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" Procédé d'isolement et de purification de l'Ampicilline "
Des procédés d'isolement et de purifica- tion de l'Ampicilline, dans lesquels on n'utilise pas d'eau nais on ne travaille qu'au sein de sol- vants organiques, n'ont pas été jusqu'à présent dé- crits dans la littérature.
Si l'on utilise pour l'isolement et la purification de 11,Ampicilline des milieux plus ou
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moins aqueux, on se heurte aux inconvénients sui- vants l'Ampioilline est assez bien soluble dans l'eau, surtout en présence d'impuretés. Il est vrai que l'on peut évaporer avec précautions des filtrats aqueux par petites charges et parvenir ainsi à de nouveaux précipités, liais l'expérience contre que ces précipités sont très impurs et ne se prêtent ensuite que fort mal à une purification.
En ortre des solutions aqueuses de l'Ampicilline sont détruites par la Pénicillinase (provenant de germes de l'atmosphère) et par suite d'autres in- fluences non encore élucidées.
La Demanderesse vient de trouver que l'on peut isoler sous forme pure l'Ampicilline à partir d'une solution plus ou Moins aqueuse, comme on l'obtient par exemple par dissolution et hydrogé-
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nolyse de la :-carbe'benzyloxy-arpici.line, par e4- - paration ou groupe N-caroobenzyloxy (Doyle, Pocker# Nayler, Smith : Soc. 162, page 1444) en solution aqueuse et qui la plupart du tempu no contient pas
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l'acide 6arinopnicillanioue comme impureté.
Pour cet isolement, on règle le pH de la solution à 4,0- 4,8, on la soumet à un séchage par congélation (lyophilisation), on met le résidu de cette lyophi- lisation en suspension dans un solvant organique, on ajoute 1 à 2 moles d'une trialkylamine, on agite quelques heures, on sépare les impuretés par filtra- tion ; et ensuite l'on évapore le filtrat, ce qui permet d'obtenir le sel de trialkylamine de l'Ampi- cilline, ou bien on incorpore h ce filtrat une quan- tité calculée d'un acide, ce qui détermine la préei-
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pitation de l'Ampicilline libre sous forme pure.
Hais au cour de la production de l'Ampicilline, il Peut aussi, selon la nature du procède choisi, pour cette production, se poser le problème d'élimi- ner de l'Ampicilline formée, - l'acide 6-aminopéni- cillanique qui n'a pas réagi. Du fait que ces deux substances présentent l'une et l'autre dos carac- téristiques très voisines de solubilité, il est très difficile de parvenir à une telle séparation. La Demanderesse vient de trouver que, dans le cas où parmi les impuretés accompagnant l'Ampicilline se trouve l'acide 6-aminopénicillanique, on peut pro- céder de la façon décrite ci-dessus, mais avec cotte restriction que l'on no doit pas utiliser d'excès do trialkylamine. On doit tout au contraire dans ce cas utiliser exactement 1 molede trialkylamine par mole d'Ampicilline.
L'Ampicilline passe alors pure- ment et simplement en solution sous forme do sel de trialkylamine, alors que l'acide 6-aminopénicilla- nique peut, Eventuellement avec d'autres impuretés, âtre séparé par filtration.
Comme solvants organiques (pour recevoir le sel de trialkylamine de l'Ampicilline), oonvien'- nent le chlorure de méthylène, le chloroforme, l'a- cétone, le méthanol, la diméthylformiamide, l'acétoni- trile, l'éthanol, le diméthylsulfoxyde et l'éther monométhylique du glycol. Le chlorure de méthylène @ et le chloroforme se sont avérés être particulière- ment intéressants.
Conviennent comme trialkylamines celles qui comportent dans leur molécule 3 à 12 atomes de
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carbone, cocne par exemple : la trim6thylamino, la n éthyldi 4th:rlu!:line, la tri I:thylm:1ine, la tripro- pylamine, etc. La Decnderccsc préfère particuliè- rement la tridthylamiiie.
Jour précipiter l'Ampicilline libre, on utilise den ac,le,3 dont le sol de trialkylamines correspondant cit soluble dans le solvant utilisé.
Par exemple, le sel de triîthylaraine de l'acide para- toluène-aulfonique est bien soluble dans le chlorure de méthylène. La combinaison : chlorure de méthylène, triéthylaaine, acide para-toluène. sulPoniquo uppar- 'tiunt donc à une forme préférée do réalisation du procédé de la présente invention.
L'agitation du résidu de la lyophilisa- tion dans un solvant organique, en prononce d'une trialkylamine, s'effectue selon l'état de surface du produit, durant une ou plusieurs heures à la température ambiante ou h une température légèrement
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plus faible, et de préférence à 0 C.
On précipite l'Ampicillino libre, au moyen d'un acide, à des températures écales ou inférieu-
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res à 0 C, et du préférence ontre .15 C et -35 0.
EXHALE 1
On mot 20 g de produit de lyophilisation, qui d'après un essai microbiologique sur Baot. subtilis contient 7,3 d'Ampicilline, en suspension dans 150 cm3 de chlorure de méthylène ; on rofroi- dit la suspension à 0 C environ, puis on ajoute 4,2 g de trithylamine, on agite une heure et demie à 0 C environ, on filtre et essore ensuite sous vide ;
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on ajoute lentement au filtrat à -20 0, tout en agi tant, 13,1 ml d'une solution anhydre 1,4 N d'a-
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cide toluèno-eulfoniquo dana le chlorure de tadthy- lène.
L'Ampicilline précipite aussitôt et au bout d'une courte période de repos on pout la filtrer,. l'essorer (loua vide, la laver avec du chlorure de méthylène et de l'acétone froide et la sécher.
Quantité obtenue : 7,2 g d'Ampicilline (pureté égale à 97,8 %, d'après une détermination microbiologique faite sur Bact. sub.).
EXEMPLE 2
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On dissout 5 e de sol pur de triethylanine et d'Ampicilline dans 50 ml de chlorure de méthylène à 0 C environ ; puis on refroidit la solution à -20 C environ, on ajoute goutte à goutte et tout en agitant une solution de 0,8 mole d'acide para-toluène- sulfonique (contenant de l'eau de cristallisation) dans 10 ml d'acétone, on laisse ensuite reposer \ 5 minutes à la même température, on filtre et essore sous vide, on lave avec de l'acétone froide et l'on sèche.
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Quantité obtenue : 3, 2 g d'AmPioÏllînu (pureté égale à 8, 5 , d'après une détermination nicrobiologique sur Tact. sub.).
EX::1,rPLE
On dissout 20 g de produit de lyophili- sation, qui d'après un essai micro biologique sur Bact. subtilis contient 7,3 g d'Ampicilline, comme décritdans 1' Exemple 1, dans un mélange de chlo-
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rure de mthyl:n^ et de triéthylr3raine ; on sépare
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les impuretés par filtration, on évapore le filtrat sous vide et on sèche le résidu.
Quantité obtenue : 9,2 g du col do trié-
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thylanine et d'Aapiclllinu (pureté d'environ 10(7 ô ; cela correspond à 7,1 g d'Ampicillil1o).
3XfllHi3 On met un r:1ülu.n,.'ù de 1,75 g d' Ar.'lpicilline (présentant contre Bact. nubtilis une activité do 1500 Unités) et l,Cfz C d'acide aminopanicillanique en suspension dans 400 ni de chlorure do méthylène absolu ; on refroidit la suspension à 00 environ et ajoute 0,505 c de tri<thylaniine. On agite en- suite durant 5 heures a 0 C, on filtra et osoore sous vide le précipité obtenu, on le lave avec du chlorure de méthylène et on le sèche.
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Quantité d'acide aulnopénicillanique obtenue : 1,20 g.
Activité contre Bact. pubtilin 130 uni- tés.
On évapore totalement le filtrat, résul-
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tant de la o4puratïon du précipita ci-dessus, dans un évaporateur rotatif ut l'on sèche le résidu (sel de triéthylanine et d'Aspicilline). '*'#> Quantité obtenue :2,1 g (soit 93,4 % du
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rendement théorique ; activité contre -%et. subt.l,o, rapportée par le calcul à l'Anpicilline libre : 1550 unités).