AT400576B - Verfahren zur herstellung von beta-(d)-2',3'-didesoxyinosin - Google Patents
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Description
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Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein verbessertes Verfahren zur Herstellung von ss- (D)-2', 3'- Didesoxyinosin.
In der Regel wird 2', 3'-Didesoxycytidin (ddC) aus 2'-Desoxycytidin hergestellt 1, 2. Dieses Verfahren stellt eine allgemeine Methode zur Synthese von 2, 3'-Didesoxynucleosiden dar. Die Ausgangsmaterialien für diese Synthese sind jedoch extrem teuer und nicht in grossen Mengen erhältlich. Die für die Desoxygenierung erforderlichen Reagentien sind ausserdem ziemlich kostspielig.
Ein noch nicht veröffentlichtes Verfahren zur Herstellung von 2', 3'-Didesoxynucleosiden, die der Formel
EMI1.1
entsprechen, worin B für eine Purin- oder Pyrimidinbase und R für H oder eine Hydroxyschutzgruppe stehen, umfasst die folgende Schritte : (a) Umwandlung eines -Carboxy- -butyrolactons in ein 5-0-Hydrox- yschutzgruppe-Methyl- -butyrolacton, (b) Umwandlung des Zwischenproduktes aus Stufe (a) in die 5-0- Hydroxyschutzgruppe-Methyl-2', 3'-didesoxypentofuranose, (c) Umwandlung des Zwischenproduktes aus (b)
EMI1.2
3'-didesoxypentafuranose,pentofuranose, (e) Umsetzung des Zwischenprodukts aus (d) mit einer aktivierten Purin- oder Pyrimidinbase und (f) Gewinnung des Didesoxynucleosids aus Stufe (e).
Das entstehende Produkt umfasst eine Mischung aus ss- und a-Anomeren, die durch Verwendung von chromatographischen und Kristallisationsverfahren, die auf dem Gebiet der vorliegenden Erfindung bekannt sind, getrennt werden können.
Es besteht jedoch nach wie vor ein Bedarf an Verfahrensverbesserungen, bei weichen das im allgemeinen aktive oder aktivere ss-Anomere des (D) -2', 3'-Desoxynucleosids selektiv erhalten werden kann, ohne die kostenaufwendige und zeitraubende chromatographische Trennung oder die Kristallisationstrennung der ss- und a-Anomeren durchführen zu müssen.
Diese Verbesserungen sind dann besonders wünschenswert, wenn grosse Mengen der angestrebten anomeren Form hergestellt werden sollen.
EMI1.3
9H-purin. Dieses Verfahren, bei dem Adenosindesaminase verwendet wird, bewirkt im Stoffwechsel der höheren Tiere den Abbau der Purine zu den ausscheidbaren Hypoxanthinen. Inosin kann aus Adenosin durch Inkubierung mit gereinigter Adenosindesaminase hergestellt werden, die ihrerseits aus biologischen Quellen, wie z. B. aus Rindereingeweiden, gewonnen werden können. Bei diesen Anwendungen, wo natürliche Substrate beteiligt sind, ist es bekannt, dass das Enzym nur ein Enantiomer des racemischen Paares desaminiert. Beim Einsatz anomerer Mischungen strukturell modifizierter Nucleoside als Substrat ist bisher eine enzymatische Spezifität nicht bekannt.
Spezifität auf der Basis der bekannten enantiomeren Selektionsverfahren des Enzyms erlauben keinen Rückschluss auf eine Spezifität bei anomeren Mischungen.
Zusammenfassend kann daher gesagt werden, dass die vorliegende Erfindung ein wirksames Verfahren zur selektiven Herstellung von ss- (D)-2', 3'-Didesoxyinosin der Formel
EMI1.4
worin I für die Purinbase Inosin steht, darstellt. Bei diesem Verfahren wird eine a-, ss-anomere Mischung von (D) -2', 3'-Didesoxyadenosin der selektiven enzymatischen Desaminierung unterworfen, wobei nur in dem ss- (D) -Isomer die Adenosinbase in das Inosin umgewandelt wird. Die entstehende Verbindung ist leicht isolierbar und durch einfache Umkristallisation zu reinigen.
Im Detail betrifft die vorliegende Erfindung ein verbessertes Verfahren zur selektiven Herstellung von ss- (0) -2', 3'-Didesoxyinosinder Formel
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EMI2.1
in welcher I für die Purinbase Inosin steht, bei weichem Verfahren folgende Schritte vorgesehen sind : - 1. In einer anomeren Mischung von ci-und ss- (D)-2', 3'-Didesoxyadenosin wird das ss- (D) -2', 3'-
Didesoxyadenosin-Anomere durch Kontakt der anomeren Mischung mit dem Enzym Adenosindesami- nase selektiv desaminiert, worauf - 2. Gewinnung des in Stufe 1 hergestellten ss- (D) -2', 3'-Didesoxyinosins erfolgt.
Ein typisches Verfahren zur Herstellung der in Stufe 1 verwendeten anomeren Mischung umfasst folgende Schritte : (a) Überführung eines (D)--y-Carboxy--y-butyrolactonsder Formel
EMI2.2
in ein 5-0-Hydroxyschutzgruppe-Methyl--y-butyrolacton der Formel
EMI2.3
worin R für eine Hydroxyschutzgruppe steht, durch Reaktion der Verbindung der Formel 1 mit einem Carboxylgruppen-reduzierenden Mittel und anschliessenden Schutz der entstehenden Hydroxymethylgruppe, (b) Überführung des Zwischenprodukts der Formel 2 von Stufe (a) in die 5-0-Hydroxyschutzgruppe- Methyl-2, 3-Didesoxy- (D) -pentofuranose der Formel
EMI2.4
in welcher R für eine Hydroxyschutzgruppe steht, durch Reaktion der Verbindung der Formel 2 mit einem Carboxylgruppen-reduzierenden Mittel, (c) Überführung des Zwischenprodukts der Formel 3 aus Stufe (b)
in die 1-0-Aktivierungsgruppe-5-0- Hydroxyschutzgruppe-2, 3-didesoxy- (D)-pentofuranose der Formel
EMI2.5
in welcher R für eine Hydroxyschutzgruppe und A für eine O-Aktivierungsgruppe steht, die ausgewählt ist aus den Alkylcarbonyl-, Arylcarbonyl-, Alkylthiocarbonyl-, Arylthiocarbonyl-, Alkylsulfonyl-, Arylsulfo-
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nyl- und Carbonatgruppen, in welchen die Alkylgruppierung eine gegebenenfalls substituierte Cl-C3- Alkylgruppe und die Arylgruppierung eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe bedeutet und der Substituent an der Alkyl- und Arylgruppierung ausgewählt sein kann aus 1 bis 3 Halogen-und Ci-C3- Alkoxygruppen,
durch Umsetzung der Verbindung der Formel 4 mit einem der obigen Gruppe A entsprechenden Acylierungs- oder Sulfonierungs- oder Carbonylierungsmittel, (d) Überführung der Zwischenverbindung der Formel 4 aus Stufe (c) durch Reaktion mit einer Verbindung der Formel HX oder mit einem Trimethylsilylhalogenid zur Gewinnung der 1-Abspaltgruppe-5-0- Schutzgruppe-2, 3-didesoxy- (D)-pentofuranose der Formel
EMI3.1
in welcher R für eine Hydroxyschutzgruppe und X für eine aus F, CI, Br und J ausgewählte Abspaltgrup- pe steht, (e) Umsetzung der Zwischenverbindung der Formel 5 aus Stufe (d) mit einem aktivierten Adeninderivat, in weichem die Base Adenin durch Reaktion der Amino- oder Hydroxygruppen des Adeninkerns mit einer als Aktivierungsverbindung dienenden Silylierungs-,
Acetylierungs- oder Benzoylierungsverbindung aktiviert worden war, gegebenenfalls in Gegenwart einer Bronsted- oder einer Lewissäure und in
Gegenwart eines inerten organischen Lösungsmittels und (f) Gewinnung der anomeren Mischung von a- und ss- (D) -2', 3'-Didesoxyadenosin nach Abspaltung der 5-
0-Hydroxyschutzgruppe von dem Zwischenprodukt der obigen Stufe (e).
Das Ausgangsmaterial (D)--y-Carboxy--y-butyrolacton wird am besten aus L-Glutaminsäure unter Verwendung üblicher, in der chemischen Literatur3 beschriebener Verfahren gewonnen.
Eine Kombination chemischer Reaktionen ergibt eine geeignet blockierte 2, 3-Didesoxypentafuranose 3.
Diese Verbindung und ihre Derivate sind aus der Literatur bekannt.
So umfasst die Umwandlung des Ausgangsmaterials (D)--)'-Carboxy--y-butyrotacton in ein 5-0-Hydrox- yschutzgruppe-Methyl-butyrolacton in Stufe (a) die Reduktion der-y-Carboxygruppe zu einer Hydroxyme- thylgruppe und die anschliessende Reaktion. mit einem Reagenz, das eine Hydroxyschutzgruppe liefert, Beispielsweise wurden die Reduktion der-y-Carboxygruppe und der Schutz der entstehenden-y-Hydroxmethylgruppe mit Hilfe der Benzylgruppe (PhCH2) in Stufe (a) durch aufeinanderfolgende Reaktion der Ausgangsverbindung der Formel 1 mit BHs'. SMez und PhCH2Br durchgeführt.
Die primäre Alkoholfunktionsgruppe kann als Ether, wie als Trialkyl-, Dialkylaryl-, Diaryldialkyl- oder Triarylsilylether, als gegebenenfalls substituierter Benzyl-, gegebenenfalls substituierter Alkyl- oder Allylether, oder als Ester, wie z. B. als Benzoyl-, Mesitoyl-, Pivaloylester, gegebenenfalls substituierter Essigsäureoder Carbonsäureester geschützt werden. Zu diesem Gebiet vergleiche "Protective Groups in Organic Synthesis"T. W. Greene, John Wiley, New York 1981, bezüglich detaillierter Beschreibung von Schutzgruppen und der damit im Zusammenhang stehenden chemischen Reaktionen.
Bei einer bevorzugteren Ausführungsform der Erfindung wurde als Hydroxyschutzgruppe für die primäre Alkoholgruppe in der 5Stellung die Benzyl- und insbesondere die Benzylgruppe verwendet, da diese Gruppen stabil sind und ihre Herstellung allgemein bekannt ist.
Die Umwandlung des 5-0-Hydroxyschutzgruppe--y-butyrolactons in die 5-0-Hydroxyschutzgruppe-2, 3- Didesoxypentafuranose der Formel 3 in Stufe (b) wurde durch Reaktion des Zwischenprodukts der Formel 2 mit NaH und HC02 Et sowie anschliessende Reaktion mit HCI erreicht.
Es ist für den Fachmann einzusehen, dass jedes mögliche Reduktionsmittel zur Durchführung entweder der einzelnen oder beider Stufen (a) und (b) unabhängig voneinander (d. h. aufeinanderfolgend) oder gleichzeitig verwendet werden kann. Abgesehen von BH3. SMe2 können als günstige Reduktionsmittel in
EMI3.2
(OMe) 3,LiAIH (O-t-Bu) 3, (Sia) 2BH (Disiamylboran) oder andere Dialkylborane und dergl. verwendet werden. Disiamylboran ist wegen seiner günstigen Handhabung und seiner Reaktionsfreudigkeit das bevorzugte Reduktionsmittel.
Die in Stufe (c) stattfindende Überführung der Zwischenverbindung der Formel 3 in die Zwischenverbindung der Formel 4, die eine "aktivierte" Hydroxygruppe in der Position C (1) des 2, 3-Didesoxypentofuran- ose-Ringsystems trägt, kann durch Einwirkung irgendeines Reagens erfolgen, das zur Überführung dieser Hydroxygruppe in eine Gruppe dient, die leicht bei Reaktion mit HCI oder HBr oder vorzugsweise TMSBr
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oder TMSCI (+) katalytische Mengen von TMSI durch Cl oder Br verdrängt werden kann.
("TMS"steht für die Trimethylsilylgruppe.) Eine solche Gruppe, die auf diese Weise ersetzt werden kann, umfasst 0-
EMI4.1
ierte Ci-Cs-Atkyigruppe und die Arylgruppierung eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe bedeutet und der Substituent an der Alkyl- und Arylgruppierung ausgewählt sein kann aus 1 bis 3 Halogen-und C,- C3-Alkoxygruppen. Insbesondere kann diese Aktivierungsgruppe ausgewählt sein aus den (zu den obigen) entsprechenden Acetoxy- und Benzoylaoxygruppen und kann vor allem Acetoxy sein. Stufe (c) wurde geeigneterweise unter Verwendung eines Essigsäureanhydrid/Pyridin-Reagens durchgeführt.
In Stufe (d) wurde die Verdrängung der funktionellen 1-0-Aktivierungsgruppe durch eine Abspaltgruppe Ci oder Br durch Behandlung von Verbindung 4 mit HCI (oder HBr) in Methylenchlorid bei niedriger Temperatur erreicht, wodurch die Furanosylhalogenide 5a und 5b erhalten wurden, die in Lösung als eine Mischung von Anomeren (a und ss) vorliegen.
In Stufe (e) dieses Verfahrens wurde die Zwischenverbindung der Formel 5 aus der obigen Stufe (d) mit einem Adenin umgesetzt, das durch Reaktion mit einem bekannten Aktivierungsmittel in ein silyliertes, acetyliertes oder benzoyliertes oder anders acyliertes Adenin übergeführt worden war. Die Umsetzung mit dem aktivierten Adenin erfolgte in Gegenwart eines geeigneten polaren oder unpolaren Lösungsmittels und gegebenenfalls in Gegenwart einer Lewis-Säure, wie beispielsweise Borhalogeniden, Aluminiumhalogeniden, Titanhalogeniden, Zinn (lV)-chlorid, Zinkhalogeniden, Trimethylsilylbromid,-jodid, Triflat oder irgend einer anderen für Glycosylierungsreaktionen bekanntermassen verwendten Säure, oder in Gegenwart einer Bronsted-Säure, wie Chlorwasserstoff, Bromwasserstoff oder Jodwasserstoff.
Insbesondere ist in dieser Stufe (e) die Verwendung von silyliertem Adenin in Gegenwart nicht-polarer Lösungsmittel, wie beispielsweise Benzol, Toluol, Tetrachlorkohlenstoff, Dichlormethan, Dichlorethan und Chloroform empfehlenswert. Beispiele geeigneter polarer Lösungsmittel sind Tetrahydrofuran und Dioxan, Nitrile, wie Acetonitril, Dimethylformamid und Dimethylsulfoxid. Ein Beispiel für ein durchführbares Verfahren von Stufe (e) ist in Brundidge et al., US-PS 4 625 020 beschrieben, wo die Kupplung von silylierten Pyrimidinen, bei weichen aktive Wasserstoffe von Hydroxy- und Aminogruppen durch Silylgruppen blockiert sind, wie etwa durch die Trimethylsilylgruppe, mit einem 2-Desoxy-2-fluoroarabinofuranosylhalogenid angegeben ist.
Bei Anwendung dieses genannten Verfahrens auf Stufe (e) wurde eine Adeninbase, bei der alle aktiven Aminowasserstoffe durch die Trimethylsilylgruppe blockiert sind, mit einem Zwischenprodukt der Formel 5 umgesetzt.
So ergab die Behandlung des Zwischenprodukts der Formel 5 mit einem oben angegebenen silylierten Adenin in Methylenchlorid und Chloroform das geschützte (D)-2', 3'-Didesoxyadenosin als Mischung der Anomeren.
Als Abänderung von Stufe (c), in welcher "A" für Acetyl steht, kann die Zwischenverbindung aus Stufe (c) mit einem aktivierten Adeninderivat in Gegenwart einer Lewis-Säure wie in Stufe (e) umgesetzt werden, um das 5-0-Hydroxyschutzgruppe2', 3'-Didesoxyadenosin-Produkt ohne den Vorgang von Stufe (d) zu erhalten.
Wie oben erwähnt, kann in einer weiteren, bevorzugteren Ausführungsform dieses Verfahrens die 1-0Acetyl-5-0-benzoyl-2, 3-pentofuranose der Formel 4 aus Stufe (c) zuerst mit einem Bromtrimethylsilan und anschliessend mit einem bis-Silyladenin in Kontakt gebracht werden, um in einer einzigen Stufe ohne Isolierung des Zwischenprodukts 1-Brom-5-0-benzoyl-2, 3-pentofuranose aus Stufe (d) das 5'-0-Benzoyl- 2', 3'-Didesoxyadenosin als Produkt der kombinierten Stufen (d) und (e) zu gewinnen.
In Stufe (f) des Verfahrens zur Herstellung der Ausgangsverbindung für das erfindungsgemässe Verfahren wurde das 5'-0-Benzoyl-2', 3'-Didesoxyadenosin einer chemischen Reaktion zur Entfernung der 5- 0-Schutzgruppe unterworfen. Geeignete Verfahren zur Abtrennung dieser Schutzgruppe sind auf dem Gebiet dieser Erfindung allgemein bekannt. Beispiele hiefür sind in der oben erwähnten Literaturstelle "Protective Groups in Organic Synthesis" von T. W. Greene, John Wiley, New York, 1981 beschrieben.
Insbesondere wurde 5'-0-Benzoyl-2', 3'-didesoxyadenosin mit Ammoniak-gesättigtem Methanol behandelt, um 2', 3'-Didesoxyadenosin als Mischung der a-und ss-Anomeren zu erhalten.
In Stufe 1 des vorliegenden erfindungsgemässen Verfahrens wird die Mischung von a-und ss- (D) -2', 3'.
Didesoxyadenosin mit dem Enzym Adenosindesaminase (ADA) behandelt, das seinerseits aus Kalbsmilz in neutralem wässerigem Medium isoliert worden war. Dieses Enzym katalysiert selektiv die Deaminierung des ss-Anomeren des (D)-2', 3'-Didesoxyadenosins, um quantitativ das ss- (D)-2', 3'-Didesoxyinosin zu ergeben.
Obwohl in den tatsächlichen Beispielen Adenosindesaminase (ADA) aus Kalbsmilz verwendet wurde, kann ohne weiteres angenommen werden, dass jedes Adenosinaminohydrolase- (oder"-Desaminase"EC 3. 5. 4. 4)- Präparat ebenso wirksam geeignet ist. So liegt die Verwendung jedes Präparates der Adenosin-Aminohydrolase (oder "Desaminase"), das selektiv das ss-2', 3'-Didesoxyadenosin-Anomer entaminiert, innerhalb des Rahmens der vorliegenden Erfindung. Dementsprechend kann ausser dem freien Enzym in einem
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geeigneten Medium, wie in dem hier beschriebenen neutralen wässerigen Medium, das Enzym ADA auch in immobilisierter Form auf einem geeigneten kompatiblen Substrat, wie z. B. dem Oxyran-Acrylpolymer- Substrat Eupergit C TM (Rohm Pharma GmbH), verwendet werden.
Das ADA kann unter Verwendung üblicher Verfahren an das Polymer gebunden sein.
Geeigneterweise gewinnt man das (D)-2', 3'-Didesoxyinosin-Produkt durch Sammeln der Reaktionsmischung aus Stufe 2, Abfiltrieren der unlöslichen Bestandteile und Additive über Celit und Reinigen des entstehenden Produktes durch einfache Umkristallisation, wobei Methanol das bevorzugte Umkristallisationsmittel ist. In Stufe 2 wird eine katalytische bis etwa äquimolare bis überschüssige Menge Adenosindesaminase zu einer anomeren Mischung von (D)-2', 3'-Didesoxyadenosin aus Stufe 1 in einem geeigneten Lösungsmittel zugesetzt. Es kann eine Vielzahl von Lösungsmitteln verwendet werden, doch sind polare Lösungsmittel, wie z. B. Wasser oder Alkohol, bevorzugt.
Die Reaktion ist in Abhängigkeit von der Enzymmenge, den Reaktionsbedingungen und dergl. nach einem Zeitraum von weniger als einer Stunde bis zu mehreren Stunden praktisch abgeschlossen. Vorzugsweise wird die Reaktion bei etwa 20-25 C während eines Zeitraums von 1 bis 4 Stunden durchgeführt.
Um verunreinigende Mengen von desaminiertem a-Anomer in dem Produkt zu vermeiden, sollte der Reaktionsablauf verfolgt werden, um die maximale Kontaktzeit zu bestimmen. Das kann beispielsweise am besten durch die dem Fachmann bekannte Methode der Dünnschichtchromatographie oder der HochdruckFlüssigkeits-Chromatographie erfolgen.
Als Beweis dafür, dass das erfindungsgemässe Verfahren dieser selektiven enzymatischen Desaminierung nicht naheligend war, möge die Tatsache gelten, dass in (L)-anomeren Mischungen das a-Anomer und nicht das ss-Anomer bei der enzymatischen Desaminierung begünstigt war. Da Adenosindesaminase ein ziemlich unspezifisches Enzym mit beträchtlicher Reaktionsfreudigkeit ist, war es sicher nicht naheliegend,
EMI5.1
und ss-Anomerem(D)-2', 3'-Didesoxyadenosins besteht.
Die Verwendung des Enzyms Adenosindesaminase nach dem erfindungsgemässen Verfahren bietet den Vorteil, dass die entstehenden Anomeren (a und ss) nicht unter Einsatz kostenaufwendiger und zeitraubender chromatographischer Methoden und Kristallisationsverfahren voneinander getrennt werden müssen, wie dies bisher auf dem Gebiet dieser Substanzen erforderlich war. Das ss- (D)-2', 3'-Didesoxyinosin-Anomer ist das gewünschte Produkt, da es ein aktives oder zumindest deutlich aktiveres antivirales Mittel darstellt als das a-Anomer.
Das erfindungsgemässe Verfahren zur Herstellung des ss- (D) -2', 3'-Didesoxyinosins unter Berücksichtigung der Herstellung des Ausgangsmaterials ist im folgenden Schema I dargestellt :
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EMI6.1
EMI6.2
EMI6.3
dungsgemässen Verfahrens und sollen den Erfindungsrahmen keineswegs einschränken.
Alle Teile und Prozente sind auf das Gewicht bezogen, und die Temperaturen sind, wenn nicht anders angegeben, in 0 C.
Experimenteller Teil
EMI6.4
: (D) -5-0-Benzyl-2, 3, -didesoxypentofuranoseTetrahydrofuran zugesetzt. Nach 20 min bei 0 C wurde die Reaktionsmischung auf 22 C erwärmt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h bei 220C gerührt, dann langsam durch Zusatz von 12 mi Wasser aufgearbeitet und 30 min unter Rückfluss erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde auf 0 C abgekühlt und langsam mit 24 ml 30% igem Wasserstoffperoxid versetzt, wobei der pH-Wert durch Zusatz von 1 N Natriumhydroxid auf 7-8 gehalten wurde. Nach erfolgtem Zusatz wurde die Reaktionsmischung unter vermindertem Druck auf einem Rotovapor bei 300 C bis zu einem öligen Rückstand eingedampft. Dieser
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wurde zwischen 500 ml Dichlormethan und 150 ml Wasser verteilt.
Die wässerige Schicht wurde mit 2 x 100 ml Dichlormethan extrahiert und dann die vereinigten organischen Schichten mit 50 ml Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zu einem Öl eingedampft. Ausbeute = 15, 3 (100%) an (D) 5-0-Benzoyl-2, 3-didesoxypentofuranose. Das 1 H-NMR-Spektrum bestätigte die Struktur und das Öl wurde direkt in der nächsten Stufe eingesetzt.
Vorschrift 2 : 1-0-Acetyl- (D) -5-0-benzoyl-2, 3-didesoxypentofuranose
Eine Lösung von (D)-5-0-Benzoyl-2, 3-didesoxypentofuranose (15, 3 g, 0, 069 Mol) in 32 ml Pyridin und 16 ml Essigsäureanhydrid wurde 4 h bei 220 C gerührt, dann mit 500 mi Dichlormethan verdünnt und mit 100 g Eis versetzt. Die Reaktionsmischung wurde dann 3 mal mit 100 ml 1 N Chlorwasserstoffsäure, 3 mal 100 ml gesättigter wässeriger Natriumbicarbonatlösung und 100 m ! Salzlösung gewaschen. Die organische Schicht wurde über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft, wobei ein blassgelbes Öl erhalten wurde.
Dieses konnte unverändert oder nach einer Chromatographie über Silicagel 35% - 60% EtOAc/Hexan verwendet werden. Ausbeute 15, 9 g (87%) 1-0-Acetyl- (D) -5-0-benzoyl-2, 3-didesoxy-pentofuranose. Das NMR-Spektrum bestätigte die Strktur.
Vorschrift 3:- (D)-5'-0-Benzoyl-2',3'-didesoxyadenosin
1-0-Acetyl- (D)-5-0-benzoyl-2,3-pentofuranose (0,522 g, 0,00198 Mol) wurde in 5 mi 1, 2-Dichlorethan.
EMI7.1
zugesetzt wurden. Die Lösung wurde 88 h bei 220 C gerührt. Dann wurde die Reaktionsmischung durch Abkühlen auf 0OC und Eingiessen in 40 ml kalter gesättigter Natriumbicarbonatlösung aufgearbeitet. Die Reaktionsmischung wurde zwischen 200 ml Dichlormethan und 2 x 40 mi kalter gesättigter wässeriger Natriumbicarbonatlösung und 40 ml Salziösung verteilt. Die organische Schicht wurde getrocknet und eingedampft, wobei ein farbloses Öl erhalten wurde, das über Silicagel chromatographiert und mit 8% Methanol in Methylenchlorid eluiert wurde.
Die Fraktionen wurden aufgefangen und die ähnlichen Fraktionen vereinigt, wobei 420 mg (D)-5'-0-benzoyl-2',3'-didesoxyadenosin als Mischung der Anomeren erhalten wurden (63%).
Beispiel : ss-(D)-2',3'-Didesoxyinosin
Diese Mischung von Anomeren (1, 66 g) wurde mit (170 ml) ammoniakgesättigtem Methanol behandelt.
Das Reaktionsgefäss wurde dicht abgeschlossen und die Masse 48 h bei 180 C gerührt. Durch Dünnschichtchromatographie wurde festgestellt, dass die Reaktion unvollständig war. Das Lösungsmittel wurde abgedampft und durch neuerliche 170 ml ammoniakgesättigtes Methanol ersetzt. Dünnschichtchromatographie nach weiteren 48 h zeigte eine vollständige Reaktion an. Daher wurde das Lösungsmittel abgedampft und Ethanol (5 mi) zugesetzt. Dadurch wurden farblose Kristalle erhalten, die abgetrennt und mit 5 mi 95% igem Ethanol gewaschen wurden, wobei 1, 20 g (95%) 2', 3'-Didesoxyadenosin 5a gemeinsam mit seinem aAnomer 5b in einem durch 1H-NMR festgestelltem Verhältnis von 1 : 1 erhalten wurde.
Die Mischung von a + ss- (D) -2', 3'-Didesoxyadenosin wurde in 50 ml entionisiertem Wasser gelöst und diese Lösung mit 10 mg Adenosin-desaminase (Typ 11, der Firma Sigma ; 9 Einheiten/mg-0, 9 uMol/min) versetzt. Die Lösung wurde bei 200 C gerührt und die Reaktion durch HPLC überwacht. Nach 2 1/2 h wurden weitere 10 mi
EMI7.2
Substanz abfiltriert und die farblosen Kristalle mit 2 x 1, 5 ml Methanol gewaschen, um ss- (D) -2', 3'- Didesoxyinosin (120 mg, 48%) zu ergeben. Die Mutterlauge wurde in gleicher Weise behandelt und lieferte weitere 29 mg (12%) eines qualitativ guten Produkts, das durch'H-NMR charakterisiert wurde. Das NMRSpektrum bestätigte die Struktur.
Literaturstellen :
EMI7.3
<Desc/Clms Page number 8>
3. Taniguchi, M. ; Koga, K. ; Yamada, S. Tetrahedron 1974, 30, 3547.
Patentansprüche
EMI8.1
Claims (1)
- 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die verwendete Adenosindesaminase als Lösung in einem neutralen wässerigen Medium verwendet wird.3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die verwendete Adenosindesaminase als immobilisiertes Präparat verwendet wird.
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Patent Citations (2)
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