WO2020073930A1 - 靶向蛋白酶降解平台(ted) - Google Patents

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WO2020073930A1
WO2020073930A1 PCT/CN2019/110225 CN2019110225W WO2020073930A1 WO 2020073930 A1 WO2020073930 A1 WO 2020073930A1 CN 2019110225 W CN2019110225 W CN 2019110225W WO 2020073930 A1 WO2020073930 A1 WO 2020073930A1
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ubi
mmol
compound
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concentrated
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PCT/CN2019/110225
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曹小冬
王晓磊
黄超然
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嘉兴优博生物技术有限公司
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    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
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    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention belongs to biomedicine, and specifically relates to a targeted protease degradation platform (TED).
  • TED targeted protease degradation platform
  • Antibody drug conjugates use endocytic antibodies to provide targeting and serve as a carrier to deliver super toxin drugs to targeted sites.
  • ADC drugs The bottleneck encountered in the development of ADC drugs is that the treatment window is not wide enough.
  • the super toxin will fall off before reaching the target site due to the heterogeneity of the coupling, causing serious toxic and side effects.
  • the normal physiological function of the ubiquitin-proteasome system is responsible for cleaning up denatured, mutated or harmful proteins in cells.
  • the object of the present invention is to provide a compound that can more efficiently and reusably degrade target proteins to treat related diseases.
  • the A is a monovalent group of target molecules
  • the B is a monovalent group of E3 ligase ligand
  • L1 is a connector connecting A and B; and L1 is represented by the following formula II:
  • L3 is a linking group
  • Z is a polypeptide element or target molecule T
  • R ' is selected from the group of the following groups: H, substituted or unsubstituted C1-C6 alkyl, substituted or unsubstituted C3- C8 cycloalkyl, protecting group, or -X'-L3-Z;
  • L2 and L3 are each independently a linking group selected from the group consisting of:
  • substitution refers to one or more (preferably 1, 2, 3, or 4) hydrogen atoms on the group are replaced by substituents selected from the group consisting of C1-C10 alkyl, C3- C8 cycloalkyl, -COOH, -OH, -SH, -NH 2 , -NHR, -N (R 1 ) R 2 , -Z, -X'-L3-Z,
  • Z is a polypeptide element or target molecule T; where, when the substituent is -Z, -Z is only located on the N atom; wherein, R 1 and R 2 are each independently H, C1-C6 alkyl, C3 -C8 cycloalkyl, amino protecting group, -X'-L3-Z
  • R 1 and R 2 are not -X'-L3-Z
  • -X'-L3-Z is a group represented by formula I-1, I-2, I-3, I-4, or I-5:
  • R 20 and R 21 are each independently selected from the following group: -H, -Me, -Et, -nPr, iPro, cPro.
  • L4 The definition of L4 is the same as L3.
  • -X'-L3-Z is a group represented by I-1, I-2, or I-3
  • Z is a polypeptide element.
  • Z is the target molecule T.
  • L4 is a linking group selected from the group consisting of:
  • a substituted or unsubstituted 5-20 membered heterocarbon chain containing 1-5 heteroatoms selected from N, O, and S, and 1-4 chain atoms in the chain are selected from heterocycles of the following group Substitution: 4-10 membered saturated heterocyclic ring containing 1-4 heteroatoms selected from N, O and S, 5-10 membered partially unsaturated ring containing 1-4 heteroatoms selected from N, O and S or Fully unsaturated heterocycle;
  • L4 is a linking group selected from the group consisting of
  • polypeptide element is selected from the group consisting of ligands or active fragments thereof, receptors or active fragments thereof, antibodies or active fragments thereof, or combinations thereof.
  • the Z is selected from the group consisting of ligands, soluble receptors, antibodies, or antibody-drug conjugates (ADC), or a combination thereof.
  • the target molecule T and the target molecule A are the same or different.
  • the target molecule T and the target molecule A are small molecules with a targeting function in the drug conjugate.
  • the target molecule T and the target molecule A are each independently selected from the group consisting of folic acid, HSP90 inhibitor, or a combination thereof.
  • the ligand includes a full-length ligand or an active fragment thereof.
  • the antibodies include full-length antibodies or active fragments thereof.
  • the antibodies include single chain antibodies or double chain antibodies.
  • the 4-10 membered saturated heterocyclic ring containing 1-4 heteroatoms selected from N, O and S may be monocyclic, bicyclic or tricyclic.
  • the 4-10 membered saturated heterocyclic ring containing 1-4 heteroatoms selected from N, O and S may be a bicyclic ring or a spiro ring.
  • the 4-10 membered saturated heterocycle containing 1-4 heteroatoms selected from N, O and S may be a 4-6 membered saturated ring containing 1 nitrogen atom or containing 1 4-6 membered saturated ring of nitrogen atom.
  • the 5-10 membered partially unsaturated or fully unsaturated heterocyclic ring containing 1-4 heteroatoms selected from N, O and S may be monocyclic, bicyclic or tricyclic.
  • the 5-10 membered partially unsaturated or fully unsaturated heterocyclic ring containing 1-4 heteroatoms selected from N, O, and S may be a paracyclic ring or a spiro ring.
  • the 5-10 membered partially unsaturated or fully unsaturated heterocyclic ring containing 1-4 heteroatoms selected from N, O, and S may contain 1-4 selected heterocycles selected from N, O The five-membered partially unsaturated or fully unsaturated heterocyclic ring of the heteroatom and S.
  • L2 and / or L3 are linking groups selected from the group consisting of:
  • s is an integer of 5-20, or an integer of 5-50.
  • s is 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20.
  • the substituted-(CH 2 ) s- refers to being substituted by one or more groups selected from the group consisting of C1-C10 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, and -NH 2 , -NHR, -NR 1 R 2 , wherein R 1 and R 2 are each independently H, C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, protecting group, or R, wherein R is as defined above, and R 1 and R 2 are not both polypeptide elements or target molecules T.
  • the L2 and / or L3 are selected from the following group:
  • the L2 and / or L3 are selected from the following group:
  • s is 5-15, preferably 6-10.
  • X is NH or NR
  • X and a part of the L2 chain connected to it together form a 4-8 membered heterocyclic ring
  • Y and R are as defined above; m is an integer of 1-15; p and q are each independently 0, 1, 2 or 3, and p + q ⁇ 2.
  • L1 is selected from the group:
  • X and Y are as defined above;
  • p and q are each independently an integer of 1, 2, or 3.
  • L1 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • n and n are each independently an integer of 1-15.
  • L1 is a divalent linking group formed by a group selected from the group consisting of losing two hydrogen atoms at any arbitrary position:
  • L1 is derived from
  • m 'and m are each independently 0, 1, 2, 3, 4 or 5 (preferably, 0, 1, 2 or 3), and m' and m are not 0 at the same time;
  • p and n are each independently an integer of 1-15;
  • NH 2 , OH means the end is NH 2 or OH
  • T ' is N or CR b : wherein R b is selected from the group consisting of H, substituted or unsubstituted C1-C6 alkyl.
  • L1 is selected from the group:
  • m 'and m are each independently 0, 1, 2, 3, 4 or 5 (preferably, 0, 1, 2 or 3), and m' and m are not 0 at the same time;
  • p and n are each independently an integer of 1-15;
  • T ', R, R 1 and R 2 are as defined above.
  • L1 is selected from the group:
  • Y, X means that the end is X or Y; the additional condition is that one end is X, and the other end is Y;
  • X and Y are as defined above, m and n are each independently an integer of 0-15;
  • At least one of T, V, Q, and W is N-'X'-L3-Z.
  • L1 is selected from the group:
  • X and Y are as defined above, and m and n are each independently an integer of 0-15;
  • R is X'-L3-Z, and L3 and Z are as defined above;
  • Z is a polypeptide element selected from antibodies, receptors, ligands, or active fragments thereof.
  • Z is ADC.
  • L1 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • X, Y and R are as defined above;
  • n and n are each independently an integer of 1-15; p is 1, 2 or 3.
  • L1 is selected from the group:
  • X and Y are as defined above; m is an integer of 1-15; p is 1, 2 or 3.
  • the linker (L1) is selected from the group:
  • X, Y and R are as defined above, and m and n are each independently an integer of 0-15.
  • the L1 is selected from the following group:
  • R 1 and R 2 are each independently H, C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, protecting group, or R, wherein R is as defined above, and R 1 and R 2 are not both polypeptide elements.
  • L1 is a group selected from the group consisting of:
  • R, R 1 and R 2 are as described above.
  • L1 is a group selected from the following groups (active groups such as -NH-, -CH (OH)-, C (NH 2 ) on the main chain in the lower group L1 can be connected via a linking group (Coupled with Z to form X'-L3-Z, or directly coupled with Z):
  • the L1 is derived from a group selected from the group (preferably, by losing two hydrogen atoms at any arbitrary position, a hydroxyl group, a protecting group (boc), and / or azide Ring) formed divalent linking group:
  • the target molecules A and T are each independently selected from the group consisting of folic acid, HSP90, TINFRm, TNFR2, NADPH oxidase (oxidase), BclIBax, C5a receptor (receptor), HMG-CoA reduction Reductase, PDE IV, squalene cyclase inhibitors, CXCR1, CXCR2, nitric oxide (NO) synthase (Nitric oxide (NO) synthase), cyclooxygenase (cyclo-oxygenase) oxygenase) 1-2, 5HT receptors (5HT receptors), dopamine receptors (dopamine receptors), G-proteins (G-proteins), Gq, histamine receptors (Histamine receptors), lipoxygenases (Lipoxygenases), Tryptase serine protease (Tryptase serine protease), thymidylate synthas
  • the polypeptide element is an antibody; preferably, the antibody includes a nanobody and / or a minibody.
  • the antibody may bind to an antigen or receptor selected from the group consisting of DLL3, EDAR, CLL1, BMPR1B, E16, STEAP1, 0772P, MPF, 5T4, NaPi2b, Sema5b, PSCAhlg, ETBR , MSG783, STEAP2, TrpM4, CRIPTO, CD21, CD22, CD79b, CD19, CD37, CD138, FcRH2, B7-H4, HER2, NCA, MDP, IL20R ⁇ , short protein (Brevican), EphB2R, ASLG659, PSCA, GEDA, BAFF-R, CD79a, CXCR5, HLA-DOB, P2X5, CD72, LY64, FcRH1, IRTA2, TENB2, PMEL17, TMEFF1, GDNF-Ra1, Ly6E, TMEM46, Ly6G6D, LGR5, RET, LY6K, GPR19, GPR54
  • Cadherin-6 (Cadherin-6), ASG-15ME, ASG-22ME, CanAg, AXL, CEACAM5, EphA4, cMet, FGFR2, FGFR3, CD123, Her3, LAMP1, LRRC15, TDGF1, CD66, CD25, BCMA , GCC, Rick3 and CD33.
  • the E3 ligase ligand is selected from the group consisting of the A 1 group in WO2017 / 176957A1 (eg A-10, A-11, A-15, A-28, A-48, A-69, A-85, A-93, A-98, A-99 or A-101):
  • the dotted line indicates the connection position with other parts (that is, the connection position with -L1-A);
  • Rx is selected from the following group: none, NH, NH-CO, O, S, SO, SO 2 , SO 2 (NH 2 ) NH, C1-C4 alkylene, C2-C5 alkenylene, C2-C5 Alkynylene; R y is C ⁇ O, C ⁇ S or CH 2 .
  • the conjugate includes conjugates in the form of monomers or polymers.
  • the conjugates in the form of polymers share one or more Z.
  • the conjugate shown in formula I is the conjugate shown in formula III
  • t 1-15 (preferably, 1-8; more preferably, 2-7);
  • Z is as described above, preferably Z is a polypeptide element, more preferably an antibody;
  • R a -L3 is the remaining part of the conjugate of formula I after the Z group is lost.
  • R a specific compound derived from Table B1 ⁇ B11 is a divalent group (wherein said derivative is B11 refers to the table shown in Table B1 ⁇ particular compound loses linking group or linker backbone A monovalent group formed by hydrogen of NH or NH 2 on the branch of the group).
  • Ab is formed by an amino acid at the N-terminus or C-terminus, or an amino acid side chain (preferably, an amino acid side chain selected from the group consisting of Lys and Cys), or a thiol group formed by reducing a disulfide bond.
  • L3 shown in formula III preferably, in L3 -NH-, -NHR or -NH 2 groups) connection.
  • each group in the conjugate of formula I is the same as the corresponding groups of the specific compounds in Tables A1 and A2, Tables B1 to B11, Table C and Table D.
  • the second aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition, wherein the pharmaceutical composition comprises the conjugate according to the first aspect and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the third aspect of the present invention provides the preparation method of the conjugate according to the first aspect, wherein the reaction route of the method is as follows:
  • the fourth aspect of the present invention provides the use of the conjugate as described in the first aspect, for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment of diseases associated with excess target protein.
  • a fifth aspect of the present invention provides a method of reducing the content of target protein in a cell, wherein the content of the target protein in the cell is reduced by contacting the cell with the conjugate as described in the first aspect.
  • the method is an in vitro method.
  • the method is non-diagnostic and non-therapeutic.
  • a sixth aspect of the present invention provides a method for reducing the content of target protein in a subject or treating a disease associated with excessive target protein, which comprises the step of: administering the conjugate as described in the first aspect to a subject in need.
  • Figure 1 is a schematic diagram of the principle of the action of the targeted protease degradation platform (TED) to degrade the target protein.
  • TED targeted protease degradation platform
  • Figure 2 shows the results of the biological test of the conjugate in the examples.
  • FIG. 3 shows the changes in tumor volume in nude mice in animal experiments.
  • Figure 4 shows the changes in body weight of nude mice in animal experiments.
  • the conjugate of the present invention has the structure shown in Formula I.
  • the conjugates of the present invention are very suitable for further connection with polypeptide elements (especially antibodies, protein ligands) or with polypeptide elements, etc., so that the conjugates of the present invention have excellent dual targeting and improve drug selectivity , Implement more precise degradation of disease-causing proteins, reduce the systemic toxicity that may be caused by non-specific degradation, and possibly overcome the difficulties encountered in drug absorption and metabolism, and eliminate the opportunities for drug resistance. On this basis, the present invention has been completed.
  • the terms "compound of the present invention”, “conjugate of the present invention”, “TED conjugate of the present invention” are used interchangeably and refer to the compound or conjugate of formula I described in the first aspect of the present invention .
  • alkyl by itself or as part of another substituent refers to a linear or branched hydrocarbon group having the specified number of carbon atoms (ie, C 1-8 represents 1-8 carbons ).
  • alkyl groups include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, t-butyl, isobutyl, sec-butyl, n-pentyl, n-hexyl, n-heptyl, n-octyl, etc.
  • alkenyl refers to an unsaturated alkyl group having one or more double bonds.
  • alkynyl refers to an unsaturated alkyl group having one or more triple bonds.
  • unsaturated alkyl groups include vinyl, 2-propenyl, crotonyl, 2-isopentenyl, 2- (butadienyl), 2,4-pentadienyl, 3- (1, 4-pentadienyl), ethynyl, 1- and 3-propynyl, 3-butynyl and higher homologs and isomers.
  • cycloalkyl refers to a hydrocarbon ring that has the specified number of ring atoms (eg, C 3-6 cycloalkyl) and is fully saturated or has no more than one double bond between ring tops.
  • Cycloalkyl also refers to bicyclic and polycyclic hydrocarbon rings, such as bicyclic [2.2.1] heptane, bicyclic [2.2.2] octane, and the like.
  • heterocycloalkyl refers to a cycloalkyl group containing one to five heteroatoms selected from N, O, and S, wherein the nitrogen and sulfur atoms are optionally oxidized, and the nitrogen atom is optionally quaternized.
  • Heterocycloalkyl can be a monocyclic, bicyclic or polycyclic ring system.
  • heterocycloalkyls include pyrrolidine, imidazolidine, pyrazolidine, butyrolactam, valerolactam, imidazolidinone, hydantoin, dioxolane, phthalimide, Piperidine, 1,4-dioxane, morpholine, thiomorpholine, thiomorpholine-S-oxide, thiomorpholine-S, S-oxide, piperazine, pyran, pyridone, 3-pyrroline, thiopyran, pyrone, tetrahydrofuran, tetrahydrothiophene, quinine ring, etc.
  • the heterocycloalkyl group can be attached to the rest of the molecule via a ring carbon or a heteroatom.
  • cycloalkylalkyl and heterocycloalkylalkyl it is meant that the cycloalkyl or heterocycloalkyl group is connected to the rest of the molecule through an alkyl or alkylene linker.
  • cyclobutylmethyl- is a cyclobutyl ring attached to the methylene linker of the rest of the molecule.
  • alkylene by itself or as part of another substituent refers to a divalent group derived from an alkane, such as -CH 2 CH 2 CH 2 CH 2- .
  • the alkyl group (or alkylene group) generally has 1 to 24 carbon atoms, and the present invention preferably has those groups having 10 or less carbon atoms.
  • “Lower alkyl” or “lower alkylene” is a shorter chain alkyl or alkylene group, usually having 4 or fewer carbon atoms.
  • alkenylene or “alkynylene” refers to an unsaturated form of "alkylene” having a double bond or a triple bond, respectively.
  • heteroalkyl by itself or in combination with other terms refers to a stable linear or branched or cyclic hydrocarbon group or a combination thereof, consisting of the specified number of carbon atoms and 1 to 3 selected from O , N, Si and S heteroatoms, and wherein nitrogen and sulfur atoms are optionally oxidized, nitrogen heteroatoms can be optionally quaternized.
  • the heteroatoms O, N and S can be located at any internal position of the heteroalkyl group.
  • the heteroatom Si may be located at any position of the heteroalkyl group, including the position where the alkyl group is attached to the rest of the molecule.
  • heteroalkenyl and “heteroalkynyl” by themselves or in combination with another term refer to alkenyl or alkynyl groups, respectively, which contain the specified number of carbons and 1 to 3 choices, respectively From heteroatoms of O, N, Si and S, and wherein nitrogen and sulfur atoms are optionally oxidized, nitrogen heteroatoms can optionally be quaternized.
  • the heteroatoms O, N and S can be located at any internal position of the heteroalkyl group.
  • heteroatoms can also occupy either or both of the chain ends (eg, alkyleneoxy, alkylenedioxy, alkyleneamino, alkylenediamino, etc.).
  • alkoxy alkylamino and “alkylthio” (or thioalkoxy) are used in their conventional sense to refer to those connected to the rest of the molecule via an oxygen atom, an amino group or a sulfur atom, respectively alkyl.
  • dialkylamino groups the alkyl moieties can be the same or different, or they can be combined with the nitrogen atom attached to each alkyl group to form a 3-7 membered ring. Therefore, the group represented by -NR a R b includes piperidinyl, pyrrolidinyl, morpholinyl, azetidinyl and the like.
  • halo or halogen by itself or as part of another substituent refers to a fluorine, chlorine, bromine, or iodine atom.
  • terms such as “haloalkyl” are meant to include monohaloalkyl or polyhaloalkyl.
  • C 1-4 haloalkyl is meant to include trifluoromethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, 4-chlorobutyl, 3-bromopropyl, and the like.
  • aryl means a polyunsaturated (usually aromatic) hydrocarbon group, which may be a single ring or multiple rings (up to three rings) fused together or covalently linked.
  • heteroaryl refers to an aryl group (or ring) containing 1 to 5 heteroatoms selected from N, O, and S, wherein the nitrogen and sulfur atoms are optionally oxidized, and the nitrogen atom is optionally quaternized . Heteroaryl groups can be attached to the rest of the molecule through heteroatoms.
  • Non-limiting examples of aryl groups include phenyl, naphthyl and biphenyl, and non-limiting examples of heteroaryl groups include pyridyl, pyridazinyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, triazinyl, quinolinyl, Quinoxalinyl, quinazolinyl, cinnolinyl, phthalazinyl, benzotriazinyl, purinyl, benzimidazolyl, benzopyrazolyl, benzotriazolyl, benziso Oxazolyl, isobenzofuryl, isoindolyl, indolizinyl, benzotriazinyl, thienopyridinyl, thienopyrimidinyl, pyrazolopyrimidinyl, imidazopyridine, benzene Thiazolyl, benzofuranyl, benzothienyl, indolyl, quinolinyl,
  • aryl when used in combination with other terms (eg, aryloxy, arylthio, aralkyl), it includes aryl and heteroaryl rings as defined above.
  • aralkyl refers to those groups that include an aryl group attached to an alkyl group attached to the rest of the molecule (eg, benzyl, phenethyl, pyridylmethyl, etc.).
  • the above terms will include both substituted and unsubstituted forms of the specified groups.
  • the preferred substituents for each type of group are provided below.
  • aryl and heteroaryl will refer to the substituted or unsubstituted forms as provided below, while the term “alkyl” and related aliphatic groups refer to the unsubstituted form, unless indicated to be substituted .
  • R ′ and R ′′ are attached to the same nitrogen atom, they may be The nitrogen atoms combine to form a 3-, 4-, 5-, 6- or 7-membered ring.
  • -NR'R is meant to include 1-pyrrolidinyl and 4-morpholinyl.
  • acyl used alone or as part of another group, refers to where the point of attachment closest to the group
  • substituent O (for example, -C (O) CH 3 , -C (O) CH 2 CH 2 OR ', etc.).
  • Two substituents on adjacent atoms of the aryl or heteroaryl ring may be optionally substituted with a substituent of the formula -TC (O)-(CH 2 ) q -U-, where T and U are independently- NH-, -O-, -CH 2 -or a single bond, and q is an integer of 0 to 2.
  • the two substituents on adjacent atoms of the aryl or heteroaryl ring may be optionally substituted by the formula -A- (CH 2 ) r -B-, where A and B are independently -CH 2 -,- O-, -NH-, -S-, -S (O)-, -S (O) 2- , -S (O) 2 NR'- or a single bond, and r is an integer of 1 to 3.
  • One single bond in the new ring thus formed may optionally be replaced by a double bond.
  • the two substituents on adjacent atoms of the aryl or heteroaryl ring may be optionally replaced by substituents of formula-(CH 2 ) s -X- (CH 2 ) t- , where s and t are independent an integer from 0 to 3, and X is -O -, - NR '-, - S -, - S (O) -, - S (O) 2 -, or -S (O) 2 NR'-.
  • the substituent R 'in -NR'- and -S (O) 2 NR'- is selected from hydrogen or unsubstituted C 1-6 alkyl.
  • the heterocyclic ring when a chain atom (such as a C atom) is replaced by a heterocyclic ring, the heterocyclic ring may lose two hydrogens located on the same ring atom (on the ring carbon atom) to connect with other chain atoms on the chain (Forming a structure similar to a spiro ring), or may lose two hydrogens located on different ring atoms to connect with other chain atoms on the chain (eg -cyclopentylene-).
  • heteroatom is intended to include oxygen (O), nitrogen (N), sulfur (S), and silicon (Si).
  • the bond from the substituent (usually the R group) to the center of the aromatic ring will be understood to mean the bond that provides the connection at any available vertex of the aromatic ring.
  • the description also includes linking on the ring fused to the aromatic ring.
  • the bond drawn to the center of the indolebenzene moiety will represent the bond to any available vertex of the six- or five-membered ring portion of indole.
  • salts are meant to include salts prepared with active compounds and relatively non-toxic acids or bases, depending on the specific substituents on the compounds described herein.
  • base addition salts can be obtained by contacting such compounds in neutral form with a sufficient amount of the desired base (solvent-free or in a suitable inert solvent).
  • salts derived from pharmaceutically acceptable inorganic bases include aluminum, ammonium, calcium, copper, iron, ferrous iron, lithium, magnesium, manganese, manganese, potassium, sodium, zinc, and the like.
  • Salts derived from pharmaceutically acceptable organic bases include salts of primary, secondary, and tertiary amines, including substituted amines, cyclic amines, naturally occurring amines, etc., such as arginine, betaine, caffeine, Choline, N, N'-dibenzylethylenediamine, diethylamine, 2-diethylaminoethanol, 2-dimethylaminoethanol, ethanolamine, ethylenediamine, N-ethylmorpholine, N- Ethyl piperidine, glucamine, glucosamine, histidine, hybamine, isopropylamine, lysine, meglucosamine, morpholine, piperazine, piperidine, polyamine resin , Procaine, purine, theobromine, triethylamine, trimethylamine, tripropylamine, tromethamine, etc.
  • arginine betaine
  • caffeine Choline
  • acid addition salts can be obtained by contacting such compounds in neutral form with a sufficient amount of the desired acid (solvent-free or in a suitable inert solvent).
  • pharmaceutically acceptable acid addition salts include those derived from inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, carbonic acid, monohydrocarbonic acid, phosphoric acid, monohydrophosphoric acid, dihydrophosphoric acid, sulfuric acid, monohydrosulfuric acid, Hydroiodic acid, or phosphorous acid, etc .; and salts derived from relatively non-toxic organic acids, such as acetic acid, propionic acid, isobutyric acid, malonic acid, benzoic acid, succinic acid, suberic acid, fumaric acid Acid, mandelic acid, phthalic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, citric acid, tartaric acid, methanesulfonic
  • salts of amino acids such as arginine salts, etc.
  • salts of organic acids such as glucuronic acid or galactunoric acid, etc.
  • Certain specific compounds of the present invention contain both basic and acidic functional groups so that the compounds can be converted into base addition salts or acid addition salts.
  • the neutral form of the compound can be regenerated by contacting the salt with a base or acid and isolating the parent compound in a conventional manner.
  • the parent form of the compound differs from the various salt forms in certain physical properties (such as solubility in polar solvents), but otherwise, for the purposes of the present invention, those salts are equivalent to the parent form compound of.
  • the present invention provides compounds in prodrug form.
  • Prodrugs of the compounds described herein are those compounds that readily undergo chemical changes under physiological conditions to provide compounds of the invention.
  • prodrugs can be converted into compounds of the invention by chemical or biochemical methods in an ex vivo environment. For example, when placed in a transdermal patch container containing a suitable enzyme or chemical agent, the prodrug can be slowly converted to the compound of the invention.
  • Certain compounds of the invention can exist in unsolvated as well as solvated forms, including hydrated forms.
  • the solvated form is generally equivalent to the unsolvated form and should be included in the scope of the present invention.
  • Certain compounds of the invention may exist in polymorphic or amorphous forms. In general, all physical forms are equivalent for the application considered by the present invention and should be included in the scope of the present invention.
  • Certain compounds of the present invention possess asymmetric carbon atoms (optical centers) or double bonds; racemates, diastereomers, geometric isomers, regioisomers, and individual isomers (eg, separated enantiomers) Body) should be included in the scope of the present invention.
  • R or S or indicated by a dashed line or wedge bond
  • those skilled in the art will understand that those compounds are substantially free of other isomers (eg, at least 80% , 90%, 95%, 98%, 99% and up to 100% without other isomers).
  • the compounds of the present invention may also contain unnatural proportions of atomic isotopes at one or more isotopic atoms constituting such compounds.
  • the unnatural proportion of a certain isotope can be defined as the amount of the atom in question from the naturally found amount to 100%.
  • the compound may incorporate a radioisotope such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I) or carbon-14 ( 14 C), or a non-radioactive isotope such as deuterium ( 2 H) or carbon-13 ( 13 C ).
  • a radioisotope such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I) or carbon-14 ( 14 C), or a non-radioactive isotope such as deuterium ( 2 H) or carbon-13 ( 13 C ).
  • such isotopic variants may provide additional uses.
  • isotopic variants of the compounds of the invention may have additional uses, including but not limited to being diagnostic and / or imaging agents, or as cytotoxic / radiotoxic therapeutic agents.
  • isotopic variants of the compounds of the invention may have altered pharmacokinetic and pharmacodynamic characteristics, thereby helping to increase safety, tolerability, or efficacy during treatment. Whether radioactive or not, all isotopic variations of the compounds of the present invention should be included within the scope of the present invention.
  • the present invention provides a targeted protease degradation platform (TED) based on the conjugate of the present invention, which utilizes the "cleaner” -ubiquitin-proteasome system within the cell.
  • TED targeted protease degradation platform
  • the cell's own protein destruction mechanism can be used to remove specific oncogenic protein from the cell, and thus is an alternative method of targeted therapy.
  • the TED technology of the present invention is a bifunctional hybrid compound, which is used to bind the target protein on one side and an E3 ligase on the other side, so that the target protein can be combined with E3 ligase
  • the target protein is ubiquitinated and thus degraded by the proteome.
  • TED technology only provides binding activity, without directly inhibiting the functional activity of the target protein, and can be reused, so it has excellent application prospects.
  • polypeptide element includes peptide segments (such as short peptides of 3-20 aa) or proteins. In addition, the term also includes intact proteins or fragments thereof. Preferred polypeptide elements include antibodies (such as intact antibodies, single chain antibodies, Nanobodies, Fab), especially against tumor cell markers (such as tumor markers located on the surface of tumor cells, such as receptors on the cell surface) or against inflammation Antibodies to factors such as inflammatory factors associated with autoimmune diseases.
  • antibody or "immunoglobulin” is a heterotetrameric glycoprotein of about 150,000 Daltons with the same structural characteristics, which consists of two identical light chains (L) and two identical heavy chains (H) Composition. Each light chain is connected to the heavy chain through a covalent disulfide bond, and the number of disulfide bonds between heavy chains of different immunoglobulin isotypes is different. Each heavy and light chain also has regularly spaced disulfide bonds in the chain. Each heavy chain has a variable region (VH) at one end, followed by multiple constant regions.
  • VH variable region
  • Each light chain has a variable region (VL) at one end and a constant region at the other end; the constant region of the light chain is opposite to the first constant region of the heavy chain, and the variable region of the light chain is opposite to the variable region of the heavy chain .
  • Special amino acid residues form an interface between the variable regions of the light chain and the heavy chain.
  • single domain antibody and “nanobody” have the same meaning, and refer to cloning the variable region of an antibody heavy chain, constructing a single domain antibody consisting of only one heavy chain variable region, which is fully functional The smallest antigen-binding fragment.
  • the variable region of the antibody heavy chain is cloned to construct a single-domain antibody composed of only one heavy chain variable region.
  • variable means that certain parts of the variable region of an antibody differ in sequence, which forms the binding and specificity of various specific antibodies for their specific antigens. However, the variability is not evenly distributed throughout the variable region of the antibody. It is concentrated in three segments called complementarity determining regions (CDRs) or hypervariable regions in the light chain and heavy chain variable regions. The more conserved part of the variable region is called the framework region (FR).
  • CDRs complementarity determining regions
  • FR framework region
  • the variable regions of the natural heavy and light chains each contain four FR regions, which are roughly in a ⁇ -sheet configuration, connected by three CDRs that form a connecting loop, and in some cases may form a partially folded structure.
  • the CDRs in each chain are closely together through the FR region and together with the CDRs of the other chain form the antigen-binding site of the antibody (see Kabat et al., NIH Publ. No. 91-3242, Volume I, pages 647-669) (1991)).
  • the constant regions are not directly involved in the binding of antibodies to antigens, but they exhibit different effector functions, such as antibody-dependent cytotoxicity involved in antibodies.
  • immunoglobulins can be classified into one of two distinct classes (called kappa and lambda) based on the amino acid sequence of its constant region. According to the amino acid sequence of the constant region of its heavy chain, immunoglobulins can be divided into different types. There are five main types of immunoglobulins: IgA, IgD, IgE, IgG and IgM, some of which can be further divided into subclasses (isotypes), such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA and IgA2.
  • the heavy chain constant regions corresponding to different classes of immunoglobulins are called ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ , and ⁇ , respectively.
  • the subunit structures and three-dimensional configurations of different classes of immunoglobulins are well known to those skilled in the art.
  • variable regions which divides this segment into 4 framework regions (FR)
  • FR framework regions
  • the amino acid sequence of FR is relatively conservative and does not directly participate in the binding reaction. These CDRs form a circular structure, and the ⁇ sheets formed by the FRs in between are close to each other in space structure.
  • the CDRs on the heavy chain and the CDRs on the corresponding light chain constitute the antigen binding site of the antibody.
  • the amino acid sequences of antibodies of the same type can be compared to determine which amino acids constitute the FR or CDR regions.
  • the polypeptide element may include not only intact antibodies, but also fragments of antibodies with immunological activity (such as Fab or (Fab ') 2 fragments; antibody heavy chains; or antibody light chains) or antibodies formed with other sequences Fusion protein. Therefore, the present invention also includes fragments, derivatives and analogs of the antibodies.
  • a targeting ligand is a small molecule capable of binding the target protein of interest.
  • target molecules include, but are not limited to: folic acid, Hsp90 inhibitors, kinase inhibitors, MDM2 inhibitors, compounds targeting human BET bromodomain-containing proteins, targeting Compounds of the cytoplasmic signaling protein FKBP12, HDAC inhibitors, human lysine methyltransferase inhibitors, angiogenesis inhibitors, immunosuppressive compounds, and compounds targeting aryl hydrocarbon receptors (AHR).
  • the targeting ligand is capable of binding kinases, BET bromodomain-containing proteins, cytoplasmic signaling proteins (eg FKBP12), nuclear proteins, histone deacetylases, lysine methyltransferases, Proteins that regulate angiogenesis, proteins that regulate immune responses, aromatic hydrocarbon receptors (AHR), estrogen receptors, androgen receptors, glucocorticoid receptors or transcription factors (eg, SMARCA4, SMARCA2, TRIM24).
  • kinases eg., BET bromodomain-containing proteins, cytoplasmic signaling proteins (eg FKBP12), nuclear proteins, histone deacetylases, lysine methyltransferases, Proteins that regulate angiogenesis, proteins that regulate immune responses, aromatic hydrocarbon receptors (AHR), estrogen receptors, androgen receptors, glucocorticoid receptors or transcription factors (eg, SMARCA4, SMARCA2, TRIM24).
  • AHR aromatic hydrocarbon
  • kinases to which the targeting ligand can bind include, but are not limited to: tyrosine kinases (eg, AATK, ABL, ABL2, ALK, AXL, BLK, BMX, BTK, CSF1R, CSK, DDR1, DDR2, EGFR, EPHA1, EPHA2, EPHA3, EPHA4, EPHA5, EPHA6, EPHA7, EPHA8, EPHA10, EPHB1, EPHB2, EPHB3, EPHB4, EPHB6, ERBB2, ERBB3, ERBB4, FER, FES, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4 FLT1, FLT3, FLT4, FRK, FYN, GSG2, HCK, HRAS, HSP90, IGF1R, ILK, INSR, INSRR, IRAK4, ITK, JAK1, JAK2, JAK3, KDR, KIT, KRAS, KSP, KSR1, LCK, LMTK2, LMTK3, LTK, LY
  • the target protein is bound by the target molecule.
  • the target molecule may be target molecule A, target molecule T, or a combination thereof.
  • the target molecule may be any inhibitor of the target protein.
  • the target molecule may be a highly effective inhibitor of the target protein, or an inhibitor with relatively low activity.
  • the target molecule of the present invention may be a small molecule inhibitor known in the art for any target protein in the art.
  • the target molecule used herein has a group (such as -O-, -NR a- (where Ra is H, or C1-C6 alkyl, etc. CO-, -COO-, etc.) are monovalently docked with the linker molecule of the invention (such as L1 in the invention) to form ethers, amines, amides, etc.
  • a group such as -O-, -NR a- (where Ra is H, or C1-C6 alkyl, etc. CO-, -COO-, etc.
  • the target protein may be various target proteins known in the art, and representative examples include (but are not limited to): MDM2, AKT, BCR-ABL, Tau, BET (BRD2, BRD3, BRD4), ERR ⁇ , FKBP12 , RIPK2, ERBB3, androgen receptor, MetAP2, TACC3, FRS2 ⁇ , PI3K, DHFR, GST, HaloTag, CRABPI, CRABPII, RAR, aromatic hydrocarbon receptor, estrogen receptor.
  • MDM2 MDM2, AKT, BCR-ABL, Tau, BET (BRD2, BRD3, BRD4), ERR ⁇ , FKBP12 , RIPK2, ERBB3, androgen receptor
  • MetAP2 TACC3, FRS2 ⁇ , PI3K, DHFR, GST, HaloTag, CRABPI, CRABPII, RAR, aromatic hydrocarbon receptor, estrogen receptor.
  • MDM2 its inhibitors can be found in WO2017176957, WO2017176958A1
  • E3 ligase ligand is used to bind E3 ligase.
  • a representative E3 ligase ligand has the structure shown below:
  • R X is none, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, O, NH, S, CO or SO n (n is 1 or 2), etc .; R Y is CH 2.
  • C S, CO; moreover, the E3 ligase ligand (B in formula I) can be connected to the L1 of the present invention through the R X group, such as -R x -L1-A (such as -O-L1-A).
  • R ' is H or Me, and R is H, Me or Et.
  • the E3 ligase ligand used herein has a group that can be attached to a linker (such as -O-, -NR a- (where Ra is H, or a C1-C6 alkyl substituent, etc. ), -CO-, -COO-, etc.), butt-bonded with the linker molecule of the present invention (such as L1, etc. in the present invention) to form ether, amine, amide and so on.
  • a linker such as -O-, -NR a- (where Ra is H, or a C1-C6 alkyl substituent, etc. ), -CO-, -COO-, etc.
  • the linker molecule of the present invention is used to connect the target molecule and the E3 ligase ligand.
  • connection head is-(CH2) s-; wherein, 1-4 -CH 2 -is a five-membered unsaturated ring containing 1-4 heteroatoms (such as N, O, S, and P)
  • 1-4 heteroatoms such as N, O, S, and P
  • X, Y, T, V, Q, W, m, n, s, R are as defined above.
  • the linker molecule of the present invention can be selected from the following structures:
  • X, Y, p, m, n, s, R are as defined above.
  • the linker molecule of the present invention is selected from the following structures:
  • X and Y are as defined above, m is an integer of 1-20; p is an integer of 1-3.
  • connection head is-(CH2) s -or the connection head is-(CH2) s- ; wherein 1-4 -CH 2 -are replaced by O.
  • linker molecule of the present invention can also be connected to the target molecule or polypeptide element through the -X'-L3- linker structure to form a trifunctional targeted protease degradation platform (TED) molecule, for example, as shown in the following formula Of the targeted protease degradation platform (TED) molecules:
  • the molecular structure of the targeted protease degradation platform (TED) of the present invention is shown as Formula Ia or Formula I:
  • Target molecule-linker-E3 ligase ligand Formula Ia Target molecule-linker-E3 ligase ligand Formula Ia.
  • the linker L1 of the present invention is used to connect a target molecule and an E3 ligase ligand.
  • the linker of the present invention may further contain various other functional groups, such as -OH, -NHR, -SH and other functional groups.
  • linker L1 of the present invention can be represented by the following general formula II:
  • X and Y are each independently a divalent group formed by the loss of a hydrogen atom by the following monovalent group: -OH, -NH 2 , -SH, -COOH, -SO 2 H.
  • linking method between the linker and the target molecule can be via the linking group as shown below:
  • R in the above formulas is as defined above; n is 1 or 2 or 3.
  • the conjugate of the present invention may also be referred to simply as ACTED or ACTED molecule or ACTED compound.
  • an exemplary ACTED compound ie Ab-linked TED molecule
  • Ab represents antibody; represents Ab through N-terminal or C-terminal amino acid, or amino acid side chain (if selected The amino acid side chains from the lower group: Lys, Cys), or the thiol group formed by reducing the disulfide bond, and the same as L3 shown in Formula III (as in L3 -NH-, -NHR or -NH 2 groups) connection.
  • Step 6 Reduce compound UBI-1054 in the same way as the preparation of compound UBI-1040.
  • Step 3 The compound UBI-1104 is reduced in the same way as the preparation of compound UBI-1040.
  • the L1-B conjugate shown in Table A was prepared, in which, after replacing the structure E3 ligase ligand B with H in the conjugate structure formula, it was the corresponding linker L1 molecule.
  • the compound UBI-1005 (20mg, 0.042mmol) was weighed and dissolved in DMF (2mL), followed by the addition of NH 2 -linking group -B (A1) (1eq.), HATU (2eq. 32mg, 0.084mmol) under ice-water bath And DIEA (3eq. 16.2 mg, 0.126 mmol). After the addition was completed, the material system was stirred at room temperature under nitrogen for 18 hours. After the reaction was completed, the reaction solution was poured into 5 mL of water and extracted three times with ethyl acetate (5 mL * 3).
  • the organic phases were combined and washed with saturated brine, anhydrous Na 2 SO 4 was dried, concentrated by rotary evaporation under reduced pressure, and the crude product was obtained.

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Abstract

靶向蛋白酶降解平台（TED），具体地为一种结构为A-L1-B （式I）所示的靶标分子-连接体-E3连接酶配体的偶联物，其中，所述A为靶标分子的一价基团，所述B为E3连接酶配体的一价基团，所述L1为连接A和B的连接头，且L1如-X-L2-Y-（式II）所示。

Description

靶向蛋白酶降解平台(TED) 技术领域
本发明属于生物医药，具体地，涉及一种靶向蛋白酶降解平台(TED)。
背景技术
现代分子生物学从3个基本层次上调控蛋白的表达水平：首先，在DNA水平，通过基因敲除，从而使目标蛋白的DNA失活；其次，在mRNA水平，通过小分子RNA，与目标蛋白的mRNA结合，从而抑制mRNA的翻译及表达；再次，在蛋白水平，通过对翻译后靶蛋白的修饰，例如甲基化、磷酸化、糖基化等，从而调整靶蛋白的量及活性。
就药物研发的总体发展来看，小分子和大分子两种药物形式都有各自的优势与不足。如小分子药物的发展一直面临如何维持体内药物浓度以及耐药性等关键挑战。有些靶点部位的形状不利于小分子的药物设计而成为“不可成药”的靶点。针对这些靶点目前还未找到有效的调控方式。单抗虽相对于小分子具有高亲和力和高选择性的优势，易于开发成高效、高选择性的药物，但其最大的弊端在于无法透过细胞膜，因此无法作用于胞内靶点。抗体药物偶联体(ADC)利用具有内吞性的抗体提供靶向并作为载体将超级毒素药物送达靶向部位。ADC类药物开发遇到的瓶颈是治疗窗口不够宽，除了抗体本身引起的毒副作用外，超级毒素会因偶联的非均一性而在到达靶位前脱落，引起严重毒副作用。此外，泛素-蛋白酶体***正常生理功能负责清理细胞中变性、变异或者有害的蛋白。
综上所述，本领域迫切需要开发能够更高效、且可重复利用的降解靶蛋白从而治疗相关疾病的化合物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够更高效、且可重复利用的降解靶蛋白从而治疗相关疾病的化合物。
在本发明的第一方面，提供了一种式I所示的偶联物：
A-L1-B      式I
其中：
所述A为靶标分子的一价基团；
所述B为E3连接酶配体的一价基团；
所述L1为连接A和B的连接头；且L1如下式II所示：
-X-L2-Y-              式II
其中，
当X或Y为NH或NR时，X或Y与和它们相连的L2链中的一部分共同形成4-8元芳香或非芳香杂环；其中，R为取代或未取代的C1-C10烷基、-(C＝O)-R'、(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'或-NH-CO-NH-R'、-NH-CO-O-R'或-X'-L3-Z；其中L3为连接基团，而Z为多肽元件或者靶标分子T；其中，R'选自下组的基团：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、氨基保护基、或者-X'-L3-Z；
或
X和Y各自独立地选自下组：-O-、-S-、-NH-、-NR-、-(C＝O)NH-、-NH(C＝O)-、-SO 2-、-NHSO 2-、-SO 2NH-、-SO-、-NHSO-、-SONH-、-PO 3-、-NHCOO-、-COO-、-NHCOCH 2O-、或-NH-CO-NH-；其中，R为取代或未取代的C1-C10烷基、-(C＝O)-R'、-(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'或-NH-CO-NH-R'、或-X'-L3-Z；
其中，L3为连接基团，而Z为多肽元件或者靶标分子T；其中，R'选自下组的基团：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、保护基、或者-X'-L3-Z；
X'选自下组：-O-、-S-、-NH-、-(C＝O)NH-、-NH(C＝O)-、-SO 2-、-NHSO 2-、-SO 2NH-、-SO-、-NHSO-、-SONH-、-PO 3-、-NHCOO-、-COO-、-COOCH 2-或-NH-CO-NH-；
L2和L3各自独立地为选自下组的连接基团：
(a)取代或未取代的5-20元碳链或5-50元碳链；
(b)取代或未取代的含有1-5个选自N、O和S的杂原子的5-20元杂碳链或5-50元杂碳链；
(c)取代或未取代的5-20元碳链或5-50元碳链，且链中的1-4个链原子被选自下组的杂环替换：含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环、含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环；
(d)取代或未取代的含有1-5个选自N、O和S的杂原子的5-20元杂碳链或5-50元杂碳链，且链中的1-4个链原子被选自下组的杂环替换：含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环、含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环；
其中，所述“取代”指基团上的一个或多个(优选为1、2、3、或4个)氢原子被选自下组的取代基所取代：C1-C10烷基、C3-C8环烷基、-COOH、-OH、-SH、-NH 2、-NHR、-N(R 1)R 2、-Z、-X'-L3-Z、
Figure PCTCN2019110225-appb-000001
其中，Z为多肽元件或者靶标分子T；其中，当取代基为-Z时，则-Z仅仅位于N原子上；其中，R 1和R 2各自独立地为H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、氨基保护基、-X'-L3-Z
Figure PCTCN2019110225-appb-000002
Figure PCTCN2019110225-appb-000003
Figure PCTCN2019110225-appb-000004
其中，R为取代或未取代的C1-C10烷基、-(C＝O)-R'、(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'或-NH-CO-NH-R'、-NH-CO-O-R'或-X'-L3-Z；；其中L3为连接基团，而Z为多肽元件或者靶标分子T；其中，R'选自下组的基团：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、保护基、或者X'-L3-Z。
在另一优选例中，R 1和R 2不同时为-X'-L3-Z、
Figure PCTCN2019110225-appb-000005
Figure PCTCN2019110225-appb-000006
在另一优选例中，-X'-L3-Z为如式I-1、I-2、I-3、I-4、或I-5所示的基团：
Figure PCTCN2019110225-appb-000007
其中，R 20和R 21各自独立地选自下组：-H，-Me,-Et,-nPr,iPro,cPro。
L4的定义同L3。
在另一优选例中，当-X'-L3-Z为如I-1、I-2或I-3所示的基团时，Z为多肽元件。
在另一优选例中，当-X'-L3-Z为如I-4或I-5所示的基团时，Z为靶标分子T。
在另一优选例中，L4为选自下组的连接基团：
(a)取代或未取代的5-20元碳链碳链；
(b)取代或未取代的含有1-5个选自N、O和S的杂原子的5-20元杂碳链；
(c)取代或未取代的5-20元碳链，且链中的1-4个链原子被选自下组的杂环替换：含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环、含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环；
(d)取代或未取代的含有1-5个选自N、O和S的杂原子的5-20元杂碳链，且链中的1-4个链原子被选自下组的杂环替换：含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环、含有1-4个选自N、O和S的杂原 子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环；
其中，所述“取代”指基团上的一个或多个(优选为1、2、3、或4个)氢原子被选自下组的取代基所取代：C1-C10烷基、C3-C8环烷基、-COOH、-OH、-SH、-NH 2、-NHR、-N(R 1)R 2；其中，R 1和R 2各自独立地为H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、氨基保护基；R为取代或未取代的C1-C10烷基、-(C＝O)-R'、(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'或-NH-CO-NH-R'、或-NH-CO-O-R'；其中，R'选自下组的基团：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、或保护基。
在另一优选例中，L4为选自下组的连接基团
(a)取代或未取代的5-20元碳链碳链；
(b)取代或未取代的含有1-5个选自N、O和S的杂原子的5-20元杂碳链。
在另一优选例中，所述的多肽元件选自下组：配体或其活性片段、受体或其活性片段、抗体或其活性片段、或其组合。
在另一优选例中，所述的Z选自下组：配体、可溶性受体、抗体、或抗体-药物偶联物(ADC)、或其组合。
在另一优选例中，所述的靶标分子T与靶标分子A是相同的或不同的。
在另一优选例中，所述的靶标分子T与靶标分子A是在药物偶联体中具有靶向功能的小分子。
在另一优选例中，所述的靶标分子T与靶标分子A各自独立地选自下组：叶酸、HSP90抑制剂、或其组合。
在另一优选例中，所述的配体包括全长的配体或其活性片段。
在另一优选例中，所述的抗体包括全长的抗体或其活性片段。
在另一优选例中，所述的抗体包括单链抗体或双链抗体。
在另一优选例中，所述含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环可以是单环、双环或三环。
在另一优选例中，所述含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环可以是并环或螺环。
在另一优选例中，所述含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环可以是含有1个氮原子的4-6元饱和环或含有1个氮原子的4-6元饱和环。
在另一优选例中，所述含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环可以是单环、双环或三环。
在另一优选例中，所述含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环可以是并环或螺环。
在另一优选例中，所述含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环可以是含有1-4个选自N、O和S的杂原子的五元部分不饱和或完全不饱和杂环。
在另一优选例中，L2和/或L3为选自下组的连接基团：
(a)取代或未取代的-(CH 2)s-；
(b)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-5个-CH 2-被O替换；
(c)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-2个-CH 2-被NR替换和任选地1-2个-CH 2-被O替换；其中，R为H、保护基或X'-L3-Z；
(d)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被含有1-4个选自N、O、S和P的杂原子的五元不饱和杂环替换；
(e)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被含有1-4个选自N、O、S和P的杂原子的4-6元饱和杂环替换；
(f)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被O和含有1-4个选自N、O、S和P的杂原子的4-6元饱和杂环替换；
(g)二价的含有1-2个氮原子的4-6元杂环基团；
其中，s为5-20的整数，或5-50的整数。
在另一优选例中，s为3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在另一优选例中，所述的取代的-(CH 2)s-指被一个或多个选自下组的基团所取代：C1-C10烷基、C3-C8环烷基、-NH 2、-NHR、-NR 1R 2，其中，R 1和R 2各自独立地为H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、保护基、或R，其中R的定义如上，且R 1和R 2不同时为多肽元件或者靶标分子T。
在另一优选例中，所述的L2和/或L3选自下组：
(d1)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被含有1-3个选自N、O、S和P的杂原子的五元不饱和杂环替换；
(e1)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被含有1-3个选自N、O、S和P的杂原子的4-6元饱和杂环替换；
(f1)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被O和含有1-3个选自N、O、S和P的杂原子的4-6元饱和杂环替换。
在另一优选例中，所述的L2和/或L3选自下组：
(d2)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被含有1-2个N原子的五元不饱和杂环替换；
(e2)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被含有1-2个N原子的4-6元饱和杂环替换；
(f2)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被O和含有1-2个N原子的4-6元饱和杂环替换。
在另一优选例中，s为5-15，较佳地6-10。
在另一优选例中，当X为NH或NR时，X与和它相连的L2链中的一部分共同形成4-8元杂环，
Figure PCTCN2019110225-appb-000008
其中，Y和R如上定义；m为1-15的整数；p和q各自独立地为0、1、2或3，且p+q≥2。
在另一优选例中，L1选自下组：
Figure PCTCN2019110225-appb-000009
其中，
X和Y如上定义；
p和q各自独立地为1、2或3的整数。
在另一优选例中，L1为
Figure PCTCN2019110225-appb-000010
其中，m和n各自独立地为1-15的整数。
在另一优选例中，L1为选自下组的基团失去两个任意位置上的氢原子形成的二价连接基团：
Figure PCTCN2019110225-appb-000011
式中，p和q如上定义。
在另一优选例中，L1为衍生自
Figure PCTCN2019110225-appb-000012
其中，m'和m各自独立地为0、1、2、3、4或5(较佳地，0、1、2或3)，且m'和m不同时为0；
p和n各自独立地为1-15的整数；
式中，“NH 2,OH”表示末端为NH 2或OH；
T'为N或CR b：其中，R b选自下组的基团：H、取代或未取代C1-C6烷基。
在另一优选例中，L1选自下组：
Figure PCTCN2019110225-appb-000013
其中，m'和m各自独立地为0、1、2、3、4或5(较佳地，0、1、2或3)，且m'和m不同时为0；
p和n各自独立地为1-15的整数；
T'、R、R 1和R 2的定义同前。
在另一优选例中，L1选自下组：
Figure PCTCN2019110225-appb-000014
式中，“Y,X”表示该末端为X或Y；附加条件是一端为X，而另一端为Y；
X和Y如上定义，m和n各自独立地为0-15的整数；
T、V、Q、和W各自独立地为CH、C＝O、S、O、NH或NR；R为C1-C10烷基、-(C＝O)NH-、-(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'、-NH-CO-NH-R'、-NH-CO-O-R'、或N-'X'-L3-Z(即-X'-L3-Z为位于N上的取代基)；其中L3的定义如上文中所述，而Z为多肽元件或者靶标分子T；R'如上定义。
在另一优选例中，T、V、Q、和W中至少一个为N-'X'-L3-Z。
在另一优选例中，m+n≤20。
在另一优选例中，m+n≥2。
在另一优选例中，L1选自下组：
Figure PCTCN2019110225-appb-000015
各式中，X和Y如上定义，m和n各自独立地为0-15的整数；
R为X'-L3-Z，且L3和Z如上定义；
Q和W各自独立地为CH、C＝O、S、O、NH或NR；R为-(C＝O)-R'、(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'、-NH-CO-NH-R'或-NH-CO-O-R'；R'如上定义。
在另一优选例中，Z为选自抗体、受体、配体、或它们的活性片段的多肽元件。
在另一优选例中，Z为ADC。
在另一优选例中，m+n≤20。
在另一优选例中，m+n≥2。
在另一优选例中，L1为
Figure PCTCN2019110225-appb-000016
其中，X、Y和R如上定义；
m和n各自独立地为1-15的整数；p为1、2或3。
在另一优选例中，L1选自下组：
Figure PCTCN2019110225-appb-000017
各式中，X、Y如上定义；m为1-15的整数；p为1、2或3。
在另一优选例中，所述连接体(L1)选自下组：
Figure PCTCN2019110225-appb-000018
Figure PCTCN2019110225-appb-000019
式中，X、Y和R的定义如上，m和n各自独立地为0-15的整数。
在另一优选例中，m+n≤20。
在另一优选例中，m+n≥2。
在另一优选例中，所述的L1选自下组：
Figure PCTCN2019110225-appb-000020
Figure PCTCN2019110225-appb-000021
Figure PCTCN2019110225-appb-000022
Figure PCTCN2019110225-appb-000023
Figure PCTCN2019110225-appb-000024
Figure PCTCN2019110225-appb-000025
Figure PCTCN2019110225-appb-000026
其中，R 1和R 2各自独立地为H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、保护基、或R，其中R的定义如上，且R 1和R 2不同时为多肽元件。
在另一优选例中，L1为选自下组的基团：
Figure PCTCN2019110225-appb-000027
其中，R、R 1和R 2的定义如前所述。
在另一优选例中，L1为选自下组的基团(下组L1中主链上的-NH-、-CH(OH)-、C(NH 2)等活性基团可通过连接基团与Z偶联从而形成X'-L3-Z，或者直接与Z偶联)：
Figure PCTCN2019110225-appb-000028
Figure PCTCN2019110225-appb-000029
在另一优选例中，所述L1为衍生自选自下组的基团(较佳地，通过失去两个任意位置上的氢原子、羟基、保护基团(boc)、和/或叠氮成环)形成的二价连接基团：
Figure PCTCN2019110225-appb-000030
Figure PCTCN2019110225-appb-000031
在另一优选例中，所述靶标分子A和T各自独立地选自下组：叶酸、HSP90、TINFRm、TNFR2、NADPH氧化酶(oxidase)、BclIBax、C5a受体(receptor)，HMG-CoA还原酶(reductase)、PDE I-V、角鲨烯环化酶抑制剂(Squalene cyclase inhibitors)、CXCR1、CXCR2、一氧化氮(NO)合成酶(Nitric oxide(NO)synthase)、环加氧酶(cyclo-oxygenase)1-2、5HT受体(5HT receptors)、多巴胺受体(dopamine receptors)、G-蛋白(G-proteins)、Gq、组胺受体(Histamine receptors)、脂肪氧合酶(Lipoxygenases)、类胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶(Tryptase serine protease)、胸苷酸合成酶(Thymidylate synthase)、嘌呤核苷酸磷酸化酶(Purine nucleotide phosphorylase)、GAPDH锥虫(GAPDH trypanosomal)、糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase)、碳酸酐酶(Carbonic anhydrase)、趋化因子受体(Chemokine receptors)、JAW STAT、RXR及其类似物、HIV 1蛋白酶(HIV 1 protease)、HIV 1整合酶(HIV 1 integrase)、流感(Influenza)、乙型肝炎逆转录酶(hepatitis B reverse transcriptase)、神经氨酸酶(neuraminidase)、钠通道(Sodium channel)、MDR、蛋白质P-糖蛋白(protein P-glycoprotein)、酪氨酸激酶(Tyrosine kinases)、CD23、CD124、TK p56 lck、CD4、CD5、IL-1受体(IL-1 receptor)、IL-2受体(IL-2 receptor)、TNF-aR,ICAM1,Ca+通道(Ca+channels)、VCAM、VLA-4整合素(VLA-4 integrin)、VLA-4整合素(VLA-4 integrin)、选择素(Selectins)、CD40/40L、新霉素和受体(Newokinins and receptors)、肌苷一磷酸脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase)、p38 MAP激酶(p38 MAP kinase)、白细胞介素-1转化酶(Interleukin-1 converting enzyme)、胱天蛋白酶(Caspase)、HCV NS3蛋白酶(HCV NS3 protease)、HCV-NS3 RNA解旋酶(HCV-NS3 RNA helicase)、甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰转移酶(Glycinamide ribonucleotide formyl transferase)、鼻病毒3C蛋白酶(rhinovirus 3C protease)、HSV-I、CMV、ADP聚合酶(ADP-polymerae)、CDK、VEGF、催产素受体(oxytoxin receptor)、msomal转移蛋白抑制剂(msomal transfer protein inhibitor)、胆汁酸转移蛋白抑制剂(Bile acid transfer protein inhibitor)、5-a还原酶(5-areductase)、血管紧张素11(Angiotensin 11),甘氨酸受体(Glycine receptors)、去甲肾上腺素再摄取受体(noradrenaline reuptake receptor)、内皮素受体(Endothelin receptors)、神经肽Y和受体(Neuropeptide Y and receptors)、***受体(Estrogen receptors)、AMP、AMP脱氨酶(AMP deaminase)、ACC、EGFR、法呢基转移酶(Farnesyltransferase)。
在另一优选例中，所述多肽元件为抗体；优选地，所述抗体包括纳米抗体(nanobody)和/或小分子抗体(minibody)。
在另一优选例中，所述抗体可与选自下组的抗原或受体结合：DLL3、EDAR、CLL1、BMPR1B、E16、STEAP1、0772P、MPF、5T4，NaPi2b、Sema 5b、PSCA hlg、ETBR、MSG783、STEAP2、TrpM4、CRIPTO、CD21、 CD22、CD79b、CD19、CD37、CD138、FcRH2、B7-H4、HER2、NCA、MDP、IL20Rα、短小蛋白聚(Brevican)、EphB2R、ASLG659、PSCA、GEDA、BAFF-R、CD79a、CXCR5、HLA-DOB、P2X5、CD72、LY64、FcRH1、IRTA2、TENB2、PMEL17、TMEFF1、GDNF-Ra1、Ly6E、TMEM46、Ly6G6D、LGR5、RET、LY6K、GPR19、GPR54、ASPHD1、酪氨酸酶(Tyrosinase)、TMEM118、GPR172A、MUC1、CD70、CD71、MUC16、methothelin、FOLR1、Trop-2、gpNMB、EGFR、ENPP3、PSMA、CA6、GPC-3、PTK7、CD44、CD56、TIM-1、钙粘素-6(Cadherin-6)、ASG-15ME、ASG-22ME、CanAg、AXL、CEACAM5、EphA4、cMet、FGFR2、FGFR3、CD123、Her3、LAMP1、LRRC15、TDGF1、CD66、CD25、BCMA、GCC、Noch3和CD33。
在另一优选例中，所述E3连接酶配体选自下组：WO2017/176957A1中的A 1基团(例如A-10、A-11、A-15、A-28、A-48、A-69、A-85、A-93、A-98、A-99或A-101)：
Figure PCTCN2019110225-appb-000032
各式中，虚线表示与其他部分连接的位置(即与-L1-A连接的位置)；
其中，Rx选自下组：无、NH、NH-CO、O、S、SO、SO 2、SO 2(NH 2)NH、C1～C4亚烷基、C2～C5亚烯基、C2～C5亚炔基；R y为C＝O,C＝S或CH 2。
在另一优选例中，所述的偶联物包括单体或多聚体形式的偶联物。较佳地，所述的多聚体形式的偶联物共用一个或多个Z。
在另一优选例中，式I所示的偶联物为如式III所示的偶联物
Z-(L3-R a) t(III)
其中，t＝1～15(较佳地，1-8；更佳地，2-7)；
Z如上所述，优选地为Z为多肽元件，更佳地为抗体；
R a-L3为式I所示偶联物的失去Z基团后余下的部分。
较佳地，R a为衍生自表B1～B11的具体化合物的一价基团(其中，所述的衍生是指表B1～表B11所示的具体化合物失去连接基团的主链或连接基团的支链上NH或NH 2的氢形成的一价基团)。
在另一优选例中，Ab通过N端或C端的氨基酸，或氨基酸侧链(较佳地，选自下组的氨基酸侧链：Lys、Cys)，或被还原打开二硫键而形成的巯基，与式III所示的L3(较佳地，L3中的
Figure PCTCN2019110225-appb-000033
-NH-,-NHR或者-NH 2基团)连接。
在另一优选例中，式I偶合物中各基团的定义同表A1和A2、表B1-表B11、表C和表D中的具体化合物的对应基团。
本发明的第二方面提供了一种药物组合物，其中，所述的药物组合物含有如第一方面所述的偶联物和药学上可接受的载体。
本发明的第三方面提供了如第一方面所述的偶联物的制备方法，其中，所述方法的反应路线如下式所示：
Figure PCTCN2019110225-appb-000034
其中m,n的定义如上所述。
本发明的第四方面提供了如第一方面所述的偶联物的用途，用于制备用于治疗与靶标蛋白过量相关的疾病的药物组合物。
本发明的第五方面提供了一种减少细胞中靶标蛋白含量的方法，其中，将细胞与如第一方面所述的偶联物相接触，从而减少细胞中靶标蛋白的含量。
在另一优选例中，所述的方法是体外方法。
在另一优选例中，所述的方法是非诊断性和非治疗性的。
本发明的第六方面提供了一种减少对象中靶标蛋白含量或治疗与与靶标蛋白过量相关的疾病，其中，包括步骤：给需要的对象施用如第一方面所述的偶联物。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1为靶向蛋白酶降解平台(TED)降解靶蛋白的作用原理示意图。
图2为实施例中偶联物生物测试结果。
图3显示了动物实验中裸鼠中肿瘤体积变化。
图4显示了动物实验中裸鼠体重变化。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次开发了一种结构新颖的TED偶联物，本发明偶联物具有式I所示的结构。此外，本发明偶联物非常适合进一步与多肽元件(尤其是抗体、蛋白配体)连接或者与多肽元件等进一步连接后，使得本发明偶联物具有优异的双重靶向性，提高药物选择性，对致病蛋白实施更精准降解，减少非特异性降解可能引起的周身毒性，并有可能克服药物吸收代谢遇到的困难，铲除产生耐药性的机会。在此基础上完成了本发明。
术语
如本文所用，术语“本发明化合物”、“本发明偶联物”、“本发明的TED偶联物”可互换使用，指本发明第一方面中所述的式I化合物或偶联物。
如本文所用，除非另有定义，术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指具有指定碳原子数的直链或支链烃基(即，C 1-8表示1-8个碳)。烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。术语“烯基”指具有一个或多个双键的不饱和烷基。类似地，术语“炔基”指具有一个或多个三键的不饱和烷基。此类不饱和烷基的例子包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基和更高级的同系物和异构体。术语“环烷基”是指具有指定环原子数(例如，C 3-6环烷基)并且完全饱和的或在环顶之间具有不超过一个双键的烃环。“环烷基”也指双环和多环烃环，例如双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷等。术语“杂环烷基”是指含有一至五个选自N、O和S的杂原子的环烷基，其中氮和硫原子任选被氧化，且氮原子任选被季铵化。杂环烷基可以是单环、双环或多环体系。杂环烷基的非限制性例子包括吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧戊环、苯邻二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二噁烷、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环等。杂环烷基可以经环碳或杂原子连接于分子的其余部分。对于诸如环烷基烷基和杂环烷基烷基的术语，是指环烷基或杂环烷基通过烷基或亚烷基连接体连接到分子的其余部分。例如，环丁基甲基-是连接到分子其余部分的亚甲基连接基上的环丁基环。
术语“亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指衍生自烷烃的二价基团，例如-CH 2CH 2CH 2CH 2-。烷基(或亚烷基)通常具有1-24个碳原子，其中本发明优选具有10个或更少碳原子的那些基团。“低级烷基”或“低级亚烷基”是较短链烷基或亚烷基，通常具有4个或更少的碳原子。类似地，“亚烯基”或“亚炔基”分别指具有双键或三键的不饱和形式的“亚烷基”。
除非另有说明，术语“杂烷基”本身或与其它术语组合是指的稳定的直链或支链或环状烃基或其组合，由指定数目的碳原子和和1至3个选自O，N，Si和S的杂原子组成，且其中氮和硫原子可选地被氧化，氮杂原子可任选地被季铵化。杂原子O，N和S可以位于杂烷基的任何内部位置。杂原子Si可以位于杂烷基的任何位置，包括烷基连接到分子其余部分的位置。实施例包括-CH 2-CH 2-O-CH 3,-CH 2-CH 2-NH-CH 3,-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 3,-CH 2-S-CH 2-CH 3,-CH 2-CH 2,-S(O)-CH 3,-CH 2-CH 2-S(O) 2-CH 3,-CH＝CH-O-CH 3,-Si(CH 3) 3,-CH 2-CH＝N-OCH 3,和-CH＝CH-N(CH 3)-CH 3。最多两个杂原子可以是连续的，例如-CH 2-NH-OCH 3和-CH 2-O-Si(CH 3) 3。类似地，除非另有说明，术语“杂烯基”和“杂炔基”其本身或与另一个术语的组合分别指烯基或炔基，其分别含有指定数目的碳和1至3个选自O，N，Si和S的杂原子，且其中氮和硫原子可选地被氧化，氮杂原子可任选地被季铵化。杂原子O，N和S可以位于杂烷基的任何内部位置。
术语“杂亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指由杂烷基衍生的饱和或不饱和或多不饱和的二价基团，例如-CH 2-CH 2-S-CH 2CH 2-和-CH 2-S-CH 2-CH 2-NH-CH 2-,-O-CH 2-CH＝CH-,-CH 2-CH＝C(H)CH 2-O-CH 2-和-S-CH 2-C≡C-。对于杂亚烷基，杂原子也可以占据链末端中的任一个或两个(例如，亚烷基氧基，亚烷基二氧基，亚烷基氨基，亚烷基二氨基等)。
术语"烷氧基"、"烷氨基"和"烷硫基"(或硫代烷氧基)以其常规意义使用，指代分别经氧原子、氨基或硫原子连接于分子的其余部分的那些烷基。此外，对于二烷基氨基，烷基部分可以相同或不同，也可和与各烷基相连的氮原子组合形成3-7元环。因此，-NR aR b所示基团表示包括哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、氮杂环丁烷基(azetidinyl)等。
除非另有表述，术语“卤代”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴、或碘原子。此外，诸如“卤代烷基”等术语表示包括单卤代烷基或多卤代烷基。例如，术语“C 1-4卤代烷基”表示包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
除非另有表述，术语“芳基”表示多不饱和的(通常芳香性)的烃基，其可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(最多三环)。术语"杂芳基"是指含有1至5个选自N、O、和S的杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选被氧化，氮原子任选被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接于分子的其余部分。芳基的非限制性例子包括苯基、萘基和联苯基，而杂芳基的非限制性例子包括吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔 啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、苯并三嗪基(benzotriazinyl)、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并***基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基(isobenzofuryl)、异吲哚基、中氮茚基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、***基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等等。以上芳基和杂芳基环***各自的取代基选自下述可接受的取代基的组。
为简洁起见，当术语“芳基”与其它术语(例如芳氧基，芳硫基，芳烷基)组合使用时，包括如上所定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”是指包括其中芳基连接到与分子的其余部分连接的烷基的那些基团(例如苄基，苯乙基，吡啶基甲基等)。
在一些实施例中，上述术语(如“烷基”，“芳基”和“杂芳基”)将包括指定基团的取代和未取代形式。下面提供了每种类型基团的优选取代基。为简洁起见，术语芳基和杂芳基将指代如下文所提供的取代或未取代的形式，而术语“烷基”和相关的脂肪族基团是指未取代的形式，除非指明被取代。
烷基(包括通常称为亚烷基，烯基，炔基和环烷基的那些基团)的取代基可以是选自下组的各种基团：-卤素、-OR'、-NR'R”、-SR'、-SiR'R”R”'、-OC(O)R'、-C(O)R'、-CO 2R'、-CONR'R”、-OC(O)NR'R”、-NR”C(O)R'、-NR'-C(O)NR”R”'、-NR”C(O) 2R'、-NH-C(NH 2)＝NH、-NR'C(NH 2)＝NH、-NH-C(NH 2)＝NR'、-S(O)R'、-S(O) 2R'、-S(O) 2NR'R”、-NR'S(O) 2R”、-CN和-NO 2，数量从零到(2m'+1)，其中m'是这种基团中的碳原子总数。R'、R”和R”'各自独立地表示氢，未取代的C 1-8烷基，未取代的杂烷基，未取代的芳基，被1-3个卤素取代的芳基，未取代的C 1-8烷基，C 1-8烷氧基或C 1-8硫代烷氧基，或未取代的芳基-C 1-4烷基。当R'和R”连接到相同的氮原子时，它们可以与氮原子结合形成3-，4-，5-，6-或7-元环。例如，-NR'R”是指包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。术语“酰基”，单独或作为另一基团的一部分使用，是指其中在最接近该基团的连接点的碳上两个取代基的被取代基＝O取代(例如-C(O)CH 3,-C(O)CH 2CH 2OR'等)。
类似地，芳基和杂芳基的取代基是多种的，并且通常选自：-卤素、-OR'、-OC(O)R'、-NR'R”、-SR'、-R'、-CN、-NO 2、-CO 2R'、-CONR'R”、-C(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR”C(O)R'、-NR”C(O) 2R'、-NR'-C(O)NR”R”'、-NH-C(NH 2)＝NH、-NR'C(NH 2)＝NH、-NH-C(NH 2)＝NR'、-S(O)R'、-S(O) 2R'、-S(O) 2NR'R”、-NR'S(O) 2R”、-N 3、全氟(C 1-C 4)烷氧基和全氟(C 1-C 4)烷基，数量从零到芳香环体系上的开放化合价的总数；其中R'、R”和R”'独立地选自氢，C 1-8烷基，C 3-6环烷基，C 2-8烯基，C 2-8炔基，未取代的芳基和杂芳基，(未取代的芳基)-C 1-4烷基和未取代的芳氧基-C 1-4烷基。其它合适的取代基包括通过1-4个碳原子的亚烷基链连接到环原子上的每一个上述芳基取代基。
芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选地被式-T-C(O)-(CH 2) q-U-的取代基取代，其中T和U独立地为-NH-，-O-，-CH 2-或单键，且q是0至2的整数。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选地被式-A-(CH 2) r-B-，其中A和B独立地是-CH 2-、-O-、-NH-、-S-、-S(O)-、-S(O) 2-、-S(O) 2NR'-或单键，且r是1至3的整数。由此形成的新环中的一个单键可以任选地被双键取代。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选地被式-(CH 2) s-X-(CH 2) t-的取代基替代，其中s和t独立地为0至3的整数，并且X是-O-、-NR'-、-S-、-S(O)-、-S(O) 2-、或-S(O) 2NR'-。-NR'-和-S(O) 2NR'-中的取代基R'选自氢或未取代的C 1-6烷基。
在本发明中，当一个链原子(如C原子)被一个杂环替代时，所述杂环可失去位于同一环原子(环碳原子上)的两个氢从而与链上的其他链原子连接(形成类似于螺环结构)，或者可失去位于不同环原子上的两个氢从而与链上的其他链原子连接(如-亚环戊基-)。
如本文所用，术语“杂原子”意在包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。
对于本文提供的化合物，从取代基(通常为R基团)到芳香环(例如苯，吡啶等)的中心的键将被理解为是指在芳香环的任何可用顶点提供连接的键。在一些实施例中，该描述也包括稠合在芳环上的环上的连接。例如，绘制到吲哚苯部分的中心的键将表示与吲哚的六元或五元环部分的任何可用顶点连接的键。
术语"药学上可接受的盐"意在包括活性化合物与相对无毒的酸或碱制备的盐，其取决于本文所述化合物上具体的取代基。当本发明化合物含有相对酸性的官能团时，可通过将中性形式的此类化合物与充足量的所需碱(无溶剂的或在合适的惰性溶剂中的)接触来获得碱加成盐。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的例子包括铝、 铵、钙、铜、铁，亚铁、锂、镁、锰，亚锰、钾、钠、锌等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括取代的胺、环状胺、自然产生的胺等等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、组氨酸、海巴明、异丙胺、赖氨酸、甲葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等等。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，可通过将中性形式的此类化合物与充足量的所需酸(无溶剂的或在合适的惰性溶剂中的)接触来获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的例子包括衍生自无机酸的那些，例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸、磷酸、单氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、单氢硫酸、氢碘酸、或亚磷酸等等；以及衍生自相对无毒的有机酸的盐，例如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、扁桃酸、苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸，酒石酸、甲磺酸等等。还包括氨基酸的盐，例如精氨酸盐等等，和有机酸的盐，例如葡萄糖醛酸(glucuronic acid)或半乳糖醛酸(galactunoric acid)等(参见，例如Berge,S.M.等,“药学上的盐(Pharmaceutical Salts)”,Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1-19)。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，从而能将化合物转换成碱加成盐或酸加成盐。
通过将盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物，可以再生该化合物的中性形式。化合物的母体形式与各种盐形式在某些物理性能(例如在极性溶剂中的溶解度)上不同，但除此之外，就本发明的目的而言，那些盐与母体形式化合物是等价的。
除盐形式外，本发明提供前药形式的化合物。本文所述的化合物的前药是在生理条件下很容易经历化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可以在离体环境中通过化学或生物化学方法转变为本发明化合物。例如，当置于含合适的酶或化学试剂的经皮贴片贮器中时，前药可缓慢转变为本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水化形式。溶剂化形式通常与非溶剂化形式等价，应包括在本发明范围内。本发明的某些化合物可以多晶型或无定形形式存在。通常，就本发明所考虑的应用而言，所有物理形式是等价的，应包括在本发明范围内。
本发明的某些化合物拥有不对称碳原子(光学中心)或双键；消旋体、非对映体、几何异构体、区域异构体和单独的异构体(例如，分离的对映体)均应包括在本发明范围内。当本文提供的化合物具有确定的立体化学(表示为R或S，或具有虚线或楔形键指明)时，被本领域技术人员将理解那些化合物为基本上不含其他异构体(例如至少80％，90％，95％，98％，99％和至多100％不含其他异构体)。
本发明化合物还可在构成此类化合物的一个或多个同位素原子处含有非天然比例的原子同位素。某同位素的非天然比例可以定义为从所讨论原子的天然发现的量到100％该原子的量。例如，化合物可以掺入放射性同位素，例如氚( 3H)、碘-125( 125I)或碳-14( 14C)，或非放射性同位素，例如氘( 2H)或碳-13( 13C)。除了本申请所述的那些用途，此类同位素变体可提供额外的用途。例如，本发明化合物的同位素变体可以有额外的用途，包括但不限于作为诊断的和/或成像试剂，或作为细胞毒性/放射毒性治疗剂。另外，本发明化合物的同位素变体可具有改变的药代动力学和药效学特征，从而有助于增加治疗期间的安全性、耐受性或疗效。无论是否有放射性，本发明化合物的所有同位素变体均应包括在本发明范围内。
靶向蛋白酶降解平台TED
本发明提供基于本发明偶联物的靶向蛋白酶降解平台(TED)，该平台利用了细胞内的“清洁工”—泛素-蛋白酶体***。
典型地，基于本发明TED技术，可利用细胞自身的蛋白质破坏机制来从细胞中去除特定致癌病蛋白，因此是一种靶向治疗的替代方法。
与传统蛋白抑制剂作用原理不同，本发明的TED技术是一个双功能杂合化合物，一边用来结合目标蛋白，另一边用来结合一个E3连接酶，使得目标蛋白可以与E3连接酶结合，把目标蛋白泛素化，从而被蛋白组降解。理论上TED技术只是提供结合活性，不需直接抑制目标蛋白的功能活性，又可以重复利用，因此，具有优异的应用前景。
多肽元件
如本文所用，术语“多肽元件”包括肽段(如3-20aa的短肽)或蛋白。此外，该术语还包括完整的蛋白或其片段。优选的多肽元件包括抗体(如完整抗体、单链抗体、纳米抗体、Fab)，尤其是针对肿瘤细胞标志物(如位于肿瘤细胞表面的肿瘤标志物，如细胞表面的受体)或针对炎性因子(如与自身免疫疾病相关的炎性因子)的抗体。
如本文所用，术语“抗体”或“免疫球蛋白”是有相同结构特征的约150000道尔顿的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(VH)，其后是多个恒定区。每条轻链的一端有可变区(VL)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区与重链的可变区相对。特殊的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。
如本文所用，术语“单域抗体”、“纳米抗体”具有相同的含义，指克隆抗体重链的可变区，构建仅由一个重链可变区组成的单域抗体，它是具有完整功能的最小的抗原结合片段。通常先获得天然缺失轻链和重链恒定区1(CH1)的抗体后，再克隆抗体重链的可变区，构建仅由一个重链可变区组成的单域抗体。
如本文所用，术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成了各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并不均匀地分布在整个抗体可变区中。它集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(CDR)或超变区中的三个片段中。可变区中较保守的部分称为构架区(FR)。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个FR区，它们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个CDR相连，在某些情况下可形成部分折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR一起形成了抗体的抗原结合部位(参见Kabat等,NIH Publ.No.91-3242,卷I，647-669页(1991))。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。
脊椎动物抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可根据其恒定区的氨基酸序列归为明显不同的两类(称为κ和λ)中的一类。根据其重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以分为不同的种类。主要有5类免疫球蛋白：IgA,IgD,IgE,IgG和IgM，其中一些还可进一步分成亚类(同种型)，如IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA和IgA2。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ、和μ。不同类免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是本领域人员所熟知的。
一般，抗体的抗原结合特性可由位于重链和轻链可变区的3个特定的区域来描述，称为可变区域(CDR)，将该段间隔成4个框架区域(FR)，4个FR的氨基酸序列相对比较保守，不直接参与结合反应。这些CDR形成环状结构，通过其间的FR形成的β折叠在空间结构上相互靠近，重链上的CDR和相应轻链上的CDR构成了抗体的抗原结合位点。可以通过比较同类型的抗体的氨基酸序列来确定是哪些氨基酸构成了FR或CDR区域。
本发明中，多肽元件不仅可包括完整的抗体，还包括具有免疫活性的抗体的片段(如如Fab或(Fab') 2片段；抗体重链；或抗体轻链)或抗体与其他序列形成的融合蛋白。因此，本发明还包括所述抗体的片段、衍生物和类似物。
靶向配体
靶向配体(或靶蛋白部分或靶蛋白配体或配体)是能够结合目标靶蛋白的小分子。
本申请的一些实施方案涉及靶标分子，代表性的靶标分子其包括但不限于：叶酸、Hsp90抑制剂、激酶抑制剂、MDM2抑制剂、靶向含人BET溴结构域的蛋白的化合物、靶向胞质信号蛋白FKBP12的化合物、HDAC抑制剂、人赖氨酸甲基转移酶抑制剂、血管生成抑制剂、免疫抑制化合物和靶向芳基烃受体(AHR)的化合物。
在某些实施方案中，靶向配体是能够结合激酶、BET含溴结构域的蛋白、胞质信号蛋白(例如FKBP12)、核蛋白、组蛋白脱乙酰酶、赖氨酸甲基转移酶、调节血管生成的蛋白、调节免疫应答的蛋白、芳烃受体(AHR)、***受体、雄激素受体、糖皮质激素受体或转录因子(例如，SMARCA4、SMARCA2、TRIM24)。
在某些实施方案中，靶向配体能够结合的激酶包括但不限于：酪氨酸激酶(例如AATK、ABL、ABL2、ALK、AXL、BLK、BMX、BTK、CSF1R、CSK、DDR1、DDR2、EGFR、EPHA1、EPHA2、EPHA3、EPHA4、EPHA5、EPHA6、EPHA7、EPHA8、EPHA10、EPHB1、EPHB2、EPHB3、EPHB4、EPHB6、ERBB2、ERBB3、ERBB4、FER、FES、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、FGR、FLT1、FLT3、FLT4、 FRK、FYN、GSG2、HCK、HRAS、HSP90、IGF1R、ILK、INSR、INSRR、IRAK4、ITK、JAK1、JAK2、JAK3、KDR、KIT、KRAS、KSP、KSR1、LCK、LMTK2、LMTK3、LTK、LYN、MATK、MERTK、MET、MLTK、MST1R、MUSK、NPR1、NRAS、NTRK1、NTRK2、NTRK3、PDGFRA、PDGFRB、PLK4、PTK2、PTK2B、PTK6、PTK7、RET、ROR1、ROR2、ROS1、RYK、SGK493、SRC、SRMS、STYK1、SYK、TEC、TEK、TEX14、TIE1、TNK1、TNK2、TNNI3K、TXK、TYK2、TYRO3、YES1或ZAP70)、丝氨酸/苏氨酸激酶(例如酪蛋白激酶2、蛋白激酶A、蛋白激酶B、蛋白激酶C、Raf激酶、CaM激酶、AKT1、AKT2、AKT3、ALK1、ALK2、ALK3、ALK4、AuroraA、AuroraB、AuroraC、CHK1、CHK2、CLK1、CLK2、CLK3、DAPK1、DAPK2、DAPK3、DMPK、ERK1、ERK2、ERK5、GCK、GSK3、HIPK、KHS1、LKB1、LOK、MAPKAPK2、MAPKAPK、MEK、MNK1、MSSK1、MST1、MST2、MST4、NDR、NEK2、NEK3、NEK6、NEK7、NEK9、NEK11、PAK1、PAK2、PAK3、PAK4、PAK5、PAK6、PIM1、PIM2、PLK1、RIP2、RIP5、RSK1、RSK2、SGK2、SGK3、SIK1、STK33、TAO1、TAO2、TGF-β、TLK2、TSSK1、TSSK2、ΜLK1或ΜLK2)、周期素依赖性蛋白激酶(例如Cdk1-Cdk11)和富含亮氨酸的重复激酶(例如LRRK2)。
靶标分子
在本发明的式I所示的偶联物中，通过靶标分子来结合靶标蛋白。
在本发明中，靶标分子可以是靶标分子A、靶标分子T、或其组合。
在本发明中，所述靶标分子可以是所述靶标蛋白的任意一种抑制剂。所述靶标分子可以是所述靶标蛋白的高效抑制剂，也可以活性比较差的抑制剂。具体地，本发明的靶标分子可以是针对本领域任一种靶标蛋白的本领域已知的小分子抑制剂。
在某些实施方案中，本文所用的靶标分子具有可与连接头进行连接的基团(如-O-，-NR a-(其中，Ra为H、或C1-C6烷基等取代基，-CO-、-COO-等等)，以一价与本发明的连接体分子(如本发明中L1)对接成醚、胺、酰胺等等。
所述靶标蛋白可以是本领域已知的各种靶标蛋白，代表性的例子包括(但并不限于)：MDM2、AKT、BCR-ABL、Tau、BET(BRD2,BRD3,BRD4)、ERRα、FKBP12、RIPK2、ERBB3、雄激素受体、MetAP2、TACC3、FRS2α、PI3K、DHFR、GST、Halo Tag、CRABPI,CRABPII、RAR、芳烃受体、***受体。不同的靶标蛋白和一些相应的抑制剂可市售获得或用常规方法制备。例如，对于MDM2，其抑制剂可参见WO 2017176957、WO2017176958A1等文献。
E3连接酶配体
在本发明中，E3连接酶配体用来结合E3连接酶。代表性的E3连接酶配体具有如下所示的结构：
Figure PCTCN2019110225-appb-000035
上式中，R X为无、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、O、NH、S、CO或SO n(n为1或2)等；R Y为CH 2、C＝S、CO；而且，所述E3连接酶配体(式I中的B)可通过其中的R X基团与本发明的L1进行连接，如-R x-L1-A(如-O-L1-A)。
Figure PCTCN2019110225-appb-000036
上式中，R'为H或Me，R为H、Me或Et。
在某些实施方案中，本文所用E3连接酶配体具有可与连接头进行连接的基团(如-O-，-NR a-(其中，Ra为H、或C1-C6烷基等取代基)，-CO-、-COO-等等)，以一价与本发明的连接体分子(如如本发明中L1等)对接成醚、胺、酰胺等等。
连接体分子(如本文中所述的L1)
本发明的连接体分子用于连接靶标分子和E3连接酶配体。例如通过两端的官能团(例如-OH、-SH、-NH 2、-NHR、-SOOH或-COOH)与靶标分子或E3连接酶配体连接；其中，R选自：取代或未取代的C1-C10烷基、-(C＝O)-R'、(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'或-NH-CO-NH-R'、-NH-CO-O-R'或-X'-L3-Z；其中L3为连接基团，而Z为多肽元件(如配体、抗体或其肽段等)或者靶向分子如具有靶向功能的小分子(如叶酸、HSP90抑制剂等)。
优选地，当所述连接头为-(CH2)s-；其中，1-4个-CH 2-被含有1-4个杂原子(如N、O、S和P)的五元不饱和环替换时，所述连接体分子如下所示：
Figure PCTCN2019110225-appb-000037
式中，X、Y、T、V、Q、W、m、n、s、R的定义如上。
优选地，当所述连接头为-(CH2)s-；其中，1-4个-CH 2-被O或含有1个氮原子的4-6元饱和环替换时，本发明的连接体分子具体可以选自如下结构：
Figure PCTCN2019110225-appb-000038
式中，X、Y、p、m、n、s、R的定义如上。
优选地，本发明的连接体分子选自如下结构：
Figure PCTCN2019110225-appb-000039
式中，X和Y的定义如上，m为1-20的整数；p为1-3的整数。
优选地，当所述连接头为-(CH2) s-或所述连接头为-(CH2) s-；其中，1-4个-CH 2-被O替换。优选地，本发明的连接体分子还能过通过-X'-L3-连接体结构再与靶标分子或者多肽元件连接形成三功能的靶向蛋白酶降解平台(TED)分子，例如，如下式所示的靶向蛋白酶降解平台(TED)分子：
Figure PCTCN2019110225-appb-000040
靶向蛋白酶降解平台(TED)分子
本发明的靶向蛋白酶降解平台(TED)分子结构如式Ia或式I所示：
靶标分子-连接体-E3连接酶配体     式Ia。
A-L1-B     式I
式中，A、L1和B的定义如本发明第一方面中所述。
连接体和偶联方法
本发明的连接体L1用于连接靶标分子和E3连接酶配体。
优选地，所述靶标分子或E3连接酶配体可以通过-O-、-S-、-NH-、-NR-、-(C＝O)-、-(C＝O)O-、-SO 2-等基团连接。
在本发明的连接体上，还可进一步含有其它各种官能团，例如-OH、-NHR、-SH等官能团。
典型地，本发明的连接体L1，可以以下通式II表示：
-X-L2-Y-             式II
式中，X、L2、Y的定义如本发明第一方面中所述。
在另一优选例中，X和Y各自独立地以下一价基团失去1个氢原子形成的二价所形成的二价基团：-OH、-NH 2、-SH、-COOH、-SO 2H。
具体地，连接体与靶标分子的连接方式可以通过如下所示的连接基团进行连接：
Figure PCTCN2019110225-appb-000041
其中，上述各式中的R如上定义；n为1或2或3。
ACTED
在本发明中，当靶标分子为抗体时，也可将本发明的偶联物简称为ACTED或ACTED分子或ACTED化合物。
在本发明中，示例性的ACTED化合物(即连接了Ab的TED分子)的结构如下：
Figure PCTCN2019110225-appb-000042
Figure PCTCN2019110225-appb-000043
Figure PCTCN2019110225-appb-000044
其中，n＝1～15(较佳地，n＝1～8，更佳地，n＝2～7)，Ab代表抗体；代表Ab通过N端或C端的氨基酸，或氨基酸侧链(如选自下组的氨基酸侧链：Lys、Cys)，或被还原打开二硫键而形成的巯基，与式III所示的L3(如L3中的
Figure PCTCN2019110225-appb-000045
-NH-,-NHR或者-NH 2基团)连接。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
实施例1 L1-B部分的合成
表A1 TED的连接子结构(即NH 2-L2-Y-B结构)
Figure PCTCN2019110225-appb-000046
Figure PCTCN2019110225-appb-000047
Figure PCTCN2019110225-appb-000048
Figure PCTCN2019110225-appb-000049
Figure PCTCN2019110225-appb-000050
化合物连接基团(Linker)b-配体(Ligand)B(A)的合成方法
化合物UBI-1097(NH 2-11b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000051
步骤1:UBI-1097c
化合物UBI-1097a(1.0g,10mmol),化合物UBI-1097b(2.36g,10mmol)和K 2CO 3(2.76g,20mmol)溶于CH 3CN(100mL)后室温反应18小时。反应完成后过滤，滤液浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝50％～80％,然后二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)，得到无色透明油状目标产物UBI-1097c(450mg,收率18％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.12(q,J＝7.1Hz,2H),3.37(t,J＝6.7Hz,2H),2.70(t,J＝7.0Hz,2H),2.60(t,J＝7.2Hz,2H),2.29(t,J＝7.5Hz,2H),1.77(p,J＝6.8Hz,2H),1.67–1.60(m,2H),1.53–1.44(m,2H),1.38–1.30(m,4H),1.25(t,J＝7.1,1.1Hz,3H).
步骤2:UBI-1097d
化合物UBI-1097c(450mg,1.76mmol),二碳酸二叔丁酯(760mg,3.52mmol)和NaHCO 3(295mg,3.52mmol)溶于THF(20mL)，室温反应2小时。反应完成后加入水(10mL)，二氯甲烷萃取(10mL*3)，合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品UBI-1097d(450mg,收率71.9％)直接用于下一步。
步骤3:UBI-1097e
化合物UBI-1097d(450mg,1.26mmol)和NaOH(200mg,5.05mmol)溶于水(0.5mL),MeOH(3mL)和THF(3mL)，室温反应16小时。反应完成后浓缩得到粗品，加水(20mL)，然后***萃取(10mL*3)。水相用稀盐酸(1M)酸化至pH＝5，然后用二氯甲烷萃取(10mL*3)。合并有机相后用无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到化合物UBI-1097e(370mg,收率64.4％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.32(t,J＝6.6Hz,2H),3.22–3.14(m,2H),3.10(t,J＝7.3Hz,2H),2.18(t,J＝7.3Hz,2H),1.70(t,J＝7.0Hz,2H),1.54–1.42(m,4H),1.39(s,9H),1.25(m,4H).
步骤4:UBI-1097f
化合物UBI-1097e(370mg,1.13mmol),B(A1)(292mg,1.13mmol),HATU(859mg,2.26)溶于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。反应液直接反相柱分离(MeOH/H 2O＝5％～95％45分钟,70％收集)得到白色固体为目标化合物UBI-1097f(420mg,产率65.4％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.02(s,1H),9.75(s,1H),7.82(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.59–7.42(m,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.51–4.27(m,2H),3.23–3.08(m,4H),2.92(m,1H),2.61(m,1H),2.41–2.29(m,3H),2.02(m,1H),1.71(t,J＝6.9Hz,2H),1.61(t,J＝7.4Hz,2H),1.38(m,17H).LC-MS:[M+H] +＝570.2
步骤5:UBI-1097
化合物UBI-1097f(420mg,0.74mmol),Pd/C(42mg)溶于MeOH(1mL)和DCM(10mL)，在氢气环境中反应2小时。反应完成后过滤，滤液浓缩得到粗品，用冷却的无水***洗(10mL*3)，过滤得到白色固体目标化合物UBI-1097(340mg,收率85％)。 1H NMR:(400MHz,DMSO-d 6)δ9.87(d,J＝7.6Hz,1H),7.82(dd,J＝6.9,2.1Hz,1H),7.49(d,J＝7.0Hz,2H),5.15(m,1H),4.37(m,2H),3.21–3.15(m,3H),3.11(t,J＝7.4Hz,2H),2.73(t,J＝7.6Hz,2H),2.37(t,J＝7.4Hz,3H),2.03m,1H),1.76(q,J＝7.7Hz,2H),1.60(q,J＝7.4Hz,2H),1.39(m,15H).LCMS:(M+H) +＝543.3
化合物UBI-1098(NH 2-12b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000052
步骤1:UBI-1098c
化合物UBI-1098a(1.0g,10mmol),BUI-1098b(2.5g,10mmol)和K 2CO 3(2.76g,20mmol)溶于CH 3CN(100mL)，80℃反应18小时。反应液过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝50％～80％,然后DCM/MeOH＝0％～10％)得到无色油状目标化合物UBI-1098c(600mg,收率22％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.12(q,J＝7.1Hz,2H),3.36(t,J＝6.8Hz,2H),2.69(t,J＝7.0Hz,2H),2.59(t,J＝7.2Hz,2H),2.28(t,J＝7.5Hz,2H),1.77(p,J＝6.9Hz,2H),1.66–1.58(m,2H),1.52–1.44(m,2H),1.33(m,6H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2:UBI-1098d
化合物UBI-1098c(450mg,2.22mmol),二碳酸二叔丁酯(960mg,4.44mmol)和NaHCO 3(373mg,4.44mmol)溶于THF(20mL)，室温反应2小时。反应完成后加入水(10mL)，二氯甲烷萃取(10mL*3)，合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩得到粗品UBI-1098d(600mg)直接用于下一步。
步骤3:UBI-1098e
化合物UBI-1098d(600mg,1.62mmol),NaOH(260mg,6.48mmol)溶于水(0.5mL),MeOH(3mL)和THF(3mL)，室温反应16小时。反应完成后浓缩，加入水(20mL)，然后***萃取(10mL*3)。水相用稀盐酸(1M)酸化至pH＝5，然后二氯甲烷萃取(10mL*3)。合并有机相后用无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到化合物UBI-1098e(700mg,收率92％).
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.31(t,J＝6.6Hz,2H),3.14(m,J＝28.8,7.2Hz,4H),2.18(t,J＝7.4Hz,2H),1.71(p,J＝6.8Hz,2H),1.39(s,13H),1.31–1.12(m,6H).
步骤4:UBI-1098f
化合物UBI-1098e(700mg,2mmol),B(A1)(518mg,2mmol),HATU(760mg,4)溶于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。反应液直接反相柱分离(MeOH/H 2O＝5％～95％45分钟,70％收集)得到白色固体为目标化合物UBI-1098f(720mg,收率62％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.02(s,1H),9.75(s,1H),7.82(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.59–7.42(m,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.51–4.27(m,2H),3.23–3.08(m,4H),2.92(m,1H),2.61(m,1H),2.41–2.29(m,3H),2.02(m,1H),1.71(t,J＝6.9Hz,2H),1.61(t,J＝7.4Hz,2H),1.38(m,19H).LC-MS:[M+H]+＝584.2
步骤4:UBI-1098
化合物UBI-1098f(700mg,1.2mmol),Pd/C(70mg)溶于MeOH(1mL)和DCM(10mL)，在氢气环境中反应2小时。反应完成后过滤，滤液浓缩得到粗品，用冷却的无水***洗(10mL*3)，过滤得到白色固体目标化合物UBI-1098(400mg,收率60％)。 1H NMR:(400MHz,DMSO-d 6)δ9.84(s,1H),7.82(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.56–7.39(m,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.37(d,J＝12.9Hz,2H),3.33(s,2H),3.17(q,J＝5.4,4.3Hz,2H),3.10(t,J＝7.4Hz,2H),2.72(t,J＝7.6Hz,2H),2.36(q,J＝8.7,8.2Hz,3H),2.08–1.98(m,1H),1.74(t,J＝7.5Hz,2H),1.60(t,J＝7.2Hz,2H),1.48–1.30(m,15H),1.23(s,2H).
化合物UBI-1158(NH 2-9b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000053
步骤1:UBI-1158c
化合物UBI-1158a(2g,20mmol),UBI-1158b(3.65g,24mmol)溶于三乙胺(2.02g,20mmol)和甲苯(100mL)，80℃反应18小时。反应液浓缩后用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％然后MeOH/DCM＝0％～10％)得到无色油状目标化合物UBI-1158c(1.4g)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.16(s,1H),4.02(s,1H),3.95–3.86(m,1H),3.80(dd,J＝6.0,4.3Hz,1H),3.70(dd,J＝6.0,4.3Hz,1H),3.52–3.46(m,1H),3.45–3.33(m,4H),1.93–1.77(m,2H).
步骤2:UBI-1158d
化合物UBI-1158c(1.3g,7.06mmol),KOH(1.19g,21.2mmol)溶于水(5mL)，100℃回流2小时。反应液冷却后直接用于下一步。
步骤3:UBI-1158e
在化合物UBI-1158d(1.3g,5.4mmol)的水溶液中加入二碳酸二叔丁酯(2.3g,10.7mmol)和二氧六环(30mL)，室温反应2小时。反应液浓缩，加水(20mL)，乙酸乙酯萃取(10mL*3)。水相浓缩得到粗品，粗品溶于MeOH/DCM＝10/1(30mL)，过滤，滤液浓缩后得到目标化合物UBI-1158e(1.7g)
步骤4:UBI-1158f
化合物UBI-1158e(600mg,1.99mmol),B(A1)(514mg,1.99mmol),HATU(1.51g,3.98mmol)溶于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。反应液直接反相柱分离(MeOH/H 2O＝5％～95％45分钟,60％收集)得到白色固体目标化合物UBI-1158f(500mg)。LC-MS:[M+H] +＝587.3
步骤5:UBI-1158
化合物UBI-1157f(100mg,0.17mmol),Pd/C(20mg)溶于DCM(10mL)，在氢气环境下反应16小时。反应 完成后过滤，滤液浓缩得到目标化合物粗品直接用于下一步。LC-MS:(M+H) +＝561.3
化合物UBI-1089(NH 2-11b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000054
步骤1:UBI-1089c
化合物UBI-1097a(2.0g,20mmol),UBI-1097b(3.57g,16mmol)以及K 2CO 3(5.52g,40mmol)溶解于乙腈(15mL)，然后室温反应18小时。反应液过滤后浓缩得粗产品。粗产品通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝＝50％～100％,20分钟,甲醇/二氯甲烷＝0％～10％20分钟)得到浅黄色油状产物UBI-1089c(460mg,收率9.5％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.13(q,J＝7.1Hz,2H),3.38(dd,J＝7.6,5.9Hz,2H),2.73(td,J＝7.0,3.1Hz,2H),2.64(d,J＝6.9Hz,2H),2.30(t,J＝7.4Hz,2H),1.88–1.76(m,2H),1.65(p,J＝7.5Hz,2H),1.53(m,2H),1.38(dt,J＝10.2,6.4Hz,2H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2:UBI-1089d
化合物UBI-1097c(460mg,2mmol),(Boc) 2O(460mg,2mmol)以及NaHCO 3(320mg,4mmol)溶解于四氢呋喃(10mL)，然后室温反应2小时。反应液加水(10mL)，用二氯甲烷萃取(10mL*3)。合并有机相用Na 2SO 4干燥后浓缩浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1089d(770mg收率100％)，直接用于下一步反应。
步骤3:UBI-1089e
化合物UBI-1089d(770mg,2mmol),LiOH(140mg,3mmol)溶解于水(3mL),甲醇(3mL)和四氢呋喃(6mL)，然后反应室温反应18小时。反应液浓缩后用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，水相用(1M)HCl酸化至pH＝5。然后用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，合并有机相后用无水硫酸钠干燥后浓缩得黄色油状产物UBI-1089e(450mg,收率63.6％)。
步骤4:UBI-1089f
化合物UBI-1089e(450mg,1.43mmol),B(A1)(371mg,1.43mmol),HATU(1.09g,2.87)溶解于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应18小时。加水(10mL)淬灭后,用乙酸乙酯萃取(8mL*3)。合并有机相后用无水硫酸钠干燥后浓缩得粗产物。该粗产品通过反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％，70％收集)得无色油状产物UBI-1089f(290mg,收率36.5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.02(s,1H),9.76(s,1H),7.81(d,J＝6.8Hz,1H),7.49(d,J＝7.2Hz,2H),5.14(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),4.49–4.24(m,2H),3.20–3.11(m,6H),2.99–2.87(m,1H),2.69–2.51(m,4H),2.35(q,J＝5.7,4.0Hz,3H),1.80–1.56(m,4H),1.37(s,9H),1.28(m,2H).
步骤5:UBI-1089
在氢气环境下下，化合物UBI-1089f(290mg,0.52mmol),Pd/C(29mg)溶解于甲醇(1mL)以及二氯甲烷(10mL)，反应液室温反应1小时.该反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％,15％收集)得黄色油状产物UBI-1089(180mg,收率65％)。
化合物UBI-1087(NH 2-8b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000055
步骤1:UBI-1087c
化合物UBI-1087a(1.5g,15mmol),UBI-1087b(1.46g,8mmol)以及DIEA(5.81g,45mmol)溶解于DMF(15mL)，室温反应18小时。反应液加水(15mL)，乙酸乙酯萃取(15mL*3)。有机相浓缩后得粗产品。该粗产品通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝50％～80％,20分钟,甲醇/二氯甲烷＝0％～10％20分钟.)得无色油状产物UBI-1087c(480mg,收率15％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.26–3.95(m,2H),3.42–3.25(m,2H),2.67(dtd,J＝22.1,7.0,1.2Hz,4H),2.36(tt,J＝7.3,1.8Hz,2H),1.86–1.67(m,4H),1.51(s,1H),1.40–1.16(m,3H).
步骤2:UBI-1087d
化合物UBI-1087c(480mg,2mmol),(Boc) 2O(540mg,2.2mmol)以及NaHCO 3(380mg,4mmol)溶解于四氢呋喃(15mL)，室温反应两小时。反应液加水(10mL)后用乙酸乙酯萃取(10mL*3)。合并有机相，通过无水硫酸钠干燥后浓缩得黄色油状粗产物UBI-1087d(600mg，收率85％)，该粗产物直接用于下一步反应。
步骤3:UBI-1087e
化合物UBI-1087d(600mg,1.9mmol),LiOH.水(88mg,2.1mmol)溶解于水(2mL),甲醇(2mL)以及四氢呋喃(6mL)，室温反应18小时。该反应液浓缩后用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，水相通过(1M)HCl酸化至pH＝5，用乙酸乙酯萃取(10mL*3)。有机相合并后通过无水硫酸钠干燥，然后浓缩的到黄色油状产物UBI-1087e(480mg,收率77％).
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.03(s,1H),3.68–3.55(m,2H),3.22–3.09(m,4H),2.17(t,J＝7.2Hz,2H),1.75–1.62(m,4H),1.39(s,9H).
步骤4:UBI-1087f
化合物UBI-1087e(420mg,1.47mmol),B(A1)(380mg,1.47mmol),EDCI(564mg,2.94mmol),HOBT(595mg,4.41mmol)以及TEA(445mg,4.41mmol)溶解于DMF(12mL)，室温下反应18小时.反应液加水(10mL)淬灭后,用乙酸乙酯萃取(15mL*3)。有机相合并后用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后通反相柱纯化得到黄色固体产物UBI-1087f(280mg,收率36％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.06(s,1H),11.02(s,1H),9.81(s,1H),7.80(d,J＝7.0Hz,1H),7.64–7.28(m,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.49–4.21(m,2H),2.93(ddd,J＝18.6,13.5,5.3Hz,1H),2.61(d,J＝18.3Hz,2H),2.38–2.32(m,2H),2.17(t,J＝7.3Hz,2H),2.06–1.95(m,1H),1.88–1.59(m,8H),1.39(d,J＝1.8Hz,9H).
步骤5:UBI-1087
在氢气环境下，化合物UBI-1087f(280mg,0.53mmol),Pd/C(28mg)溶解于甲醇(1mL)以及二氯甲烷(10mL)，室温下反应1小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％,20％收集)得到黄色油状产物UBI-1087(80mg,收率30％)。
化合物UBI-1088(NH 2-9b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000056
步骤1:UBI-1088c
化合物UBI-1188a(2g,20mmol),UBI-1188b(3.34g,16mmol)以及K 2CO 3(5.52g,40mmol)溶解于乙腈(15mL)，该反应在室温下反应18小时。反应液过滤，滤液浓缩后通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝50％～100％20分钟,甲醇/二氯甲烷＝0％～10％30分钟.)得到浅黄色油状产物UBI-1188c(700mg,收率15％)。
步骤2:UBI-1088d
化合物UBI-1088c(700mg,3.1mmol),(Boc) 2O(740mg,3.4mmol)以及NaHCO 3(520mg,6.2mmol)溶解于四氢呋喃(15mL)，室温下反应2小时。反应液中加水(10mL)然后乙酸乙酯萃取(10mL*3)。合并有机相，无水硫酸钠干燥后浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1088d(1g，收率100％)，该粗产品直接用于下一步反应。
步骤3:UBI-1088e
化合物UBI-1088d(1g,3mmol),LiOH.水(190mg,5mmol)溶于水(2mL),甲醇(2mL)以及四氢呋喃(6mL)，室温反应过夜。反应液浓缩后用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，水相通过(1M)HCl酸化至pH＝5，再用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥后得到黄色油状粗产物UBI-1088e(600mg,产率66％)。
步骤4:UBI-1088f
化合物UBI-1088e(640mg,2.13mmol),B(A1)(497mg,1.92mmol),HATU(1.62g,4.27mmol)溶解于DMF(8mL)以及DIPEA(0.5mL)，反应室温反应18小时。反应液直接通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％,70％收集)得到淡黄色油状产物UBI-1088f(380mg，收率33％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.02(s,1H),9.77(s,1H),7.81(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.57–7.43(m,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.45–4.26(m,2H),3.23–3.06(m,6H),3.00–2.85(m,1H),2.69–2.56(m,2H),2.38(t,J＝7.0Hz,2H),2.10–1.98(m,1H),1.77–1.66(m,2H),1.54(m,4H),1.39(s,9H).
步骤5:UBI-1088
在氢气环境下下，化合物UBI-1188f(390mg,0.72mmol),Pd/C(39mg)溶解于甲醇(1mL)，二氯甲烷(10mL)，室温反应1小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后得到得到黄色油状粗产物UBI-1088(350mg，收率95％)，该粗产物直接用于下一步反应。
化合物UBI-1141(NH 2-9b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000057
步骤1:UBI-1141b
化合物UBI-1141a(2.0g,10.6mmol)溶于四氢呋喃(25mL)后加入TEA(1.6g,15.9mmol)，然后在0℃条件下加入MsCl(1.5g,12.7mmol)。室温下反应18小时。反应液加水(30mL)淬灭后用乙酸乙酯萃取(20 mL*3)。合并有机相，无水硫酸钠干燥后浓缩得到黄色油状粗产物UBI-1141b(2.5g,收率89％)。该粗产品直接用于下一步反应。
步骤2:UBI-1141d
化合物UBI-1141c(1.3g,13mmol),UBI-1141b(2.78g,10mmol)以及K 2CO 3(2.59g,26mmol)溶解于乙腈(15mL)，室温反应18小时。反应液过滤，滤液浓缩后通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝50％～100％20分钟,甲醇/二氯甲烷＝0％～10％30分钟.)得到浅黄色油状产物UBI-1141d(450mg,收率16％)。
步骤3:UBI-1141e
化合物UBI-1141d(450mg,1.7mmol),(Boc) 2O(543mg,2.5mmol)以及NaHCO 3(279mg,3.3mmol)溶于四氢呋喃(15mL)，室温下反应2小时。反应液加水(10mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(10mL*3)。合并有机相，无水硫酸钠干燥后浓缩后得到浅黄色油状粗产物UBI-1141e(550mg，收率89％)。该粗产物直接用于下一步反应。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.30(q,J＝7.1Hz,6H),3.19(s,2H),2.66(s,2H),2.41(s,3H),1.81(p,J＝6.9Hz,2H),1.46(d,J＝2.7Hz,18H).
步骤4:UBI-1141f
化合物UBI-1141e(550mg,1.5mmol)溶解于50％aq.NaOH(10mL)和四氢呋喃(10mL)中，室温下反应18小时。反应液浓缩后乙酸乙酯(10mL)洗一次，水相通过(1M)HCl酸化至pH＝5，再用乙酸乙酯萃取(10mL*3)。合并有机相，无水硫酸钠干燥后浓缩后得到浅黄色油状粗产物UBI-1141f(400mg,收率86％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.39–3.14(m,8H),2.83(s,2H),2.53(s,3H),1.85–1.68(m,2H),1.45(s,9H).
步骤5:UBI-1141g
化合物UBI-1141f(200mg,0.63mmol),B(A1)(148mg,0.57mmol),HATU(483mg,1.27mmol)溶于DMF(8mL)以及DIPEA(0.5mL)，室温下反应16小时。反应液直接通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％,70％收集)得到黄色油状产物UBI-1141g(30mg,收率9％)。
步骤6:UBI-1141
在氢气环境下下，化合物UBI-1141g(50mg,0.09mmol),Pd/C(5mg)溶于甲醇(1mL)二氯甲烷(10mL)，反应室温下反应1小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后得粗产品UBI-1141(50mg，收率100％)，该粗产品直接用于下一步反应。
化合物UBI-1075(NH 2-9b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000058
步骤1:UBI-1075b
化合物UBI-1075a(1.0g,7.69mmol)和丙烯酸甲酯(984mg,7.69mmol)溶解在乙腈(20mL)，80℃反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取(5mL*3)。合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品用色谱硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)得到无色油状化合物(660 mg,收率40％)。
1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ3.67–3.62(m,1H),3.60–3.57(m,5H),3.48–3.43(m,2H),3.39–3.36(m,2H),2.77-2.74(m,2H),2.70-2.63(m,2H),2.43-2.40(m,2H).
步骤2:UBI-1075c
化合物UBI-1075b(660mg,3.06mmol),二叔丁基二碳酸酯(975mg,4.58mmol)以及碳酸氢钠(771mg,9.18mmol)加入到四氢呋喃(20mL)中，室温反应2小时，反应完成后倒入10mL水中，二氯甲烷提取(5mL*3)。合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，减压旋蒸浓缩，得到化合物UBI-1075c(490mg,收率64％)。 1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ3.60–3.56(m,5H),3.51–3.48(m,2H),3.43–3.38(m,4H),1.43(s,9H),1.38(s,4H).
步骤3:UBI-1075d
化合物UBI-1075c(316mg,1.0mmol)和氢氧化钠(200mg,5.0mmol)加入到水/甲醇/四氢呋喃(0.5mL/3mL/3mL)体系中，室温反应16小时，反应完成后浓缩移除有机溶剂，水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5。然后用二氯甲烷萃取(10ml*3)，将合并的有机相无水Na2SO4干燥，浓缩得到所需化合物UBI-1075d(170mg，收率56.3％)。 1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ12.16(s,1H),3.60-3.57(m,2H),3.54-3.49(m,2H),3.46(dt,J＝11.1,5.1Hz,4H),3.47–3.38(m,2H),2.48–2.40(m,2H),1.39(s,9H).
步骤4:UBI-1075e
化合物UBI-1075d(268mg,0.88mmol),B(A1)(230mg,0.88mmol),HATU(337mg,0.97)以及DIPEA(0.3mL)加入到无水DMF(3mL)中，室温反应16小时，反应完成后浓缩移除有机溶剂，粗品反向色谱硅胶柱层析分离(MeOH/H 2O＝5％～95％45mins,60％收集)得到无色油状化合物UBI-1075e(350mg,收率72.7％)。
步骤5:UBI-1075
化合物UBI-1075e(200mg,0.37mmol),10％的钯碳(42mg)加入到甲醇/二氯甲烷(1mL/10mL)混合溶剂中,在氢气环境下室温反应2小时。过滤后浓缩滤液得到粗品，用冷的***洗涤(10mL*3)，干燥后得到目标化合物无色油状物UBI-1075(169mg,收率88.9％)。
化合物UBI-1093(NH 2-10b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000059
步骤1:UBI-1093b
化合物UBI-1093a(970mg,7.46mmol)、4-溴丁酸乙酯(1.45g,7.46mmol)以及K 2CO 3(2.06g,14.9mmol)溶于乙腈(20mL)，80℃反应18小时，反应完成后过滤，滤液减压旋蒸浓缩，色谱硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)得到无色油状化合物UBI-1093b(710mg,收率22％)。
1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ4.09–4.02(m,2H),3.62–3.58(m,2H),3.52–3.48(m,2H),3.41–3.37(m,2H),2.68–2.64(m,2H),2.58–2.54(m,2H),2.37–2.35(m,2H),1.63(ddd,J＝13.8,10.9,7.0Hz,2H),1.19–1.16 (m,3H).
步骤2:UBI-1093c
化合物UBI-1093b(350mg,1.43mmol),二叔丁基二碳酸酯(469mg,2.15mmol)，碳酸氢钠(360mg,4.29mmol)依次加入到四氢呋喃(20mL)中，室温反应2小时。反应完成后倒入10mL水，二氯甲烷提取(5mL*3)。合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到无色油状化合物UBI-1093c(320mg,收率71％)。
步骤3:UBI-1093d
化合物UBI-1093c(300mg,0.87mmol)、氢氧化钠(69.6mg,1.74mmol)依次加入到水/甲醇/四氢呋喃(0.5mL/3mL/3mL)体系中，室温反应16小时，反应完成后浓缩移除有机溶剂，水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5。然后用二氯甲烷(10ml*3)萃取，将合并的有机层经无水Na 2SO 4干燥，浓缩得到所需无色油状化合物UBI-1093d(250mg，收率91％)。
1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ12.03(s,1H),3.67–3.51(m,4H),3.51–3.30(m,4H),3.24(dt,J＝12.6,6.0Hz,2H),2.16(t,J＝7.2Hz,2H),1.73–1.69(m,2H),1.39(s,9H).
步骤4:UBI-1093e
化合物UBI-1093d(254mg,0.80mmol),B(A1)(230mg,0.88mmol),HATU(337mg,0.97)以及DIPEA(0.3mL)加入到无水DMF(3mL)中，室温反应16小时。反应完成后浓缩，粗品用硅胶柱层析分离(MeOH/DCM＝1％～10％)得到无色油状化合物UBI-1093e(220mg,收率49％).
步骤4:UBI-1093
化合物UBI-1093e(200mg,0.35mmol),10％的钯碳(20mg)加入到甲醇/二氯甲烷(1mL/10mL)混合溶剂中,在氢气环境下室温反应2小时，过滤后浓缩滤液得到粗品，用冷的***洗涤(10mL*3)，干燥后得到无色油状化合物UBI-1093(170mg,收率89.4％)。
化合物的合成方法UBI-1094(NH 2-11b-B(A1))
Figure PCTCN2019110225-appb-000060
步骤1:UBI-1094b
化合物UBI-1094a(1.0g,7.69mmol)、UBI-1094-1(1.6g,7.69mmol)以及三乙胺(2.02g,20mmol)加入到无水甲苯中(10mL)，80℃反应18小时。反应完成后将反应液浓缩，粗品用硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)得到无色油状化合物UBI-1094b(740mg,收率37％)。
步骤2:UBI-1094c
将化合物UBI-1094b(350mg,1.35mmol)，二叔丁基二碳酸酯(441mg,2.03mmol)以及碳酸氢钠(360mg,4.29mmol)依次加入到二氧六环(20mL)中，室温反应2小时，反应完成后将反应液倒入10mL水中，用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到无色油状化合物UBI-1094c(390mg,收率87％)。
步骤3:UBI-1094d
将化合物UBI-1094c(390mg,1.09mmol)，氢氧化钠(1.19g,21.2mmol)依次加入到水(25mL)中，30℃反应12小时，反应完成后浓缩，水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5。然后用二氯甲烷(10ml*3)萃取，将合并的有机层经无水Na 2SO 4干燥，浓缩得到目标化合物UBI-1094d(250mg，产率91％)。
1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ11.99(s,1H),3.69–3.48(m,4H),3.39–3.27(m,6H),2.22(t,J＝6.9Hz,2H),1.47(s,4H),1.36(s,9H).
步骤4:UBI-1094e
化合物UBI-1093d(210mg,0.665mmol),B(A1)(160mg,0.618mmol)，HATU(305mg,0.803mmol)以及DIPEA(0.5mL)加入到无水DMF(5mL)中，室温反应16小时，反应完成后浓缩，粗品用硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)得到白色固体化合物UBI-1093e(157mg,收率43％)。
LC-MS:[M-100+H] +＝472.3
步骤5:UBI-1094
化合物UBI-1094e(100mg,0.17mmol),10％的钯碳(20mg)加入到甲醇/二氯甲烷(1mL/10mL)混合溶剂中,在氢气环境下室温反应2小时，反应液过滤后浓缩滤液得到粗品，用冷的***洗涤(10mL*3)，干燥后得到目标化合物无色油状物UBI-1094(81mg,收率85％)。
LCMS:(M-100+H) +＝446.3
化合物的合成方法UBI-1095(NH 2-14b-B(A1))
Figure PCTCN2019110225-appb-000061
步骤1:UBI-1095b
化合物UBI-1095a(2g,15.3mmol)、UBI-1095-1(3.80g,15.3mmol)以及三乙胺(2.02g,20mmol)加入到无水甲苯中(100mL)，80℃反应18小时，反应完成后浓缩，粗品用硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)得到无色油状化合物UBI-1095b(740mg,收率16％)。
步骤2:UBI-1095c
化合物UBI-1095b(1.3g,3.7mmol)、二叔丁基二碳酸酯(2.3g,10.7mmol)以及碳酸氢钠(360mg,4.29mmol)依次加入到二氧六环(30mL)中，室温反应2小时。反应完成后将反应液倒入10mL水中，用乙酸乙酯提取(10mL*3)。合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到化合物UBI-1095c(1.4g,收率83％)。
1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ12.03(s,1H),3.63–3.51(m,4H),3.45–3.41(m,2H),3.32-3.29(m,2H),3.24(dt,J＝12.6,6.0Hz,2H),2.16(t,J＝7.2Hz,2H),1.54(d,J＝12.2Hz,4H),1.39(s,9H),1.35–1.28(m,6H).
步骤3:UBI-1095d
将化合物UBI-1095c(1.5g,6.0mmol)，氢氧化钠(1.19g,21.2mmol)依次加入到水(50mL)中，30℃反应12小时。反应完成后浓缩，水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5。然后用二氯甲烷萃取(10ml*3)，合并有机层经无水Na2SO4干燥，浓缩得到所需化合物UBI-1095d(1.2g,收率83％)。
步骤4:UBI-1095e
化合物UBI-1095d(600mg,1.57mmol),B(A1)(406mg,1.57mmol),HATU(1.51g,3.98mmol)以及DIPEA(0.5mL)加入到无水DMF(5mL)中，室温反应16小时，反应完成后浓缩移，粗品用硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)得到白色固体化合物UBI-1095e(500mg,收率51％)。
LC-MS:[M-100+H] +＝515.3
步骤5:UBI-1095
化合物UBI-1095e(100mg,0.17mmol),10％的钯碳(20mg)加入到甲醇/二氯甲烷(1mL/10mL)混合溶剂中,在氢气环境下室温反应16小时。过滤后浓缩滤液得到粗品，用冷的***洗涤(10mL*3)，干燥后得到目标化合物白色固体UBI-1095(83mg,收率86％)。
LCMS:(M-100+H) +＝489.3
化合物UBI-1100(NH 2-14b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000062
步骤1:UBI-1100c
化合物UBI-1100a(1.0g,4.58mmol)溶于乙腈(30mL)加入无水碳酸钾(949.8mg,6.87mmol)和UBI-1160b(765.2mg,4.58mmol)，然后加热至80℃反应18小时。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％,然后二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)得到白色固体UBI-1100c(0.6g,收率43％)。
步骤2:UBI-1100d
化合物UBI-1100c(0.6g,1.97mmol)溶于四氢呋喃(20mL)，加入碳酸氢钠(331.2mg,3.94mmol)和Boc 2O(0.64g,2.92mmol)。室温反应2小时。反应加水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1100d(V1084-016,400mg,收率50.2％)。LCMS[M-100] +＝305.1
步骤3:UBI-1100e
化合物UBI-1100d(400mg,1mmol)，氢氧化锂(47mg,1.98mmol)溶于四氢呋喃(20mL)和水(10mL)。该体系在40℃反应5小时。水解完全后，加水(15mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到无色油状产品UBI-1100e(V1084-019,320mg,收率86％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.00(s,2H),3.72–3.63(m,10H),3.52(s,2H),3.42(d,J＝5.2Hz,2H),1.46(d,J＝10.2Hz,11H).LCMS[M-100] +＝277.2
步骤4:UBI-1100f
化合物UBI-1100e(200mg,0.53mmol),B(A1)(137.7mg,0.53mmol),HATU(303mg,0.8mmol),DIPEA(0.5mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应完全后过反相柱纯化(MeOH/H2O＝5％～95％45分钟,70％收集)，纯化后得到黄色油状产品UBI-1100f(V1084-035,180mg,收率54.9％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.09(s,1H),7.99(s,1H),7.72(s,2H),7.48(t,J＝7.7Hz,1H),5.22(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),4.41(s,2H),3.62(d,J＝35.7Hz,12H),3.33(s,2H),2.95–2.80(m,2H),2.42–2.31(m,1H),2.27–2.21(m,1H),1.47(s,9H).LCMS[M-100] +＝518.1
步骤5:UBI-1100
化合物UBI-1100e(100mg,0.16mmol)溶于二氯甲烷(10mL)和甲醇(1mL)，加入Pd/C(20mg)，氢气环境下室温反应2小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物UBI-1100f(130mg,收率100％)。LCMS[M+H] +＝592.2
化合物UBI-1071(NH 2-15b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000063
步骤1:UBI-1071c
化合物UBI-1071a(1.0g,4.58mmol)，UBI-1071b(0.39g,4.58mmol)溶于乙腈(30mL)，然后加热至80℃反应18小时。反应液浓缩硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％,然后二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)得到黄色油状产物UBI-1071c(0.4g,收率28.7％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.63-3.47(m,13H),3.44(t,J＝5.6Hz,2H),3.41-3.36(m,2H),2.76(t,J＝6.8Hz,2H),2.64(t,J＝5.6Hz,2H),2.44(t,J＝6.8Hz,2H).
步骤2:UBI-1071d
化合物UBI-1071c(0.4g,1.31mmol)溶于四氢呋喃(20mL)加入碳酸氢钠(220.8mg,2.63mmol)和Boc 2O(430mg,1.97mmol)，室温反应2小时。反应加水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1071d(0.42g,收率79％)。LCMS[M-100] +＝305.1
步骤3:UBI-1071e
化合物UBI-1071d(0.4g,0.99mmol)，氢氧化锂(47.8mg,1.98mmol)溶于四氢呋喃(20mL)和水(10mL)。该体系在40℃反应5小时。水解完全后，加水(30mL)，用乙酸乙酯萃取杂质(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6，再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到无色油状产品UBI-1071e(V1084-010,320mg,收率82.9％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),3.63-3.58(m,2H),3.58-3.49(m,8H),3.46(s,2H),3.42-3.34(m,4H),3.32-3.27(m,2H),2.45(t,J＝7.2Hz,2H),1.39(s,9H).LCMS[M-100] +＝291.2
步骤4:UBI-1071f
化合物UBI-1071e(200mg,0.51mmol),B(A1)(132.8mg,0.51mmol),HATU(292.2mg,0.77mmol),DIPEA(0.5mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应完全后过反相柱纯化(MeOH/H2O＝5％～95％45分钟,70％收集)，纯化后得到黄色油状产品UBI-1071f(150mg,收率46.7％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),9.83(d,J＝14.0Hz,1H),7.90-7.75(m,1H),7.57-7.37(m,2H),5.21-5.10(m,1H),4.47-4.26(m,2H),3.55-3.47(m,16H),3.31-3.26(m,2H),3.00-2.85(m,1H),2.66-2.56(m,3H),2.38-2.27(m,1H),2.08-1.98(m,1H),1.38(s,9H).LCMS[M-100] +＝532.2
步骤5:UBI-1071
化合物UBI-1071f(100mg,0.74mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(10mL)和甲醇(1mL)加入Pd/C(20mg)氢气环境下室温反应2小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物UBI-1071(130mg,收率86.5％)。LCMS[M+H] +＝606.2.
化合物UBI-1072(NH 2-16b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000064
步骤1:UBI-1072c
化合物UBI-1072a(1.0g,4.58mmol)溶于乙腈(30mL)，加入无水碳酸钾(0.95g,6.87mmol)和UBI-1160b(0.89g,4.58mmol)，然后加热至80℃反应18小时。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％,然后二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)得到黄色油状产物UBI-1072c(530mg,收率34.8％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.83(s,1H),4.14(d,J＝7.1Hz,2H),3.89–3.81(m,2H),3.69(d,J＝3.1Hz,10H),3.43(dd,J＝5.6,4.4Hz,2H),3.16–3.09(m,2H),3.03(s,2H),2.47(t,J＝7.0Hz,2H),2.11(s,2H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2:UBI-1072d
化合物UBI-1072c(0.5g,1.5mmol)溶于四氢呋喃(20mL)加入碳酸氢钠(252.7mg,3.01mmol)和Boc 2O(492.4mg,2.26mmol)。室温反应2小时。反应加水(20mL)淬灭用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1072d(0.52g,收率80％)。LCMS[M-100] +＝233.1
步骤3:UBI-1072e
化合物UBI-1072d(400mg,0.93mmol)，氢氧化锂(44.3mg,1.85mmol)溶于四氢呋喃(20mL)和水(10mL)。该体系在40℃反应5小时。水解完全后，加水(15mL)，用乙酸乙酯萃取杂质(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6，再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到无色油状产品UBI-1072e(300mg,收率80.2％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.67(d,J＝5.0Hz,8H),3.64–3.60(m,4H),3.40(d,J＝5.2Hz,2H),3.35–3.30(m,2H),2.34(t,J＝7.2Hz,2H),1.85(q,J＝7.2Hz,2H),1.45(s,11H).LCMS[M-100] +＝305.2
步骤4:UBI-1072f
化合物UBI-1072e(200mg,0.49mmol),B(A1)(128.2mg,0.49mmol),HATU(282mg,0.74mmol),DIPEA(0.5mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应完全后过反相柱纯化(MeOH/H2O＝5％～95％45分钟,70％收集)，纯化后得到黄色油状产品UBI-1072f(150mg,收率47％)。LCMS[M-100] +＝546.1
步骤5:UBI-1072
化合物UBI-1072e(100mg,0.15mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(10mL)和甲醇(1mL)，加入Pd/C(20mg)，氢气环境下室温反应2小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物UBI-1072(80mg,收率55.6％)。LCMS[M+H] +＝620.2
化合物UBI-1102(NH 2-17b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000065
步骤1:UBI-1102c
化合物UBI-1102a(1.0g,4.58mmol)溶于乙腈(30mL)加入无水碳酸钾(950mg,6.87mmol)和UBI-1102b(0.88g,1.92mmol)，然后加热至80℃反应18小时。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％,然后二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)得到黄色油状产物UBI-1102c(0.5g,收率25％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.12(q,J＝7.1Hz,2H),3.71–3.60(m,11H),3.40(t,J＝5.1Hz,2H),2.86–2.77(m,2H),2.70–2.62(m,2H),2.32(t,J＝7.4Hz,2H),2.17(s,2H),1.73–1.50(m,4H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2:UBI-1102d
化合物UBI-1102c(0.5g,1.44mmol)溶于四氢呋喃(30mL)加入碳酸氢钠(121mg,2.16mmol)和Boc 2O(0.47g,2.17mmol)。室温反应2小时。反应加水(20mL)淬灭用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1102d(0.45g,收率60.7％)。
步骤3:UBI-1102e
化合物UBI-1102d(0.4g,0.9mmol)，氢氧化锂(40mg,1.79mmol)溶于四氢呋喃(20mL)和水(10mL)。该体系在40℃反应5小时。水解完全后，加水(15mL)，用乙酸乙酯萃取杂质(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6，再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到无色油状产品UBI-1102e(300mg,收率83.6％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ10.30(s,1H),3.71–3.55(m,12H),3.38(q,J＝11.2,8.1Hz,4H),3.26(s,2H),2.41–2.32(m,2H),1.65–1.56(m,4H),1.45(d,J＝1.7Hz,9H).
步骤4:UBI-1102f
化合物UBI-1102e(300mg,0.72mmol),B(A1)(150mg,0.57mmol),HATU(408.9mg,1.08mmol),DIPEA(0.5mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应完全后过反相柱纯化(MeOH/H2O＝5％～95％45分钟,70％收集)，纯化后得到黄色油状产品UBI-1102f(135mg,收率35.2％)。LCMS[M-100] +＝574
步骤5:UBI-1102
溶于混合溶剂二氯甲烷(30mL)和甲醇(3mL)加入Pd/C(50mg)，氢气环境下室温反应2小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物UBI-1102(130mg,收率89.8％)。LCMS[M+H] +＝648
化合物UBI-1154(NH 2-5b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000066
步骤1:UBI-1154c
化合物UBI-1154a(1.0g,11.63mmol)溶于乙腈(30mL)加入无水碳酸钾(2.41g,17.44mmol)和UBI-1154b(1.93g,11.63mmol)，然后加热至80℃反应18小时。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％,然后二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)得到黄色油状产物UBI-1154c(500mg,收率25％)。
步骤2:UBI-1154d
化合物UBI-1154c(500mg,2.91mmol)溶于四氢呋喃(20mL)加入碳酸氢钠(731.8mg,8.72mmol)和Boc 2O(1.27g,5.81mmol)。室温反应2小时。反应加水(20mL)淬灭用乙酸乙酯取(20mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1154d(0.48g,收率60.7％)。LCMS[M-100] +＝173.1
步骤3:UBI-1154e
化合物UBI-1154d(0.4g,1.47mmol)，氢氧化锂(70mg,2.94mmol)。溶于四氢呋喃(20mL)和水(10mL)。该体系在40℃反应5小时。水解完全后，加水(30mL)，用乙酸乙酯萃取杂质(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6，再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到无色油状产品UBI-1154e(230mg,收率83.6％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.03(s,2H),3.45(d,J＝4.1Hz,4H),1.44(s,9H).
步骤4:UBI-1154f
化合物UBI-1154e(200mg,0.82mmol),B(A1)(212.3mg,0.82mmol),HATU(467mg,0.13mmol),DIPEA(0.5mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应完全后过反相柱纯化(MeOH/H2O＝5％～95％45分钟,70％收集)，纯化后得到黄色油状产品UBI-1154f(140mg,收率35.2％)。LCMS[M+H] +＝486.1
步骤5:UBI-1154
化合物UBI-1154e(100mg,0.21mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(10mL)和甲醇(1mL)加入Pd/C(20mg)氢气环境下室温反应2小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物UBI-1154f(85mg,收率89.8％)。LCMS[M+H] +＝460.2
化合物UBI-1155(NH 2-6b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000067
步骤1:UBI-1155c
化合物UBI-1155a(1.0g,11.63mmol)，UBI-1155b(1.0g,11.63mmol)溶于乙腈(30mL)，然后加热至80℃反应18小时。反应液浓缩硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％,然后二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)得到黄色油状产物UBI-1071c(0.4g,收率30％)。
步骤2:UBI-1155d
化合物UBI-1155c(500mg,2.90mmol)溶于四氢呋喃(20mL)加入碳酸氢钠(732mg,8.71mmol)和Boc 2O(1.27g,5.81mmol)，室温反应2小时。反应加水(20mL)淬灭用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1155d(500mg,收率44.3％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.69(s,3H),3.54(t,J＝6.8Hz,2H),3.48-3.35(m,4H),2.68-2.53(m,2H),1.47(s,9H).LCMS[M-100] +＝173.1
步骤3:UBI-1155e
化合物UBI-1155d(500mg,1.84mmol)，氢氧化锂(88.0mg,3.67mmol)溶于四氢呋喃(20mL)和水(10mL)。该体系在40℃反应5小时。水解完全后，加水(30mL)，用乙酸乙酯萃取杂质(20mL*2)。水相用 1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到无色油状产品UBI-1155e(350mg,收率73.8％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.68(s,1H),3.54(t,J＝6.9Hz,2H),3.49–3.30(m,4H),2.65(s,2H),1.47(s,9H).LCMS[M-100] +＝159.1
步骤4:UBI-1155f
化合物UBI-1155e(200mg,0.74mmol),B(A1)(183.9mg,0.74mmol),HATU(419mg,1.10mmol),DIPEA(0.5mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应完全后过反相柱纯化(MeOH/H2O＝5％～95％45分钟,70％收集)，纯化后得到黄色油状产品UBI-1155f(V1084-066,200mg,收率51.7％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),9.88(s,1H),7.83(s,1H),7.56–7.43(m,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.45–4.28(m,2H),3.50(t,J＝7.0Hz,2H),3.46–3.37(m,4H),3.27–2.87(m,2H),2.64(t,J＝6.9Hz,2H),2.39–2.00(m,2H),1.40(s,9H).LCMS[M+H] +＝400.2
步骤5:UBI-1155
化合物UBI-1155e(200mg,0.74mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(30mL)和甲醇(3mL)加入Pd/C(40mg)氢气环境下室温反应2小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物UBI-1155f(130mg,收率68.6％)。LCMS[M+H] +＝474.2
化合物的合成方法：UBI-1156(NH 2-7b-B(A1))
Figure PCTCN2019110225-appb-000068
步骤1:UBI-1156c
化合物UBI-1156a(1.0g,11.63mmol)溶于乙腈(30mL)加入无水碳酸钾(2.41g,17.44mmol)和UBI-1156b(2.26g,11.63mmol)，然后加热至80℃反应18小时。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％,然后二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)得到黄色油状产物UBI-1156c(650mg,收率27％)。LCMS[M+H] +＝201.1
步骤2:UBI-1156d
化合物UBI-1156c(500mg,2.5mmol)溶于四氢呋喃(10mL)加入碳酸氢钠(731.8mg,7.50mmol)和Boc 2O(1.09g,5.0mmol)。室温反应2小时。反应加水(40mL)淬灭用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1156d(500mg,收率66.7％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.14(q,J＝7.1Hz,2H),3.48–3.32(m,4H),3.29(t,J＝7.3Hz,2H),2.31(t,J＝7.3Hz,2H),1.86(p,J＝7.3Hz,2H),1.47(s,9H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤3:UBI-1156e
化合物UBI-1156d(500mg,1.66mmol)，氢氧化锂(79.73mg,3.33mmol)溶于四氢呋喃(20mL)和水(10mL)。该体系在40℃反应5小时。水解完全后，加水(30mL)，用乙酸乙酯萃取杂质(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。合并有机相、无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到无色油状产品UBI-1156e(400mg,收率88.2％)。LCMS[M+H] +＝173.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ3.40(dd,J＝6.3,4.7Hz,2H),3.33(dd,J＝7.1,5.5Hz,2H),3.18(t,J＝7.3Hz,2H),2.16(t,J＝7.3Hz,2H),1.68(p,J＝7.3Hz,2H),1.40(s,9H).
步骤4:UBI-1156f
化合物UBI-1156e(200mg,0.735mmol),B(A1)(191.2mg,0.735mmol),HATU(419.12mg,1.1mmol)and  DIPEA(0.5mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应完全后过反相柱纯化(MeOH/H2O＝5％～95％45分钟,70％收集)，纯化后得到黄色油状产品UBI-1156f(100mg,收率26.5％)。LCMS[M-100] +＝414.1
步骤5:UBI-1156
化合物UBI-1156e(100mg,0.20mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(20mL)和甲醇(2mL)加入Pd/C(20mg)氢气环境下室温反应2小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物UBI-1156f(100mg,收率80.3％)。LCMS[M+H] +＝488.1
化合物UBI-1160(NH 2-18b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000069
步骤1:UBI-1160c
化合物UBI-1160a(1.5g,6.87mmol)溶于乙腈(30mL)，加入无水碳酸钾(1.9g,6.87mmol)和UBI-1160b(1.53g,6.87mmol)，80℃反应过夜。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝95/5)得到白色固体产品UBI-1160c(1g，收率40％)。
步骤2:UBI-1160d
化合物UBI-1160c(1g,2.77mmol)溶于四氢呋喃(30mL)，加入NaHCO 3(700mg,8.31mmol)和Boc 2O(0.72g,3.33mmol)，室温反应2小时。反应加水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝90/10)得到黄色油状产物UBI-1160d(2g，收率100％)。
步骤3:UBI-1160e
化合物UBI-1160d(1.27g,2.77mmol)溶于四氢呋喃(20mL)和水(10mL)，加入NaOH(332mg,8.31mmol)40℃反应5小时。反应液浓缩，加入饱和食盐水(15mL)用***萃取(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。有机相合并无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到无色油状粗产品UBI-1160e(500mg，收率42％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.97(s,1H),3.60(m,2H),3.51-3.49(m,8H),3.46(m,2H),3.40(m,2H),3.25(m,2H),3.16-3.12(m,2H),2.17-2.19(m,2H),1.54-1.35(m,13H),1.16-1.21(m,2H).
步骤4:UBI-1160f
化合物UBI-1160e(70mg,0.22mmol),B(A1)(50mg,0.11mmol),EDCI(32mg,0.165mmol),HOBT(18mg,0.13mmol),DIEA(0.5mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。补加HATU(870mg,2.3mmol)室温反应过夜。反应加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝97/3)得到黄色油状粗产品UBI-1160f(500mg，收率76％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.02(s,1H),9.75(s,1H),7.82(m,1H),7.55–7.43(m,2H),5.15(m,1H),4.43–4.28(m,2H),3.66–3.57(m,8H),3.55–3.50(m,8H),3.15(m,8H),2.06–1.95(m,2H),1.62(m,2H),1.49(m,4H),1.38(d,9H).LCMS：[M-100] +＝574
步骤5:UBI-1160
化合物UBI-1160e(500mg,0.74mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(30mL)和甲醇(3mL)，加入Pd/C(500mg)，氢气环境下反应2小时。硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物UBI-1160f(130mg，收率27％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.02(s,1H),9.76(s,1H),7.54–7.46(m,1H),7.25(t,1H),7.20–7.11(m,1H),5.15(dd, 1H),4.45–4.24(m,2H),3.68–3.38(m,15H),3.27(m,2H),3.14(m,5H),3.01–2.93(m,3H),2.68–2.59(m,1H),2.39–2.31(m,2H),2.08–1.99(m,1H),1.61(m,2H),1.48(m,2H),1.38(d,9H).LCMS：[M+H] +＝648
化合物UBI-1069(NH 2-12b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000070
步骤1:UBI-1169c
化合物UBI-1169a(1.5g,11.5mmol)溶于乙腈(30mL)，加入无水碳酸钾(3.18g,23mmol)和UBI-1169b(2.56g,11.5mmol)，80℃反应过夜。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝95/5)得到白色固体产品UBI-1169c(1.3g，收率41％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.12(q,J＝7.1Hz,2H),3.70–3.59(m,4H),3.38(t,J＝5.0Hz,2H),2.86–2.79(m,2H),2.70–2.60(m,2H),2.30(t,J＝7.5Hz,2H),1.69–1.60(m,2H),1.53(p,J＝7.4Hz,2H),1.42–1.34(m,2H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2:UBI-1169d
化合物UBI-1169c(1.3g,4.77mmol)溶于四氢呋喃(30mL)加入NaHCO 3(1.2g,14.33mmol)和Boc 2O(1.24g,5.72mmol)，室温反应2小时。反应加水(20mL)淬灭用乙酸乙酯(20mL*3)萃取.有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1169d(2.5g，收率100％)。
步骤3:UBI-1169e
化合物UBI-1169d(1.7g,4.77mmol)溶于四氢呋喃(20mL)和水(10mL)，加入氢氧化钠(572mg,14.31mmol)，反应40℃搅拌5小时。反应液浓缩，加入饱和食盐水(15mL)用***萃取(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。有机相合并无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到无色油状粗产品UBI-1169e(300mg，收率18％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.96(s,1H),3.62–3.56(m,2H),3.51(t,J＝5.9Hz,2H),3.38(d,J＝9.5Hz,2H),3.28(t,J＝5.9Hz,2H),3.16(q,J＝7.4,6.3Hz,2H),2.19(t,J＝7.3Hz,2H),1.50(dt,J＝15.0,7.5Hz,4H),1.39(s,9H),1.25–1.17(m,2H).
步骤4:UBI-1069f
化合物UBI-1169e(300mg,0.87mmol),B(A1)(226mg,0.87mmol),HATU(660mg,1.7mmol),DIPEA(561mg,4.35mmol)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应加水(20mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(50mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝97/3)得到黄色油状粗产品UBI-1069f(300mg，收率71％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.02(s,1H),9.76(s,1H),7.81(m,1H),7.53–7.44(m,2H),5.15(m,1H),4.35(m,2H),3.65–3.57(m,6H),3.38(d,J＝4.8Hz,2H),3.16(m,6H),2.02(m,2H),1.62(m,2H),1.49(m,4H),1.38(d,9H).LCMS：[M-100] +＝486
步骤5:UBI-1069
化合物UBI-1069f(300mg,0.51mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(30mL)和甲醇(3mL)加入Pd/C(300mg)，氢气环境下反应2小时。硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物UBI-1069(200mg，收率70％)。LCMS:[M+H] +＝560
化合物UBI-1080(NH 2-13b-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000071
步骤1:UBI-1180c
化合物UBI-1180a(1.5g,11.5mmol)溶于乙腈(30mL)，加入无水碳酸钾(3.17g,23mmol)和UBI-1180b(2.73g,11.5mmol)，80℃反应过夜。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝95/5)得到黄色油状粗产品UBI-1180c(1.4g,收率42％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.12(q,2H),3.72–3.60(m,4H),3.47(s,1H),3.38(t,2H),2.86–2.76(m,2H),2.65–2.59(m,2H),2.29(t,2H),1.69–1.58(m,2H),1.56–1.47(m,2H),1.34(m,4H),1.25(t,3H).
步骤2:UBI-1180d
化合物UBI-1180c(1.4g,4.8mmol)溶于四氢呋喃(30mL)，加入NaHCO 3(1.2g,14.4mmol)和Boc 2O(1.15g,5.28mmol)，室温反应2小时。反应加水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1180d(2g，收率100％)。
步骤3:UBI-1180
化合物UBI-1180d(1.85g,4.8mmol)溶于EtOH(20mL)和水(10mL)，加入氢氧化钠(1.15g,28.8mmol)，室温反应过夜。反应液浓缩，加入饱和食盐水(15mL)，用***萃取(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。有机相合并无水硫酸钠干燥过滤浓缩，粗产物硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝94/6)得到无色油状产品UBI-1180(1.4g，收率82％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.96(s,1H),3.58(t,J＝4.8Hz,2H),3.51(t,J＝5.9Hz,2H),3.38(t,J＝4.9Hz,2H),3.28(t,J＝5.9Hz,2H),3.15(t,J＝7.4Hz,2H),2.18(t,J＝7.4Hz,2H),1.53–1.41(m,4H),1.39(s,9H),1.24(m,4H).
步骤4:UBI-1180f
化合物UBI-1180e(500mg,1.39mmol),B(A1)(362mg,1.39mmol),HATU(633mg,1.67mmol),DIPEA(3mL)溶于DMF(8mL)室温反应过夜。反应加水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝93/7)得到黄色油状产物UBI-1180f(500mg，收率60％)。LCMS：[M+H] +＝600
步骤5:UBI-1180
化合物UBI-1180f(500mg,0.83mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(30mL)和甲醇(3mL)加入Pd/C(300mg)，氢气环境下反应2小时。硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色油状产物过反相柱纯化(水:甲醇＝97:3)得到黄色固体产物UBI-1180(270mg，收率57％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.77(s,1H),7.82(m,1H),7.53–7.46(m,2H),5.15(m,1H),4.42–4.27(m,2H),3.56(m,3H),3.50(m,3H),3.19–3.11(m,4H),2.95(m,4H),2.37(m,2H),1.61(m,2H),1.46(m,4H),1.38(m,13H),1.26(m,5H),1.14–1.09(m,3H),1.07–0.98(m,2H).LCMS：[M+H] +＝574
化合物UBI-1204(N 3-14b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000072
步骤1:UBI-1204c
化合物UBI-1204a(5.986g,69.52mmol),UBI-1204b(19.05g,66.05mmol)以及K 2CO 3(11.53g,83.43mmol)溶于乙腈(200mL)，该反应在室温下反应3小时。反应液过滤，滤液浓缩后通过硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝0％～10％)得到无色透明油状产物UBI-1204c(4.10g,收率26％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.76-3.71(m,2H),3.70-3.59(m,8H),3.49-3.41(m,2H),2.86-2.79(m,4H),2.14-1.97(m,2H)。
步骤2:UBI-1204d
化合物UBI-1204c(4.100g,18.76mmol),(Boc) 2O(8.200g,37.57mmol)以及NaHCO 3(3.156g,37.57mmol)溶解于四氢呋喃(50mL)，室温下反应16小时。过滤，滤液浓缩后通过柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝0％～95％)得到无色透明油状产物UBI-1204d(4.85g,收率71％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.76-3.72(m,2H),3.69-3.64(m,2H),3.64-3.56(m,6H),3.49-3.39(m,6H),1.93(s,1H),1.47(s,9H)。
步骤3:UBI-1204e
化合物UBI-1097d(1.00g,3.14mmol)溶解于四氢呋喃(10mL)冷却到0℃，加入NaH(0.251g,6.28mmol)，反应十分钟。然后加入UBI-1204e(0.787g,4.71mmol)，反应室温下反应16小时。过滤，滤液浓缩后加水(50mL)，然后乙酸乙酯萃取(50mL*3)。有机相合并后用水、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥减压浓缩后通过硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝0％～3％)得到无色透明油状产物UBI-1204f(705mg,收率53％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.22(q,J＝7.2Hz,2H),4.15(s,2H),3.77-3.72(m,2H),3.72-3.67(m,2H),3.67-3.63(m,2H),3.63-3.55(m,4H),3.48–3.39(m,6H),1.47(s,9H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤4:UBI-1204g
化合物UBI-1204f(698mg,1.21mmol),LiOH.H2O(253mg,6.04mmol)溶解于甲醇(3mL)、四氢呋喃(9mL)和水(3mL)组成的混合溶剂中，室温下搅拌过夜。反应液加水浓缩后用乙酸乙酯萃取。水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5，然后冻干。固体加入甲醇(2mL)和二氯甲烷(20mL)组成的混合溶剂，搅拌10分钟后过滤，滤液浓缩后得到无色油状产物UBI-1204g(650mg,收率90％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ3.86(s,2H),3.58-3.55(m,2H),3.54-3.46(m,8H),3.43-3.38(m,4H),3.36-3.32(m,2H),1.40(s,9H)。LCMS:[M+Na] +＝399.3.
步骤5:UBI-1204h
化合物UBI-1204g(120mg,0.32mmol),B(A1)(82.6mg,0.32mmol),HATU(181.8mg,0.478mmol)溶解于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。加水(10mL)淬灭后,用乙酸乙酯萃取(8mL*3)。合并有机相后用无水硫酸钠干燥后浓缩得粗产物。该粗产品通过反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％，70％收集)得无色油状产物UBI-1204h(90mg,收率45.7％)。LCMS:[M+H-100] +＝518.3.
步骤6:UBI-1204
在氢气环境下，化合物UBI-1204h(90mg,0.15mmol),Pd/C(30mg)溶解于甲醇(1mL)以及二氯甲烷(10mL)，反应液室温反应1小时.该反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％,15％收集)得黄色油状产物UBI-1204(80mg,收率93％)。LCMS:[M+H] +＝592.7。
化合物UBI-1205(N 3-15b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000073
步骤1:UBI-1205c
化合物UBI-1205a(1.050g,3.298mmol)溶解于四氢呋喃(10mL)，加入NaH(26.4mg,0.660mmol)后室温下反应10分钟。然后加入UBI-1205b(0.426g,4.95mmol)，反应室温下反应过夜。反应液加入甲醇，然后浓缩，通过硅胶柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝0％～95％)得到无色透明油状产物UBI-1205c(710mg,收率51％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.76(t,J＝6.4Hz,2H),3.69(s,3H),3.66-3.53(m,10H),3.48-3.37(m,6H),2.61(t,J＝6.4Hz,2H),1.47(s,9H).
步骤2:UBI-1205d
化合物UBI-1205c(700mg,1.21mmol)和LiOH.H 2O(254mg,6.06mmol)溶解于由甲醇(3mL)、四氢呋喃(9mL)和水(3mL)组成的混合溶剂中，反应室温下搅拌过夜。反应液加入水，浓缩后用乙酸乙酯萃取。水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5，然后冻干。固体倒入甲醇(2mL)和二氯甲烷(20mL)的混合溶剂中，搅拌10分钟，过滤，滤液浓缩后得到无色透明油状产物UBI-1205d(650mg,收率87％).
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.98(s,1H),3.59(t,J＝6.4Hz,2H),3.55-3.44(m,10H),3.43-3.38(m,4H),3.35-3.32(m,2H),2.43(t,J＝6.4Hz,2H),1.40(s,9H).LCMS:[M+Na] +＝413.3.
步骤3:UBI-1205e
化合物UBI-1205d(150mg,0.38mmol),B(A1)(100mg,0.38mmol),HATU(0.22g,0.58mmol)溶解于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。加水(10mL)淬灭后,用乙酸乙酯萃取(8mL*3)。合并有机相后用无水硫酸钠干燥后浓缩得粗产物。该粗产品通过反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％，70％收集)得无色油状产物UBI-1205e(95mg,收率40％)。
LCMS:[M+H-100] +＝532.3.
步骤4:UBI-1205
在氢气环境下，化合物UBI-1205e(95mg,0.15mmol),Pd/C(29mg)溶解于甲醇(1mL)以及二氯甲烷(10mL)，反应液室温反应1小时.该反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％,15％收集)得黄色油状产物UBI-1205(70mg,收率77％)。LCMS:[M+H] +＝606.3.
化合物UBI-1206(N 3-17b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000074
步骤1:UBI-1206c
化合物UBI-1206a(5.000g,38.42mmol),UBI-1206b(11.69g,38.42mmol),K 2CO 3(6.371g,46.10mmol)加入乙腈(200mL)中室温下搅拌过夜反应。过滤，滤液浓缩后通过硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝0％～6％)得到无色透明油状产物UBI-1206c(4.54g,收率43％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.76-3.70(m,2H),3.68-3.60(m,12H),3.40-3.37(m,2H),2.87-2.80(m,4H),2.18(s,2H)。LCMS:[M+H] +＝263.2.
步骤2:UBI-1206d
化合物UBI-1206c(4.524g,17.25mmol),(Boc) 2O(7.528g,34.49mmol),NaHCO 3(2.898g,34.49mmol),加入四氢呋喃(50mL)中,室温下搅拌过夜反应。反应液过滤，滤液浓缩后通过硅胶柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝0％～95％)得到无色透明油状产物UBI-1206d(6.04g,收率90％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.77-3.70(m,2H),3.70-3.54(m,12H),3.47(s,4H),3.37(t,J＝5.2Hz,2H),2.10(s,1H),1.46(s,9H)。
步骤3:UBI-1206e
化合物UBI-1206d(2.90g,8.00mmol)溶解于四氢呋喃(20mL)中，冰浴下加入NaH(640mg,16.0mmol)，反应十分钟。然后加入UBI-1206e(2.004g,12.00mol)，室温下反应16小时。过滤，滤液浓缩，加入(50mL)后用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。有机相合并后用水(50mL*3)、饱和食盐水(50mL*3)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后通过硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝0％～10％)得到黄色油状产物UBI-1206f(910mg,25％)。LCMS:[M+H-100] +＝349.3.
步骤4:UBI-1206g
化合物UBI-1206f(900mg,1.41mmol)和LiOH.H 2O(295mg,7.02mmol)溶解于甲醇(3mL)、水(3mL)和四氢呋喃(9mL)组成的混合溶剂中室温下搅拌过夜反应。反应液加入水，浓缩后用乙酸乙酯萃取。水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5，再用乙酸乙酯萃取。有机相合并后用水和饱和食盐水洗，再用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到无色油状产物UBI-1206g(740mg,收率83％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.42(s,1H),4.01(s,2H),3.64-3.56(m,4H),3.55-3.43(m,10H),3.39(d,J＝4.2Hz,2H),3.37-3.33(m,4H),1.39(s,9H).LCMS:[M+H-100] +＝321.2.
步骤5:UBI-1206h
化合物UBI-1206g(120mg,0.28mmol),B(A1)(74mg,0.28mmol),HATU(163mg,0.43mmol)溶解于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。加水(10mL)淬灭后,用乙酸乙酯萃取(8mL*3)。合并有机相后用无水硫酸钠干燥后浓缩得粗产物。该粗产品通过反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％，70％收集)得无色油状产物UBI-1206g(90mg,收率51％)。LCMS:[M+H-100] +＝562.3.
步骤6:UBI-1206
在氢气环境下，化合物UBI-1206g(90mg,0.15mmol),Pd/C(29mg)溶解于甲醇(1mL)以及二氯甲烷(10mL)，反应液室温反应1小时.该反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％,15％收集)得黄色油状产物UBI-1206(65mg,收率75％)。LCMS:[M+H] +＝636.5.
UBI-1209(N 3-18b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000075
步骤1:UBI-1209c
化合物UBI-1209a(2.10g,5.79mmol)溶解于四氢呋喃THF(10mL)中，加入NaH(46mg,1.2mmol)，室温下反应10分钟。然后加入UBI-1209b(0.748g,8.69mmol)，反应室温下搅拌过夜。反应淬灭，浓缩后通过硅胶柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝5％～95％)得到黄色油状产物UBI-1209c(645mg,收率25％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.81-3.72(m,2H),3.71-3.66(m,3H),3.65-3.54(m,12H),3.46(d,J＝5.2Hz,4H),3.38-3.34(m,2H),2.68-2.53(m,2H),1.58-1.57(m,2H),1.45(s,9H).
步骤2:UBI-1209d
化合物UBI-1209c(600mg,0.936mmol)和LiOH.H 2O(0.196g,4.68mmol)溶解于甲醇(3mL)、水(3mL)和四氢呋喃(9mL)中，室温下搅拌过夜反应。反应液加入水，浓缩后用乙酸乙酯萃取。水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5后用乙酸乙酯萃取。有机相合并后用水、饱和食盐水洗，再用无水硫酸钠干燥。浓缩后得到黄色油状产物UBI-1209d(305mg,收率47％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.19(s,1H),3.65-3.55(m,2.9Hz,4H),3.55-3.43(m,12H),3.42-3.37(m,2H),3.36-3.32(m,4H),2.43(t,J＝6.4Hz,2H),1.39(s,9H).LCMS:[M+H-100] +＝335.3.
步骤3:UBI-1209e
化合物UBI-1209d(120mg,0.27mmol),B(A1)(71.6mg,0.27mmol),HATU(157mg,0.41mmol)溶解于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。加水(10mL)淬灭后,用乙酸乙酯萃取(8mL*3)。合并有机相后用无水硫酸钠干燥后浓缩得粗产物。该粗产品通过反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％，70％收集)得无色油状产物UBI-1209e(90mg,收率52.7％)。LCMS:[M+H-100] +＝676.3
步骤4:UBI-1209
在氢气环境下，化合物UBI-1209e(90mg,0.15mmol),Pd/C(29mg)溶解于甲醇(1mL)以及二氯甲烷(10mL)，反应液室温反应1小时.该反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％,15％收集)得黄色油状产物UBI-1209(60mg,收率70％)。LCMS:[M+H] +＝650.3
化合物UBI-1215(NH 2-17b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000076
步骤1:UBI-1215c
化合物UBI-1215a(2.0g,9.17mmol),UBI-1215b(1.39g,9.17mmol)and TEA(1.39g,13.76mmol)和甲苯(25mL)，80℃反应18小时。反应液浓缩后用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％然后MeOH/DCM＝0％～10％)得到无色油状目标化合物UBI-1215(500mg收率18％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.17(s,2H),3.89–3.83(m,2H),3.69(ddd,J＝4.7,1.9,0.7Hz,4H),3.66(d,J＝1.3Hz,4H),3.63(dtt,J＝4.6,2.9,1.4Hz,4H),3.61–3.58(m,2H),3.53(dd,J＝6.0,4.2Hz,2H),3.39(t,J＝5.0Hz,2H).
步骤2:UBI-1215d
化合物UBI-1215c(400mg,1.32mmol),KOH(371mg,6.62mmol)溶于水(10mL)，100℃回流2小时。反应液冷却后直接用于下一步。LCMS:[M+H] +＝321.1.
步骤3:UBI-1215e
在化合物UBI-1215d(400mg,1.25mmol)的水溶液中加入二碳酸二叔丁酯(545mg,2.5mmol)和二氧六环(4mL)，室温反应2小时。反应液浓缩，加水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL*3)。水相浓缩得到粗品，粗品溶于MeOH/DCM＝10/1(30mL)，过滤，滤液浓缩后得到目标化合物UBI-1215e(300mg).LCMS:[M+H-100] +＝335.3.
步骤4:UBI-1215f
化合物UBI-1215e(300mg,0.71mmol)，B(A1)(184mg,0.71mmol),HATU(406.9mg,1.07mmol)溶于DMF (10mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。反应液直接反相柱分离(MeOH/H 2O＝5％～95％45分钟,60％收集)得到白色固体目标化合物UBI-1215f(150mg，收率32％)。LCMS:[M+H-100] +＝562.3.
步骤5:UBI-1215
化合物UBI-1215f(150mg,0.08mmol),Pd/C(20mg)溶于DCM(5mL)，在氢气环境下反应1小时。反应完成后过滤，滤液浓缩得到目标化合物UBI-1215(100mg,69％yield)粗品直接用于下一步。LCMS:[M+H] +＝636.3。
化合物UBI-1171(N 3-8b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000077
步骤1:UBI-1171c
化合物UBI-1171a(3g,23mmol)溶于乙腈(50mL)后,加入UBI-1171b(3.9g,23mmol)以及K 2CO 3(4.8g,35mmol),然后室温反应16小时。反应液过滤后滤液浓缩并通过硅胶柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝1/1～甲醇/二氯甲烷＝1/10)得到无色油状目标产物UBI-1171c(2.6g,收率57％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.73(s,3H),3.70–3.57(m,4H),3.48(dd,J＝5.6,3.0Hz,2H),3.39(td,J＝5.1,1.7Hz,2H),2.83(td,J＝5.0,2.6Hz,2H),1.79(s,1H).
步骤2:UBI-1171d
化合物UBI-1171c(2.6g,13mmol)溶于四氢呋喃(50mL)后,加入(Boc) 2O(4.2g,19mmol)以及NaHCO 3(2.2g,26mmol)，然后室温反应16小时。该反应液加水(10mL)并用乙酸乙酯(15mL*2)萃取。有机相用Na 2SO 4干燥后浓缩得到浅黄色油状粗产物UBI-1171d(3.6g,收率93％)。
步骤3:UBI-1171e
化合物UBI-1171d(3.6g,12mmol)溶于甲醇(10mL),四氢呋喃(30mL)以及水(10mL)中，然后加入LiOH.H 2O(751mg,18mmol),该反应室温反应16小时。反应液用乙酸乙酯(20mL)洗一次,水相通过3N HCl调节pH＝6,再用乙酸乙酯(25mL*2)萃取,有机相浓缩后得到无色油状粗产物UBI-1171e(2.9g,收率85％)。该粗产物直接用于下一步反应。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ10.52(s,1H),4.06(d,J＝14.6Hz,2H),3.62(dt,J＝15.8,5.1Hz,4H),3.55–3.42(m,2H),3.35(q,J＝4.5Hz,2H),1.45(d,J＝15.0Hz,9H).
步骤4:UBI-1171
在0℃条件下，化合物UBI-1171e(350mg,1.2mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(8mL)后加入HATU(924mg,2.4mmol)以及DIEA(313mg,2.4mmol)，然后再加入B(A1)(315mg,1.2mmol)。该体系室温反应16h。反应液加水(10mL)淬灭后，乙酸乙酯(10mL*2)萃取。有机相用Na 2SO 4干燥后浓缩得到粗产物。该粗产物通过反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％45分钟,80％收集)得到黄色固体目标产物UBI-1171(350mg,收率54％)。LCMS[M+H] +＝530.0
化合物UBI-1217(NH 2-17b-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000078
步骤1:UBI-1217b
将UBI-1217a(8.0g，34mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，加入对甲基苯磺酰氯(14.7g，7.7mmol)，在25℃下加入三乙胺(10.2g，101mmol)，搅拌过夜。反应完成后向反应液加水(10ml)并用二氯甲烷(10ml*3)萃取。有机相用Na 2SO 4干燥并浓缩，得到粗品，用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得到无色油状物(18g，收率99％)。LC-MS:(M+H) +＝547.1
步骤2:UBI-1217c
将UBI-1217b(18g，33mmol)溶于DMF(100ml)中，加入NaN 3(6.43g，99mmol)，在85℃下搅拌过夜。反应完成后将反应液过滤，真空浓缩得到粗品，用FFC(二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化得到无色油状物(8.7g，收率92％)。
步骤3:UBI-1217d
将化合物UBI-1217c(8.7g，30mmol)和三苯基膦(7.9g，30mmol)混合后溶解在ET2O/THF/1M HCl(100ml)中，在25℃搅拌12h，反应完成后向反应物中加入水，用乙酸乙酯(50ml*2)萃取后，有机层经无水硫酸镁干燥浓缩物，粗品通过硅胶柱层析(EtOAc/PE＝1/1)纯化，得到油状物(3.9g，收率45％)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ3.69–3.62(m,14H),3.52–3.40(m,2H),3.39–3.37(m,2H),2.87–2.80(m,2H),1.40(s,2H)。
步骤4:UBI-1217e
化合物UBI-1217d(2g,7.6mmol)、溴乙酸乙酯(1.27g,7.6mmol)以及碳酸钾(2.06g,14.9mmol)混合后溶于乙腈(20mL)中，80℃下反应18小时，反应完成后过滤，滤液减压浓缩，色谱硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到无色油状物UBI-1217e(1.4g,收率30％)。
步骤5:UBI-1217f
将化合物UBI-1217e(1.3g,3.7mmol)、二叔丁基二碳酸酯(2.3g,10.7mmol)以及碳酸氢钠(318mg,3.79mmol)依次加入到二氧六环(30mL)中，室温反应2小时。反应完成后将反应液倒入10mL水中，用乙酸乙酯提取(10mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压浓缩，得到化合物UBI-1217f(1.4g,收率83％)。
步骤6:UBI-1217g
将化合物UBI-1217f(150mg,0.335mmol)，氢氧化钠(26.8mg,0.669mmol)依次加入到水(5mL)中，室温反应12小时。反应完成后浓缩，水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5。然后用二氯甲烷萃取(10ml*3)，合并有机层经无水Na2SO4干燥，浓缩得到所需化合物UBI-1217g.(131mg,收率93％)。
步骤7:UBI-1217h
将化合物UBI-1217g(101mg,0.24mmol),B(A1)(75mg,0.29mmol),HATU(137mg,0.36mmol)以及DIPEA(0.5mL)加入到无水DMF(5mL)中，室温反应16小时，反应完成后浓缩移，粗品用硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到白色固体化合物UBI-1217h(81mg,收率51％)。LC-MS:[M-100+H] +＝562.3
步骤8:UBI-1217
将化合物UBI-1217h(81mg,0.12mmol),10％的钯碳(20mg)加入到甲醇/二氯甲烷(1mL/10mL)混合溶剂中,在氢气环境下室温反应16小时。过滤后浓缩滤液得到粗品，用冷的***洗涤(10mL*3)，干燥后得到目标化合物白色固体UBI-1217((63mg,收率82％)。LCMS:(M-100+H) +＝536.3
化合物连接基团c-配体B(A1)的合成方法
化合物UBI-1167(NH 2-12c-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000079
步骤1:UBI-1167c
化合物UBI-1167a(5g,4.8mmol)的DCM(20mL)溶液冷却到0℃，加入NaOH(50％aq.20mL)，接着加入四丁基硫酸氢铵(12.5g,16.9mmol)和化合物UBI-1167b(4.8g,20.3mmol)，40℃反应16小时。反应液冷却后收集上层有机相，水相用二氯甲烷萃取(10mL*3)。将所有有机相合并后用无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝10％)得到无色油状目标化合物UBI-1167c(2.25g)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.39–7.15(m,11H),4.80(s,1H),3.88(d,J＝13.3Hz,2H),3.71–3.43(m,8H),3.31–3.20(m,2H),3.17–3.02(m,1H),1.77(p,J＝12.8,9.5Hz,2H),1.43(s,9H).LC-MS:[M+H] +＝429.1
步骤2:UBI-1167d
化合物UBI-1167c(1.44g,3.36mmol)的DCM(20mL)溶液冷却到0℃，加入NaOH(50％aq.20mL)，接着加入四丁基硫酸氢铵(12.28g,6.72mmol)和丙烯酸叔丁酯(861mg,6.72mmol)，然后在40℃反应16小时。反应液用二氯甲烷萃取(10mL*3)，合并有机相后用无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝10％)得到无色油状目标化合物UBI-1167d(480mg)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.40–7.25(m,8H),7.22–7.14(m,2H),6.75(t,J＝5.8Hz,1H),3.70(s,4H),3.61–3.41(m,6H),3.30(d,J＝1.4Hz,2H),3.03–2.95(m,2H),2.89(q,J＝6.0Hz,1H),2.42(t,J＝6.0Hz,2H),1.61(p,J＝6.5Hz,2H),1.38(d,J＝6.5Hz,18H).
步骤3:UBI-1167e
化合物UBI-1167d(2.45g,4.4mmol)溶于EtOH(20mL)和H 2O(5mL)，然后加入KOH(2.46g,44mmol)，60℃反应3小时。反应完成后浓缩后加入水，稀盐酸(1M)酸化至pH＝6。然后用二氯甲烷萃取(20mL*3)，合并有机相后用无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩得到目标化合物UBI-1167e(2g)。LC-MS:[M+H] +＝500.7
步骤4:UBI-1167f
化合物UBI-1167e(1g,2mmol),B(A1)(518mg,2mmol),HATU(1.52g,4mmol)溶于DIPEA(1mL)和DMF(10mL)，室温反应16小时。反应液直接反相柱分离(MeOH/H2O＝5％～95％,48％收集)得到白色固体目标化合物UBI-1167f(440mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.01(d,J＝4.4Hz,1H),9.87(d,J＝8.4Hz,1H),7.94–7.79(m,1H),7.53–7.43(m,2H),7.40–7.11(m,10H),6.75(t,J＝5.5Hz,1H),5.20–5.01(m,1H),4.41–4.19(m,2H),3.74–3.62(m,7H),3.56–3.51(m,2H),3.47–3.41(m,1H),3.32–3.27(m,1H),3.02–2.87(m,4H),2.70–2.54(m,4H),2.27–2.12(m,1H),1.98–1.83(m,1H),1.64–1.54(m,2H),1.37(s,9H).LC-MS:[M+H] +＝742.6。
步骤5:UBI-1167
化合物UBI-1167f(100mg,0.135mmol)溶于HCl/dioxane(10mL)，室温反应16小时。反应液浓缩后得到目标化合物粗品UBI-1167g(100mg)直接用于下一步。LC-MS:(M+H) +＝641.7
化合物UBI-1050(NH 2-5c-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000080
步骤1:UBI-1050b
化合物UBI-1050a(2g,5.4mmol),B(A1)(1.4g,5.4mmol),HATU(4.1g,10.8mmol)溶于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。反应液直接反相柱分离(MeOH/H 2O＝5％～95％40分钟,65％收集)得到白色固体目标化合物UBI-1050b(2g)。LCMS:(M+H) +＝608.3.
步骤2:UBI-1050
化合物UBI-1050b(1g,1.64mmol),Pd/C(200mg)溶于DCM(200mL)和THF(100mL)，在氢气环境下反应48小时。反应完成后将反应液浓缩，加入300mL MeOH/DCM＝10:1室温搅拌3小时后过滤，滤液浓缩得到目标化合物粗品。粗品用反相柱层析(MeOH/H 2O＝5％～95％45％收集)分离纯化得到白色固体目标化合物UBI-1050(200mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.06(s,1H),7.81–7.73(m,1H),7.57–7.44(m,3H),7.21–7.10(m,1H),5.26–5.12(m,1H),4.44–4.27(m,2H),4.13(d,J＝29.1Hz,1H),2.97–2.88(m,1H),2.83–2.72(m,2H),2.65–2.56(m,1H),2.36–2.27(m,1H),2.10–2.01(m,1H),1.64(s,4H),1.39(s,9H).LCMS:(M+H) +＝474.2.
化合物UBI-1051(NH 2-6c-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000081
步骤1:UBI-1051b
化合物UBI-1051a(2g,5.26mmol),B(A1)(1.36g,5.26mmol),HATU(4g,10.52mmol)溶于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。反应液直接反相柱分离(MeOH/H 2O＝5％～95％40分钟,65％收集)得到白色固体目标化合物UBI-1051b(1.8g)。LCMS:(M+H) +＝622.3.
步骤2:UBI-1051
化合物UBI-1051b(1g,1.64mmol),Pd/C(200mg)溶于DCM(200mL)和THF(100mL)，在氢气环境下反应48小时。反应完成后将反应液浓缩，加入300mL MeOH/DCM＝10:1溶剂室温搅拌3小时后过滤，滤液浓缩得到目标化合物粗品。粗品用甲醇洗(3mL*3)，过滤得到白色固体目标化合物UBI-1051(800mg)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.03(s,1H),10.03(s,1H),7.96–7.71(m,3H),7.60–7.43(m,2H),7.08(dd,J＝7.7,4.1Hz,1H),5.16(dt,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.34(q,J＝18.4,17.9Hz,2H),4.15–4.05(m,1H),3.03–2.88(m,1H),2.78(t,J＝7.5Hz,2H),2.67–2.56(m,1H),2.37–2.21(m,1H),2.09–1.99(m,1H),1.79–1.54(m,4H),1.39(s,11H).LCMS:(M+H) +＝488.4.
化合物UBI-1040(NH 2-7c-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000082
步骤1:UBI-1040c
化合物UBI-1040a(5g,18.5mmol),UBI-1040b(2.4g,18.5mmol)溶于四氢呋喃(100mL)后，在冰浴中冷却至0℃，然后添加催化量的NaH。该反应在室温下反应18小时。反应液加水(30mL)，乙酸乙酯萃取(40mL*3)，合并有机相后将其浓缩并通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1/5)得到无色油状产物UBI-1040c(3.6g,收率48％)。
步骤2:UBI-1040d
化合物UBI-1040c(800mg,2.0mmol),PpH 3(1.3g,5.0mmol)以及DIAD(1.0g,5.0mmol)溶于干燥的四氢呋喃(15mL)，并在冰浴中冷却至0℃，然后慢慢加入DPPA(1.4g,5.0mmol)。反应液通过微波加热至60℃反应2小时。将反应液浓缩后通过硅胶柱层析(二氯甲烷/石油醚＝1/5)得到无色油状产物UBI-1040d(300mg,收率36％)。
步骤3:UBI-1040e
化合物UBI-1040e(860mg,2.0mmol)溶于HCl的二氧六环溶液(15mL)，室温下反应2小时。将反应液浓缩后得到浅粉色油状产物UBI-1040e(750mg,收率100％)，该粗产物直接用于下一步反应。
步骤4:UBI-1040f
化合物UBI-1140e(750mg,2.0mmol),B(A1)(528mg,2.0mmol),HATU(929mg,2.4mmol)溶于DMF(10mL)以及DIPEA(0.5mL)，该反应在室温下反应18小时。反应液直接通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝1/3)得到无色油状产物UBI-1040f(750mg,收率60％)。
步骤5:UBI-1040
化合物UBI-1040f(750mg,1.2mmol)以及PpH 3(387mg,1.5mmol)溶于四氢呋喃(30mL)，室温下反应18小时后加水(10mL)，继续反应1小时。反应液加水(10mL),乙酸乙酯萃取(20mL*3)。有机相合并后浓缩并通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％45分钟，40％收集)得到白色固体产物UBI-1040(54mg,收率8％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.90(s,1H),7.87(dd,J＝7.7,4.5Hz,2H),7.63–7.06(m,11H),5.13(dt,J＝13.4,4.3Hz,1H),4.34(d,J＝5.9Hz,2H),3.85–3.48(m,6H),3.30(s,2H),3.05–2.78(m,3H),2.67(d,J＝4.6Hz,2H),2.29–1.81(m,6H).
化合物UBI-1054(N 3-12c-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000083
步骤1:UBI-1054b
化合物UBI-1054a(10g,37mmol)溶于二氯***(50mL),然后加入N(Bu) 4HSO 4(12.5g,37mmol)。反应通过冰浴冷却至0℃后，慢慢滴加50％NaOH(100mL)至反应中，滴加时间大于15分钟。最后反应40℃条件下反应18小时。反应液加水(50mL),二氯甲烷萃取(80mL*3)，有机相合并后浓缩并通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1/5)的得到浅黄色产物UBI-1054b(8.8g,收率63％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.43–7.14(m,10H),3.86(d,J＝13.4Hz,2H),3.81–3.75(m,3H),3.72–3.52(m,11H),3.29–3.00(m,1H),2.89(s,1H).
步骤2:UBI-1054c
化合物UBI-1054b(7.5g,20mmol)溶于DMF(50mL)后，加入NaN 3(1.6g,24mmol)。该反应加热至80℃反应4小时。反应液中加入冰水(30mL)，再通过二氯甲烷萃取(50mL*3)。有机相合并后，无水硫酸钠干燥，然后浓缩得到黄色油状粗产物。该粗产物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1/4)得到浅黄色油状产物UBI-1054c(10g,100％收率)。LCMS[M+1]+＝384.0
步骤3:UBI-1054e
化合物UBI-1054c(4.0g,10.42mmol)溶于ButOH(150mL)，然后在0℃条件下加入ButOK(1.4g,12.50mmol)以及UBI-1054d(2.0g,10.42mmol)。室温下反应18小时。反应液浓缩后加水(50mL)，通过乙酸乙酯萃取(80mL*3)。有机相合并后，无水硫酸钠干燥，将其浓缩后得到粗产品。该粗产物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1/4)得到白色固体产物UBI-1054e(520mg,收率10％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.43–7.15(m,10H),3.96–3.89(m,2H),3.81(s,4H),3.77–3.54(m,10H),3.35(t,J＝5.1Hz,2H),3.13(p,J＝6.0Hz,1H),1.48(s,9H).
步骤4:UBI-1054f
化合物UBI-1054e(520mg,1.04mmol)溶于EtOH(10mL)和水(1mL)后，在0℃条下加入KOH(234mg,4.18mmol),在室温下反应1小时。反应液浓缩得到粗产品。该粗产品加水(10mL),通过3N HCl酸化至pH＝3，再冻干得到800mg粗产物。该粗产物通过甲醇/二氯甲烷＝1/10(20mL)洗脱后并浓缩得到白色固体产物UBI-1054f(500mg,收率100％)。
步骤5:UBI-1054
化合物UBI-1054f(250mg,0.57mmol),B(A1)(146mg,0.57mmol),HATU(258mg,0.68mmol)溶于DMF(3mL)以及DIPEA(0.5mL)，在室温下反应18小时。反应液直接通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％，80％收集)得到黄色固体产物UBI-1054(50mg,收率13％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.00(s,1H),9.63(d,J＝5.2Hz,1H),7.77(ddd,J＝7.6,3.8,1.3Hz,1H),7.62–7.46(m,2H),7.38(d,J＝8.1Hz,4H),7.28(t,J＝7.4Hz,4H),7.23–7.12(m,2H),5.12(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),4.41–4.24(m,2H),4.09(d,J＝1.5Hz,2H),3.89–3.45(m,16H),3.08–2.82(m,2H),2.58(s,1H),2.31–2.11(m,1H),2.03–1.90(m,1H).
步骤6:将化合物UBI-1054还原，方法同化合物UBI-1040的制备。
化合物连接基团(Linker)d-配体(Ligand)B(A1)的合成方法
化合物UBI-1105(N 3-13d-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000084
步骤1:UBI-1105b
化合物UBI-1105a(1g,4.6mmol)溶于无水DMF(20mL)降至0℃加入咪唑(1.56g,23mmol)和TBSCl(829mg,5.5mmol)，0℃反应1小时，然后室温反应过夜。反应液浓缩硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝20/1,Rf＝0.5)得到白色固体产物UBI-1105b(500mg,收率32％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.73(d,4H),3.58–3.60(d,2H),3.51–3.53(d,2H),1.35(s,9H),0.82(s,9H),0.0(s,6H).LCMS:[M+H] +＝332
步骤2:UBI-1105c
化合物UBI-1105b(800mg,2.4mmol)溶于无水二氯甲烷(30mL)，0℃再加入三乙胺(48mg,4.8mmol)和MsCl(304mg,2.64mmol)0℃反应1小时，然后室温反应过夜。反应加水(50mL)淬灭，然后用二氯甲烷(50mL*3)萃取。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到白色固体产物UBI-1105c(1g，收率100％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.27(s,2H),3.65(s,2H),3.62(s,4H),2.97(s,3H),1.38(s,9H),0.82(s,9H),0.0(s,6H).LCMS:[M+H] +＝310
步骤3:UBI-1105e
化合物UBI-1105d(445mg 3.4mmol)溶于无水DMF(10mL)，0℃分批加入60％NaH(272mg,6.8mmol)，0℃反应1小时，然后加入UBI-1105c(1g crude,1.7mmol)溶，反应过夜。反应加水(20mL)淬灭，然后用二氯甲烷(50mL*3)萃取，有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝94/6,Rf＝0.7)得到黄色油状产物UBI-1105e(450mg，收率32％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ4.62(s,2H),3.98(s,2H),3.61(m,2H),3.58(m,2H),3.54–3.44(m,6H),3.39(m,2H),1.36(s,9H).
步骤4:UBI-1105g
化合物UBI-1105e(400mg,1.21mmol),UBI-1105f(104mg,1.21mmol)溶于无水DMF(5mL)0℃分批加入60％NaH(5mg,0.12mmol)。然后反应4小时，反应加水(20mL)淬灭然后用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝94/6,Rf＝0.7)得到黄色油状产物UBI-1105g(300mg，收率59％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ4.62(s,2H),3.98(s,2H),3.64(m,3H),3.62–3.56(m,5H),3.56–3.43(m,6H),3.39(d,J＝5.0Hz,2H),3.24–3.20(m,1H),2.54(t,J＝6.2Hz,2H),1.36(d,J＝1.1Hz,9H).
步骤5:UBI-1105h
化合物UBI-1105g(260mg,0.62mmol)溶于甲醇(5mL)加入2M NaOH(1.6mL,3.1mmol).室温反应过夜.反应液浓缩，加入饱和食盐水(15mL)，***萃取(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。有机相合并无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1105h(120mg，收率46％)直接用于下一步反应。
步骤6:UBI-1105
化合物UBI-1105h(120mg,0.3mmol),B(A1)(93mg,0.36mmol),HATU(137mg,0.36mmol),DIPEA(0.3mL)溶于DMF(3mL)室温反应过夜.反应加水(20mL)淬灭用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝90/10)和反相(water/甲醇＝20/80)得到白色固体粗 产品UBI-1105(12mg，收率6％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.01(s,1H),9.86(s,1H),7.80(m,1H),7.54–7.45(m,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.39–4.29(m,2H),3.75(m,2H),3.65–3.56(m,8H),3.55–3.47(m,8H),3.37(m,2H),2.97–2.88(m,1H),2.63(m,2H),2.36–2.27(m,2H),2.02(m,1H),1.34(d,J＝15.4Hz,9H).LCMS:[M+H] +＝644
化合物UBI-1104(N 3-12d-COOH)的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000085
步骤1:UBI-1104c
化合物UBI-1104a(700mg,2.1mmol)溶于无水DMF(5mL)，0℃分批加入60％NaH(252mg,6.3mmol)，0℃反应1小时。化合物UBI-1104b(324mg,2.1mmol)0℃加入，然后反应过夜。反应加水(20mL)淬灭，然后用二氯甲烷萃取(50mL*3)，有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝90/10)得到黄色油状粗产品UBI-1104c(300mg，收率35％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ4.63(s,2H),3.98(s,2H),3.72–3.46(m,11H),3.39(m,1H),2.90(m,3H),2.59–2.53(m,2H),1.36(s,9H).LCMS：[M+H] +＝403.
步骤2:UBI-1104
化合物UBI-1104c(200mg,0.49mmol)溶于甲醇(5mL)加入2M NaOH(1.24mL,2.48mmol).室温反应过夜.反应液浓缩一下，加入饱和食盐水(15mL)用***萃取2次(20mL*2).水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3).有机相合并无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到黄色油状粗产品UBI-1104(80mg，收率42％).
步骤3:将化合物UBI-1104还原，方法同化合物UBI-1040的制备。
化合物连接基团e-配体B(A1)/B(B1)的合成方法
化合物UBI-1143(NH 2-12e-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000086
步骤1:UBI-1143b
化合物UBI-1143a(10g,37.8mmol)溶于DMF(50mL)加入叠氮钠(2.95g,45.4mmol),60℃反应过夜。加水淬灭用乙酸乙酯(80mL*3)萃取，有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩。粗产品硅胶柱层析分离(石油醚/ 乙酸乙酯＝9/1)得到无色油状产物UBI-1143b(8.6g，收率100％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ3.82(m,2H),3.61–3.52(m,1H),3.09(m,2H),1.87(m,2H),1.62–1.53(m,2H),1.46(s,9H).LCMS：[M-56] +＝171
步骤2:UBI-1143c
化合物UBI-1143b(8.6g,38mmol)在冰浴下加入4M盐酸二氧六环溶液(47.5mL).室温反应2小时。反应液浓缩得到黄色固体粗产物UBI-1143c(6.3g，收率100％)直接用于下一步。
步骤3:UBI-1143e
化合物UBI-1143c(5.6g,34.4mmol),UBI-1143d(8.8g,49mmol),三乙胺(11mL,78mmol)溶于乙腈(100mL)，然后60℃反应过夜。反应加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝70/30,Rf＝0.3)得到黄色油状产物UBI-1143e(3.1g，收率33％)。
步骤4:UBI-1143f
化合物UBI-1143e(3.1g,11.5mmol)在冰浴下加入4M盐酸二氧六环溶液(35mL)，室温反应2小时。反应液浓缩得到黄色油状粗产物UBI-1143f(2.36g，收率100％)直接用于下一步。
步骤5:UBI-1143h
化合物UBI-1143f(1.52g,7.3mmol)溶于乙腈(60mL)，加入DIPEA(6mL,36.8mmol)UBI-1143g(1.54g,7.3mmol),室温反应过夜。反应加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝40/60,Rf＝0.7)得到黄色固体UBI-1143h(400mg，收率18％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ4.06(q,J＝7.1Hz,2H),3.56(m,1H),3.28(m,1H),2.98(m,2H),2.89(t,J＝7.5Hz,2H),2.73(m,2H),2.55(m,2H),2.34(t,J＝7.1Hz,2H),2.18(m,2H),1.85(m,2H),1.68–1.49(m,6H),1.31–1.23(m,3H),1.19(t,J＝7.1Hz,3H).LCMS：[M+H] +＝298
步骤6:UBI-1143i
化合物UBI-1143h(400mg,1.34mmol)溶于四氢呋喃，(10mL)加入NaHCO 3(338mg,1.61mmol)和Boc 2O(352mg,1.61mmol)，室温反应过夜。反应加水(20mL)淬灭用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝90/10)得到黄色油状产物UBI-1143i(400mg，收率75％)。LCMS：[M+H] +＝398
步骤7:UBI-1143j
化合物UBI-1143i(400mg,1mmol)溶于四氢呋喃(10mL)加入2M NaOH(5mL,10mmol)，室温反应过夜。加入饱和食盐水(15mL)用***萃取2次(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。有机相合并无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到无色油状粗产品UBI-1143j(380mg，收率100％)。LCMS：[MS+H] +＝370
步骤8:UBI-1143k
化合物UBI-1143j(370mg,1mmol),B(A1)(260mg,1mmol),HATU(570mg,1.5mmol),DIPEA(1mL)溶于DMF(5mL)，反应室温过夜。反应加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝93/7)得到无色油状产品UBI-1143k(360mg，收率59％)。LCMS：[M+H] +＝611 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.03(s,1H),9.78(s,1H),7.82(dd,J＝7.1,1.9Hz,1H),7.50(m,2H),5.16(m,1H),4.44–4.27(m,2H),3.61(m,1H),3.48(m,1H),3.17(m,4H),2.98–2.87(m,1H),2.78–2.57(m,2H),2.43–2.22(m,4H),2.21–2.00(m,3H),1.81(m,2H),1.47(m,13H),1.28–1.22(m,2H).
步骤9:UBI-1143
化合物UBI-1143k(360mg,0.58mmol)溶于二氯甲烷(20mL)和甲醇(2mL)加入Pd/C(250mg)，氢气环境下反应2小时。硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色固体产物UBI-1143(300mg，收率88％)直接用于用于下一步。LCMS：[M+H]+＝585
化合物UBI-1159(NH 2-12e-B(B1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000087
步骤1:UBI-1159c
化合物UBI-1159a(2g,10mmol),UBI-1159b(2mL,12mmol),无水碳酸钾(11g,80mmol)溶于乙腈(40mL)，85℃反应过夜。反应冷却至室温倒入水中然后用乙酸乙酯萃取(40mL*2)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到白色固体产物UBI-1159c(1.9g,收率58％)。LCMS：[M+H] +＝329
步骤2:UBI-1159d
化合物UBI-1159c(1.9g,5.8mmol),2N NaOH(8.7mL,17.4mmol)溶于乙醇(30mL)70℃反应过夜。反应冷却至室温倒入水中然后用乙酸乙酯萃取(40mL*2)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到白色固体产物UBI-1159d(1.3g，收率78％)。LCMS：[M+H] +＝287
步骤3:UBI-1159
化合物UBI-1159d(1g,3.5mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)冷却到0℃分批加入60％NaH(276mg,6.9mmol),0℃反应半小时。然后把化合物UBI-1159e(324mg,2.3mmol)溶于无水四氢呋喃(2mL)加入上述反应液中，反应室温过夜。反应倒入水中然后用乙酸乙酯萃取(40mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6,浓缩粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝90/10)得到白色固体产品(290mg,收率36％). 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ6.93(d,1H),3.89(s,2H),3.44(m,3H),3.36(m,2H),3.10(m,2H),2.64(m,2H),1.85–1.75(m,2H),1.53(m,6H),1.38(s,9H),1.29(m,2H).LCMS：[M+H] +＝345
步骤4:UBI-1159g
化合物UBI-1159f(190mg,0.55mmol),B(B1)(237mg,0.55mmol),HATU(250mg,0.66mmol),DIPEA(1mL)溶于DMF(5mL)，室温反应3小时。反应倒入水中(30ml)，然后用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。合并的有机相用1M HCl，饱和NaHCO 3,有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1,Rf＝0.3)得到白色固体产品UBI-1159g(180mg,收率43％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.68(s,1H),7.36(s,4H),5.35(t,1H),4.73(s,1H),4.67–4.58(m,1H),4.53(s,1H),4.45(d,1H),4.00(s,1H),3.65(m,5H),3.03(m,3H),2.52(m,2H),2.30(s,3H),2.27–2.20(m,1H),2.09(m,1H),2.01(m,5H),1.86(m,3H),1.59(m,3H),1.41(m,5H),1.25(s,9H),1.01(s,9H),0.97–0.84(m,5H).LCMS：[M+H] +＝757
步骤5:UBI-1159
化合物UBI-1159g(50mg,0.066mmol)在冰浴下加入4M盐酸二氧六环溶液(1mL),室温反应2小时.反应液浓缩得到黄色油状粗产物UBI-1159h(50mg,收率100％)。LCMS：[M+H] +＝657
化合物UBI-1124(NH 2-12e-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000088
步骤1:UBI-1124c
化合物UBI-1124a(5.6g,34.4mmol),UBI-1124b(8.8g,49mmol),三乙胺(11mL,78mmol)溶于乙腈(100mL)60℃反应过夜.反应冷却至室温倒入水中然后用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝70/30,Rf＝0.3)得到黄色油状产物UBI-1124c(3.1g，收率33％)。
步骤2:UBI-1124d
化合物UBI-1124c(3.1g,11.5mmol)在冰浴下加入4M盐酸二氧六环溶液(35mL)室温反应2小时。反应液浓缩得到黄色油状产物UBI-1124d(2.36g，收率100％)。
步骤3:UBI-1124f
化合物UBI-1124d(1.5g,8.8mmol)溶于乙腈(150mL)加入无水碳酸钾(3.64g,26.4mmol)和UBI-1124e(1.7g,10.2mmol)80℃反应过夜。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝97/3,Rf＝0.2)得到黄色油状产物UBI-1124f(260mg，收率11％)。LCMS：[M+H] +＝254
步骤4:UBI-1124g
化合物UBI-1124f(800mg,3.15mmol)溶于水(5mL)，加入氢氧化钾(530mg,9.47mmol)100℃反应3小时。反应完全后反应冷却至室温加入Boc 2O(1.37g,6.3mmol)和四氢呋喃(5mL)，室温反应2小时。加入饱和食盐水(15mL)用***萃取2次(20mL*2).水相用1M HCl酸化至pH＝5,再用乙酸乙酯、丙酮混合溶剂萃取(40mL*3)，有机层合并无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到无色油状产物UBI-1124g(1.1g，收率100％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.58(s,1H),3.61–3.52(m,6H),3.35(m,4H),3.24(m,2H),3.06(m,2H),2.11(m,2H),1.77(m,2H),1.41(d,J＝5.0Hz,9H).LCMS：[MS+H] +＝372.2
步骤5:UBI-1124h
化合物UBI-1124g(500mg,1.34mmol),B(A1)(347mg,1.34mmol),HATU(763mg,2mmol),DIPEA(1mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应加水(50mL)淬灭用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝93/7)得到黄色固体产物UBI-1124h(370mg，收率45％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.03(s,1H),9.85(m,1H),7.78(m,1H),7.62-7.45(m,2H),5.16(m,1H),4.45-4.30(m,2H),4.16(m,3H),3.69-3.56(m,4H),3.41(m,2H),3.30(m,2H),3.15(m,2H),3.04-2.84(m,2H),2.69–2.55(m,2H),2.33(m,2H),2.16(m,1H),2.08–1.89(m,3H),1.39(s,9H).LCMS：[M+H] +＝613
步骤6:UBI-1124
化合物UBI-1124h(370mg,0.6mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(10mL)和甲醇(2mL)，加入Pd/C(300mg)氢气环境下反应2小时。硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色固体产物UBI-1124(370mg，收率100％)直接用于下一步。LCMS：[M+H] +＝587.1
化合物UBI-1144(NH 2-12e-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000089
步骤1:UBI-1144c
化合物UBI-1144a(1.5g,6.8mmol)溶于乙腈(30mL)加入无水碳酸钾(2.82g,20.4mmol)和UBI-1144b(1.14g,6.8mmol)，80℃反应过夜。反应冷却至室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝95/5)得到黄色油状产物UBI-1144c(1.1g，收率51％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.22(s,1H),3.54(m,4H),3.42(m,1H),3.30(m,2H),2.81(m,2H),2.57(m,2H),2.23(m,2H),1.91(m,2H),1.71(m,2H),1.45(s,9H).LCMS：[M+H] +＝314
步骤2:UBI-1144d
化合物UBI-1144c(1.1g,3.5mmol)在冰浴下加入4M盐酸二氧六环溶液(5mL)室温反应2小时。反应液浓缩得到黄色油状产物UBI-1144d(874mg，收率100％)直接用于下一步。
步骤3:UBI-1144f
化合物UBI-1144d(1.5g,6.8mmol)溶于乙腈(30mL)加入无水碳酸钾(2.82g,20.4mmol)和UBI-1144e(1.14g,6.8mmol)，室温反应过夜。过滤滤液浓缩硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝95/5)得到黄色油状产物UBI-1144f(670mg，收率33％)。LCMS：[M+H] +＝300
步骤4:UBI-1144g
化合物UBI-1144f(670mg,2.2mmol)溶于四氢呋喃(10mL)加入碳酸氢钠(554mg,6.6mmol)和Boc 2O(590mg,2.7mmol)。室温反应3小时.反应加水(20mL)淬灭用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝90/10)得到黄色油状产物UBI-1144g(800mg，收率91％)。LCMS：[M+H] +＝400
步骤5:UBI-1144h
化合物UBI-1144g(800mg,2mmol)溶于乙醇(10mL)加入2M NaOH(4mL,8mmol)室温反应过夜。反应液浓缩一下，加入饱和食盐水(15mL)用***萃取(20mL*2)。水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3).有机相合并无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到无色油状粗产品UBI-1144h(650mg，收率87％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.62(s,1H),3.87(m,3H),3.71–3.64(m,2H),3.50(m,2H),3.36(m,2H),3.17(m,2H),3.04(m,2H),2.89(m,2H),2.01(m,2H),1.74(m,2H),1.37(d,J＝19.6Hz,9H).LCMS：[MS+H] +＝372.2
步骤6:UBI-1144i
化合物UBI-1144h(300mg,0.8mmol),B(A1)(251mg,0.96mmol),HATU(456mg,1.2mmol),DIPEA(516mg)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应加水(50mL)淬灭用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝93/7)得到黄色固体产物UBI-1144i(250mg，收率51％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.04(s,1H),9.88(s,1H),9.26(s,1H),7.88-7.72(m,1H),7.59-7.46(m,2H),5.23-5.13(m,1H),4.43-4.27(m,2H),4.08-3.98(m,3H),3.80-3.39(m,8H),3.15-2.88(m,3H),2.70-2.58(m,2H),2.35-2.18(m,2H),2.08(m,2H),1.90(m,1H),1.68(m,1H),1.35(s,9H).LCMS:[M+H] +＝613
步骤7:UBI-1144
化合物UBI-1144i(250mg,0.4mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(10mL)和甲醇(2mL)加入Pd/C(150mg)氢气环境下反应2小时。硅藻土过滤，滤液浓缩得到黄色固体产物UBI-1144(210mg，收率89％)直接用于下一步反应。LCMS:[M+H] +＝587.1
化合物UBI-1113(NH 2-11e-B(A1))的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000090
步骤1:UBI-1113c
化合物UBI-1113a(1g,3.7mmol)溶于乙腈(30mL)加入无水碳酸钾(1.5g,11.1mmol)和UBI-1113b(770mg,3.7mmol).室温反应72小时.室温过滤，滤液浓缩硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝95/5)得到黄色油状产物UBI-1113c(600mg，收率57％)。LCMS:[M+H] +＝284
步骤2:UBI-1113d
化合物UBI-1113c(600mg,2.1mmol)溶于四氢呋喃(10mL)加入碳酸氢钠(530mg,6.3mmol)和Boc 2O(545mg,2.5mmol)，室温反应过夜。反应加水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝90/10)得到黄色油状产物UBI-1113d(600mg，收率74％)。LCMS:[M+H] +＝384
步骤3:UBI-1113e
化合物UBI-1113d(400mg,1mmol)溶于四氢呋喃(10mL)加入2M NaOH(5mL,10mmol)，室温反应过夜。反应液浓缩一下，加入饱和食盐水(15mL)用***萃取(20mL*2).水相用1M HCl酸化至pH＝6,再用乙酸乙酯萃取(40mL*3)。有机相合并无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到无色油状粗产品UBI-1113e(530mg，收率100％)直接用于下一步反应. 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.00(s,1H),3.54(m,2H),3.17(m,3H),2.49–2.41(m,2H),2.18(m,2H),1.91(m,5H),1.76–1.63(m,3H),1.40(s,9H).LCMS:[M+H] +＝356.2
步骤4:UBI-1113f
化合物UBI-1113e(530mg,1.5mmol),B(A1)(460mg,1.8mmol),HATU(855mg,2.2mmol),DIPEA(1.2mL)溶于DMF(5mL)室温反应过夜。反应加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。有机层合并无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝93/7)得到白色固体产物UBI-1113f(350mg，收率39％)。LCMS:[M+H] +＝597
步骤5:UBI-1113
化合物UBI-1113f(350mg,0.58mmol)溶于混合溶剂二氯甲烷(10mL)和甲醇(2mL)，加入Pd/C(250mg)，氢气环境下反应2小时。硅藻土过滤，滤液浓缩得到白色固体产物UBI-1113(300mg，收率91％)直接用于下一步反应。LCMS:[M+H] +＝571
化合物连接基团f-配体B(A1)的合成方法
化合物UBI-1157(NH 2-11f-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000091
步骤1:UBI-1157c
化合物UBI-1157a(700mg,4.48mmol),UBI-1157b(1.74g,8.98mmol)溶于三乙胺(452mg,4.48mmol)和甲苯(10mL)，80℃反应18小时。反应液浓缩，硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％，然后MeOH/DCM＝0％～10％)得到无色油状目标化合物UBI-1157c(1g)。LC-MS:[M+H] +＝238.5
步骤2:UBI-1157d
化合物UBI-1157c(600mg,2.5mmol),KOH(708mg,12.5mmol)溶于水(3mL)，100℃回流1小时。反应液冷却后用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，水相直接用于下一步反应。LC-MS:[M+H] +＝257.5
步骤3:UBI-1157e
在化合物UBI-1157d(600mg,2.35mmol)的水溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.01g,4.7mmol)和二氧六环(20mL)，室温反应2小时。反应液浓缩，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(10mL*3)。水相浓缩得到粗品，溶于MeOH/DCM＝10/1(30mL)，过滤，滤液浓缩后得到目标化合物UBI-1157e(600mg)。LC-MS:[M+H] +＝357.2
步骤4:UBI-1157f
化合物UBI-1157e(600mg,1.69mmol),B(A1)(437mg,1.69mmol),HATU(1.28g,3.38mmol)
溶于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。反应液直接反相柱分离(MeOH/H 2O＝5％～95％45分钟,40％收集)得到白色固体目标化合物UBI-1157f(400mg)。LC-MS:[M+H] +＝597.5
步骤5:UBI-1157
化合物UBI-1157f(100mg,0.17mmol),Pd/C(20mg)溶于MeOH(1mL)和DCM(10mL)，在氢气环境下反应16小时。反应完成后过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用无水***洗(3mL*3)，过滤后得到白色固体目标化合物UBI-1157(50mg)。LCMS:(M+H) +＝543.3
化合物UBI-1139(NH 2-11f-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000092
步骤1:UBI-1139c
化合物UBI-1157a(1.5g,10mmol),UBI-1139b(4.4g,29mmol)以及TEA(980mg,10mmol)溶于甲苯(25mL)，在80℃下反应18小时。反应液浓缩后通过硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50％～100％20分钟,甲醇/二氯甲烷＝0％～10％30分钟)得到浅黄色油状粗产物UBI-1139c(500mg，收率22％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.03(s,2H),3.92(s,1H),3.79(dd,J＝5.8,4.2Hz,2H),3.68(dd,J＝6.2,4.5Hz,2H),3.43(d,J＝6.4Hz,2H),2.87(s,2H),2.76(d,J＝9.7Hz,2H),2.65(s,2H),2.45(s,1H),2.32–2.15(m,1H),1.92(s,1H).
步骤2:UBI-1139d
化合物UBI-1139c(200mg,0.8mmol),KOH(141mg,2.5mmol)溶于水(2mL)，该反应在100℃下反应3小 时。反应液直接用于下一步反应。
步骤3:UBI-1139e
化合物UBI-1139d(200mg,0.8mmol)以及(Boc) 2O(340mg,1.6mmol)溶于二氧六环(3mL)以及水(2mL)，室温下反应2小时。反应液浓缩后用乙酸乙酯洗(10mL*3)。水相通过(1M)HCl酸化至pH＝6，冻干得到粗产品。该粗产品用甲醇/二氯甲烷＝1/10(30mL)浸泡后过滤，母液旋干后得到无色油状粗产品UBI-1139e(300mg，收率100％)。
步骤4:UBI-1139f
化合物UBI-1139e(300mg,0.84mmol),B(A1)(196mg,0.76mmol),HATU(639mg,1.68mmol)溶于DMF(10mL)以及DIPEA(0.3mL)，室温下反应16小时。反应液直接通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％45分钟，40％收集)得到浅黄色油状产物UBI-1139f(100mg，收率20％)。
步骤5:UBI-1039
在氢气环境下下化合物UBI-1139f(50mg,0.08mmol),Pd/C(5mg)溶于甲醇(0.5mL)以及二氯甲烷(5mL)，室温下反应1小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后得到黄色油状粗产物UBI-1139(50mg，收率100％)。
化合物UB-1163(NH 2-11f-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000093
步骤1:UBI-1163c
化合物UBI-1163a(1.40g,8.92mmol),化合物BUI-1163b(3.032g,10.70mmol)和K 2CO 3(2.456g,17.83mmol)溶于CH 3CN(40mL)后加热至80℃反应16小时。反应完成后减压浓缩，加水(50mL)，然后用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。合并有机相依次用水(50mL*3)、饱和食盐水(50mL*3)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝0％～10％)，得到黄色油状目标产物UBI-1163c(1.32g,收率47％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.29-4.94(m,1H),4.15-3.89(m,1H),3.58(t,J＝5.6Hz,2H),3.52(t,J＝5.2Hz,2H),3.36-3.25(m,2H),2.93-2.79(m,1H),2.79-2.67(m,2H),2.67-2.56(m,2H),2.30-2.13(m,1H),1.96-1.79(m,1H),1.45(s,9H).
步骤2:UBI-1163d
化合物UBI-1163c(1.300g,4.342mmol)溶于HCl的二氧六环溶液(40mL)，25℃下反应1小时。将反应液浓缩后得到黄色色油状产物UBI-1163d(1.05g,收率100％)，该粗产物直接用于下一步反应。
步骤3:UBI-1163e
化合物UBI-1163d(1.05g,4.34mmol)，2-溴乙酸乙酯(1.09g,6.51mmol)和K 2CO 3(1.8g,13.03mmol)溶于CH 3CN(50mL)后加热至80℃反应16小时。反应完成后浓缩，加水(50mL)，然后用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。合并有机相依次用水(50mL*3)、饱和食盐水(50mL*3)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，减压旋蒸浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝0％～10％)，得到黄色油状目标产物UBI-1163e(810mg,收率62％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.19(q,J＝7.2Hz,2H),4.10＝3.96(m,1H),3.67-3.52(m,4H),3.51-3.41(m,2H), 3.01-2.54(m,8H),2.29-2.14(m,2H),1.95-1.81(m,1H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤4:UBI-1163f
化合物UBI-1163e(790mg,2.22mmol),二碳酸二叔丁酯(1.208g,5.537mmol)和NaHCO 3(465mg,5.54mmol)溶于THF(30mL)，25℃反应1小时。反应完成后浓缩，浓加入水(50mL)，然后用乙酸乙酯萃取(50mL*3)，合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝0％～20％)，得到无色透明油状目标产物UBI-1163f(900mg，收率83％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.25-4.13(m,2H),4.10-3.91(m,3H),3.64-3.40(m,6H),2.97-2.41(m,6H),2.27-2.12(m,1H),1.95-1.79(m,1H),1.47(s,4H),1.42(s,5H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤5:UBI-1163g
化合物UBI-11163f(900mg,2.34mmol),NaOH(280mg,7.00mmol)溶于水(3mL),THF(9mL)和MeOH(3mL)，25℃反应16小时。反应完成后浓缩，加入水(20mL)，然后用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。水相用稀盐酸(1M)酸化至pH＝5，然后二氯甲烷萃取(50mL*3)。合并有机相后依次用水(50mL*3)、饱和食盐水(50mL*3)洗涤，再用无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到无色透明油状液体为目标化合物UBI-1163g(490mg,收率59％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ4.09-3.97(m,1H),3.85(d,J＝8.8Hz,2H),3.50-3.42(m,4H),3.36-3.31(m,2H),2.80-2.69(m,1H),2.69-2.61(m,2H),2.58-2.54(m,2H),2.37-2.31(m,1H),2.19-2.07(m,1H),1.78-1.62(m,1H),1.49-1.25(m,9H).
步骤6:UBI-1163h
化合物UBI-1098e(455mg,1.27mmol),B(A1)(330mg,1.27mmol),HATU(968mg,2.55mmol)，DIPEA(823mg，6.36mmol)溶于DMF(4mL)和，25℃反应2小时。反应完成后加水(30mL)，再用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。合并有机相后依次用水(50mL*3)、饱和食盐水(50mL*3)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，再减压旋蒸浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝0％～20％)，得到黄色固体为目标化合物UBI-1163h(384mg,收率50％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.04(s,1H),9.87(s,1H),7.80(s,1H),7.62-7.44(m,2H),5.27-5.09(m,1H),4.45-4.26(m,2H),4.05(d,J＝11.6Hz,2H),3.71-3.52(m,4H),3.44(d,J＝5.4Hz,2H),3.32(s,7H),3.17(d,J＝3.6Hz,1H),2.99-2.89(m,1H),2.66-2.58(m,1H),2.27(d,J＝13.2Hz,1H),2.09-2.00(m,1H),1.91(s,1H),1.38(d,J＝26.4Hz,9H).LCMS[M+H] +:599.1.
步骤7:UBI-1163
化合物UBI-1163h(173mg,0.290mmol),Pd/C(156mg)溶于MeOH(3mL)和DCM(30mL)，在25℃氢气环境中反应3小时。反应完成后过滤，并用甲醇(4mL)和二氯甲烷(40mL)洗涤，滤液减压旋蒸浓缩得到黄色固体为目标化合物UBI-11163(140mg,收率82％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.03(s,1H),9.94(s,1H),8.34(s,2H),7.89-7.74(m,1H),7.65-7.40(m,2H),5.26-5.08(m,1H),4.51-4.24(m,2H),4.14-4.03(m,2H),3.98-3.80(m,1H),3.80-3.50(m,5H),3.50-3.36(m,4H),3.17(s,2H),2.99-2.89(m,1H),2.67-2.56(m,3H),2.49-2.43(m,2H),2.31-2.22(m,1H),2.09-2.02(m,1H),1.38(d,J＝27.6Hz,9H).LCMS[M+H] +:573.1.
化合物连接基团g-配体B(A1)的合成方法
化合物UBI-1216(NH 2-9g-B(A1))的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000094
步骤1:UBI-1216b
将甲基-1H-1,2,4-***-3-甲酸酯(200mg，1.57mmol)和N-Boc-乙醇胺(304mg，1.89mmol)加入THF(10ml)中,向上述溶液加入三苯基膦(495mg，1.89mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(381mg，1.89mmol)，室温下搅拌过夜。反应液用反相柱(甲醇/H2O＝5％～95％，45mins)纯化混合物，60％收集，得到白色固体(230mg，收率54％)。LC-MS:(M+H) +＝271.1
步骤2:UBI-1216c
在0℃下，向UBI-1216b(1g，33.3mmol)的THF(10ml)溶液中加入四氢化铝锂(1.9g，50mmol)30min。搅拌反应3小时，加水(1ml)和10％NaOH溶液(2ml)，过滤，然后Na 2SO 4干燥滤液。减压浓缩得到产品(8.01g，收率51％)。LC-MS:(M+H) +＝243.1
步骤3:UBI-1216d
向UBI-1216c(1.08g，4mmol)和三乙胺(0.68g，7mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)中滴加甲基磺酰氯(0.76g，7mmol)，在室温下搅拌过夜。反应完成后将混合物加水(10ml)并用二氯甲烷(10ml*3)萃取。有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到白色固体(1.15g，粗品)。LC-MS:(M+H) +＝321.1
步骤4:UBI-1216e
将UBI-1216d(1.7g，5mmol)与NaN 3(520mg，8mmol)混合后溶于DMF(10ml)中，室温搅拌过夜，反应完成后用H2O(300ml)稀释反应并使用***(2x150ml)萃取。用H2O(3x100ml)和盐水(1x100ml)洗涤有机相，经MgSO4干燥，过滤，并在低压下去除溶剂，得到淡黄色油(1.1g，产率79％。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.61(d,J＝8.5Hz,1H),4.94(s,1H),4.51(dd,J＝17.7,12.2Hz,2H),4.43(s,2H),3.70(dd,J＝10.7,5.6Hz,2H),1.44(s,9H).LC-MS:(M+H) +＝268.3
步骤5:UBI-1216f
将UBI-1216e(500mg，1.416mmol)溶于于盐酸/二氧六环(4N)(10ml)中的溶液中，室温下搅拌过夜。反应完成后，除去溶剂，直接用于下一步反应。(430mg，粗品)。LC-MS:(M+H) +＝168.3
步骤6:UBI-1216g
将化合物UBI-1075a UBI-1216f(500mg,2.99mmol)和丙烯酸甲酯(257mg,2.99mmol)溶解在乙腈(20mL)，80℃反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取(5mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得到粗品用色谱硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到无色油状化合物(170mg,收率:23％)。LC-MS：(M+H) +＝254.1
步骤7:UBI-1216h
化合物UBI-1216g(650mg,2.57mmol)，二叔丁基二碳酸酯(840mg，3.85mmol)以及碳酸氢钠(318mg,3.79 mmol)依次加入到二氧六环(30mL)中，室温反应2小时。反应完成后将反应液倒入10mL水中，用乙酸乙酯提取(10mL*3)。合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压浓缩，得到化合物UBI-1216h(625mg,收率69％).LC-MS:(M+H) +＝354.1
步骤8:UBI-1216i
将化合物UBI-1216h(500mg,1.416mmol)，氢氧化钠水溶液(4N，10mL)依次加入到水(50mL)中，30℃反应12小时。反应完成后浓缩，水相用盐酸(1M)酸化至pH＝5。然后用二氯甲烷萃取(10ml*3)，合并有机层经无水Na 2SO 4干燥，浓缩得到化合物UBI-1216i.(1.2g,收率83％)。LC-MS:(M+H) +＝340.1
步骤9:UBI-1216j
将化合物UBI-1216i(20mg,0.059mmol),B(A1)(15mg,0.059mmol),HATU(33mg,0.088mmol)以及DIPEA(0.5mL)加入到无水DMF(5mL)中，室温反应16小时，反应完成后浓缩移，粗品用硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到白色固体化合物UBI-1216j(16mg,收率49％)。LC-MS(M+H) +＝581.1
步骤10:UBI-1216
将化合物UBI-1216j(100mg,0.17mmol),10％的钯碳(20mg)加入到甲醇/二氯甲烷(1mL/10mL)混合溶剂中,在氢气环境下室温反应16小时。过滤后浓缩滤液得到粗品，用冷的***洗涤(10mL*3)，干燥后得到目标化合物白色固体UBI-1095(83mg,收率88％).LCMS:(M-100+H) +＝455.3
化合物UB-180844e的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000095
步骤1:UB-180844b
化合物UB-180844a(600mg,1.4mmol)溶于乙腈(20mL)加入炔丙胺(400mg,7.2mmol),碳酸钾(386mg,2.8mmol).80℃反应18小时.反应液冷却过滤浓缩直接投到下一步反应.LCMS[M+H] +＝301
步骤2:UB-180844c
化合物UB-180844b(459mg,1.53mmol)溶于四氢呋喃(10mL)加入二碳酸二叔丁酯(1.5g,6.88mmol),碳酸氢钠(257mg,3.06mmol).室温反应3小时.反应完成后滤液浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝0％～30％)得到黄色透明油状目标产物UB-180844c(340mg,收率60％).LCMS[M+H] +＝401
步骤3:UB-180844d
化合物UB-180844c(346mg,0.86mmol),碘取代的来那度胺(150mg,0.55mmol),Pd(PPh 3) 2Cl 2(35mg,0.05mmol),碘化亚酮(21mg,0.11mmol),三乙胺(55mg,0.55mmol)溶于无水DMF(6mL)80℃反应3小时氮气保护.反应完成后滤液浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(乙酸乙酯-二氯甲烷/甲醇＝100％—0％～10％)得到棕色油状目标产物UB-180844d(200mg,收率42％).LCMS[M-100] +＝543
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.84(d,J＝7.6Hz,1H),7.71–7.64(m,1H),7.63–7.51(m,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,1H),5.24(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),4.50(d,J＝16.8Hz,1H),4.37(m,2H),3.70–3.60(m,14H),3.55(m,2H),3.42–3.36(m,2H),2.91(m,1H),2.30–2.20(m,1H),2.03(d,J＝14.4Hz,1H),1.49(s,9H),1.31(m,2H),0.88(t,J＝6.2Hz,2H).
步骤4:UB-180844e
化合物UB-180844d(240mg,0.37mmol)溶于四氢呋喃(20mL)加入三苯基膦(262mg,1mmol).室温反应3小时.加水(0.3mL)室温反应18小时.反应完成后浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)得到黄色油状粗产物UB-180844e(60mg).LCMS[M+H] +＝617
化合物UB-180847b(N 3-13b-A1)的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000096
步骤1:UB-180847b
化合物UB-180847a(100mg,2.3mmol)和Pd/C(10mg)溶于甲醇(1mL)以及二氯甲烷(10mL)，然后在氢气条件下室温反应1小时。将反应液过滤后，滤液浓缩得到粗产物，该粗产物通过反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％，在20％收集)得到黄色油状目标产物UB180847b(80mg,收率84％)。
化合物UBI-1235(NH 2-16e-A1)的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000097
步骤1:UBI-1235b
将UBI-1235a(1.0g,7.0mmol,1.0equiv)溶解到甲苯(20mL)中，在0℃下，加入1.0M二异丁基氢化铝的己烷溶液(20mL,20mmol,2.9equiv)。将溶液加热到80℃，反应12小时.加入甲醇(20mL)，酒石酸钠(20mL)和氯仿(100mL)。搅拌30分钟。分离氯仿，并对水溶液提取5次。混合物经干燥(Na2SO4)、过滤和浓缩，得到白色固体UBI-1235b粗品980mg。LC-MS:[M+H] +＝146.3
步骤2:UBI-1235c
将UBI-1235b(0.28g，1.93mmol)加入DMF(10ml)中，并加入UBI-1235b(581mg，1.93mmol)和K 2CO 3(748mg，5.42mmol)。上述溶液在80℃下搅拌过夜。TLC显示反应完成，将反应混合物加入到DCM/MeOH的混合溶剂中(V/V＝20ml)，搅拌10分钟，过滤，真空浓缩得到粗品，用色谱柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)纯化得到产物UBI-1235C(625mg,收率：89％)为黄色油状物。LC-MS:[M+H] +＝367.5
步骤3:UBI-1235d
将化合物UBI-1235C(500mg，1.366mmol)溶于DCM(10ml)中，加入TsCl(313mg，1.639mmol)及三乙胺(275mg，2.732mmol)，室温下搅拌过夜。反应完成后将反应液过滤，并浓缩，用色谱柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到产物UBI-1235d(510mg，收率：72％)无色油状物。LC-MS:[M+H] +＝521.6
步骤4:UBI-1235e
将UBI-1235d(450mg，0.865mmol)和3-氨基丙酸甲酯(200mg，1.30mmol)加入到MeCN(30ml)中，加入碳酸钾(239mg，1.731mmol)。在室温下搅拌过夜。反应完成后过滤，并浓缩，用色谱柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到产物UBI-1235e(190mg，收率：49％)为无色油状物。LC-MS:[M+H] +＝452.5
步骤5:UBI-1235f
将UBI-1235e(100mg，0.323mmol)加入四氢呋喃/水(30ml)中，再加入二碳酸二叔丁酯(105mg，0.484mmol)和碳酸氢钠(54mg，0.643mmol)。室温下搅拌过夜。反应完成后过滤并浓缩得滤液到粗品，用色谱柱层析分离(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到产物UBI-1235f(99mg，收率：81％)黄色油状物。LC-MS:[M+H] +＝552.3
步骤6:UBI-1235g
将UBI-1235f(100mg，0.181mmol)溶解在4N的NaOH(10ml)中的，室温下搅拌过夜，反应完成后，将混合物调至pH＝5，加入盐水和乙酸乙酯，分层。分三次用乙酸乙酯萃取水层。合并的提取物用硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到产品UBI-1235g(56mg)。
步骤7:UBI-1235h
将UBI-1235g(50mg，0.093mmol)和来那度胺(24mg，0.093mmol)加入到DMF(10ml)中，加入HATU(53mg，0.139mmol)和DIEA(36mg，0.279mmol)。室温搅拌过夜。反应完成后浓缩得到粗品，粗品经Pre-TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化得到产物UBI-1235h(65mg，收率：90％)白色固体。LC-MS:[M+H] +＝779.1
步骤8:UBI-1235i
将UBI-1235h(85mg，0.109mmol)加入到THF(10ml)中，加入钯碳(10％，10mg)，在H 2环境下室温下搅拌过夜。反应完成后，将反应液加入DCM/MeOH混合物中(v/v＝20ml)，搅拌10min，过滤，浓缩得到粗品，经Pre-TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化得到白色固体UBI-1235i(56mg，收率80％)。LC-MS:[M+H] +＝645.3
制备表A中所示的L1-B偶联物，其中，在偶联物结构式中用H替换结构E3连接酶配体B后，即为相应的连接体L1分子。
表A
Figure PCTCN2019110225-appb-000098
Figure PCTCN2019110225-appb-000099
Figure PCTCN2019110225-appb-000100
Figure PCTCN2019110225-appb-000101
实施例2 TED的制备
(2.1)TED分子的制备操作1：
Figure PCTCN2019110225-appb-000102
式中，
Figure PCTCN2019110225-appb-000103
代表L2。
称取化合物UBI-1005(20mg,0.042mmol)溶解在DMF(2mL)中，冰水浴下依次加入NH 2-连接基团-B(A1)(1eq.),HATU(2eq.32mg,0.084mmol)和DIEA(3eq.16.2mg,0.126mmol)。加料完成后，物料体系在氮气保护下室温搅拌反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取三次(5mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品后以展开剂极性(DCM/MeOH＝10/1)进行薄层色谱硅胶板分离制备得到相应的TED化合物。
通过类似方式，制得表B1中所示的A-L1-B偶联物。
表B1
Figure PCTCN2019110225-appb-000104
Figure PCTCN2019110225-appb-000105
Figure PCTCN2019110225-appb-000106
Figure PCTCN2019110225-appb-000107
(2.2)TED分子的制备操作2：
Figure PCTCN2019110225-appb-000108
称取化合物UBI-1005(20mg,0.042mmol)溶解在DMF(2mL)中，冰水浴下依次加入NH 2-连接基团-B(B1)(1eq.),HATU(2eq.32mg,0.084mmol)and DIEA(3eq.16.2mg,0.126mmol)。加料完成后，物料体系在氮气保护下室温搅拌反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取三次(5mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品后以展开剂极性(DCM/MeOH＝10/1)进行薄层色谱硅胶板分离制备得到相应的TED化合物。
通过类似方式，制得表B2中所示的A-L1-B偶联物。
表B2
Figure PCTCN2019110225-appb-000109
Figure PCTCN2019110225-appb-000110
Figure PCTCN2019110225-appb-000111
Figure PCTCN2019110225-appb-000112
(2.3)TED分子的制备操作3：
Figure PCTCN2019110225-appb-000113
称取化合物UBI-1001(20mg,0.043mmol)溶解在DMF(2mL)中，冰水浴下依次加入NH 2-连接基团-B(A1)(1eq.)，HOBT(2eq.23mg,0.086mmol),EDCI(2eq.16.4mg,0.086mmol)和TEA(3eq.13mg,0.129mmol)。加料完成后，物料体系在氮气保护下室温搅拌反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取三次(5mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品后以展开剂极性(DCM/MeOH＝10/1)进行薄层色谱硅胶板分离制备得到目标化合物TED。
通过类似方式，制得表B3中所示的A-L1-B偶联物。
表B3
Figure PCTCN2019110225-appb-000114
Figure PCTCN2019110225-appb-000115
Figure PCTCN2019110225-appb-000116
Figure PCTCN2019110225-appb-000117
(2.4)TED分子的制备操作4：
Figure PCTCN2019110225-appb-000118
称取化合物UBI-1001(20mg,0.043mmol)溶解在DMF(2mL)中，冰水浴下依次加入NH 2-连接基团-B(B1)(1eq.)，HOBT(2eq.23mg,0.086mmol),EDCI(2eq.16.4mg,0.086mmol)和TEA(3eq.13mg,0.129mmol)。加料完成后，物料体系在氮气保护下室温搅拌反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取三次(5mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品后以展开剂极性(DCM/MeOH＝10/1)进行薄层色谱硅胶板分离制备得到目标化合物TED。
通过类似方式，制得表B4中所示的A-L1-B偶联物。
表B4
Figure PCTCN2019110225-appb-000119
Figure PCTCN2019110225-appb-000120
Figure PCTCN2019110225-appb-000121
Figure PCTCN2019110225-appb-000122
通过类似(2.1)、(2.2)、(2.3)或(2.4)的制备操作制得表B9中化合物
表B9
Figure PCTCN2019110225-appb-000123
Figure PCTCN2019110225-appb-000124
Figure PCTCN2019110225-appb-000125
Figure PCTCN2019110225-appb-000126
Figure PCTCN2019110225-appb-000127
Figure PCTCN2019110225-appb-000128
Figure PCTCN2019110225-appb-000129
Figure PCTCN2019110225-appb-000130
Figure PCTCN2019110225-appb-000131
Figure PCTCN2019110225-appb-000132
Figure PCTCN2019110225-appb-000133
Figure PCTCN2019110225-appb-000134
Figure PCTCN2019110225-appb-000135
Figure PCTCN2019110225-appb-000136
(2.5)TED分子的制备操作5：
Figure PCTCN2019110225-appb-000137
称取化合物UBI-1007(20mg,0.0436mmol)溶解在无水DMF(1mL)中，冰水浴下依次加入NH 2-连接基团(Linker)-B(A1)(0.0436mmol)，HATU(33mg,0.0872mmol)和DIEA(0.072mL,0.436mmol)，加料完成后，物料体系在氮气保护下室温搅拌反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取三次(5mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品后以展开剂极性(DCM/MeOH＝10/1)进行薄层色谱硅胶板分离制备得目标化合物。
通过类似方式，制得表B5中所示的A-L1-B偶联物。
表B5
Figure PCTCN2019110225-appb-000138
Figure PCTCN2019110225-appb-000139
Figure PCTCN2019110225-appb-000140
Figure PCTCN2019110225-appb-000141
(2.6)TED分子的制备操作6：
Figure PCTCN2019110225-appb-000142
称取化合物UBI-1007(20mg,0.0436mmol)溶解在无水DMF(1mL)中，冰水浴下依次加入NH 2-连接基团(Linker)-B(B1)(0.0436mmol)，HATU(33mg,0.0872mmol)和DIEA(0.072mL,0.436mmol)，加料完成后，物料体系在氮气保护下室温搅拌反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取三次(5mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品后以展开剂极性(DCM/MeOH＝10/1)进行薄层色谱硅胶板分离制备得目标化合物。
通过类似方式，制得表B6中所示的A-L1-B偶联物。
表B6
Figure PCTCN2019110225-appb-000143
Figure PCTCN2019110225-appb-000144
Figure PCTCN2019110225-appb-000145
Figure PCTCN2019110225-appb-000146
(2.7)TED分子的制备实实例操作7：
Figure PCTCN2019110225-appb-000147
称取化合物UBI-1008(20mg,0.0436mmol)溶解在无水DMF(1mL)中，冰水浴下依次加入NH 2-连接基团(Linker)-B(A1)(0.0436mmol)，HATU(33mg,0.0872mmol)和DIEA(0.072mL,0.436mmol)，加料完成后，物料体系在氮气保护下室温搅拌反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取三次(5mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品后以展开剂极性(DCM/MeOH＝10/1)进行薄层色谱硅胶板分离制备得目标化合物。
通过类似方式，制得表B7中所示的A-L1-B偶联物。
表B7
Figure PCTCN2019110225-appb-000148
Figure PCTCN2019110225-appb-000149
Figure PCTCN2019110225-appb-000150
Figure PCTCN2019110225-appb-000151
(2.8)TED分子的制备操作8：
Figure PCTCN2019110225-appb-000152
称取化合物UBI-1008(20mg,0.0436mmol)溶解在无水DMF(1mL)中，冰水浴下依次加入NH 2-连接基团(Linker)-B(B1)(0.0436mmol)，HATU(33mg,0.0872mmol)和DIEA(0.072mL,0.436mmol)，加料完成后，物料体系在氮气保护下室温搅拌反应18小时，反应完成后将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯提取三次(5mL*3).合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压旋蒸浓缩，得到粗品后以展开剂极性(DCM/MeOH＝10/1)进行薄层色谱硅胶板分离制备得目标化合物。
通过类似方式，制得表B8中所示的A-L1-B偶联物。
表B8
Figure PCTCN2019110225-appb-000153
Figure PCTCN2019110225-appb-000154
Figure PCTCN2019110225-appb-000155
Figure PCTCN2019110225-appb-000156
通过类似(2.5)、(2.6)、(2.7)或(2.8)的制备操作制得表B10中化合物。
表B10
Figure PCTCN2019110225-appb-000157
Figure PCTCN2019110225-appb-000158
Figure PCTCN2019110225-appb-000159
Figure PCTCN2019110225-appb-000160
Figure PCTCN2019110225-appb-000161
Figure PCTCN2019110225-appb-000162
Figure PCTCN2019110225-appb-000163
Figure PCTCN2019110225-appb-000164
Figure PCTCN2019110225-appb-000165
Figure PCTCN2019110225-appb-000166
Figure PCTCN2019110225-appb-000167
Figure PCTCN2019110225-appb-000168
Figure PCTCN2019110225-appb-000169
Figure PCTCN2019110225-appb-000170
Figure PCTCN2019110225-appb-000171
Figure PCTCN2019110225-appb-000172
Figure PCTCN2019110225-appb-000173
Figure PCTCN2019110225-appb-000174
Figure PCTCN2019110225-appb-000175
Figure PCTCN2019110225-appb-000176
Figure PCTCN2019110225-appb-000177
Figure PCTCN2019110225-appb-000178
Figure PCTCN2019110225-appb-000179
Figure PCTCN2019110225-appb-000180
Figure PCTCN2019110225-appb-000181
Figure PCTCN2019110225-appb-000182
Figure PCTCN2019110225-appb-000183
Figure PCTCN2019110225-appb-000184
(2.9)TED分子的制备操作9：
化合物UB-180811的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000185
步骤1:UB-180811c
化合物UB-180811a(3.2g,18.2mmol)溶于乙腈(100mL)慢慢滴加化合物UB-180811b(4.7g,18.2mmol),再加入碳酸钾(5g,36.4mmol).然后80℃反应18小时.反应完成后过滤，滤液浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝0％～30％)，得到无色透明油状目标产物UB-180811c(5.8g,收率90％)LCMS[M+H] +＝352
步骤2:UB-180811d
化合物UB-180811c(1.9g,5.4mmol)溶于四氢呋喃(40mL)滴加偶氮二甲酸二异丙酯(1.6g,8.1mmol)和三苯基膦(2.1g,8.1mmol).室温反应2小时.加入化合物邻苯二甲酰亚胺(1.2g,8.1mmol)室温反应过周末。反应完成后反应液浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝0％～10％)得到黄色透明油状目标产物UB-180811d(3.2g).LCMS[M+H] +＝481
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.57–7.51(m,4H),7.43–7.23(m,5H),7.11(m,1H),5.01(d,J＝1.9Hz,2H),3.75(t,J＝5.7Hz,1H),3.58(q,J＝7.0,6.4Hz,1H),3.47(d,J＝5.8Hz,4H),3.14–2.97(m,2H),2.47–1.92(m,12H).
步骤3:UB-180811e
化合物UB-180811d(1.5g,3.1mmol)溶于乙醇(20mL)加入肼(580mg,11.6mmol).室温反应18小时.反应冷却至室温会有固体析出，过滤把滤液旋干。粗产物用乙醇反复洗，滤液旋干得到粗产物UB-180758e 1.2g.LCMS[M+H] +＝351
步骤4:UB-180811f
化合物UB-180811e(1g,2.8mmol)溶于四氢呋喃(20mL)加入二碳酸二叔丁酯(2mL,8.7mmol).室温反应3小时.反应完成后滤液浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝0％～5％)得到黄色透明油状目标产物UB-180811f(580mg,收率42％).LCMS[M+H] +＝451
步骤5:UB-180811g
化合物UB-180811f(580mg,1.28mmol)溶于二氯甲烷(10mL)加入三氟乙酸(2mL).室温反应3小时。反应完成后浓缩得到粗品直接用于下一步.LCMS[M+H] +＝351
步骤6:UB-180811h
冰浴下将三乙胺(84mg,0.84mmol)滴加到溴乙酸叔丁酯(82mg,0.42mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，然后反应10分钟.化合物UB-180811g(150mg,0.42mmol)溶于二氯甲烷(2mL)加到上述反应中.室温反应18小时.反应中加入饱和食盐水(10mL),用二氯甲烷萃取(20mL*2),有机相浓缩爬大板纯化(二氯甲烷/甲 醇＝10/1)得到黄色透明油状目标产物UB-180811h(40mg,收率20％yield).LCMS[M+H] +＝465
步骤7:UB-180811i
化合物UB-180811h(450mg,0.97mmol)溶于四氢呋喃(10mL)加入二碳酸二叔丁酯(632mg,2.9mmol)和碳酸氢钠(243mg,2.9mmol).室温反应3小时。反应液浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝0％～5％)得到黄色透明油状目标产物UB-180811i(500mg,收率91％).LCMS[M+H] +＝565
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.43–7.28(m,5H),7.16–7.07(m,1H),5.01(s,2H),3.84(d,J＝6.3Hz,2H),3.45(dt,J＝8.5,5.8Hz,4H),3.30(d,J＝4.9Hz,2H),3.09(q,J＝6.5Hz,2H),2.48–2.19(m,12H),1.45–1.32(m,18H).
步骤8:UB-180811j
化合物UB-180811i(500mg,0.88mmol)溶于乙醇(5mL)加入2M NaOH(3mL,2mmol).室温反应18小时。反应液浓缩加入水(3mL),然后用***萃取(10mL*3)，除去有机杂质。水相用1M HCl中和至pH～6冻干得到白色固体产物UB-180811j(408mg).LCMS[M+H] +＝509
步骤9:UB-180811k
化合物UB-180811j(405mg,0.8mmol),A1(208mg,0.8mmol),HATU(365mg,0.96mmol),DIPEA(0.4mL)溶于DMF(3mL)室温反应18小时。反应完成后反应液浓缩得到粗品，并用硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝0％～20％)得到黄色透明油状目标产物UB-180811k(380mg,收率54％).LCMS[M+H] +＝750
步骤10:UB-180811l
化合物UB-180811k(380mg,0.5mmol)溶于二氯甲烷(6mL)甲醇(3mL)加入10％钯碳(50mg)在氢气环境下室温反应2小时.反应完成后过滤掉钯碳，滤液浓缩得到淡黄色粗品UB-180811l(300mg)。LCMS[M+H] +＝616
步骤11:UB-180811m
化合物UB-180811l(123mg,0.2mmol),R1(95mg,0.2mmol),HATU(152mg,0.4mmol),DIPEA(0.2mL)溶于DMF(3mL)室温反应18小时。反应中加入饱和食盐水(10mL),用二氯甲烷萃取(20mL*2),有机相浓缩，Prep-TLC(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到黄色固体目标产物UB-180811m(100mg,收率46％).LCMS[M+H] +＝1074
步骤12:UB-180811
化合物UB-180811m(100mg)溶于二氯甲烷(1.5mL)加入4M HCl/dioxane(0.4mL)室温反应5分钟.弃去上清液，固体用***洗(10mL*3),冻干得到淡黄色固体产物UB-180811(97mg,收率100％)。LCMS[M+H] +＝974.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,1H),10.95(s,1H),10.23(s,1H),9.45(s,2H),8.77(m,2H),8.30(d,J＝8.5Hz,1H),8.04–7.83(m,6H),7.55(q,J＝7.3Hz,3H),7.35(d,J＝2.2Hz,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,2H),5.17(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),4.54(d,J＝17.8Hz,1H),4.41(d,J＝17.7Hz,1H),4.15(d,J＝4.8Hz,2H),3.96(m,4H),3.80(m,4H),3.72(m,8H),3.50(m,2H),3.40–3.17(m,4H),2.94(m,1H),2.64(m,1H),2.37–2.26(m,1H),2.06(m,1H).
化合物UB-180849的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000186
步骤1:UB-180849c
化合物UB-180849b(19.05g,66.05mmol)溶于四氢呋喃(250mL)，在冰浴下滴加入化合物UB-180849a(22.95g,218.7mmol)的四氢呋喃(550mL)溶液中，反应在室温下反应16小时。反应液浓缩后通过硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝0％～10％)得到无色透明油状产物UB-180849c(17.4g,收率63％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.44-7.29(m,5H),5.18(s,2H),3.79-3.68(m,2H),3.65-3.55(m,4H),3.51(s,2H),2.90-2.79(m,2H),1.95(s,2H).
步骤2:UB-180849d
化合物UB-180849c(4.100g,18.76mmol),(16.50g,65.14mmol),(Boc)2O(28.43g,130.3mmol)以及NaHCO 3(10.94g,130.3mmol)溶解于四氢呋喃(600mL)，室温下反应2小时。过滤，滤液浓缩后通过柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝0％～3％)得到无色透明油状产物UB-180849d(20.7g,收率90％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.43-7.29(m,5H),5.17(s,2H),4.06(d,J＝33.2Hz,2H),3.70-3.56(m,4H),3.55-3.41(m,4H),1.41(d,J＝43.2Hz,9H).
步骤3:UB-180849e
化合物UB-180849d(119.78g,55.97mmol)溶解于二氯甲烷(500mL)，在冰浴下加入TEA(11.33g,111.9mmol)和MsCl(7.692g,67.16mmol)，在冰浴下反应1小时，然后室温下反应2小时。反应液用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸浓缩后得到黄色油状产物UB-180849f(22.94g,收率95％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.43-7.29(m,5H),5.21-5.13(m,2H),4.32-4.21(m,2H),4.06(d,J＝33.2Hz,2H),3.66-3.56(m,4H),3.53-3.43(m,2H),3.01(s,3H),1.41(d,J＝42.8Hz,9H).
步骤4:UB-180849i
化合物UB-180849h(12.00g,44.32mmol),UB-180849e(22.95g,53.18mmol),K 2CO 3(15.31g,110.8mmol)加入乙腈(300mL)中，在80℃下搅拌反应16小时。过滤，滤液浓缩后通过硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝0％～10％)得到黄色油状产物UB-180849c(23.4g,收率93％)。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.38-7.30(m,10H),5.17-5.14(m,2H),5.09(s,2H),4.62(s,1H),4.13-4.02(m,2H),3.63-3.42(m,8H),2.97-2.66(m,2H),2.51(s,2H),2.14(s,2H),2.01-1.85(m,2H),1.39(d,J＝42.4Hz,9H).
步骤5:UB-180849h
将4mol/L的氯化氢的二氧六环溶液(2ml)滴加至UB-180849g(500mg，0.87mmol)的二氯甲烷(20ml)中的溶液中，室温下搅拌1小时，反应完全后反应夜在浓缩，得到化合物UB-180849h(350mg，85％)黄色固体，产品直接用于下一步无需再纯化。LCMS[M+H] +＝470.3
步骤6:UB-180849i
2-(2-溴乙氧基)四氢-2H-吡喃(187mg，0.89mmol)，UB-180849h(350mg，0.75mmol)，碳酸钾(206mg，1.49mmlc)溶于CH 3CN(10ml).反应液回流过夜。反应完全后用水稀释，乙酸乙酯萃取。合并有机层，干燥、过滤和浓缩。粗品用硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝5％)得到黄色油状物目标产物UB-180849I(250mg，收率56％)LCMS[M+H] +＝598.4
步骤7:UB-180849j
化合物UB-180849i(250mg,19.66mmol)溶解于四氢呋喃(20mL)中，加入NaOH(20mmol,5mL)，室温下搅拌过夜反应。反应液加水浓缩后，用乙酸乙酯萃取，水相用1N HCl调节pH至6。水相冻干后得到固体溶解于二氯甲烷(200mL)和甲醇(20mL)中。过滤，滤液浓缩后得到黄色油状产物UB-180849j(130g,收率61％)。LCMS[M+H] +＝342.9； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.43–7.26(m,5H),5.02(s,2H),4.03(q,J＝7.1Hz,1H),3.87(d,J＝9.8Hz,2H),3.74–3.68(m,2H),3.51(q,J＝5.8Hz,3H),3.37(t,J＝5.8Hz,10H),3.13(s,2H),2.99(s,2H),1.99(s,2H),1.91(s,2H),1.71(d,J＝11.7Hz,2H),1.34(m,6H).
步骤8:UB-180849k
化合物UB-180849j(130mg,0.26mmol),A1(66mg,0.26mmol),HATU(144mg,0.39mmol)溶解于DMF(3mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应16小时。加水(10mL)淬灭后,用乙酸乙酯萃取(8mL*3)。合并有机相后用无水硫酸钠干燥后浓缩得粗产物。该粗产品通过反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％，70％收集)得白色固体UB-180849k(80mg,收率62％)。LCMS[M+H] +＝749.5
步骤9:UB-180849l
在氢气环境下，化合物UB-180849k(80mg,0.10mmol),Pd/C(20mg)溶解于甲醇(1mL)以及二氯甲烷(10mL)，反应液室温反应1小时.该反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后通反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％,15％收集)得黄色油状产物UB-180849l(35mg,收率53％)。LCMS[M+H] +＝615.4
步骤10:UB-180849m
化合物UB-180849l(35mg,0.06mmol),P1(24.2mg,0.06mmol),HATU(32mg,85.4μmol)溶解于DMF(2mL)和DIPEA(0.3mL)，室温反应18小时。加水(20mL)淬灭后,用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。合并有机相后用无水硫酸钠干燥后浓缩得粗产物。粗品用硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝10％)得到黄色固体UB-180849m(20mg，收率34％)。LCMS[M+H] +＝1022.6
步骤11:UB-180849
将UB-180849m(20mg，20μmol)和对甲苯磺酸一水合物(5mg)在甲醇(2ml)中的溶液在室温下搅拌6小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液(1ml)，减压浓缩得到粗品，粗品经反相柱纯化(甲醇/水＝5％～95％，在65％收集)，得到黄色固体UB-180849(3mg，收率16％)。 1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.48(d,J＝8.4Hz,1H),7.86(dd,J＝16.4,7.8Hz,1H),7.78(s,1H),7.64(dd,J＝11.9,7.5Hz,1H),7.57–7.50(m,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),4.51(d,J＝9.2Hz,2H),4.28(dd,J＝7.7,3.6Hz,1H),3.99(s,3H),3.92(ddd,J＝17.3,11.7,5.4Hz,2H),3.65(dt,J＝11.0,5.2Hz,5H),3.59(s,3H),3.52(d,J＝10.9Hz,2H),3.04(d,J＝12.3Hz,2H),2.88(ddt,J＝16.5,11.2,5.2Hz,5H),2.66(dt,J＝11.7,5.6Hz,2H),2.49(dt,J＝19.8,6.8Hz,2H),2.26–2.10(m,4H),2.00–1.80(m,8H),1.78–1.67(m,4H),0.86(t,J＝7.5Hz,3H)
化合物UB-180828的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000187
步骤1:UB-180828
化合物UB-180828a(34mg,0.036mmol),乙醛(0.02mL,0.1mmol),冰醋酸(9mg,0.072mmol)溶于DMF(3mL)室温反应1小时.然后加入NaBH 3CN(6.3mg,0.1mmol)60℃反应3小时.反应液制备纯化得到白 色固体产物UB-180828(15mg,收率40％).LCMS[M+H] +＝992
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,1H),10.55(s,1H),9.69(s,3H),8.37(s,1H),8.21(s,1H),7.88(d,J＝7.6Hz,1H),7.81(s,1H),7.60(t,J＝5.8Hz,2H),7.51(d,J＝7.2Hz,2H),5.32(t,J＝4.8Hz,1H),5.19(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),4.47–4.32(m,4H),4.27(d,J＝8.8Hz,3H),4.02(s,2H),3.93(s,3H),3.79(s,5H),3.24(s,3H),2.66(dt,J＝7.5,2.5Hz,2H),2.61(s,1H),2.00(dq,J＝13.1,7.8,6.2Hz,7H),1.90–1.78(m,6H),1.69(dd,J＝14.4,7.1Hz,3H),1.53(t,J＝6.3Hz,2H),1.46(d,J＝7.1Hz,2H),0.81(t,J＝7.0Hz,3H).
化合物UB-180835的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000188
步骤1:UB-180835
化合物UB-180835a(26mg,0.028mmol),乙酸酐(1滴),DIEA(1滴)溶于二氯甲烷(3mL)室温反应3小时.反应液制备纯化得到白色固体产物UB-180835(10mg,收率30％).LCMS[M+H] +＝936
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.03(s,1H),10.06(s,1H),9.86(s,1H),9.30(s,1H),8.39(d,J＝7.2Hz,1H),8.13(s,1H),7.87–7.78(m,2H),7.53(m,4H),5.16(m,1H),4.38(m,3H),4.28(m,2H),4.15(s,2H),4.01(m,2H),3.93(s,3H),3.79(m,2H),3.73(m,2H),3.62(m,2H),3.55(m,2H),3.24(s,3H),3.13(m,2H),2.92(m,2H),2.67–2.59(m,2H),2.33(m,1H),2.12(s,2H),2.02(m,4H),1.98(m,2H),1.83(m,5H),1.64(m,2H),1.52(m,2H),0.76(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物UB-180840的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000189
步骤1:UB-180840
化合物UB-180840a(30mg,0.03mmol),三甲基硅基异氰酸酯(7mg,0.06mmol),DIPEA(7mg)溶于二氯甲烷(10mL)室温反应18小时.反应液制备纯化得到白色固体产物UB-180840(2mg,收率7％).LCMS[M+H] +＝937
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.03(s,1H),9.88(s,1H),9.60(s,1H),8.76(s,1H),8.43(d,J＝7.3Hz,1H),8.07(d,J＝8.5Hz,1H),7.90–7.78(m,2H),7.58–7.46(m,4H),6.03(s,2H),5.16(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),4.46–4.34(m,3H),4.32–4.19(m,2H),4.11(s,2H),4.07–3.96(m,2H),3.93(s,3H),3.78(t,J＝5.0Hz,2H),3.60–3.57(m,4H),3.23(s,3H),3.13(s,3H),2.97–2.88(m,2H),2.63(d,J＝3.7Hz,1H),2.33(d,J＝3.8Hz,1H),2.02(ddd,J＝18.7,11.1,4.6Hz,7H),1.84(dq,J＝10.8,3.8Hz,5H),1.62(s,2H),1.50(t,J＝7.1Hz,2H),0.76(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物UB-180834(699-CHO)的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000190
步骤1:UB-180834
化合物UB-180834a(30mg,0.03mmol)溶于UB-180834b(5mL)，然后加入三乙胺(5mg,0.05mmol)。该反应用微波加热至60℃反应1小时。反应液浓缩后制备得到白色固体目标产物UB-180834(14.2mg,收率46％)。
表B11
Figure PCTCN2019110225-appb-000191
Figure PCTCN2019110225-appb-000192
Figure PCTCN2019110225-appb-000193
Figure PCTCN2019110225-appb-000194
Figure PCTCN2019110225-appb-000195
Figure PCTCN2019110225-appb-000196
实施例3 ACTED化合物的合成
实施例3.1带有连接子的TED的合成
化合物256的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000197
步骤1:256b(V1318-051)
化合物156a(19g,52mmol)以及对甲苯磺酸乙酯(21g,105mmol)溶于乙醇(150mL)后回流反应16小时。反应液浓缩得到粗产品，该粗产品通过硅胶柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝1/3)得到黄色油状目标产物256b(23g,收率100％)。LCMS[M+H] +＝392.0
步骤2:256c(V1318-053)
化合物256b(2.0g,3.7mmol)溶于DMSO(30mL)后加入UBI-1214(1.45g,3.7mmol)以及TEA(1.9g,18.6mmol)，该反应在25C条件下反应16小时。反应液用***(50mL*3)打浆后，过滤得到棕色固体目标产物156c(2.3g,收率77％)。该固体直接用于下一步反应。
步骤3:256d(V1318-062)
化合物156c(3g,3.7mmol)溶于甲醇(30mL)以及水(5mL)后加入KOH(825mg,14.7mmol)。该反应在25℃条件下反应18小时。该粗产物通过反相柱纯化(甲醇/水＝0％～95％45分钟,3％收集)得到黄色固体目标产物256d(750mg,收率26％)。LCMS[M+H] +＝787.2
步骤4:256e(V1318-064)
化合物256d(100mg,0.13mmol)溶于TFA(3mL)以及二氯甲烷(3mL)后加入催化量的Et 3SiH，然后室温反应1小时。反应液浓缩后得到黄色固体目标粗产物256e(100mg,收率100％)。该固体直接用于下一步反应。LCMS[M+H] +＝545.0
步骤5:256(V1318-065)
化合物156e(5mg,0.11mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(1mL)以及DIEA(6mg,0.04mmol)后加入1699-Vc-linker(10mg,0.01mmol)，然后室温反应16小时。反应液通过Prep-HPLC纯化得到黄色固体目标产物256(7.6mg,收率40％)。LCMS[M/2+H] +＝1018.8
化合物258的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000198
步骤1:258c(V1480-015)
化合物258a(2g,3。47mmol),化合物158b(2g,5。21mmol)和DCC(1。43g,6。94mmol),DIEA(2mL)溶于干燥二氯甲烷(50mL)后25℃反应48小时。反应完成后加入水(20mL)，二氯甲烷萃取(20mL*3)，合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压浓缩，并用反相柱分离(MeOH/H 2O＝2％～97％)，得到黄色透明油状目标产物258c(1。5g,收率45％)。LCMS[M+H] +＝949
步骤2:258d(V1480-018)
化合物258c溶于干燥四氢呋喃(15mL)加入哌啶(9mL,90mmol)室温反应18小时。反应完成后加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL*3)，合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析分离(二氯甲烷/MeOH＝0％～50％)得到黄色油状目标化合物258d(900mg,收率78％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8。36(d,J＝7。8Hz,1H),7。42–7。20(m,15H),4。10(td,J＝8。1,5。4Hz,1H),4。02–3。97(m,2H),3。58(t,J＝6。5Hz,2H),3。53–3。45(m,19H),3。40(d,J＝5。6Hz,2H),2。73(t,J＝5。6Hz,2H),2。35(tt,J＝7。1,2。9Hz,3H),1。10(t,J＝7。1Hz,3H)。LCMS[M+H] +＝727
步骤3:258f(V1480-020)
化合物258e(1。65g,3。0mmol),化合物258d(900mg,1。23mmol)和三乙胺(500mg)溶于干燥DMSO(10mL)后25℃反应24小时。加入***(50mL*3)并搅拌3分钟。***层去掉再用乙腈(100mL)离心。固体收集得到红色透明油状目标产物258f(2g)。LCMS[M+H] +＝1150。
步骤4:258g(V1480-022)
化合物158f(500mg,0。43umol)溶于二氯甲烷(20mL)和MeOH(10mL)再加入2M NaOH(1mL)。室温反应18小时。反应液减压浓缩，并用反相柱分离(MeOH/H 2O＝2％～30％)，得到黄色固态目标产物258g(30mg，纯度70％)。LCMS[M+H] +＝1122
步骤5:258h(V1480-027)
化合物258g(40mg,0。035mmol)溶于干燥二氯甲烷(4mL)加入TFA(0。5mL)和三乙基硅烷(3drops)。室温反应2小时。减压浓缩，加入***(10mL)并搅拌，有固体生成，固体过滤出来得到黄色目标产物258h(45mg,纯度70％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8。65(d,J＝1。6Hz,1H),8。23–8。15(m,2H),7。88(q,J＝7。6,6。6Hz,1H),7。69–7。61(m,2H),6。64(dd,J＝8。9,2。3Hz,2H),4。49(s,2H),4。44–4。23(m,4H),3。60(td,J＝6。5,1。6Hz,3H),3。52–3。43(m,19H),3。41–3。28(m,3H),3。18(t,J＝5。7Hz,2H),2。89–2。79(m,1H),2。78–2。65(m,2H),2。43–2。35(m,3H),2。26–2。13(m,2H),2。10–1。80(m,3H)。LCMS[M+H] +＝880。
步骤6:258(V1480-029)
化合物258h(7mg,8*10 -3mmol),化合物258i(12mg,8*10 -3mmol),DIEA(5mg)溶于干燥DMF(0。7mL)室温反应2小时。反应液过滤用制备Prep-HPLC得到黄色固态目标产物258(10。4mg,收率55％)。LCMS[M/2+H] +＝1186
化合物266的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000199
步骤1:266c(V1480-023)
化合物266a(1。5g,2。82mmol),化合物266b(1。65g,4。23mmol)和(1。16g,5。64mmol),DIEA(1。5mL)溶于干燥二氯甲烷(50mL)后25℃反应48小时。反应完成后加入水(20mL)，二氯甲烷萃取(20mL*3)，合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压浓缩，并用反相柱分离(MeOH/H 2O＝2％～97％)，得到黄色透明油状目标产物266c(900mg,收率35％)。LCMS[M+H] +＝905
步骤2:266d(V1480-026)
化合物266c(900mg,1mmol)溶于干燥四氢呋喃(15mL)加入哌啶(5mL,68。8mmol)室温反应3小时。反应完成后加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL*3)，合并有机相后用饱和食盐水洗，无水Na 2SO 4干燥，减压浓缩，并用反相柱分离(MeOH/H 2O＝2％～80％)，得到黄色油状目标化合物266d(460mg,收率67％)。
LCMS[M+H] +＝683。
步骤3:266f(V1480-028)
化合物266e(725mg,1。34mmol),化合物266d(460mg,0。67mmol)和三乙胺(270mg)溶于干燥DMSO(4mL)后25℃反应18小时。加入***(50mL*3)并搅拌3分钟，***层去掉再用乙腈(100mL)，离心，固体收集得到红色透明油状目标产物266f(1g)。LCMS[M+H] +＝1107
步骤4:266g(V1480-030)
化合物266f(1g,0。9umol)溶于二氯甲烷(10mL)和MeOH(20mL)再加入2M NaOH(2mL)。室温反应3小时。反应液减压浓缩，并用反相柱分离(MeOH/H 2O＝2％～30％)，得到黄色固态目标产物266g(170mg，收率17％)。LCMS[M+H] +＝1078
步骤5:266h(V1480-031)
化合物266g(40mg,0。037mmol)溶于干燥二氯甲烷(4mL)加入TFA(0。5mL)和triethylsilane(3drops)。室温反应2小时。减压浓缩，加入***(10mL)并搅拌，有固体生成，固体过滤出来得到黄色目标产物266h(25mg,收率80％)。LCMS[M+H] +＝836
步骤6:266(V1480-032)
化合物266h(10mg,12*10 -3mmol),化合物266i(12mg,8*10 -3mmol),DIEA(5mg)溶于干燥DMF(0。7mL)室温反应2小时。反应液过滤后用Prep-HPLC纯化得到黄色固态目标产物266(6。2mg,收率33％)。LCMS[M/2+H] +＝1165
化合物157的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000200
步骤1:257(V1162-111)
化合物257a(5mg,8*10 -3mmol),(12mg,8*10 -3mmol),TEA(5mg)的N，N-二甲基甲酰胺(0.7mL)溶液室温反应2小时。反应液用Prep-HPLC分离纯化得到黄色固体目标化合物(4.0mg,收率30.7％)。LCMS[M/2+H] +＝1200.5
化合物MC-VC-133/180/199的合成方法：
Figure PCTCN2019110225-appb-000201
化合物133/180/199(40mg,1eq.),MC-VC-PAB-PNP(1eq.),HOBT(2eq.)溶于DMF(0.8mL)和DIEA(2eq.)，氮气保护下室温反应48小时。反应液直接用反相制备色谱柱分离得到目标化合物MC-Vc-133/180/199.
化合物UBI-1212的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000202
步骤1:UBI-1212c(V1162-120)
MC-Val-Cit-OHCI-TrtCI-resin(UBI-1212b)放置在过滤器里，加入10mL二氯甲烷，搅拌一小时后过滤。然后再加入Fmoc-Cit-OH(UBI-1212a)(600mg,1.5mmol)和DIPEA(0.66ml)的二氯甲烷溶液。室温反应一小时。反应液中加入甲醇搅拌15分钟后过滤得到固体用以下溶剂洗涤:二氯甲烷(5 x 50mL x 0.5min),N，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min),哌啶:N，N-二甲基甲酰胺(1:4,1 x 1min,2 x 10min),N，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min),二氯甲烷(5 x 50mL x 0.5min)，得到目标化合物树脂(UBI-1212c)。
步骤2:UBI-1212e(V1162-121)
化合物UBI-1212c用N，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min)洗后加入Fmoc-Val-OH(UBI-1212d)(950mg,2.8mmol),HOBt(567mg,4.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液。搅拌10分钟加入DIC(538mg,4.2mmol) 后室温反应1.5小时。反应液过滤得到固体用以下溶剂洗涤:N，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min)，哌啶:N，N-二甲基甲酰胺(1:4,1 x 1min,2 x 10min)和N，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min)，得到目标化合物树脂.(UBI-1212e).
步骤3:UBI-1212g(V1162-122)
化合物UBI-1212e用N，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min)洗后加入UBI-1212f(740mg,1.4mmol),HOBt(567mg,4.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液，搅拌10分钟后加入DIC(538mg,4.2mmol)，后室温反应1.5小时。反应液过滤得到固体用以下溶剂洗涤:N，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min)，哌啶:N，N-二甲基甲酰胺(1:4,1 x 1min,2 x 10min)和N，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min)，得到目标化合物树脂.(UBI-1212g).
步骤4:UBI-1212i(V1162-123)
化合物UBI-1212gN，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min)洗后加入UBI-1212h(740mg,2.8mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)和DIPEA(0.66mL)溶液，室温反应1小时。反应液用N，N-二甲基甲酰胺(5 x 50mL x 0.5min)洗后加入二氯甲烷(10mL)和TFA(1mL)，室温反应2小时。反应液过滤，滤液浓缩后得到粗品油状物。然后用反相柱分离纯化(MeOH/H2O＝5％～95％45％收集UV 210检测)得到目物色油状物标化合物UBI-1212i(600mg)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.19(d,J＝7.3Hz,1H),8.02(d,J＝5.7Hz,1H),7.83(d,J＝9.1Hz,1H),7.35–7.11(m,2H),7.00(s,2H),5.95(s,1H),4.25(dd,J＝9.0,6.7Hz,1H),4.12(t,J＝7.1Hz,1H),3.81(m,8H),3.59(t,J＝7.3Hz,4H),3.49(t,J＝5.3Hz,8H),3.36(t,J＝5.9Hz,2H),3.15(q,J＝5.8Hz,2H),2.95(t,J＝6.7Hz,2H),2.37–2.19(m,4H),2.01–1.88(m,1H),1.70(d,J＝12.4Hz,1H),1.60–1.52(m,1H),1.43–1.30(m,2H),0.84(dd,J＝15.4,6.8Hz,6H).LC-MS:(M+H) +＝717.5
步骤5:UBI-1212j(V1162-129)
化合物UBI-1212i(442mg,0.61mmol),4-氨基苄醇(152mg,1.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液加入HOBT(166mg,1.2mmol)和DIC(194ul,1.2mmol)。室温反应2小时。反应液用反相柱纯化分离(MeOH/H 2O＝5％～95％,40％收集)得到UBI-1212j(140mg，收率28％)LC-MS:(M+H) +＝822.4
步骤6:UBI-1212l(V1162-134)
化合物UBI-1212j(380mg,0.46mmol),UBI-1212k(281mg,0.92mmol),加入到DIPEA(0.3mL)和N，N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中室温反应18小时。反应液用反相柱纯化分离(乙腈/水＝5％～50％,40％收集)得到淡黄色固体UBI-1212l(130mg,收率28.5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.06(s,1H),8.38–8.23(m,2H),8.14(d,J＝7.4Hz,1H),8.01(t,J＝5.6Hz,1H),7.88(d,J＝8.6Hz,1H),7.70–7.63(m,2H),7.60–7.53(m,2H),7.44–7.37(m,2H),7.00(s,2H),6.15–5.96(m,1H),5.25(s,2H),4.98(s,4H),4.43–4.36(m,1H),4.24(dd,J＝8.6,6.6Hz,1H),3.64–3.56(m,4H),3.52–3.45(m,16H),3.36(t,J＝5.9Hz,2H),3.15(q,J＝5.8Hz,2H),3.06–2.91(m,2H),2.33(dd,J＝7.9,6.7Hz,2H),1.97(h,J＝6.7Hz,1H),1.78–1.32(m,4H),0.85(dd,J＝13.3,6.7Hz,6H).LC-MS:(M+H) +＝987.4
步骤7:UBI-1212(V1162-136)
化合物UBI-1212l(40mg,0.04mmol)和化合物199(37mg,0.04mmol),HOBT(5.4mg,0.04mmol),加入到DIEA(15ul,0.08mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(500uL)的溶液中室温反应36小时。反应液用Prep-HPLC纯化得到白色固体目标化合物UBI-1212(45mg,收率65.2％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.02(d,J＝7.0Hz,1H),10.04–9.87(m,2H),9.38(s,1H),8.99(s,1H),8.43(d,J＝7.3Hz,1H),8.10(d,J＝6.7Hz,2H),8.03–7.98(m,1H),7.86(d,J＝7.8Hz,2H),7.79(s,1H),7.73(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(d,J＝8.3Hz,1H),7.56–7.50(m,6H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(d,J＝8.2Hz,1H),7.00(s,2H),6.00(s,2H),5.14(td,J＝12.6,5.1Hz,1H),5.04(d,J＝14.2Hz,1H),4.44–4.12(m,2H),3.98–3.86(m,12H),3.80–3.68(m,10H),3.64–3.52(m,12H),3.38–3.33(m,12H),3.26–3.19(m,3H),3.14(q,J＝5.8Hz,5H),2.37–2.30(m,4H),2.09–1.74(m,4H),1.62–1.40(m,9H),0.88–0.79(m,9H),0.76(t,J＝7.4Hz,3H).LC-MS:M+H＝1742.9
化合物UBI-1211的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000203
步骤1:UBI-1211c(V1318-111)
化合物UBI-1211a(2g,5.7mmol)溶于四氢呋喃(20mL)后加入UBI-1211b(1.1g,6.8mmol)以及K 2CO 3水溶液(10mL)。该反应室温下反应1小时。反应液除去四氢呋喃后通过反相柱纯化(甲醇/水＝0％～25％45分钟,0％收集)得到白色固体粗产物。该粗产物通过3N HCl酸化后再反相柱纯化(甲醇/水＝0％～80％45分钟,25％收集)得到黄色油状目标产物UBI-1211c(1g,收率41％)。LCMS[M+H] +＝434.3
步骤2:UBI-1211d(V1318-112)
化合物UBI-1211c(200mg,0.46mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)后加入HATU(191mg,0.50mmol)以及DIEA(163mg,1.26mmol)。室温反应20分钟后加入VC1001(UBI-1207)(159mg,0.42mmol)，然后室温反应16小时。反应液浓缩后通过反相柱纯化(甲醇/水＝0％～95％45分钟,50％收集)得到200mg无色油状粗产物。该粗产物再通过Prep-TLC(甲醇/二氯甲烷＝1/10)得到无色油状目标产物UBI-1211d(100mg,收率27％)。 1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.59–7.47(m,2H),7.25(d,J＝8.6Hz,2H),6.71(s,2H),4.57(s,2H),4.23(s,1H),3.91–3.37(m,26H),3.19–2.98(m,2H),2.68(m,12H),1.49–1.36(m,2H),1.12–0.70(m,6H).
步骤3:UBI-1211f(V1318-114)
化合物UBI-1211d(100mg,0.13mmol),UBI-1211e(76mg,0.25mmol)溶于DIPEA(0.3mL)以及N，N-二甲基甲酰胺(2mL)后室温反应18小时。该反应通过反相柱纯化column(乙腈/水＝5％～50％40min,40％收集)。冻干后得到浅黄色固体目标产物UBI-1211f(27mg,收率22％)。LCMS[M+H] +＝960.3
步骤4:UBI-1211(V1318-115)
化合物UBI-1211f(27mg,0.03mmol)以及199(26mg,0.03mmol),HOBT(4mg,0.03mmol),DIEA(7mg,0.06mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(0.3mL)后室温反应36小时。反应液通过Prep-HPLC纯化得到白色固体目标产物UBI-1211(10mg,收率21％)。LCMS[M+H] +＝1715.6.
实施例3.2 ACTED化合物的合成
实施例3.2.1
化合物TECP(磷酸三(2-氯乙基)酯)(67uL,5mmol/L in PBS缓冲溶液PH＝7.4)在0℃下加入到抗CD33抗体(2.5mg,5mg/mL)的PBS缓冲溶液中，混合均匀后37℃下孕育2小时。反应液超滤5次(500rpm,5min)并用PBS缓冲溶液置换。然后将反应液冷却到4℃后加入带有链接子的TED(53ul,5mmol/L N，N-二甲基甲酰胺溶液)，4℃下反应1小时。加入L-半胱氨酸搅拌10分钟。超滤5次(14krpm,5min)后浓缩得到澄清的ACTED溶液。
分析条件:
HIC柱的洗脱方法:
Time(min) ％B
0.0 0
12.0 100
12.1 0
18.0 0
流动相A:1.5M(NH 4) 2SO 4缓冲溶液:PH＝6.9-7.1.
198.21g(NH 4) 2SO 4溶解到800mL水，定容至1L。用Na 2HPO 4(25mM)调制PH＝7.
流动相B:0.025M K 2HPO 4和0.025M KH 2PO 4缓冲溶液:PH＝6.9-7.1.
a:S1:0.025M K 2HPO 4：4.35g K 2HPO 4溶解到800mL水中，定容至1L
b:S2:0.025M KH 2PO 4:：3.4g K 2HPO 4溶解到800mL水中，定容至1L
c:取S1(610ml)和S2(390mL)混合后加入0.025M K 2HPO 4缓冲溶液，调节PH＝6.9-7.1.
d:取c 75％+异丙醇(25％)配制成流动相B
备注:所有流动相均需要滤膜过滤。
ACTED化合物的实例：
表C：ACTED化合物
例子 结构 DAR(Drug Antibody ratio)
AC-721(UB-180721) Anti-CD33-Ab-MC-VC-633 2.0
AC-252(UB-180752) Anti-CD33-Ab-MC-VC-680 4.0
AC-222(UB-180722) Anti-CD33-Ab-MC-VC-680 2.0
AC-253(UB-180753) Anti-CD33-Ab-MC-VC-699 3.6
AC-305(UB-180805) Anti-CD33-Ab-PEG5-VC-699 2.3
AC-306(UB-180806) Anti-CD33-Ab-PEG5-VC-699 3.6
AC-825(UB-180825) Anti-CD33-Ab-PEG6-VC-699 6.5
MC和VC是氨基酸的缩写，其结构如下：
Figure PCTCN2019110225-appb-000204
PEG5和PEG6是指(-CH 2-CH 2-O-) 5和(-CH 2-CH 2-O-) 6；
Anti-CD33-Ab是指抗CD33抗体。
UB-180721：
Figure PCTCN2019110225-appb-000205
UB-180722：
Figure PCTCN2019110225-appb-000206
UB-180752：
Figure PCTCN2019110225-appb-000207
UB-180753：
Figure PCTCN2019110225-appb-000208
UB-180805：
Figure PCTCN2019110225-appb-000209
UB-180806：
Figure PCTCN2019110225-appb-000210
UB-180825：
Figure PCTCN2019110225-appb-000211
各式中，Ab代表抗体。
类似地，以AC-001～AC-006为带有链接子的TED合成了一系列DAR在2～5范围内的ACTED化合物。
AC-001
Figure PCTCN2019110225-appb-000212
AC-002
Figure PCTCN2019110225-appb-000213
AC-003
Figure PCTCN2019110225-appb-000214
AC-004
Figure PCTCN2019110225-appb-000215
AC-005
Figure PCTCN2019110225-appb-000216
AC-006
Figure PCTCN2019110225-appb-000217
实施例4：叶酸偶联TED的制备
化合物UB-180839(FR-多肽(Peptide)-连接基团(Linker)S-S-730)的合成方法
Figure PCTCN2019110225-appb-000218
步骤1:UB-180839c
化合物UB-180839a(500mg,2.3mmol)溶于甲醇(10mL)后加入UB-180839b(80mg,0.76mmol)，该反应在氮气保护下室温过夜。反应液浓缩后得到粗产物，该粗产物通过柱层析分离(乙酸乙酯/二氯甲烷＝1/10)得到无色油状粗产物UB-180839c(300mg,收率61％)。
步骤2:UB-180839e
化合物UB-180839c(300mg,1.4mmol)溶于二氯甲烷(10mL)后加入UB-180839d(309mg,1.5mmol)以及TEA(282mg,2.8mmol)。该反应在氮气保护下室温过夜。反应液浓缩后通过反相柱纯化(甲醇/水＝5％-95％，在70％收集)得到黄色油状目标产物UB-180839e(80mg,收率15％)。
步骤3:UB-180839f
化合物UB-180839e(20mg,0.05mmol)以及UB-180730(49mg,0.05mmol),HOBT(7mg,0.05mmol), DIEA(14mg,0.11mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)，该反应在室温下反应36小时。反应液通过制备得到白色固体产物UB-180839f(10mg,收率16％)。
步骤4:UB-180839h
化合物UB-180839g的树脂放置在带过滤装置的反应器中，加入50mL二氯甲烷，摇床反应1h。过滤后得到树脂，加入到哌啶/DMF(1:4)溶液中反应15分钟，然后用无水DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤后得到树脂。
N-芴甲氧羰基-D-天冬氨酸-4-叔丁酯(3.8g,9.2mmol),PyBOP(7.2g,13.8mmol)，DIPEA(2.4mL,6.9mL)溶于DMF,然后加入树脂。混合物在摇床上反应2h。然后用DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤，得到的树脂加入到哌啶/DMF(1:4)溶液中反应15分钟，然后用无水DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤后得到树脂。
N-芴甲氧羰基-D-天冬氨酸-4-叔丁酯(3.8g,9.2mmol),PyBOP(7.2g,13.8mmol)，DIPEA(2.4mL,6.9mL)溶于DMF,然后加入树脂。混合物在摇床上反应2h。然后用DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤，得到的树脂加入到哌啶/DMF(1:4)溶液中反应15分钟，然后用无水DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤后得到树脂。
Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(6g,9.2mmol),PyBOP(7.2g,13.8mmol)，DIPEA(2.4mL,6.9mL)溶于DMF,然后加入树脂。混合物在摇床上反应2h。然后用DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤，得到的树脂加入到哌啶/DMF(1:4)溶液中反应15分钟，然后用无水DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤后得到树脂。
N-芴甲氧羰基-D-天冬氨酸-4-叔丁酯(3.8g,9.2mmol),PyBOP(7.2g,13.8mmol)，DIPEA(2.4mL,6.9mL)溶于DMF,然后加入树脂。混合物在摇床上反应2h。然后用DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤，得到的树脂加入到哌啶/DMF(1:4)溶液中反应15分钟，然后用无水DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤后得到树脂。
N-(9-芴甲氧羰基)-D-谷氨酸1-叔丁酯(3.8g,9.2mmol),PyBOP(7.2g,13.8mmol)，DIPEA(2.4mL,6.9mL)溶于DMF,然后加入树脂。混合物在摇床上反应2h。然后用DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤，得到的树脂加入到哌啶/DMF(1:4)溶液中反应15分钟，然后用无水DMF(5 x 30mL x 0.5min)洗涤后得到树脂。
步骤5:UB-180839i
蝶酸(1.75g,4.6mmol)加入到DMSO(1L)中，然后加热到120℃溶解，慢慢冷却至室温得到澄清的溶液。然后加入UBI-180839h(20g)的树脂,HATU(5.2g,13.8mmol)，DIPEA(7.2mL)。混合物在摇床反应16h。反应液过滤后，树脂用DMSO(50mLx3)DMF(50mLx3),DCM(50ml x3)分别洗涤得到粗品。该粗品加入到TFA/H 2O/TIPS/EDT＝92.5:2.5:2.5:2.5溶液(100mL)中搅拌1h。过滤得到滤液，浓缩后用反相柱纯化得到UB-180839i(80mg)
步骤6:UB-180839
化合物UB-180839g(10mg,0.01mmol)溶于DMSO(1mL)后加入溶于PBS(0.5mL)和DMSO(0.5mL)的UB-180839f(27mg,0.03mmol)，该反应液在室温下过夜。反应液通过制备得到白色固体产物UB-180839(1.0mg,收率2％)。
化合物UB-180838(FR-多肽-连接基团S-S-699)的合成方法同UB-180839
化合物UB-180829(FR-多肽-连接基团S-S-699)的合成方法同UB-180839
表D为叶酸偶联TED分子829，838，839的分析数据
表D
Figure PCTCN2019110225-appb-000219
实施例5：多肽分子偶联TED
多肽CAADGCTWEVWGRECWY-NH 2的合成采用常规多肽合成程序。
多肽-TED偶联物UB-180759的合成如下所示：
Figure PCTCN2019110225-appb-000220
式中，Peptide(多肽)是指任何多肽药物(例如，序列为“CAADGCTWEVWGRECWY”的多肽)。
将多肽跟TED的偶联反应操作同抗体跟TED的偶联反应操作；多肽偶联TED后的分子需要进一步氧化。氧化操作如下:
取多肽40mg(纯度75％，即40*0.75/3710.7＝0.008mmol)，加入下述溶剂，使浓度约为1mg/mL：50％甲醇水15mL，50％乙酸15mL，1N HCl 1mL。碘(253)8eq溶于极少量的甲醇；氮气保护，最后加入碘溶液。反应30min之后，加入抗坏血酸(176.12)：直接加入18mg(和剩余的碘的摩尔量大约1:1计算加入)溶于5mL的水，滴加到反应无色即可；反应结束之后体系是略浑浊的白色。用氨水调pH至弱酸性条件。离心之后将上清液冻干，纯化得到化合物UB-180759。检测到MS＝3567。
测试例1生物学测试
1.1本发明化合物对MV4；11细胞增殖抑制作用的生物学测定
实验材料：
Figure PCTCN2019110225-appb-000221
Figure PCTCN2019110225-appb-000222
实验方法：
1)缓冲液配制
MV4；11细胞培养液：Iscove's改良的DμLbecco's培养基加10％FBS和1/100pen-strep。
2)实验步骤：
(1)MV4；11细胞用细胞培养液传代培养，取生长状态良好的细胞接种于96孔板，每孔100μL，每孔细胞数为20000，于37℃，5％CO2细胞孵育箱中培养过夜。
(2)将药物用二甲基亚砜(DMSO)配置成10mM的储存液。将化合物稀释(以此保证培养体系中DMSO浓度为1％)，每个浓度做2个孔重复。取稀释好的化合物加到细胞培养孔(终浓度为100μM,33μM,11μM…)，轻轻振荡混匀。另外设置2个只加细胞的阴性对照孔(保证培养体系中DMSO浓度为1％)。
3)结果检测：
(1)培养72小时后，每孔加50μL Cell Titer-Glo，室温孵育10分钟。
(2)用Envision读取化学发光信号值。
(3)数据用软件GraphPad Prism中Dose-response-inhibition方程分析，得出IC50值。
1.2本发明化合物PLK1蛋白表达生物学测定
实验材料：
Figure PCTCN2019110225-appb-000223
实验方法：
1)缓冲液配制
1x电泳缓冲液 稀释Novex TMTris-甘氨酸SDS电泳缓冲液(10X)至1X
1x转移缓冲液 稀释Novex TMTris-甘氨酸转移缓冲液(25X)至1X,加入20％甲醇
1x TBST 稀释Pierce TM20X TBS Tween TM20 Buffer至1X
封闭液 1x TBST加入5％脱脂牛奶
2)实验步骤：
(1)MV4；11细胞用细胞培养液传代培养后，取生长状态良好的细胞接种于6孔板，每孔2ml，每孔细胞数为100万，于37℃，5％CO 2细胞孵育箱中培养过夜。
(2)将药物用二甲基亚砜(DMSO)配置成10mM的储存液。取稀释好的化合物加到细胞培养孔(保证培养体系中DMSO浓度为0.1％)，轻轻振荡混匀。另外设置阴性对照孔(加等量DMSO)。
(3)培养6小时后，用RIPA细胞裂解液裂解细胞，提取蛋白，用BCA试剂盒测蛋白浓度。加2X蛋白上样缓冲液，100℃加热10分钟后样品放-20℃保存。
(4)每孔蛋白量为25μg的蛋白量上样到聚丙烯酰胺凝胶，进行电泳。
(5)蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到PVDF膜上，加5％脱脂牛奶室温封闭1小时。
(6)一抗(PLK1(208G4)兔mAb和GAPDH(D16H11)
Figure PCTCN2019110225-appb-000224
兔mAb)4℃孵育过夜，TBST溶液洗膜三次每次10分钟。
(7)二抗(Anti-rabbit IgG,HRP-连接的抗体)室温孵育1小时，再用TBST溶液洗膜三次每次10分钟。
3)结果检测：
最后加显色液(SuperSignal TMWest Femto最大灵敏度底物)显色，用自动化学发光仪(ChemiDoc XRS+(BIO-RAD))拍照，收集图片，分析。
1.3本发明化合物对PLK1酶活性抑制作用的生物学测定
实验材料：
Figure PCTCN2019110225-appb-000225
实验方法：
1)缓冲液配制
酶反应缓冲液：使用ddH2O稀释5X缓冲液至1X，加入50uM DTT。
2)实验步骤：
(1)使用1X缓冲液稀释酶，底物和ATP。
(2)加入2μL2.5X酶溶液至每个孔。
(3)加入1μL稀释好的化合物至每个孔，室温孵育15分钟。
(4)加入2μL2.5X底物/ATP混合液到每个孔，室温孵育1个小时。
(5)加入5μLADP-glo至每个孔，室温孵育40分钟。
(6)加入10μL检测试剂，室温孵育30分钟。
3)结果检测：
(1)使用Envision读取化学发光信号值。
(2)数据用软件GraphPad Prism中Dose-response-inhibition方程分析，得出IC50值。
1.4本发明化合物BRD4(Bromodomain containing protein 4)蛋白表达生物学测定
测试方法类似1.2PLK1蛋白表达生物学测定。
1.5本发明化合物PLK1(Polo-like kinase 1)蛋白表达生物学测定
测试方法类似1.2PLK1蛋白表达生物学测定。
1.6生物测试结果
1.2、1.4及1.5的蛋白表达测试结果如图2所示。
以下分子对MV4；11细胞抑制活性IC 50在0.1nM-10M之间:UB-180510，UB-180519，UB-180523，UB-180525，UB-180529，UB-180537，UB-180539，UB-180541，UB-180545，UB-180552，UB-180553，UB-180554，UB-180564，UB-180566，UB-180594，UB-180601，UB-180602。
以下分子对Hela细胞抑制活性IC 50在0.1nM-10M之间:UB-180512，UB-180525。
以上结果表明，本发明提供了一类靶向蛋白酶降解(TED)分子，由靶向作用于目标蛋白的小分子化合物单元、E3泛素连接酶结合单元和连接单元组成，能够与PLK和/或BRD4蛋白进行结合，促使PLK1和/或BRD4蛋白更易被蛋白酶降解，从而起到抑制细胞增殖的作用，可以作为蛋白降解的药物。本发明提供的化合物对MV4-11细胞增殖具有很好的抑制作用，说明本发明化合物可以制备成为抗肿瘤药物，特别是用于治疗急性髓细胞性白血病(Acute myeloid leukemia，AML)。
测试例2
(2.1)细胞增殖实验：
试剂：RPMI-1640培养基、McCoy's5A培养基、IMDM培养基、MEM培养基、L-15培养基、胎牛血清、青-链双抗、胰蛋白酶等、2-mercaptoethanol、NEAA、pyruvate等。
本实验使用的肿瘤细胞株，如表1.1所示：
表1.1 肿瘤细胞株列表
Figure PCTCN2019110225-appb-000226
细胞进行常规培养，细胞铺板前至少传2代以上。收集处于对数生长期细胞，制备成单细胞悬液并计数，调整细胞浓度至所需浓度，以每孔加入100μl接种到96孔细胞培养板内。每孔加入100μL受试化合物的完全培养基，每个浓度皆设2个复孔，5倍梯度往下稀释，继续培养72h。所有细胞都进行相对应受试样品的EC 50测定。
使用Alarm blue法检测各孔荧光强度，并计算EC 50。
EC 50由以下公式计算：
Y＝Max+(Min-Max)/[1+(X/EC 50)×Slope]
其中Min、Max和Slope分别表示最小值、最大值和斜率。
(2.2)流式细胞实验
为检测Ab.及ACTED与细胞表面靶受体(CD33,DLL3)的结合能力，将细胞铺到96孔板后，加一抗4度孵育1个小时，然后用含1％BSA的PBS洗两遍，然后二抗4度避光孵育半小时，洗三遍后用流式细胞仪分析。
为检测Ab.及ACTED的内吞，细胞先用抗体或抗体蛋白降解剂偶联物处理一定时间后，用1％BSA的PBS清洗两遍，而后二抗4度避光孵育半小时。为检测细胞表面靶受体的水平，细胞和FITC-抗人CD33或DLL3抗体4度避光孵育半小时，最后洗三遍，用流式细胞仪检测。
(2.3)蛋白质印迹
细胞用化合物处理一定时间后，离心收集细胞，PBS清洗后，加入RIPA buffer裂解细胞；细胞裂解液加入Loading buffer后取适量体积缓慢加到胶板对应的孔中，跑SDS-PAGE胶(4％-12％)。跑胶结束后转到PVDF 膜上，用5％脱脂奶粉室温封闭1小时。将膜放到用5％脱脂奶粉稀释的一抗中，4度慢摇过夜。一抗孵育结束后，用TBST摇床洗膜3次；加入与一抗对应的用5％脱脂奶粉稀释的二抗，室温慢摇1小时。二抗孵育结束后，再次用TBST摇床洗膜3次。将PVDF膜平放到暗盒中，用ECL显影液均匀浸润条带，置于ChemDoc XRS+凝胶成像仪中拍照。使用ImageJ软件定量分析蛋白条带强度。
计算DC50
(2.4)体外激酶活性实验
用1x reaction buffer将化合物、酶、底物和ATP稀释到所需浓度。384孔板中加入1μL不同浓度化合物、2μL酶、2μL底物/ATP混合溶液，室温孵育1小时。然后每孔加入5μL ADP-Glo TM试剂，室温孵育40分钟。最后加入10μL检测试剂，室温孵育30分钟后使用Envision检测化学发光信号。
计算IC50
测试结果如表1.2所示
表中，A≤10nM，10nM＜B≤100nM，100nM＜C≤1000nM，D＞1000nM
Figure PCTCN2019110225-appb-000227
Figure PCTCN2019110225-appb-000228
Figure PCTCN2019110225-appb-000229
Figure PCTCN2019110225-appb-000230
Figure PCTCN2019110225-appb-000231
Figure PCTCN2019110225-appb-000232
Figure PCTCN2019110225-appb-000233
测试例3动物实验
雌性BALB/c裸小鼠(只数：58只；周龄：5-6周)从北京维通利华实验动物技术有限公司购买，饲养于苏州圣苏新药开发有限公司SPF动物房，温度20～25℃，相对湿度40％～70％，明暗照明各12小时；动物自由饮水及采食。正常喂养约5天后，经兽医检验，体征状况良好的小鼠可入选本实验。分组前使用记号笔于动物尾根部进行标识，分组后每只动物均用耳部剪缺方式标识。
人急性单核细胞白血病细胞MV-4-11，来源于美国模式培养物保藏所(ATCC，本实验室液氮冻存)。
在5％CO 2、37℃培养条件下，MV-4-11细胞在含10％胎牛血清的IMDM培养基中进行常规细胞培养。以0.25％胰酶消化传代，根据细胞生长情况进行传代，传代比例为1:3或1:6。收取对数生长期MV-4-11细胞，细胞计数后重悬于含50％的PBS(pH 7.4，0.01M)和50％的Matrigel中，调整细胞浓度至7.0×10 7细胞/mL；将细胞置于冰盒中，用1mL注射器吸取细胞悬液，注射到裸鼠前右侧腋窝皮下，每只动物接种200μL(14×10 6细胞/只)，建立MV-4-11移植瘤模型。定期观察动物状态，使用电子游标卡尺测量瘤径，数据输入Excel电子表格，计算肿瘤体积，监测肿瘤生长情况。待瘤体积达到100～300mm 3，淘汰肿瘤体积过大、过小或成瘤不确定的动物，挑选健康状况良好、肿瘤体积相近的荷瘤鼠，采用随机区组法分为4组(n＝6～8)。实验开始后每周测量2次瘤径，计算肿瘤体积，同时称量动物体重并记录。
肿瘤体积(TV)计算公式如下：
TV(mm 3)＝l×w 2/2
其中，l表示肿瘤长径(mm)；w表示肿瘤短径(mm)。
每次给药前拿取化合物，配制成一定浓度的给药制剂。
动物分组及给药方案见表2
表2.裸鼠移植瘤模型药效实验给药方案
Figure PCTCN2019110225-appb-000234
在实验过程中，实验人员和兽医需对实验动物的体征和健康状况进行持续观察，定期称量体重、测量瘤径。
相对肿瘤体积(RTV)的计算公式为：
RTV＝TV t/TV initial
其中，TV initial为分组给药时测量到的肿瘤体积；TV t为给药期间每一次测量时的肿瘤体积。
相对肿瘤增殖率(％T/C)的计算公式为：
％T/C＝100％×(RTV T/RTV C)
其中，RTV T表示治疗组RTV；RTV C表示溶剂对照组RTV。
肿瘤生长抑制率TGI(％)的计算公式为：
TGI＝100％×[1-(TV t(T)-TV initial(T))/(TV t(C)-TV initial(C))]
其中，TV t(T)表示治疗组每次测量的肿瘤体积；TV initial(T)表示分组给药时治疗组的肿瘤体积；TV t(C)表示溶剂对照组每次测量的肿瘤体积；TV initial(C)表示分组给药时溶剂对照组的肿瘤体积。
动物体重下降率的计算公式为：
动物体重下降率＝100％×(BW initial-BW t)/BW initial
其中，BW t表示给药期间每次测量的动物体重；BW initial表示分组给药时的动物体重。
瘤重抑瘤率IR(％)的计算公式为：
IR＝100％×(W C-W T)/W C
其中，W C表示对照组瘤重；W T表示治疗组瘤重。
结果分析
参见图3，TED化合物在199在MV4；11肿瘤模型老鼠身上以30mpk剂量，每隔一天注射给药，显示出肿瘤萎缩效果。老鼠体重稳定，未观察到老鼠其他异常。
ACTED化合物AC-252,AC-253在MV4；11肿瘤模型老鼠身上分别以10mpk剂量，每隔2天注射给药，都显示出肿瘤生长抑制效果(64％)。老鼠体重稳定，未观察到老鼠其他异常。
根据ACTED计算出携带的相应TED分子的量是极其微量的。以253为例，给药剂量是10mpk，折算成TED分子199的剂量，相当于0.014mpk。这个剂量远远低于199本身的给药量30mpk。在如此微量的给药剂量下，如单独使用TED分子199难以观察到预期的肿瘤生长抑制效应。本发明的ACTED类化合物(如表C所示)均表现出类似AC-252,AC-253的优异的抑制肿瘤活性和优良的药代性能。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (14)

  1. 一种式I所示的偶联物：
    A-L1-B   式I
    其中：
    所述A为靶标分子的一价基团；
    所述B为E3连接酶配体的一价基团；
    所述L1为连接A和B的连接头；且L1如下式II所示：
    -X-L2-Y-    式II
    其中，
    当X或Y为NH或NR时，X或Y与和它们相连的L2链中的一部分共同形成4-8元芳香或非芳香杂环；其中，R为取代或未取代的C1-C10烷基、-(C＝O)-R'、(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'或-NH-CO-NH-R'、-NH-CO-O-R'或-X'-L3-Z；其中L3为连接基团，而Z为多肽元件或者靶标分子T；其中，R'选自下组的基团：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、氨基保护基、或者-X'-L3-Z；
    或
    X和Y各自独立地选自下组：-O-、-S-、-NH-、-NR-、-(C＝O)NH-、-NH(C＝O)-、-SO 2-、-NHSO 2-、-SO 2NH-、-SO-、-NHSO-、-SONH-、-PO 3-、-NHCOO-、-COO-、-NHCOCH 2O-、或-NH-CO-NH-；其中，R为取代或未取代的C1-C10烷基、-(C＝O)-R'、-(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'或-NH-CO-NH-R'、或-X'-L3-Z；；
    其中，L3为连接基团，而Z为多肽元件或者靶标分子T；其中，R'选自下组的基团：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、保护基、或者-X'-L3-Z；
    X'选自下组：-O-、-S-、-NH-、-(C＝O)NH-、-NH(C＝O)-、-SO 2-、-NHSO 2-、-SO 2NH-、-SO-、-NHSO-、-SONH-、-PO 3-、-NHCOO-、-COO-、-COOCH 2-或-NH-CO-NH-；
    L2和L3各自独立地为选自下组的连接基团：
    (a)取代或未取代的5-20元碳链；
    (b)取代或未取代的含有1-5个选自N、O和S的杂原子的5-20元杂碳链；
    (c)取代或未取代的5-20元碳链，且链中的1-4个链原子被选自下组的杂环替换：含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环、含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环；
    (d)取代或未取代的含有1-5个选自N、O和S的杂原子的5-20元杂碳链，且链中的1-4个链原子被选自下组的杂环替换：含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环、含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环；
    其中，所述“取代”指基团上的一个或多个(优选为1、2、3、或4个)氢原子被选自下组的取代基所取代：C1-C10烷基、C3-C8环烷基、-COOH、-OH、-SH、-NH 2、-NHR、-N(R 1)R 2、-Z、-X'-L3-Z、
    Figure PCTCN2019110225-appb-100001
    Figure PCTCN2019110225-appb-100002
    其中，Z为多肽元件或者靶标分子T；其中，当取代基为-Z时，则-Z仅仅位于N原子上；其中，R 1和R 2各自独立地为H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、氨基保护基、-X'-L3-Z
    Figure PCTCN2019110225-appb-100003
    Figure PCTCN2019110225-appb-100004
    Figure PCTCN2019110225-appb-100005
    其中，R为取代或未取代的C1-C10烷基、-(C＝O)-R'、(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'或-NH-CO-NH-R'、-NH-CO-O-R'或-X'-L3-Z；；其中L3为连接基团，而Z为多肽元件或者靶标分子T；其中，R'选自下组的基团：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、保护基、或者X'-L3-Z。
  2. 如权利要求1所述的偶联物，其特征在于，L2选自下组的连接基团：
    (a)取代的5-20元碳链；
    (b)取代的含有1-5个选自N、O和S的杂原子的5-20元杂碳链；
    (c)取代的5-20元碳链，且链中的1-4个链原子被选自下组的杂环替换：含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环、含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环；
    (d)取代的含有1-5个选自N、O和S的杂原子的5-20元杂碳链，且链中的1-4个链原子被选自下组的杂环替换：含有1-4个选自N、O和S的杂原子的4-10元饱和杂环、含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元部分不饱和或完全不饱和杂环；
    其中，所述“取代”指基团上的至少一个氢原子被选自下组的取代基所取代：-NHR、-N(R 1)R 2、-Z、-X'-L3-Z、
    Figure PCTCN2019110225-appb-100006
    Figure PCTCN2019110225-appb-100007
    且当取代基为-Z时，则-Z仅仅位于N原子上；
    且其余氢原子若被取代则取代的定义同权利要求1中取代的定义。
  3. 如权利要求1所述的偶联物，其特征在于，L2和/或L3为选自下组的连接基团：
    (a)取代或未取代的-(CH 2)s-；
    (b)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-5个-CH 2-被O替换；
    (c)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-2个-CH 2-被NR替换和任选地1-2个-CH 2-被O替换；其中，R为H、氨基保护基或X'-L3-Z；
    (d)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被含有1-4个选自N、O、S和P的杂原子的五元不饱和杂环替换；
    (e)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被含有1-4个选自N、O、S和P的杂原子的4-6元饱和杂环替换；
    (f)取代或未取代的-(CH 2)s-，其中，1-4个-CH 2-被O和含有1-4个选自N、O、S和P的杂原子的4-6元饱和杂环替换；
    (g)二价的含有1-2个氮原子的4-6元杂环基团；
    其中，s为5-20的整数。
  4. 如权利要求1所述的偶联物，其特征在于，当X为NH或NR时，X与和它相连的L2链中的一部分共同形成4-8元杂环，
    Figure PCTCN2019110225-appb-100008
    其中，Y和R如上定义；m为1-15的整数；p和q各自独立地为0、1、2或3，且p+q≥2。
  5. 如权利要求1所述的偶联物，其特征在于，L1选自下组：
    Figure PCTCN2019110225-appb-100009
    式中，“Y,X”表示该末端为X或Y；附加条件是一端为X，而另一端为Y；
    X和Y如上定义，m和n各自独立地为0-15的整数；
    T、V、Q、和W各自独立地为CH、C＝O、S、O、NH或NR；R为C1-C10烷基、-(C＝O)-R'、-(C＝O)NH-R'、-NH(C＝O)-R'、-SO 2-R'、-NHSO 2-R'、-SO 2NH-R'、-SO-R'、-NHSO-R'、-SONH-R'、-PO 3-R'、-NHCOO-R'、-COO-R'、-NH-CO-NH-R'、-NH-CO-O-R'或N-X'-L3-Z；其中L3为连接基团，而Z为多肽元件或者靶标分子T；R'、X'如权利要求1或2中定义；
    或者，L1为
    Figure PCTCN2019110225-appb-100010
    其中，X、Y和R如上定义；
    m和n各自独立地为1-15的整数；；p为1、2或3。
  6. 如权利要求1所述的偶联物，其特征在于，L1选自下组：
    Figure PCTCN2019110225-appb-100011
  7. 如权利要求1所述的偶联物，其特征在于，
    L1选自下组：
    Figure PCTCN2019110225-appb-100012
    其中，m'和m各自独立地为0、1、2、3、4或5(较佳地，0、1、2或3)，且m'和m不同时为0；
    p和n各自独立地为1-15的整数；T'为N或CR b：其中，R b选自下组的基团：H、取代或未取代C1-C6烷基；
    R、R 1和R 2如权利要求1或2中定义；
    或者，L1为
    Figure PCTCN2019110225-appb-100013
    其中，m和n各自独立地为1-15的整数。
  8. 如权利要求1所述的偶联物，其特征在于，L1选自下组：
    Figure PCTCN2019110225-appb-100014
    Figure PCTCN2019110225-appb-100015
    Figure PCTCN2019110225-appb-100016
    Figure PCTCN2019110225-appb-100017
    Figure PCTCN2019110225-appb-100018
    Figure PCTCN2019110225-appb-100019
    其中，R，或者R 1和R 2中的一个为-X'-L3-Z；
    R 1和R 2中的另一个，以及X'、X和Y的定义同权利要求1中定义。
  9. 如权利要求1所述的偶联物，其特征在于，L1选自下组：
    Figure PCTCN2019110225-appb-100020
    其中，R，或者R 1和R 2中的一个为-X'-L3-Z；
    R 1和R 2中的另一个，以及X'、X和Y的定义同权利要求1中定义。
  10. 一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有如权利要求1-8任一项所述的偶联物和药学上可接受的载体。
  11. 如权利要求1-8任一项所述的偶联物的制备方法，其特征在于，所述方法的反应路线如下式所示：
    Figure PCTCN2019110225-appb-100021
    其中m,n的定义如上所述。
  12. 如权利要求1-9任一项所述的偶联物的用途，其特征在于，用于制备用于治疗与靶标蛋白过量相关的疾病的药物组合物。
  13. 一种减少细胞中靶标蛋白含量的方法，其特征在于，将细胞与权利要求1-9任一项所述的偶联物相接 触，从而减少细胞中靶标蛋白的含量。
  14. 一种减少对象中靶标蛋白含量或治疗与与靶标蛋白过量相关的疾病，其特征在于，包括步骤：给需要的对象施用权利要求1-9任一项所述的偶联物。
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