WO2019209078A1 - 신규한 융합 단백질 및 이를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

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Definitions

  • the present invention relates to a novel fusion protein comprising an extracellular domain and an immunoglobulin Fc region of leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1 (Lrig-1) protein, and uses thereof.
  • Immunoglobulins comprise four polypeptide chains, ie two heavy and two light chains associated via interchain disulfide bonds. Each light chain has two domains, namely the variable light domain (VL) and the constant light chain domain (CL), and each heavy chain has two regions, namely the variable heavy chain region (VH) and the constant heavy chain region (CH).
  • the constant heavy chain region (CH) consists of the constant heavy chain region (e.g., CH1, CH2, CH3, etc.) designated by number (e.g., US 6,086,875 (Blumberg RS, et al.), US 5,624,821 (Winter GP et al.) And US 5,116,964 (Capon DJ and Lasky LA).
  • Immunoglobulins are classified into different isotypes (ie, IgG, IgM, IgA, IgD and IgE) based on their biological properties, their location in the organism and their ability to process different antigens.
  • the constant heavy chain region may have three or four CH domains.
  • the heavy chain in some isotypes (IgA, IgD and IgG), contains a hinge region that adds flexibility to the molecule (Janeway et al. 2001, Immunobiology, Garland Publishing, N.Y., N.Y.).
  • IgG1 In humans there are four IgG subclasses (IgG1, 2, 3, 4), which are named according to the order in which they are abundant in serum (IgG1 is most abundant).
  • the IgG isotype consists of two light chains and two heavy chains, each heavy chain comprising three constant heavy chain domains (CH1, CH2, CH3).
  • the two heavy chains of IgG are linked by disulfide bonds (-S-S-) to each other and to the light chain, respectively.
  • the antigen binding site of IgG is located in a fragment antigen binding region (Fab region) comprising the variable light (VL) and variable heavy (VH) domains as well as the constant light (CL) and constant heavy (CH1) domains.
  • the fragment crystallizable region (Fc region) of IgG is part of a heavy chain that contains CH2 and CH3 domains that bind Fc receptors found on the surface of certain cells, including neonatal Fc receptors (FcRn).
  • the heavy chain of IgG also has a hinge region (hinge) between CH1 and CH2, which separates the Fab region from the Fc region and joins the two heavy chains together via disulfide bonds.
  • the structure of the hinge region contributes to the unique biological properties of each of the four IgG subclasses.
  • IgG is secreted into small monomers that allow for easy perfusion of tissue. This is the only isotype with a receptor (newborn Fc receptor (FcRn)) that promotes passage through the human placenta to protect the fetus in the uterus. IgG absorbed through the placenta provides humoral immunity to newborns before their own immune system develops.
  • FcRn newborn Fc receptor
  • the IgG neonatal Fc receptor (FcRn) binding site is located in the Fc region of the antibody.
  • FcRn is generally expressed in human placental and epithelial cells and participates in the endocytosis salvage pathway that prevents the degradation of IgG. This salvage pathway is mediated by the high pH dependent binding affinity of IgG for FcRn at acidic pH.
  • the high affinity of IgG for FcRn at acidic pH is believed to induce binding of internalized IgG to FcRn after uptake into acidic endosomes (Goebl NA, et al., 2008; Junghans RP, et. al., 1996].
  • the salvage pathway provides one mechanism for the development of next generation protein drugs with extended half-lives in the blood circulation compared to unmodified protein drugs.
  • unmodified protein drugs have short circulatory half-lives and therefore require frequent administration over the long period of treatment required.
  • Extensive efforts have been made to extend the half-life of protein drugs by a number of methods, including PEGylated fusion protein technology (Food and Drug Administration, Osborn BL, et al., 2002). The result was not ideal.
  • One object of the present invention is to provide a novel fusion protein comprising an extracellular domain and an immunoglobulin Fc region of the leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1 (Lrig-1) protein.
  • Another object of the invention relates to a nucleic acid molecule encoding said fusion protein according to the invention.
  • Still another object of the present invention is to provide an expression vector into which the nucleic acid molecule is inserted.
  • Still another object of the present invention is to provide a host cell line transfected with the expression vector according to the present invention.
  • Still another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising the fusion protein according to the present invention.
  • the present invention relates to a fusion protein comprising an extracellular domain and an immunoglobulin Fc region of the leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1 (Lrig-1) protein.
  • the "Lrig-1 protein” is a transmembrane protein consisting of 1091 amino acids present on the surface of regulatory T cells, leucine-rich repeat (LRR) and three extracellular or lumen side It consists of immunoglobulin-like domains, cell membrane penetration sequences and cytoplasmic tails.
  • the LRIG gene family includes LRIG1, LRIG2 and LRIG3, and the amino acids between them are highly conserved.
  • the extracellular domain of the Lrig-1 protein may be an extracellular domain of Lrig-1 protein derived from a mammal including a human, a primate such as a monkey, a mouse, a rodent such as a rat, and the like.
  • the extracellular domain of the Lrig-1 protein may be represented by SEQ ID NO: 1 corresponding to the 35 th to 794 amino acid sequences of the human-derived Lrig-1 protein, which is a nucleic acid represented by SEQ ID NO: 2 It may be encoded by the sequence, but is not limited thereto (see Table 1).
  • Sequence Listing Sequence information SEQ ID NO: 1 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATC
  • the extracellular domain of the Lrig-1 protein may be represented by SEQ ID NO: 3 corresponding to the 35th to 794th amino acid sequence of the mouse-derived Lrig-1 protein, which is a nucleic acid represented by SEQ ID NO: 4 It may be encoded by the sequence, but is not limited thereto (see Table 2).
  • immunoglobulin Fc region means a site including heavy chain constant region 2 (CH2) and / or heavy chain constant region 3 (CH3) moieties excluding the heavy and light chain variable regions of an immunoglobulin.
  • the immunoglobulin Fc region may be one component forming a moiety of the protein conjugate of the present invention.
  • the immunoglobulin Fc region may include a hinge portion in the heavy chain constant region, which may affect the structural flexibility of the final fusion protein, and may further increase productivity and stability of the fusion protein.
  • the present invention is not limited thereto.
  • the immunoglobulin Fc region of the present invention has a substantially equivalent or improved effect as the natural type, except for the heavy and light chain variable regions of the immunoglobulin, some or all heavy chain constant region 1 (CH1) and / or light chain constant region It may be an extended Fc region including 1 (CL1). It may also be a region from which some fairly long amino acid sequences corresponding to CH2 and / or CH3 have been removed.
  • CH1 heavy chain constant region 1
  • CL1 extended Fc region including 1
  • the immunoglobulin Fc regions of the present invention may comprise 1) CH1 domain, CH2 domain, CH3 domain and CH4 domain, 2) CH1 domain and CH2 domain, 3) CH1 domain and CH3 domain, 4) CH2 domain and CH3 domain, 5) Combination of one or two or more of the CH1 domain, CH2 domain, CH3 domain and CH4 domain with an immunoglobulin hinge region (or a portion of the hinge region), 6) heavy chain constant region may be a dimer of each domain and light chain constant region .
  • an immunoglobulin hinge region or a portion of the hinge region
  • immunoglobulin Fc regions of the present invention include naturally occurring amino acid sequences as well as sequence derivatives thereof.
  • Amino acid sequence derivatives mean that one or more amino acid residues in a natural amino acid sequence have different sequences by deletion, insertion, non-conservative or conservative substitution, or a combination thereof.
  • amino acid residues known to be important for binding can be used as suitable sites for modification.
  • various kinds of derivatives are possible, such as a site capable of forming disulfide bonds, a few amino acids at the N-terminus in the native Fc, or a methionine residue may be added at the N-terminus of the native Fc.
  • the complement binding site such as C1q binding site may be removed, ADCC (antibody dependent cell mediated cytotoxicity) site may be removed in order to eliminate the effector function.
  • ADCC antibody dependent cell mediated cytotoxicity
  • Amino acid exchanges in proteins and peptides that do not alter the activity of the molecule as a whole are known in the art (H. Neurode, R. L. Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979).
  • the most commonly occurring exchanges are amino acid residues Ala / Ser, Val / Ile, Asp / Glu, Thr / Ser, Ala / Gly, Ala / Thr, Ser / Asn, Ala / Val, Ser / Gly, Thy / Phe, Ala / Exchange between Pro, Lys / Arg, Asp / Asn, Leu / Ile, Leu / Val, Ala / Glu, Asp / Gly.
  • it may be modified by phosphorylation, sulfation, acrylation, glycosylation, methylation, farnesylation, acetylation and amidation. may be modified.
  • Fc derivatives may exhibit biological activities equivalent to those of the Fc region of the present invention and may increase structural stability to heat, pH, etc. of the Fc region.
  • the Fc region may be obtained from a natural type separated in vivo from animals such as humans, cows, goats, pigs, mice, rabbits, hamsters, rats or guinea pigs, or obtained from transformed animal cells or microorganisms. It may be recombinant or a derivative thereof.
  • the method of obtaining from the natural form may be a method of separating the whole immunoglobulin from a human or animal living body, and then processing the protease. When treated with papain, it is cleaved into Fab and Fc, and when treated with pepsin, it is cleaved into pF'c and F (ab) 2.
  • Fc or pF'c may be separated by size-exclusion chromatography or the like.
  • the recombinant immunoglobulin Fc region obtained from a microorganism is an Fc region derived from human or mouse.
  • the immunoglobulin Fc region may be in a natural sugar chain, an increased sugar chain compared to the natural form, a reduced sugar chain or a sugar chain removed from the natural form.
  • Conventional methods such as chemical methods, enzymatic methods, and genetic engineering methods using microorganisms can be used to increase or decrease such immunoglobulin Fc sugar chains.
  • the immunoglobulin Fc region in which the sugar chain is removed from the Fc is significantly reduced in binding strength with the complement (c1q), and antibody-dependent cytotoxicity or complement-dependent cytotoxicity is reduced or eliminated, thereby not causing an unnecessary immune response in vivo. Do not.
  • a form more consistent with the original purpose as a carrier of the drug would be the immunoglobulin Fc region from which the sugar chains have been removed or unglycosylated.
  • “Deglycosylation” refers to an Fc region in which sugar is removed by an enzyme
  • Aglycosylation refers to an Fc region which is not produced and glycosylated in prokaryotes, and more specifically, in Escherichia coli. .
  • the immunoglobulin Fc region may be derived from humans or animals such as cattle, goats, pigs, mice, rabbits, hamsters, rats, guinea pigs, and the like, and may be derived from humans or mice.
  • the immunoglobulin Fc region of the present invention is IgG, IgA, IgD, IgE, IgM-derived Fc region, heavy chain constant region 2 (CH2), heavy chain constant region 3 (CH3), hinge, fragments thereof, or Hybrid Fc (combination), or combinations thereof.
  • the term "combination” refers to a polypeptide encoding a single-chain immunoglobulin Fc region, heavy chain constant region 2 (CH2) or heavy chain constant region 3 (CH3) when forming a dimer or multimer. Is meant to form a bond with single chain polypeptides of different origin. That is, it is possible to prepare dimers or multimers from two or more fragments selected from Fc region, heavy chain constant region 2 (CH2) or heavy chain constant region 3 (CH3) derived from IgG, IgA, IgM, IgD or IgE.
  • the "hybrid Fc" may be derived from a combination of human IgG subclasses or a combination of human IgD and IgG.
  • the hybrid Fc may include, for example, an IgD hinge region and a CH2 N-terminal region plus an IgG4 CH2 and CH3 region, for example, a hybrid Fc form disclosed in Korean Patent No. 0897938. May be used in the same manner, and is incorporated herein by reference.
  • the hybrid Fc when the hybrid Fc binds to a biologically active molecule, a polypeptide, or the like, it not only increases the serum half-life of the biologically active molecule, but also increases the expression level of the polypeptide when the nucleotide encoding the Fc-polypeptide fusion protein is expressed. It works.
  • the immunoglobulin Fc region is an Fc region derived from IgG, IgA, IgM, IgD or IgE, or heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constants derived from IgG, IgA, IgM, IgD or IgE.
  • Region 3 may be included, but is not limited thereto.
  • the immunoglobulin Fc region may be the IgG or IgM-derived Fc region that is most abundant in human blood, or may include the IgG or IgM-derived heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3).
  • IgG-derived Fc region known to enhance half-life of a ligand binding protein, or may comprise heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from said IgG, and another
  • it may be an Fc region derived from IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4, or the heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from the IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4.
  • the immunoglobulin Fc region comprises heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from human IgG1 represented by SEQ ID NO: 5, or derived from mouse IgG2 represented by SEQ ID NO: 6
  • the heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) of may include, but are not limited thereto (see Table 3 below).
  • Sequence Listing Sequence information SEQ ID NO: 5 LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEKFSQVVSL SEQ ID NO: 6 IFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCVVVDDFMPEDIYVEVEKKNKKVKTKVHTAQTKN
  • the immunoglobulin Fc region may include a hinge region derived from IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, or Abatacept, and as another example, IgG, IgD or Abatacept It may include a hinge region derived from, or may include, but is not limited to, a hinge region derived from IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgD or Abatacept.
  • the immunoglobulin Fc region may comprise a hinge region derived from human IgG1 represented by SEQ ID NO: 7; A hinge region derived from mouse IgG2 represented by SEQ ID NO: 8; A hinge region derived from human IgD represented by SEQ ID NO: 9; And a hinge region of Abatacept represented by SEQ ID NO: 10 (see Table 4 below) to increase structural flexibility of the fusion protein to be finally produced and to improve productivity of the fusion protein. And stability can be significantly improved, but is not limited thereto.
  • the linker when the extracellular domain and the Fc region of the Lrig-1 protein are linked through a linker, the linker may be linked to the N-terminus, C-terminus or free radical of the Fc fragment, and Lrig-1 It may be linked to the N-terminus, C-terminus or free group of the extracellular domain of the protein. If the linker is a peptide linker, the linkage may occur at any site.
  • the linker may be linked to the C-terminus of the extracellular domain of the Lrig-1 protein and the N-terminus of the Fc region of the immunoglobulin, or the C-terminus and the Lrig of the Fc region of the immunoglobulin -1 may be linked to the N-terminus of the extracellular domain of the protein.
  • the "linker” reduces the interference effect between the extracellular domain of the Lrig-1 protein and the immunoglobulin Fc region in the fusion protein, thereby reducing the desired activity of the extracellular domain of the Lrig-1 protein in the target cell. It can increase.
  • the linker may include a sequence that may be cleaved by an enzyme that is overexpressed in a tissue or cell of a desired disease. When it can be cleaved by the overexpressed enzyme as described above it can effectively prevent the activity of the polypeptide is reduced due to the Fc portion.
  • the linker preferably has 1 to 100 amino acids, but is not limited thereto, and may be any peptide capable of separating the extracellular domain of the Lrig-1 protein from the immunoglobulin Fc region.
  • the amino acid sequence constituting the linker it is preferable to include glycine (G) and serine (S), or to include them repeatedly or in a random pattern.
  • the linker may be a peptide linker represented by SEQ ID NO: 11; And peptide linkers represented by SEQ ID NO: 12; By including at least one of the amino acid sequences of (GGGGS) N (N is an integer of 1 or more, preferably 1 to 20) (see Table 5 below), thereby improving the stability of the active substance in the cell. It can raise and productivity can be improved more.
  • a peptide linker consisting of 33 amino acids located at the 282th to 314th portions of the human albumin most present in the blood, more preferably 13th to 292 to 304th position It may be a peptide linker consisting of two amino acids, and this part is a part that is mostly exposed to the outside of the three-dimensional structure is a part that minimizes the possibility of inducing an immune response in the body. However, it is not limited thereto.
  • the linker when the linker and the Fc region are separately expressed and then bound to each other, the linker may be a crosslinking agent known in the art.
  • the crosslinking agent is, for example, 1,1-bis (diazoacetyl) -2-phenylethane (1,1-bis (diazoacetyl) -2-phenylethane), glutaraldehyde, 4-azidosalicyl N-hydroxysuccinimide esters, such as 4-azidosalicylic acid, 3,3'-dithiobis (succinimidylpropionate) Imidoesters, including disuccinimidyl esters, and bifunctional maleimides such as bis-N-maleimido-1,8-octane, but It is not limited.
  • a fusion protein is an extracellular domain of Lrig-1 protein represented by SEQ ID NO: 1; A hinge region represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10; It may be a fusion protein comprising heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from human IgG1 represented by SEQ ID NO: 5 (see Table 6 below).
  • the fusion proteins represented by SEQ ID NOs 13 to 16 of Table 6 may be encoded by the nucleic acid sequences represented by SEQ ID NOs 17 to 20 of Table 7 below (see Table 7 below).
  • Sequence Listing Sequence information SEQ ID NO: 13 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATC
  • a fusion protein is an extracellular domain of Lrig-1 protein represented by SEQ ID NO: 3; A hinge region represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10; It may be a fusion protein comprising heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from human IgG1 represented by SEQ ID NO: 5 (see Table 8 below).
  • the fusion proteins represented by SEQ ID NOs 21 to 24 in Table 8 may be encoded by nucleic acid sequences represented by SEQ ID NOs 25 to 28 in Table 9, respectively (see Table 9 below).
  • Sequence Listing Sequence information SEQ ID NO: 21 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPE
  • a fusion protein is an extracellular domain of Lrig-1 protein represented by SEQ ID NO: 3; A hinge region represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10; It may be a fusion protein comprising heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from mouse IgG2 represented by SEQ ID NO: 6 (see Table 10 below).
  • the fusion proteins represented by SEQ ID NOs: 29 to 32 in Table 10 below may be encoded by nucleic acid sequences represented by SEQ ID NOs: 33 to 36 in Table 11, respectively (see Table 11 below).
  • Sequence Listing Sequence information SEQ ID NO: 29 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPE
  • a fusion protein is an extracellular domain of Lrig-1 protein represented by SEQ ID NO: 1; A linker represented by SEQ ID NO: 11; A hinge region represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10; It may be a fusion protein comprising heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from human IgG1 represented by SEQ ID NO: 5 (see Table 12 below).
  • the fusion proteins represented by SEQ ID NOs 37 to 40 in Table 12 below may be encoded by nucleic acid sequences represented by SEQ ID NOs 41 to 44 in Table 13 below (see Table 13 below).
  • Sequence Listing Sequence information SEQ ID NO: 37 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATC
  • a fusion protein is an extracellular domain of Lrig-1 protein represented by SEQ ID NO: 3; A linker represented by SEQ ID NO: 11; A hinge region represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10; It may be a fusion protein comprising heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from human IgG1 represented by SEQ ID NO: 5 (see Table 14 below).
  • the fusion proteins represented by SEQ ID NOs: 45 to 48 in Table 14 below may be encoded by nucleic acid sequences represented by SEQ ID NOs: 49 to 52 in Table 15, respectively (see Table 15 below).
  • Sequence Listing Sequence information SEQ ID NO: 45 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPE
  • a fusion protein is an extracellular domain of Lrig-1 protein represented by SEQ ID NO: 3; A linker represented by SEQ ID NO: 11; A hinge region represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10; It may be a fusion protein comprising heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from mouse IgG2 represented by SEQ ID NO: 6 (see Table 16 below).
  • the fusion proteins represented by SEQ ID NOs 53 to 56 in Table 16 below may be encoded by nucleic acid sequences represented by SEQ ID NOs 57 to 60 in Table 17 below (see Table 17 below).
  • Sequence Listing Sequence information SEQ ID NO: 53 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPE
  • a fusion protein is an extracellular domain of Lrig-1 protein represented by SEQ ID NO: 1; A linker represented by SEQ ID NO: 12; A linker represented by SEQ ID NO: 11; A hinge region represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10; It may be a fusion protein comprising heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from human IgG1 represented by SEQ ID NO: 5 (see Table 18 below).
  • the fusion protein represented by SEQ ID NOs: 61 to 64 in Table 18 below may be encoded by the nucleic acid sequence represented by SEQ ID NOs: 65 to 68 in Table 19 below (see Table 19 below).
  • a fusion protein is an extracellular domain of Lrig-1 protein represented by SEQ ID NO: 3; A linker represented by SEQ ID NO: 12; A linker represented by SEQ ID NO: 11; A hinge region represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10; It may be a fusion protein comprising heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from human IgG1 represented by SEQ ID NO: 5 (see Table 20 below).
  • the fusion proteins represented by SEQ ID NOs: 69 to 72 in Table 20 below may be encoded by nucleic acid sequences represented by SEQ ID NOs: 73 to 76 in Table 21 below (see Table 21 below).
  • a fusion protein is an extracellular domain of Lrig-1 protein represented by SEQ ID NO: 3; A linker represented by SEQ ID NO: 12; A linker represented by SEQ ID NO: 11; A hinge region represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10; It may be a fusion protein comprising heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from mouse IgG2 represented by SEQ ID NO: 6 (see Table 22 below).
  • the fusion protein represented by SEQ ID NOs 77 to 80 of Table 22 below may be encoded by the nucleic acid sequence represented by SEQ ID NOs 81 to 84 of Table 23 below (see Table 23 below).
  • the fusion protein provided in the present invention interacts with a ligand for Lrig-1 protein present in effector T cells, thereby regulating T cells containing Lrig-1 protein on the surface. Inhibiting the interaction between Treg cells and effector T cells can inhibit the activity of regulatory T cells and maintain or elevate the activity of effector T cells, thereby effectively inhibiting the growth of solid cancer cells, particularly among cancer cells.
  • nucleic acid molecule encoding the fusion protein provided by the present invention is provided.
  • Nucleic acid molecules of the present invention include all nucleic acid molecules in which the amino acid sequence of the fusion protein provided herein is translated into a polynucleotide sequence as known to those skilled in the art. Therefore, various polynucleotide sequences can be prepared by an open reading frame (ORF), all of which are also included in the nucleic acid molecules of the present invention.
  • ORF open reading frame
  • the nucleic acid molecule is SEQ ID NO: 17 to 20, 25 to 28, 33 to 36, 41 to 44, 49 to 52, 57 to 60, 65 to 68, 73 to 76 and 81 to 84 It may be displayed as one, but is not limited thereto.
  • an expression vector into which the isolated nucleic acid molecule provided in the present invention is inserted is provided.
  • the "vector” is the nucleic acid molecule capable of transporting another nucleic acid to which a nucleic acid molecule is linked.
  • a vector which refers to circular double stranded DNA into which additional DNA segments can be ligated.
  • a phage vector Another type of vector is a viral vector, where additional DNA segments can be ligated into the viral genome.
  • Some vectors are capable of autonomous replication in the host cell into which they are introduced (eg, bacterial vectors are episomal mammalian vectors of bacterial replication origin).
  • vectors eg, non-episomal mammalian vectors
  • Other vectors can enter the host cell and integrate into the genome of the host cell, thereby replicating with the host genome.
  • some vectors can direct the expression of the genes to which they are linked in a working dimension.
  • Such vectors are referred to herein as “recombinant expression vectors” or simply "expression vectors.”
  • expression vectors of utility in recombinant DNA techniques are often in the form of plasmids.
  • plasmid and vector may be used interchangeably because the plasmid is the most commonly used form of the vector.
  • the expression vector in the present invention include commercially widely used pCDNA vectors, F, R1, RP1, Col, pBR322, ToL, Ti vectors; Cosmid; Phages such as lambda, lambdoid, M13, Mu, p1 P22, Q ⁇ , T-even, T2, T3, T7; It can be selected from the group consisting of plant viruses, but is not limited thereto. All expression vectors known to those skilled in the art as expression vectors can be used in the present invention, and the selection of the expression vector depends on the nature of the host cell of interest.
  • the introduction of the vector into the host cell may be performed by calcium phosphate transfection, viral infection, DEAE-dextran controlled transfection, lipofectamine transfection or electroporation, but is not limited thereto.
  • An introduction method suitable for the expression vector and the host cell can be selected and used.
  • the vector contains one or more selection markers, but is not limited thereto, and may be selected depending on whether the product is produced using a vector that does not include the selection marker.
  • the selection of the selection marker is selected by the host cell of interest, which uses methods already known to those skilled in the art and the present invention is not so limited.
  • tag sequences can be inserted and fused to an expression vector.
  • the tag may include, but is not limited to, a hexa-histidine tag, a hemagglutinin tag, a myc tag, or a flag tag. Any tag that facilitates purification known to those skilled in the art may be used in the present invention.
  • a host cell line transfected with the expression vector provided in the present invention.
  • the "host cell” includes individual cells or cell cultures that may or may have been recipients of the vector (s) for incorporation of the polypeptide insert.
  • Host cells include the progeny of a single host cell, which may not necessarily be exactly the same (in morphological or genomic DNA complement) as the original parent cell because of natural, accidental or intentional mutations.
  • Host cells include cells transfected in vivo with the polypeptide (s) herein.
  • the host cell may include cells of mammalian, plant, insect, fungal or cellular origin, for example, bacterial cells such as E. coli, Streptomyces, Salmonella typhimurium; Fungal cells such as yeast cells and peach pastoris; Insect cells such as Drozophila and Spodoptera Sf9 cells; Chinese hamster ovary cells (CHO), SP2 / 0 (mouse myeloma), human lymphoblastoid, COS, NSO (mouse myeloma), 293T, bow melanoma cells, HT-1080, BHK (Baby hamster kidney cells, Baby Hamster Kidney cells), animal cells of HEK (Human Embryonic Kidney cells) or PERC.6 (human retinal cells); Or it may be a plant cell, but is not limited thereto, any cell that can be used as a host cell line known to those skilled in the art is available.
  • bacterial cells such as E. coli, Streptomy
  • a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising the fusion protein provided by the present invention as an active ingredient is provided.
  • the cancer to be prevented, improved or treated may be a solid tumor composed of agglomerates caused by abnormal growth of cells in a solid organ, and according to the site of the solid organ, stomach cancer, liver cancer, Glioblastoma, ovarian cancer, colon cancer, head and neck cancer, bladder cancer, renal cell cancer, breast cancer, metastatic cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, melanoma or lung cancer, and the like, preferably melanoma or colorectal cancer, but is not limited thereto. It is not.
  • prophylaxis may be used without limitation any action to block the symptoms of the disease, or to suppress or delay the symptoms using the pharmaceutical composition of the present invention.
  • treatment may include without limitation any action that improves or benefits the symptoms of the disease using the pharmaceutical composition of the present invention.
  • the pharmaceutical composition may be characterized in that the capsule, tablets, granules, injections, ointments, powder or beverage form, the pharmaceutical composition may be characterized in that it is intended for humans.
  • the pharmaceutical composition is not limited thereto, but may be used in the form of oral dosage forms, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, such as powders, granules, capsules, tablets, and aqueous suspensions, respectively, according to conventional methods.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may comprise a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Pharmaceutically acceptable carriers can be used as oral administration binders, suspending agents, disintegrants, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspending agents, pigments, fragrances, etc.
  • buffers, preservatives, analgesic Topical agents, solubilizers, isotonic agents, stabilizers and the like can be mixed and used, and for topical administration, bases, excipients, lubricants, preservatives and the like can be used.
  • the formulation of the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared in various ways by mixing with a pharmaceutically acceptable carrier as described above.
  • oral administration may be in the form of tablets, troches, capsules, elixirs, suspensions, syrups, wafers, and the like, in the case of injections, in unit dosage ampoules or multiple dosage forms. have. And other solutions, suspensions, tablets, capsules, sustained release preparations and the like.
  • suitable carriers, excipients and diluents suitable for formulation include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, malditol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate or mineral oil and the like can be used.
  • fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers, preservatives and the like may further be included.
  • the route of administration of the pharmaceutical composition in the present invention is not limited to these, oral, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intradural, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, intestinal, topical, Sublingual or rectal. Oral or parenteral release is preferred.
  • parenteral includes subcutaneous, intradermal, intravenous, intramuscular, intraarticular, intramuscular, intrasternal, intradural, intralesional and intracranial injection or infusion techniques.
  • the pharmaceutical compositions of the invention may also be administered in the form of suppositories for rectal administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention depends on a number of factors, including the activity, age, weight, general health, sex, formulation, time of administration, route of administration, rate of release, drug combination and severity of the particular disease to be prevented or treated, of the specific compound employed.
  • the dosage of the pharmaceutical composition may vary depending on the patient's condition, weight, degree of disease, drug form, route of administration, and duration, and may be appropriately selected by those skilled in the art, and 0.0001 to 50 mg / kg per day. Or 0.001 to 50 mg / kg. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may be formulated as pills, dragees, capsules, solutions, gels, syrups, slurries, suspensions.
  • a method for preventing or treating cancer comprising administering to a subject a fusion protein or a composition comprising the same according to the present invention.
  • the fusion protein of the present invention interacts with ligands for Lrig-1 protein present in effector T cells, thereby regulating T cells and effector T cells containing Lrig-1 protein on the surface.
  • the activity of regulatory T cells can be inhibited and the effector T cells can be maintained or elevated to effectively inhibit the growth of solid cancer cells, particularly among cancer cells.
  • the "individual” is a subject suspected of developing cancer
  • the suspected subject of cancer refers to a mammal including a mouse, a livestock, and the like, including a human having or may have the disease
  • Individuals treatable with the fusion protein of the invention or the composition comprising the same are included without limitation.
  • the methods of the present invention may comprise administering a fusion protein or a composition comprising the same in a pharmaceutically effective amount.
  • Suitable total daily doses may be determined by the treating physician within the scope of good medical judgment and may be administered once or in divided doses.
  • the specific therapeutically effective amount for a particular patient is determined by the specific composition, including the type and extent of the reaction to be achieved, whether or not other agents are used in some cases, the age, weight, general health of the patient, It is desirable to apply differently depending on various factors and similar factors well known in the medical field, including sex and diet, time of administration, route of administration and rate of composition, duration of treatment, drugs used with or co-specific with the specific composition.
  • the method for preventing or treating cancer may be a combination therapy further comprising administering a compound or substance having a therapeutic activity against one or more cancer diseases.
  • the "combination” is to be understood to denote simultaneous, separate or sequential administration. If the administration is sequential or separate, the interval of administration of the secondary components should be such that the beneficial effect of the combination is not lost.
  • the dosage of the fusion protein may be about 0.0001 ⁇ g to 500 mg per kg of patient's body weight, but is not limited thereto.
  • the fusion protein provided in the present invention interacts with a ligand for Lrig-1 protein present in effector T cells, thereby regulating T cells and effectors containing Lrig-1 protein on the surface.
  • a ligand for Lrig-1 protein present in effector T cells By inhibiting the interaction between T cells, the activity of regulatory T cells can be inhibited and the effector T cells can be maintained or elevated to effectively inhibit the growth of solid cancer cells, particularly among cancer cells.
  • Figure 1 shows the structure of the Lrig-1 protein according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 2 shows the structure of the Lrig-1 protein according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 3 shows the results of predicting the epitope of the antigen of the Lrig-1 protein according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 4 shows the results of predicting the epitope of the antigen of the Lrig-1 protein according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 5 shows the expression level of Lrig-1 mRNA according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 6 shows the expression level of Lrig-1 mRNA according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 7 shows the expression level of Lrig-1 mRNA according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 8 shows the expression level of Lrig-1, Lrig-2 and Lrig-3 mRNA according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 9 shows the results of comparing the expression level of Lrig-1 protein in regulatory T cells and non-regulated T cells according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 10 shows the expression of Lrig-1 protein on the surface of regulatory T cells according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 11 shows the effect of inhibiting the inhibitory ability of regulatory T cells to effector T cells of the fusion protein according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 12 shows a subset of T cells in which there is a ligand recognized by the fusion protein according to one embodiment of the invention.
  • Figure 13 shows the design of a cancer treatment experiment using a fusion protein according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 14 shows the results of analyzing the cancer treatment effect using a fusion protein according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 15 shows the results of analyzing the cancer treatment effect using a fusion protein according to an embodiment of the present invention.
  • the present invention relates to a fusion protein comprising an extracellular domain and an immunoglobulin Fc region of the leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1 (Lrig-1) protein.
  • the immunoglobulin Fc region is an Fc region derived from IgG, IgA, IgM, IgD or IgE, or heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constants derived from IgG, IgA, IgM, IgD or IgE.
  • Region 3 may be included, but is not limited thereto.
  • the immunoglobulin Fc region may include a hinge region derived from IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, or Abatacept, but is not limited thereto.
  • the extracellular domain of the Lrig-1 protein may be linked to the N-terminus or C-terminus of the immunoglobulin Fc region through a linker, but is not limited thereto.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, comprising the fusion protein of the present invention as an active ingredient.
  • the fusion protein provided in the present invention interacts with a ligand for Lrig-1 protein present in effector T cells, thereby regulating T cells and effectors containing Lrig-1 protein on the surface.
  • a ligand for Lrig-1 protein present in effector T cells By inhibiting the interaction between T cells, the activity of regulatory T cells can be inhibited and the effector T cells can be maintained or elevated to effectively inhibit the growth of solid cancer cells, particularly among cancer cells.
  • T cells In order to confirm that Lrig-1 protein is expressed only in regulatory T cells (Treg), subsets of T cells, Th0, Th1, Th2, Th17 and iTreg, were prepared.
  • the iTreg refers to cells which artificially induced differentiation in a medium containing the following composition, unlike nTreg, which is naturally isolated.
  • T cells were first isolated from na ⁇ ve T cells obtained from the spleen of the rat, and then RPMI1640 containing 10% fetal bovine serum (FBS; hyclone, logan, UT) (Invitrogen Gibco, Grand Island, NY). The components of Table 24 were further included in the nutrient medium, and differentiation was induced to each cell through 72 hours of incubation in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator.
  • FBS fetal bovine serum
  • the three-dimensional conformation of the extracellular domain of Lrig-1 protein was predicted to produce a fusion protein including the extracellular domain of Lrig-1 protein, which is a surface protein of regulatory T cells.
  • LRR1 to LRR15 existed in the Lrig-LRR domain (amino acid sequence Nos. 41 to 494) in the extracellular domain of Lrig-1 protein.
  • LRR domains consisted of 23 to 27 amino acids, with 3 to 5 leucine present.
  • the prediction of the nucleotide sequence was performed using Ellipro server (http://tools.iedb.org/ellipro/), which is an epitope prediction software based on the structure of the Lrig-1 protein.
  • the Ellipro search engine corresponds to a search engine known to have the highest reliability among algorithms for predicting existing antigenic determinants.
  • Example 2 After entering the extracellular domain analyzed in Example 1 into the epitope predictor software, the predicted contiguous or discontinuous amino acid sequences of the predicted epitope are shown in FIGS. 3 and 4.
  • Lrig-1 protein could act as a biomarker specific for regulatory T cells.
  • CD4 + T cells were isolated from the spleen of mice using magnet-activated cell sorting (MACS) through CD4 beads. Thereafter, regulatory T (CD4 + CD25 + T) cells and non-regulated T (CD4 + CD25 ⁇ T) cells were separated using a fluorescent activated cell sorter (FACS) using a CD25 antibody.
  • FACS fluorescent activated cell sorter
  • Each cell and the cells differentiated in Preparation Example 1 extracted mRNA using Trizol, and genomic RNA removed gDNA by a protocol provided by a company using gDNA extraction kit (Qiagen). . gDNA removed mRNA was synthesized into cDNA through the BDsprint cDNA Synthesis Kit (Clonetech).
  • the real-time polymerase chain reaction was carried out in 40 cycles of 3 minutes at 95 °C, 15 seconds at 61 °C, 30 seconds at 72 °C by the protocol provided by the manufacturer using SYBR Green (Molecular Probes), Table 25 It was performed using a primer, relative gene expression was calculated using the ⁇ CT method, and normalized using HPRT, the results are shown in Figures 5 to 8.
  • Lrig-1 expression was the highest among the Lrig-1, Lrig-2 and Lrig-3 corresponding to the Lrig family.
  • Lrig-1 protein according to the present invention is specifically expressed in regulatory T cells, particularly naturally occurring regulatory T cells.
  • Lrig-1 protein expressed from Lrig-1 mRNA was specifically expressed only in regulatory T cells.
  • a magnet-activated cell sorter (magnet-activated) from a mouse's spleen to CD4 beads using FOXP3-RFP-Knock-in mice incorporating a red fluorescence protein (RFP) to the FOXP3 promoter, a regulatory T cell specific transcription factor CD4 + T cells were isolated using cell sorting (MACS). Then, using a RFP protein, regulatory T cells (CD4 + RFP + T cells) and non-regulated T cells (CD4 + RFP - T cells) were obtained by fluorescence activated cell sorter (FACS). Each of the cells was purchased Lrig-1 antibody and negative control wasotype (isotype) staining to measure the expression level of Lrig-1 with a fluorescent active cell sorter, the results are shown in Figure 9.
  • RFP red fluorescence protein
  • the non-regulated T cells indicated by dotted lines showed almost the same expression level of Lrig-1 as the negative control, but there were a large number of cells with high expression levels of Lrig-1 in the case of regulatory T cells. .
  • Lrig-1 protein according to the present invention is specifically expressed in regulatory T cells.
  • Lrig-1 protein In order for Lrig-1 protein to be a target of cell therapy, it must be expressed on the surface of regulatory T cells to more effectively target the treatment. Therefore, it was confirmed whether Lrig-1 protein was expressed on the surface.
  • Each differentiated T cell subtype of Preparation Example 1 was stained with anti-CD4-APC and anti-Lrig-1-PE antibodies and surfaced to each cell using a Fluorescence-Activated Cell Sorter (FACS). The expression level of Lrig-1 at was measured, and the results are shown in FIG.
  • Lrig-1 is expressed in an amount of 0.77 to 15.3 in activated T cells, Th1 cells, Th2 cells, Th17 cells, and Naive T cells, whereas differentiation. was highly expressed as 83.9 in T-induced T cells (iTreg).
  • the Lrig-1 protein according to the present invention is not only specifically expressed in regulatory T cells (Treg) cells, but also particularly expressed on the surface of the regulatory T cells.
  • each nucleic acid sequence encoding each fusion protein in Table 26 was synthesized. NheI and EcoRI restriction enzyme sequences were added to the 5 'and 3' ends of the nucleic acid sequence, respectively, followed by a Kozak's sequence (GCCACC) and a start codon for protein translation. Mouse IgG kappa light chain signal peptide (ATGGAAACCGATACTCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGCTCTACCGGG) was inserted to allow the protein to be secreted out of the cells.
  • nucleic acid sequence encoding each of the fusion proteins of Table 26 the extracellular domain of the human-derived Lrig-1 protein; Optionally a linker; Hinge area; A stop codon was inserted after the nucleic acid sequence encoding heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) derived from human IgG1.
  • the nucleic acid sequence encoding the fusion protein of the present invention was cloned into a pcDNA3.1 (+) expression vector using two restriction enzyme sequences, NheI and EcoRI.
  • 293F cells were transformed using polyethyleneimine (Polyethylenimine) and the expression vector prepared in 1. was incubated for 6 days at 37 °C and 8% CO 2 conditions. The culture supernatant was filtered and poured into Protein A resin and washed with 1X PBS. The solution was eluted with a 0.1 M glycine solution at pH 3.5 and then neutralized by adding 1 M TRIS solution at pH 9.0 to the resulting solution. The solution was then dialyzed into PBS solution and concentrated.
  • polyethyleneimine Polyethylenimine
  • the fusion protein represented by SEQ ID NO: 21 according to the present invention prepared in Preparation Example 5 (manufactured using a nucleic acid sequence represented by SEQ ID NO: 25) binds to a ligand for Lrig-1 protein, and The following experiment was performed to confirm whether finally inhibiting the proliferation inhibitory effect on the effector T cells of regulatory T cells by inhibiting the interaction between regulatory T cells.
  • the fusion protein of Preparation Example 5 was added under conditions of coculture of regulatory T cells and effector T cells to confirm the change of the proliferation inhibitory ability of the regulatory T cells on the effector T cells. The results are shown in FIG.
  • the treatment of the fusion protein according to the present invention was confirmed that the effect of suppressing the proliferation of regulatory T cells to effector T cells.
  • the fusion protein according to the present invention interacts with the ligand for the Lrig-1 protein, thereby inhibiting the interaction between the regulatory T cell containing the Lrig-1 protein and the ligand, thereby activating regulatory T cells.
  • the activity of effector T cells was maintained or elevated.
  • the fusion protein represented by SEQ ID NO: 21 according to the present invention prepared in Preparation Example 5 may recognize the Lrig-1 ligand.
  • activated T cells, Th1 cells, and Th2 cells from naive T cells which are considered targets of regulatory T cells.
  • these cells were stained with the fusion protein (primary antibody) and anti-human-PE antibody (secondary antibody) of Preparation Example 5 above.
  • the expression level of the fusion protein at each cell surface was measured using a fluorescence-activated cell sorter (FACS), and the results are shown in FIG. 12.
  • the fusion protein according to the present invention hardly stained antigen on the surface of na ⁇ ve T cells (0.71%), and the surface of activated T cells, Th1 cells, Th2 cells, and Th17 cells. Antigens in stained more than 96%.
  • the ligand of Lrig-1 was found to be a surface protein induced by the stimulation of the T cell receptor (receptor).
  • the treatment of the fusion protein according to the present invention was found to significantly reduce the size of melanoma tumors compared to the negative control.
  • the fusion protein produced using the nucleic acid sequence represented by SEQ ID NO: 82
  • SEQ ID NO: 78 represented by SEQ ID NO: 78 according to the present invention prepared in Preparation Example 34 for solid cancer
  • CT-26 colorectal cancer cells After subcutaneous injection in the amount of 3 ⁇ 10 5 cells in mice, etc., the fusion protein of Preparation 34 was injected intraperitoneally on the 4th, 8th and 12th days. The change in the volume of the tumor over time after the colorectal cancer cell transplantation was measured and the results are shown in FIG. 15.
  • the fusion protein comprising the extracellular domain and immunoglobulin Fc region of the Lrig-1 protein according to the present invention inhibits the activity of regulatory T cells and inhibits the effector T effector by inhibiting the interaction between regulatory T cells and effector T cells. It can be seen that the activity of the cells can be maintained or raised to effectively inhibit the growth of solid cancer cells, particularly among cancer cells.
  • the present invention relates to a novel fusion protein comprising an extracellular domain of an Lrig-1 protein and an immunoglobulin Fc region, and use for the prevention or treatment of cancer using the same.

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Abstract

본 발명은 Lrig-1(leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1) 단백질의 세포 외 도메인(extracellular domain) 및 면역글로불린(immunoglobulin) Fc 영역을 포함하는 융합 단백질에 관한 것이다. 본 발명에서 제공하는 융합 단백질은 이펙터 T 세포(effector T cell)에 존재하는 Lrig-1 단백질에 대한 리간드와 상호 작용하여, Lrig-1 단백질을 표면에 포함하고 있는 조절 T 세포(regulatory T cell, Treg cell)와 이펙터 T 세포간의 상호 작용을 저해함에 따라 조절 T 세포의 활성을 억제하고 이펙터 T 세포의 활성은 유지 혹은 상승시켜 암 세포 중에서도 특히 고형암 세포의 성장을 효과적으로 억제할 수 있다.

Description

신규한 융합 단백질 및 이를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
본 발명은 Lrig-1(leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1) 단백질의 세포 외 도메인(extracellular domain)과 면역글로불린(immunoglobulin) Fc 영역을 포함하는 신규한 융합 단백질과, 이의 용도에 관한 것이다.
면역글로불린(immunoglobulin)은 4개의 폴리펩타이드 쇄, 즉 쇄간 디술피드 결합을 통해 회합된 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함한다. 각각의 경쇄는 2개의 도메인, 즉 가변 경쇄 도메인 (VL) 및 불변 경쇄 도메인 (CL)을 갖고, 각각의 중쇄는 2개의 영역, 즉 가변 중쇄 영역 (VH) 및 불변 중쇄 영역 (CH)을 갖는다. 불변 중쇄 영역 (CH)은 숫자에 의해 지정된 불변 중쇄 영역 (예를 들어, CH1, CH2, CH3 등)으로 이루어진다 (예를 들어, US 6,086,875 (블룸버그 알. 에스.(Blumberg R. S.) 등), US 5,624,821 (윈터 (Winter G. P.) 등) 및 US 5,116,964 (카폰 디. 제이.(Capon D. J.) 및 라스키 엘. 에이.(Lasky L. A.)) 참조). 면역글로불린은 그의 생물학적 특성, 유기체 내의 위치 및 상이한 항원을 처리하는 능력에 기초하여 상이한 이소형(즉, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE)으로 분류된다. 이뮤노글로불린 이소형에 따라, 불변 중쇄 영역 (CH)은 3개 또는 4개의 CH 도메인을 가질 수 있다. 또한, 일부 이소형 (IgA, IgD 및 IgG)에서, 중쇄는 분자에 유연성을 부가하는 힌지 영역을 포함한다 (Janeway et al. 2001, Immunobiology, Garland Publishing, N.Y., N.Y.).
인간에는 4개의 IgG 하위클래스 (IgG1, 2, 3, 4)가 있고, 이들은 혈청에 풍부한 순서에 따라 명명된다 (IgG1이 가장 풍부하다). IgG 이소형은 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄로 이루어지고, 각각의 중쇄는 3개의 불변 중쇄 도메인 (CH1, CH2, CH3)을 포함한다. IgG의 2개의 중쇄는 서로에 대해 및 경쇄에 각각 디술피드 결합 (-S-S-)에 의해 연결되어 있다. IgG의 항원 결합 부위는 가변 경쇄 (VL) 및 가변 중쇄 (VH) 도메인뿐만 아니라 불변 경쇄 (CL) 및 불변 중쇄 (CH1) 도메인을 포함하는 단편 항원 결합 영역 (Fab 영역)에 위치한다. IgG의 단편 결정화가능 영역 (Fc 영역)은 신생아 Fc 수용체 (FcRn)를 포함하는 특정 세포의 표면에서 발견되는 Fc 수용체에 결합하는 CH2 및 CH3 도메인을 함유하는 중쇄의 일부이다. IgG의 중쇄는 또한 Fab 영역을 Fc 영역으로부터 분리하고 2개의 중쇄를 디술피드 결합을 통해 함께 연결할 때 참여하는, CH1과 CH2 사이의 힌지 영역 (힌지)을 갖는다. 힌지 영역의 구조는 4개의 IgG 하위클래스 각각의 특유한 생물학적 특성에 기여한다.
IgG는 쉽게 조직을 관류할 수 있도록 허용하는 크기가 작은 단량체로 분비된다. 이것은 자궁 내의 태아를 보호하기 위해 인간 태반을 통과하는 것을 촉진하는 수용체 (신생아 Fc 수용체 (FcRn))를 갖는 유일한 이소형이다. 태반을 통해 흡수된 IgG는 그 자체 면역계가 발달하기 전에 체액성 면역을 신생아에게 제공한다.
IgG 신생아 Fc 수용체 (FcRn) 결합 부위는 항체의 Fc 영역에 위치한다. FcRn은 일반적으로 인간의 태반 및 상피 세포에서 발현되고, IgG의 분해를 막는 세포내이입 샐비지 경로에 참여한다. 이 샐비지 경로는 산성 pH에서 FcRn에 대한 IgG의 높은 pH 의존성 결합 친화도에 의해 매개된다. 산성 pH에서 FcRn에 대한 IgG의 높은 친화도는 산성 엔도솜 내로의 흡수 후에 내재화된 IgG의 FcRn에 대한 결합을 유발하는 것으로 생각된다 ([Goebl NA, et al., 2008]; [Junghans RP, et al., 1996]). 대부분의 가용성 단백질은 내재화 후에 리소솜으로 향하지만, 내재화된 FcRn-결합 IgG는 형질 막으로 되돌아가고, 기본 분해 경로로부터 효과적으로 구출된다. 세포외 공간의 중성 pH에 노출시, IgG는 FcRn으로부터 해리되어 순환계로 되돌아갈 수 있다. 따라서, 항체의 연장된 혈청 반감기 특성은 Fc 단편에서 유지된다.
상기 샐비지 경로는 비변형된 단백질 약물에 비해 혈액 순환에서 반감기가 연장된 차세대 단백질 약물의 개발을 위한 하나의 메커니즘을 제공한다. 특히, 비변형된 단백질 약물은 순환 반감기가 짧고, 따라서 필요한 장기간의 치료 기간에 걸쳐 빈번한 투여가 필요하다. PEG화 융합 단백질 기술 (미국 식품의약국 (Food and Drug Administration), [Osborn BL, et al., 2002])을 포함한 많은 방법에 의해 단백질 약물의 반감기를 연장하기 위한 광범위한 노력이 이루어졌지만, 이러한 노력의 결과는 이상적이지 않았다.
본 발명의 일 목적은 Lrig-1(leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1) 단백질의 세포 외 도메인(extracellular domain)과 면역글로불린(immunoglobulin) Fc 영역을 포함하는 신규한 융합 단백질을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 융합 단백질을 코딩하는 핵산 분자에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 핵산 분자가 삽입된 발현 벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 발현 벡터가 형질 감염된 숙주 세포주를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 융합 단백질을 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명의 일 구현 예에 따르면, Lrig-1(leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1) 단백질의 세포 외 도메인(extracellular domain) 및 면역글로불린(immunoglobulin) Fc 영역을 포함하는 융합 단백질에 관한 것이다.
본 발명에서, 상기 "Lrig-1 단백질"은 조절 T 세포의 표면에 존재하는 1091개의 아미노산으로 이루어진 막관통 단백질로서, 세포 외 혹은 루멘 쪽의 루신 반복 서열(leucine-rich repeat(LRR))과 세개의 면역체 유사 도메인(immunoglobulin-like domains), 세포막 관통 서열 및 세포질 꼬리부분으로 구성되어 있다. LRIG 유전자 패밀리는 LRIG1, LRIG2와 LRIG3이 존재하며, 이들간의 아미노산들은 매우 보전적으로 구성되어 있다.
본 발명의 일 예시에서 상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인은 인간, 원숭이 등의 영장류, 마우스, 래트 등의 설치류, 등을 포함하는 포유류로부터 유래된 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인일 수 있다.
본 발명의 일 예시에서 상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인은 인간 유래 Lrig-1 단백질의 35번째 내지 794번째 아미노산 서열에 해당하는 서열번호 1로 표시될 수 있고, 이는 서열번호 2로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다(표 1 참조).
서열목록 서열정보
서열번호 1 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIF
서열번호 2 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttc
본 발명의 다른 예시에서 상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인은 마우스 유래 Lrig-1 단백질의 35번째 내지 794번째 아미노산 서열에 해당하는 서열번호 3으로 표시될 수 있고, 이는 서열번호 4로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다(표 2 참조).
서열목록 서열정보
서열번호 3 AQAGPRAPCA AACTCAGDSL DCSGRGLATL PRDLPSWTRS LNLSYNRLSE IDSAAFEDLT NLQEVYLNSN ELTAIPSLGA ASIGVVSLFL QHNKILSVDG SQLKSYLSLE VLDLSSNNIT EIRSSCFPNG LRIRELNLAS NRISILESGA FDGLSRSLLT LRLSKNRITQ LPVKAFKLPR LTQLDLNRNR IRLIEGLTFQ GLDSLEVLRL QRNNISRLTD GAFWGLSKMH VLHLEYNSLV EVNSGSLYGL TALHQLHLSN NSISRIQRDG WSFCQKLHEL ILSFNNLTRL DEESLAELSS LSILRLSHNA ISHIAEGAFK GLKSLRVLDL DHNEISGTIE DTSGAFTGLD NLSKLTLFGN KIKSVAKRAF SGLESLEHLN LGENAIRSVQ FDAFAKMKNL KELYISSESF LCDCQLKWLP PWLMGRMLQA FVTATCAHPE SLKGQSIFSV LPDSFVCDDF PKPQIITQPE TTMAVVGKDI RFTCSAASSS SSPMTFAWKK DNEVLANADM ENFAHVRAQD GEVMEYTTIL HLRHVTFGHE GRYQCIITNH FGSTYSHKAR LTVNVLPSFT KIPHDIAIRT GTTARLECAA TGHPNPQIAW QKDGGTDFPA ARERRMHVMP DDDVFFITDV KIDDMGVYSC TAQNSAGSVS ANATLTVLET PSLAVPLEDR VVTVGETVAF QCKATGSPTP RITWLKGGRP LSLTERHHFT PGNQLLVVQN VMIDDAGRYT CEMSNPLGTE RAHSQLSILP TPGCRKDGTT
서열번호 4 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACA
본 발명에서, "면역글로불린 Fc 영역"은, 면역글로불린의 중쇄와 경쇄 가변영역을 제외한, 중쇄 불변영역 2(CH2) 및/또는 중쇄 불변영역 3(CH3) 부분을 포함하는 부위를 의미한다. 상기 면역글로불린 Fc 영역은 본 발명의 단백질 결합체의 모이어티를 이루는 일 구성일 수 있다.
본 발명에서 상기 면역글로불린 Fc 영역은 중쇄 불변영역에 힌지(hinge) 부분을 포함함으로써 최종 제조될 융합 단백질의 구조적 유연성(flexibility)에 영향을 줄 수 있고, 융합 단백질의 생산성 및 안정성을 보다 높일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한 본 발명의 면역글로불린 Fc 영역은 천연형과 실질적으로 동등하거나 향상된 효과를 갖는 한, 면역 글로불린의 중쇄와 경쇄 가변영역만을 제외하고, 일부 또는 전체 중쇄 불변영역 1(CH1) 및/또는 경쇄 불변영역 1(CL1)을 포함하는 확장된 Fc영역일 수 있다. 또한, CH2 및/또는 CH3에 해당하는 상당히 긴 일부 아미노산 서열이 제거된 영역일 수도 있다.
예컨대, 본 발명의 면역글로불린 Fc 영역은 1) CH1 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인 및 CH4 도메인, 2) CH1 도메인 및 CH2 도메인, 3) CH1 도메인 및 CH3 도메인, 4) CH2 도메인 및 CH3 도메인, 5) CH1 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인 및 CH4 도메인 중 1개 또는 2개의 이상의 도메인과 면역글로불린 힌지 영역(또는 힌지 영역의 일부)와의 조합, 6) 중쇄 불변 영역 각 도메인과 경쇄 불변영역의 이량체일 수 있다. 그러나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 면역글로불린 Fc 영역은 천연형 아미노산 서열뿐만 아니라 이의 서열 유도체를 포함한다. 아미노산 서열 유도체란 천연 아미노산 서열 중의 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합에 의하여 상이한 서열을 가지는 것을 의미한다.
예를 들면, IgG Fc의 경우 결합에 중요하다고 알려진 214 내지 238, 297 내지 299, 318 내지 322 또는 327 내지 331번째 아미노산 잔기들이 변형을 위해 적당한 부위로서 이용될 수 있다.
또한, 이황화 결합을 형성할 수 있는 부위가 제거되거나, 천연형 Fc에서 N-말단의 몇몇 아미노산이 제거되거나 또는 천연형 Fc의 N-말단에 메티오닌 잔기가 부가될 수도 있는 등 다양한 종류의 유도체가 가능하다. 또한, 이펙터 기능을 없애기 위해 보체결합부위, 예로 C1q 결합부위가 제거될 수도 있고, ADCC (antibody dependent cell mediated cytotoxicity) 부위가 제거될 수도 있다. 이러한 면역글로불린 Fc 영역의 서열 유도체를 제조하는 기술은 국제특허공개 제WO 97/34631호, 국제특허공개 제96/32478호 등에 개시되어 있다.
분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질 및 펩타이드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다(H.Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly 간의 교환이다. 경우에 따라서는 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아크릴화(acrylation), 당화(glycosylation), 메틸화(methylation), 파네실화(farnesylation), 아세틸화(acetylation) 및 아미드화(amidation) 등으로 수식(modification)될 수도 있다.
상기 기술한 Fc 유도체는 본 발명의 Fc 영역과 동등한 생물학적 활성을 나타내며 Fc 영역의 열, pH 등에 대한 구조적 안정성을 증대시킨 것일 수 있다.
또한, 이러한 Fc 영역은 인간, 소, 염소, 돼지, 마우스, 래빗, 햄스터, 랫트 또는 기니아 픽 등의 동물의 생체 내에서 분리한 천연형으로부터 얻어질 수도 있고, 형질 전환된 동물세포 또는 미생물로부터 얻어진 재조합형 또는 이의 유도체일 수 있다. 여기서, 천연형으로부터 획득하는 방법은 전체 면역글로불린을 인간 또는 동물의 생체로부터 분리한 후, 단백질 분해효소를 처리하여 획득하는 방법일 수 있다. 파파인으로 처리할 경우에는 Fab 및 Fc로 절단되고, 펩신으로 처리할 경우에는 pF'c 및 F(ab)2로 절단된다. 크기 배제 크로마토그래피(size-exclusion chromatography) 등을 이용하여 Fc 또는 pF'c를 분리할 수 있다. 더 구체적인 실시 형태에서는 인간 또는 마우스 유래의 Fc 영역을 미생물로부터 수득한 재조합형 면역글로불린 Fc 영역이다.
또한, 면역글로불린 Fc 영역은 천연형 당쇄, 천연형에 비해 증가된 당쇄, 천연형에 비해 감소한 당쇄 또는 당쇄가 제거된 형태일 수 있다. 이러한 면역글로불린 Fc 당쇄의 증감 또는 제거에는 화학적 방법, 효소학적 방법 및 미생물을 이용한 유전 공학적 방법과 같은 통상적인 방법이 이용될 수 있다. 여기서, Fc에서 당쇄가 제거된 면역글로불린 Fc 영역은 보체(c1q)와의 결합력이 현저히 저하되고, 항체-의존성 세포독성 또는 보체-의존성 세포 독성이 감소 또는 제거되므로, 생체 내에서 불필요한 면역 반응을 유발하지 않는다. 이런 점에서 약물의 캐리어로서의 본래의 목적에 보다 부합하는 형태는 당쇄가 제거되거나 비당쇄화된 면역글로불린 Fc 영역이라 할 것이다.
본 발명에서 "당쇄의 제거(Deglycosylation)"는 효소로 당을 제거한 Fc 영역을 말하며, 비당쇄화(Aglycosylation)는 원핵동물, 더 구체적인 실시 형태에서는 대장균에서 생산하여 당쇄화되지 않은 Fc 영역을 의미한다.
한편, 면역글로불린 Fc 영역은 인간 또는 소, 염소, 돼지, 마우스, 래빗, 햄스터, 랫트, 기니아 픽 등의 동물 유래일 수 있으며, 바람직한 일 예시로 인간 또는 마우스 유래일 수 있다.
또한, 본 발명의 면역글로불린 Fc 영역은 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM 유래 Fc 영역, 중쇄 불변영역 2(CH2), 중쇄 불변영역 3(CH3), 힌지(hinge), 이의 단편, 또는 이들의 조합(combination), 또는 이들의 조합을 포함하는 하이브리드 Fc(hybrid Fc)일 수 있다.
한편, 본 발명에서 "조합(combination)"이란 이량체 또는 다량체를 형성할 때, 동일 기원 단쇄 면역글로불린 Fc 영역, 중쇄 불변영역 2(CH2) 또는 중쇄 불변영역 3(CH3)을 코딩하는 폴리펩타이드가 상이한 기원의 단쇄 폴리펩타이드와 결합을 형성하는 것을 의미한다. 즉, IgG, IgA, IgM, IgD 또는 IgE 유래의 Fc 영역, 중쇄 불변영역 2(CH2) 또는 중쇄 불변영역 3(CH3)으로부터 선택된 2개 이상의 단편으로부터 이량체 또는 다량체의 제조가 가능하다.
본 발명에서 상기 "하이브리드 Fc"는 인간 IgG 서브클래스의 조합 또는 인간 IgD 및 IgG의 조합으로부터 유도될 수 있다. 하나의 실시예에서, 상기 하이브리드 Fc는 예를 들어, IgD 힌지 영역 및 CH2 N-말단 영역 + IgG4 CH2 및 CH3 영역을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 한국등록특허 제0897938호에 개시된 하이브리드 Fc 형태를 동일하게 차용하여 사용할 수 있고, 본 명세서에 참조로서 도입된다. 본 발명에서 상기 하이브리드 Fc는 생물학적 활성 분자, 폴리펩타이드 등에 결합하는 경우, 생물학적 활성 분자의 혈청 반감기를 증가시킬 뿐만 아니라 Fc-폴리펩타이드 융합 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드가 발현될 때 폴리펩타이드의 발현 수준을 높이는 효과가 있다.
본 발명의 일 예시로 상기 면역글로불린 Fc 영역은 IgG, IgA, IgM, IgD 또는 IgE 유래의 Fc 영역이거나, 혹은 상기 IgG, IgA, IgM, IgD 또는 IgE 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 예시로 상기 면역글로불린 Fc 영역은 인간 혈액에 가장 풍부한 IgG 또는 IgM 유래 Fc 영역이거나, 혹은 상기 IgG 또는 IgM 유래 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함할 수 있고, 다른 예시로 리간드 결합 단백질의 반감기를 향상시키는 것으로 공지된 IgG 유래 Fc 영역이거나, 혹은 상기 IgG 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함할 수 있고, 또 다른 예시로 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 유래 Fc 영역이거나, 혹은 상기 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함할 수 있으며, 또 다른 예시로 IgG1 또는 IgG2 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함할 수 있다.
본 발명에서 바람직한 예시로서 상기 면역글로불린 Fc 영역은 서열번호 5로 표시되는 인간 IgG1 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하거나, 서열번호 6으로 표시되는 마우스 IgG2 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다(하기 표 3 참조).
서열목록 서열정보
서열번호 5 LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 6 IFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
본 발명의 일 예시로, 상기 면역글로불린 Fc 영역은 IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, 또는 아바타셉트(Abatacept) 유래의 힌지 영역을 포함할 수 있고, 또 다른 예시로 IgG, IgD 또는 아바타셉트(Abatacept) 유래의 힌지 영역을 포함할 수 있으며, 혹은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgD 또는 아바타셉트(Abatacept) 유래의 힌지 영역을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 바람직한 예시로서 상기 면역글로불린 Fc 영역은 서열번호 7로 표시되는 인간 IgG1 유래의 힌지 영역; 서열번호 8로 표시되는 마우스 IgG2 유래의 힌지 영역; 서열번호 9로 표시되는 인간 IgD 유래의 힌지 영역; 및 서열번호 10으로 표시되는 아바타셉트(Abatacept)의 힌지 영역;으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함함으로써(하기 표 4 참조) 최종 제조될 융합 단백질의 구조적 유연성(flexibility)을 높이고, 융합 단백질의 생산성 및 안정성을 현저히 향상시킬 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
서열목록 서열정보
서열번호 7 EPKSSDKTHTSPPCPAPELLGGPSVF
서열번호 8 EPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVF
서열번호 9 RNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVF
서열번호 10 EPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVF
본 발명에서 상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인과 Fc 영역이 링커를 통해 연결되는 경우, 상기 링커는 Fc 단편의 N-말단, C-말단 또는 유리기 (free radical)에 연결될 수 있고, Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인의 N-말단, C-말단 또는 유리기에 연결될 수 있다. 링커가 펩타이드 링커인 경우, 연결은 임의의 부위에서 일어날 수 있다. 예를 들면, 상기 링커는 상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인의 C-말단 및 상기 면역글로불린의 Fc 영역의 N-말단에 연결될 수 있고, 혹은 상기 면역글로불린의 Fc 영역의 C-말단 및 상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인의 N-말단에 연결될 수 있다.
본 발명에서 상기 "링커(linker)"는 융합 단백질 내 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인과 면역글로불린 Fc 영역 사이의 간섭 효과를 줄여 타겟 세포에서 상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인의 목적하는 활성을 높일 수 있다. 또한, 본 발명에서 상기 링커는 목적하는 질환의 조직 또는 세포 내에서 과발현되는 효소에 의해 절단될 수 있는 서열을 포함할 수 있다. 상기와 같이 과발현되는 효소에 의해 절단될 수 있는 경우에는 Fc 부분으로 인하여 폴리펩타이드의 활성이 저하되는 것을 효과적으로 방지할 수 있다.
본 발명의 일 예시로서 상기 링커는 1 내지 100개의 아미노산을 갖는 것이 바람직하나, 이에 제한되지는 않으며, Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인과 면역글로불린 Fc 영역을 분리시킬 수 있는 어떠한 펩타이드라도 가능하다. 상기 링커를 구성하는 아미노산 서열에는 특별한 제한은 없으나, 글라이신(G) 및 세린(S)을 포함하거나, 이들을 반복적으로 또는 무작위적 패턴으로 포함하는 것이 바람직하다. 그러한 예로서, 상기 링커는 서열번호 11로 표시되는 펩타이드 링커; 및 서열번호 12로 표시되는 펩타이드 링커; 중 적어도 하나를 포함할 수 있고, 혹은 (GGGGS)N(N은 1 이상의 정수, 바람직하게는 1 내지 20의 정수임)의 아미노산 서열을 포함함으로써(하기 표 5 참조), 세포 내 활성 물질의 안정성을 높이고, 생산성을 보다 향상시킬 수 있다.
서열목록 서열정보
서열번호 11 GS
서열번호 12 GGG
또한, 본 발명에서 상기 링커의 일 예시로, 혈액 내에 가장 많이 존재하는 인간 알부민의 282번 내지 314번째 부분에 위치한 33개의 아미노산으로 이루어진 펩타이드 링커, 보다 바람직하게는 292번 내지 304번째 부분에 위치한 13개의 아미노산으로 이루어진 펩타이드 링커일 수 있으며, 이러한 부분은 3차원적인 구조상 대부분 외부에 노출된 부분으로서 체내에서 면역반응을 유도할 가능성이 최소화된 부분이다. 단, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명에서 상기 링커 및 Fc 영역이 별개로 발현된 후에 서로 결합될 때, 링커는 당업계에 알려진 가교제일 수 있다. 상기 가교제는, 예를 들어, 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄 (1,1-bis(diazoacetyl)-2-phenylethane), 글루타르알데하이드 (glutaraldehyde), 4-아지도살리실릭산 (4-azidosalicylic acid)과 같은 N-하이드로옥시석신이미드 에스테르 (N-hydroxysuccinimide ester), 3,3'-디사이오비스(석신이미딜프로피오네이트) (3,3'-dithiobis(succinimidylpropionate))와 같은 디석신이미딜에스테르 (disuccinimidyl esters)를 포함하는 이미도에스테르 (imidoesters), 및 비스-N-말레이미도-1,8-옥테인과 같은 이중 기능적 말레이미드 (bifunctional maleimides)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 일 예시는 상기 서열번호 1로 표시되는 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역; 서열번호 5로 표시되는 인간 IgG1 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하는 융합 단백질일 수 있다(하기 표 6 참조). 하기 표 6의 서열번호 13 내지 16으로 표시되는 융합 단백질은 하기 표 7의 서열번호 17 내지 20으로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다(하기 표 7 참조)
서열목록 서열정보
서열번호 13 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFEPKSSDKTHT SPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 14 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 15 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 16 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열목록 서열정보
서열번호 17 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGAGCCAAAGTCCTCTGATAAGACACACACCTCTCCACCATGCCCAGCACCAGAGCTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTC CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 18 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGagcctcggggccctaccatcaagccctgccccccttgcaagtgccctgcccctaatctgctgggcggaccctccgtgttcCTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 19 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttccgcaacaccggccgcggcggcgaggagaagaagaaggagaaggagaaggaggagcaggaggagcgcgagaccaagacccccgagtgccccagccacacccagcccctgggcgtgttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 20 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcgaaccgaaatcttctgacaaaacccacacctctccgccgtctccggctccggaactgctgggtggttcttctgttttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 일 예시는 상기 서열번호 3로 표시되는 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역; 서열번호 5로 표시되는 인간 IgG1 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하는 융합 단백질일 수 있다(하기 표 8 참조). 하기 표 8의 서열번호 21 내지 24로 표시되는 융합 단백질은 각각 하기 표 9의 서열번호 25 내지 28으로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다(하기 표 9 참조)
서열목록 서열정보
서열번호 21 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTEPKSSDKTHT SPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 22 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 23 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 24 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열목록 서열정보
서열번호 25 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGAGCCAAAGTCCTCTGATAAGACACACACCTCTCCACCATGCCCAGCACCAGAGCTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTC CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 26 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGagcctcggggccctaccatcaagccctgccccccttgcaagtgccctgcccctaatctgctgggcggaccctccgtgttcCTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 27 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAcgcaacaccggccgcggcggcgaggagaagaagaaggagaaggagaaggaggagcaggaggagcgcgagaccaagacccccgagtgccccagccacacccagcccctgggcgtgttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 28 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAgaaccgaaatcttctgacaaaacccacacctctccgccgtctccggctccggaactgctgggtggttcttctgttttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 다른 일 예시는 상기 서열번호 3으로 표시되는 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역; 서열번호 6으로 표시되는 마우스 IgG2 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하는 융합 단백질일 수 있다(하기 표 10 참조). 하기 표 10의 서열번호 29 내지 32로 표시되는 융합 단백질은 각각 하기 표 11의 서열번호 33 내지 36으로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다(하기 표 11 참조).
서열목록 서열정보
서열번호 29 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTEPKSSDKTHTSPPCPAPELLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 30 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVF IFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 31 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 32 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVF IFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열목록 서열정보
서열번호 33 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGAGCCAAAGTCCTCTGATAAGACACACACCTCTCCACCATGCCCAGCACCAGAGCTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTC atcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
서열번호 34 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGagcctcggggccctaccatcaagccctgccccccttgcaagtgccctgcccctaatctgctgggcggaccctccgtgttcatcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
서열번호 35 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAcgcaacaccggccgcggcggcgaggagaagaagaaggagaaggagaaggaggagcaggaggagcgcgagaccaagacccccgagtgccccagccacacccagcccctgggcgtgttc atcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
서열번호 36 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAgaaccgaaatcttctgacaaaacccacacctctccgccgtctccggctccggaactgctgggtggttcttctgttttc atcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 또 다른 일 예시는 상기 서열번호 1로 표시되는 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 서열번호 11로 표시되는 링커; 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역; 서열번호 5로 표시되는 인간 IgG1 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하는 융합 단백질일 수 있다(하기 표 12 참조). 하기 표 12의 서열번호 37 내지 40으로 표시되는 융합 단백질은 각각 하기 표 13의 서열번호 41 내지 44로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다(하기 표 13 참조).
서열목록 서열정보
서열번호 37 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFGSEPKSSDKTHT SPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 38 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 39 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFGSRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 40 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFGSEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열목록 서열정보
서열번호 41 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGGATCCGAGCCAAAGTCCTCTGATAAGACACACACCTCTCCACCATGCCCAGCACCAGAGCTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTC CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 42 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGGATCCGagcctcggggccctaccatcaagccctgccccccttgcaagtgccctgcccctaatctgctgggcggaccctccgtgttcCTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 43 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGGATCCcgcaacaccggccgcggcggcgaggagaagaagaaggagaaggagaaggaggagcaggaggagcgcgagaccaagacccccgagtgccccagccacacccagcccctgggcgtgttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 44 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGGATCCgaaccgaaatcttctgacaaaacccacacctctccgccgtctccggctccggaactgctgggtggttcttctgttttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 또 다른 일 예시는 상기 서열번호 3으로 표시되는 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 서열번호 11로 표시되는 링커; 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역; 서열번호 5로 표시되는 인간 IgG1 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하는 융합 단백질일 수 있다(하기 표 14 참조). 하기 표 14의 서열번호 45 내지 48로 표시되는 융합 단백질은 각각 하기 표 15의 서열번호 49 내지 52로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다(하기 표 15 참조).
서열목록 서열정보
서열번호 45 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGSEPKSSDKTHT SPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 46 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 47 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGSRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 48 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGSEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열목록 서열정보
서열번호 49 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGATCCGAGCCAAAGTCCTCTGATAAGACACACACCTCTCCACCATGCCCAGCACCAGAGCTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTC CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 50 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGATCCGagcctcggggccctaccatcaagccctgccccccttgcaagtgccctgcccctaatctgctgggcggaccctccgtgttcCTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 51 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGATCCcgcaacaccggccgcggcggcgaggagaagaagaaggagaaggagaaggaggagcaggaggagcgcgagaccaagacccccgagtgccccagccacacccagcccctgggcgtgttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 52 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGATCCgaaccgaaatcttctgacaaaacccacacctctccgccgtctccggctccggaactgctgggtggttcttctgttttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 또 다른 일 예시는 상기 서열번호 3으로 표시되는 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 서열번호 11로 표시되는 링커; 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역; 서열번호 6로 표시되는 마우스 IgG2 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하는 융합 단백질일 수 있다(하기 표 16 참조). 하기 표 16의 서열번호 53 내지 56으로 표시되는 융합 단백질은 각각 하기 표 17의 서열번호 57 내지 60으로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다(하기 표 17 참조).
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서열번호 53 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGSEPKSSDKTHTSPPCPAPELLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 54 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVF IFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 55 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGSRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVF IFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 56 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGSEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVF IFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열목록 서열정보
서열번호 57 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGATCCGAGCCAAAGTCCTCTGATAAGACACACACCTCTCCACCATGCCCAGCACCAGAGCTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTC atcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
서열번호 58 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGATCCGagcctcggggccctaccatcaagccctgccccccttgcaagtgccctgcccctaatctgctgggcggaccctccgtgttcatcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
서열번호 59 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGATCCcgcaacaccggccgcggcggcgaggagaagaagaaggagaaggagaaggaggagcaggaggagcgcgagaccaagacccccgagtgccccagccacacccagcccctgggcgtgttc atcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
서열번호 60 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGATCCgaaccgaaatcttctgacaaaacccacacctctccgccgtctccggctccggaactgctgggtggttcttctgttttc atcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 또 다른 일 예시는 상기 서열번호 1로 표시되는 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 서열번호 12로 표시되는 링커; 서열번호 11로 표시되는 링커; 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역; 서열번호 5로 표시되는 인간 IgG1 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하는 융합 단백질일 수 있다(하기 표 18 참조). 하기 표 18의 서열번호 61 내지 64로 표시되는 융합 단백질은 하기 표 19의 서열번호 65 내지 68로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다(하기 표 19 참조).
서열목록 서열정보
서열번호 61 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFGGGGSEPKSSDKTHT SPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 62 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 63 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFGGGGSRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 64 AGPRAPCAAACTCAGDSLDCGGRGLAALPGDLPSWTRSLNLSYNKLSEIDPAGFEDLPNLQEVYLNNNELTAVPSLGAASSHVVSLFLQHNKIRSVEGSQLKAYLSLEVLDLSLNNITEVRNTCFPHGPPIKELNLAGNRIGTLELGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVRAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLNSLEVLKLQRNNISKLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSIARIHRKGWSFCQKLHELVLSFNNLTRLDEESLAELSSLSVLRLSHNSISHIAEGAFKGLRSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFSGLDSLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLEGLEHLNLGGNAIRSVQFDAFVKMKNLKELHISSDSFLCDCQLKWLPPWLIGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVPPESFVCDDFLKPQIITQPETTMAMVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLTNADMENFVHVHAQDGEVMEYTTILHLRQVTFGHEGRYQCVITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKTPHDITIRTTTVARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDAGVYSCTAQNSAGSISANATLTVLETPSLVVPLEDRVVSVGETVALQCKATGNPPPRITWFKGDRPLSLTERHHLTPDNQLLVVQNVVAEDAGRYTCEMSNTLGTERAHSQLSVLPAAGCRKDGTTVGIFGGGGSEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열목록 서열정보
서열번호 65 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGGCGGTGGCGGATCCGAGCCAAAGTCCTCTGATAAGACACACACCTCTCCACCATGCCCAGCACCAGAGCTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTC CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 66 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGGCGGTGGCGGATCCGagcctcggggccctaccatcaagccctgccccccttgcaagtgccctgcccctaatctgctgggcggaccctccgtgttcCTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 67 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGGCGGTGGCGGATCCcgcaacaccggccgcggcggcgaggagaagaagaaggagaaggagaaggaggagcaggaggagcgcgagaccaagacccccgagtgccccagccacacccagcccctgggcgtgttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 68 agccacggggaaccctccgccccgcatcacctggttcaagggggaccgcccgctgagcctcactgagcggcaccacctgacccctgacaaccagctcctggtggttcagaacgtggtggcagaggatgcgggccgatatacctgtgagatgtccaacaccctgggcacggagcgagctcacagccagctgagcgtcctgcccgcagcaggctgcaggaaggatgggaccacggtaggcatcttcGGCGGTGGCGGATCCgaaccgaaatcttctgacaaaacccacacctctccgccgtctccggctccggaactgctgggtggttcttctgttttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 또 다른 일 예시는 상기 서열번호 3으로 표시되는 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 서열번호 12로 표시되는 링커; 서열번호 11로 표시되는 링커; 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역; 서열번호 5로 표시되는 인간 IgG1 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하는 융합 단백질일 수 있다(하기 표 20 참조). 하기 표 20의 서열번호 69 내지 72로 표시되는 융합 단백질은 각각 하기 표 21의 서열번호 73 내지 76으로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다(하기 표 21 참조).
서열목록 서열정보
서열번호 69 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGGGGSEPKSSDKTHT SPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 70 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 71 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGGGGSRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 72 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGGGGSEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열목록 서열정보
서열번호 73 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGCGGTGGCGGATCCGAGCCAAAGTCCTCTGATAAGACACACACCTCTCCACCATGCCCAGCACCAGAGCTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTC CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 74 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGCGGTGGCGGATCCGagcctcggggccctaccatcaagccctgccccccttgcaagtgccctgcccctaatctgctgggcggaccctccgtgttcCTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 75 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGCGGTGGCGGATCCcgcaacaccggccgcggcggcgaggagaagaagaaggagaaggagaaggaggagcaggaggagcgcgagaccaagacccccgagtgccccagccacacccagcccctgggcgtgttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
서열번호 76 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGCGGTGGCGGATCCgaaccgaaatcttctgacaaaacccacacctctccgccgtctccggctccggaactgctgggtggttcttctgttttc CTGTTTCCTCCAAAGCCCAAGGACACACTGATGATCTCCAGGACACCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACTCTACCTATAGGGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCCCCAATCGAGAAGACAATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGGGATGAGCTGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCTGAGAATAACTACAAGACAACCCCACCCGTGCTGGATTCTGACGGCAGCTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAAGCACTGCACAATCACTACACCCAGAAATCACTGTCACTGAGCCCTGGCAAA
본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 또 다른 일 예시는 상기 서열번호 3으로 표시되는 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 서열번호 12로 표시되는 링커; 서열번호 11로 표시되는 링커; 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역; 서열번호 6으로 표시되는 마우스 IgG2 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함하는 융합 단백질일 수 있다(하기 표 22 참조). 하기 표 22의 서열번호 77 내지 80로 표시되는 융합 단백질은 하기 표 23의 서열번호 81 내지 84로 표시되는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다(하기 표 23 참조).
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서열번호 77 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGGGGSEPKSSDKTHTSPPCPAPELLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 78 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVF IFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 79 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGGGGSRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 80 AQAGPRAPCAAACTCAGDSLDCSGRGLATLPRDLPSWTRSLNLSYNRLSEIDSAAFEDLTNLQEVYLNSNELTAIPSLGAASIGVVSLFLQHNKILSVDGSQLKSYLSLEVLDLSSNNITEIRSSCFPNGLRIRELNLASNRISILESGAFDGLSRSLLTLRLSKNRITQLPVKAFKLPRLTQLDLNRNRIRLIEGLTFQGLDSLEVLRLQRNNISRLTDGAFWGLSKMHVLHLEYNSLVEVNSGSLYGLTALHQLHLSNNSISRIQRDGWSFCQKLHELILSFNNLTRLDEESLAELSSLSILRLSHNAISHIAEGAFKGLKSLRVLDLDHNEISGTIEDTSGAFTGLDNLSKLTLFGNKIKSVAKRAFSGLESLEHLNLGENAIRSVQFDAFAKMKNLKELYISSESFLCDCQLKWLPPWLMGRMLQAFVTATCAHPESLKGQSIFSVLPDSFVCDDFPKPQIITQPETTMAVVGKDIRFTCSAASSSSSPMTFAWKKDNEVLANADMENFAHVRAQDGEVMEYTTILHLRHVTFGHEGRYQCIITNHFGSTYSHKARLTVNVLPSFTKIPHDIAIRTGTTARLECAATGHPNPQIAWQKDGGTDFPAARERRMHVMPDDDVFFITDVKIDDMGVYSCTAQNSAGSVSANATLTVLETPSLAVPLEDRVVTVGETVAFQCKATGSPTPRITWLKGGRPLSLTERHHFTPGNQLLVVQNVMIDDAGRYTCEMSNPLGTERAHSQLSILPTPGCRKDGTTGGGGSEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열목록 서열정보
서열번호 81 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGCGGTGGCGGATCCGAGCCAAAGTCCTCTGATAAGACACACACCTCTCCACCATGCCCAGCACCAGAGCTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTC atcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
서열번호 82 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGCGGTGGCGGATCCGagcctcggggccctaccatcaagccctgccccccttgcaagtgccctgcccctaatctgctgggcggaccctccgtgttcatcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
서열번호 83 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGCGGTGGCGGATCCcgcaacaccggccgcggcggcgaggagaagaagaaggagaaggagaaggaggagcaggaggagcgcgagaccaagacccccgagtgccccagccacacccagcccctgggcgtgttc atcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
서열번호 84 GTGTAAGGCCACCGGCTCTCCAACACCAAGGATCACCTGGCTGAAGGGCGGCAGGCCCCTGAGCCTGACAGAGCGCCACCACTTCACCCCTGGCAATCAGCTGCTGGTGGTGCAGAACGTGATGATCGATGACGCCGGCAGGTATACATGCGAGATGAGCAATCCTCTGGGCACCGAGAGGGCACACTCCCAGCTGTCTATCCTGCCTACCCCAGGCTGCCGGAAGGATGGCACCACAGGCGGTGGCGGATCCgaaccgaaatcttctgacaaaacccacacctctccgccgtctccggctccggaactgctgggtggttcttctgttttc atcttcccacccaagatcaaggacgtgctgatgatctccctgtcccccatcgtgacctgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatcagttggttcgtgaacaacgtggaagtgcacaccgcccagacccagacccacagagaggactacaactccaccctgcgggtggtgtccgccctgcccatccagcaccaggactggatgtccggcaaagaattcaagtgcaaagtgaacaacaaggacctgcctgcccccatcgagcggaccatctccaagcccaagggctccgtgcgggctccccaggtgtacgtgctgccccctccagaggaagagatgaccaagaagcaggtcacactgacctgcatggtcaccgacttcatgcccgaggacatctacgtggaatggaccaacaatggcaagaccgagctgaactacaagaacaccgagcctgtgctggactccgacggctcctacttcatgtactccaagctgcgggtggaaaagaagaactgggtcgagcggaactcctactcctgctccgtggtgcacgagggcctgcacaaccaccacaccaccaagtccttctcccggacccccggcaaa
본 발명에서 제공하는 상기의 융합 단백질은 이펙터 T 세포(effector T cell)에 존재하는 Lrig-1 단백질에 대한 리간드와 상호 작용하여, Lrig-1 단백질을 표면에 포함하고 있는 조절 T 세포(regulatory T cell, Treg cell)와 이펙터 T 세포간의 상호 작용을 저해함에 따라 조절 T 세포의 활성을 억제하고 이펙터 T 세포의 활성은 유지 혹은 상승시켜 암 세포 중에서도 특히 고형암 세포의 성장을 효과적으로 억제할 수 있다.
본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 본 발명에서 제공하는 상기 융합 단백질을 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.
본 발명의 핵산 분자는 본 발명에서 제공하는 융합 단백질의 아미노산 서열을 당업자에게 알려진 바와 같이 폴리뉴클레오티드 서열로 번역된 핵산 분자 모두를 포함한다. 그러므로 ORF(open reading frame)에 의한 다양한 폴리뉴클레오티드 서열이 제조될 수 있으며 이 또한 모두 본 발명의 핵산 분자에 포함된다.
본 발명의 바람직한 일 예시로, 상기 핵산 분자는 서열번호 17 내지 20, 25 내지 28, 33 내지 36, 41 내지 44, 49 내지 52, 57 내지 60, 65 내지 68, 73 내지 76 및 81 내지 84 중 어느 하나로 표시될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 본 발명에서 제공하는 상기 단리된 핵산 분자가 삽입된 발현 벡터를 제공한다.
본 발명에서 상기 "벡터"는 어떤 핵산 분자가 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 상기 핵산 분자이다. 벡터의 한 가지 유형은, 추가적인 DNA 세그멘트가 결찰될 수 있는 원형 이중가닥 DNA를 가리키는 "플라스미드"이다. 또 다른 유형의 벡터는 파지 벡터이다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스성 벡터로, 추가적인 DNA 세그멘트가 바이러스 게놈에 결찰될 수 있다. 어떤 벡터들은 그들이 유입된 숙주세포에서 자율적인 복제를 할 수 있다(예컨대, 박테리아성 벡터는 박테리아성 복제 기원을 갖는 에피솜 포유류 벡터). 기타 벡터(예컨대, 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주세포에 유입되면서 숙주세포의 게놈에 통합될 수 있고, 그럼으로써, 숙주 게놈과 함께 복제된다. 뿐만 아니라, 어떤 벡터는 이들이 작동차원에서 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이와 같은 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터" 또는 단순히 "발현 벡터"라 명명된다. 일반적으로 재조합 DNA 기법에서 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태로 존재한다. 본 명세서에서, "플라스미드"와 "벡터"는, 플라스미드가 벡터 중 가장 통상적으로 사용되는 형태이기 때문에, 상호 교환하여 사용될 수 있다.
본 발명에서 상기 발현 벡터의 구체적인 예시로는 상업적으로 널리 사용되는 pCDNA 벡터, F, R1, RP1, Col, pBR322, ToL, Ti 벡터; 코스미드; 람다, 람도이드(lambdoid), M13, Mu, p1 P22, Qμ, T-even, T2, T3, T7 등의 파아지; 식물 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 당업자에게 발현 벡터로 알려진 모든 발현 벡터는 본 발명에 사용 가능하고, 발현 벡터를 선택할 때에는 목적으로 하는 숙주 세포의 성질에 따른다. 숙주세포로의 벡터 도입 시 인산칼슘 트랜스펙션, 바이러스 감염, DEAE-덱스트란 조절 트랜스펙션, 리포펙타민 트랜스펙션 또는 전기천공법에 의해 수행될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며 당업자는 사용하는 발현 벡터 및 숙주 세포에 알맞은 도입 방법을 선택하여 이용할 수 있다. 바람직하게 벡터는 하나 이상의 선별 마커를 함유하나 이에 한정되지 않으며, 선별 마커를 포함하지 않은 벡터를 이용하여 생산물 생산 여부에 따라 선별이 가능하다. 선별 마커의 선택은 목적하는 숙주 세포에 의해 선별되며, 이는 이미 당업자에게 알려진 방법을 이용하므로 본 발명은 이에 제한을 두지 않는다.
본 발명의 핵산 분자를 정제를 용이하게 하기 위하여 태그 서열을 발현 벡터 상에 삽입하여 융합시킬 수 있다. 상기 태그로는 헥사-히스티딘 태그, 헤마글루티닌 태그, myc 태그 또는 flag 태그를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니며 당업자에게 알려진 정제를 용이하게 하는 태그는 모두 본 발명에서 이용 가능하다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 다르면, 본 발명에서 제공하는 상기 발현 벡터가 형질 감염된 숙주 세포주를 제공한다.
본 발명에서 상기 "숙주 세포"에는 폴리펩타이드 삽입물의 편입을 위한 벡터(들)의 수령자(recipient)일 수 있거나 또는 수령자였던 개별적인 세포 또는 세포배양물이 포함된다. 숙주 세포에는 단일 숙주 세포의 자손이 포함되고, 상기 자손은 자연적인, 우발적인 또는 고의의 돌연변이 때문에 반드시 원래 모세포와 완전히 동일(형태학상 또는 게놈 DNA 보완체에서)하지 않을 수 있다. 숙주 세포에는 본원의 폴리펩타이드(들)로 체내에서 형질주입된 세포가 포함된다.
본 발명에 있어서, 상기 숙주 세포로는 포유동물, 식물, 곤충, 균류 또는 세포성 기원의 세포를 포함할 수 있고, 예를 들면 대장균, 스트렙토미세스, 살모넬라 티피뮤리움 등의 박테리아 세포; 효모 세포, 피치아 파스 토리스 등의 균류세포; 드로조필라, 스포도프테라 Sf9 세포 등의 곤충 세포; CHO(중국 햄스터 난소 세포, Chinese hamster ovary cells), SP2/0(생쥐 골수종), 인간 림프아구(Human lymphoblastoid), COS, NSO(생쥐 골 수종), 293T, 보우 멜라노마 세포, HT-1080, BHK(베이비 햄스터 신장세포, Baby Hamster Kidney cells), HEK(인간 배아신장 세포, Human Embryonic Kidney cells) 또는 PERC.6(인간 망막 세포)의 동물 세포; 또는 식물 세포일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 당업자에게 알려진 숙주 세포주로 사용 가능한 세포는 모두 이용 가능하다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 본 발명에서 제공하는 융합 단백질을 유효 성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 "암" 포유류에서 전형적으로 조절되지 않는 세포 성장으로 특징 지어진 생리적 상태를 나타내거나 가리킨다. 본 발명에서 예방, 개선 또는 치료의 대상이 되는 암은 고형 장기(solid organ)에서 비정상적으로 세포가 성장하여 발생한 덩어리로 이루어진 고형암(solid tumor)일 수 있고, 고형 장기의 부위에 따라 위암, 간암, 교세포종, 난소암, 대장암, 두경부암, 방광암, 신장세포암, 유방암, 전이암, 전립선암, 췌장암, 흑색종 또는 폐암 등일 수 있으며, 바람직하게는 흑색종 또는 대장암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
한편, 본 발명에서, "예방"은 본 발명의 약학 조성물을 이용하여 질환의 증상을 차단하거나, 그 증상을 억제 또는 지연시키는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에서, "치료"는 본 발명의 약학 조성물을 이용하여 질환의 증상이 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 약학 조성물은 캡슐, 정제, 과립, 주사제, 연고제, 분말 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에서 상기 약학 조성물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사 용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형화할 수 있다.
한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말디톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항 응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 상기 약학 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다.
본 발명에서 상기 "비경구"란, 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입기술을 포함한다. 본 발명의 약학 조성물은 또한 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여 시간, 투여 경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약무 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 50mg/kg 또는 0.001 내지 50mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 의약 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형화될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 본 발명에 따른 융합 단백질 또는 이를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명의 융합 단백질은 이펙터 T 세포(effector T cell)에 존재하는 Lrig-1 단백질에 대한 리간드와 상호 작용하여, Lrig-1 단백질을 표면에 포함하고 있는 조절 T 세포(Treg cell)와 이펙터 T 세포간의 상호 작용을 저해함에 따라 조절 T 세포의 활성을 억제하고 이펙터 T 세포의 활성은 유지 혹은 상승시켜 암 세포 중에서도 특히 고형암 세포의 성장을 효과적으로 억제할 수 있다.
본 발명에서 상기 "개체"는 암의 발병이 의심되는 개체로서, 상기 암 발병의 의심 개체는 해당 질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 가축 등을 포함하는 포유동물을 의미하나, 본 발명의 융합 단백질 또는 이를 포함하는 상기 조성물로 치료 가능한 개체는 제한 없이 포함된다.
본 발명의 방법은 융합 단백질 또는 이를 포함하는 조성물을 약학적 유효량으로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 본 발명의 목적상, 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.
한편, 이에 제한되지 않으나, 상기 암의 예방 또는 치료 방법은 하나 이상의 암 질환에 대한 치료적 활성을 가지는 화합물 또는 물질을 투여하는 것을 더 포함하는 병용 요법일 수 있다.
본 발명에서 상기 "병용"은 동시, 개별 또는 순차 투여를 나타내는 것으로 이해되어야 한다. 상기 투여가 순차 또는 개별적인 경우, 2차 성분 투여의 간격은 상기 병용의 이로운 효과를 잃지 않도록 하는 것이어야 한다.
본 발명에서 상기 융합 단백질의 투여 용량은 환자 체중 1 kg당 약 0.0001 μg 내지 500 mg일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 제공하는 융합 단백질은 이펙터 T 세포(effector T cell)에 존재하는 Lrig-1 단백질에 대한 리간드와 상호 작용하여, Lrig-1 단백질을 표면에 포함하고 있는 조절 T 세포(Treg cell)와 이펙터 T 세포간의 상호 작용을 저해함에 따라 조절 T 세포의 활성을 억제하고 이펙터 T 세포의 활성은 유지 혹은 상승시켜 암 세포 중에서도 특히 고형암 세포의 성장을 효과적으로 억제할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 단백질의 구조를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 단백질의 구조를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 단백질의 항원 결정기(epitope)를 예측한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 단백질의 항원 결정기(epitope)를 예측한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 mRNA의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 mRNA의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 mRNA의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1, Lrig-2 및 Lrig-3 mRNA의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 조절 T 세포와 비-조절 T 세포 내 Lrig-1 단백질의 발현량 비교 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 조절 T 세포의 표면에 Lrig-1 단백질의 발현을 나타낸 것이다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 융합 단백질의 이펙터 T 세포에 대한 조절 T 세포의 억제능을 저해하는 효과를 나타낸 것이다.
도 12는 본 발명의 일 실시예에 따른 융합 단백질에 의해 인식되는 리간드가 존재하는 T 세포 서브세트(subset)를 나타낸 것이다.
도 13은 본 발명의 일 실시예에 따른 융합 단백질을 이용한 암 치료 실험의 설계도를 나타낸 것이다.
도 14은 본 발명의 일 실시예에 따른 융합 단백질을 이용한 암 치료 효과를 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 15는 본 발명의 일 실시예에 따른 융합 단백질을 이용한 암 치료 효과를 분석한 결과를 나타낸 것이다.
본 발명의 일 구현 예에 따르면, Lrig-1(leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1) 단백질의 세포 외 도메인(extracellular domain) 및 면역글로불린(immunoglobulin) Fc 영역을 포함하는 융합 단백질에 관한 것이다.
본 발명의 일 예시로 상기 면역글로불린 Fc 영역은 IgG, IgA, IgM, IgD 또는 IgE 유래의 Fc 영역이거나, 혹은 상기 IgG, IgA, IgM, IgD 또는 IgE 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 예시로 상기 면역글로불린 Fc 영역은 IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, 또는 아바타셉트(Abatacept) 유래의 힌지 영역을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인은 링커를 통해 상기 면역글로불린 Fc 영역의 N-말단 또는 C-말단에 연결될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 본 발명의 융합 단백질을 유효 성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 제공하는 융합 단백질은 이펙터 T 세포(effector T cell)에 존재하는 Lrig-1 단백질에 대한 리간드와 상호 작용하여, Lrig-1 단백질을 표면에 포함하고 있는 조절 T 세포(Treg cell)와 이펙터 T 세포간의 상호 작용을 저해함에 따라 조절 T 세포의 활성을 억제하고 이펙터 T 세포의 활성은 유지 혹은 상승시켜 암 세포 중에서도 특히 고형암 세포의 성장을 효과적으로 억제할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
[준비예 1] T 세포 아형 세포 배양
조절 T 세포(Treg)에서만 Lrig-1 단백질이 발현되는지 확인하기 위하여, T 세포의 아형(subset)인 Th0, Th1, Th2, Th17 및 iTreg을 준비하였다. 상기 iTreg은 자연적으로 분리한 nTreg과는 달리 하기 조성을 포함하는 배지에서 분화를 인공적으로 유도한 세포를 의미한다.
T 세포의 아형은 우선, 쥐의 비장으로부터 얻은 나이브(naive) T 세포를 분리한 뒤, 우태아혈청(FBS; hyclone, logan, UT) 10%를 포함하는 RPMI1640(Invitrogen Gibco, Grand Island, NY) 영양배지에 하기 표 24의 성분을 각각 더 포함하도록 하여, 37℃, 5 % CO2 배양기 내에서 72시간 배양을 통해 각각의 세포로 분화 유도하였다.
분화 세포 조성
Th0 anti-CD3, anti-CD28
Th1 IL-12, anti-IL-4 항체
Th2 IL-4, anti-IFNβ
Th17 IL-6, TGFβ, anti-IFNβ, anti-IL-4
iTreg IL-2, TGFβ
[실시예 1] Lrig-1 구조 분석
조절 T 세포의 표면 단백질인 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인을 포함하는 융합 단백질을 제작하기 위하여 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인의 3차원 입체 구조를 예측하였다.
우선, 항원 결정기(Epitope) 염기서열 예측을 위해 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인(Extracellular domain; ECD)의 구조를 확인하기 위하여 Uniprot(http://www.uniprot.org)과 RCSB Protein Data Bank (http://www.rcsb.org/pdb) 툴을 이용하여 3차원 입체 구조를 예측한 뒤, 그 결과를 도 1 및 2에 나타내었다.
도 1에서 보는 바와 같이, Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인 중 Lrig-LRR 도메인(아미노산 서열 41 ~ 494번) 내에는 LRR1 내지 LRR15의 총 15개의 류신 리치 부위(Leucine rich region)가 존재하였다. 상기 LRR 도메인 각각은 23 내지 27개의 아미노산으로 구성되고, 류신은 3 내지 5개가 존재하였다.
또한, 도 2에서 보는 바와 같이, Lrig-1 단백질의 세포외 도메인 중 Lrig-1 단백질의 아미노산 서열 494 내지 781번에는 면역글로불린 유사 도메인(Immunoglobulin-like domain)이 3개 존재하였다.
[실시예 2] Lrig-1 항원 결정기(epitope) 아미노산 서열 예측
상기 염기서열의 예측은 Lrig-1 단백질의 구조를 기반으로 하는 항원 결정기 예측 소프트웨어(epitope prediction software)인 Ellipro 서버(http://tools.iedb.org/ellipro/)를 이용하였다. 상기 Ellipro 검색 엔진은 현존하는 항원 결정기를 예측하는 알고리즘 중에서 가장 신뢰도가 높다고 알려진 검색엔진에 해당하여 이를 이용하였다.
항원 결정기 예측 소프트웨어에 상기 실시예 1에서 분석된 세포외 도메인을 입력한 뒤, 예측된 항원 결정기의 예측된 연속 또는 불연속 아미노산 서열을 도 3 및 4에 나타내었다.
도 3 및 4에서 보는 바와 같이, 연속된 항원 결정기 아미노산 서열은 총 22개가 예측되었고, 불연속된 항원 결정기 아미노산 서열은 총 8개가 예측되었다.
[실시예 3] Lrig-1 mRNA의 조절 T 세포에서의 특이적 발현 확인
Lrig-1 단백질이 조절 T 세포에 특이적인 바이오마커(biomarker)로 작용할 수 있는지 검증하였다.
상기 검증을 위하여, 쥐의 비장으로부터 CD4 비드를 통해 자석 활성 세포 분류기(magnet-activated cell sorting; MACS)를 이용하여 CD4+ T 세포를 분리하였다. 이후, CD25 항체를 이용하여 형광 활성 세포 분류기(FACS)를 이용해 조절 T (CD4+CD25+ T) 세포 및 비 조절 T (CD4+CD25- T) 세포를 분리하였다. 각각의 세포 및 상기 준비예 1에서 분화된 세포는 트리졸(Trizol)을 이용하여 mRNA를 추출한 뒤, 게노믹 RNA는 gDNA 추출 키트(Qiagen)를 이용하여 업체에서 제공한 프로토콜에 의해 gDNA를 제거하였다. gDNA가 제거된 mRNA는 BDsprint cDNA 합성 키트 (Clonetech)를 통해 cDNA로 합성하였다.
상기 cDNA에서 Lrig-1 mRNA의 발현량을 정량적으로 확인하기 위하여 실시간 중합효소연쇄반응(real time PCR)을 수행하였다.
상기 실시간 중합효소연쇄반응은 SYBR Green (Molecular Probes)을 이용하여 업체에서 제공한 프로토콜에 의해 95℃에서 3분, 61℃에서 15초, 72℃에서 30초씩 40 사이클의 조건으로, 하기 표 25의 프라이머를 이용하여 수행하였고, 상대적인 유전자 발현량은 ΔCT 방법을 이용하여 계산하였으며, HPRT를 이용하여 일반화(normalization) 하여, 그 결과를 도 5 내지 8에 나타내었다.
프라이머 서열
쥐 Lrig-1 Forward 5' - GAC GGA ATT CAG TGA GGA GAA CCT - 3'
Reverse 5' - CAA CTG GTA GTG GCA GCT TGT AGG - 3'
쥐 Lrig-2 forward 5' - TCA CAA GGA ACA TTG TCT GAA CCA- 3'
reverse 5' - GCC TGA TCT AAC ACA TCC TCC TCA- 3'
쥐 Lrig-3 forward 5' - CAG CAC CTT GAG CTG AAC AGA AAC - 3'
reverse 5' - CCA GCC TTT GGT AAT CTC GGT TAG - 3'
쥐 FOXP3 forward 5' - CTT TCA CCT ATC CCA CCC TTA TCC - 3'
reverse 5' - ATT CAT CTA CGG TCC ACA CTG CTC - 3'
ACTG1 forward 5' - GGC GTC ATG GTG GGC ATG GG - 3'
reverse 5' - ATG GCG TGG GGA AGG GCG TA - 3'
도 5에서 보는 바와 같이, 비-조절 T 세포(CD4+CD25- T cell)에 비하여 조절 T 세포(CD4+CD25+ T cell)에서 Lrig-1의 발현이 18.1배 높은 것을 알 수 있다. 이는, 기존에 알려져 있는 조절 T 세포의 마커인 Lag3 및 Ikzf4와 비교하였을 때 약 10배 정도 발현양이 높은 수준이었다.
또한, 도 6 및 7에서 보는 바와 같이, 다른 종류의 면역 세포에 비하여 조절 T 세포, 특히 유도된 조절 T 세포(iTreg)에 비해 자연적으로 분리한 조절 T 세포(nTreg)에서 Lrig-1 mRNA의 발현이 현저하게 높았다.
또한, 도 8에서 보는 바와 같이, Lrig 패밀리에 해당하는 Lrig-1, Lrig-2 및 Lrig-3 중에서 Lrig-1의 발현이 가장 높았다.
상기 결과를 통해 본 발명에 따른 Lrig-1 단백질은 조절 T 세포, 특히 자연적으로 존재하는 조절 T 세포에서 특이적으로 발현하는 것을 알 수 있다.
[실시예 4] Lrig-1 단백질의 조절 T 세포에서의 특이적 발현 확인
Lrig-1 mRNA로부터 발현된 Lrig-1 단백질이 조절 T 세포에서만 특이적으로 발현되는지 확인하였다.
조절 T 세포 특이적인 전사 인자인 FOXP3 프로모터에 RFP(Red fluorescence protein)이 결합된 FOXP3-RFP 주입(Knock-in) 쥐를 이용하여, 상기 쥐의 비장으로부터 CD4 비드로 자석 활성 세포 분류기(magnet-activated cell sorting; MACS)를 이용하여 CD4+ T 세포를 분리하였다. 이후, RFP 단백질을 이용하여, 형광 활성 세포 분류기(FACS)를 통해 조절 T 세포(CD4+RFP+ T cell) 및 비-조절 T 세포(CD4+RFP- T cell)를 분리하여 얻었다. 각각의 상기 세포는 구입한 Lrig-1 항체 및 음성 대조군은 아이소타입(isotype)을 통해 염색하여 형광 활성 세포 분류기로 Lrig-1의 발현량을 측정하여, 그 결과를 도 9에 나타내었다.
도 9에서 보는 바와 같이, 점선으로 표시되는 비-조절 T 세포의 경우 음성 대조군과 거의 동일한 Lrig-1의 발현 수준을 보였지만, 조절 T 세포의 경우 Lrig-1의 발현 수준이 높은 세포가 다수 존재하였다.
상기 결과를 통해 본 발명에 따른 Lrig-1 단백질은 조절 T 세포에서 특이적으로 발현하는 것을 알 수 있다.
[실시예 5] 조절 T 세포 표면에서의 Lrig-1 단백질 특이적 발현 확인
Lrig-1 단백질이 세포 치료의 타겟이 되기 위해서는 조절 T 세포의 표면에서 발현되어야 더욱 효과적으로 타겟 치료를 할 수 있으므로, Lrig-1 단백질이 표면에서의 발현 여부를 확인하였다.
상기 준비예 1의 각각의 분화된 T 세포 아형을 항-CD4-APC 및 항 Lrig-1-PE 항체로 염색하고, 형광 이용 세포 분류기(Fluorescence-Activated Cell Sorter; FACS)를 이용하여 각각의 세포 표면에서 Lrig-1의 발현량을 측정하여, 그 결과를 도 10에 나타내었다.
도 10에서 보는 바와 같이, 활성화된 T 세포(activated T cell), Th1 세포, Th2 세포, Th17 세포 및 나이브(Naive) T 세포에서는 Lrig-1의 발현이 0.77 내지 15.3의 양으로 발현되는 반면, 분화가 유도된 T 세포(iTreg)에서는 83.9로 높게 발현되었다.
상기 결과를 통해 본 발명에 따른 Lrig-1 단백질은 조절 T 세포(Treg) 세포에서 특이적으로 발현될 뿐만 아니라, 특히 상기 조절 T 세포의 표면에서 더욱 높게 발현되는 것을 알 수 있다.
[제조예] 융합 단백질의 제작
1. 발현 벡터의 제작
본 발명에 따른 융합 단백질을 제조하기 위하여, 하기 표 26의 각각의 융합 단백질을 코딩하는 각 핵산 서열을 합성하였다. 핵산 서열의 5' 말단과 3' 말단에 각각 NheI과 EcoRI 제한효소 서열을 첨가하였고, 5' 말단의 제한효소 서열 뒤에 코작 서열(Kozak's sequence)(GCCACC)과, 단백질 번역을 위한 시작 코돈과 발현된 단백질을 세포 밖으로 분비하게 하는 마우스 IgG 카파 경쇄 시그널 펩타이드(Mouse kappa light chain signal peptide)(ATGGAAACCGATACTCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGCTCTACCGGG)를 삽입하였다. 이후 하기 표 26의 각각의 융합 단백질을 코딩하는 핵산 서열로, 인간 유래 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인; 선택적으로 링커; 힌지 영역; 인간 IgG1 유래의 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3);을 코딩화하는 핵산 서열 뒤에는 종결 코돈을 삽입하였다. NheI 과 EcoRI 두 제한효소 서열을 이용하여 본 발명의 융합 단백질을 코딩하는 핵산 서열을 pcDNA3.1(+) 발현 벡터에 클로닝하였다.
연번 융합 단백질의 아미노산 서열 융합 단백질의 핵산 서열
제조예 1 서열번호 13 서열번호 17
제조예 2 서열번호 14 서열번호 18
제조예 3 서열번호 15 서열번호 19
제조예 4 서열번호 16 서열번호 20
제조예 5 서열번호 21 서열번호 25
제조예 6 서열번호 22 서열번호 26
제조예 7 서열번호 23 서열번호 27
제조예 8 서열번호 24 서열번호 28
제조예 9 서열번호 29 서열번호 33
제조예 10 서열번호 30 서열번호 34
제조예 11 서열번호 31 서열번호 35
제조예 12 서열번호 32 서열번호 36
제조예 13 서열번호 37 서열번호 41
제조예 14 서열번호 38 서열번호 42
제조예 15 서열번호 39 서열번호 43
제조예 16 서열번호 40 서열번호 44
제조예 17 서열번호 45 서열번호 49
제조예 18 서열번호 46 서열번호 50
제조예 19 서열번호 47 서열번호 51
제조예 20 서열번호 48 서열번호 52
제조예 21 서열번호 53 서열번호 57
제조예 22 서열번호 54 서열번호 58
제조예 23 서열번호 55 서열번호 59
제조예 24 서열번호 56 서열번호 60
제조예 25 서열번호 61 서열번호 65
제조예 26 서열번호 62 서열번호 66
제조예 27 서열번호 63 서열번호 67
제조예 28 서열번호 64 서열번호 68
제조예 29 서열번호 69 서열번호 73
제조예 30 서열번호 70 서열번호 74
제조예 31 서열번호 71 서열번호 75
제조예 32 서열번호 72 서열번호 76
제조예 33 서열번호 77 서열번호 81
제조예 34 서열번호 78 서열번호 82
제조예 35 서열번호 79 서열번호 83
제조예 36 서열번호 80 서열번호 84
2. 융합 단백질의 정제
293F 세포에 폴리에틸렌이민(Polyethylenimine)을 이용하여 상기 1.에서 제작한 발현 벡터를 형질 전환시킨 뒤 37 ℃ 및 8% CO2 조건 하에서 6일 동안 배양하였다. 배양 상청액을 여과한 뒤 단백질 A 레진(Protein A resin)에 흘려준 후 1X PBS 로 세척하였다. pH 3.5의 0.1M 글리신(glycine) 용액을 이용하여 용출한 뒤 얻어진 용액에 pH 9.0의 1M TRIS 용액을 첨가하여 pH 중화하였다. 이후 용액을 투석하여 PBS 용액 상태로 만든 후 농축하여 사용하였다.
[실시예 6] 본 발명에 따른 융합 단백질에 의한, 조절 T 세포의 이펙터 T 세포에 대한 억제능(suppression activity) 저해 효과
상기 제조예 5에서 제작된 본 발명에 따른 서열번호 21로 표시되는 융합 단백질(서열번호 25로 표시되는 핵산 서열을 이용한 제작)이 Lrig-1 단백질에 대한 리간드(ligand)와 결합하여, 상기 리간드와 조절 T 세포 사이의 상호 작용을 저해함에 따라 최종적으로 조절 T 세포의 이펙터 T 세포에 대한 증식 억제능을 감소시키는지 확인하기 위하여 하기의 실험을 수행하였다. 구체적으로는, 조절 T 세포와 이펙터 T 세포를 공동 배양(coculture)하는 조건에서 상기 제조예 5의 융합 단백질을 첨가하여, 조절 T 세포의 이펙터 T 세포에 대한 증식 억제능의 변화를 확인하였다. 그 결과는 도 11에 나타내었다.
도 11에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 융합 단백질을 처리하자 이펙터 T 세포에 대한 조절 T 세포의 증식 억제능이 저하된 것을 확인할 수 있었다.
이를 통하여 본 발명에 따른 융합 단백질은 Lrig-1 단백질에 대한 리간드와 상호 작용하여, Lrig-1 단백질을 표면에 포함하고 있는 조절 T 세포와 상기 리간드 사이의 상호 작용을 저해함에 따라 조절 T 세포의 활성을 억제하고 이펙터 T 세포의 활성은 유지 혹은 상승시키는 것을 알 수 있었다.
[실시예 7] 본 발명에 따른 융합 단백질에 의해 인식되는 Lrig-1 리간드의 분포 확인
상기 실시예 6에서 보는 바와 같이, 상기 제조예 5에서 제작된 본 발명에 따른 서열번호 21로 표시되는 융합 단백질(서열번호 25로 표시되는 핵산 서열을 이용한 제작)은 Lrig-1 리간드를 인식할 수 있는 것을 알 수 있으므로, 상기 Lrig-1의 리간드가 존재하는 면역 세포들을 발굴하기 위하여, 조절 T 세포의 타겟으로 생각되는 나이브 T 세포(naive T cell)로부터, 활성화된 T 세포, Th1 세포, Th2 세포 또는 Th17 세포로 분화를 유도시킨 뒤 이들 세포를 상기 제조예 5의 융합 단백질(1차 항체) 및 항-인간-PE 항체(2차 항체)로 염색(staining) 하였다. 형광 이용 세포 분류기(Fluorescence-Activated Cell Sorter; FACS)를 이용하여 각각의 세포 표면에서 상기 융합 단백질의 발현량을 측정하여, 그 결과를 도 12에 나타내었다.
도 12에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 융합 단백질은 나이브 T 세포의 표면에 있는 항원(antigen)은 거의 염색시키지 않았고(0.71%), 활성화된 T 세포, Th1 세포, Th2 세포 및 Th17 세포의 표면에 있는 항원은 96% 이상을 염색시켰다.
이를 통하여 Lrig-1의 리간드는 T 세포 리셉터(receptor)의 자극에 의하여 유도되는 표면 단백질인 것을 알 수 있었다.
[실시예 8] 본 발명에 따른 융합 단백질의 암 치료 효과
상기 제조예 5에서 제작된 본 발명에 따른 서열번호 21로 표시되는 융합 단백질(서열번호 25로 표시되는 핵산 서열을 이용한 제작)의 고형암에 대한 치료 효과를 확인하기 위하여, 도 13에서 보는 바와 같이, B16F10 흑색종 세포(melanoma cell)를 마우스 등에 3X105 세포의 양으로 피하 주사(subcutaneous injection)한 뒤, 4일, 8일, 12일 째에 상기 제조예 5의 융합 단백질을 200 ug의 양으로 복강 내 주사하였다. 상기 멜라노마 세포 이식 후 시간의 경과에 따른 종양의 부피 변화를 측정하여 그 결과를 도 14에 나타내었다.
도 14에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 융합 단백질을 처리한 경우 아무런 처리하지 않은 음성 대조군에 비하여 흑색종 종양의 크기가 현저히 감소한 것을 확인할 수 있었다.
[실시예 9] 본 발명에 따른 융합 단백질의 암 치료 효과
상기 제조예 34에서 제작된 본 발명에 따른 서열번호 78로 표시되는 융합 단백질(서열번호 82로 표시되는 핵산 서열을 이용한 제작)의 고형암에 대한 치료 효과를 확인하기 위하여, CT-26 대장암 세포를 마우스 등에 3X105 세포의 양으로 피하 주사(subcutaneous injection)한 뒤, 4일, 8일, 12일 째에 상기 제조예 34의 융합 단백질을 200 ug의 양으로 복강 내 주사하였다. 상기 대장암 세포 이식 후 시간의 경과에 따른 종양의 부피 변화를 측정하여 그 결과를 도 15에 나타내었다.
도 15에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 융합 단백질을 처리한 경우 아무런 처리하지 않은 음성 대조군에 비하여 대장암 종양의 크기가 현저히 감소한 것을 확인할 수 있었다.
이를 통하여, 본 발명에 따른 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인 및 면역글로불린 Fc 영역을 포함하는 융합 단백질은 조절 T 세포와 이펙터 T 세포간의 상호 작용을 저해함에 따라 조절 T 세포의 활성을 억제하고 이펙터 T 세포의 활성은 유지 혹은 상승시켜 암 세포 중에서도 특히 고형암 세포의 성장을 효과적으로 억제할 수 있는 것을 알 수 있다.
이상에서 본 발명에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.
본 발명은 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인과 면역글로불린 Fc 영역을 포함하는 신규한 융합 단백질과, 이를 이용한 암의 예방 또는 치료를 위한 용도에 관한 것이다.

Claims (21)

  1. Lrig-1(leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1) 단백질의 세포 외 도메인(extracellular domain) 및 면역글로불린(immunoglobulin) Fc 영역을 포함하는 융합 단백질.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인은 서열번호 1 또는 3으로 표시되는, 융합 단백질.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린 Fc 영역은 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1개 내지 4개 도메인을 포함하는, 융합 단백질.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린 Fc 영역은 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM 유래 Fc 영역, 중쇄 불변영역 2(CH2), 중쇄 불변영역 3(CH3), 힌지(hinge), 이의 단편, 이들의 조합(combination), 또는 이들의 조합을 포함하는 하이브리드 Fc(hybrid Fc)인, 융합 단백질.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린 Fc 영역은 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM 유래의 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는, 융합 단백질.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린 Fc 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 유래의 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는, 융합 단백질.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린 Fc 영역은 힌지(hinge) 영역을 포함하는, 융합 단백질.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 면역글로불린 Fc 영역은 IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, 또는 아바타셉트(Abatacept) 유래의 힌지 영역을 포함하는, 융합 단백질.
  9. 제7항에 있어서,
    상기 힌지(hinge) 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgD 또는 아바타셉트(Abatacept) 유래의 힌지 영역을 포함하는, 융합 단백질.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린 Fc 영역은 서열번호 5 또는 6으로 표시되는 CH2 및 CH3을 포함하는, 융합 단백질.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린 Fc 영역은 서열번호 7 내지 10 중 어느 하나로 표시되는 힌지 영역을 포함하는, 융합 단백질.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인은 상기 면역글로불린 Fc 영역의 N-말단 또는 C-말단에 직접 연결되는, 융합 단백질.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 Lrig-1 단백질의 세포 외 도메인은 링커를 통하여 상기 면역글로불린 Fc 영역의 N-말단 또는 C-말단에 연결되는, 융합 단백질.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 링커는 서열번호 11로 표시되는 펩타이드 링커; 및 서열번호 12로 표시되는 펩타이드 링커; 중 적어도 하나인, 융합 단백질.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 융합 단백질을 코딩하는 핵산 분자.
  16. 제15항의 핵산 분자가 삽입된 발현 벡터.
  17. 제16항의 발현 벡터가 형질 감염된 숙주 세포주.
  18. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 융합 단백질을 유효 성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 암은 고형암인, 약학 조성물.
  20. 제18항에 있어서,
    상기 암은 위암, 간암, 교세포종, 난소암, 대장암, 두경부암, 방광암, 신장세포암, 유방암, 전이암, 전립선암, 췌장암, 흑색종 또는 폐암인, 약학 조성물.
  21. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 융합 단백질을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료 방법.
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