AR125468A1 - Sistema de producción de vectores virales - Google Patents

Abstract

La divulgación proporciona, al menos en parte, un método para producir vectores lentivirales de alto título y para producir partículas lentivirales que portan un transgén de interés y en condiciones de seguridad satisfactorias. La divulgación también proporciona, al menos en parte, métodos de purificación de dicha partícula lentiviral, por ejemplo, a partir de un cultivo celular. La divulgación también proporciona una formulación para preparaciones lentivirales que mantienen la integridad estructural del vector viral durante los eventos de purificación, almacenamiento y transferencia de genes. Reivindicación 1: Un método para fabricar un vector lentiviral, caracterizado porque comprende: a) proporcionar una pluralidad de células de mamíferos (p. ej., humanas), b) poner en contacto la pluralidad de células de mamíferos con lo siguiente: I) reactivo de transfección FectoVIR®-AAV, y II) un ácido nucleico que codifica un efector terapéutico, p. ej., una proteína terapéutica (p. ej., CAR), y suficiente secuencia LTR para empaquetar en una partícula viral y, opcionalmente, un ácido nucleico que codifica una proteína de empaquetamiento lentiviral, una proteína de envoltura lentiviral y, en condiciones que permiten que el ácido nucleico se introduzca en al menos un subconjunto de células; c) cultivar la célula en condiciones adecuadas para la producción del vector lentiviral. Reivindicación 82: Un método para fabricar un vector lentiviral, caracterizado porque comprende: a) proporcionar una pluralidad de células de mamífero (p. ej., humanas), donde la pluralidad de células de mamífero no comprende el antígeno T SV40 grande (p. ej., donde la célula es una célula de fibroblasto, p. ej., una célula de fibroblasto de riñón embrionario, p. ej., una célula Expi293F), donde la pluralidad de células de mamífero comprende un ácido nucleico (p. ej., DNA) que codifica una o más proteínas de empaquetamiento retroviral, una proteína de envoltura retroviral y un efector terapéutico, p. ej., una proteína terapéutica (p. ej., un CAR), b) cultivar la célula en condiciones adecuadas para la producción del vector lentiviral. Reivindicación 102: Una composición acuosa que comprende un vector lentiviral, un tampón seleccionado del grupo caracterizada porque consiste en un tampón de fosfato, un tampón de citrato de sodio, un tampón de ácido 2-(N-morfolino) etanosulfónico (MES), un tampón de ácido 3-morfolinopropano-1-sulfónico (MOPS) y una sal.