BR112012017564B1 - formulação antimicrobiana sinérgica para tratar ração animal - Google Patents

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Abstract

ormulação antimicrobiana. a invenção refere-se a uma composição antimicrobiana para tratar ração animal, compreendendo: de 1 a 90% em peso, com base no peso total, de um ácido orgânico c~ 1~ a c~ 24~, de 1 a 90% em peso, com base no peso total, de trans-2-hexenal, desde que constitua pelo menos 5% da mistura de ácido orgânico e aldeído, de 0 a 50% em peso1com base no peso total, de termpenos, de 0 a 20%, com base no peso total, de um surfactante e água.

Description

(54) Título: FORMULAÇÃO ANTIMICROBIANA SINÉRGICA PARA TRATAR RAÇÃO ANIMAL (51) Int.CI.: A23K 20/10; A23K 20/111; A23K 50/75; A01N 61/00; A01P 1/00; A01N 37/02; A01N 31/16; A01N 35/02; A01N 31/08; A01N 37/42 (30) Prioridade Unionista: 27/08/2010 US 61/377,819 (73) Titular(es): ANITOX CORPORATION (72) Inventor(es): PIMENTEL, JULIO (85) Data do Início da Fase Nacional: 16/07/2012
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FORMULAÇÃO ANTIMICROBIANA SINÉRGICA PARA TRATAR RAÇÃO ANIMAL.
CAMPO DA INVENÇÃO
É descrita uma formulação antimicrobiana sinérgica contendo uma mistura de ácidos orgânicos, aldeídos alifáticos α,β-insaturados e terpenos antimicrobianos.
ANTECEDENTES
Um estudo recente da Pew Charitable Trusts da Georgetown University sugeriu que doenças derivadas de alimentos custam aos Estados Unidos U$152 bilhões em despesas relacionadas à saúde a cada ano. Uma estimativa de 76 milhões de pessoas nos Estados Unidos adoecem a cada ano com doenças derivadas de alimentos e 5000 morrem, de acordo com o Center of Diseases Control and Prevention (Thomson Reuters 2010, 3/10/2010).
Há um desejo de se encontrar antimicrobianos mais naturais e/ou orgânicos, o que resultou em uma grande quantidade de pesquisa e aumentou o custo das matérias primas devido à baixa disponibilidade comercial destes novos produtos naturai s/orgâni cos.
Vários novos antimicrobianos foram encontrados em plantas. Nós descobrimos que quando capim ou outras plantas são danificadas por corte, aparo ou são expostas a patógenos, a rota da lipoxigenase é ativada e isto leva à produção de compostos que exibem atividade antimicrobiana. Lipoxigenases são enzimas amplamente distribuídas na natureza que catalisam a oxidação de ácidos graxos insaturados, formando hidroperóxidos de ácidos graxos, que atuam como substratos para a síntese de compostos com importância na defesa da planta (Kishimoto, K.; Matsui, K.;
Ozawa, R.; Takabayashi, J. “Direct fungicidal activities of C6-aldeídos are important constituents for defense responses in Arabidopsis against Botrytis cinéreá\ Phytochemistry 2008, vol. 69, 2127-2132; Gardini, F.; Lanciotti, R.; Guerzoni, M.E. “Effect of /ra/7.s-2-hexenal on the growth of Aspergillus flavus in relation to its concentration, temperature and water activity”, Letters in App. Microbiology 2001, vol. 33, 50-55).
de 28/05/2018, pág. 10/39
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Aldeídos são representados pela fórmula geral HCHO, onde R pode ser hidrogênio ou um grupo alifático, aromático ou heterocíclico. Os aldeídos alifáticos α,βinsaturados dc importância comercial significativa são os dc três a dez unidades dc carbono. São moderadamente solúveis em água e a solubilidade reduz conforme a massa molecular aumenta.
Os aldeídos alifáticos α,β-insaturados incluem, propenal, trans-2-butenal, 2metil-2-butenal, 2-metil-(E)-2-butenal, 2-pentenal, trans-2-hexenal, trans-2-hexen-1 -ol, 2-metil-2-pentanal, 2-isopropilpropenal, 2-etil-2-butenaI, 2-etil-2-hexenal, (Z)-3hexenal, 3,7-dimetil-6-octenal, 3,7-dimetil-2,6-octadienal, (2E)-3,7-dimetil-2-6ío octadienal, (2Z)-3,7-dimetil-2,6-octadienal, trans-2-nonenal, (2E,6Z)-nonadienal, 10undecanal, 2-dodecenal e outros. A presente invenção inclui aldeídos alifáticos α,βinsaturados C3 a Cl2.
A quebra de gorduras e fosfolipídeos leva à formação de três aldeídos co seis carbonos e nove carbonos, entre eles (2E,6Z)-nonadienal, trans-2-nonaenal e trans-215 hexenal. Estes compostos são produzidos enzimaticamente pela ação combinada de duas enzimas diferentes da rota de lipoxigenase (LOX) vegetal. Na primeira reação, a LOX catalisa a oxigenação de ácidos graxos poli-insaturados, tais como os ácidos linoléíco e linolênico, com a conseqüente formação de 9- ou 13-hidroperóxidos. Estes compostos são muito instáveis e são clivados em aldeídos e oxo ácidos pela enzima hidroperóxido liase (HPL). Partindo de 9-hidroperoxi, são obtidos trans-2-nonaenal e (2E,6Z)-nonadienal, enquanto que hexanal e trans-2-hexenal são obtidos a partir de derivados 13-hidroperoxi. Na segunda reação, estes aldeídos podem ser convertidos nos correspondentes alcoóis pela ação da álcool desidrogenase (Hubert, J.; Munzbergova, Z.; Santino, A. “Plant volatile aldehydes as natural insecticides against stored-produet
Beetles” Pest Mcmag. Sei. 2008, vol. 64, 57-64).
O composto volátil utilizado nesta invenção é o trans-2-hexenal, que é um aldeído de seis carbonos e ligação dupla, C^HioO e PM = 98,14. O trans-2-hexenal sintético ou natutal, também conhecido como aldeído foliar é considerado um flavorizante natural de acordo com o EU Council Directive 88/388/EEC e US FDA
21CFR101.22.
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Ο trans-2-hexenal está presente em muitas plantas comestíveis tais como maçãs, peras, ucas, morangos, kiwi, tomates, azeitonas, etc. O uso de plantas e extratos de plantas foi bem sucedido em estudos que procuravam por novos antimicrobianos. Por exemplo, o caju foi efetivo contra Helicobacter pilori e S cholerasuis (50-100 ug/ml).
Foi encontrado que os dois componentes principais são o ácido anacárdico e o trans-2hexenal. A atividade inibidora mínima e a atividade biocida mínima do trans-2-hexenal foram determinadas como sendo de 400 e 800 pg/ml, respectivamente (Kubo, J.; Lee, J. R.; Kubo, I. “toti-Helicohacter pilori Agents from the Cashew Apple” J. Agric. Food Chem. 1999, vol. 47, 533-537; Kubo, I. e K. Fujita, “Naturally Occumng Anti10 Salmonella Agents”, J. Agric. Food Chem. 2001, vol. 49, 5750-5754). Kim e Shin encontram que o trans-2-hexenal (247 mg/L) era efetivo contra B. cereus, S. iyphimurium, V. parahaemolyticus, L. monocytogenes, S. aureus e E. coli 0157Ή7 (Kim, Y.S.; Shin, D.H. “Volatile Constituents from the Leaves of Callicarpa japonica Thunb. and Their Antibacterial Activities”, J Agric. Food Chem. 2004, vol. 52, 78115 787). Nakamura e Hatanaka (“Green-leaf-derived C6-aroma compounds wíth potent antibacterial action that act on both gram-negative and gram-positive bactéria”, J Agric. Food Chem. 2002, vol. 50 n° 26, 7639-7644), demonstraram que (3E)-hexenal era efetivo no controle de Staphilococcus aureus, E. coli e Salmonella iyphimurium em um nível de 3 - 30 pg/ml. O trans-2-hexenal inibiu completamente a proliferação tanto de patovares de P. syringae (570 ug/L de ar) quanto de E. coli (930 microgramas/L de ar) (Deng, W.; Hamilton-Kemp, T.; Nielsen, M.; Anderson, R.; Collins, G.; Hilderbrand, D. “Effects of Six-Carbon Aldehydes and Alcohols on Bacterial Proliferation”, J. Agric. Food Chem. 1993, vol. 41, 506-510). Foi observado que o trans-2-hexenal a 250 pg/ml foi efetivo na inibição do crescimento de Phoma mycelium (Saniewska, S. e M.
Saniewski, 2007. “The effect of trans-2-hexenaí and trans-2-nonaenaI on the mycelium growth of Phoma narcissi in vitro”, Rocz. AR. Pozn. CCCLXXXIII, Ogrodn. vol. 41, 189193). Em um estudo para controlar mofo em frutas foi encontrado que a trans-2-hexenal não era fitotóxico para damasco, mas era fitotóxico para peras e nectarinas a 40 pl/L (Neri, F., M. Mari, S. Brigati e P. Bertolini, 2007, “Fungicidal activity of plant volatile compounds for controlling Monolinia laxa in stone fruit”, Plani Disease vol. 91, n° 1,
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30-35). Trans-2-hexenal (12,5 μΙ/L) foi efetivo no controle de Penicillium expansum que causa o mofo azul (Neri, F.; Mari, M.; Menniti, A.; Brigati, S.; Bertolini, P. “Control of Penicillium expansum in pears and apples by trans-2-hexenal vapours”, Postharvest Biol, and Tech, 2006, vol. 41, 101-108. Neri, F.; Mari, M.; Menniti, A.M.; Brigati, S.
“Activity of trans-2-hexenal against Penicillium expansum in 'Conference' pears”, J. Appl. Micrhiol. 2006, vol. 100, 1186-1193). Hamilton-Kemp, et. al, (J. Agric. Food Chem. 1991, vol. 39, n° 5, 952-956) sugeriram que vapores de trans-2-hexenal inibem a germinação de esporos de Botrytis e pólen de maça.
O pedido de patente US n° 2007/0087094 sugere o uso de pelo menos dois compostos GRAS microbiocidamente ativos em combinação com menos de 50% de álcool (isopropanol ou isopropanol/etanol) como microbiocida. O trans-2-hexenal pode ser um dos compostos GRAS. Da mesma forma, Archbold et. al. observaram que o uso de trans-2-hexenal a 0,86 ou 1,71 mmol (100 ou 200 microlitros líquidos do composto por 1,1 L de recipiente, respectivamente) por 2 semanas como fumigação pós colheita de uvas de mesa sem semente, se mostrou promissor para o controle de mofo (Archbold, D.; Hamilton-Kemp, T.; Clements, A.; Collins, R. “Fumigating 'Crimson Seedless’ Table Grapes with (3/4)-2-Hexenal Reduces Mold during Long-term Postharvest Storage”, HortSeience. 1999, vol. 34, n° (4, 705-707).
A patente US 5.698.599 sugere um método para a inibição da produção de micotoxina em um alimento por tratamento com trans-2-hexenal. O trans-2-hexenal inibiu completamente o crescimento de A.jlavus, P. notatum, A. alternate, F. oxisporum, Cladosporium species, B. suhtilis e A. tumerfaciens a uma concentração de 8 ng/L de ar. Quando da comparação do trans-2-hexenal com citral no controle de leveduras (105 CFU/garrafa) em bebidas foi encontrado que 25 ppm de trans-2-hexenal e tratamento térmico (56°C por 20 min) foi equivalente a 100 - 120 ppm de citral. Em bebidas que não foram tratadas termicamente, 35 ppm de trans-2-hexenal foram necessários para as estabilizar (Belletti, N.; Kamdem, S.; Patrignani, F.; Lanciotti, R.; Covelli, A.; Gardini, F. Antirnicrobial Activity of Aroma Compounds against Saccharomyces cerevisiae and Improvement of Microbiological Stability of Soft Drinks as Assessed by Logistic
Regression”, AEM. 2007, vol. 73, n° 17, 5580-5586). Não apenas o trans-2-hexenal foi
5/33 utilizado como antimicrobiano, mas também foi observado como sendo efetivo no controle de insetos. Voláteis (isto é trans-2-hexenal) foram efetivos contra besouros tais como Tibolium castaneum, Rhyzoperíha dom i nica. Sitophilus granaries^ Sitophilus orazyzae e Cryptolestes perrugineus (Elubert, J.; Munzbergova, Z.; Santino, A. Plant volatile aldehydes as natural insecticides against stored-product Beetles”, Pesí Mancig. Sei. 2008, vol. 64, 57-64). A patente US 6.201.026 sugere um aldeído orgânico de três ou mais carbonos para o controle de afídios.
Várias patentes sugerem o uso de trans-2-hexenal como fragrância ou perfume. A patente US 6.596.681 sugere a utilização de trans-2-hexenal como fragrância em um pano para limpeza de superfície. As patentes US 6.387.866, US 6.960.350 e US 7.638.114 sugerem a utilização de óleos essenciais ou terpenos (por exemplo, trans-2hexenal) como um perfume para produtos antimicrobianos. A patente US 6.479.044 descreve uma solução antibacteriana compreendendo um surfactante aniônico, um antibacteriano policatiônico e água, onde um óleo essencial é adicionado como perfume.
Este perfume pode ser um terpeno tal como o trans-2-hexenal ou um outro tipo de terpeno. As patentes US 6.323.171, US 6.121.224 e US 5.911.915 descrevem microemulsões antimicrobianas contendo um surfactante catiônico em que um óleo essencial é adicionado como perfume. Este perfume pode ser vários terpenos incluindo o trans-2hexenal. A patente US 6.960.350 descreve uma fragrância antifúngica onde um efeito sinérgico foi observado quandso diferentes terpenos foram utilizados em combinação (por exemplo, trans-2-hexenal com benzaldeído).
Acredita-se que o modo de ação do trans-2-hexenal seja pela alteração da membrana celular devida à reação do trans-2-hexenal com os radicais sulfidrilas ou rsds de cisteína ou à formação de bases de Schiff com grupos amino de peptídeos e proteínas (Deng, W.; Hamilton-Kemp, T.; Nielsen, M.; Anderson, R.; Collins, G.; Hilderbrand, D. “Effects of Six-Carbon Aldehydes and Alcohols on Bacterial Proliferation”, J. Agric. Food Chem. 1993, vol.41, 506-510). É reportado que o trans-2-hexenal atua como surfactante, mas provavelmente permea por difusão passiva através da membrana plasmática. Uma vez no interior das células, seu radical aldeído α,β-insaturado reage com grupos nucleofílicos biologicamente importantes. O radical aldeído α,β-insaturado
6/33 é conhecido por reagir com grupos sulfídrila, principalmente por 1,4-adição sob condições fisiológicas (Patrignani, F.; Lucci, L.; Belletti, N.; Gardini, F.; Guerzoni, M. E.; Lanciotti, R. Efíects of sub-lethal concentrations of hexanal and 2-(E)-hexenal on membrane fatty acid composition and volatile compounds of Listeria monocytogenes, Staphilococcus aureus, Salmonella enter itidis e Escherichia colF, International J. Food Micro. 2008, vol. 123, 1-8).
O trans-2-hexenal é um inibidor da fosfolipase D, uma enzima que catalisa a hidrólise de fosfolipídeos de membrana, que ocorre durante a maturação e amadurecimento de muitos tipos de frutas e legumes. Desta forma, é sugerido que o trans-2-hexenal pode inibir o amadurecimento (pedido de patente publicado US n° 2005/0031744 Al). E sugerido que a inibição de Salmonella typhimurim e Staphilococcus aureus pelo trans-2 hexenal é devida à ligação de hidrogênio e hidrofóbica de sua partição na bicamada lipídica. A destruição dos sistemas de transporte de elétrons e o desarranjo da permeabilidade da membrana foram sugeridos como outros modos de ação (Gardini, F.; Lanciotti, R.; Guerzoni, M.E. “Effect of trans2-hexenal on the growth of Aspergillus flavus in relation to its concentration, temperature and water activity”, Letters in App. Microhiology. 2001, vol. 33, 50-55). A redução da inibição de P. expansum pode ser devida ao dano nas membranas fúngicas dos conídeos de germinação (Neri, F.; Mari, M.; Menniti, A.; Brigati, S.; Bertolini, P. “Control of Penicillium expansum in pears and apples by trans-2-hexenal vapours”, Postharvest Biol, and Tech. 2006, vol. 41, 101-108; Neri, F.; Mari, M.; Menniti, A. M.; Brigati, S. “Activity of trans-2-hexenal against Penicillium expansum in 'Conference' pears. J. Appl. Micrhiol. 2006, vol. 100, 1186-1193).
Estudos foram realizados para comparar o trans-2-hexenal a outros compostos similares. Deng et al. mostraram que os voláteis insaturados de trans-2-hexenal e trans2-hexen-l-ol exibiram um efeito inibidor maior que os voláteis saturados de hexanal e 1 hexanol (Deng, W.; Hamilton-Kemp, T.; Nielsen, M.; Anderson, R.; Collins, G.; Hilderbrand, D. “Effects of Síx-Carbon Aídehydes and Alcohols on Bacterial Proliferation”, J. Agric. Food Chem. 1993, vol. 41, 506-510). O trans-2-hexenal foi mais ativo que o hexanal, nonanal e trans-2-octenal contra todas as cepas bacterianas
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ATCC (Bisignano, G.; Lagana, M.G.; Trombetta, D.; Arena, S.; Nostra, A.; Uccella, N.; Mazzanti, G.; Saija, A. “In vitro antibacterial activity of some aliphatic aldehydes from Olea europaea L”, FEMS Microbiology Letters. 2001, voí. 198, 9-13). Outros encontraram que o (E)-2-hexenal apresentava concentrações inibidoras de crescimento de fungos menores que o hexanal, 1-hexanol, (E)-2-hexen-l-ol, e (Z)-3-hexen-l-ol como determinado por várias espécies de fungos, basicamente aldeídos > cetonas > alcoóis (Andersen, R.A.; Hamilton-Kemp, T.; Hilderbrand, D.F.; McCraken Jr., C.T.; Collins, R.W.; Fleming, P.D. “Structure—Antifungal Activity Relationships among Volatile C6 and C9 Aliphatic Aldehydes, Ketones, and Alcohols”, J Agric. Food Chem. 1994, vol. 42, 1563-1568). O trans-2-hexenal e 0 ácido hexanóico foram mais efetivos que o hexanol na inibição de salmonella (Kubo, I. e K. Fujita, “Naturally Occurring AntiSalmonella Agents”, J. Agric. Food Chem. 2001, vol. 49, 5750-5754).
Muroi et al. sugerem que o trans-2-hexenal exibe atividade antimicrobiana ampla, no entanto sua atividade biológica (50 a 400 pg/ml) é usualmente não potente o suficiente para considerada para aplicações práticas (Muroi, H.; Kubo, A.; Kubo, 1. “Antimicrobial Activity of Cashew Apple Flavor Compounds”, J. Agric. Food Chem. 1993, vol. 41, 1106-1109). Estudos mostraram que 0 trans-2-hexenal pode potencializar a efetividade de certos tipos de antimicrobianos. Várias patentes sugerem o uso de potencializadores para antibióticos de aminoglicosídeo (US 5.663.152) e potencializadores para 0 antibiótico polimixina (US 5.776.919 e US 5.587.358). Estes potencializadores podem incluir indol, anetol, 3-metilindol, ácido 2-hidroxi-6-Rbenzóico ou trans-2-hexenal. Um efeito sinérgico forte foi observado quando trans-2eptenal, trans-2-nonenal, trans-2-decenal e (F,£)-2,4-decadienal foram testados juntos (proporção 1:1:1:1) contra ATCC e cepas microbianas clinicamente isoladas (Bisignano, G.; Lagana, M.G.; Trombetta, D.; Arena, S.; Nostra, A.; Uccella, N.; Mazzanti, G.; Saija, A. “In vitro antibacterial activity of some aliphatic aldehydes from Olea europaea L”, FEMS Microbiology Letters. 2001, vol. 198, 9-13).
Humanos são expostos diariamente ao trans-2-hexenal pelo consumo de alimentos e bebidas. A exposição de humanos ao trans-2-hexenal é de -350 pg/kg/dia, com 98% derivados de fontes naturais e 2% de flavorizantes artificiais. E improvável
8/33 que ο trans-2-hexenal seja tóxico a humanos, uma vez que níveis tóxicos em ratos são de 30 vezes mais altos que a ingestão normal por humanos (Stout, M.D.; Bodes, E.; Schoonhoven, R.; Upton, P.B.; Travlos, G.S.; Swenberg, J.A. “Toxicity, DNA Binding, and Cell Proliferation in Male F344 Rats following Short-term Gavage Exposures to Trans-2-Hexenal”, Soc. Toxicologic. Pathology, 24 de março de 2008, 1533-1601 online). Em um outro estudo em ratos, a alimentação com trans-2-hexenal em níveis dietéticos de 0, 260, 640, 1600 ou 4000 ppm administrados por 13 semanas, não induziu quaisquer alterações nos parâmetros hematológicos ou pesos nos órgãos. A 4000 ppm ocorreu uma redução no peso corporal e ingestão, no entanto não foi significativa (Gaunt, I.F.; Colley, J. “Acute and Short-term Toxicity Studies on trans-2-Hexenal”, Fd Cosmet. Toxicol. 1971, vol. 9, 775-786).
Mesmo em frutas, uma exposição de vinte e quatro horas a sete dias de peras e maçãs ao trans-2-hexenaí (12,5 μΙ/L) não afetou a aparência, cor, firmeza teor de sólidos solúveis ou acidez tituíável da fruta. Em um grupo treinado para gosto, nenhuma diferença significativa na qualidade organoléptica de maçãs Golden Delicious” não tratadas e tratadas com trans-2-hexenal foi observada, embora a permanência de sabores/odores indesejáveis tenha sido percebida em frutas “Bartlett”, “Abate Fetel” e “Royal Gala” (Neri, F.; Mari, M.; Menniti, A.; Brigati, S.; Bertolini, P. “Control of PeniciUium expanswn in pears and apples by trans-2-hexenal vapours”, Poslharvest Biol, and Tech. 2006, 41, 101-108; Neri, F.; Mari, M.; Menniti, A. M.; Brigati, S. “Activity of trans-1 -exenal against PeniciUium expansum in 'Conference' pears”, J. Appl. Micrhiol. 2006, v.100, 1186-1193).
Uma concentração de 1,8 ug de trans-2-hexenal/ml de ar inibiu a germinação de semente de soja em aproximadamente 100%. A ordem da inibição de crescimento foi trans-2-hexenal > hexanal > trans-2-nonenal, quando sementes em germinação foram expostas a vapores saturados dos aldeídos (Gardner, H.W.; Dornbos Jr., D.L.; Desjardins, A.E. “Hexenal, trans-2-Hexenal, and trans-2-Nonenal Inhibit Soybean, Glycine max, Seed Germination”, J. Agric. Food Chem. 1990, vol. 38, 1316-1320).
O estado da técnica não sugeriu ou observou que o uso de trans-2-hexenal em combinação com ácidos orgânicos aumentou sinergicamente a atividade antimicrobiana
9/33 de ambos os componentes em si. Sugeriu a sinergia com a combinação com óleos essenciais e como potencializadores de antibióticos.
Inibidores de mofo e bactericidas comerciais são compostos de um único ácido orgânico ou uma mistura de ácidos orgânicos e formaldeído. Estes ácidos são principalmente ácido propiônico, ácido benzóico, ácido butírico, ácido acético, e ácido fórmico. Os ácidos orgânicos têm sido os aditivos principais para reduzir a incidência de infecções produzidas por alimentos. O mecanismo pelo qual ácidos graxos de cadeia pequena exercem sua atividade antimicrobiana é o fato de ácidos não dissociados (RCOOH = não-ionizado) serem permeáveis em lipídeos e, desta forma, podem cruzar a parede celular microbiana e se dissociarem no interior mais alcalino do microorganismo (RCOOH —> RCOO + H+) tornando o citoplasma instável para sobrevivência (Van Immerseel, F., J.B. Russell, M.D. Flythe, I. Gantois, L. Timbermont, F. Pasmans, F. Haesebrouck, e R. Ducatelle. 2006, “The use of organic acids to combat Salmonella in poultry: a mechanistic explanation of the efficacy”, Avian Pathology, vol. 35, n° 3, 182188; Paster, N. 1979, “A commercial study of the efficiency of propionic acid and calei um propionate as fungistats in poultry feed”, Poult. Sei. vol. 58, 572-576).
O ácido propiônico é um inibidor de fungos mais potente que o ácido acático, valérico, butírico, lático e benzóico. O ácido propiônico apresemta uma dose efetiva entre 0,05 e 0,25% contrariamente aos outros ácidos orgânicos que requerem mais de 0,5% (Higgins C. e F. Brinkhaus, 1999, “Efficacy of several organic acids against mold”, J Applied Poultry Res. vol.8, 480-487).
Milho alimentício tratado com 0,5% de uma mistura contendo 80% de ácido propiônico e 20% de ácido acético não apresentou qualquer efeito negativo sobre a performance de leitões desmamados (Rahnema, S. e S.M. Neal, 1992, “Preservation and use of chemically treated high-moisture com by weanling pigs”, J. Prod. Agric. vol. 5, iT 4, 458-461). Em frangos de corte, a adição de 0, 0,1, 0,2, 0,3 e 0,4% de ácido acético à água não afetou a performance ou contagem bacteriana intestinal em frangos de corte (Akbari, M.R., H. Kermanshani e G.A. Kalidari, 2004, “Effect of acetic acid administraiion in drinking water on performance growth characteristics and ileal microflora of broiler chickens”, J Sei. A Technol. Agric. &Natur. Resour. 8 (3): 148).
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O ácido pelargônico (ácido nonanóico) é um ácido graxo de ocorrência natural. E um fluido oleoso incolor, que se torna sólido a temperaturas inferiores. Apresente odor fraco em comparação com o ácido butíríco e é quase que insolúvel em água. O ácido pelargônico tem sido utilizado como herbicida não seletivo. Scythe (57% de ácido pelargônico, 3% de ácidos graxos relacionados e 40% de material inerte) é um herbicida de amplo espectro de pós-emergência ou dessecante produzido pela Mycogen/Dow Chemicals. O modo de ação herbicida do ácido pelargônico é devido primeiramente à quebra da membrana durante o período escuro e de luz do dia e segundo a peroxidação orientada por radicais originados durante o período de luz do dia pela clorofila sensibilizada deslocada da membrana tilacóide (B. Lederer, T. Fujimori, Y. Tsujino, K. Wakabayashi e P. Boger, 2004, “Phytotoxic activity of middle-chain fatty acids II: peroxidation and membrane effects”, Pesticide Biochemistry and Physiology 80, 151156).
Chadeganipour e Haims (2001) mostraram que a concentração inibidora mínima (MIC) de ácidos graxos de cadeia média para prevenir o crescimento de M. gypseum era de 0,02 mg/ml de ácido cáprico e para o ácido pelargônico de 0,04 mg/ml em meio sólido e de 0,075 mg/ml de ácido cáprico e de 0,05 mg/ml de ácido pelargônico em meio líquido. Estes ácidos foram tratados independentemente e não como mistura (Chadeganipour e Haims, 2001, “Antifungal activities of pelargonic and capric acid on Microsporum gypseum”, Mycoses vol. 44, n° 3-4, 109-112). N. Hirazawa, et al. (“Antiparasitic effect of médium-chain fatty acids against ciliated Criptocaryon irritans infestation in the red sea bream Pagrus major”, 2001, Aquaculture vol. 198, 219-228) encontraram que o ácido nonanóico, bem como ácidos graxos Cô a Cio eram efetivos no controle do crescimento dos parasitos C. irritans e que Cs, C9 e C19 eram mais potentes. Foi encontrado que 0 Trichoderma harzianum, um biocontrole para cacaueiros, produz o ácido pelargônico como dos muitos produtos químicos, e que era efetivo no controle da germinação e crescimento de patógenos do cacaueiro (Aneja, M., Gianfagna, Τ..Ε, e Hebbar, K.P. 2005, “Trichoderma harzian produces nonanoic acid, an inhibitor of spore germination and mycelial growth of two cacao pathogens”, Physiol. Mol. Plant Pathol. 67,304-307).
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Várias patentes US descrevem o uso de ácido pelargônico como fungidida e bactericida: o pedido de patente publicado US n° 2004/026685 descreve um fungicida para usos em agricultura que é composto de um ou mais ácidos graxos e um ou mais ácidos orgânicos diferentes do ácido graxo. Na mistura dos ácidos orgânicos e ácidos graxos, o ácido orgânico atua como um sinergista potente para o ácido graxo funcionar como fungicida. A patente US 5.366.995 descreve um método para erradicar infecções fúngicas e bacterianas em plantas e para amplificar a atividade de fungicidas e bactericidas em plantas pelo uso de ácidos graxos e seus derivados. Esta formulação consiste em 80% de ácido pelargônico ou seus sais para o controle de fungos de plantas. Os ácidos graxos utilizados são principalmente os de C9 a Cig. A patente US 5.342.630 descreve um novo pesticida para uso vegetal contendo um sal inorgânico que aumenta a eficácia de ácidos graxos Cs a C22. Um dos exemplos mostra um produto em pó com 2% de ácido pelargônico, 2% de ácido cáprico, 80% de talco, 10% de carbonato de cálcio e 5% de carbonato de potássio. A patente US 5.093.124 descreve um fungicida e artropodicida para plantas compreendendo ácidos alfa mono carboxílicos e seus sais. Preferivelmente, 0 fungicida contém ácidos graxos de C9 a Cio, parcialmente neutralizados por metal alcalino ativo tal como potássio. A mistura descrita consiste em 40% de ingrediente ativo dissolvido em água e inclui 10% de ácido pelargônico, 10% de ácido cáprico e 20% de ácidos graxos de coco, todos neutralizados com hidróxido de potássio. A patente US 6.596.763 descreve um método para controlar infecção de pele utilizando ácidos graxos de Có a C^ ou seus derivados. As patentes US6.103.768 eUS 6.136.856 descrevem a utilidade única de ácidos graxos e derivados em erradicar infecções fúngicas e bacterianas existentes em plantas. Este método não é preventivo, mas mostrou efetividade em infecções já estabelecidas. Sharpshooter, um produto comercialmente disponível com 80% de ácido pelargônico, 2% de emulsificante e 18% de surfactante mostrou efetividade contra Penicillium e Bolrylis spp. A patente US 6.638.978 descreve um conservante antimicrobiano composto de um éster de ácido graxo e glicerol, uma mistura binária de ácidos graxos (Có a Cis) e um segundo ácido graxo (Có a Cis) em que 0 segundo ácido graxo é diferente do primeiro ácido graxo para a conservação de alimentos. O documento WO 01/97799 descreve 0 uso de ácidos
12/33 graxos de cadeia média como agentes antimicrobianos. Mostra que um aumento no pH de 6,5 para 7,5 aumentou a MIC dos ácidos graxos de cadeia pequena contendo de 6 a 8 cadeias de carbono.
O ácido pelargônico é utilizado como um componente de uma solução de higienização de superfície de contato com alimentos em estabelecimentos que manipulam alimentos. Um produto da EcoLab contendo 6,49% de ácido pelargônico como ingrediente ativo pode ser utilizado como produto de higienização para todas as superfícies de contato com alimentos (12 CFR 178.1010 b). O FDA liberou o ácido pelargônico como agente flavorizante sintético de alimentos (21 CFR 172.515), como adjuvante, auxiliar de produção e produto de higienização a ser utilizado em contato com alimentos (12 CFR 178.1010 b) e em lavagem ou para auxiliar em descascamento de frutas e legumes (12 CFR 173.315). O ácido pelargônico é incluído na lista do USDA de Substâncias Autorizadas, 1990, seção 5.14, “Fruit and Vegetable Washing Compounds”.
Emulsificante ou surfactante não iônico etoxilado como óleo de rícino etoxilado são produzidos pela reação do óleo com óxido de etileno. Os emulsificantes de óleo de rícino etoxilado são de vários comprimentos de cadeia, dependendo da quantidade de óxido de etileno utilizado durante a síntese. A proporção molar pode variar de 1 molécula de óleo de rícino e de 1 a 2000 moléculas de óxido de etileno produzindo um emulsificante de óleo de rícino etoxilado também chamado de emulsificante de óleo de rícino PEG-x (polietilenoglicol), onde “x” é o número de moléculas de óxido de etileno. (Fruijtier-Polloth, Claudia, 2005, “Safety assessment on polyetilene glycols (PEGs) and their derivatives as used in cosmetic products”, Toxicology^ vol. 214, 1-38). Estes emulsificantes foram amplamente utilizados para solubilizar fármacos insolúveis em água para tratamentos humanos e animais. São compostos estáveis não voláteis, que não se hidrolisam ou deterioram no armazenamento. O óleo de rícino é obtido a partir de sementes de Ricinus communis e consiste principalmente em triglicerídeos dos ácidos ricinoléico, iso-ricinoléico, esteárico e dihidroxiesteárico. O óleo de rícino é 90% de ácido ricinoléico (ácido 12-hidroxioléico), não tóxico, biodegradável, e uma fonte renovável.
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Vários pedidos PCT foram depositados sobre usos de surfactantes de óleo de rícino etoxiíado. O documento WO 99/60865 refere-se a uma emulsão surfactante-água adicionada a ração animal antes ou após tratamento térmico. Esta patente refere-se a uma emulsão para auxuliar em manter ou reduzir a perda de água durante o tratamento térmico. A emulsão consiste em 1-8 partes de água e 0,005 - 0,5 partes de surfactante. O documento WO 97/28896 refere-se ao uso do surfactante para facilitar a dispersão de melaços. O documento WO 96/11585 refere-se ao uso de óleo de rícino etoxiíado em ração animal para aumentar o valor nutricional da ração. O documento WO 95/28091 refere-se à adição de óleo de rícino etoxiíado em ração para aumentar a disponibilidade das substâncias nutritivas em ração animal seca convencional de maneira a aumentar o crescimento animal e reduzir a mortalidade. Estas quatro patentes mencionam a adição de surfactante de óleo de rícino etoxiíado, preferivelmente uma emulsão, para aumentar a digestibilidade de substâncias hidrofóbicas presentes em ração animal e não mostram qualquer benefício na produção da ração ou na prevenção de crescimento de mofo na ração.
Terpenos, que são Genericamente Reconhecidos como Seguros (GRAS “Generally Recognized as Safe”) estão amplamente difundidos na natureza, principal mente em plantas como constituintes de óleos essenciais. Seu bloco constituinte é o hidrocarboneto isopreno (CjHs)^ Exemplos de terpenos incluem citral, pineno, nerol, b-ionono, geraniol, carvacrol, eugenol, carvona, terpeniol, anetol, câmfora, mentol, limoneno, nerolidol, farnesol, fítol, caroteno, esqualeno, timol, tocotrienol, álcool perílico, bomeol, mirceno, simeno, careno, terpenona, linalool e outros. Geraniol, tocotrienol, álcool perílico, b-ionona e d-limoneno, suprimem a atividade de I-IMG-COA redutase, uma etapa limitante de taxa na síntese do colesterol, e modestamente reduzem os níveis de colesterol em animais (Elson C.E. e S.G. Yu, 1994, “The Chemoprevention of Câncer by Mevalonate-Derived Constituents of Fruits and Vegetables”, J Nulr. vol. 124, 607-614). D-limoneno e geraniol reduzem tumores de mama (Elgebede, J.A., C.E. Elson, A. Qureshi, M.A. Tanner e M.N. Gould, 1984, “Inhíbition of DMBA-Induced Mammary Câncer by Monoterpene D-limonene”, Carcinogensis vol. 5, n° 5, 661-664; Elgebede, J.A., C.E. Elson, A. Qureshi, M.A.
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Tanner e M.N. Gould, 1986, “Regression of Rat Primary Mammary Tumors Following Dietary D-limonene”, J. Nat'l Câncer Inslitute vol. 76, n° 2, 323-325; Karlson, J., A.K. Borg, R. Unelius, M.C. Shoshan, N. Wilking, U. Ringborg e S. Linder, 1996, “Inhibítion of Tumor Cell Growth By Monoterpenes In Vitro: Evidence of a Ras-Independent Mechanism of Action”, Anticancer Drugs vol. 7, n° 4, 422-429) e suprimiram o crescimento de tumores transplantados (Yu, S.G., P.J. Anderson e C.E. Elson, 1995, “The Effícacy of B-ionone in the Chemoprevention of Rat Mammary Carcinogensis”, J. Agri. Food Chem. vol. 43, 2144-2147).
Foi observado que terpenos inibem o crescimento in vitro de bactérias e fungos (Chaumont J.P. e D. Leger, 1992, “Campaign Against Allergic Moulds in Dwellings, Inhibitor Properties of Essential Oil Geraníum ‘Bourbon’, Citronellol, Geraniol and Citral”, Ann. Pharm. Fr vol. 50, n° 3, 156-166), e alguns parasitas internos e externos (Hooser, S.B., V.R. Beasly e J.J. Everitt, 1986, “Effects of an Insecticidal Dip Containing D-limonene in the Cat”, J. Am. Vel. Med. Assoe, vol. 189, n° 8, 905-908). Foi observado que geraniol inibe o crescimento de cepaas de Candida albicans e Saccharomyces cerevisiae pelo aumento da taxa de perda de potássio e ruptura da fluidez da membrana (Bard, M., M.R. Albert, N. Gupta, C.J. Guuynn e W. Stillwell, 1988, “Geraniol Interferes with Membrane Functions in Strains of Candida and Saccharomyces”, Lipids vol. 23, n° 6, 534-538). B-ionona apresente atividade antifúngica que foi determinada pela inibição da germinação de esporos e inibição do crescimento em agar (Mikhlin E.D., V.P. Radina, A.A. Dmitrossky, L.P. Blinkova, e L.G. Button, 1983, “Antifungal and Antimicrobial Activity of Some Derivatives of BetaIonone and Vitamin A”, Prikl Biokhim Mikrobiol, vol. 19, 795-803; Salt, S.D., S. Tuzun e J. Kuc, 1986, “Effects of B-ionone and Abscisic Acid on the Growth of Tobacco and Resistance to Blue Mold, Mimicry the Effects of Stem Infection by Peronospora Tabacina”, Adam Physiol. Molec. Plant Path vol. 28, 287-297). Terprenona (geranilgeranilacetona) apresenta um efeito antibacteriano sobre H pilori (Ishii, E., 1993, “Antibacterial Activity of Terprenone, a Non Water-Soluble Antiulcer Agent, Against Helicohacíer Pilori, Int. .1 Med. Microbiol. Virol. Parasitol. Infect. Dis. vol. 280, n° 1-2, 239-243). Soluções de 11 terpenos diferentes foram efetivas na inibição do
15/33 crescimento de bactérias patogênicas em testes vitro (Kim, J., M. Marshall e C. Wei, 1995, “Antibacterial Activity of Some Essential OÍ1 Components Against Five Foodborne Pathogens”, J. Agric. Food Chem. vol. 43, 2839-2845). Diterpenos, isto é, tricorabdal A (proveniente de R. Trichocarpa), mostraram um efeito antibacteriano muito forte contra H. pilori (Kadota, S., P. Basnet, E. Ishii, T. Tamura e T. Namba, 1997, “Antibacterial Activity of Trichorabdal A from Rahdosia Trichocarpa Against Helicobacter Pilor?\ Zentralbl. Bakíeriol vol. 287, n° 1 63-67). Owawunmi, 1989 (“Evaluation of the Antimicrobial Activity of Citral”, Letters in Applied Microbiology vol. 9, n° 3, 105-108), mostrou que um meio de crescimento com mais de 0,01% de citral reduziu a concentração de E. coli, e a 0,08% ocorreu um efeito bacterícida. A patente US 5.673.468 ensina uma formulação de terpeno, a base de óleo de pinho, utilizada como um produto de limpeza desinfetante ou antisséptico. A patente US 5.849.956 ensina que um terpeno encontrado em arroz apresenta atividade antifúngica. A patente US 5.939.050 ensina um produto antimicrobiano de higiene oral com uma combinação de 2 ou 3 terpenos que mostrou um efeito sinérgico.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Um objetivo da invenção é aumentar o efeito microbiocida de ácidos orgânicos em ração animal inlcuindo pelo menos 10% em peso, com base no peso total dos ácidos orgânicos, do aldeído trans-2-hexenal. A composição antimicrobiana pode ser uma solução aquosa contendo um ácido orgânico ou uma mistura de vários ácidos orgânicos, em combinação com o aldeído.
A composição pode conter adicionalmente um surfactante não iônico etoxilado.
A composição pode conter adicionalmente terpenos antimicrobianos ou óleos essenciais.
Os ácidos orgânicos podem conter de 1 a 24 carbonos na cadeia, e podem ser saturados, insaturados, cíclicos e podem ser substituídos por grupos funcionais contendo radicais halo, hidroxil, amino, éter ou éster.
O surfactante pode ser um óleo de rícino etoxilado com um HLB (equilíbrio hidrofílico-lipofílico - “hidrophilic-lipophilic balance”) de 4 a 18. Pode compreender
16/33 também outros surfactantes não iônicos, iônicos ou anfotéricos ou outros surfactantes de propriedades similares tais como Tween.
Os terpenos da composição podem compreender dissulfeto de alila, timol, citral, eugenol, carvacrol, limoneno e carvona, ou misturas destes.
Em adição ao trans-2-hexenal, a composição pode conter um aldeído volátil resultante da rota da lipoxigenase incluindo o (2E,6Z)-nonadienal, trans-2-nonenal, e outros aldeídos alifáticos α,β-insaturados, isto é, propenal, trans-2-butenal, 2-metil-2butenal, 2-metil-(E)-2-butenal, 2-pentenal, trans-2-hexen-l-ol, 2-metil-2-pentanal, 2isopropilpropenal, 2-etil-2-butenal, 2-etil-2-hexenal, (Z)-3-hexenal, 3,7-dimetil-6io octenal, 3,7-dimetil-2,6-octadienal, (2E)-3,7-dimetil-2-6-octadíenal, (2Z)-3,7-dimetiI2,6-octadienal, trans-2-nonenal, (2E,6Z)-nonadienal, 10-undecanal. 2-dodecenal e outros aldeídos alifáticos α,β-insaturados com propriedades antimicrobianas e flavorizantes, bem como seus respectivos alcoóis e ácidos.
Uma mistura da invenção contém de 1 a 90% em peso de ácidos orgânicos e de
5 a 99% de trans-2-hexenal.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de ácido acético, preferivelmente de 10 a 55% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de ácido butírico, preferivelmente de 10 a 55% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso ácido propiônico, preferivelmente de 10 a 55% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de ácido pelargônico, preferivelmente de 5 a 10% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de ácido lático, preferivelmente de
10 a 40% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de ácido fórmico, preferivelmente de 10 a 55% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de ácido succínico, preferivelmente de 20 a 30% em peso.
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A mistura pode conter de 0 a 90% em peso ácido láurico, preferivelmente de 1 a 10% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de ácido mirístico, preferivelmente de 1 a 5% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de ácido caprílico, preferivelmente de 5 a 20% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de ácido levulínico, preferivelmente de 1 a 20% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 90% em peso de aldeídos alifáticos α,βίο insaturados voláteis, preferivelmente de 1 a 30% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 50% em peso por volume de terpenos, preferivelmente de 0,5 a 7% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 50% em peso de um terpeno antimicrobiano, preferivelmente de 0,5 a 7% em peso.
A mistura pode conter de 0 a 20% em peso por volume de surfactante, preferivelmente de 0,5 a 10% em peso.
A mistura pode conter de 0,5 a 10% em peso de óleo de rícino etoxilado surfactante com de 1 a 200 moléculas de etileno, preferivelmente de 1 a 5,0% em peso.
A mistura da invenção pode conter de 0,5 a 10% em peso de surfactante com 20 propriedades similares às do surfactante de óleo de rícino etoxilado, preferivelmente de a 5,0% em peso
A mistura da invenção pode conter de 0 a 97% em peso de água, preferivelmente de 1 a 20% em peso.
A composição é efetiva contra vários fungos presentes em alimentos e nos 25 ingredientes principais de alimentos.
A composição é efetiva contra várias bactérias presentes em alimentos e nos ingredientes principais de alimentos.
A composição é efetiva contra várias bactérias e fungos presentes na água.
A composição é efetiva contra micróbios nocivos para a produção de álcool a partir de fermentação de celulose, amido ou açúcares.
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Um outro objetico da invenção é prover um método para o tratamento de ração animal, compreendendo: a mistura da ração animal com uma quantidade efetiva de uma composição antimicrobiana compreendendo de 1 a 90% em peso, com base no peso total, de um ácido orgânico Ci a C24, de 10 a 55% em peso, com base no peso total, de um aldeído alifático α,β-insaturado, por exemplo, trans-2-hexenal, desde que constitua pelo menos 5% em peso da mistura de ácido orgânico e aldeído, de 0 a 30% em peso, com base no peso total, de terpenos, de 0 a 10% em peso, com base no peso total, de um surfactante, e água.
DESCRIÇÃO DAS REALIZAÇÕES PREFERIDAS
Definições
Um “volume percentual” de um componente é baseado no volume total da formulação ou composição na qual o componente está incluído.
Um “ácido orgânico” da composição pode ser o ácido fórmico, acético, propiônico, butírico, pelargônico, lático e outros ácidos graxos em C2 a C24 ou mono-, di-, ou triglicerídeos contendo ácidos graxos em C( a C24. Estes ácidos graxos compreendendo ácidos graxos de cadeia pequena, cadeia média, cadeia longa ou triglicerídeos de cadeia pequena, cadeia média ou cadeia longa.
Um aldeído alifático α,β-insaturado da composição pode ser propenal, trans-2butenaí, 2-metil-2-butenal, 2-metil-(E)-2-butenal, trans-2 hexenal, 2-pentenal, trans-2hexen-l-ol, 2-metil-2-pentanal, 2-isopropilpropenal, 2-etÍI-2-butenal, 2-etil-2-hexenal, (Z)-3-hexenal, 3,7-dimetil-6-octenal, 3,7-dimetil-2,6-octadienal, (2E)-3,7-dimetil-2-6octadienal, (2Z)-3,7-dimetil-2,6-octadienal, trans-2-nonenal, (2E,6Z)-nonadÍenal, 10undecanal, 2-dodecenal e outros aldeídos alifáticos α,β-insaturados com propriedades antimicrobianas e flavorizantes, bem como seus respectivos alcoóis e ácidos.
Um “terpeno antimicrobiano” da composição pode compreender, dissulfeto de alila, citral, pineno, nerol, geraniol, carvacrol, eugenol, carvona, anetol, câmfora, mentol, limoneno, farnesol, caroteno, timol, borneol, mirceno, terpenona, linalool, ou misturas destes. Mais especifícamente, os terpenos podem compreender dissulfeto de alila, timol, citral, eugenol, limoneno, carvacrol, e carvona, ou misturas destes.
19/33
Pelo termo “quantidade efetiva” de um composto quer-se significar uma quantidade capaz de realizar a função do composto ou propriedade em que a quantidade efetiva é expressa, tal como não tóxica, mas uma quantidade suficiente para prover os benefícios antimicrobianos desejados. Desta forma, uma quantidade efetiva apropriada pode ser determinada por um especialista na técnica utilizando apenas experimentação de rotina.
As formulações podem variar não apenas na concentração dos componentes principais, isto é, os ácidos orgânicos, mas também quanto ao tipo de aldeídos, terpenos, surfactantes e concentração de água utilizados. Esta invenção pode ser modificada de várias maneiras pela adição ou retirada dá formulação de terpeno, tipo de ácido orgânico, aldeído e tipo de surfactante.
O termo “efeito sinérgico” ou “sinergia” significa aumento do efeito conservante quando os ingredientes são adicionados como uma mistura em vez de como componentes individuais.
Composição
Uma composição da present invenção compreende uma quantidade efetiva de ácidos orgânicos de 1 a 24 carbonos na cedeia e aldeídos alifáticos α,β-insaturados, por exemplo, trans-2-hexenal.
Os terpenos antimicrobianos, extratos vegetais ou óleos essenciais contendo terpenos, podem ser utilizados, bem como os terpenos mais purificados. Os terpenos são prontamente disponíveis comercialmente ou podem ser produzidos por vários métodos conhecidos na técnica, tais como extração por solvente ou extraçao/destilação por vapor e síntese química.
O surfactante é não iônico, incluindo surfactante de óleo de rícino etoxilado com de 1 a 2000 ligações de polietileno, preferivelmente de 20 a 100.
A composição preferida contém de 1 a 90% em peso de ácidos orgânicos e de 1 a 30% de trans-2-hexenal, wonde o ácido orgânico pode ser de 10 a 55% em peso de ácido acético, de 10 a 55% em peso de ácido propiônico, de 10 a 40% em peso de ácido lático, ou de 5,0 a 10% em peso de ácido pelargônico, e misturas destes. A composição
20/33 preferida pode conter também de 0,5 a 7% em peso de terpenos, de 0,5 a 10% em peso de surfactante e de 1,0 a 10% em peso de água.
Métodos
A presente invenção é efetiva contra bactérias e fungos. É aplicada de tal forma que provê uma distribuição uniforme e homigênea da mistura por todo o alimento.
A presente invenção pode ser aplicada à água.
A presente invenção pode ser aplicada à matéria prima antes de entrar no misturador.
A presente invenção pode ser aplicada às matérias primas não misturadas no misturador.
A presente invenção pode ser aplicada durante a mistura dos ingredientes brutos.
A presente invenção pode ser aplicada por um bocal de aspersão.
Um dos objetivos é o de controlar o nível de micróbios no alimento e produtos alimentícios. Várias misturas de ácidos orgânicos, terpenos e aldeídos resultaram em formulações que mostraram efetividade contra bactérias em tampão e alimento. Um outro objetivo é o de formular um antimicrobiano com compostos de ocorrência natural ou compostos seguros para uso. Todos os produtos químicos utilizados na invenção estão atualmente aprovados para usos em humanos como antimicrobianos, amplificadores de sabor e perfumaria.
Há resultados inesperados, isto é, sinergia além dos efeitos aditivos, quando o trans-2-hexenal é adicionado aos ácidos orgânicos e terpenos.
Por todo este relatório, faz-se referência a várias publicações, as quais são incorporadas neste pedido como referência em sua totalidade.
EXEMPLOS Exemplos 1 e 2
21/33
Procedimento: as seguintes formulações foram preparadas para estudos in vitro em duplicata. Todos os reagentes eram de pureza mais alta e de grau de laboratório. Para o ácido acético, foi preparada uma solução a 56%. O ácido succínico foi diluído em água para uma solução a 5% devido a problemas de solubilidade. Dois produtos comerciais, uma mistura de ácido fórmico/propiônico e uma mistura de formaldeído/ácido propiônico, foram testados para propósitos de comparação.
FORMULA* ÇÕES QUÍMICAS PARA OS EXEMPLOS 1 E 2
PRODUTOS QUÍMICOS % dos Produtos Químicos na Formulação
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Eugenol 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 0
Carvacrol 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 0
CO60* (surfactante) 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 0
Ácido pelargônico 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 0
Ácido acético (56%) 22,5 32,5 22,5 22,5 22,5 37,5 22,5 12,5 32,5 12,5 0 0
Ácido lático 20,0 0 0 0 0 0 0 10,0 40,0 0 0 0
Ácido propiônico 30,0 30,0 30,0 30,0 30,0 30,0 30,0 50,0 0 40,0 42,5 10,0
Ácido fórmico 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 70,0
Ác. succínico (5%) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 20,0 30,0 0
Ácido iáuríco 0 0 0 0 0 0 20,0 0 0 0 0 0
Ácido mirístico 0 0 0 0 0 5,0 0 0 0 0 0 0
Ácido caprílico 0 0 0 0 20,0 0 0 0 0 0 0 0
Ácido levulínico 0 0 0 20,0 0 0 0 0 0 0 0 20,0
trans-2- hexenal 0 10,0 20,0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
TOTAL 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100, 0
22/33 *CO-60 é surfactante de óleo de rícino etoxilado com 60 unidades de etileno.
Uma suspensão de Salmonella typhimurium foi adicionada a dois tubos de teste contendo 0,05% (500 ppm) de cada formulação. Os tubos foram submetidos a vórtice, incubados à temperatura ambiente por 24 horas e então a solução foi plaqueada em SMA (Agar para Métodos Padrão - “Standard Methods Agar”) por 48 horas antes da contagem das colônias de Salmonella.
Resultados: A tabela a seguir mostra que várias das formulações foram efetivas no controle do crescimento de Salmonella.
Resultados: Estudos 1 e 2.
24 H cfu/ml (0,05%)
Tratamento Estudo 1 % Redução Estudo 2 <>/ /o Redução
Controle 1093 1900
Fórmula 1 0 100,0 37 98,0
Fórmula 2 7 99,4 10 99,5
Fórmula 3 13 98,8 0 100,0
Fórmula 4 33 97,0 130 93,2
Fórmula 5 27 97,5 133 93,0
Fórmula 6 83 92,4 163 91,4
Fórmula 7 143 86,9 240 87,4
Fórmula 8 20 98,2 70 96,3
Fórmula 9 3 99,7 0 100,0
Fórmula 10 147 86,6 160 91,6
Fórmula 11 197 82,0 283 85,1
Fórmula 12 0 100,0 0 100,0
Acido fórmico/prop iônico 9 100,0 0 100,0
Formaldeído (33%) 0 100,0 0 100,0
Conclusões: As formulações resultaram em diferentes respostas contra Salmonella. As formulações com níveis mais altos de trans-2-hexenal e ácido lático
23/33 mostraram uma melhor performance que todas as outras com excessão dos produtos a base de formaldeído e ácido fórmico.
Exemplo 3
Procedimento; A partir dos estudos in vitro anteriores, seis formulações foram 5 escolhidas para testar sua efetividade contra Salmonella em alimentos. Uma mistura de formaldeído/ácido propiônico foi testada com propósitos de comparação. Ração para frango foi alterada com um inoculo de Salmonella typhimurium de torta de carne e osso. A ração contaminada foi então tratada com 1, 2 ou 3 kg/MT das formulações listadas abaixo. Após 24 horas, 10 g de sub-amostras da ração tratada foram suspendidos em 90 ío ml de tampão Butterfield. Diluições foram plaqueadas em agar XLT-4 e incubadas a 37°C por 48 horas antes da contagem das colônias de Salmonella. As fórmulas utilizadas para este experimento são mostradas na tabela a seguir.
FORMULAÇÕES QUÍMICAS PARA 0 EXEMPLO 3
Produtos Químicos % dos Produtos Químicos na Formulação
FÓRMULAS 1 2 3 8 9 12
Eugenol 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 0
Carvacrol 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 0
CO60* 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 0
Ácido pelargônico 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 0
Ácido acético (56%) 22,5 32,5 22,5 12,5 32,5 0
Ácido lático 20,0 0 0 10,0 40,0 0
Ácido propiônico 30,0 30,0 30,0 50,0 0 10,0
Ácido fórmico 0 0 0 0 0 70,0
Ác. succínico (5%) 0 0 0 0 0 0
Ácido levulínico 0 0 0 0 0 20,0
trans-2-hexenal 0 10,0 20,0 0 0 0
TOTAL 100,0 100, 0 100, 0 100, 0 100, 0 100,0
*CO-60 é surfactante de óleo de rícino etoxilado com 60 unidades de etileno.
24/33
Resultados: A tabela a seguir mostra que várias das formulações foram efetivas no controle do crescimento de Salmonella.
Tratamento Kg/MT cfu/g % REDUÇÃO
Fórmula 1 0 2540
1 2010 21
2 1730 32
3 1385 45
Fórmula 2 0 1860
1 895 52
2 583 69
3 273 85
Fórmula 3 0 2220
1 815 63
2 420 81
3 60 96
Fórmula 8 0 2080
1 1670 20
2 1540 26
3 1325 36
Fórmula 9 0 2005
1 1313 34
2 1470 27
3 1150 43
Fórmula 12 0 2080
1 1010 51
2 230 89
3 93 96
Formaldeído (33%) 0 1180
1 0 100
2 0 100
3 0 100
Conclusões: As fórmulas contendo trans-2-hexenal mostraram maior efetividade contra Salmonella. As formulações com alto nível de trans-2-hexenal
25/33 resultaram em efetividade similar em comparação com os produtos a base de formaldeído (formaldeído 33%) e ácido fórmico.
Exemplo 4
Procedimento: Cinco formulações foram escolhidas para testar sua efetividade 5 contra Salmonella typhimurium, ração de frango foi alterada com um inoculo de Salmonella typhimurium de torta de came e osso. A ração contaminada foi então tratada com 1, 2 ou 3 kg/MT das formulações listadas abaixo. Após 24 horas, 10 g de subamostras da ração tratada foram suspendidos em 90 ml de tampão Butterfield. DilutiçÕes foram plaqueadas em agar XLT-4 e incubadas a 37°C por 48 horas antes da ío contagem das colônias de Salmonella. Amostras adicionais foram tomadas 7 e 14 dias após o tratamento para contagem de Salmonella. As fórmulas utilizadas são mostradas na tabela a seguir.
FORMULAÇÕES QUÍMICAS PARA O EXEMPLO 3
Produtos Químicos % dos Produtos Químicos na Formulação
16 17 18 19 20
Eugenol 5,00 0,00 0,00 0,50 1,00
Carvacrol 5,00 0,00 0,00 0,50 1,00
CO60* 5,00 0,00 0,00 0,50 1,00
Ácido pelargônico 5,00 5,00 5,00 5,00 1,00
Ácido acético (56%) 30,00 45,00 20,00 47,50 53,00
Acido propiônico 20,00 20,00 50,00 26,00 24,00
trans-2-hexenal 30,00 30,00 25,00 20,00 15,00
100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
*CO-60 é surfactante de óleo de rícino etoxiíado com 60 unidades de etileno.
Resultados: A tabela a seguir mostra que várias das formulações foram efetivas no controle de Salmonella.
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Efeito de Produtos Químicos sobre Salmonella a 1, 7 e 14 dias pós-tratamento
Fórmula Taxa do trata ment 0 Salmonella a24H SalmoneUa a 7 Dias Salmonella a 14 Dias
Kg/MT cfu/g ração % redução cfu/g ração % redução cfu/g ração % reduçã 0
Fórmula 16 0 l,2E+05 l,8E+05 6,4E+ 04
1 2,8E+04 77 ; 2,3E+04 86,9 1,5E+ 04 77,1
2 l,2E+04 90 6,3E+03 96,4 4,3E+ 03 93,2
3 2,0E+03 98 l,0E+03 99,4 3,3E+ 02 99,5
Fórmula 17 0 l,5E+05 l,5E+05 1,4E+ 05
1 5,0E+04 66 3,5E+04 76,9 3,5E+ 04 75,8
2 l,4E+04 91 6,0E+03 96,0 2,3E+ 03 98,4
3 3,3E+02 100 3,3E+02 99,8 l,0E+ 03 99,3
Fórmula 18 0 l,3E+05 l,5E+05 1,4E+ 05
1 3,7E+04 72 2,7E+04 82,3 2,5E+ 04 81,4
2 7,3E+03 94 l,2E+04 92,1 7,7E+ 03 94,4
J 7,3E+03 04 3,3E+03 97,8 6,7E+ 02 99,5
Fórmula 19 0 l,4E+05 l,8E+05 8,2E+ 04
1 5,5E+04 59 7,2E+04 60,8 2,7E+ 04 66,9
2 6,3E+03 95 2,0E+04 88,9 1,1E+ 04 86,5
3 3,7E+03 97 4,0E+03 97,8 6,3E+ 92,2
27/33
03
Fórmula 20 0 l,3E+05 2,0E+05 8,0E+ 04
1 6,5E+04 48 7,5E+04 62,4 4,0E+ 04 49,8
2 2,8E+04 77 2,7E+04 86,4 1,2E+ 04 85,5
3 9,7E+03 92 l,4E+04 93,2 l,0E+ 04 87,6
Conclusões: Todas as formulações resultaram em uma redução na contagem de Salmonella na ração. As fórmulas com baixo nível de trans-2-hexanal (< 15%) não foram tão efetivas quanto as outras.
Exemplo 5
Procedimento: Formulações #17 e #18 contendo trans-2-hexenal foram comparadas com seis outras formulações contendo quantidades menores deste aldeído, mas com níveis aumentados de ácido lático. Ração de frango foi alterada com um inoculo de Salmonella typhimurium de torta de carne e osso. A ração contaminada foi ío então tratada com 1, 2 ou 3 kg/MT das formulações listadas abaixo. Após 24 horas, 10 g de sub-amostras da ração tratada foram suspendidos em 90 ml de tampão Butterfield. DiluçÕes foram plaqueadas em agar XLT-4 e incubadas a 37°C por 48 horas antes da contagem das colônias de Salmonella. Amostras adicionais foram tomas 7 e 14 dias após o tratamento por por contagem de Salmonella. As fórmulas utilizadas são mostradas na tabela a seguir.
FORMULAÇÕES QUÍMICAS PARA O EXEMPLO 5
Produtos Químicos % dos Produtos Químicos na Formulação
FÓRMULAS 17 18 21 22 23 24 25 26
Eugenol 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,75 0,00 0,00
Carvacrol 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,75 0,00 0,00
CO60* 0,00 0,00 0,00 5,00 5,00 5,00 8,00 0,00
Ácido pelargônico 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 0,00
Ácido acético (56%) 45,00 20,0 0 38,0 0 40,0 0 35,0 0 30,00 36,00 0,00
28/33
trans-2-hexenaI 30,00 25,0 0 5,00 5,00 5,00 10,00 10,00 0,00
Ácido propiônico 20,00 50,0 0 12,0 0 15,0 0 10,0 0 10,00 15,00 10,00
Ácido lático 0,00 0,00 40,0 0 30,0 0 40,0 0 38,50 26,00 0,00
Ácido fórmico (88%) 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 90,00
TOTAL 100,0 100, 0 100, 0 100, 0 100, 0 100,0 100,0 100,0
*CO-60 é surfactante de óleo de rícino etoxilado com 60 unidades de etileno.
Resultados: A tabela a seguir mostra que várias das formulações foram efetivas no controle de Salmonella.
Efeito de Produtos Químicos sobre Salmonella a 1, 7 e 14 dias pós-tratamento
Fórmula Taxa trat. Salmonella no Dia 1 Salmonella a 7 Dias Salmonella a 14 Dias
Kg/M T cfu/g ração % redução cfu/g ração % redução cfu/g ração % reduçã 0
Fórmula 17 0 l,75E+0 5 1,11E+05 1,07E+0 4
1 3,93E+0 4 77,52 2,67E+04 97,60 3,33E+0 4 68,75
2 1,OOE+0 3 99,43 3,33E+02 99,70 l,00E+0 3 90,63
3 6,70E+0 2 99,62 Ο,ΟΟΕ+ΟΟ 100,00 6,67E+0 2 93,75
Fórmula 18 0 l,87E+0 5 6,77E+04 8,33E+0 3
1 7,07E+0 4 62,21 l,13E+04 83,25 l,00E+0 3 88,00
2 9,67E+0 3 94,83 4,00E+03 94,09 3,33E+0 2 96,00
n 6,00E+0 3 96,79 6,67E+02 99,01 Ο,ΟΟΕ+Ο 0 100,00
29/33
Fórmula 21 0 l,17E+0 5 1,31E+05 l,40E+0 4
1 6,60E+0 4 43,59 3,40E+04 74,05 7,33E+0 3 47,62
2 2,30E+0 4 80,34 2,30E+04 82,44 3,50E+0 3 75,00
3 8,67E+0 3 92,59 8,67E+03 93,38 l,33E+0 3 90,48
Fórmula 22 0 2,30E+0 5 2,08E+05 7,00E+0 3
1 l,65E+0 5 28,41 4,13E+04 80,13 3,33E+0 3 52,38
2 6,97E+0 4 69,71 l,30E+04 93,75 l,50E+0 3 78,57
3 2,13E+0 4 90,72 4,33E+03 97,92 l,00E+0 3 85,71
Fórmula 23 0 1,13E+O 4 l,66E+05 5,33E+0 3
1 1,O1E+O 4 10,88 7,07E+04 57,52 2,00E+0 3 62,50
2 5,95E+0 4 47,50 2,83E+04 82,97 l,33E+0 75,00
3 3,00E+0 4 73,53 5,67E+03 96,59 l,0)E+0 3 81,25
Fórmula 24 0 l,75E+0 5 9,70E+04 5,00E+0 3
1 5,73E+0 4 67,14 3,70E+04 61,86 l,00E+0 3 80,00
2 3,10E+0 4 82,23 l,27E+04 86,94 l,00E+0 3 80,00
3 2,20E+0 4 87,39 4,00E+03 95,88 6,67E+0 2 86,67
Fórmula 25 0 2,36E+0 5 8,20E+04 2,27E+0 4
1 1,11E+0 5 52,97 2,37E+04 71,14 6,67E+0 3 70,59
2 9,13E+0 4 61,30 7,00E+03 91,46 4,00E+0 3 82,35
30/33
3 4,10E+0 4 82,63 3,00E+03 96,34 6,67E i 0 2 97,06
Fórmula 26 0 l,53E+0 5 5,15E+04 l,13E+0 4
1 8,40E+0 4 45,10 l,17E+04 77,35 3,67E+0 3 67,65
2 3,37E+0 4 78,00 6,00E+03 88,35 2,33E+0 3 79,41
3 l,53E+0 4 89,98 6,67E+02 98,71 1,33E+O 3 88,24
Conclusões: Pela redução do nível de trans-2-hexenal (para 5 % - 25 %) e aumento do nível de ácido lático (para 26% - 40%), uma resposta similar foi obtida em comparação com os altos níveis de trans-2-hexenal (30%).
Exemplo 6
Procedimento: Quatro de sete formulações testadas no Exemplo 5 demonstraram um efeito satisfatório contra Salmonella typhimurium. Uma nova formulação (fórmula 27) e um antimicrobiano baseado em formaldeído (33% de formaldeído) foram testados neste estudo. Ração de frango foi alterada com um inoculo de Salmonella typhimurium de torta de came e osso. A ração contaminada foi então tratada com 1, 2 ou 3 kg/MT das formulações listadas abaixo. Após 24 horas, 10 g de sub-amostras da ração tratada foram suspendidos em 90 ml de tampão Butterfíeld. As diluições foram plaqueadas em agar XLT-4 e incubadas a 37°C por 48 horas antes da contagem das colônias de Salmonella. Amostras adicionais foram tomadas 7, 14 e 21 dias após o tratamento para contagem de Salmonella. As fórmulas utilizadas são mostradas na tabela a seguir.
FORMULAÇÕES QUÍMICAS PARA O EXEMPLO 6
Produtos Químicos % dos Produtos Químicos na Formulação
FÓRMULAS 17 18 22 25 27 HCH O
CO60* 0,00 0,00 5,00 8,00 10,0 0 10,00
Ácido pelargônico 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 0,00
31/33
Ácido acético (56%) 45,00 20,0 0 40,0 0 36,0 0 40,0 0 0,00
trans-2-hexenal 30,00 25,0 0 5,00 10,0 0 5,00 0,00
Ácido propiônico 20,00 50,0 0 15,0 0' 15,0 0 10,0 0 10,00
Ácido lático 0,00 0,00 30,0 0 26,0 0 30,0 0 0,00
Formaldeído (37%) 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 90,00
TOTAL 100,0 100, 0 100, 0 100, 0 100, 0 100,0
*CO-60 é surfactante de óleo de rícino etoxilado com 60 unidades de etileno.
Resultados: A tabela a seguir mostra que várias das formulações foram efetivas no controle de Salmonella.
Efeito de Produtos Químicos sobre Salmonella a 1, 7 e 14 Dias Pós-Tratamento
Tratamento Taxa Salmonella a 24 horas Salmonella Dia 7 Salmonella Dia 14 Salmonella Dia 21
Fórmula Dose kg/MT cfu/g % redução cfu/g % redução cfu/g % redução cfu/g % redução
17 0 56408 11969 25889 4150
1 14600 74,1 4550 62,0 11400 56,0 1633 60,7
2 3900 93,1 1400 88,3 4833 81,3 267 93,6
3 2900 80,1 1150 90,4 1300 95,0 0 100,0
18 0 56408 11969 25889 4150
1 18400 67,4 2200 81,6 10533 59,3 1300 68,7
2 5400 90,4 2900 75,8 5133 80,2 200 95,2
1800 96,8 1317 89,0 1767 93,2 33 99,2
22 0 56408 11969 25889 4150
1 43000 23,8 10217 14,6 17667 31,8 2567 38,1
2 31000 45,0 6450 46,1 15167 41,4 800 80,7
3 26600 52,8 2133 82,2 11500 55,6 233 94,4
25 0 56408 11969 25889 4150
1 19450 65,5 7217 39,7 13233 48,9 1300 68,7
2 9500 83,2 1967 83,6 9333 63,9 367 91,2
3 5900 89,5 767 93,6 8867 65,7 450 89,2
32/33
27 0 56408 11969 25889 4150
1 33000 41,5 10017 16,3 13600 47,5 633 84,7
2 24150 57,2 9367 21,7 11933 53,9 367 91,2
3 17150 69,6 4983 58,4 7367 71,5 267 93,6
HCHO* 0 56408 11969 25889
1 150 99,7 0 100,0 0 100,0
2 150 99,7 0 100,0 0 100,0
3 0 100,0 0 100,0 0 100,0
* Mistura formaldeído (33%)/ácido propiônico
Conclusões: Todas as formulações resultaram em efetividade acima de 90% 2 ou 3 semanas após o tratamento.
Exemplo 7
Este experimento foi para determinar se a Fórmula #18 apresenta atividade residual após o tratamento. Ração de franco comercial foi molda com um moinho Romer para um tamanho de partícula fino de maneira a se assegurar uma mistura uniforme do inoculo na ração. A ração (sub-amostras de 1 kg) foi transferida para ío frascos de vidro de 1 galão que foram randomicamente associados aos tratamentos. O conteúdo de um frasco de vidro de um galão foi adicionado ao misturador de ração de escala laboratorial e misturado por 1-2 minutos, antes do tratamento com 0, 1, 2, ou 3 kg/ton da Fórmula #18. Foi realizada uma réplica por nível de tratamento. Após o tratamento, a ração foi re-contaminada com 10 g de inoculo de Salmonella e misturada por mais 2-3 minutos. O conteúdo do misturador foi transferido para o frasco de vidro de um galão original, tampado e deixado em repouso por 1 dia à temperatura ambiente (23-24°C). Foram obtidas amostras da ração (três sub-amostras de 10 g por tratamento) às 24 horas, 7 e 14 dias após a re-contaminação utilizando-se técnicas assépticas. As sub-amostras foram transferidas para garrafas de diluição contendo 100 ml de tampão
Butterfield. Diluições em série foram plaqueadas em 2 placas separadas de agar XLT-4. As placas de agar foram incubadas a 37°C por 48 horas antes da contagem de Salmonella.
33/33
Foi obtida uma média dos níveis de Salmonella nas três amostras em réplica/tratamento nos diferentes intervalos de tempo e isto é reportado na tabela a seguir.
Efetividade % Contra Re-contaminação de Salmonella
Fórmula #18 (dose) Dial Dia 7 Dia 14
1 kg/MT 63 70 54
2 kg/MT 75 45 87
3 kg/MT 82 | 73 98
Observa-se que a Fórmula #18 reteu a efetividade por 14 dias após a ração ter sido contaminada com Salmonella.
Será claro aos especialistas na técnica que um número de modificações e variações podem ser realizadas na presente invenção sem se afastarem do escopo da io invenção. Pretende-se que o relatório e exemplos sejam considerados apenas exemplificativos e não restritivos, com o verdadeiro escopo e espírito da invenção sendo indicados pelas reivindicações anexas.
1/1

Claims (9)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composição antimicrobiana caracterizada pelo fato de conter com base no peso total: de 1 a 90% em peso de um ou de uma mistura de ácidos orgânicos selecionados do grupo consistindo em ácido acético, ácido lático, ácido pelargônico, e misturas destes, de 10% a 55% em peso de trans-2-hexenal, de 0 a 30 % em peso de terpenos, de 0 a 10 % em peso de surfactante, e água.
  2. 2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de compreender de 0,5 a 7% em peso de terpenos, de 0,5 a 10% em peso de surfactante.
  3. 3. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato do surfactante ser um surfactante de óleo de rícino etoxilado com um HLB (equilíbrio hidrofílicolipofílico) de 4 a 18.
  4. 4. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato do surfactante ser um surfactante de óleo de rícino etoxilado com de 1 a 200 moléculas de etileno.
  5. 5. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato do terpeno ser selecionado do grupo consistindo em alil dissulfeto, citral, pineno, nerol, geraniol, carvacrol, eugenol, carvona, anetol, câmfora, mentol, limoneno, farnesol, caroteno, timol, borneol, mirceno, terpeneno, linalool, e misturas destes.
  6. 6. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de conter 5% em peso de ácido pelargônico, 11 - 25% em peso de ácido acético, 20 - 50% em peso de ácido propiônico e 10 - 30 % em peso de trans-2-hexenal.
  7. 7. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de conter 5% em peso de ácido pelargônico, 11% em peso de ácido acético, 50% em peso de ácido propiônico e 25% em peso de trans-2-hexenal.
  8. 8. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de conter 10 55% em peso de ácido acético, 10 - 55% em peso de ácido propiônico ou 5 - 10% em peso de ácido pelargônico.
  9. 9. Método de tratamento de ração animal caracterizado pelo fato de compreender:
    a mistura da ração animal com uma quantidade efetiva de uma composição antimicrobiana conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 8.
    Petição 870180045674, de 28/05/2018, pág. 11/39
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