BR112020004364A2 - método para preparar um extrato botânico de ácido abscísico - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a um método para preparar um extrato botânico de ácido abscísico. O extrato de ácido abscísico é obtido a partir de materiais vegetais que contêm ácido abscísico com bons rendimentos. A presente invenção também se refere ao extrato que pode ser obtido de acordo com o dito método, a um extrato botânico purificado de ácido abscísico, a uma composição que contém o dito extrato, à sua utilização em uma composição nutricional, farmacêutica ou cosmética, e ao dito extrato para uso como um medicamento.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTO- DO PARA PREPARAR UM EXTRATO BOTÂNICO DE ÁCIDO ABS- CÍSICO".

[0001] A presente invenção refere-se a um método para a prepa- ração de um extrato de ácido abscísico a partir de materiais vegetais, que pode ser utilizado em composições farmacêuticas, nutricionais e cosméticas.

[0002] O ácido abscísico (em seguida ABA) é um hormônio vege- tal que foi descoberto no início da década de 60. O dito ácido regula importantes funções do mesmo, tal como a resposta à escassez de água e nutrientes, radiação ultravioleta, dormência e germinação de sementes, e crescimento das raízes.

[0003] O ABA natural consiste de uma mistura de dois isômeros, que têm as seguintes estruturas: Me Me Me Me, Me Me “or “OH O Me o Me co (+)-2-cis-4-trans-ABA (+)-2-trans-4-trans-ABA

[0004] O ABA é sintetizado em folhas, caules, raízes e frutos ver- des. No entanto, não foi até a descoberta da sua biossíntese em célu- las animais que se despertou interesse em elucidar possíveis paralelos entre seu papel em sistemas vegetais e animais.

[0005] Assim, de acordo com o artigo de Bassaganya-Riera e ou- tros, Abscisic acid regulates inflammation via ligand-binding domain- independent activation of peroxisome proliferator-activated receptor, J. Biol. Chem., 2011, 286 (4), 2504-2516, o ABA recebeu atenção como um resultado de suas aplicações médicas. O dito artigo descreve co- mo a administração oral de ABA demonstrou ser profilática e terapeu- ticamente eficaz em modelos murinos de diabetes, queixas inflamató- rias intestinais e aterosclerose.

[0006] O artigo de Bassaganya-Riera e outros, Mechanisms of ac- tion and medicinal applications of abscisic acid, Curr. Med. Chem., 2010, 17 (5), 467 a 478, descreve como o uso de ABA foi reivindicado na terapia de câncer. O dito uso também é descrito no pedido de Pa- tente Chinesa CN-A-1748674, e na Patente US-2006/0292215.

[0007] O pedido de Patente internacional WO-A-2007/092556 des- creve o uso de ABA no tratamento de um indivíduo que tem uma do- ença ou distúrbio ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio, tal como resistência à insulina, hiperglicemia, into- lerância à glicose, altas concentrações de glicose em jejum, diabetes tipo 2, pré-diabetes ou inflamação, entre outros.

[0008] O pedido de patente internacional WO-A-2011/150160 des- creve o uso de ABA para tratar ou prevenir a inflamação produzida pe- la exposição a lipopolissacarídeos ou inflamação respiratória.

[0009] O pedido de patente internacional WO-A-2016/009399 des- creve o uso de ABA para o tratamento preventivo, de controle ou tera- pêutico da hiperglicemia sem aumento substancial da insulinemia.

[0010] A descoberta do ABA e a possível utilização do mesmo na medicina favoreceu o desenvolvimento de várias rotas de síntese, co- mo descrito, por exemplo, por Constantino e outros, A novel synthesis of (+-)-abscisic acid, J. Org. Chem., 1989, 54(3), 681 a 683, ou por Smith e outros, Concise enantioselective synthesis of abscisic acid and a new analogue, Org. Biomol. Chem., 2006, 4 (22), 4186 a 4192.

[0011] Na técnica anterior, também foram propostos métodos in- dustriais para obter ABA por fermentação a partir de micro-organis- mos, como os descritos, por exemplo, nos pedidos de patente chinesa CN-1749401, CN-A-1944385, CN-A-101041837 ou CN-A -105541603, entre outros. Os ditos métodos têm desvantagens, tais como, por exemplo, o uso de grandes instalações devido aos volumes utilizados na fermentação, a sensibilidade dos micro-organismos à contaminação ou inativação. Os produtos assim obtidos são praticamente equivalen- tes aos produtos obtidos sinteticamente, exceto que se trata de um produto obtido por extração de material vegetal.

[0012] O interesse em ABA também exigiu o desenvolvimento de métodos de análise para sua quantificação, seja em meios de fermen- tação ou em amostras de material vegetal.

[0013] Assim, por exemplo, o pedido de patente chinesa CN- 103529156 descreve um método para extrair e determinar ABA em morangos, compreendendo a extração a partir da polpa de morango moída congelada usando uma mistura de metanol, etil acetato e ácido fórmico em uma proporção de 50:50:1, filtração, evaporação da amos- tra e análise UHPLC.

[0014] No artigo de Loveys e outros, Improved extraction of absci- sic acid from plant tissue, Aus. J. Plant Physiol., 1988, 15, 421 a 427, é descrito um método para determinar ABA em pequenas amostras de tecido vegetal com um peso entre 0,7 e 1,0 g. O dito método utiliza metanol, água fria ou água morna como um solvente para extrair ABA a partir das folhas de plantas tal como árvores de damasco, tremoços, abacate, girassóis e videiras. O mesmo artigo também descreve como principalmente o metanol foi usado no passado como um solvente pa- ra produzir estimativas quantitativas de ABA nos ditos tecidos, embora também tenham sido sugeridas alternativas, tal como o uso de uma combinação de clorofórmio e metanol; etanol; etil éter; e uma combi- nação de metanol, etil acetato e ácido acético.

[0015] Outros artigos sobre métodos analíticos para determinar ABA em amostras de plantas que incluem um método de extração em escala de laboratório são, por exemplo, de Cai e outros, chromatogra- bphy-mass spectrometry, J. Chromat. B: Anal. Technol. Biomed. Life Sci., 2015, 1004, 23 a 29; Cai e outros, Profiling of phytohormones in rice under elevated cadmium concentration, J. Chromat. A, 2015,

1406, 78 a 86; ou Zhang e outros, Analysis of phytohormones in ver- micompost using a novel combinative sample preparation strategy of ultrasound-assisted extraction and solid-phase extraction coupled with liquid chromatography-tandem mass spectrometry levels by magnetic solid-phase extraction coupled with liquid chromatography tandem mass spectrometry, Talanta, 2015, 139, 189 a 197.

[0016] O pedido de patente internacional mencionado acima WO- A-2016/009399 descreve um método para extrair ABA em quantidades relativamente pequenas de matrizes de plantas (350 g) que passaram anteriormente por um processo de secagem, o que implica na extração usando dióxido de carbono em condições supercríticas, seguida por extração usando água. Também é descrita a extração usando água a partir de matrizes de plantas secas, que também inclui o ABA e o éster de glicose (ABB-GE). Como descrito por Lee e outros, Activation of Glucosidase via Stress Induced Polymerization Rapidly Increases Acti- ve Pools of Abscisic Acid, Cell, 2006, 126, 1109 a 1120, este é um conjugado de ABA inativo que pode ser transformado em ABA por hi- drólise alcalina, por exemplo. O dito pedido de patente descreve o teor de ABA em frutas e vegetais que são comuns na dieta ocidental. As- sim, 2812,3 pmol / g é encontrado nos figos, 2583,4 pmol / g em da- mascos, 1444,2 pmol / g em cranberries / mirtilos, 835,4 pmol / g em bananas, 119,2 pmol / g em batatas, 117,4 pmol / g em leite de soja, 90,2 pmol / g em maçãs (variedade Smith) e 52 pmol / g em azeitonas.

[0017] Portanto, a preparação industrial de extratos de ácido abs- císico mostrou-se difícil na prática devido ao baixo teor do mesmo em materiais vegetais, o que cria dificuldades para realizar a extração econômica e comercializar os produtos em condições economicamen- te aceitáveis. Portanto, não é surpreendente que não tenham sido descritos métodos para extrair ABA a partir de materiais vegetais que sejam adequados para obter extratos ricos em ABA em escala indus-

trial e sejam adequados para incorporação em composições farmacêu- ticas, nutricionais ou cosméticas.

[0018] Por conseguinte, ainda é necessário um método para extra- ir ácido abscísico a partir de materiais vegetais que forneça bons ren- dimentos e seja facilmente aplicado em escala industrial.

[0019] A presente invenção refere-se a um método para preparar um extrato botânico de ácido abscísico. Em particular, um aspecto da presente invenção refere-se a um método econômico em larga escala para a preparação de um extrato botânico de ácido abscísico.

[0020] A invenção também se refere ao extrato que pode ser obti- do usando o dito método.

[0021] A invenção também se refere a um extrato botânico purifi- cado de ácido abscísico.

[0022] A invenção também se refere a uma composição que com- preende o dito extrato e um ingrediente adicional.

[0023] A invenção também se refere ao uso do dito extrato em uma composição nutricional, farmacêutica ou cosmética.

[0024] A invenção refere-se ao dito extrato para uso como medi- camento.

[0025] A presente invenção refere-se a um método para preparar um extrato botânico de ácido abscísico a partir de materiais vegetais, que compreende: a) extrair um material vegetal que contém ácido abscísico usando um solvente aquoso, e separar o material vegetal sólido da fração líquida, b) concentrar a fração líquida, c) purificar a fração líquida obtida na etapa b) por meio de separação cromatográfica em uma coluna de adsorção usando um solvente orgânico miscível em água como um eluente, ou extração lí- quido - líquido usando um solvente que não é miscível em água,, ou por filtração e d) evaporar a fase orgânica obtida na etapa c).

[0026] Os autores da presente invenção desenvolveram um méto- do para extrair ABA a partir de materiais vegetais que, surpreenden- temente, permite que extratos purificados com um teor de ABA entre 1000 ppm e 4000 ppm sejam obtidos. O método desenvolvido permite que um extrato vegetal tendo esses altos teores de ABA seja prepara- do em escala industrial a partir de matérias-primas nas quais o teor natural deste produto é muito pequeno, em níveis de aproximadamen- te 5 ppm, para produtos secos tendo um teor de água de aproximada- mente 10% em peso, e aproximadamente dez vezes menos ABA em produtos não secos. O método desenvolvido inclui processos de extra- ção e purificação nos quais não é realizado nenhum processo de sín- tese ou modificação química. Uma vantagem adicional do processo desenvolvido é a eficiência do mesmo, uma vez que geralmente é ob- tida uma recuperação de ABA superior a 80% em relação à quantida- de do mesmo nas substâncias vegetais iniciais. O dito método pode ser aplicado a uma ampla gama de materiais vegetais, pode ser facil- mente escalonado até uma escala industrial e é economicamente viá- vel para a preparação de extratos adequados para serem formulados como composições farmacêuticas, nutricionais ou cosméticas.

[0027] Em toda a presente descrição, a menos que especificado de outra forma, as concentrações expressas como porcentagens sem- pre se referem à porcentagem em peso (% em peso), ou seja, gramas de um ingrediente específico por 100 g de composição, e as porcenta- gens dos vários ingredientes de um composição são ajustadas de mo- do que a soma seja de 100%.

[0028] Na presente descrição, e também nas reivindicações, as formas singulares “um' e “o' incluem a referência plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Os intervalos definidos pela preposição “entre' incluem seus extremos. Material Vegetal

[0029] O material vegetal utilizado no método de acordo com a in- venção é selecionado dentre os materiais que compreendem ABA en- tre seus ingredientes, na forma livre ou na forma de um éster, tal co- mo, por exemplo, o éster com glicose. Estes materiais vegetais são selecionados preferencialmente a partir do grupo que consiste de fi- gos, cranberries / mirtilos, damascos, bananas, laranjas amargas, cas- ca de laranja, casca de tangerina, casca de limão e casca de toranja. De preferência, são utilizados figos ou laranjas amargas; mais prefe- rencialmente, são utilizados figos. No método de acordo com a inven- ção, o material vegetal pode ser utilizado como encontrado na nature- za, isto é, com o teor natural de água ou, alternativamente, o material vegetal seco. De preferência, é utilizado material vegetal seco, usual- mente com um teor de água não superior a 20% em peso, preferenci- almente não superior a 15% em peso e ainda mais preferencialmente não superior a 10% em peso.

[0030] No método de extração, o dito material vegetal pode ser usado “como está', isto é, integral, ou picado mecanicamente como um estágio antes da extração. Nesse caso, qualquer um dos métodos dis- poníveis para o versado na técnica para triturar ou cortar material ve- getal é adequado. Solvente

[0031] O solvente utilizado no método de acordo com a invenção é um solvente aquoso, isto é, ele contém água. O solvente é seleciona- do a partir de: a) água e b) uma mistura de água e pelo menos um ál- cool alifático inferior tendo 1 a 4 átomos de carbono, preferencialmente selecionado a partir de metanol, etanol, isopropanol e uma mistura dos mesmos; mais preferencialmente, o álcool alifático inferior é etanol.

[0032] Em uma modalidade preferencial, a extração é realizada usando água como o único solvente. Em outra modalidade preferenci- al, a extração é realizada usando uma mistura de etanol e água. Quando uma mistura de etanol e água é utilizada, preferencialmente uma proporção de etanol entre 50% em volume e 85% em volume, mais preferencialmente 60% em volume e 80% em volume, ainda mais preferencialmente entre 65% em volume e 75% em volume e ainda mais preferencialmente 70% em volume.

[0033] Geralmente, é usado um volume de solvente equivalente a entre 3 e 6 vezes o peso do material vegetal a ser extraído. Extração, Filtração e Concentração

[0034] O método de extração pode ser realizado de acordo com métodos que são bem conhecidos do versado na técnica. Ou seja, submetendo o material vegetal, que é integral ou cortado em peque- nos pedaços, de preferência com um tamanho inferior a 2 cm, à ação do solvente aquoso, seja água isoladamente ou uma mistura de água e pelo menos um álcool alifático inferior tendo 1 a 4 átomos de carbo- no.

[0035] Para realizar a extração, os métodos convencionais de ex- tração sólido - líquido são adequados, tal como, por exemplo, macera- ção, digestão, maceração com agitação, extração em leito fluidizado, extração por ultrassom, extração em contracorrente, percolação, re- percolação, extração a baixa pressão ou extração sólido - líquido com refluxo contínuo.

[0036] Em escala industrial, o método preferencial é a percolação com a reciclagem de solventes, também conhecida como re- percolação. No dito método, o solvente é passado através do material vegetal continuamente, até a extração estar completa. Geralmente, a percolação inclui uma etapa anterior que consiste de umedecer o ma- terial vegetal fora da percoladora. Esta operação facilita o contato do solvente com o material vegetal a ser extraído, aumenta a porosidade da parede celular e facilita a difusão das substâncias extraíveis para o exterior das células.

[0037] No método de acordo com a invenção, a extração é nor- malmente realizada a uma temperatura entre 50ºC e 75ºC, preferenci- almente entre 55ºC e 70ºC, e mais preferencialmente entre 60ºC e 65ºC. Se for usada uma mistura de água e álcoois alifáticos inferiores tendo 1 a 4 átomos de carbono, a temperatura de extração é adaptada ao álcool utilizado e ao seu ponto de ebulição.

[0038] O tempo necessário para a extração é geralmente adapta- do ao material vegetal inicial, ao método de extração, à temperatura de extração, à razão entre solvente e material vegetal, e similares.

[0039] Após a extração, a micela (mistura de solvente e compos- tos extraídos que é formada depois que o solvente entra em contato com o material vegetal e começa a extrair os compostos solúveis) é geralmente separada por filtração sólido - líquido do material vegetal por métodos que são bem estabelecidos em processos industriais.

[0040] Em escala industrial, quando um grande volume de extrato é obtido e a concentração de açúcar no dito extrato é alta, torna o dito extrato muito sensível à degradação microbiana. Para evitar isso, é preferencial pasteurizar o extrato obtido, a fim de manter sua integri- dade microbiológica durante as etapas de concentração e purificação.

[0041] A fração líquida obtida após a separação do material vege- tal - a micela - é concentrada, preferencialmente sob vácuo, por exem- plo, a uma pressão de aproximadamente 80 mbar e, geralmente, a uma temperatura não superior a 70ºC, preferencialmente não superior a 65ºC. O dito processo de concentração é geralmente continuado até que um produto seja obtido tendo um resíduo seco adequado para as etapas subsequentes de purificação, que é de preferência entre 5% em peso e 20% em peso, mais preferencialmente entre 7% em peso e 15% em peso e ainda mais preferencialmente de aproximadamente

10% em peso.

[0042] Opcionalmente, a micela pode passar por uma etapa de descoloração para eliminar a sua cor, por exemplo, por tratamento com carvão ativado ou terras de branqueamento.

[0043] No método de extração de acordo com a invenção, geral- mente são obtidos extratos que, uma vez secos sob vácuo e, geral- mente, a uma temperatura não superior a 70ºC, preferencialmente não superior a 65ºC, contêm entre 5 e 25 ppm de ABA, preferencialmente entre 10 ppm e 20 ppm, geralmente com uma (DER) (razão entre o material vegetal inicial e o extrato obtido) entre 2 e 3. Purificação

[0044] O método de acordo com a invenção compreende uma eta- pa de purificar o produto obtido após a extração usando o solvente aquoso.

[0045] Observou-se, surpreendentemente, que o uso de: i) sepa- ração cromatográfica em uma coluna de adsorção cromatográfica usando um solvente orgânico miscível em água, por exemplo, etanol, como um eluente, ou ii) extração líquido - líquido usando um solvente que não é miscíveis em água, tal como, por exemplo, etil acetato, permitiram obter extratos com um teor de ABA entre 1000 e 4000 ppm, caracterizado por uma DER entre 200:1 e 1000:1.

[0046] De preferência, o eluente é selecionado dentre um álcool alifático inferior tendo 1 a 4 átomos de carbono, cetona, dioxano, tetra- hidrofurano, acetonitrilo e misturas dos mesmos; mais preferencial- mente o solvente miscível em água é um álcool alifático inferior tendo 1 a 4 átomos de carbono, preferencialmente selecionado a partir de metanol, etanol e isopropanol; mais preferencialmente o álcool alifático inferior é etanol.

[0047] Para a separação cromatográfica, são seguidos métodos que são bem conhecidos do versado na técnica. Na dita operação, a fração líquida obtida após a extração usando o solvente aquoso é usada, filtrada para separar o material vegetal, e concentrada para ob- ter uma solução tendo um resíduo seco adequado para ser carregado em uma coluna cromatográfica preenchida com uma resina de adsor- ção, e um solvente orgânico miscível em água é usado como um elu- ente, de preferência um álcool alifático inferior tendo 1 a 4 átomos de carbono; mais preferencialmente o eluente é selecionado dentre o grupo que consiste de metanol e etanol, e ainda mais preferencialmen- te é etanol.

[0048] As resinas adequadas para cromatografia de adsorção são bem conhecidas no mercado. Dentre as resinas de adsorção adequa- das para realizar a dita purificação estão, por exemplo, resinas das séries Amberlite& (Dow), ResindionO (Mitsubishi) ou MacronetO (Puro- lite).

[0049] Na extração líquido - líquido, a fração líquida obtida após a extração usando o solvente aquoso também é usada, filtrada para se- parar o material vegetal, e concentrada para obter uma solução tendo um resíduo seco adequado, e um solvente orgânico que não é miscí- vel em água, tal como butano!l ou etil acetato, de preferência etil aceta- to, também é usado. A dita extração é geralmente realizada a uma temperatura mínima de 25ºC, sendo o limite superior a temperatura de ebulição do solvente orgânico. Preferencialmente, a extração líquido - líquido é realizada entre 40ºC e 60ºC, mais preferencialmente entre 45ºC e 55ºC, e ainda mais preferencialmente a 50ºC. Extrato

[0050] A invenção refere-se ao extrato que pode ser obtido de acordo com o método de acordo com a invenção.

[0051] O extrato purificado da invenção, na forma sólida, tem um teor de ABA entre 1000 ppm e 4000 ppm, caracterizado por uma DER (razão entre o material vegetal inicial e o extrato obtido) entre 200:1 e

1000:1. Este nível de purificação do extrato obtido e de sua DER mos- tra a grande eficiência do dito processo. Isso é demonstrado pelo fato de que o material vegetal seco usado como matéria-prima no método de acordo com a invenção tem um teor de ABA de aproximadamente 5 ppm e as purificações realizadas concentram esse valor em níveis en- tre 1000 ppm e 4000 ppm, o que, combinado com uma DER entre 200:1 e 1000:1, representa rendimentos totais de pelo menos 80% em termos de recuperação de ABA.

[0052] Por conseguinte, a invenção refere-se a um extrato botâni- co purificado de ácido abscísico que tem entre 1000 ppm e 4000 ppm de ABA.

[0053] Em uma modalidade preferencial, o extrato de acordo com a invenção, na forma sólida, é caracterizado por uma DER entre 10:1 e 50:1, preferencialmente por uma DER de 10:1 ou uma DER de 50:1.

[0054] Em outra modalidade preferencial, o extrato de acordo com a invenção, na forma líquida como uma solução aquosa, é caracteri- zado por uma DER de 3:1.

[0055] Em uma modalidade preferencial da invenção, o extrato pu- rificado de acordo com a invenção também compreende um extrato não purificado em uma proporção de 99:1 a 1:99. O extrato não purifi- cado é o extrato tendo um teor de ABA entre 5 ppm e 25 ppm, prefe- rencialmente entre 10 ppm e 20 ppm, e que é obtido após a extração do material vegetal usando o solvente aquoso, de acordo com a etapa a) do método de acordo com a invenção e, opcionalmente, após a se- cagem da fração líquida, como descrito acima. Assim, um extrato pode ser obtido com um teor de ABA entre 5 ppm e 4000 ppm, dependendo da proporção de cada um dos extratos. O extrato purificado e o extrato não purificado podem ser combinados na forma sólida e / ou líquida. Quando ambos os extratos são combinados na forma sólida, o teor de ABA na dita combinação de extratos tem, de preferência, um valor en-

tre 10 ppm e 300 ppm, entre 20 ppm e 300 ppm, entre 30 ppm e 300 ppm, entre 40 ppm e 300 ppm, entre 50 ppm e 300 ppm, entre 60 ppm e 300 ppm, entre 70 ppm e 300 ppm, entre 80 ppm e 300 ppm, entre 90 ppm e 300 ppm, entre 100 ppm e 300 ppm, entre 150 ppm e 300 ppm, entre 200 ppm e 300 ppm, ou entre 250 e 300 ppm. Quando am- bos são combinados na forma líquida, o teor de ABA na dita combina- ção de extratos tem, de preferência, um valor entre 20 ppm e 100 ppm, entre 30 ppm e 100 ppm, entre 40 ppm e 100 ppm, entre 50 ppm e 100 ppm, entre 60 ppm e 100 ppm, entre 70 ppm e 100 ppm, entre 80 ppm e 100 ppm, ou entre 90 ppm e 100 ppm. A combinação de um extrato na forma sólida e o outro extrato na forma líquida torna possível prepa- rar extratos tendo diferentes teores de ABA. A combinação do extrato purificado de acordo com a invenção com o extrato não purificado tor- na possível preparar extratos tendo concentrações específicas de ABA dentro de uma ampla faixa entre 5 ppm e 4000 ppm sem a necessida- de de usar ingredientes adicionais e, ao mesmo tempo, manter a ma- triz de material vegetal usada como o produto inicial para a extração. Composições

[0056] A invenção também se refere a uma composição que com- preende o extrato da invenção e pelo menos um ingrediente adicional.

[0057] As composições podem ser farmacêuticas, nutricionais ou cosméticas.

[0058] Em uma modalidade da invenção, o extrato é combinado com um ingrediente adicional selecionado dentre o grupo que consiste de sílica coloidal, talco, fosfato tricálcico, estearato de magnésio, car- boidratos (por exemplo, amido), maltodextrinas, água, poliálcoois (por exemplo, glicerina ou propileno glicol), celuloses (por exemplo, celulo- se microcristalina), amidos e misturas dos mesmos. Em uma modali- dade preferencial, o extrato de acordo com a invenção é combinado com ingredientes adicionais que têm um baixo índice glicêmico, tal como, por exemplo, tagatose.

[0059] Em uma modalidade preferencial, a composição compreen- de entre 0,5% em peso e 35% em peso, de preferência entre 5% em peso e 20% em peso de um ingrediente adicional. Em uma modalida- de mais preferencial, ela compreende aproximadamente 20% em peso de maltodextrina como um ingrediente adicional e, em outra modalida- de mais preferencial, a composição compreende aproximadamente 5% em peso de dióxido de silício ou fosfato tricálcico como um ingrediente adicional.

[0060] A invenção também se refere ao uso do dito extrato em uma composição nutricional, farmacêutica ou cosmética.

[0061] A invenção refere-se ao dito extrato para uso como um me- dicamento. Em particular, o extrato de acordo com a invenção pode ser utilizado no tratamento de doenças, como descrito na técnica ante- rior mencionada acima, tal como, por exemplo, diabetes, doença in- flamatória intestinal, aterosclerose, resistência à insulina, hiperglicemia e intolerância à glicose, mais preferencialmente no tratamento de dia- betes e hiperglicemia. Composições Farmacêuticas

[0062] As composições farmacêuticas adequadas para administrar o extrato de acordo com a invenção e os métodos para a sua prepara- ção serão bastante claros para os versados na técnica. As ditas com- posições e métodos para a sua preparação podem ser encontrados, por exemplo, em Remington The Science and Practice of Pharmacy, 20º edição, ed. A.R. Gennaro, Lippincott Williams e Wilikins, 2000.

[0063] Excipientes e veículos adequados para a preparação das ditas composições farmacêuticas são conhecidos dos versados na técnica e podem ser encontrados em Handbook of Pharmaceutical Ex- cipients, 4º edição, Ed. R. C. Crove, P.J. Sheskey e P.J. Weller, Phar- maceutical Press, 2003.

[0064] Para a administração adequada a um mamífero, em parti- cular a um ser humano, uma dose eficaz de ABA pode ser administra- da preferencialmente pela via oral (incluindo administração bucal e sublingual) e pela via parentérica (incluindo administração retal ou por injeção), embora a via tópica também possa ser usada (incluindo ad- ministração ocular e nasal) e a via pulmonar. As formas de entrega de dosagem incluem comprimidos, dispersões, suspensões, soluções, cápsulas, cremes, pomadas, aerossóis e similares. De preferência, o extrato de acordo com a invenção é administrado por via oral ou pa- rentérica.

[0065] Como já mencionado, o extrato de acordo com a invenção pode ser administrado por via oral. A administração oral pode incluir deglutição, de modo que o ingrediente ativo entra no trato gastrointes- tinal e / ou administração bucal, lingual ou sublingual, em que o ingre- diente ativo entra na corrente sanguínea diretamente a partir da boca.

[0066] As formulações adequadas para administração oral incluem sistemas sólidos, semissólidos e líquidos, tal como comprimidos; cáp- sulas moles ou duras que contêm múltiplos ou nanopartículas, líquidos ou pós; pílulas (incluindo aquelas preenchidas de líquido); gomas de mascar; formas de entrega de dosagem de dispersão rápida; filmes; aerossóis; e adesivos bucais / muco-adesivos.

[0067] As formulações líquidas incluem suspensões, soluções, xa- ropes e elixires. Esses tipos de formulações podem ser usados como enchimentos em cápsulas moles ou duras (feitas, por exemplo, de ge- latina ou hidroxipropil metil celulose) e tipicamente compreendem um veículo, por exemplo, água, etanol, propileno glicol, polietileno glicol, metil celulose ou um óleo adequado, e um ou mais agentes emulsifi- cantes e / ou agentes de suspensão. As formulações líquidas também podem ser preparadas por reconstituição de um sólido, por exemplo, a partir de um sachê.

[0068] Para a forma de entrega de dosagem de comprimidos, os comprimidos geralmente contêm, além do agente ativo, um agente de- sintegrante, tal como, por exemplo, carboximetil celulose de sódio, amido glicolato de sódio, carboximetil celulose de cálcio, croscarmelo- se de sódio, crospovidona, polivinil pirrolidona, metil celulose, celulose microcristalina, hidroxipropil celulose substituída com alquil inferior, amido, amido pré-gelatinizado ou alginato de sódio.

[0069] Os agentes aglutinantes são geralmente usados para con- ferir qualidades coesivas a uma formulação de comprimido. Os agluti- nados adequados incluem, por exemplo, gelatina, celulose microcrista- lina, açúcares, polietileno glicol, gomas naturais e sintéticas, polivinil pirrolidona, amido pré-gelatinizado, hidroxipropil celulose ou hidroxi- propil metil celulose. Os comprimidos também podem conter diluentes, tal como, por exemplo, lactose (mono-hidratada, monohidratada seca por pulverização, anidra e similar), sacarose, sorbitol, manitol, xilitol, dextrose, celulose microcristalina, amido ou diidrato dibásico de fosfato de cálcio.

[0070] Os comprimidos também podem opcionalmente compreen- der tensoativos, tal como, por exemplo, polissorbato 80, ou lauril sulfa- to de sódio e agentes deslizantes, tal como, por exemplo, dióxido de silício ou talco.

[0071] Os comprimidos também geralmente contêm lubrificantes, tal como, por exemplo, estearato de magnésio, estearato de cálcio, estearato de zinco, estearil fumarato de sódio ou misturas de estearato de magnésio com lauril sulfato de sódio.

[0072] Outros possíveis ingredientes incluem antioxidantes, coran- tes, flavorizantes e intensificadores de sabor, conservantes, agentes estimulantes de saliva, agentes de resfriamento, cossolventes (incluin- do óleos), emolientes, agentes de volume, agentes antiformadores de espuma, tensoativos, agentes de mascaramento de sabor, ou misturas dos mesmos.

[0073] As misturas do extrato de acordo com a invenção e os ex- cipientes podem ser comprimidos diretamente ou por rolos para formar comprimidos. As ditas misturas ou uma porção das mesmas podem, alternativamente, ser granuladas a úmido, granuladas a seco ou gra- nuladas por fusão, congeladas por fusão, ou extrudadas antes da for- mação dos comprimidos. A formulação final pode compreender uma ou mais camadas e pode ser revestida ou não; ela também pode ser encapsulada.

[0074] A formulação de comprimidos é discutida, por exemplo, em Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets. Vol. 1, por H. Lieberman, L. Lachman, J.B. Schwartz (2º edição, Marcel Dekker, Nova lorque, 1989).

[0075] As formulações sólidas para administração oral podem ser formuladas para liberação imediata e / ou modificada. As formulações de liberação modificada incluem liberação retardada, sustentada, pul- sada, controlada, direcionada e programada.

[0076] As composições de liberação controlada para uso oral po- dem, por exemplo, ser construídas para liberar o agente ativo contro- lando a dissolução e / ou difusão do mesmo.

[0077] A dissolução ou liberação controlada por difusão pode ser conseguida revestindo um comprimido, cápsula, grânulos ou formula- ção de agente ativo granulado adequadamente, ou incorporando o agente ativo em uma matriz apropriada. Um revestimento de liberação controlada pode incluir uma ou mais substâncias, tal como, por exem- plo, goma-laca, cera de abelha, mamona, cera de carnaúba, estearil álcool, gliceril monoestearato, gliceril distearato, gliceril palmitosteara- to, etil celulose, ácido dl-polilático, acetato butirato de celulose, cloreto de polivinil, acetato de polivinil, vinil pirrolidona, polietileno, polimetacri- lato, metil metacrilato, hidrogéis de metacrilato, 1,3-butileno glicol, me-

tacrilato de etileno glicol e / ou polietileno glicol. Em uma formulação de matriz de liberação controlada, o material da matriz também pode incluir, por exemplo, metil celulose hidratada, cera de carnaúba e es- tearil álcool, CarbopolO 934, silício, gliceril triestearato, metil acrilato — metil metacrilato, cloreto de polivinil, polietileno e / ou fluorocarbono halogenado.

[0078] Uma composição de liberação controlada que contém o ex- trato de acordo com a invenção também pode estar na forma de um comprimido ou cápsula flutuante (isto é, um comprimido ou cápsula que, após administração oral, flutua nos conteúdos gástricos por um certo período de tempo). Uma formulação de comprimido flutuante do agente ou agentes ativos pode ser preparada granulando uma mistura do extrato com excipientes e hidrocoloides, tal como hidroxietil celulo- se, hidroxipropil celulose ou hidroxipropil metil celulose. Os grânulos obtidos podem então ser compactados em comprimidos. Em contato com os sucos gástricos, o comprimido forma uma barreira de gel que é substancialmente impermeável à água em torno de sua superfície. Es- sa barreira de gel ajuda a manter uma densidade menor que um, per- mitindo que o comprimido permaneça flutuando nos sucos gástricos.

[0079] O extrato de acordo com a invenção também pode ser ad- ministrado pela via parentérica diretamente na corrente sanguínea, no músculo ou em um órgão interno. Os meios adequados para adminis- tração parentérica incluem administração intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intrauretral, intraesternal, intracraneana, intramuscular, intrassinovial e subcutânea. Os dispositi- vos adequados para administração parentérica incluem injetores de agulha (incluindo microagulhas), injetores sem agulha, e técnicas de infusão.

[0080] As formulações parentéricas são tipicamente soluções aquosas que podem conter excipientes, tal como, por exemplo, sais,

carboidratos e agentes tampão (preferencialmente com pH de 3 a 9), mas, para algumas aplicações, as ditas formulações podem ser formu- ladas mais apropriadamente como uma solução não estéril ou como uma forma seca a ser usada em conjunto com um veículo adequado, tal como água estéril livre de pirogênio.

[0081] A preparação de formulações parentéricas em condições estéreis, por exemplo, por liofilização, pode ser realizada facilmente usando técnicas farmacêuticas padrão que são bem conhecidas dos versados na técnica.

[0082] As formulações para administração parentérica podem ser formuladas para liberação imediata e / ou modificada. As formulações de liberação modificada incluem liberação retardada, sustentada, pul- sada, controlada, direcionada e programada. Assim, o extrato de ABA de acordo com a invenção pode ser formulado como uma suspensão ou como um líquido, sólido, semissólido ou tixotrópico para administra- ção como um depósito implantado que fornece liberação modificada do ingrediente ativo. Exemplos de tais formulações incluem stents re- vestidos com agentes ativos, e semissólidos e suspensões que com- preendem microesferas de ácido poli (láctico-co-glicólico) (PGLA) car- regado com um agente ativo.

[0083] O extrato de ABA também pode ser administrado topica- mente, (intra) dermicamente ou transdermicamente na pele ou na mu- cosa. As formulações típicas para esse fim incluem géis, hidrogéis, loções, soluções, cremes, pomadas, pós para sachês, curativos, es- pumas, filmes, adesivos para a pele, bolachas, implantes, esponjas, fibras, ataduras e microemulsões. Lipossomas também podem ser uti- lizados. Os veículos típicos incluem álcool, água, óleo mineral, vaseli- na líquida, vaselina branca, glicerina, polietileno glicol e propileno gli- col.

[0084] O extrato de ABA também pode ser administrado por via intranasal ou por inalação, normalmente na forma de pó seco (ou iso- ladamente, como uma mistura, por exemplo, em uma mistura seca com lactose, ou como uma partícula de ingrediente misto, por exem- plo, misturado com fosfolipídios, tal como fosfatidilcolina) de um inala- dor de pó seco ou como uma aspersão de aerossol a partir de um re- cipiente pressurizado, bomba, aspersor, atomizador (de preferência um atomizador usando eletrohidrodinâmica para produzir uma névoa fina), ou nebulizador, com ou sem o uso de um propelente adequado, tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano ou 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano, ou como gotas nasais. Para uso intranasal, o pó pode compreender um agente bioadesivo, por exemplo, quitosana ou ciclodextrina.

[0085] O recipiente pressurizado, bomba, aspersor, atomizador ou nebulizador contém o extrato de ABA, um solvente adequado e, possi- velmente, um tensoativo.

[0086] Antes do uso em uma formulação ou suspensão em pó se- co, o extrato de ABA é seco e moído. Isso pode ser alcançado por qualquer método de trituração adequado, tal como moagem a jato em espiral, moagem a jato de leito fluidizado, processamento de fluido su- percrítico para formar nanopartículas, homogeneização de alta pres- são ou secagem por pulverização.

[0087] As cápsulas (feitas, por exemplo, de gelatina ou hidroxipro- pil metil celulose), ampolas e cartuchos para uso em um inalador ou soprador podem ser formuladas para conter uma mistura em pó do extrato de ABA, uma base em pó adequada, tal como lactose ou ami- do, e um modificador de desempenho tal como leucina, manitol ou es- tearato de magnésio. A lactose pode estar na forma anidra ou na for- ma monohidratada, de preferência a última. Outros excipientes ade- quados incluem dextrano, glicose, maltose, sorbitol, xilitol, frutose, sa- carose e trealose.

[0088] As formulações destinadas à administração por inalação /

intranasal podem ser formuladas para serem de liberação imediata e / ou de liberação modificada usando, por exemplo, PGLA.

[0089] O extrato de ABA também pode ser administrado por via retal ou vaginal, por exemplo, na forma de um supositório, pessário ou enema. A manteiga de cacau é uma base de supositório convencional, mas várias alternativas podem ser usadas conforme apropriado. Composições Nutricionais

[0090] O extrato de ABA pode fazer parte de uma composição nu- tricional, tal como, por exemplo, suplementos nutricionais. Nestes tipos de suplementos, o ABA pode estar presente em doses adequadas pa- ra administração diária (ou mais frequente). Normalmente, para su- plementos dietéticos, o ABA está presente em uma forma adequada para ingestão oral, tal como por meio de pílulas, cápsulas, comprimi- dos, pós, líquidos ou similares. Como nas composições farmacêuticas, aditivos típicos podem ser incluídos, tal como agentes desintegrantes, aglutinantes, gomas, corantes ou flavorizantes. Composições Cosméticas

[0091] As composições cosméticas que compreendem o extrato de ABA de acordo com a invenção normalmente incluem um ingredi- ente adicional selecionado a partir do grupo que compreende, por exemplo, tensoativos, emulsificantes, compostos lipídicos, emolientes, fatores de consistência, agentes espessantes, hidrótropos, e conser- vantes

[0092] As composições de acordo com a invenção podem incluir tensoativos para facilitar a solução, emulsão, dispersão ou suspensão dos ingredientes cosméticos.

[0093] Os tensoativos podem ser aniônicos, não iônicos, catiôni- cos e / ou anfotéricos. De preferência, são utilizados tensoativos não iônicos. Dentre os tensoativos aniônicos, podem ser citados, por exemplo: sabões, alcanos sulfonados, olefinas sulfonadas, alquil sulfa-

tos, éteres de álcool graxo, éter sulfatos de glicerina, éter sulfatos de ácido graxo, mono- e dialquil sulfossucinatos, mono- e dialquil sulfos- sucinamatos, éter de ácidos carboxílicos e seus sais, isotionatos de ácidos graxos, sarcosinatos de ácidos graxos, tauretos de ácidos gra- xOS, N-acil aminoácidos. Dentre os tensoativos não iônicos, podem ser citados, por exemplo: álcoois graxos polialcoxilados, ácidos graxos po- lialcoxilados, amidas de ácidos graxos polialcoxilados, aminas graxas polialcoxiladas, triglicerídeos alcoxilados, éteres mistos, alquil poligli- cosídeos, N-alquil glucamidas de ácidos graxos, ésteres de sorbitano, ésteres de sorbitano polietoxilados, e óxidos de amina. Dentre os ten- soativos catiônicos, podem ser citados, por exemplo: compostos de amônio quaternário e sais quaternários de ésteres de trialcanolamina e ácidos graxos, por exemplo, esterquats. Dentre os tensoativos anfoté- ricos, podem ser citados, por exemplo: alquil betaínas, alquil amido betaínas, amino propionatos, amino glicinatos, imidazolina betaínas e sulfobetaínas.

[0094] As composições cosméticas de acordo com a invenção ge- ralmente contêm uma série de compostos lipídicos e emolientes adici- onais, que ajudam a otimizar as propriedades organolépticas e derma- tológicas dos mesmos. Os seguintes são possíveis compostos lipídi- cos: álcoois de Guerbet à base de álcool graxo com 6 a 18 átomos de carbono, ésteres lineares de ácidos graxos com 6 a 22 átomos de car- bono contendo álcoois lineares com 6 a 22 átomos de carbono, éste- res de ácido carboxílico ramificado com 6 a 13 átomos de carbono contendo álcoois lineares com 6 a 22 átomos de carbono, tal como, por exemplo, miristil miristato, miristil palmitato, miristil estearato, behenil estearato, behenil isoestearato, behenil oleato, behenil behe- nato, behenil erucato, ou erucil miristato. Também são adequados os seguintes: ésteres de ácidos graxos lineares com 6 a 22 átomos de carbono contendo álcoois ramificados; alquil hidroxi ésteres de ácidos carboxílicos com 18 a 38 átomos de carbono contendo álcoois graxos lineares ou ramificados com 6 a 22 átomos de carbono, em particular dioctil malatos; ésteres de ácidos graxos lineares e / ou ramificados contendo álcoois polivalentes, e / ou álcoois de Guerbet; triglicerídeos à base de ácidos graxos com 6 a 10 átomos de carbono; misturas lí- quidas de mono- / di- / triglicerídeos à base de ácidos graxos com 6 a 18 átomos de carbono; ésteres de álcool graxo com 6 a 22 átomos de carbono e / ou álcoois de Guerbet com ácidos carboxílicos aromáticos, em particular ácido benzoico; ésteres de ácido dicarboxílico com 2 a 12 átomos de carbono contendo álcoois lineares ou ramíificados com 1 a 22 átomos de carbono, ou polióis com 2 a 10 átomos de carbono e 2 a 6 grupos hidroxila; óleos vegetais; álcoois primários ramificados; ci- clohexanos substituídos; carbonatos de álcool graxo linear ou ramifi- cado com 6 a 22 átomos de carbono, tal como, por exemplo, dicaprilil carbonatos; dialquil éteres lineares ou ramificados, simétricos ou assi- métricos com 6 a 22 átomos de carbono por grupo alquila, tal como, por exemplo, dicaprilil éteres; hidrocarbonetos alifáticos, ou alternati- vamente naftênicos, tal como esqualano, esqualeno ou dialquil ciclo- hexanos, e misturas dos mesmos.

[0095] Fatores de consistência e espessantes são usados nas composições cosméticas de acordo com a invenção para ajustar a vis- cosidade e o comportamento reológico da mesma. Em primeiro lugar, os possíveis fatores de consistência que podem ser considerados são os álcoois graxos com uma cadeia de 12 a 22 átomos de carbono, e preferencialmente de 16 a 18 átomos de carbono, além de glicerídeos parciais, ácidos graxos ou ácidos graxos hidroxilados. Os agentes es- pessantes adequados são, a título de exemplo, silício hidrofílico ani- dro; polissacarídeos, especialmente goma xantana, goma guar, ágar- ágar, alginatos e tiloses, carboximetil celulose e hidroxietil celulose, bem como polietileno glicol mono- e diésteres de ácidos graxos de maior peso molecular; poliacrilatos, poliacrilamidas, polivinil álcool e polivinil pirrolidona.

[0096] Para melhorar a fluidez das composições cosméticas de acordo com a invenção, também podem ser utilizados hidrótropos, tal como, por exemplo, etanol, isopropil álcool ou polióis. Os polióis consi- derados no caso têm preferencialmente 2 a 15 átomos de carbono, e pelo menos dois grupos hidroxila. Os polióis também podem conter outros grupos funcionais, em particular, grupos amino ou, alternativa- mente, podem ser modificados com nitrogênio. Exemplos típicos são glicerina; alquileno glicóis, tal como etileno glicol, dietileno glicol, propi- leno glicol, butileno glicol, hexileno glicol, bem como polietileno glicóis com um peso molecular médio de 100 a 1000 Dáltons; misturas técni- cas de oligo glicerinas com um nível de condensação típico de 1,5 a 10, tal como, por exemplo, misturas técnicas de diglicerinas com um teor de diglicerina de 40 a 50% em peso; compostos de metilol, tal como, em particular, trimetilol metano, trimetilol propano, trimetilol bu- tano, pentaeritritol e dipentaeritritol; alquil glucosídeos com uma cadeia de 1 a 8 átomos de carbono no resíduo alquila; álcoois sacáricos com a 12 átomos de carbono, tal como, por exemplo, sorbitol ou manitol; açúcares com 5 a 12 átomos de carbono, tal como, por exemplo, gli- cose ou sacarose; amino açúcares, tal como, por exemplo, glucamina; dialcoolaminas, tal como dietanolamina ou 2-amino-1,3-propanodiol.

[0097] Os agentes conservantes adequados para uso nas compo- sições de acordo com a invenção são, a título de exemplo, fenoxieta- nol, solução de formaldeído, parabenos (metilparabeno, propilparabe- no, butilparabeno e misturas dos mesmos), 3- (4-clorofenoxi) -1,2- propanodiol (clorofenesina), pentanodiol ou ácido sórbico, e as classes de substâncias adicionais indicadas no Anexo VI de Cosmetics Directi- ve 76/768/EEC.

[0098] Em um primeiro aspecto, a presente invenção descreve um método para preparar um extrato botânico de ácido abscísico a partir de materiais vegetais, caracterizado por compreender: a) extrair um material vegetal que contém ácido abscísico usando um solvente aquoso, e separar o material vegetal sólido da fração líquida, b) concentrar a fração líquida, c) purificar a fração líquida obtida na etapa b) por separa- ção cromatográfica em uma coluna de adsorção usando um solvente orgânico miscível em água como um eluente, ou uma extração líquido - líquido usando um solvente que não é miscível em água, ou por fil- tração e d) evaporar a fase orgânica obtida na etapa c).

[0099] O dito material vegetal que contém ácido abscísico é sele- cionado a partir do grupo que consiste de figos, cranberries / mirtilos, damascos, bananas, laranjas amargas, casca de laranja, casca de tangerina, casca de limão e casca de toranja. De preferência, o mate- rial vegetal que contém ácido abscísico é selecionado a partir do grupo que consiste de figos e laranjas amargas. Mais preferencialmente, o material vegetal que contém ácido abscísico é o figo.

[00100] Além disso, o dito material vegetal está seco.

[00101] No dito método, o solvente aquoso é selecionado dentre: a) água e b) uma mistura de água e pelo menos uma seleção dentre um álcool alifático inferior com 1 a 4 átomos de carbono.

[00102] No dito método, o álcool alifático inferior com 1 a 4 átomos de carbono é selecionado dentre metanol, etanol, isopropanol e mistu- ras dos mesmos. De preferência, o álcool alifático inferior com 1 a 4 átomos de carbono é etanol.

[00103] No dito método, a extração é realizada usando água como o único solvente.

[00104] Em outra modalidade do dito método, a extração é realiza-

da usando uma mistura de etanol e água.

[00105] No dito método, a proporção de etanol está entre 50% em volume e 85% em volume.

[00106] Usar apenas água como solvente de extração é uma opção em que o dito solvente é seguro e a toxicidade é zero.

[00107] Dentre as misturas de água com outro solvente, é preferen- cialmente uma mistura de água e etanol. A dita mistura tem uma toxi- cidade mais baixa do que outros solventes utilizados na técnica anteri- or, tal como o metanol, que é altamente tóxico se um alimento ou me- dicamento é desejado.

[00108] Em escala industrial, é preferencial usar percolação como a etapa de extração. A dita percolação é feita em equipamentos industri- ais que podem operar em corrente e contracorrente. A vazão do sol- vente de extração na dita etapa de percolação está dentro de uma fai- xa de 500 a 1200 litros por hora.

[00109] A quantidade de matéria-prima vegetal carregada em cada lote industrial está entre 500 e 2000 kg, dependendo do equipamento industrial utilizado. A quantidade do extrato resultante (micela de ex- tração) é de cerca de 1200 litros.

[00110] No dito método, é utilizado um volume de solvente que é equivalente a entre 3 e 6 vezes o peso do material vegetal a ser extra- ído. Com a dita faixa de razão de volume de solvente por peso de ma- terial vegetal, é possível estabelecer um equilíbrio entre a eficiência do processo e a relação custo - benefício do mesmo em escala industrial.

[00111] Na etapa de extração do método da presente invenção, uma recuperação de mais de 75% do teor inicial de ABA é conseguida, tornando o processo rentável a partir do ponto de vista industrial. Con- siderando que o teor de ABA no material vegetal de partida é muito baixo, é muito importante fazer uma seleção adequada da matéria- prima com o objetivo de obter uma extração econômica em escala in-

dustrial.

[00112] Uma das matérias-primas vegetais com maior teor de ABA são os figos ou frutas cítricas. Na industrialização, é necessário um processo de extração de figos para começar com uma matéria-prima contendo mais de 1 ppm de ABA, preferencialmente mais de 5 ppm. À dita seleção envolve uma análise rigorosa da matéria-prima, compre- endendo desde uma amostragem representativa até a aplicação de técnicas analíticas apropriadas.

[00113] Também em escala industrial, quando é obtido um grande volume de extrato e a concentração de açúcar no dito extrato é alta, isso torna o dito extrato muito sensível à degradação microbiana. Para evitar isso, é preferencial pasteurizar o extrato obtido, a fim de manter sua integridade microbiológica durante as etapas de concentração e purificação.

[00114] A extração no dito método é realizada a uma temperatura entre 50ºC e 75ºC.

[00115] No processo da presente invenção, é preferencial pasteuri- zar o dito extrato pelo menos a 92ºC durante pelo menos 78 segun- dos, mais preferencial a 98ºC durante 90 segundos.

[00116] A purificação no dito método é realizada por separação cromatográfica em uma coluna de adsorção usando um solvente orgâ- nico miscível em água como um eluente.

[00117] O solvente orgânico miscível em água usado na dita coluna de adsorção é selecionado a partir do grupo que consiste de um álcool alifático inferior com 1 a 4 átomos de carbono, cetona, dioxano, tetra- hidrofurano, acetonitrilo e misturas dos mesmos. O dito solvente orgâ- nico miscível em água é um álcool alifático inferior com 1 a 4 átomos de carbono.

[00118] O eluente do dito método é selecionado a partir do grupo que consiste de metanol e etanol. Mais preferencialmente, o eluente é etanol.

[00119] Na extração líquido - líquido do dito método, é utilizado um solvente orgânico que não é miscível em água, selecionado dentre o grupo que consiste de butanol e etil acetato. O dito solvente é etil ace- tato.

[00120] Em uma modalidade, a filtração da etapa c) do método da presente invenção é uma filtração de fluxo tangencial, mais preferenci- almente uma nanofiltração. O versado na técnica sabe que as mem- branas de nanofiltração têm tamanhos de poro de 1 a 10 nanometros. De preferência, a pressão do processo de filtração está entre 4 e 20 bar.

[00121] — Outro aspecto descrito pela presente invenção é um extrato botânico de ácido abscísico obtido de acordo com o dito método, ca- racterizado por compreender entre 5 ppm e 4000 ppm de ácido abscí- sico.

[00122] O dito extrato botânico de ácido abscísico compreende en- tre 1000 ppm e 4000 ppm de ácido abscísico.

[00123] Além disso, o extrato compreende um extrato não purifica- do na proporção de 99:1 a 1:99, no qual o extrato não purificado cor- responde ao extrato obtido após a extração do material vegetal usando o solvente aquoso, de acordo com a etapa a) do método de presente invenção e, em qualquer caso, após secagem da fração líquida.

[00124] Odito extrato compreende entre 5 ppm e 4000 ppm de áci- do abscísico.

[00125] Em um terceiro aspecto da presente invenção, é descrita uma composição que compreende o dito extrato e, pelo menos, um ingrediente adicional.

[00126] Na dita composição, o ingrediente adicional é selecionado dentre o grupo que consiste de sílica coloidal, talco, fosfato tricálcico, estearato de magnésio, carboidratos, maltodextrinas, água, poliálcoois,

celuloses, amidos e misturas dos mesmos.

[00127] —Adita composição compreende entre 0,5% em peso e 35% em peso de um ingrediente adicional. Mais preferencialmente, a dita composição compreende 20% em peso de maltodextrina. A dita com- posição compreende 5% em peso de dióxido de silício ou fosfato tri- cálcico.

[00128] Em outra modalidade, é descrito o uso do extrato em uma composição nutricional, farmacêutica ou cosmética.

[00129] Além disso, é descrito o uso do dito extrato como medica- mento.

[00130] Vários exemplos são dados abaixo como exemplos ilustra- tivos não limitantes da invenção.

Exemplos

[00131] O ABA pode ser determinado por métodos que são bem conhecidos por um versado na técnica, que incluem, geralmente, HPLC, espectrometria de massas, ou detectores mais convencionais, tal como, por exemplo, espectrofotômetros UV, como descrito, por exemplo, no artigo por Kelen e outros, Separation of Abscisic Acid, In- dole-3-Acetic Acid, Gibberellic Acid in 99 R (Vitis berlandieri x Vitis ru- pestris) and Rose Oil (Rosa damascena Mill.) by Reversed Phase Li- quid Chromatography, Turk J. Chem, 2004, 29, 603 a 610.

Exemplo 1: Preparação de um extrato de ABA usando água

[00132] 50g de figos secos cortados em pedaços com tamanho in- ferior a 2 cm foram extraídos usando água morna a uma temperatura en- tre 55ºC e 65ºC, enquanto sob agitação. Foram realizadas duas etapas de extração, com base na adição de uma quantidade de solvente equiva- lente a entre 3 e 6 vezes o peso do material vegetal a ser extraído.

[00133] O material vegetal foi separado da micela resultante por filtração sólido - líquido. A micela foi concentrada por evaporação a vácuo, mantendo a temperatura abaixo de 65ºC, até que um produto foi obtido com um resíduo seco de 78% em peso. O produto foi seco a vácuo e a uma temperatura não superior a 70ºC. Assim, foram obtidos g de extrato seco, o que corresponde a um rendimento de extração de 50%, ou seja, uma DER de 2:1.

[00134] Oteorde ABA neste extrato era de 19 ppm.

[00135] Várias operações de extração de figos secos usando água morna levaram à obtenção de um extrato seco com um teor de ABA entre 5 e 25 ppm. Exemplo 2: Preparação de um extrato de ABA usando uma mistura de água e etanol

[00136] 50,5 g de figos secos cortados em pedaços com um tama- nho inferior a 2 cm foram extraídos usando 500 ml de uma mistura de etanol e água com um teor de etanol de 70% em volume. A extração foi realizada a uma temperatura entre 55ºC e 65ºC, com agitação e por 2 horas.

[00137] O material vegetal foi separado da micela por filtração sóli- do - líquido. A micela foi concentrada por evaporação a vácuo, man- tendo a temperatura abaixo de 65ºC, até que um produto foi obtido com um resíduo seco de 76% em peso. O produto foi seco a vácuo e a uma temperatura não superior a 70ºC. Assim, foram obtidos 26,3 g de extrato seco, o que corresponde a um DER de 1,92:1. O teor de ABA neste extrato foi de 10 ppm. Exemplo 3: Preparação de um extrato de ABA usando uma mistura de água e etanol

[00138] 20,49 de casca de laranja seca foram extraídos usando 2 x 200 ml de uma mistura de 70% em volume de etanol e água por uma hora, enquanto sob agitação e a uma temperatura de 50ºC.

[00139] “Seguindo um método que era substancialmente semelhante ao descrito no exemplo 2, foram obtidos 7,4 g de um extrato (DER 2,76:1) que tinha um teor de ABA de 6 ppm.

Exemplo 4: Preparação de um extrato de ABA usando uma mistura de água e etanol

[00140] 20,7g de casca de tangerina seca foram extraídos usando 2 x 200 ml de uma mistura de etanol e água a 70% em volume por uma hora, enquanto sob agitação e a uma temperatura de 50ºC.

[00141] Seguindo um método que era substancialmente semelhante ao descrito no exemplo 2, foram obtidos 8,4 g de um extrato (DER 2,46:1) que tinha um teor de ABA de 8 ppm. Exemplo 5: Preparação de um extrato de ABA usando uma mistura de água e etanol

[00142] 50,1gde casca de laranja amarga seca foram extraídos em três etapas, utilizando 350 ml, 250 ml e 200 ml de uma mistura de eta- nol e água a 70% em volume por uma hora, enquanto sob agitação e a uma temperatura de 50ºC.

[00143] “Seguindo um método que era substancialmente semelhante ao descrito no exemplo 2, foram obtidos 17,3 g de um extrato (DER 2,9:1) que tinha um teor de ABA de 16 ppm. Exemplo 6: Preparação de um extrato de ABA usando uma mistura de água e etanol

[00144] 50,3g de laranjas amargas pequenas, secas e inteiras fo- ram extraídas em três etapas, utilizando 250 ml, 250 ml e 150 ml de uma mistura de 70% em volume de etanol e água por uma hora, en- quanto sob agitação e a uma temperatura de 50ºC.

[00145] “Seguindo um método que era substancialmente semelhante ao descrito no exemplo 2, foram obtidos 19,4 g de um extrato (DER 2,59:1) que tinha um teor de ABA de 20 ppm. Exemplo 7: Preparação de um extrato purificado de ABA

[00146] 500 g de figos secos inteiros foram submetidos a duas eta- pas de extração. Cada uma das etapas durou duas horas e 2500 ml de água foram utilizados a uma temperatura de 70ºC.

[00147] O material vegetal foi separado da micela por filtração sóli- do - líquido. A micela tinha um peso de 4636 g e um resíduo seco de 5,5% em peso. A dita micela foi concentrada por evaporação sob vá- cuo, mantendo a temperatura abaixo de 65ºC, até se obter um produto com um resíduo seco de 10% em peso.

[00148] Este produto concentrado foi carregado em uma coluna cromatográfica preenchida com uma resina de adsorção. A eluição dos produtos contidos na coluna foi realizada usando etanol como o eluen- te. A solução etanólica foi concentrada até a obtenção de um resíduo seco de 75% em peso, e a secagem foi continuada em forno a vácuo e a uma temperatura não superior a 65ºC.

[00149] Finalmente, 2,1 g de extrato de ABA purificado foram obti- dos, significando um rendimento de 0,42% na matéria-prima inicial, ou seja, uma DER de 240:1. O teor ABA é de 1400 ppm. Exemplo 8: Preparação de um extrato de ABA purificado

[00150] 100 kg de figos secos inteiros foram carregados em quatro percoladoras de 30 L e a extração foi realizada com água morna a uma temperatura de 70ºC, em uma proporção de aproximadamente seis ve- zes em peso em relação à massa do material vegetal a ser extraído.

[00151] A micela, 1050 L, tinha um resíduo seco de 4,9% em peso e foi concentrada por evaporação a vácuo, mantendo a temperatura abaixo de 65ºC, até que um produto foi obtido com um resíduo seco de 10% em peso.

[00152] Em seguida, foram realizadas duas extrações com 1000 L de etil acetato, cada uma com três vezes o volume e a fase orgânica em comparação com a fase aquosa, enquanto sob agitação e a uma temperatura de 50ºC.

[00153] As frações orgânicas combinadas foram concentradas até a obtenção de um resíduo seco de 75% em peso, e a secagem foi conti- nuada em forno a vácuo e a uma temperatura não superior a 65ºC.

[00154] — Foram obtidos 120 g de um extrato com um teor de ABA de 3800 ppm. O rendimento deste método de purificação é de 0,1% a 0,12% em peso, o que corresponde a uma DER aproximada de 850- 1000:1. Exemplo 9: Composição nutricional contendo extrato de ABA

[00155] “Foram carregados 12 kg de figos secos inteiros em uma percoladora de 30 L e a extração foi realizada com água morna a uma temperatura de 70ºC, na proporção de aproximadamente 11 vezes o peso do material vegetal.

[00156] A micela tinha um resíduo seco de 4,5% em peso e foi con- centrada por evaporação a vácuo, mantendo a temperatura abaixo de 65ºC, até que um produto foi obtido com um resíduo seco de 79% em peso.

[00157] Maltodextrina de tapioca foi adicionada ao dito produto em uma proporção de 20% em peso do material seco final, e a secagem da composição foi concluída em um forno, mantendo uma temperatura não superior a 70ºC.

[00158] Foram obtidos 7,5 kg de extrato bruto com um teor de ABA de 10 ppm.

[00159] — Composições semelhantes foram preparadas utilizando 5% em peso de silício anidro e 5% em peso de fosfato tricálcico em vez de maltodextrina. Exemplo 10: Preparação de iogurte contendo extrato de ABA

[00160] 1Ldeleitede vaca pasteurizado foi misturado com fermen- to lácteo e a dita mistura foi aquecida a uma temperatura de 45ºC. À mistura foi mantida na dita temperatura durante 8 horas para promover a sua fermentação. No final deste período, a mistura foi resfriada rapi- damente a 4ºC. Foram então adicionados 50 g de açúcar e 0,26 g de um extrato com um teor de ABA de 300 ppm. Um agente regulador de pH foi adicionado para garantir a viabilidade do fermento lácteo.

Exemplo 11: Preparação de barras de cereal contendo extrato de ABA

[00161] Aveia, tâmaras, cranberries / mirtilos, sementes de gergelim e amêndoas foram moídos. A mistura foi realizada até que uma com- posição homogênea fosse alcançada. Foram adicionados açúcar e 1 g de um extrato com um teor de ABA de 50 ppm à mistura. A pasta foi colocada em papel manteiga e esticada até uma espessura de 0,5 cm. Ela é deixada em repouso na geladeira por pelo menos 2 horas. Exemplo 12: Preparação de uma bebida energética contendo extrato de ABA

[00162] Foram adicionados 100 ml de suco de limão a 60 ml de mel natural e misturados com 250 ml de água. Foram adicionados 2 g de sal, 2 g de bicarbonato de sódio e 4 g de um extrato com um teor de ABA de 20 ppm. A mistura foi agitada até os ingredientes se dissolve- rem completamente. Ela foi deixada esfriar em um recipiente coberto. Exemplo 13: Preparação de creme para o corpo contendo extrato de

ABA

[00163] 200 ml de um creme comercial foram misturados com 0,2 g de um extrato com um teor de ABA de 500 ppm e 10 ml de óleo de co- Co. Exemplo 14: Preparação de comprimidos contendo extrato de ABA

[00164] Os excipientes são misturados com 0,1 g de um extrato com um teor de ABA de 300 ppm. A mistura foi aglomerada. Três comprimidos por dia devem ser tomados para ingerir 90 microgramas de ABA diariamente. Exemplo 15: Preparação de sachês contendo extrato de ABA

[00165] Os excipientes são misturados com 0,23 g de um extrato com um teor de ABA de 300 ppm. Ele foi embrulhado em sachês de papel à prova d'água. O teor de um sachê deve ser dissolvido em água para ingestão oral. Exemplo 16: Preparação de cápsulas contendo extrato de ABA

[00166] 0,15g de um extratocom um teor de ABA de 300 ppm fo- ram introduzidos em uma cápsula de gelatina dura. Duas cápsulas por dia devem ser consumidas para ingerir 90 microgramas de ABA diari- amente. Exemplo 17: Preparação de um extrato purificado de ABA usando fil- tração

[00167] 10kKkg de figos secos inteiros foram extraídos com 100 kg de água a 70ºC com duas etapas de extração. O material vegetal foi se- parado das micelas por uma filtração líquido - sólido resultando em um líquido com uma concentração de sólidos de cerca de 8,6% e um teor de ABA de 10 ppm. A dita micela foi submetida a uma filtração de fluxo tangencial utilizando um cartucho de filtração com uma membrana de nanofiltração. Para este processo, o pH da micela foi ajustado entre 2 e 5 adicionando um ácido mineral. A pressão do processo de filtração foi ajustada entre 4 e 20 bar.

[00168] Após a filtração, cerca de 80% do ABA inicial foi recuperado versus cerca de 20% obtido no permeado, resultando em uma purifi- cação de três vezes o teor de ABA de partida. Exemplo 18: Preparação de um extrato purificado de ABA usando fil- tração

[00169] 8 kg de figos secos inteiros foram extraídos com 100 kg de água a 70ºC com duas etapas de extração. O material vegetal foi se- parado das micelas por uma filtração líquido - sólido resultando em um líquido com uma concentração de sólidos de cerca de 8,6% e um teor de ABA de 9,1 ppm. A dita micela foi submetida a uma filtração de flu- xo tangencial utilizando um cartucho de filtração com uma membrana de nanofiltração. Para este processo, o pH da micela foi ajustado entre e 9 adicionando um ácido mineral. A pressão do processo de filtra- ção foi ajustada entre 4 e 20 bar.

[00170] Após a filtração, cerca de 95% do ABA de partida foi recu-

perado versus cerca de 5% obtido no permeado, resultando em uma purificação de mais de 5 vezes o teor do ABA de partida. Exemplo 19: Preparação de um extrato purificado de ABA usando fil- tração

[00171] Foram extraídos 5 kg de figos secos inteiros com 100 kg de água a 70ºC, com duas etapas de extração. O material vegetal foi se- parado das micelas por uma filtração sólido - líquido resultando em um líquido com uma concentração de sólidos de cerca de 8,0% e um teor de ABA de 10 ppm. A dita micela foi submetida a uma filtração de fluxo tangencial utilizando um cartucho de filtração com uma membrana de nanofiltração com um tamanho de poro > 1000 Da. Para este proces- so, o pH da micela foi ajustado entre 5 e 9 adicionando um ácido mine- ral. A pressão do processo de filtração foi ajustada entre 4 e 20 bar.

[00172] Após a filtração, cerca de 65% do ABA de partida foi recu- perado, resultando em uma purificação de 2 vezes o teor do ABA de partida. Exemplo 20: Preparação de um extrato purificado de ABA usando fil- tração

[00173] 8kg de figos secos inteiros foram extraídos com 100 kg de água a 70ºC com duas etapas de extração. O material vegetal foi se- parado das micelas por uma filtração sólido - líquido resultando em um líquido com uma concentração de sólidos de cerca de 9,0% e um teor de ABA de 8,9 ppm. A dita micela foi submetida a uma filtração de fluxo tangencial utilizando um cartucho de filtração com uma membrana de nanofiltração com um tamanho de poro > 1000 Da. Para este processo, o pH da micela foi ajustado entre 2 e 5 adicionando um ácido mineral. A pressão do processo de filtração foi ajustada entre 4 e 20 bar.

[00174] Após a filtração, cerca de 60% do ABA de partida foi recu- perado, resultando em uma purificação de 2 vezes o teor do ABA de partida.

Claims (27)

REIVINDICAÇÕES

1. Método para preparar um extrato botânico de ácido abs- císico a partir de materiais vegetais, caracterizado pelo fato de que compreende: a) extrair um material vegetal em uma quantidade entre 500 kg e 2000 kg que contém ácido abscísico usando uma mistura de eta- nol e água em uma proporção entre 50% em volume e 85% em volu- me, e separar o material vegetal sólido da fração líquida, b) concentrar a fração líquida, c) purificar a fração líquida obtida na etapa b) por separa- ção cromatográfica em uma coluna de adsorção usando um etanol miscível em água como um eluente, ou extração líquido - líquido usan- do um solvente que não é miscível em água, ou por filtração de fluxo tangencial a uma pressão entre 4 e 20 bar, e d) evaporar a fase orgânica obtida na etapa c), em que o dito extrato botânico compreende entre 1000 ppm e 4000 ppm de ácido abscísico.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o material vegetal que contém ácido abscísico é sele- cionado a partir do grupo que consiste de figos, cranberries / mirtilos, damascos, bananas, laranjas amargas, casca de laranja, casca de tangerina, casca de limão e casca de toranja.

3. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o material vegetal que contém ácido abscísico é sele- cionado a partir do grupo que consiste de figos e laranjas amargas.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o material vegetal que contém ácido abscísico é figo.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o material vegetal está seco.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 5, caracterizado pelo fato de que o solvente aquoso é selecionado dentre: a) água e b) uma mistura de água e etanol.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a extração é realizada com água como o único solvente.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que um volume de solvente que é usado é equivalente a entre 3 e 6 vezes o peso do material vegetal a ser extraído.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a extração é realizada a uma temperatura entre 50ºC e 75ºC.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a purificação é realizada por separação cromatográfica em uma coluna de adsorção usando um solvente orgânico miscível em água como um eluente.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracteriza- do pelo fato de que o solvente orgânico miscível em água é seleciona- do a partir do grupo que consiste de um álcool alifático inferior com 1 a 4 átomos de carbono, cetona, dioxano, tetrahidrofurano, acetonitrilo e misturas dos mesmos.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracteriza- do pelo fato de que o solvente orgânico miscível em água é um álcool alifático inferior com 1 a 4 átomos de carbono.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que na extração líquido — líqui- do, é utilizado um solvente orgânico que não é miscível em água, se- lecionado dentre o grupo que consiste de butano!l e etil acetato.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracteriza- do pelo fato de que o solvente é etil acetato.

15. Método, de acordo com as reivindicações 1 a 14, carac- terizado pelo fato de que a dita filtração é uma nanofiltração.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 15, caracterizado pelo fato de que a dita etapa de extração a) é feita por percolação.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracteriza- do pelo fato de que a vazão do solvente de extração na dita etapa de percolação está dentro de uma faixa de 500 a 1200 litros por hora.

18. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 17, carac- terizado pelo fato de que o extrato obtido na etapa a) é submetido à pasteurização.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracteriza- do pelo fato de que a dita pasteurização é realizada pelo menos a 92ºC durante pelo menos 78 segundos.

20. Extrato, compreendendo um extrato não purificado na proporção de 99:1 a 1:99, caracterizado pelo fato de que o extrato não purificado corresponde ao extrato obtido após a extração do material vegetal utilizando o solvente aquoso, de acordo com a etapa a) do mé- todo da reivindicação 1, e, em qualquer caso, após a secagem da fra- ção líquida.

21. Composição, caracterizada pelo fato de que compreen- de o extrato da reivindicação 20 e pelo menos um ingrediente adicio- nal.

22. Composição, de acordo com a reivindicação 21, carac- terizada pelo fato de que o ingrediente adicional é selecionado a partir do grupo que consiste de sílica coloidal, talco, fosfato tricálcico, estea- rato de magnésio, carboidratos, maltodextrinas, água, poliálcoois, celu- loses, amidos e misturas dos mesmos.

23. Composição, de acordo com a reivindicação 22, carac- terizada pelo fato de que compreende entre 0,5% em peso e 35% em peso de um ingrediente adicional.

24. Composição, de acordo com a reivindicação 23, carac- terizada pelo fato de que compreende aproximadamente 20% em peso de maltodextrina.

25. Composição, de acordo com a reivindicação 24, carac- terizada pelo fato de que compreende aproximadamente 5% em peso de dióxido de silício ou fosfato tricálcico.

26. Uso do extrato, como definido na reivindicação 20, ca- racterizado pelo fato de que é em uma composição nutricional, farma- cêutica ou cosmética.

27. Extrato de acordo com qualquer uma das reivindicações a 26, caracterizado pelo fato de que é para uso como um medica- mento.