade de solução de anticorpo anti-MMP1 biotinilado (R&D). Esse anticorpo secundá- rio é diluído em tampão C (0,82 g de NaH2PO4-H2O, 4,82 g de Na2HPO4, 466 g de NaCI, 20 g de albumina bovina e 4 ml de EDTA 0,5 M pH 8 em 2 litros de milli Q, e ajustado até o pH de 7,0) em uma concentração de 5 μg/ml. Após 2 h de incubação em temperatura ambiente, as placas são Ia- vadas como descrito acima, e incubadas com 50 μΙ/cavidade de conjugado de estreptavidina-HRP (Biosource). O conjugado de estreptavidina-HRP é diluído em tampão C em uma concentração de 0,25 μg/ml. Após 45 min, as placas são lavadas como descrito acima, e incubadas por 5 min com 50 μΙ/cavidade de Substrato de ELISA BM Chem (Roche). A leitura é feita no Luminômetro Luminoscan Ascent (Labsystems) com um tempo de integra- ção de 200 mseg ou com uma leitora Envision (Perkin Elmer).

O aumento da expressão de MMP1 por SFs mediante o trata- mento com citocinas relevantes no campo de AR (TNF-α, IL1 β e OSM), ou com uma combinação destas, é mostrado na Figura 2 como barras brancas. Para esse experimento, os SFs são semeados em placas de 96 cavidades, 3.000 células/cavidade. Vinte e quatro horas mais tarde, o meio é trocado por meio M199 suplementado com FBS 1%. Um dia após a troca do meio, são adicionadas citocinas, ou combinações destas, às culturas, cada citocina sendo adicionada até uma concentração final de 25 ng/ml. Setenta e duas horas após a adição de citocina, o sobrenadante é coletado e processado no ELISA de MMP1, como descrito no protocolo apresentado acima. Em parale- Io a esse experimento, os SFs são estimulados com a utilização do mesmo protocolo, com o sobrenadante de células THP1 (diluído 2 vezes em M199 + FBS 1%) tratadas com as mesmas citocinas ou combinações de citocinas por 48 horas em meio M199 + FBS 1%. Os níveis de MMP1 para essas a- mostras são mostrados na Figura 2 como barras cinzas. A indução da ex- pressão de MMP1 por SFs desencadeada pelos sobrenadantes de células THP1 tratadas com TNF-α é mais forte (indução > 4,5 vezes), quando com- parada com os SFs estimulados com TNF-α recombinante isoladamente (in- dução de 3 vezes), e quase iguala a indução de 5 vezes obtida por uma mis- tura de 3 citocinas purificadas (TNF-α, IL13b, OSM). Esse resultado indica que o sobrenadante de células THP1 induzidas por TNF-α contém, além de TNF-α, fatores pró-inflamatórios adicionais que ativam SFs em direção à ex- pressão de MMP1. Como o papel de TNF-α na patogênese da AR é validado (bloqueadores de TNF-α como, por exemplo, Infliximab e Etanercept, mos- tram alguma eficácia no tratamento de pacientes com AR) e as células THP- 1 são representativas para monócitos/macrófagos presentes na articulação de pacientes com AR, a mistura desencadeadora baseada em TNF-α prepa- rada pelo contato de células THP-1 com TNF-α irá conter fatores presentes nas articulações de pacientes com AR e, subseqüentemente, é relevante para a AR. Esse desencadeador complexo baseado em TNF-α, também de- nominado "desencadeador complexo", será ainda utilizado como base para o "ensaio de MMP".

A inibição da ativação de SF pelo "desencadeador complexo" é demonstrada com o uso de dexametasona, um agente anti-inflamatório po- tente que também reduz fortemente a artrite induzida por colágeno em roe- dores (Yang e outros, 2004) (Figura 3). A dexametasona demonstrou que reduz de forma dose-dependente as quantidades de MMP1 produzidas pelos SFs ativados por desencadeador complexo. SFs são semeados em uma densidade de 3.000 células/cavidade em placas de 96 cavidades. Vinte e quatro horas após a semeadura, concentrações crescentes de dexametaso- na são adicionadas às células. Após incubação de um dia para o outro, o meio de cada uma dos cavidades é renovado quanto aos sobrenadante de células THP-1 tratadas com TNF-α (diluído a 50% em M199 + FBS 0,5%), e na mesma concentração de dexametasona adicionada no dia anterior. Qua- renta e oito horas após o tratamento, o sobrenadante é coletado e submetido ao ELISA de MMP1 descrito acima. A adição de dexametasona reduziu niti- damente a expressão de MMP1 por SFs, com um valor de IC50 de cerca de 1 nM (veja Figura 3). Esses dados mostram que a expressão de MMP1 por SFs ativados pode ser reduzida pela adição de um inibidor fisiologicamente relevante e representam uma prova dos princípios do "ensaio de MMP". Exemplo 2.2: MAPKAPK5 modula a expressão de MMP1 por SF induzi- da por "desencadeador complexo"

(A) Vírus Ad-siRNA funciona para derrubar a expressão de MAPKAPK5.

Adenovírus recombinantes que medeiam a expressão de siR- NA's direcionados a MAPKAPK5 e eGFP são gerados de acordo o procedi- mento descrito em WO 03/020931. A sequência-alvo usada nos adenovírus recombinantes é: CGGCACTTTACAGAGAAGC (ID. DE SEQ. Ne: 5), bem como ATGATGTGTGCCACACACC (ID. DE SEQ. Ns: 6). A sequência-alvo dentro do mRNA de eGFP usada nos adenovírus recombinantes é: GCT- GACCCTGAAGTTCATC (ID. DE SEQ. Ns: 1). Essas seqüências são clona- das no plasmídeo adaptador com o uso de sítios Sap1. Adenovírus dE1/dE2A são gerados a partir desses plasmídeos adaptadores por co- transfecção do he plasmídeo auxiliar pWEAd5Aflll-rlTR.dE2A em packaging cells PER.E2A, como descrito em WO 99/64582.

A funcionalidade de um adenovírus dirigido a MAPKAPK5 é tes- tada da seguinte forma: esses adenovírus são usados para infectar SFs pri- mários humanos cultivados em placas de Petri da seguinte forma. No 1Q dia, 500.000 SFs são semeados por placa de Petri. Um dia mais tarde, as células são infectadas com Ad5-MAPKAPK5-v13_KD (1,6E9 VP/ml) ou Ad5-eGFP- v5_KD (1,3E10 VP/ml) em uma MOI de 4.000 (com base nas titulações (nú- mero de partículas virais por ml) definida para o vírus por Q-rt-PCR). No 7S dia, as células são destacadas da placa de Petri de acordo com procedimen- to-padrão com o uso de uma solução de tripsina EDTA. A tripsina é então neutralizada por adição de meio de crescimento DMEM suplementado com FBS 10%. As células são então coletadas por uma etapa de centrifugação (1.000 rpm, 5 min). O pélete é Iisado em 100 μΙ de tampão RIPA fresco (Tris 50 mM pH 7,5, NaCI 150 mM, desoxicolato 1%, Triton X100 1%, SDS 0,1%). As amostras são então sonificadas por 10 segundos. A concentração de pro- teína das amostras é então determinada com a utilização do kit BCA (Pierce, N0 de catálogo 23227), como descrito pelo fornecedor, com a utilização de BSA como padrão. A 30 pg de Iisado de células diluído a 19,5 μΙ em tampão RIPA, 3,5 μΙ de agente redutor (agente redutor NuPage N°10, Invitrogen NP0004) e 7,5 μΙ de tampão de amostra (tampão de amostra NuPage LDS, Invitrogen NP0007) são adicionados. A amostra de 30 μΙ é então fervida por minutos, e carregada em um gel de poliacrilamida 10% (Invitrogen NP0301). Para permitir a estimativa do nível de redução de proteína, 15 μg, 7,5 μg e 3,75 μg do Iisado das células infectadas por Ad5-eGFP-v5_KD tam- bém são carregados no gel. O gel é então processado por 2 horas a 100 V em tampão de processamento 1 χ MOPS/SDS NuPage (Invitrogen NP001). Dez μΙ de padrão pré-corado Seablue Plus (Invitrogen LC5925) são usados para estimar o tamanho da proteína no gel. As proteínas no gel são então transferidas para uma membrana de PVDF (Invitrogen LC2002) por um pro- cedimento de wet blotting com o uso de um tampão de transferência prepa- rado pela mistura de 100 ml de tampão de transferência Nupage 20* (NP0006-1), 400 ml de metanol e 1.500 ml de água Milli Q. Antes da transfe- rência, primeiro a membrana é embebida em metanol e em tampão de trans- ferência. A transferência é realizada a 100 V por 90 minutos. A membrana é então bloqueada por imersão por 30 minutos em tampão de bloqueio (pó de bloqueio 2% (Amersham, RPN 2109) preparado em PBST (PBS suplemen- tado com Tween 20 0,1% (Sigma, P1379)). Após o bloqueio, a imunodetec- ção é efetuada com o uso de um monoclonal anticorpo de camundongo con- tra MAPKAPK5 (BD Biosciences, N0 de catálogo612080) diluído 250 vezes em tampão de bloqueio. Após incubação de um dia para o outro com esse anticorpo primário, a membrana é lavada 3 vezes com PBST e incubada por 1 hora com o anticorpo secundário ((Ig policlonal anticamundongo de cabra, conjugado à HRP (DAKO P0447) diluído 50.000 vezes em tampão de blo- queio. O blot é então lavado 3 vezes em PBST, e a detecção é realizada com ECL Advance (RPN2109, Amersham) em um Kodakimager de acordo com as instruções do fabricante. O Western Blotting revelou um nível de ex- pressão menor de MAPKAPK5 nas células infectadas com Ad5-MAPKAPK5- v13_KD, comparadas com as células infectadas com o vírus de controle ne- gativo Ad5-eGFP-v5_KD. A comparação com as amostras diluídas infecta- das com Ad5-eGFP-v5_KD permitiu estimar a redução na expressão como sendo de 2 vezes. Uma carga igual das amostras de 30 pg é demonstrada por imunodetecção de β-actina após remoção do anticorpo de MAPKAPK5 por um "procedimento de raspagem" (fervura por 5 minutos da membrana em PBST). A imunodetecção de β-actina é realizada de acordo com o méto- do descrito para a detecção de MAPKAPK5, mas usando um anticorpo poli- clonal de cabra contra β-actina (Santa Cruz, N0 de catálogo SC-1615) em uma diluição de 1.000 vezes como anticorpo primário e um anticorpo antica- bra de coelho em uma diluição de 50.000 vezes como anticorpo secundário. Os resultados desse experimento são apresentados na Figura 4. Considera- dos os dados em conjunto, esse experimento demonstrou a funcionalidade do vírus de Ad-siRNA produzido para reduzir os níveis de expressão de MAPKAPK5 em SFs primários humanos.

(B) Ad-siRNA com MAPKAPK5 reduzido diminui a expressão de MMP1 in- duzida por SF

A eficácia do vírus Ad5-MAPKAPK5-v13_KD no "ensaio de MMP" é testada da seguinte forma: no 1- Dia, SFs (passagem 9 a 10) são semeados em placas de 96 cavidades em uma densidade de 3.000 células por cavidade em meio de crescimento sinovial completo (Cell Applications). Um dia mais tarde, as células são infectadas com quantidades crescentes (3, 6; 9, 12 ou 15 μΙ) dos seguintes vírus: Ad5-eGFP-v5_KD, Ad5- MAPKAPK5-v12_KD, Ad5-MAPKAPK5-v13_KD, Ad5-MMP1-v10_KD. A car- ga de vírus é corrigida por adição do vírus neutro Ad5-Luc-v13_KD para le- var o volume final de vírus nas células até 15 μΙ em cada um dos cavidades. Essa correção garante que os efeitos observados não sejam causados pela carga de vírus aplicada às células. As células são então incubadas por 5 dias, antes da etapa de ativação. Essa etapa envolve a substituição, em to- dos os cavidades, do meio de crescimento por 75 μΙ de meio M199 suple- mentado com 25 μΙ de "desencadeador complexo". Quarenta e oito horas após a etapa de ativação, o sobrenadante é coletado e submetido ao ELISA de MMP1, como descrito no Exemplo 1. Os resultados do experimento são mostrados na Figura 5. A qualidade do experimento é demonstrada pela efi- cácia do vírus de Ad-siRNA se dirigir ao próprio MMP1. Esse vírus de contro- le positivo reduz fortemente a expressão de MMP1 por SFs, enquanto o ví- rus de controle negativo, designado para ter como alvo a expressão de Iuci- ferase, não influencia os níveis de expressão de MMP1. Dois vírus usados para validar o (Ad5-MAPKAPK5-v12_KD e Ad5-MAPKAPK5-v13) dirigido a MAPKAPK5 também levaram a uma redução nítida da expressão de MMP1 induzida por desencadeador complexo por SFs primários humanos. Pode-se concluir, a partir desse experimento, que MAPKAPK5 representa um alvo de fármaco valioso que demonstrou participação na modulação da expressão de MMP1 em SFs. Da mesma forma, espera-se que a inibição da atividade enzimática de MAPKAPK5 por um composto de pequena molécula reduza a expressão de MMP1 induzida por "citocina complexa" no "ensaio de MMP". Prevê-se também que a inibição da atividade enzimática de MAPKAPK5 por um composto de pequena molécula reduza a degradação da articulação as- sociada à AR.

(C) "Ensaio de MMP" in vitro: teste de compostos que inibem MAPKAPK5

Os compostos que inibem a atividade de MAPKAPK5 em um ensaio bioquímico (ou seja, sem células, com a utilização de enzima purifi- cada), são testados no "ensaio de MMP" de acordo com o protocolo apre- sentado a seguir.

Os estoques principais de composto (todos em uma concentra- ção de 10 mM em DMSO 100%) são diluídos 10 vezes em água (água desti- lada, GIBCO, sem DNAse e RNAse) para se obter um estoque de trabalho intermediário de 1 mM em DMSO 10%. Esse estoque de trabalho intermedi- ário é ainda diluído 3 vezes (ou 10 vezes) em DMSO 10% para se obter um estoque de trabalho intermediário com uma concentração de 333 μΜ (ou 100 μΜ), respectivamente, em DMSO 10%. Os estoques de trabalho inter- mediários de 1 mM e de 333 μΜ (ou 100 μΜ) são então ainda diluídos 10 vezes em DMSO 1,1% para se obter os estoques de trabalho 10 χ em uma concentração de 100 μΜ e 33,3 μΜ (ou 10 μΜ) em DMSO 2%. Esse estoque de trabalho 10 χ é então diluído 10 vezes em meio M199 suplementado com FBS 1% para se obter a "preparação de composto 1 x" final que contém os compostos a 10 μΜ e 3,33 μΜ (ou 1μΜ), bem como DMSO 0,2%. Essas são as condições finais nas quais os compostos são testados nas células. Em paralelo, o estoque de trabalho 10 χ é diluído 10 vezes em "desencadeador complexo" (ou seja, o sobrenadante de células THP1 tratadas com TNF-a produzidas da forma descrita no Exemplo 1), que é diluído 2 vezes em meio M199 suplementado com FBS 1% para produzir o "composto 1 χ em prepa- ração de desencadeador complexo 50%".

No 1 - dia, RASFs são semeados em placas de 96 cavidades (fundo plano, tratadas para cultura de tecido, Greiner) em uma densidade de 3.000 células/cavidade em meio de crescimento sinovial completo (Cell Ap- plications). No 59 Dia, os compostos são adicionados ás células cultivadas da forma descrita a seguir. O meio é completamente removido das células e substituído por 75 μΙ das "preparações de composto 1 x" que contêm os compostos a 10 μΜ ou 3,33 μΜ (ou 1 μΜ) em meio M199 suplementado com FBS 1% e DMSO 0,2%. Após um período de incubação de 2 horas, que permite que os compostos se equilibrem e entrem nas células, 25 μΙ do "composto 1 χ em preparações de desencadeador complexo 50%" são adi- cionados às cavidades no topo da "preparação de composto 1 x", nas cavi- dades que contêm os compostos correspondentes em concentração corres- pondente. Dessa forma, no final é aplicado nas células um desencadeador complexo diluído 8 vezes. É então realizada uma incubação de 48 horas, e 20 μΙ do sobrenadante das células são então processados no ELISA de MMP1, como descrito acima, liberando os dados brutos (RLU: unidades de luminescência relativa). A seguir, os controles são incluídos nos experimen- tos. Um controle de sinal máximo, no qual as células são ativadas pelo de- sencadeador complexo, mas só é adicionado o veículo de DMSO 0,2% (e, dessa forma, sem composto). Esse controle indica o nível máximo de MMP1 que pode ser obtido no teste. Um controle de sinal mínimo também é incluí- do nesses experimentos. Aqui, as células não são induzidas. O meio das células é então trocado por 100 μΙ de meio M199 suplementado com FBS 1% no 5Q Dia. Esse controle retorna aos níveis basais de MMP1 produzidos pelas RASFs. O percentual de inibição da expressão de MMP1 obtido pelos compostos é então calculado com base nos dados de data fornecidos pelo ELISA com a seguinte fórmula: [[(níveis máximos de MMP1 - níveis mínimos de MMP1) - (nível de MMP1 do composto X em concentração Y - níveis mínimos de MMP1)]/(níveis máximos de MMP1 - níveis mínimos de MMP1)] χ 100.

A toxicidade dos compostos é avaliada da seguinte forma. No 1e Dia, os SFs são semeados em placas de 96 cavidades brancas de cultura de tecido tratadas em uma densidade de 3.000 células por cavidade em 100 μΙ de meio de crescimento sinovial completo. A manipulação do composto, a adição do composto nas células, bem como a ativação das células, são rea- lizadas como descrito acima neste exemplo para determinação dos níveis de MMP1. Após o período de incubação de 48 horas, o meio é removido das cavidades, substituído por 50 μΙ de meio M199 fresco suplementado com FBS 1%. Cinqüenta μΙ de substrato (kit de viabilidade celular Promega Cellti- ter Glow) são então adicionados às cavidades. Após um período de incuba- ção de 10 min, o sinal de luminescência é medido. Uma redução do sinal de luminescência em mais de 50%, comparado com as cavidades de controle máximo, é considerado como reflexo de uma toxicidade significativa. Não foi observada toxicidade para os compostos testados no "ensaio de MMP".

Deve-se entender que fatores, como por exemplo, a capacidade diferencial de penetração nas células dos vários compostos, podem contribu- ir para as discrepâncias entre a atividade dos compostos nos ensaio de MP bioquímicos in vitro e em células.

Em relação à Tabela 3 e à Tabela 4 abaixo, a EC50 de MMP1 de cada composto, que pode ser determinada com a utilização do método de ensaio aqui descrito, é expressa da seguinte forma: **** o composto exibiu EC5O de MMP1 de 1 -100 nM *** o composto exibiu EC5O de MMP1 de 101-500 nM ** o composto exibiu EC50 de MMP1 de 501 -1.000 nM * o composto exibiu EC50 de MMP1 > 1.000 nM

Tabela 3

Composto # EC50 de MMP1 (nM) 1 ★ 2 ★ 3 *** 4 ★ *** 6 *** 7 * 8 ** 9 ** *★ 11 *** 12 ★* Composto # EC50 de MMP1 (nM) 13 *** 14 * *** 16 * 17 * 18 ** 19 * * 21 22 * 23 * 24 * 26 * 27 28 ** 29 * * 31 * 32 ** 33 34

36 **★ 37 ** 38 * CompostoJ EC50 de MMP1 (nM) 39 * 40 * 41 * 42 * 43 * 44 * 45 * 46 * 47 *★ 48 ★** 49 * 50 *** 51 52 * 53 ** 54 *** 55 ★** 56 ** 57 *** 58 *** 59 * 60 * 61 ** 62 ★ 63 64 * Composto # EC50 de MMP1 (nM) 65 *** 66 ** 67 * 68 * 69 * 70 ★ 71 * 72 * 73 * 74 * 75 * 76 77 * 78 * 79 ** 80 *** 81 * 82 * 83 * 84 * 85 * 86 ★ 87 *** 88 ** 89 ** 90 * Composto # EC50 de MMP1 (nM) 91 * 92 *** 93 * 94 * 95 * 96 * 97 * 98 * 99 * 100 * 101 * 102 * 103 ** 104 * 105 ★ 106 107 108 * 109 110 * 111 * 112 * 113 114 * 115 * 116 * Composto # EC50 de MMP1 (nM) 117 *** 168 * 169 * 170 * 171 ★ 172 * 173 * 174 ★ 175 ★ 176 ** 177 * 178 * 179 * 180 181 ★ 182 * 183 * 184 * 185 *

Tabela 4

Composto # EC50 de MMP1 (nM) 118 * 119 * 120 * 121 ★ 122 ★ 123 * Composto # EC50 de MMP1 (nM) 124 * 125 * 126 * 127 ★ 128 ★ 129 ★ 130 * 131 132 * 133 * 134 ** 135 136 * 137 * 138 * 139 ★ 140 ★ 141 * 142 * 143 * 144 145 ★ 146 * 147 * 148 ★ 149 * 150 * 151 * 152 * 153 * 154 ★ 155 * Composto # EC50 de MMP1 (nM) 156 * 157 * 158 * 159 * 160 * 161 * 162 * 163 * 164 * 165 ★ 166 ★ 167 * 191 * 192 *** 193 * 194 ** 195 * 196 * 197 * 198 *

Exemplo 3: Ensaio para avaliar o efeito dos compostos sobre a liberação de citocina por PBMCs humanas

Células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs) são isoladas da camada de células brancas "buffy coats" preparada a partir do sangue de voluntários saudáveis, isoladas basicamente de acordo com o método de Boyum (1984). Resumidamente, a camada de células brancas é diluída 1:1 com PBS 1 χ (Gibco), e 30 ml são colocados cuidadosamente no topo de 20 ml de Lymphoprep™ (Lucron Bioprodutos) em tubos de Falcon de 50 ml. Após centrifugação (35 min, 400 g, 18°C), as células mononuclea- res são coletadas da interfase branca, e lavadas 3 vezes com PBS 1 χ por re-suspensão e centrifugação (10 min, 200 g). As PBMCs isoladas são fi- nalmente re-suspensas em RPMI 1640 (Ne de Catálogo 21875, Gibco) que é suplementado com FBS 10% inativado pelo calor (Hyclone).

Para o ensaio, as PBMCs são semeadas a 2,5E6 células/ml em placas de 96 cavidades de 160 μΙ (Nunc). A diluição serial dos compostos de teste é feita inicialmente em DMSO (Sigma), e depois diluída 50 vezes em meio M199 (Gibco) contendo FBS 1% inativado pelo calor. Os compostos são ainda diluídos 1/10 nas placas do ensaio, para se obter uma concentra- ção de DMSO final de 0,2%. As células são pré-incubadas com os compos- tos por 1 hora a 37°C, CO2 5%. A seguir, as células são estimuladas com LPS (Escherichia coli sorotipo 026:B6, N2 de Catálogo L2654, Sigma), que é adicionado em um volume de 20 μΙ, até uma concentração final de 1 μg/ml) e as células são ainda cultivadas por 24 horas. As placas são centrifugadas, e o sobrenadante é coletado e armazenado a -80°C, até análise de diluições apropriadas em ELISAs.

O seguinte protocolo de ELISA quimioluminescente de 384 cavi- dades foi desenvolvido para medir os níveis de TNFa no sobrenadante: pla- cas de 384 cavidades White Lumitrac 600 (Greiner) são revestidas com (40 μΙ/cavidade) anticorpo de captura anti-TNFa (Ns de Catálogo 551220, BD Pharmingen), que é diluído até 1 μg/ml em PBS 1 χ (Gibco). Após incubação de um dia para o outro a 4°C, as placas são lavadas com PBS 1 χ (80 g de NaCI, 2 g de KCI (Sigma), 11,5 g de Na2HP04.7H20 e 2 g de KH2PO4 em 10 litros de milli Q; pH 7,4), e bloqueadas com 100 μΙ/cavidade de tampão B (PBS 1 χ contendo BSA 1% (Sigma), sacarose 5% (Sigma) e NaN3 0,05% (Sigma)). Após incubação de 4 horas em temperatura ambiente, o tampão de bloqueio é removido, e as placas são lavadas uma vez com PBST (PBS 1 χ com Tween 20 0,05% (Sigma)). A seguir, 40 μΙ de amostra são transferidos para as placas de ELISA, e as placas são incubadas a 4°C. No dia seguinte, as placas são lavadas 3 vezes (duas vezes com PBST e uma vez com PBS), e 35 μΙ/cavidade de anticorpo anti-TNFa biotinilado (N2 de Catálogo 554511, BD Pharmingen), diluídos inicialmente até uma concentração de 250 ng/ml em tampão D (PBS 1 χ com BSA 1%), são adicionados. Após 2 horas de incubação em temperatura ambiente, as placas são lavadas como descrito acima, e 35 μΙ/cavidade de uma diluição 1/2.000 de conjugado de estrepta- vidina-HRP (N2 de Catálogo SNN2004, Biosource) em tampão D são adicio- nados. Após 45 min, as placas são lavadas como descrito acima, e incuba- das por 5 min com 50 μΙ/cavidade de Substrato de ELISA por Quimiolumi- nescência POD BM (Roche). A leitura é feita no Luminômetro Luminoscan Ascent (Labsystems), com um tempo de integração de 100 mseg, o que libe- ra os dados brutos (RLU: unidades de luminescência relativa). Os controles seguintes são incluídos nos experimentos: um controle de sinal máximo, no qual as células são ativadas por LPS1 mas só é adicionado o veículo de DMSO 0,2% (e, dessa forma, sem composto). Esse controle indica o nível máximo de TNFa que pode ser obtido no teste. Um controle de sinal mínimo também é incluído nesses experimentos. Aqui, as células não são induzidas. Esse controle retorna os níveis basais de TNFa produzidos pelas PBMCs. O percentual de inibição (PIN) da liberação de TNFa obtido pelos compostos é então calculado com base nos dados de RLU gerados pelo ELISA com a seguinte fórmula: 100 - [((nível de TNFa do composto X em concentração Y - níveis mínimos de TNFa)/(níveis máximos de TNF a- níveis mínimos de TNFa)) χ 100]. Quando os compostos são testados em 8 concentrações (di- luição serial de 1/3), os valores de EC5O podem ser calculados por ajuste da curva das médias dos dados de PIN obtidos para um composto em cada concentração de teste.

Para avaliar o efeito dos compostos sobre a liberação de IL1 e IL6 por culturas de PBMC estimuladas por LPS, diluições apropriadas do sobrenadante podem ser medidas utilizando-se o mesmo protocolo de ELI- SA descrito acima. Anticorpos pareados para ELISA de IL1 e IL6 (todos de R&D Systems) podem ser usados da seguinte forma: anticorpo de captura anti-IL1 (Ne de Catálogo MAB601), usado a 0,5 μg/m, anticorpo de detecção biotinilado anti-IL1 (N5 de Catálogo BAF201), usado a 50 ng/ml; anticorpo de captura anti-IL6 (N2 de Catálogo MAB206), usado a 1 μg/ml; anticorpo de detecção biotinilado anti-IL6 (N9 de Catálogo BAF206), usado a 50 ng/ml. Em relação à Tabela 5 abaixo, a EC50 de PBMC de cada com-

posto, que pode ser determinada com a utilização do método de ensaio aqui descrito, é expressa da seguinte forma: #### o composto exibiu EC50 de PBMC de 1-100 nM ### o composto exibiu EC50 de PBMC de 101-500 nM ## o composto exibiu EC50 de PBMC de 501-1.000 nM # o composto exibiu EC50 de PBMC > 1.000 nM

Tabela 5

Composto # PBMC EC50 (nM) 1 # 2 # 3 # 4 # # 6 # 7 # 8 # 9 ### # 11 # 12 # 13 # 14 # ## 16 # 17 # 18 # 19 # # 21 # 22 # 23 # 24 # # 26 ## Composto # PBMC EC50 (nM) 27 # 28 # 29 # # 31 # 32 ## 33 # 34 # 34 # # 36 # 36 # 36 # 36 # 36 # 36 # 37 # 38 # 39 # 40 ## 41 # 42 # 43 ### 43 ## 43 # 43 # 43 # 44 # 45 # 46 # 47 # 48 # Composto # PBMC EC50 (nM) 49 # 50 # 51 # 52 # 53 # 54 ## 54 # 56 # 57 # 58 # 59 # 60 # 61 # 62 ## 62 ## 63 # 64 # 65 # 66 # 67 # 68 # 69 # 70 # 71 # 72 # 73 # 74 # 75 # 76 # 77 # 78 ## 79 # Composto # PBMC EC50 (nM) 81 # 84 # 85 # 86 # 87 # 88 #### 88 # 89 # 90 # 91 # 92 # 94 # 99 ## 101 # 102 # 103 ### 104 # 105 # 108 # 110 # 113 # 115 # 116 # 117 # 169 # 170 # 171 ## 172 # 174 # 176 # 179 # 180 # Composto # PBMC EC50 (nM) 181 #

A presente invenção também está relacionada a um método de tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias, que compreende a ad- ministração a um indivíduo que dela necessita de um inibidor terapeutica- mente eficaz de uma quantidade inibidora de Proteína Quinase 5 Ativada por Proteína Quinase Ativada por Mitógeno de um composto de acordo com Fórmula 1.

Outro aspecto do método da presente invenção está relacionado a um método de tratamento ou profilaxia de uma condição caracterizada por atividade anormal da metaloproteinase da matriz, que compreende a admi- nistração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto inibi- dor da metaloproteinase da matriz de acordo com Fórmula 1.

Um aspecto adicional do método da presente invenção consiste em um método de tratamento ou profilaxia de uma condição selecionada de doenças que envolvem a degradação da matriz extracelular, que compreen- de a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um com- posto inibidor da metaloproteinase da matriz de acordo com Fórmula 1.

Ainda um aspecto adicional do método da presente invenção consiste em um método de tratamento ou profilaxia de uma condição sele- cionada de doenças que envolvem a expressão celular anormal de MMP1, que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente efi- caz de um composto inibidor da metaloproteinase da matriz de acordo com Fórmula 1.

Uma modalidade especial do método da presente invenção con- siste em um método de tratamento ou prevenção de artrite reumatóide, que compreende a administração a um indivíduo que dela necessita de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com Fórmu- la 1.

Esta invenção também está relacionada ao uso dos presentes compostos na fabricação de um medicamento para o tratamento ou a profi- Iaxia de uma condição evitada, atenuada ou eliminada pela administração de um inibidor de Proteína Quinase 5 Ativada por Proteína Quinase Ativada por Mitógeno, ou uma condição caracterizada por atividade anormal de colage- nase, ou uma condição selecionada de doenças que envolvem inflamação, principalmente para o tratamento de artrite reumatóide.

A administração do composto da presente invenção ao paciente

em questão inclui tanto a auto-administração quanto a administração por outra pessoa. O paciente pode necessitar de tratamento para uma doença ou condição médica existente, ou pode precisar de tratamento profilático pa- ra evitar ou reduzir o risco de doenças e condições médicas afetadas por um distúrbio no metabolismo ósseo. O composto da presente invenção pode ser liberado ao paciente em questão por via oral, transdérmica, por meio de ina- lação, injeção, por via nasal, retal ou por meio de uma formulação de libera- ção sustentada.

Um regime preferido do presente método compreende a admi- nistração a um indivíduo que sofre de uma condição de doença caracteriza- da por inflamação, com uma quantidade inibidora eficaz de metaloprotease, da matriz de um composto da presente invenção por um período de tempo suficiente para reduzir os níveis anormais de degradação da matriz extrace- Iular no paciente e, de preferência, terminar processos autoperpetuantes responsáveis pela referida degradação. Uma modalidade especial do méto- do compreende a administração de uma quantidade inibidora eficaz de me- taloprotease da matriz de um composto da presente invenção a um paciente individual que sofre ou está suscetível ao desenvolvimento de artrite reuma- tóide, por um período de tempo suficiente para reduzir ou evitar, respectiva- mente, a degradação de colágeno e óssea nas articulações do referido paci- ente e, de preferência, terminar processos autoperpetuantes responsáveis pela referida degradação.

A toxicidade e a eficácia terapêutica desses compostos podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padronizados em cultu- ras de célula ou animais experimentais, por exemplo, para determinação da LD50 (a dose letal para 50% da população) e da ED50 (a dose terapeutica- mente eficaz em 50% da população). A proporção de doses entre os efeitos tóxicos e terapêuticos consiste no índice terapêutico, que pode ser expresso como a proporção LD50ZED50. Preferem-se compostos que exibem índices terapêuticos elevados. Embora possam ser usados compostos que exibam efeitos colaterais tóxicos, deve-se ter o cuidado de se projetar um sistema de liberação que direcione tais compostos ao local de tecido afetado, a fim de minimizar danos potenciais às células não infectadas e, desse modo, reduzir os efeitos colaterais.

Os dados obtidos a partir dos ensaios de cultura de células e de estudos animais podem ser usados na formulação de uma gama de dosa- gens para uso em seres humanos. A dosagem desses compostos se situa preferivelmente dentro de uma faixa de concentrações circulantes que inclu- em a ED50, com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar den- tro dessa faixa, dependendo da forma de dosagem empregada e da via de administração utilizada. Para qualquer composto usado no método da inven- ção, a dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios de cultura de células. Uma dose pode ser formulada em modelos animais para se obter uma faixa de concentrações plasmáticas circulantes que inclui a IC50 (ou seja, a concentração do composto de teste que obtém metade da inibição máxima dos sintomas), como determinada em cultura de células. Essa informação pode ser usada para determinar com mais precisão as doses úteis em seres humanos. Os níveis plasmáticos podem ser medi- dos, por exemplo, por cromatografia líquida de alto rendimento.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz preferida do composto da presente invenção a ser administrada a um paciente individual é de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, administrada de uma vez a três vezes ao dia. Por exemplo, um regime eficaz do presente método pode administrar cerca de 5 mg a cerca de 1.000 mg do referido composto da presente inven- ção, de uma vez a três vezes ao dia. Será subentendido, no entanto, que o nível de dose específico para qualquer paciente em particular dependerá de diversos fatores, incluindo a idade, o peso corporal, a saúde geral, o sexo, a dieta, o tempo de administração, a via de administração, a taxa de excreção, a combinação de fármacos e a gravidade da condição inflamatória em parti- cular. A consideração desses fatores faz parte dos conhecimentos do médi- co experiente com a finalidade de determinar a quantidade de dosagem te- rapêutica ou profilaticamente eficaz para evitar, se opor ou interromper o progresso da condição.

Os compostos da invenção podem ser incorporados em compo-

sições farmacêuticas adequadas à administração. Essas composições tipi- camente compreendem pelo menos um composto da invenção e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável. Como aqui usado, o termo "veículo farmaceuticamente aceitável" visa incluir veículos sólidos como, por exem- pio, lactose, estearato de magnésio, terra alba, sacarose, talco, ácido esteá- rico, gelatina, ágar, pectina, acácia, ou semelhantes; e líquidos como, por exemplo, óleos vegetais, óleo de amendoim e água estéril, ou semelhantes, qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e de retardo da absorção, e semelhantes, compatíveis com a administração farmacêutica. Essa lista- gem de veículos farmaceuticamente aceitáveis não deve ser considerada como limitante. O uso desses meios e agentes para substâncias farmaceuti- camente ativas é bem-conhecido na técnica. Excetuando-se os meios ou agentes convencionais que sejam incompatíveis com o composto ativo, o uso destes nas composições é contemplado. Também podem ser incorpora- dos nas composições compostos ativos suplementares.

Uma composição farmacêutica da invenção é formulada para ser compatível com sua via de administração escolhida. Exemplos de vias de administração incluem a administração parenteral, por exemplo, intravenosa, intradérmica, subcutânea, oral (por exemplo, inalação), transdérmica (tópi- ca), transmucosa e retal. Soluções ou suspensões usadas para aplicação parenteral, intradérmica ou subcutânea podem incluir os seguintes compo- nentes: um diluente estéril como, por exemplo, água para injeção, solução salina, óleos fixos, polietileno glicóis, glicerina, propileno glicol ou outros sol- ventes sintéticos; agentes antibacterianos como, por exemplo, álcool benzíli- co ou metil parabenos; antioxidantes como, por exemplo, ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes como, por exemplo, ácido etilenodia- minatetraacético; tampões como, por exemplo, acetatos, citratos ou fosfatos, e agentes para o ajuste da tonicídade como, por exemplo, cloreto de sódio ou dextrose. O pH pode ser ajustado com ácidos ou bases, por exemplo, ácido clorídrico ou hidróxido de sódio. A preparação parenteral pode ser em- balada em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de doses múltiplas feitos de vidro ou plástico.

As composições farmacêuticas adequadas ao uso injetável in- cluem soluções aquosas estéreis (quando hidrossolúveis) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Para administração intravenosa, veículos adequados in- cluem soro fisiológico, água bacteriostática, Cremofor ELTM (BASF, Parsip- pany, NJ) ou solução salina tamponada com fosfato (PBS). Em todos os ca- sos, a composição deve ser estéril e deve ser suficientemente fluida para permitir sua introdução em seringas. Ela deve ser estável sob as condições de fabricação e armazenamento, e deve ser preservada contra a ação con- taminante de microorganismos como, por exemplo, bactérias e fungos. O veículo pode ser um solvente ou um meio de dispersão contendo, por exem- plo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, e polietileno glicol líquido, e semelhantes), e misturas adequadas destes. A fluidez ade- quada pode ser mantida, por exemplo, pela utilização de um revestimento como, por exemplo, lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula ne- cessário, no caso de dispersões, e pelo uso de tensoativos. A prevenção da ação de microorganismos pode ser obtida por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, e semelhantes. Em muitos casos, será preferível incluir na com- posição agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, polialcoóis como, por exemplo, manitol, sorbitol, cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser criada pela inclusão na composição de um agente que retarde a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.

Soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas por incorpo- ração do composto ativo (por exemplo, um composto de acordo com uma modalidade da invenção), na quantidade necessária, em um solvente apro- priado, com um ingrediente ou com uma combinação de ingredientes enu- merados acima, como necessário, seguida por esterilização por filtração. Geralmente, dispersões são preparadas por incorporação do composto ativo em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários entre aqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferidos são secagem a vácuo e liofilização, que gera um pó do ingrediente ativo, mais quaisquer ingrediente adicionais desejados a partir de uma solução previamente esterilizada por filtração destes.

Composições orais geralmente incluem um diluente inerte ou um veículo comestível. Elas podem ser embaladas em cápsulas de gelatina ou compactadas em comprimidos. Para administração terapêutica oral, o com- posto ativo pode ser incorporado com excipientes, e usado na forma de comprimidos, pastilhas ou cápsulas. Composições orais também podem ser preparadas com o uso de um veículo líquido para uso como um colutório, em que o composto no veículo líquido é aplicado oralmente e bochechado e ex- pectorado ou deglutido.

Agentes de ligação e/ou materiais adjuvantes farmaceuticamen- te compatíveis podem ser incluídos como parte da composição. Os compri- midos, pílulas, cápsulas, pastilhas e semelhantes podem conter qualquer um dos ingredientes seguintes, ou compostos de natureza similar: um aglutinan- te, por exemplo, celulose microcristalina, goma tragacanto ou gelatina; um excipiente, por exemplo, amido ou lactose, um agente desintegrante como, por exemplo, ácido algínico, Primogel ou amido de milho; um lubrificante como, por exemplo, estearato de magnésio ou Sterotes; um glidante como, por exemplo, dióxido de silício coloidal; um agente adoçante, por exemplo, sacarose ou sacarina; ou um agente flavorizante como, por exemplo, menta, salicilato de metila ou flavorizante de laranja.

Para administração por inalação, os compostos são liberados na forma de um spray em aerossol por um recipiente pressurizado ou por um dispensador que contém um propelente adequado, por exemplo, um gás como dióxido de carbono, ou um nebulizador.

A administração sistêmica também pode ocorrer por meios transmucosos ou transdérmicos. Para administração transmucosa ou trans- dérmica, são usados na formulação penetrantes adequados à barreira a ser permeada. Esses penetrantes são geralmente conhecidos na técnica, e in- cluem, por exemplo, para administração transmucosa, detergentes, sais bili- ares e derivados do ácido fusídico. A administração transmucosa pode ser obtida por meio do uso de sprays nasais ou supositórios. Para administração transdérmica, os compostos ativos são formulados em pomadas, unguentos, géis ou cremes, como geralmente conhecido na técnica.

Os compostos também podem ser preparados na forma de su- positórios (por exemplo, com bases convencionais para supositórios como, por exemplo, manteiga de cacau e outros glicerídeos), ou enemas de reten- ção para liberação retal.

Em uma modalidade, os compostos ativos são preparados com veículos que protegerão o composto contra a eliminação rápida do corpo como, por exemplo, uma formulação de liberação controlada, incluindo im- plantes, e sistemas de liberação microencapsulada. Polímeros biodegradá- veis, biocompatíveis, podem ser usados, por exemplo, etileno vinil acetato, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido polilático. Métodos para a preparação dessas formulações serão evidentes para aque- les versados na técnica. Os materiais também podem ser obtidos comerci- almente de Alza Corporation e Nova Pharmaceuticals, Inc. Suspensões Ii- possômicas (incluindo Iipossomos dirigidos às células infectadas com anti- corpos monoclonais para antígenos virais) também podem ser usadas como veículos farmaceuticamente aceitáveis. Esses podem ser preparados de a- cordo com métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.

É especialmente vantajoso formular composições orais ou pa- renterais em forma de dosagem unitária para facilitar a administração e uni- formizar a dosagem. As formas de dosagem unitária aqui usadas referem-se às unidades fisicamente distintas apropriadas às dosagens unitárias para o indivíduo a ser tratado; cada unidade contendo uma quantidade predetermi- nada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico deseja- do, em associação com o veículo farmacêutico necessário. As especifica- ções das formas de dosagem unitária da invenção são ditadas e dependem diretamente das características únicas do composto ativo, e do efeito tera- pêutico específico a ser obtido, e das limitações inerentes na técnica de for- mulação de um composto ativo para o tratamento de indivíduos.

As composições farmacêuticas podem ser incluídas em um reci- piente, uma embalagem ou um dispensador, juntamente com instruções pa- ra administração.

Um composto de acordo com uma modalidade da invenção pode

ser fornecido como um sal, preferivelmente como um sal farmaceuticamente aceitável de compostos de fórmula I. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis desses compostos incluem aqueles derivados de ácidos orgâni- cos como, por exemplo, ácido acético, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido lático, ácido oxálico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido ma- léico, ácido benzóico, ácido salicílico, ácido fenilacético, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido benzenossulfônico e ácido p- toluenossulfônico, ácidos minerais como, por exemplo, ácido clorídrico e sul- fúrico, e semelhantes, gerando metanossulfonato, benzenossulfonato, p- toluenossulfonato, cloridrato e sulfato, e semelhantes, respectivamente, ou aqueles derivados de bases como, por exemplo, bases orgânicas e inorgâni- cas. Exemplos de bases inorgânicas adequadas à formação de sais de compostos desta invenção incluem os hidróxidos, carbonatos e bicarbonatos de amônia, lítio, sódio, cálcio, potássio, alumínio, ferro, magnésio, zinco, e semelhantes. Os sais também podem ser formados com bases orgânicas adequadas. Essas bases adequadas à formação de sais de adição básica farmaceuticamente aceitáveis com compostos da presente invenção incluem bases orgânicas que sejam atóxicas e suficientemente fortes para formar sais. Essas bases orgânicas já são bem conhecidas na técnica, e podem incluir aminoácidos como, por exemplo, arginina e lisina, mono-, di-, ou trii- droxialquilaminas como, por exemplo, mono-, di- e trietanolamina, colina, mono-, di- e trialquilaminas, por exemplo, metilamina, dimetilamina e trimeti- lamina, guanidina; N-metilglicosamina; N-metilpiperazina; morfolina; etileno- diamina; N-benzilfenotilamina; tris(hidroximetil) aminometano, e semelhan- tes.

Os sais de compostos de acordo com uma modalidade da in- venção podem ser preparados de forma convencional com o uso de méto- dos bem-conhecidos na técnica. Sais de adição ácida dos referidos compos- tos básicos podem ser preparados por dissolução dos compostos de base livre de acordo com o primeiro ou segundo aspectos da invenção, em solu- ção aquosa ou alcoólica aquosa, ou outros solventes adequados que contêm o ácido necessário. Quando um composto da invenção contiver uma função acidífera, um sal de base do referido composto poderá ser preparado por reação do referido composto com uma base adequada. O sal de ácido ou base pode se separar diretamente ou pode ser obtido concentrando-se a solução, por exemplo, por evaporação. Os compostos desta invenção tam- bém podem existir em formas solvatadas ou hidratadas.

Será observado por aqueles versados na técnica que a descri- ção apresentada anteriormente possui natureza exemplar e explanatória, e visa ilustrar a invenção e suas modalidades preferidas. Por meio de experi- mentação de rotina, aqueles versados na técnica irão reconhecer modifica- ções e variações evidentes que podem ser feitas, sem se afastar do espírito da invenção. Dessa forma, a invenção visa ser definida não pela descrição acima, mas pelas reivindicações a seguir e seus equivalentes.

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A partir da descrição anterior, várias modificações e mudanças nas composições e nos métodos desta invenção ocorrerão àqueles versados na técnica. Todas essas modificações que se incluem no escopo das reivin- dicações em anexo visam ser nelas incluídas.

Deve-se entender que vários fatores, por exemplo, a capacidade diferencial de penetração nas células dos vários compostos, podem contribu- ir para as discrepâncias entre a atividade dos compostos nos ensaios bio- químicos in vitro e nos ensaios celulares.

Todas as publicações, incluindo, sem limitação, as patentes e pedidos de patente, citadas nesta especificação, são aqui incorporadas por referência, como se cada publicação individual fosse específica e individu- almente indicada para ser aqui incorporada por referência, como se apresen- tada em sua totalidade.

Os nomes químicos dos compostos da invenção dados neste pedido são gerados com o uso da ferramenta "MDL's ISIS Draw Autonom Software", e não são verificados. De preferência, no caso de inconsistência, a estrutura apresentada predomina. Listagem de Seqüência

<110> Galapagos N.V.

Andrews, Martin J I Edwards, Paul Chambers, Mark S Schmidt, Wolfgana Clase, Juha A Bar, Gregory Hirst, Kim L Angus, MacLeod

<120> COMPOSTOS DE TRIAZOLOPIRAZINA ÚTEIS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS DEGENERATIVAS E INFLAMATÓRIAS

<130> GAL-Ü33-WO-PCT

<150> US 60/803,552 <151> 2006-05-31

<150> US 60/ <151> 2007-05-25

<150> US 60/ <151> 2007-05-29

<160> 6

<170> PatentIn versão 3.4

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> artificial

<220>

<223> seauência alvo <400> 1

gctgaccctg aagttcatc 19

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> secruência alvo <400> 2 ggttacctaa gggtgtggc 19

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> secruência alvo

<400> 3

ctctgagtgc agtgaaatc 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> seauência alvo

<400> 4

acaagagcaa gatgtggac 19

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> secruência alvo

<400> 5

cggcacttta cagagaagc 19

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> secruência alvo

<400> 6

atgatgtgtg ccacacacc 19

Claims

1. Composto de acordo com a fórmula III: <formula>formula see original document page 230</formula>(III) em que, R1 é H, ou alquila substituída ou não-substituída; e cada um de R8 e R9 é selecionado independentemente de cicloalquila substituída ou não- substituída, heterocicloalquila substituída ou não-substituída, arila substituí- da ou não-substituída, heteroarilaa substituída ou não-substituída; ou um sal, solvato ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste; e estereoisôme- ros, variantes isotópicas e tautômeros destes.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R8 é se- lecionado de ciclopentila substituída ou não-substituída, ciclohexila, fenila substituída ou não-substituído, piridila substituída ou não-substituída, pirimi- dina substituída ou não-substituída, e pirazina substituída ou não- substituída, pirrol substituído ou não-substituído, pirazol substituído ou não- substituído, e imidazol substituído ou não-substituído.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R8 é se- lecionado de fenila substituída, piridila substituída e pirimidina substituída; e a substituição é: -L-R8d; em que L é selecionado de ligação, alquileno, heteroalquileno, -O-, - N(R8e)-, -CO-, -CO2-, -S0-, -SO2-, -CON(R8e)-, -SO2N(R8e)-, -N(R8e)CO-, - N(R8e)SO2-, -N(R8e)CO N(R8e)-, -N(R8e)SO2 N(R8e)-; e R8d é selecionado de alquila substituída ou não-substituída, ci- cloalquila substituída ou não-substituída, arila substituída ou não-substituída, heterocicloalquila substituída ou não-substituída, heteroarilaa substituída ou não-substituída, amino substituído ou não-substituído, aralquil substituído ou não-substituído, heteroarilaalquila substituída ou não-substituída, e aminoal- quila substituída ou não-substituída; e R8e é selecionado de H, alquila substituída ou não-substituída, e cicloalquila substituída ou não-substituída.

4. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R8 é: <formula>formula see original document page 231</formula> em que L e R8d são como na reivindicação 3; o subscrito η é selecionado de 1-4; e cada R8a é selecionado independentemente de hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída, alcóxi, ciano e halo.

5. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que L é uma ligação, -O-, -CO-, -CON(R8e)- ou -N(R8e)CO-; R8d é selecionado de alquila substituída ou não-substituída, ci- cloalquila substituída ou não-substituída, arila substituída ou não-substituída, heterocicloalquila substituída ou não-substituída, heteroarilaa substituída ou não-substituída, aralquila substituída ou não-substituída, heteroarilaalquila substituída ou não-substituída, e aminoalquila substituída ou não-substituída; e R8e é selecionado de H1 alquila substituída ou não-substituída.

6. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que L é uma 20 ligação, -O-, -CO-, -CON(R8e)- ou -N(R8e)CO-; e R8d é selecionado de H, alquilaminoetila, dialquilaminoetila, ci- cloalquila, heterocicloalquila, arilalquila e heteroarilaalquila.

7. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que L é uma ligação, -O-, -CO-, -CON(R8e)- ou -N(R8e)CO-; e R8d é selecionado de H, metilaminoetila, etilaminoetila, dimetila- minoetila, dietilaminoetila, pirrolidinila substituída ou não-substituída, benzila e piridilmetila.

8. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que L é uma ligação, -CO-, -0(CH2)mr, -CON(H)(CH2)mI- ou - NHCO-; o subscrito m1 é selecionado de 1-4; e R8d é: <formula>formula see original document page 232</formula> e em que o anel P é heterocicloalquila substituída ou não-substituída.

9. Composto de acordo com a fórmula IVa, IVb, IVc ou IVd: <formula>formula see original document page 232</formula> e em que Leo anel P são como na reivindicação 8; o subscrito η é selecio- 5 nado de 1-4; cada R8a é selecionado independentemente de hidrogênio, al- quila substituída ou não-substituída, alcóxi, ciano e halo; e R9 é selecionado independentemente de arila substituída ou não-substituída e heteroarilaa; ou um sal, solvato ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste; e estere- oisômeros, variantes isotópicas e tautômeros destes.

10. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que L é uma ligação.

11. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que L é - <formula>formula see original document page 232</formula>

12. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que L é - NHCO-ou-CONH-.

13. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que L é - CON(H)-CH2-CH2- ou -N(H)-CO-CH2-CH2-.

14. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que L é - OCH2-CH2- ou -NHCH2-CH2-.

15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 9-14, em que o anel P é piperidina, morfolina ou piperazina substituída ou não-substituída.

16. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que cada R8a é H.

17. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que o subs- crito η é 1 e R8a é Me1 Et, Pr, iso-Pr, Cl, F, CN, OMe ou CF3.

18. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula Va, Vb, Vc, Vd, Ve ou Vf: <formula>formula see original document page 233</formula> e em que R9 é como na reivindicação 1 e R8b é hidrogênio, alquila substituí- da ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída.

19. Composto de acordo com a reivindicação 18, em que R8b é H.

20. Composto de acordo com a reivindicação 18, em que R8b é alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não- substituída.

21. Composto de acordo com a reivindicação 18, em que R8b é Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CH2CONH2, ciclopropila ou ciclopropilmetila.

22. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R9 é 15 selecionado de arila substituída ou não-substituída.

23. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R9 é selecionado de fenila substituída ou não-substituído.

24. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R9 é selecionado de heteroarilaa substituída ou não-substituída.

25. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R9 é selecionado de fenila substituída ou não-substituído, piridil, indolil, isoindolil, pirrolil, furanil, tienil, pirazolil, oxazolila e tiazolil.

26. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, em que R9 é <formula>formula see original document page 234</formula> e cada um de A1, A2 e A3 é selecionado independentemente de S, O, N, NR9a e CR9a; cada um de R9a é independentemente H ou alquila substituída ou não-substituída; e R9b é CONH2, CONHMe ou CN.

27. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações1-25, em que R9 é <formula>formula see original document page 234</formula>

28. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, em que R9 é

29. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, em que R9 é e em que o subscrito m é selecionado de 1-4, e cada R9d é independente- mente H, alquila substituída ou não-substituída ou halo.

30. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, em que R9 é <formula>formula see original document page 235</formula>e em que o subscrito m é selecionado de 1-4 e cada R9d é independente- mente H, alquila substituída ou não-substituída ou halo.

31. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, em que R9 é e em que o subscrito m é selecionado de 1-3, e cada R9d é independente- mente H, alquila substituída ou não-substituída ou halo.

32. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações29-31, em que cada R9d é H.

33. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações29-31, em que m é 1 ou 2 e cada R9d é Me, Cl ou F.

34. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula Via, Vlb, Vlc, Vld, Vle ou Vlf: (rwL <formula>formula see original document page 236</formula> e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída.

35. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula Vila, Vllb, Vllc, Vllc, Vlldl Vlle ou Vllf: <formula>formula see original document page 236</formula> <formula>formula see original document page 237</formula> e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída.

36. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula Vllla, Vlllb, Vlllc, Vllld1 Vllle ou Vlllf: <formula>formula see original document page 237</formula>e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída.

37. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula IXa, IXb, IXc, IXd, IXe ou IXf: <formula>formula see original document page 238</formula> e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída.

38. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula Xa, Xb, Xe, Xd, Xe ou Xf: <formula>formula see original document page 238</formula> <formula>formula see original document page 239</formula>e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída.

39. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula Xla, Xlb1 Xlc1 Xld, Xle ou Xlf: <formula>formula see original document page 239</formula>e R8b é hidrogênio, alquila substituída ou não-substituída ou cicloalquila substituída ou não-substituída; e R9e é hidrogênio, Me ou CN.

40. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 34-39, em que R8b é H.

41. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações .34-39, em que R8b é cicloalquila.

42. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações34-39, em que R8b é ciclopropila.

43. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 34-39, em que R8b é alquila substituída ou não-substituída.

44. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações34-39, em que R8b é Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF3, CH2CF3, CH2CONH2 ou ciclopropilmetila.

45. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula Xlla, Xllb, Xllc ou Xlld: <formula>formula see original document page 240</formula>

46. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula Xllla, Xlllb, Xlllc ou Xllld: <formula>formula see original document page 240</formula>

47. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula XIVa, XIVb, XIVc ou XIVd: <formula>formula see original document page 241</formula>

48. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto está de acordo com a fórmula XVa, XVb ou XIVc: <formula>formula see original document page 241</formula> e R8b é H, Me, i-Pr, t-Bu, CH2CONH2, ciclopropilmetila ou CH2CF3.

49. Composto de acordo com a reivindicação 48, em que L é uma ligação e o anel P é Me I <formula>formula see original document page 241</formula> Me

50. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que o com- posto é selecionado de: (4-Morfolin-4-il-fenila)-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,510 a]pirazin-8-il]-amina; [4-(4-Metil-piperazin-1 -il)-fenila]-[5-(1 H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;4-{8-[4-(4-Metil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il}-benzamida;4-{8-[4-(4-Metil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il}-1H-piridin-2-ona;4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]- benzamida; Amida de ácido 4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico;2-Flúor-4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida; 3-Flúor-4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida; Amida de ácido 5-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico;3-Flúor-4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pira- zin-5-il]-benzamida;2-Flúor-4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pira- zin-5-il]-benzamida; [5-(5-Metil-1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4- morfolin-4-il-fenila)-amina; [5-(5-Metil-1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4- morfolin-4-il-fenila)-amina; Amida de ácido 5-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico;2,6-Diflúor-4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il]-benzamida; Amida de ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico; [4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenila]-[5-(5-metil-1H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; (3-Flúor-4-morfolin-4-il-fenila)-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; (3-Cloro-4-morfolin-4-il-fenila)-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; [4-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-fenila]-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; Amida de ácido 4-{8-[4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 5-{8-[4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; (4-Morfolin-4-il-fenila)-[5-(2H-pirazola-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il]-amina; Amida de ácido 4-{8-[4-((2R,6S)-2,6-dimetil-morfolin-4-il)- fenilamino]-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; (4-Morfolin-4-il-3-trifluormetila-fenila)-[5-(1H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;2,6-Diflúor-4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida; Amida de ácido 4-[8-(4-piperazin-1-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 5-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-furan-3-carboxílico; Amida de ácido 5-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-3-carboxílico; [5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-((2S,5R)-2,4,5-trimetil-piperazin-1 -il)-fenila]-amina; Amida de ácido 4-{8-[4-((2S,5R)-2,4,5-trimetil-piperazin-1-il)- fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico;5-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; Amida de ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-5-il]-furan-2-carboxílico;6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]- .3,4-diidro-2H-isoquinolin-1-ona; 5-{8-[4-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4] triazolo [1,5 a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1-ona; {2-Morfolin-4-il-5-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanol; [4-(4-lsopropil-piperazin-1-il)-fenila]-[5-(1/-/-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-3,4-diidro-1 H-quinolin-2-ona;(4-Piperazin-1 -il-fenila)-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-il]-amina; (6-Morfolin-4-il-pirídin-3-il)-[5-(1 /-/-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-il]-amina; [6-(4-Ciciopropilmetila-piperazin-1 -il)-piridin-3-il]-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; [6-(4-lsopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-[5-(1/-/-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; [5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-{6-[4-(2,2,2- triflúor-etila)-piperazin-1-il]-piridin-3-il}-amina; [5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-{4-[4-(2,2,2- triflúor-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-amina; [4-(4-Ciclopropilmetila-piperazin-1-il)-fenila]-[5-(1/-/-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; Amida de ácido 4-[8-(6-morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico; (5-Benzo[#b!]tiofen-3-il-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4- morfolin-4-il-fenila)-amina; (5-Benzo[#b!]tiofen-3-il-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4- isopropil-piperazin-1-il)-fenila]-amina; (4-Morfolin-4-il-fenila)-(5-tiofen-3-il-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pirazin-8 il)-amina; [4-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-fenila]-(5-tiofen-3-il-[1,2,4] triazo· lo[1,5-a]pirazin-8-il)-amina; [5-(5-Etila-1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4- morfolin-4-il-fenila)-amina; 6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]- 1,1 -dioxo-1,2-diidro-1 $l%6&-benzo[#d!]isotiazol-3-ona; Amida de ácido 4-{8-[6-(4-ciclopropilmetila-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3- ilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-(8-{6-[4-(2,2,2-triflúor-etila)-piperazin-1-il]- piridin-3-ilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-(8-{4-[4-(2,2,2-triflúor-etila)-piperazin-1-il]- fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-(4-ciclopropilmetila-piperazin-1-il)- fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; [4-(4-Ciclopropila-piperazin-1-il)-fenila]-[5-(1/-/-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; [6-(4-Ciclopropila-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-[5-(1/-/-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazoio[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; Amida de ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-5-il]-tiazol-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiazol-2-carboxílico; Amida de ácido 4-(8-{4-[1-(2,2,2-triflúor-etila)-piperidin-4-il]- fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofeno-2-carboxílico; [5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-{4-[1 -(2,2,2- triflúor-etila)-piperidin-4-il]-fenila}-amina; 5-{8-[4-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pi- razin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1-ona; (5-Benzotiazol-6-i!-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4- il-fenila)-amina; (2-Flúor-4-morfolin-4-ii-fenila)-[5-(1 /-/-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; (2-Cloro-4-morfolin-4-il-fenila)-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; 1 -{5-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-5 il]-tiofen-2-il}-etanona; {4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-2H-pirazola-3-il}-metanol;6-{4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5- il]-fenila}-4,5-diidro-2/-/-piridazin-3-ona;(5-Benzo[1,2,5]oxadiazol-5-il-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4- morfolin-4-il-fenila)-amina; Metilamida de ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiazol-2-carboxílico; Metilamida de ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)- fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiazol-2-carboxílico;5-[8-(2-Flúor-4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pira- zin-5-il]-2,3-diidro-isoindol-1-ona;5-[8-(2-Cloro-4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il]-2,3-diidro-isoindol-1-ona;5-{8-[2-Cloro-4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; [5-(2-Amino-pirimidin-5-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4- morfolin-4-il-fenila)-amina;5-{8-[6-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; Amida de ácido 3-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-benzo[#b!]tiofeno-7-carboxílico; Amida de ácido 3-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-benzo[#b!]tiofeno-7-carboxílico; {4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]- piridin-2-il}-metanol; (4-{8-[4-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-5-il}-piridin-2-il)-metanol; [4-(1-lsopropil-piperidin-4-il)-fenila]-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; {5-[4-(2-Amino-tiazol-4-il)-fenila]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}- (4-morfolin-4-il-fenila)-amina; Amida de ácido 4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3- ilamino]-[1,2,4]triazoio[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-2-carboxílico; 5-[8-(6-Morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin- 5-il]-2,3-diidro-isoindol-1-ona; Amida de ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-(1-isopropil-piperidin-4-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; (4-{8-[6-(4-lsopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-piridin-2-il)-metanol; [5-(2-Fluormetil-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-(4- isopropil-piperazin-1-il)-fenila]-amina; 5-{8-[4-(1-lsopropil-piperidin-4-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1-ona; [5-(1 H-lndazol-6-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4- il-fenila)-amina; Amida de ácido 4-[8-(6-morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a]pirazin-5-il]-furan-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-5-metil-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3- ilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-5-metil-tiofeno-2-carboxílico; 4-{8-[4-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1-ona; 4-{8-[6-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; 5-[8-(2-Morfolin-4-il-pirimidin-5-ilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pira- zin-5-il]-2,3-diidro-isoindol-1-ona; 1 -{4-[5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]- fenila}-piperazin-2-ona; 5-{8-[2-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-pirimidin-5-ilamino]-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; 5-{8-[4-(4-terc-Butil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4] triazolo[1,5- a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1-ona; [4-(4-terc-Butil-piperazin-1 -il)-fenila]-[5-(1 H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; [5-(1 H-lndazol-5-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4- il-fenila)-amina; 5-{8-[4-(2-Oxo-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1-ona; [5-(1 H-lndazol-6-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-(4- isopropil-piperazin-1 -il)-fenila]-amina; [6-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-piridin-3-il]-(5-{(E)-1 -[4-metilene-2,4-diidro-pirazola-(3E)-ilidenemetil]-propenil}-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8- il)-amina; 7-Flúor-5-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; 6-{8-[4-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1-ona; (3-Metilaminometil-4-morfolin-4-il-fenila)-[5-(1/-/-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; 2-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]- 5,6-diidro-furo[2,3-c]pirrol-4-ona; 5-{8-[4-(4-lsopropil-2-oxo-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; 2-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-4,5-diidro-tieno[2,3-c]pirrol-6-ona; 5-{8-[4-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-5-il}-3,3-dimetil-2,3-diidro-isoindol-1-ona; .5-(8-Ciclohexilamino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-2,3-diidro- isoindol-1-ona; õ-ie-ÍTetrahidro-pyran^-ilaminoí-tl^.^tnazolotl.õ-alpirazin-õ-il]-2,3-diidro-isoindol-1-ona; e-[8-(4-Flúor-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3- diidro-isoindol-1 -ona.

51. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que o com- posto é selecionado de: 4-[5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N- piridin-3-ilmetil-benzamida;4-[5-(2-Oxo-1,2-diidro-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilamino]-N-piridin-3-ilmetil-benzamida;2-Metóxi-N-(6-metil-piridin-3-ilmetil)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; Amida de ácido 4-(8-{3-metóxi-4-[(6-metil-piridin-3-ilmetil)- carbamoíla]-fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofeno-2-carboxílico; N-Benzila-2-metóxi-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; N-Benzila-3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilaminoj-benzamida; 3-[5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N- piridin-2-ilmetil-benzamida; /V,A/-Dietil-3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilamino]-benzamida; {3-[5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]- fenila}-pirroüdin-1-il-metanona; (4-lsopropil-piperazin-1 -il)-{3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; 3-[5-(1 /-/-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]- benzamida; N-Etila-3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilamino]-benzamida; N-Ciclohexilmetil-3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pira- zin-8-ilamino]-benzamida; N-(4-Hidróxi-benzila)-3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pirazin-8-ilamino]-benzamida; Amida de ácido 4-[8-(4-benzilcarbamoil-3-metóxi-fenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-[8-(6-benzoilamino-piridin-3-ilamino)-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico; /V-Benzila-N-metil-3-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pi- razin-8-ilamino]-benzamida; N-{ 5-[5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]- piridin-2-il}-benzamida; Metilamida de ácido l^-tS-ÍIH-pirazola^-ilJ-fl^^^riazolotl.õ- a]pirazin-8-ilamino]-benzoil}-piperidina-4-carboxílico;4-[5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N- (2-piridin-4-il-etila)-benzamida; (4-Etila-piperazin-1 -il)-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; N-(1 -Etila-pirrolidin-2-ilmetil)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; (2,5-Diidro-pirrol-1 -il)-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; [4-(2-Etóxi-etila)-piperazin-1 -il]-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; A/-Ciciopropilmetila-4-[5-( 1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pirazin-8-ilamino]-benzamida; A/-Metil-A/-(1 -{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil}-pirrolidin-3-il)-acetamida; [4-(4-Flúor-benzila)-piperazin-1 -il]-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; (4-Fenila-piperazin-1 -il)-{4-[5-(1 /-/-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; ((S)-2-Metoximetil-pirrolidin-1 -il)-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; N-((R)-1 -Benzila-pirrolidin-3-il)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; {4-[5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]- fenila}-(4-piridin-2-il-piperazin-1-il)-metanona; Λ/-(1 -Metoximetil-propil)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; [4-(2-Metóxi-etila)-piperazin-1 -il]-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; N-[2-(4-Hidróxi-fenila)-etila]-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; (4-sec-Butil-piperazin-1-il)-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; /V-[4-(4-Metil-piperazin-1 -il)-fenila]-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; Éster etílico de ácido (benzila-{4-[5-(1H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil}-amino)-acético; A/-lsopropil-2-(4-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pira- zin-8-ilamino]-benzoil}-piperazin-1-il)-acetamida; A/-(2-Metóxi-etila)-/V-metil-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; /V-Etila-/V-(2-metóxi-etila)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; 4-[5-(1 H-Pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-/V- (tetrahidro-furan-2-ilmetil)-benzamida; (3,6-Diidro-2H-piridin-1 -il)-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenila}-metanona; A/-(2-Metilsulfanil-etila)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; /V-(2,2-Dimetil-[1,3]dioxolan-4-ilmetil)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; N-(2-Diisopropilamino-etila)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; N-(( S)-1 -Etila-pirrolidin-2-ilmetil)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; /V-lsobutH-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8- ilamino]-benzamida; [1,4']Bipiperidinil-1 '-il-{4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-8-iiamino]-fenila}-metanona; N-(2-Hidróxi-etila)-4-[5-(1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pi- razin-8-ilamino]-benzamida; e Amida de ácido 4-[8-(6-fenilacetilamino-piridin-3-ilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a] pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico.

52. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto é selecionado de: Amida de ácido 4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 5-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; [5-(5-Metil-1 H-pirazola-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4- morfolin-4-il-fenila)-amina; Amida de ácido 4-[8-(4-morfolin-4-ii-fenilamino)-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-(2-morfolin-4-ii-etóxi)-fenilamino]-[1,2,4] triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-((2R,6S)-2,6-dimetil-morfolin-4-il)- fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-[8-(4-piperazin-1-il-fenilamino)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-feniiamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-((2S,5R)-2,4,5-trimetil-piperazin-1-il)- fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; .5-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]- 2,3-diidro-isoindol-1 -ona; Amida de ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo [1,5-a]pirazin-5-il]-furan-2-carboxílico; 5-{8-[4-(4-lsopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo [1,5- a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1-ona; Amida de ácido 4-[8-(6-morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4] tria- zolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[6-(4-ciclopropilmetila-piperazin-1-il)-piridin- 3-ilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3- ilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-(8-{6-[4-(2,2,2-triflúor-etila)-piperazin-1-il]- piridin-3-ilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-(8-{4-[4-(2,2,2-triflúor-etila)-piperazin-1-il]- fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofeno-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-(4-ciclopropilmetila-piperazin-1-il)- fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxíiico; 5-{8-[4-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pi- razin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; 5-{8-[6-(4-lsopropil-piperazin-1 -il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4] triazo- lo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; 5-[8-(6-Morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pira- zin-5-il]-2,3-diidro-isoindol-1-ona; Amida de ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-2-carboxílico; Amida de ácido 4-{8-[4-(1-isopropil-piperidin-4-il)-fenilamino]- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofeno-2-carboxílico; 5-{8-[4-(1 -lsopropil-piperidin-4-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5- a]pirazin-5-il}-2,3-diidro-isoindol-1 -ona; 5-[8-(2-Morfolin-4-il-pirimidin-5-ilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a] pira- zin-5-il]-2,3-diidro-isoindol-1-ona; [4-(4-terc-Butil-piperazin-1-il)-fenila]-[5-(1H-pirazola-4-il)- [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina; e 2-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-4,5-diidro-tieno[2,3-c]pirrol-6-ona.

53. Composição farmacêutica que compreende um veículo far- maceuticamente aceitável e uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 52.

54. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 53, em que o veículo é um veículo parenteral.

55. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 53, em que o veículo é um veículo oral.

56. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 53, em que o veículo é um veículo tópico.

57. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 52 na fabricação de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia de uma condição caracterizada por degradação de ECM.

58. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 52 na fabricação de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia de uma condição selecionada de doenças que envolvem in- flamação.

59. Uso de um composto como definido na reivindicação 58, em que a referida doença é artrite reumatóide.

60. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 52 na fabricação de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia de uma condição evitada, atenuada ou eliminada pela admi- nistração de um inibidor de Proteína Quinase 5 Ativada por Proteína Quina- se Ativada por Mitógeno.

61. Método de tratamento de uma condição caracterizada por atividade anormal da metaloproteinase da matriz, que compreende a admi- nistração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de inibição da metaloproteinase da matriz como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 52.

62. Método de tratamento de uma condição selecionada de do- enças que envolvem a degradação da matriz extracelular, que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um compos- to de inibição da metaloproteinase da matriz como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 52.

63. Método de tratamento de uma condição selecionada de do- enças que envolvem a expressão celular anormal de MMP1, que compreen- de a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um com- posto de inibição da metaloproteinase da matriz como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 52.

64. Método de tratamento ou prevenção de doenças inflamató- rias, que compreende a administração a um indivíduo que dela necessite de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 52.

65. Método de tratamento ou prevenção de artrite reumatóide, que compreende a administração a um indivíduo que dela necessite de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 52.