WO2024014421A1 - 分注準備装置、分注装置、および分注準備方法 - Google Patents

分注準備装置、分注装置、および分注準備方法 Download PDF

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WO2024014421A1
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cell suspension
dispensing
reservoir
rotation
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保人 岸井
周彦 徳永
Original Assignee
株式会社サイフューズ
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/02—Apparatus for enzymology or microbiology with agitation means; with heat exchange means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/26—Inoculator or sampler

Definitions

  • the present invention relates to a cell suspension dispensing preparation device for dispensing a cell suspension, a dispensing device using the same, and a dispensing preparation method.
  • cells to be cultured are placed in each well of a well plate and cultured in a CO 2 incubator. In this preliminary step, it is necessary to dispense a cell suspension containing cells to be aggregated into each well of the well plate.
  • Patent Document 1 and Patent Document 2 disclose that a cell suspension storage section is directly connected to a pipetter that dispenses the cell suspension onto the plate, and the cell suspension is continuously dispensed toward the plate. Dispensing devices and associated devices are disclosed that allow for repeated dispensing.
  • Patent Document 1 does not disclose either how to uniformly distribute cells in a suspension without bias or how not to damage cells during the dispensing stage. Further, in the dispensing device disclosed in Patent Document 2, although a suspension stirring device is mentioned, measures to prevent damage to cells are not disclosed.
  • ⁇ Agitation'' is a typical action for homogenizing an object, not only in cells but also in the entire area of the medium containing the object, but ⁇ stirring'' involves the flow of the object within the medium. . Therefore, applying agitation to homogenize cells in a cell-containing suspension can cause direct damage to the cells. Therefore, it is difficult to simply apply "stirring" to the process of dispensing cells. Therefore, a dispensing device that can stir the cell suspension without damaging the cells is desired.
  • One aspect of the present invention includes a reservoir that accommodates a cell suspension, has an opening, and into which a discharge tip of a pipettor that discharges the cell suspension from the opening enters and exits repeatedly;
  • the piping includes a rotary table for rotating the tank and a controller for controlling the rotation of the rotary table, and the piping has one end opening in contact with an inner wall of the reservoir and the other end of the piping in contact with an inner wall of the reservoir.
  • the opening is arranged so as to be spaced apart from the inner wall of the tank, and the controller rotates the rotating table a first number of times in a predetermined direction around the rotation axis to remove the cell suspension.
  • the dispensing preparation device is controlled to perform initial agitation including initial inertial flow generation and then backflow generation in which the rotary table is reversely rotated a second number of times in a direction opposite to the predetermined direction.
  • Another aspect of the present invention is a reservoir that accommodates a cell suspension and has an opening, into which a discharge tip of a pipettor that discharges the cell suspension from the opening to the cell storage section repeatedly enters and exits;
  • a dispensing preparation method for stirring the cell suspension in the tank using a dispensing preparation device including a rotating table for rotating the tank around the tank, the rotating table rotating the rotating table a first number of times.
  • This is a dispensing preparation method comprising a step of performing initial stirring consisting of .
  • the present invention it is possible to manage and dispense a suspension so that cells are evenly and evenly contained in the dispensed suspension so as not to damage the cells.
  • 1 shows an external configuration of a dispensing preparation device according to an embodiment of the present invention.
  • 1 is a functional block diagram of a dispensing preparation device and a dispensing device according to an embodiment of the present invention.
  • 1 shows an external configuration of a dispensing device that is an embodiment of the present invention.
  • Fig. 3 shows a conceptual cross-section of the relationship between the tip of the pipettor and the reservoir in the dispensing preparation device that is an embodiment of the present invention.
  • Fig. 2 shows a conceptual cross-section of the relationship between the tip of the pipetter and the suspension surface inside the well in the dispensing preparation device which is an embodiment of the present invention.
  • FIG. 1 shows the external appearance of the configuration of the dispensing preparation device 1.
  • FIG. 2 shows a functional block diagram of the dispensing preparation device 1 and the dispensing device 10.
  • FIG. 3 shows the external configuration of the dispensing device 10.
  • FIG. 4 shows the relationship between the tip of the pipettor and the suspension surface inside the reservoir 4 of the dispensing preparation device 1.
  • FIG. 5 shows the concept of the relationship between the tip of the pipetter and the suspension surface inside the well in the dispensing preparation device 1.
  • the dispensing preparation device 1 includes a bottle tank (hereinafter referred to as "tank") 2, a rotating table 22, a reservoir 4, a piping system 5, and a controller 6.
  • the dispensing preparation device 1 can be combined to constitute a part of the dispensing device 10.
  • the dispensing device 10 can be configured to include, for example, a dispensing head 7 and a plate exchanger 8 in addition to the dispensing preparation device 1 .
  • the dispensing head 7 moves a pipettor with a pipette tip attached to the tip into and back into the reservoir 4 to accommodate the cell suspension inside. Then, the cell suspension is injected into the cell accommodating part of the container having the cell accommodating part.
  • the container having the cell storage portion is, for example, a well plate, and the cell storage portion is each well thereof.
  • the dispensing head 7 injects the cell suspension into the well using a pipettor.
  • the pipetter When the dispensing head 7 aspirates the cell suspension from the reservoir 4, the pipetter enters the inside of the reservoir 4. At this time, the tip of the pipette tip is moved from the surface of the cell suspension in the reservoir 4 to a predetermined depth H L that is at least 1/3 of the depth, preferably 1/2 in the direction of the depth H of the cell suspension. Once reached, start aspiration of the cell suspension. After a predetermined amount of cell suspension has been aspirated, the pipettor is withdrawn from inside the reservoir 4. The dispensing head 7 does not move the pipettor into or out of the reservoir 4 when the depth H of the cell suspension in the reservoir 4 reaches a predetermined critical depth S.
  • the critical depth S is determined by taking into account manufacturing tolerances of the pipette tip and pipettor, accuracy of the moving distance of the dispensing head, variations in the amount of cells in the remaining cell suspension in the reservoir, etc. It can be set freely as long as the tip does not come into contact with the bottom of the reservoir 4.
  • the dispensing head 7 When the pipetter injects the cell suspension into the cell accommodating part, the dispensing head 7 does not inject the cell suspension while the tip of the pipetter enters the inside of the cell accommodating part. The dispensing head 7 starts to withdraw from the inside of the cell container after the tip of the pipetter has completely penetrated into the cell container. After the pipettor starts exiting from inside the cell container, the pipettor injects the cell suspension into the cell container.
  • the plate exchanger 8 moves the container in which the cell suspension has not been injected into the cell storage section to a predetermined location. Then, the dispensing head 7 injects the cell suspension into the cell storage section using a pipettor. The plate exchanger 8 collects the container in which the cell suspension is injected into the cell storage section.
  • the reservoir 4 has an opening 4a and accommodates the cell suspension LR therein.
  • a dispensing tip of a pipettor for discharging a cell suspension into the cell storage section repeatedly enters and exits from the opening 4a.
  • the tank 2 is placed beside reservoir 4.
  • the tank 2 includes a hollow bottle container 21 having an opening on one side and a cap 21a that can close the opening of the bottle container 21.
  • the bottle container 21 has, for example, a bottom surface 2a, and a cylindrical wall portion extending vertically along a tank axis 2b passing through the center of the bottom surface 2a and extending perpendicularly to the bottom surface 2a.
  • a hollow portion is defined inside by the cylindrical wall portion and the bottom surface 2a.
  • the tank 2 contains a cell suspension LT .
  • the center of the bottom surface 2a of the bottle container 21 of the tank 2 is, for example, the center of gravity.
  • the tank 2 typically has a cylindrical shape with a circular bottom surface 2a, and the tank axis 2b is an axis passing through the center of the bottom surface 2a.
  • the bottom surface 2a of the tank 2 is not limited to a circular shape, but may be a polygon including a quadrangle, or an oblong shape such as an ellipse.
  • the main body has a hollow shape extending along the direction of the tank axis 2b perpendicular to the bottom surface 2a.
  • the tank 2 will be described as a hollow cylinder having a circular bottom surface 2a.
  • the tank 2 is capable of accommodating a cell suspension in which a predetermined amount of cells are mixed into a predetermined culture solution in a hollow portion therein.
  • a piping system 5 connects the tank 2 and the reservoir 4.
  • a pump unit 3 is connected to the piping system 5.
  • the pump unit 3 is, for example, a reciprocating pump having a cylinder inside.
  • the piping system 5 includes a tank piping 51 whose one end 51a is connected to the tank 2, a reservoir piping 52 whose one end 52a is connected to the reservoir 4, a pump piping 53 whose one end 53a is connected to the pump unit 3, and a valve 54. It consists of and.
  • the valve 54 is a three-way valve, and the other end 51b of the tank pipe 51, the other end 52b of the reservoir pipe 52, and the other end 53b of the pump pipe 53 are connected to the valve 54.
  • the valve 54 can be, for example, a solenoid valve or a rotary valve.
  • the valve 54 has a first state in which the connection with the reservoir piping 52 is closed and the tank piping 51 and the pump piping 53 are connected, and a first state in which the connection with the tank piping 51 is closed and the reservoir piping 52 and the pump piping 53 are connected. It is possible to switch between the second state and the second state.
  • the pump unit 3 evacuates the cylinder and sucks the inside, and the pump piping 53 and the tank piping 51 become negative pressure, causing the cell suspension in the tank 2.
  • the liquid flows into the pump pipe 53 and the tank pipe 51.
  • the valve 54 is switched to the second state, and the pump unit 3 advances the cylinder to increase the internal pressure, and the cell suspension inside the pump piping 53 is sent to the reservoir piping 52, and finally to the pump piping.
  • the cell suspension inside 53 is transferred into reservoir 4 . Thereby, the cell suspension is transferred from the tank 2 to the reservoir 4 via the tank piping 51 and the reservoir piping 52.
  • Tank piping 51, pump piping 53, and reservoir piping 52 suck the cell suspension in tank 2, and pump piping 53 and reservoir piping 52 are filled with the cell suspension.
  • the valve 54 brings the piping system into the first state as the cylinders of the pump unit 3 retract, and the valve 54 brings the piping system into the second state as the cylinders of the pump unit 3 advance.
  • One end 52a of the reservoir piping 52 which is one end opening of the piping system 5, is arranged inside the reservoir 4 so as to be in contact with the inner wall of the reservoir 4. Further, one end 51a of the tank piping 51, which is the other end opening of the piping system 5, is spaced apart from the inner wall of the tank 2, and one end 51a of the tank piping 51 is positioned within the cell suspension L T of the cell suspension. It is supported by a holding member (not shown) in such a manner.
  • the tank piping 51 is fixed above the opening of the tank 2, and one end 51a of the tank piping 51 is inserted into the tank 2 from the opening of the tank 2.
  • the reservoir 4 has a liquid level detection sensor (not shown) that detects the liquid level, and can detect the liquid level of the cell suspension inside the reservoir 4.
  • a liquid level detection sensor (not shown) is connected to the controller 6.
  • the liquid level detection sensor detects the liquid level height of the reservoir 4
  • the liquid level height is notified to the controller 6, and the controller 6 determines whether the liquid level height of the liquid level detection sensor is a predetermined height.
  • an operation instruction is given to the pump unit 3 to operate the pump unit 3.
  • the pump unit 3 receives an operation instruction from the controller 6 and supplies the cell suspension from the tank 2 to the reservoir 4 through the piping system 5 as described above.
  • the liquid level detection sensor may have a mode other than a mode that directly detects the height of the liquid level.
  • the height of the liquid level may be indirectly detected by calculating from the amount of cell suspension transferred to the reservoir 4. That is, as described above, the amount of cell suspension delivered by the pump unit 3 corresponds to a decrease in the amount of liquid in the tank 2 and an increase in the amount of liquid in the reservoir 4.
  • the pump unit 3 is a reciprocating pump, as in this embodiment, the amount of cell suspension delivered by the pump unit 3 directly corresponds to the volume of the cylinder of the pump unit 3. .
  • the dispensing preparation device 1 has a rotating table 22 that is rotated by a motor 23 and has a mounting surface 22a that is a substantially horizontal surface.
  • the rotary table 22 rotates around a shaft 23b that extends along a vertical rotation axis 23a that extends perpendicularly to the bottom surface 2a of the tank 2.
  • the motor 23 rotates a vertical rotating shaft 23a.
  • the rotating table 22 is placed so that the vertical rotation axis 23a is the rotation center of the motor, and the tank 2 is centered on the tank axis 2b, which is an axis eccentric by a distance of rotation radius d with respect to the vertical rotation axis 23a. It can be placed on the surface 22a.
  • the rotating table 22 can rotate the tank 2 placed on the mounting surface 22a of the rotating table 22 around a vertical rotation axis 23a.
  • the tank 2 placed on the mounting surface 22a of the rotating table 22 is rotated in a predetermined direction by the rotation of the vertical rotating shaft 23a.
  • the rotation of the rotary table 22 is defined by predetermined rotation conditions such as a predetermined rotation radius d, a predetermined angular velocity w, and a predetermined angular acceleration.
  • a tank pipe 51 is inserted into the tank 2, and even when the tank 2 is rotated by the rotating table 22, the position of one end 51a of the tank pipe 51 remains unchanged and is held so as not to be twisted.
  • the cap 21a of the tank 2 may have a hole into which the tank pipe 51 is inserted, the tank pipe 51 may be inserted into the tank 2 through the hole, and the cap 21a may hold the tank pipe 51. I can do it.
  • the tank piping 51 may be configured as a tank piping 51 that is divided into two parts at the cap part, inside and outside the tank 2, and connected by the cap to connect the inside and outside of the tank 2.
  • the rotation radius d of the tank 2 at this time is defined as the distance between the tank axis 2b of the tank 2 and the vertical rotation axis 23a of the rotating table 22.
  • the rotation radius d of the tank 2 can be less than or equal to the diameter of the inscribed circle of the bottom surface 2a of the tank 2.
  • the rotation radius d of the tank 2 is equal to or less than the diameter of the bottom surface 2a of the tank 2.
  • the rotation radius d of the tank 2 is 1.2 times the radius of the bottom surface 2a of the tank 2.
  • the rotation radius d of the tank 2 is not limited to these and can be freely set as long as the tank 2 can rotate around the rotation axis perpendicular to the bottom surface of the tank 2. It is possible.
  • the controller 6 controls the rotation of the rotating table 22.
  • the controller 6 rotates the rotating table 22 to perform initial agitation of the cells in the cell suspension through the rotation of the tank 2. conduct.
  • Initial agitation is composed of initial inertial flow generation (forward rotation) and reverse flow generation (reverse rotation) performed subsequent to initial inertial flow generation (forward rotation). If only the initial inertial flow generation (forward rotation) is performed, the cells simply rotate along with the swirling flow of the cell suspension in the tank 2, and no stirring effect is produced. Therefore, the initial stirring is effective only when the initial inertial flow generation (forward rotation) and the reverse flow generation (reverse rotation) are performed subsequent to the initial inertial flow generation (forward rotation).
  • the controller 6 causes the rotating table 22 to generate an initial inertial flow around the vertical rotating shaft 23a in a predetermined direction of the vertical rotating shaft 23a, and then generates an initial inertial flow around the vertical rotating shaft 23a in a direction opposite to the direction of initial inertial flow generation. Control to rotate around.
  • the direction of initial inertial flow generation is defined as forward rotation.
  • the rotation direction of initial inertial flow generation can be arbitrarily set according to the angular velocity of rotation of the rotary table 22. That is, the controller 6 rotates the rotary table 22 by combining initial inertial flow generation (forward rotation) and initial stirring (reverse rotation).
  • This initial agitation creates an agitation effect in the cell suspension as a flow counteracts the initial inertial flow generation (forward rotation) created in tank 2. That is, it is sufficient that the initial stirring (reverse rotation) immediately after the initial inertial flow generation (forward rotation) is in the opposite direction to the rotational direction of the initial inertial flow generation (forward rotation).
  • Initial inertial flow generation is performed a first number of times
  • reverse flow generation is performed a second number of times. The second number of times is less than or equal to the first number of times, and typically the second number of times is less than the first number of times.
  • the predetermined angular velocity w of the rotary table 22 by the controller 6 is defined as an angular velocity within a range that produces the effect of stirring the cells in the cell suspension and does not cause damage to the cells. If the angular speed of rotation is too slow, the effect of stirring the cells in the cell suspension will be low, while if the angular speed of rotation is too fast, the stirring may damage the cells in the cell suspension.
  • the predetermined angular velocity w is, for example, about 2 revolutions per second (2 rps).
  • the generation of a reverse flow (reverse rotation) during initial stirring has the effect of canceling the swirling up of the cell suspension caused by the initial inertial flow generation (forward rotation), in addition to the stirring effect on the cell suspension.
  • the reverse flow generation (reverse rotation) is a flow in the opposite direction to the initial inertial flow generation (forward rotation)
  • the initial inertial flow generation (forward rotation) creates a spiral swirl in the cell suspension in tank 2. This can prevent the cell suspension from rippling inside the tank 2 by canceling the swirling up of the cell suspension that occurs inside the tank 2 due to backflow generation (reverse rotation).
  • the controller 6 first generates an initial inertial flow (forward rotation) for seven rotations of the rotary table 22, and then generates a reverse flow (reverse rotation) for five rotations of the rotary table 22.
  • the rotating table 22 is rotated 7 to 10 times as initial inertial flow generation (forward rotation), and the rotating table 22 is rotated 5 to 7 times as reverse flow generation (reverse rotation).
  • This initial inertial flow generation (forward rotation) of 7 to 10 rotations and reverse flow generation (reverse rotation) of 5 to 7 rotations causes the cell suspension to flow in the radial direction, circumferential direction, and depth of tank 2. It is possible to achieve a stirring effect in three horizontal directions and a winding canceling effect.
  • the former stirring effect is an effect on homogenizing the distribution of cells within the cell suspension, and the latter effect of canceling the curling is in addition to the former stirring effect. This is the effect on preventing damage.
  • the number of rotations is typically smaller than that of the initial inertial flow generation (forward rotation) (first rotation).
  • the reverse flow generation (reverse rotation) be approximately 70% of the rotation of the initial inertial flow generation (forward rotation).
  • At least one additional stirring can be performed.
  • the number of additional stirrings can be freely set depending on the distribution of cells in the cell suspension.
  • One additional stirring consists of a combination of additional inertial flow generation (forward direction) and additional backflow generation (reverse direction) by the rotary table 22.
  • one additional stirring includes the generation of an additional inertial flow (forward rotation) of the rotary table 22 after the generation of a reverse flow (reverse rotation) of the initial stirring, and the addition after the generation of an additional inertial flow (forward rotation). It consists of backflow generation (reverse rotation).
  • the number of rotations for additional inertial flow generation (forward rotation) and the number of rotations for additional reverse flow generation (reverse rotation) can be freely determined depending on the state of the cells in the tank 2, such as the distribution of cells in the cell suspension. Can be set. Furthermore, additional stirring may be performed multiple times. In this case, after the additional backflow generation (reverse rotation) of the previous additional stirring, additional stirring consisting of additional forward rotation of the rotary table 22 and additional reverse rotation after the additional forward rotation is performed. good. Generally, the number of rotations for additional reverse flow generation (reverse rotation) is less than the number of rotations for additional inertial flow generation (forward rotation).
  • the number of rotations for additional countercurrent generation is set to two
  • the number of rotations for additional inertial flow generation is set to two or one.
  • the additional countercurrent generation contributes to the effect of agitation of the cells in the suspension, along with the effect of counteracting the flow inertia that causes curling due to the additional inertial flow generation (forward rotation).
  • Additional stirring can be performed, for example, multiple times. For example, in an example in which additional stirring is performed twice, a first additional stirring and a second additional stirring after the first additional stirring are performed.
  • first additional inertial flow generation (forward direction) and first additional reverse flow generation (reverse direction) following the first additional inertial flow generation (forward direction) are performed.
  • the second additional agitation includes a second additional inertial flow generation (forward direction) after the first additional backflow generation (reverse direction) and a second additional inertial flow generation (forward direction) after the second additional inertial flow generation (forward direction).
  • the number of rotations for each additional reverse flow generation (reverse rotation) is 2, and the number of rotations for additional inertial flow generation (forward rotation) is free as necessary.
  • the number of rotations for additional reverse flow generation is two times
  • the number of rotations for additional inertial flow generation is two times. You can also run it five times. That is, for example, after the initial stirring in which the rotating table 22 is rotated 7 to 10 times as initial inertial flow generation (forward rotation) and the rotating table 22 is rotated 5 to 7 times as initial stirring (reverse rotation), two additional forward rotations are performed.
  • One additional stirring consisting of and two additional counter-rotations is performed five times in a row.
  • the cells in the cell suspension become uniform within the tank 2 in three directions: the radial direction, the circumferential direction, and the depth direction of the tank 2.
  • each rotation in the additional inertial flow generation (forward rotation) and the additional reverse flow generation (reverse rotation) that constitute the additional stirring is set to be smaller than each rotation in the initial inertial flow generation and the reverse flow generation that constitute the initial stirring. do.
  • Dispensing preparation device 2
  • Tank 3 Pump unit 4
  • Piping system 6
  • Controller 7
  • Dispensing head 8
  • Plate exchanger 10
  • Dispensing device 21
  • Bottle container 22 Turntable 23
  • Motor 51
  • Tank piping 52
  • Reservoir piping 53
  • Pump piping 54 Valve

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Abstract

細胞に損傷を与えないように細胞懸濁液を攪拌できる分注準備装置が望まれる。 細胞懸濁液を収容し、開口を有して、前記開口から細胞収容部に細胞懸濁液を吐出するピペッタの吐出先端部が繰り返し進入退出するリザーバと、前記細胞懸濁液を収容するタンクと、前記タンクと前記リザーバとを接続し、ポンプユニットにより前記タンクから前記リザーバまで内部に細胞懸濁液を流す配管と、前記タンクの底面に垂直な回転軸のまわりに前記タンクの回転を行う回転台と、前記回転台の回転を制御する制御器と、を備え、前記配管は、前記配管の一端開口が前記リザーバの内壁に接触し、前記配管の他端開口は前記タンクの内壁から離間するように配置されている分注準備装置により解決する。

Description

分注準備装置、分注装置、および分注準備方法
　本発明は、細胞懸濁液の分注のための細胞懸濁液の分注準備装置およびそれを用いた分注装置と、分注準備方法に関する。
　単一細胞を凝集させたスフェロイドなどを作成する細胞の培養では、ウェルプレートの各ウェルに培養する細胞を入れてＣＯ２インキュベータにより培養する。この前段階では、ウェルプレートの各ウェルに、凝集させる細胞を含む細胞懸濁液を分注する必要がある。
　たとえば、特許文献１と特許文献２には、プレートに細胞懸濁液を分注するピペッタに向けて細胞懸濁液の貯蔵部を直結し、細胞懸濁液をプレートに向けて連続的に分注を繰り返すことが可能な分注装置およびそれに付随する装置が開示されている。
特許第６９０６７７３号明細書 特開２０２１－００００１８号公報
　各ウェルに培養する細胞を含む細胞懸濁液を分注する工程の自動化にあたっては、各ウェルに分注される懸濁液内に偏りなく均一に細胞が含まれていること、細胞に損傷を与えないこと、が必要となる。この点、特許文献１には、懸濁液内に偏りなく均一に細胞を分配すること、分注する段階で細胞に損傷を与えないこと、のいずれもが開示されていない。また、特許文献２に開示される分注装置では、懸濁液の攪拌装置には言及されているものの、細胞に損傷を与えないようにする対策は開示されていない。
　細胞に限らず、一般に、物を含む媒体内の全域において、その物を均一化するための動作としては「攪拌」が代表的であるが、「攪拌」は媒体内での物の流動を伴う。そのため、細胞を含む懸濁液内における細胞の均一化のためには、攪拌を適用することは、細胞に直接的な損傷を与える原因となりうる。そのため、細胞を分注する工程に「攪拌」を単純に適用することが難しい。したがって、細胞に損傷を与えないように細胞懸濁液を攪拌できる分注装置が望まれる。
　本発明の一の態様は、細胞懸濁液を収容し、開口を有して、前記開口から細胞収容部に細胞懸濁液を吐出するピペッタの吐出先端部が繰り返し進入退出するリザーバと、前記細胞懸濁液を収容するタンクと、前記タンクと前記リザーバとを接続し、ポンプユニットにより前記タンクから前記リザーバまで内部に細胞懸濁液を流す配管と、前記タンクの底面に垂直な回転軸のまわりに前記タンクの回転を行う回転台と、前記回転台の回転を制御する制御器と、を備え、前記配管は、前記配管の一端開口が前記リザーバの内壁に接触し、前記配管の他端開口は前記タンクの内壁から離間するように配置されていて、前記制御器は、前記回転台を第１の回数だけ前記回転軸のまわりの所定の方向に順回転して前記細胞懸濁液の初期慣性流生成と、その後に前記回転台を前記所定の方向と逆方向に第２の回数だけ逆回転させる逆流生成と、を備える初期攪拌を実行するように制御する分注準備装置である。
　本発明の他の態様は、細胞懸濁液を収容し、開口を有して、前記開口から細胞収容部に細胞懸濁液を吐出するピペッタの吐出先端部が繰り返し進入退出するリザーバと、前記細胞懸濁液を収容するタンクと、前記タンクと前記リザーバとを接続し、ポンプユニットにより前記タンクから前記リザーバまで内部に細胞懸濁液を流す配管と、前記タンクの底面に垂直な回転軸のまわりに前記タンクの回転を行う回転台と、を備える分注準備装置によって、前記細胞懸濁液を前記タンク内で攪拌する分注準備方法であって、前記回転台を第１の回数だけ前記回転軸のまわりの所定の方向に順回転して前記細胞懸濁液の初期慣性流生成と、その後に前記回転台を前記所定の方向と逆方向に第２の回数だけ逆回転させる逆流生成と、からなる初期攪拌を実行する工程を備える分注準備方法である。
　本発明により、細胞に損傷を与えないように、分注される懸濁液内に偏りなく均一に細胞が含まれるように懸濁液を管理して分注を行うことが可能となる。
本発明の実施の形態である分注準備装置の外観構成を示している。 本発明の実施の形態である分注準備装置と分注装置との機能ブロック図を示している。 本発明の実施の形態である分注装置の外観構成を示している。 本発明の実施である分注準備装置における、ピペッタの先端とリザーバとの関係の概念断面を示している。 本発明の実施である分注準備装置における、ウェル内部におけるピペッタの先端と懸濁液面との関係の概念断面を示している。
（本発明の実施の形態）
　図１から図５を参照して、本発明の実施の形態の分注準備装置１および分注装置１０について説明する。図１は分注準備装置１の構成の外観を示している。図２は分注準備装置１と分注装置１０との機能ブロック図を示している。図３は分注装置１０の外観構成を示している。図４は分注準備装置１のリザーバ４の内部におけるにおいてのピペッタの先端と懸濁液面との関係を示している。図５は分注準備装置１において、ピペッタの先端とウェル内部の懸濁液面との関係の概念を示している。
[実施例１]
（分注準備装置および分注装置）
　分注準備装置１は、ボトルタンク（以下、「タンク」）２と、回転台２２と、リザーバ４と、配管系５と、制御器６と、を備える。分注準備装置１は分注装置１０の一部を構成させるように組み合わせることが可能である。分注装置１０は、たとえば、分注準備装置１のほかに、たとえばと、分注ヘッド７と、プレート交換機８と、を備えるように構成させることが可能である。
　分注ヘッド７はピペットチップが先端に取り付けられたピペッタをリザーバ４の内部に進入後退を行って、細胞懸濁液を内部に収容する。そして、細胞収容部を有する容器の細胞収容部に細胞懸濁液を注入する。細胞収容部を有する容器は、たとえばウェルプレートであり、細胞収容部はその各ウェルである。分注ヘッド７は細胞懸濁液をピペッタでウェル内に注入する。
　分注ヘッド７はリザーバ４から細胞懸濁液を吸引する際に、リザーバ４の内部にピペッタを進入させる。このとき、ピペットチップの先端がリザーバ４の細胞懸濁液の表面から細胞懸濁液の深さＨ方向に深さの少なくとも１／３の深度、好ましくは１／２の所定の深度ＨＬに到達してから細胞懸濁液の吸引を開始する。所定量の細胞懸濁液の吸引が完了した後に、リザーバ４の内部からピペッタを退出させる。分注ヘッド７は、リザーバ４の細胞懸濁液の深さＨが所定の臨界深さＳに到達したときには、リザーバ４内部へのピペッタの進入退出を行わない。臨界深さＳは、ピペットチップおよびピペッタの製造公差、分注ヘッドの移動距離の精度、リザーバ内の細胞懸濁液の残液中の細胞の量のばらつき等を考慮した上で、ピペットチップの先端がリザーバ４の底部に接触しない範囲で、自由に設定することができる。
　分注ヘッド７は、ピペッタが細胞収容部に細胞懸濁液を注入する際に、ピペッタの先端が細胞収容部の内部に侵入する間は細胞懸濁液を注入しない。分注ヘッド７は、ピペッタの先端が細胞収容部の内部に完全に侵入した後に、細胞収容部の内部から退出を開始する。ピペッタが細胞収容部の内部から退出を開始した後に、ピペッタは細胞収容部に細胞懸濁液を注入する。
　プレート交換機８は、細胞収容部に細胞懸濁液が未注入の容器を所定の箇所に移動させる。そこで、分注ヘッド７が細胞懸濁液をピペッタで細胞収容部に注入する。プレート交換機８は、細胞収容部に細胞懸濁液が注入された容器を回収する。
（分注準備装置）
　リザーバ４は開口４ａを有し、内部に細胞懸濁液ＬＲを収容する。開口４ａからは細胞収容部に細胞懸濁液を吐出するピペッタの吐出先端部が繰り返し進入退出する。
　タンク２はリザーバ４の脇に配置される。タンク２は、一方に開口を有する内部が中空のボトル容器２１と、ボトル容器２１の開口を閉鎖可能なキャップ２１ａと、からなる。ボトル容器２１は、たとえば底面２ａを有し、底面２ａの中心を通り底面２ａに垂直に延在するタンク軸２ｂに沿って鉛直方向に延在する円筒壁部を有する。円筒壁部と底面２ａとによって内部に中空の部分が画定される。タンク２の内部には、細胞懸濁液ＬＴを収容する。タンク２のボトル容器２１の底面２ａの中心は、たとえば重心である。タンク２は代表的には底面２ａを円形とする円筒形であって、タンク軸２ｂは底面２ａの中心をとおる軸である。タンク２の底面２ａは円形に限られず、四角形をはじめとする多角形や楕円形などの長丸形であってもよい。この場合も、本体は、底面２ａに垂直なタンク軸２ｂの方向に沿って延在する中空形状を有している。本明細書では、タンク２は円形の底面２ａを有する中空な円筒形として説明する。タンク２は、この内部の中空部に所定の量の細胞が所定の培養液に混入される細胞懸濁液を収容可能である。
　配管系５は、タンク２と前記リザーバ４とを接続する。配管系５には、ポンプユニット３が接続されている。ポンプユニット３は、たとえば内部にシリンダを有するレシプロ型のポンプである。配管系５は、一端５１ａがタンク２に接続されるタンク配管５１と、一端５２ａがリザーバ４に接続されるリザーバ配管５２と、一端５３ａがポンプユニット３に接続されるポンプ配管５３と、バルブ５４と、からなる。バルブ５４は三方バルブであって、バルブ５４には、タンク配管５１の他端５１ｂと、リザーバ配管５２の他端５２ｂと、ポンプ配管５３の他端５３ｂと、が接続されている。バルブ５４は、たとえば、電磁バルブやロータリバルブとすることができる。バルブ５４は、リザーバ配管５２との接続を閉鎖してタンク配管５１とポンプ配管５３とを接続する第１状態と、タンク配管５１との接続を閉鎖してリザーバ配管５２とポンプ配管５３とを接続する第２状態と、の間で切り替えが可能である。
　そして、バルブ５４を切り替えて第１状態にしたときに、ポンプユニット３がシリンダを退避させて内部を吸引するとポンプ配管５３とタンク配管５１とが負圧になって、タンク２内の細胞懸濁液がポンプ配管５３とタンク配管５１とに流入する。続いて、バルブ５４を切り替えて第２状態にして、ポンプユニット３がシリンダを進行させて内部を昇圧するとポンプ配管５３内部の細胞懸濁液がリザーバ配管５２に送出されて、最終的にポンプ配管５３内部の細胞懸濁液がリザーバ４内に移送される。これにより、細胞懸濁液がタンク配管５１とリザーバ配管５２とを介して、タンク２からリザーバ４へと移送される。タンク配管５１とポンプ配管５３とリザーバ配管５２とがタンク２内の細胞懸濁液を吸引してポンプ配管５３とリザーバ配管５２とが細胞懸濁液で満たされる。この例では、ポンプユニット３のシリンダの退行に合わせてバルブ５４が配管系を第１状態とし、ポンプユニット３のシリンダの進行に合わせてバルブ５４が配管系を第２状態とする。
　配管系５の一端開口となるリザーバ配管５２の一端５２ａはリザーバ４の内壁に接触するようにリザーバ４の内部に配置されている。また、配管系５の他端開口となるタンク配管５１の一端５１ａはタンク２の内壁から離間するように、かつタンク配管５１の一端５１ａが細胞懸濁液の細胞懸濁液ＬＴ内に位置するように保持部材（不図示）に支持されている。タンク配管５１は、タンク２の開口の上部で固定され、タンク配管５１の一端５１ａがタンク２の開口からタンク２の内部に挿入されている。リザーバ４は、液面高さを検出する液面検出センサ（不図示）を有していて、リザーバ４の内部の細胞懸濁液の液面高さを検出可能である。液面検出センサ（不図示）は、制御器６に接続されている。液面検出センサ（不図示）がリザーバ４の液面高さを検出すると液面高さは制御器６に通知され、制御器６は、液面検出センサの液面高さが所定の高さを下回っていると判断したときには、ポンプユニット３に動作するように、ポンプユニット３に動作指示を行う。制御器６から動作指示を受けたポンプユニット３は、配管系５を通じて、前記のとおり、タンク２からリザーバ４へと細胞懸濁液の供給を行う。液面検出センサ（不図示）は液面の高さを直接検出する態様以外の態様とすることができる。たとえば、リザーバ４への細胞懸濁液の移送量から計算して、液面の高さを間接的に検出するものであってもよい。すなわち、前記の通り、ポンプユニット３が送出する細胞懸濁液の量がタンク２内の液量の減少とリザーバ４の液量の増加に対応する。この実施の形態のように、ポンプユニット３がレシプロ型ポンプである場合には、特に、ポンプユニット３が送出する細胞懸濁液の量は、ポンプユニット３のシリンダの容積に直接的に対応する。
　分注準備装置１はモータ２３により回転するほぼ水平な面である載置面２２ａを有する回転台２２を有している。回転台２２はタンク２の底面２ａに垂直に延在する鉛直回転軸２３ａに沿って延在するシャフト２３ｂ周りに回転する。モータ２３は鉛直回転軸２３ａを回転させる。鉛直回転軸２３ａはモータの回転中心であって、タンク２は鉛直回転軸２３ａに対して回転半径ｄの距離分だけ偏心した軸であるタンク軸２ｂを中心とするように回転台２２の載置面２２ａの上に載置可能である。回転台２２は、回転台２２の載置面２２ａ上に載置されたタンク２を鉛直回転軸２３ａ周りに回転させることができる。回転台２２の載置面２２ａの上に載置されたタンク２は、回転台２２は鉛直回転軸２３ａの回転により、所定の方向に回転する。回転台２２の回転は、所定の回転半径ｄ、所定の角速度ｗ、所定の角加速度などの所定の回転条件で画定される回転である。タンク２内にはタンク配管５１が挿入され、回転台２２によりタンク２が回転しても、タンク配管５１の一端５１ａの位置が変わらず捻れないように保持される。たとえば、タンク２のキャップ２１ａにはタンク配管５１が挿入される孔を備え、その孔からタンク配管５１がタンク２の内部に挿入され、キャップ２１ａがタンク配管５１を保持している構造とすることができる。これにより、特に回転台２２の回転半径が大きい場合でも、タンク配管５１が捻れることなく、回転台２２によりタンク２が回転しても、タンク配管５１の一端５１ａの位置が変わらず、タンク配管５１に捻れによる負荷がかからないようになっている。タンク配管５１は、キャップ部でタンク２の内外で２つの部材に分断され、キャップで接続されてタンク２の内外を接続するタンク配管５１として構成してもよい。
　このときのタンク２の回転半径ｄはタンク２のタンク軸２ｂと回転台２２の鉛直回転軸２３ａとの距離として画定される。たとえば、タンク２の回転半径ｄはタンク２の底面２ａの内接円の直径以下とすることができる。タンク２の底面２ａが真円の場合、タンク２の回転半径ｄはタンク２の底面２ａの直径以下とすることが好ましい。またタンク２の底面２ａが真円の場合、さらには、タンク２の回転半径ｄはタンク２の底面２ａの半径の１．２倍とすることが好ましい。ただし、タンク２の回転半径ｄは、タンク２がタンク２の底面に垂直な回転軸のまわりにタンク２の回転を行うことができるかぎり、これらに限定されることなく、自由に設定することが可能である。
　制御器６は回転台２２の回転を制御する。タンク２が回転台２２の載置面２２ａの上に載置されると、制御器６は回転台２２を回転させて、タンク２の回転を介して細胞懸濁液内の細胞の初期攪拌を行う。初期攪拌は、初期慣性流生成（順回転）と、初期慣性流生成（順回転）に続いて実行される逆流生成（逆回転）と、で構成される。初期慣性流生成（順回転）のみでは、タンク２内での細胞懸濁液の旋回流に乗って細胞が旋回するだけで攪拌効果を生じない。そのため、初期攪拌は、初期慣性流生成（順回転）と、初期慣性流生成（順回転）に続いて実行される逆流生成（逆回転）とで、初めて効果を奏する。すなわち、制御器６は、回転台２２を鉛直回転軸２３ａの所定の方向に鉛直回転軸２３ａまわりの初期慣性流生成を行い、その次に初期慣性流生成の方向と逆方向に鉛直回転軸２３ａまわりの回転を行うように、制御する。この明細書では、初期慣性流生成の方向を順回転と定義する。初期慣性流生成（順回転）の回転方向は回転台２２の回転の角速度に応じて任意に設定できる。すなわち、制御器６は、初期慣性流生成（順回転）と初期攪拌(逆回転)とを組み合わせて、回転台２２を回転させる。この初期攪拌（逆回転）が、タンク２内に生成された初期慣性流生成（順回転）に抗する流動として細胞懸濁液の中に攪拌効果を生じさせる。すなわち、初期慣性流生成（順回転）の直後の初期攪拌（逆回転）が初期慣性流生成（順回転）の回転方向と逆方向であればよい。初期慣性流生成（順回転）を第１の回数だけ行って、逆流生成（逆回転）を第２の回数だけ行う。第２の回数は第１の回数以下であり、代表的には、第２の回数は第１の回数より少ない。
　制御器６による回転台２２の所定の角速度ｗは、細胞懸濁液内における細胞の攪拌の効果を生じる範囲で細胞に損傷が生じないような範囲の角速度として画定される。回転の角速度が遅すぎると細胞懸濁液内における細胞の攪拌の効果が低くなる一方、回転の角速度が速すぎると攪拌により細胞懸濁液内の細胞に損傷が生じる可能性がある。所定の角速度ｗは、たとえば毎秒２回転（２ｒｐｓ）程度である。
　また、初期攪拌の逆流生成（逆回転）には、細胞懸濁液における攪拌効果に加えて、初期慣性流生成（順回転）によって生じた細胞懸濁液の巻き上げを打消す効果がある。すなわち、逆流生成（逆回転）は初期慣性流生成（順回転）と逆方向の流動であるため、初期慣性流生成（順回転）によりタンク２の中では、細胞懸濁液には渦状の巻き上げが発生するところ、逆流生成（逆回転）によりタンク２の内部に生じた細胞懸濁液の巻き上げを打ち消して、細胞懸濁液がタンク２の内部で波立つことを防ぐことができる。 
　たとえば、制御器６は、初期攪拌として、まず回転台２２の７回転分の初期慣性流生成（順回転）を行い、その後回転台２２の５回転分の逆流生成（逆回転）を行う。たとえば、代表的には、初期慣性流生成（順回転）として回転台２２を７から１０回転させ、逆流生成（逆回転）として回転台２２を５から７回転させる。この７から１０回転の初期慣性流生成（順回転）と５から７回転の逆流生成（逆回転）とにより、タンク２の中では細胞懸濁液にタンク２の半径方向、円周方向および深さ方向の３方向での攪拌効果と、巻き上げの打消し効果が、実現できる。前者の攪拌効果は細胞懸濁液内での細胞の分布の均一化に対する効果であり、後者の巻き上げの打消し効果は前者の攪拌効果に加えて、さらに攪拌による細胞懸濁液の流動による細胞の損傷防止に対する効果である。
　初期慣性流生成（順回転）として回転台２２を７から１０回転（第１の回転）させると、細胞懸濁液に巻き上げが発生するが、逆流生成（逆回転）として５から７回転（第２の回転）を行うことにより、その巻き上げを打ち消すことができる。巻き上げの打消しでは、巻き上げ流れを生じた回転の回数よりも少ない回数、特には約７割程度の回転数とすることが好ましい。前記の通り、逆流生成（逆回転）の回転（第２の回転）は巻き上げの打消しの役割を担うので、逆流生成（逆回転）は初期慣性流生成（順回転）の回転（第１の回転）以下とする。また、特に、代表的には初期慣性流生成（順回転）の回転（第１の回転）より少なくすることが好ましい。たとえば、逆流生成（逆回転）は初期慣性流生成（順回転）の回転の約７割とすることが好ましい。
　さらに、初期攪拌の後に、少なくとも１回の追加攪拌を追加して実行することができる。追加攪拌の回数は、細胞懸濁液の中の細胞の分布状態によって、自由に設定することができる。１回の追加攪拌は、回転台２２の追加慣性流生成（順方向）と、追加逆流生成（逆方向）と、の組み合わせからなる。すなわち、１回の追加攪拌は、初期攪拌の逆流生成（逆回転）の後に、追加的な回転台２２の追加慣性流生成（順回転）と、追加慣性流生成（順回転）の後の追加逆流生成（逆回転）と、からなる。追加慣性流生成（順回転）の回転回数と追加逆流生成（逆回転）の回転回数とは、たとえば細胞懸濁液の中の細胞の分布状態などのタンク２内の細胞の状態によって、自由に設定することができる。さらに、追加攪拌を複数回行う場合こともできる。この場合には、前の追加攪拌のうちの追加逆流性生成（逆回転）の後に、回転台２２の追加順回転と、追加順回転の後の追加逆回転とからなる追加攪拌をさらに行えばよい。一般に追加逆流性生成（逆回転）の回転回数は追加慣性流生成（順回転）の回転回数以下である。たとえば、１回の追加攪拌において、追加逆流性生成（逆回転）の回転回数は２回とし、追加慣性流生成（順回転）の回転回数を２回または１回とする。追加逆流生成（逆回転）は、追加慣性流生成（順回転）による巻き上げの原因となる流れの慣性を打ち消す効果とともに、懸濁液内の細胞の攪拌の効果に寄与する。
　追加攪拌は、たとえば、複数回実行することができる。たとえば、２回の追加攪拌を実行する例では、第１の追加攪拌と、第１の追加攪拌後の第２の追加攪拌を実行する。第１の追加攪拌では、第１の追加慣性流生成（順方向）と、第１の追加慣性流生成（順方向）の次の第１の追加逆流生成（逆方向）と、を実行する。第２の追加攪拌では、第１の追加逆流生成（逆方向）の後の第２の追加慣性流生成（順方向）と、第２の追加慣性流生成（順方向）の次の第２の追加逆流生成（逆方向）と、を実行する。第１の追加攪拌と、第２の追加攪拌とにおいて、それぞれの追加逆流性生成（逆回転）の回転回数は２回とし、追加慣性流生成（順回転）の回転回数は必要に応じて自由に設定できる。
　追加攪拌は、たとえば、１回の追加攪拌において、追加逆流性生成（逆回転）の回転回数は２回とし、追加慣性流生成（順回転）の回転回数を２回とし、このような追加攪拌を５回実行することもできる。すなわち、たとえば、初慣性流生成（順回転）として回転台２２を７から１０回転させ、初期攪拌（逆回転）として回転台２２を５から７回転させる初期攪拌の後に、２回の追加順回転と２回の追加逆回転とからなる１回の追加攪拌を５回連続で実行する。これにより、タンク２の内部で、タンク２の半径方向、円周方向および深さ方向の３方向に、細胞懸濁液で細胞が均一になる。
　細胞懸濁液に含まれる細胞を細胞懸濁液内で均一にするために細胞懸濁液を攪拌する場合に、一方向のみの回転による攪拌を行うのみでは、細胞懸濁液の慣性流が生成されて細胞が細胞懸濁液とともに回転するだけで、細胞懸濁液に含まれる細胞を細胞懸濁液内で均一にすることができない。そこで、前記の通り、初期攪拌および追加攪拌のいずれにおいても、順回転の回転による慣性流を生成した後に、逆方向の回転を行って逆流生成を行うものである。
　さらに、攪拌により細胞懸濁液の回転流が生じると、細胞懸濁液の中に渦流が生じる。細胞懸濁液内に渦流が生じると、攪拌が終了した後に、細胞懸濁液の内部において、細胞が渦流によってタンク２の中心に集合することになる。適切な回数の追加攪拌は、攪拌流れによって生じた渦流を打ち消す効果がある。そのため、追加攪拌では、回数および回転数を徐々に減じていくように設定することが好ましい。すなわち、追加攪拌を構成する追加慣性流生成（順回転）と追加逆流性生成（逆回転）とにおける各回転は、初期攪拌を構成する初期慣性流生成と逆流生成とにおける各回転よりも少なく設定する。
この出願は２０２２年７月１２日に出願された日本国特許出願第２０２２－１１１７１４からの優先権を主張するものであり、その内容を引用してこの出願の一部とするものである。
１　　分注準備装置
２　　タンク
３　　ポンプユニット
４　　リザーバ
５　　配管系
６　　制御器
７　　分注ヘッド
８　　プレート交換機
１０　分注装置
２１　ボトル容器
２２　回転台
２３　モータ
５１　タンク配管
５２　リザーバ配管
５３　ポンプ配管
５４　バルブ

Claims (10)

  1. 　細胞懸濁液を収容し、開口を有して、前記開口から細胞収容部に細胞懸濁液を吐出するピペッタの吐出先端部が繰り返し進入退出するリザーバと、
    　前記細胞懸濁液を収容するタンクと、
    　前記タンクと前記リザーバとを接続し、ポンプユニットにより前記タンクから前記リザーバまで内部に細胞懸濁液を流す配管と、
    　前記タンクの底面に垂直な回転軸のまわりに前記タンクの回転を行う回転台と、
    　前記回転台の回転を制御する制御器と、を備え、
    　前記配管は、前記配管の一端開口が前記リザーバの内壁に接触し、前記配管の他端開口は前記タンクの内壁から離間するように配置されていて、
    　前記制御器は、前記回転台を第１の回数だけ前記回転軸のまわりの所定の方向に順回転して前記細胞懸濁液の初期慣性流生成と、その後に前記回転台を前記所定の方向と逆方向に第２の回数だけ逆回転させる逆流生成と、を備える初期攪拌を実行するように制御する分注準備装置。
  2. 　請求項１に記載の分注準備装置であって、
    　前記タンクの底面の中心と前記回転台の前記回転軸は離間している分注準備装置。
  3. 　請求項１に記載の分注準備装置であって、
    　前記制御器は、前記第２の回数は前記第１の回数以下である、分注準備装置。
  4. 　請求項１に記載の分注準備装置と、前記ピペッタの進入後退を行い、前記細胞収容部を有する容器の前記細胞収容部に細胞懸濁液を注入する分注ヘッドと、
    　前記細胞収容部に細胞懸濁液が未注入の前記容器を所定の箇所に移動させて、前記細胞収容部に細胞懸濁液の注入が完了した容器を回収するプレート交換機と、を備える分注準備装置。
  5. 　請求項４に記載の分注準備装置であって、
    　前記分注ヘッドは、前記ピペッタの前記進入後退において、前記ピペッタの先端が前記リザーバの細胞懸濁液の表面から前記細胞懸濁液の深さ方向に所定の深度に到達してから前記細胞懸濁液の吸引を開始する分注準備装置。
  6. 　請求項１から５のいずれか一項に記載の分注準備装置であって、
    　前記制御器は、前記初期攪拌の後に、前記所定の方向の順回転で前記回転台を回転させる追加慣性流生成と、前記追加慣性流生成の後に前記所定の方向と逆方向の逆回転で前記回転台を回転させる追加逆流生成と、を備える追加攪拌を実行する分注準備装置。
  7. 　請求項６に記載の分注準備装置であって、
    　前記追加攪拌における各回転の回転回数は前記初期攪拌における各回転の回転回数よりも少ない分注準備装置。
  8. 　細胞懸濁液を収容し、開口を有して、前記開口から細胞収容部に細胞懸濁液を吐出するピペッタの吐出先端部が繰り返し進入退出するリザーバと、
    　前記細胞懸濁液を収容するタンクと、
    　前記タンクと前記リザーバとを接続し、ポンプユニットにより前記タンクから前記リザーバまで内部に細胞懸濁液を流す配管と、
    　前記タンクの底面に垂直な回転軸のまわりに前記タンクの回転を行う回転台と、を備える分注準備装置によって、前記細胞懸濁液を前記タンク内で攪拌する分注準備方法であって、
    　前記回転台を第１の回数だけ前記回転軸のまわりの所定の方向に順回転して前記細胞懸濁液の初期慣性流生成と、その後に前記回転台を前記所定の方向と逆方向に第２の回数だけ逆回転させる逆流生成と、からなる初期攪拌を実行する工程を備える分注準備方法。
  9. 　請求項８に記載の分注準備方法であって、
    　前記第２の回数は前記第１の回数以下である、分注準備方法。
  10. 　請求項８または９に記載の分注準備方法であって、
    　前記初期攪拌の後に、前記所定の方向の順回転で前記回転台を回転させる追加慣性流生成と、前記追加慣性流生成の後に前記所定の方向と逆方向の逆回転で前記回転台を回転させる追加逆流生成と、を備える追加攪拌を実行する工程を備える分注準備方法。
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